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Die vorliegende Erfindung betrifft die Medizin und die tierarzneikundige Medizin und
mehr besonders eine neuartige bakterielle Zubereitung für die Prophylaxe und die
Behandlung von Entzündungsvorgängen und von allergischen Krankheiten.
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Man kennt zurzeit eine Anzahl von heilenden und prophylaktischen lebendigen
bakteriellen Zubereitungen, wie das aufgrund des Escherichia coli M17 Stammes
erhaltene Colibakterin, das aufgrund des B. Bifidum Stammes erhaltene
Bifidumbakterin, das aufgrund der Züchtung von Laktibacillus plantarum 8 PA-3 erhaltene
Lactobakterin, das aufgrund der Stämme der Bacillusgattung erhaltene SL-Bakterin,
das Baktisubtil usw.. Sämtliche angegebene Zubereitungen sind für die Prophylaxe
und die Behandlung der bakteriellen Infektionen des Magen-Darm-Traktes und der
Dysbakteriose des Menschen und der Tiere (Taschenbuch des Gebrauches von
bakteriellen und Viruszubereitungen, unter der Schriftleitung von S.G. Dzagurov und
von F.F. Resepov, 1975 (Moskau), Verlag "Meditsina"; V.M. Karpov, "L-Bakterin-"
Zubereitung, Tierärztliche Medizin, 1987 (Moskau), 7, Seite 45).
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Demzufolge kennt man auch gewisse Versuche zur örtlichen Verwendung der
lebenden Bakterien für die Prophylaxe und die Behandlung von
Entzündungsvorgängen. Die Bakterien werden an der Stelle der Verletzung
eingeführt (G.I. Khanine und andere, "Verwendung der Bifido- und lactobakterien für
die Verbesserung der Mikroökologie der Genitalwege und die technologischen
Experimental-Besonderheiten der Ausarbeitung auf deren Grund von heilenden
Zubereitungen", Bifidobakterien und deren Verwendung in der Klinik, dem
medizinischen Gewerbe und der Landwirtschaft, 1986 (Moskau), Seiten 151-156). Die
angegebenen bakteriellen Zubereitungen (Colibakterin, Bifidumbakterin, Baktisubtil)
haben eine schwache antagonistische Tätigkeit gegenüber den Krankheitserregern
und ein schwaches Vermögen zur Erzeugung der proteolytischen Enzymen.
Außerdem bei dem Fall der örtlichen Verwendung für die Prophylaxe und die
Behandlung der Eiterung der Wunden üben die angegebenen Zubereitungen
keinen Einfluß auf die Krankheitserreger in denjenigen Geweben, die, wie man es
weiß, eine Hauptrolle in der Entwicklung des pathologischen Vorganges spielen,
sowie auf die tiefen Schichten der Nekrose aus. Dieses vermindert plötzlich deren
heilende und prophylaktische Wirkung.
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Man kennt ebenfalls aus dem britischen Patent Nr. 1 585 863 Zubereitungen für
pharmazeutische Zwecke aufgrund eines Stammes oder mehreren Stämmen von
Lactobacillus für die Vorbeugung von Infektionen oder Entzündungen oder um
Entzündungen oder Infektionskrankheiten, wie Blinddarmentzündung, Gastritis,
Darmentzündung, Zahnfleischentzündung und Hämorrhoiden zu hemmen.
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Die europäische Patentanmeldung Nr. 228861 schildert die Verwendung von neuen
bakteriellen zelligen Erzeugnissen aufgrund von Mikroorganismen, der Streptokoccus,
Bifidobakterium und Lactobacillus Spezies und mit antikarzinogenen Fähigkeiten.
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Die erfindungsgemäße bakterielle Zubereitung für die Prophylaxe und die
Behandlung der Entzündungsvorgängen und der allergischen Krankheiten ist eine
neuartige Zubereitung die in der Litteratur nicht beschrieben worden ist.
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Man hat sich vorgenommen, eine neuartige bakterielle Zubereitung, die eine große
Tätigkeit, ein breites Wirkungsspektrum haben und keine Nebenwirkungen haben.
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Die Lösung besteht darin, daß die erfindungsgemäße bakterielle Zubereitung für die
Prophylaxe und die Behandlung der Entzündungsvorgängen und der allergischen
Krankheiten Zellen von wenigstens einem unter den Bacillus subtilis 534-, Bacillus sp.
538- und Bacillus pulvifaciens 535-Stämmen gewählten Mikroorganismus von
Bakterien aufweist, welcher die Fähigkeit hat, von dem Magen-Darm-Trakt aus in
den Herd der Verletzung einzudringen, seine Lebensfähigkeit zu bewahren und
Antibiotiken, proteolytische Enzyme, Immunitätsmodulatore zu erzeugen und von 5
bis 1·10&sup9; lebenden Zellen von Mikroorganismen je mg der Zubereitung enthält.
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Der in der bakteriellen Zubereitung verwendete Bacillus subtilis 534-Stamm ist am 28.
März 1988 in der pansovietischen Sammlung von Mikroorganismen des Institut
biokhimii i fiziologii mikroorganizmov der Akademie der Wissenschaften der U.S.S.R.
hinterlegt und unter der Nummer B-1666 II eingetragen worden.
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Der in der vorliegenden Erfindung verwendete Bacillus sp. 538-Stamm ist am 20. Juni
1988 in der pansovietischen Sammlung der Mikroorganismen des Vsesojuzny
nauchno-issledovatelsky institut genetiki i selektsii promyshlennykh mikroorganizmov
hinterlegt und unter der Nummer BK II M-4401 eingetragen worden.
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Der in der erfindungsgemäßen bakteriellen Zubereitung verwendete Bacillus
pulvifaciens 535-Stamm ist am 14. April 1988 in der pansovietischen Sammlung von
gewerblichen Mikroorganismen des Vsesojuzny nauchno-issledovatelsky institut
genetiki i selektsii promyshlennykh mikroorganizmov hinterlegt und unter der Nummer
BK II M-4348 eingetragen worden.
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Die vorliegende Erfindung betrifft ebenfalls die Verwendung des Escherichia Coli
M17-Stammes für die Gewinnung einer medikamentösen bakteriellen Zubereitung
gemäß der vorliegenden Erfindung, die bestimmt ist, eitrige Vorgänge in den
Muskelgeweben der Glieder zu behandeln.
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Die erfindungsgemäße Zubereitung kann die Antibiotiken, die proteolytischen
Enzyme und bei gewissen Krankheiten, die desensibilisierenden Mittel ersetzen. Die
Zubereitung wird per os verabreicht und konzentriert sich in dem pathologischen
Herd. In den Geweben des inneren Mediums des Organismus hemmt die
Zubereitung das Wachstum der grampositiven und gramnegativen Bakterien, der
Mikrobakterien, begünstigt die von den nekrotisierten Geweben ausgehende
Reinigung, hält die allergischen Rückwirkungen auf.
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Die erfindungsgemäße Zubereitung wird durch eine einfache Technologie erhalten.
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Die erfindungsgemäße Zubereitung kann bei einer Temperatur bis 100ºC während
10 Jahre und darüber hinaus aufbewahrt werden, während die Fähigkeitszeit der
bekannten bakteriellen Zubereitungen, der Antibiotiken, der Enzyme nicht zwei Jahre
unter strengeren Temperaturordnungsverhältnissen überschreitet. Die
erfindungsgemäße Zubereitung ergibt praktisch keine Nebenwirkungen, da sie
aufgrund einer in der Natur weitverbreiteten aber vorher unbekannten Erscheinung,
insbesondere der Erscheinung des natürlichen bakteriellen Schutzes hergestellt
worden ist. Die beanspruchte Zubereitung hat ein breites Wirkungsspektrum und ist
außerdem wie die bekannten Erzeugnissen, bei Dysbakteriosen,
Verdauungsstörungen wirksam.
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Die erfindungsgemäße Zubereitung wird ausgehend von Mikroorganismen
vorbereitet, die fähig sind, von dem Einführungsherd aus in die pathologisch
veränderten Gewebe des Organismus bei dem Menschen, den Tieren und den
Vögeln einzudringen, dort ihre Lebensfähigkeit zu bewahren, den pathologischen
Vorgang hemmende oder seine Entwicklung verhindernde biologisch tätige
Substanzen freizusetzen.
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Man sondert die lebendigen Bakterien ausgehend von den Geweben des
Organismus bei dem Menschen, bei den Tieren und bei den Vögeln ab.
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Unter den Bakterien wählt man diejenigen, die von dem Magen-Darm-Trakt aus in
den pathologischen Herd oder bis zu den genau bestimmten gesunden Organen
und Geweben eindringen können. Die erhaltenen Stämme werden auf
Pathogenizität, Virulenz, akute und chronische Toxizität, die allergene, teratogene
und onkogene Tätigkeit untersucht. Bei Ausbleiben von unerwünschten
Nebenwirkungen können die Stämme der Mikroorganismen für die Erzeugung der
bakteriellen Zubereitung verwendet werden.
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Außerdem ermittelt man, das Vermögen der Stämme, ihre Lebensfähigkeit in den
Geweben zu bewahren und die biologisch tätigen Substanzen, Antibiotiken
proteolytische Enzyme, Immunitätsmodulatore freizusetzen. Aufgrund der gewählten
Stämme erhält man, eine bakterielle Zubereitung durch Kultur auf flüssigen oder
festen Nährböden. Später verwendet man sie in dem gediegenen Zustand oder in
dem ausgetrockneten Zustand mit den Akkumulatoren oder ohne derselben. Die
Zubereitung kann einen Stamm oder mehrere Stämme von Bakterien in einer Menge
von 5 bis 1·10&sup9; lebendigen Zellen von Mikroorganismen je mg enthalten. Für die
Herstellung der Zubereitung verwendet man vorzugsweise die folgenden neuartigen
Stämme: Bacillus subtilis 534-Stamm, Bacillus s.p. 538-Stamm, Bacillus pulvifaciens
535-Stamm. Es ist vorteilhaft, bekannte Stämme, wie Escherichia coli M17 ebenfalls zu
verwenden. Der in der nicht eitrigen Wunde des Kranken abgesonderte Bacillus
subtilis 534-Stamm wird durch morphologische Anzeichen und die folgenden
physiologischen Eigenschaften gekennzeichnet.
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Es sind Bazillen. Die Größe der Zellen der Agarkultur am Ende von 24 Stunden beträgt
(2-4)·(0,6-0,8) um. Bewegliche Bakterien. Sie bilden Sporen und bilden keine Kapseln.
Sie sind grampositiv. Die Kolonien auf dem peptonisierten Ochsenagar sind rauh, mit
festonierten Rändern, schwach rosa, mit einem Durchmesser von 2 bis 12 mm. Der
Stamm vermehrt sich bei einer Temperatur von 15 bis 50ºC; das optimale Wachstum
erfolgt bei einer Temperatur von 36 bis 37ºC. Der Stamm zersetzt bis zu der Säure
ohne Freisetzung von Gas, der Glukose, der Saccharose, den Mannit. Er verursacht
nicht die Gärung der Lactose bildet weder Schwefelwasserstoff noch Indol. Es setzt
das Acetylmethylkarbinol und die Katalase frei der Stamm ist gegen Benzylpenizilin,
Ampicilin, Erythromicyn, Monomicyn, Linkomicyn, Tetracyklin und ist unempfindlich
gegen Polymyxin empfindlich.
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Der Stamm erzeugt ein Antibiotikum mit breitem Wirkungsspektrum, das das
Wachstum der Staphylikokken, der Streptokokken des Proteas, des Bacillus
pyocyaneus und der Saccaromyceten hemmt. Außerdem setzt der Stamm die
Protiden und den Immunitätsmodulator zersetzende proteolitysche Enzyme frei.
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Der neue Bacillus sp. 538-Stamm wird in dem Organismus bei Menschen
abgesondert. Es sind Bazillen. Die Größe der Zellen der Agarkultur am Ende von 24
Stunden beträgt (5-10)·(0,7-1,2) um. Die Bazillen wachsen in der Gestalt einer aus 3
bis 5 Zellen gebildeten Kette. Die Bakterien sind beweglich, grampositif. Die Sporen
sind in subterminaler Weise angeordnet, sie bilden keine Kapseln. Die Kolonien auf
dem peptonisierten Ochsenagar sind leicht konvex gelblich und haben 2 bis 4 mm
im Durchmesser. Auf der peptonisierten Ochsenbrühe wachsen sie in Hautgestalt an
der Oberfläche und in Flockengestalt am Boden auf einer 7%-Sodiumchloridlösung
unter aeroben und anaeroben Verhältnissen bei einer Temperatur von 25 bis 40ºC
mit einem Optimum bei 36-37ºC. Sie veranlassen nicht die Gärung der Lactose, der
Glukose, der Saccharose, des Mannits, der Arabinose, der Xylose. Sie setzen
Schwefelwasserstoff frei; das Indol bildet sich nicht. Sie gerinnen nicht den Plasma,
ergeben keinen positiven dermonekrotischen Versuch.
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Der Stamm ist empfindlich gegen Erythromycin, Oleandomycin, Methylcillin,
Karbenylcillin Ristomycin, Levomycetin; der Stamm ist gegenüber Polymyxin,
Linkomycin, Monomycin stabil.
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Der Stamm erzeugt eine antibakterielle Substanz mit breitem Wirkungsspektrum.
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In die äußere Umgebung setzt der Stamm Albumin, Fibrin, Hämoglobin, zersetzende
proteolytische Enzyme frei. Er erzeugt die Immunität modulierende, die Allergie
vermindernde Substanzen.
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Der Stamm ist atoxisch und nicht pathogen.
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Der neue Bacillus pulvifaciens 535-Stamm wird in der nicht eitrigen Wunde des
Kranken abgesondert. Es ist ein Bazille, dessen Größe der Zellen der Agarzüchtung
am Ende von 24 Stunden (2-4)·(0,6-0,8)um beträgt. Die Bakterien sind beweglich;
bilden eine runzlige Haut beim Wachsen auf der peptonisierten Ochsenbrühe. Der
Stamm bildet Sporen; bildet keine Kapseln; die Bakterien sind grampositiv. Die
Kolonien auf dem pepsonisierten Ochsenagar sind rauh, mit festonierten Rändern,
schwach rosa gefärbt; haben 2 bis 9 mm in Durchmesser; sie wachsen unter
aerobischen und anaerobischen Verhältnissen. Sie vermehren sich bei einer
Temperatur von 15 bis 20ºC, mit einem optimalen Wachstum bei 36-37ºC. Sie
zersetzen bis zu der Säure ohne Freisetzung von Gas, der Glukose, der Saccharose,
der Maltose, dem Dulcit, der Galaktose; veranlassen nicht die Gärung der Lactose,
des Mannits, der Xylose, der Ramnose, des Lysins, des Arginins, des Ornithins. Der
Stamm bildet weder Schwefelwasserstoff noch Indol; peptonisiert die Milch. Die
Bakterien erzeugen keine Lecithinase; sie setzen das Acetylmethylkarbinol und die
Katalose frei; hydrolysieren nicht die Stärke.
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Der Stamm ist gegen Erythromycin, Ampicillin, Methylcilin, Benzylpenicilin, Oxacilin,
Linkomycin, Neomycin, Levomycetin Monomycin, Ristomycin, Kanamycin,
Tetracyclin, Oleandomycin empfindlich; und ist für Polymyxine unempfindlich.
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Der Bacillus pulvifaciens Stamm erzeugt Albumin, Hämoglobin, Fibrin zersetzende
proteolytische Enzyme, ein Antibiotikum mit breitem Wirkungsspektrum und den
Immunitätsmodulator. Die gegen das Antibiotikum empfindlichen, potentiell
pathogenen Mikroorganismen sind: Staphylokokken, Streptokokken, Colibazillen,
pyocyanische Bazillen, Proteas, Salmonellen, ruhrartige Baziilen, Clebsias,
Saccharomyceten. Das Antibiotikum hemmt nicht das Wachstum der
saprophytischen Mikroflora. Außerdem zerfällt das Antibiotikum vollständig (rasch
am Ende von einigen Stunden), was die Bildung einer Ernährungsallergie
ausschließt. Die proteolytischen Enzyme begünstigen die Assimilation des
Viehfutters.
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Ein wesentlicher Unterschied des angegebenen Stammes von Bacillus subtilis 534 ist
das Ausbleiben der Hydrolyse von Stärke und der Zersetzung des Mannits.
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Der Stamm ist atoxisch und nicht pathogen.
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Die erfindungsgemäße bakterielle Zubereitung wurde unter Laborverhältnissen an
den Tieren und in der Klinik bei den Menschen untersucht.
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Man hat ebenfalls den Antagonismus der erfindungsgemäßen Zubereitung
gegenüber den pathogenen Erregern der bakteriellen Infektion untersucht.
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Der Antagonismus des Bacillus subtilis 534-Stammes gegenüber den pathogenen
Erregern der bakteriellen Infektion wurde durch das von V.I. Nikitenko
ausgearbeitete Verfahren ermittelt. In den 5 cm³ keimfreie Kolbekbrühe
enthaltenden Probiergläsern setzte man 40-50 Millionen Zellen einer (Vergleichs-)
Versuchszüchtung und mit den gleichen Dosen die Versuchskultur mit dem
angegebenen Stamm an. Die Probegläser wurden im Thermostat während 24
Stunden bei der Temperatur von 37ºC ausgebrütet. Da die Bakterien des Bacillus
subtilis 534-Stammes die Dichte der Brühe in unbedeutender Weise veränderten,
wurde der Hemmungsgrad des Wachstumes der Versuchskultur mittels des
photoelektroelektrischen Farbenmessers aus dem Dichteunterschied zwischen der
Versuchsbrühe und der Bezugsbrühe ermittelt. Man bewertete das Ergebnis als
positiv wenn die Dichte des Gemisches 1,2 mal kleiner und mehr als diejenige der
Brühe der Versuchszüchtung war.
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Der Bacillus subtilis 534-Stamm hemmte das Wachstum von 34 unter 37 untersuchten
Stämmen von Staphylokokken, 11 unter 12 Stämmen von Streptokokken, 8 unter 12
Stämmen von Colibazillen, 7 unter 8 Stämmen von Ruhrbazillen, 7 unter 7 Stämmen
von Salmonellen 6 unter 6 Stämmen von Proteas, 7 unter 8 Stämmen von
pyocyanischen Bazillen. Die Stämme von saprophytischen Mikroorganismen waren
im wesentlichen widerstandsfähig und weniger empfindlich.
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Um die Erzeugung der antibakteriellen Substanzen in der äußeren Umgebung zu
ermitteln, wurden die Kulturen des Bacillus subtilis-Stammes von drei Laborreihen
während 96 Stunden in Vibrationskolben auf Schwingen (240 Umdrehungen je
Minute) bei der Temperatur von 28ºC auf dem Nährboden mit der folgenden
Zusammensetzung in Gewichtsprozenten gezüchtet: Erbsenmehl: 1,5; Saccharose:
2,1; Stärke: 0,85; NaNO&sub3; : 0,5; CaCO&sub3; : 0,5; NaCl:0,5; Wasser: Ergänzung bis 100.
Die antibakterielle Tätigkeit von 0,1 cm³ des Kulturflüssigkeitsfiltrates wurde durch das
Verfahren zur Diffusion in dem Agar mit 2% peptonisierter Ochsenbrühe ermittelt,
unter Berücksichtigung der Größe der Hemmungsbereiche des Wachstums bei
Subtrahieren des Durchmessers der Löcher (8 mm).
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Das Wachstum des Staphylokokkus wurde in den Bereichen von 24-27 mm; das
Wachstum des ColiBazillus in den Bereichen von 18-22 mm; der Clebsia in den
Bereichen von 18-21 mm; der Sacchoromyceten in den Bereichen von 22-24 mm
gehemmt. Bei den in vitro Versuchen hemmte der Bacillus sp. 538-Stamm das
Wachstum von 11 unter 12 untersuchten Stämmen von Staphylokokken, von 5 unter
6 Stämmen von Streptokokken, von 7 unter 9 Stämmen von Salmonellen. Bei
Verwendung des Verfahrens zur Diffusion in dem die Versuchsmikroben und die
Kulturflüssigkeit enthaltenden Agar wurde das Wachstum des Staphylokokkus in dem
Bereich von 35,1±0,3 mm; des ColiBazillus, in dem Bereich von 22,0±0,2 mm; der
Clebsia in dem Bereich von 20,9±0,2 mm; der Saccharomyceten in dem Bereich
von 28,0±0,2 mm gehemmt. Bei 1 : 10 Verdünnung betrugen die Hemmungsbereiche
des Wachstumes mit dem Staphylokokkus, 27,9±0,1 mm; mit dem ColiBazillus 20,0±
0,1 mm; mit der Clebsia, 20,0±0,2 mm; mit den Saccharomyceten, 29,2±0,2 mm.
Das rohe Antibiotikum behielt seine Tätigkeit in der Lösung bei der
Umgebungstemperatur während 3 Tagen.
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Der Bacillus pulvifaciens 535-Stamm hemmte das Wachstum von 34 unter 37
untersuchten Stämmen von Staphylokokken von 11 unter 12 Stämmen von
Streptokokken, von 12 unter 12 Stämmen von Colibazillen, von 7 unter 8 Stämmen
von Ruhrbazillen, von 7 unter 7 Stämmen von Salmonellen, von 6 unter 6 Stämmen
von Proteas, 7 unter 8 Stämmen von pyocyanischen Bazillen. Die Stämme von
saprophytischen Mikroorganismen waren hauptsächlich widerstandsfähig und
weniger empfindlich. Das rohe Antibiotikum in der Lösung wurde während einigen
Stunden zerstört.
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Man hat die Untersuchung der Erzeugung der Proteasen in der äußeren Umgebung
ausgehend von der erfindungsgemäßen bakteriellen Zubereitung durchgeführt.
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Die Erzeugung der proteolytischen Enzyme in der äußeren Umgebung der drei
Laborzubereitungsreihen aufgrund des Bacillus subtilis 534-Stammes wurde durch das
Anson'sche Verfahren ermittelt.
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Die Zubereitung jeder der drei Reihen besitzt das Vermögen, die das Albumin, das
Hämoglobin das Fibrin zersetzende Enzyme zu erzeugen. Das Vorhandensein von
Enzymen bei anderen Substraten wurde nicht ermittelt.
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Gleichzeitig mit den Antibiotiken erzeugen die Bacillus pulvifaciens 535- und Bacillus
sp. 538-Stämme in exogener Weise das Hämoglobin und das Albumin zersetzende
proteolytische Enzyme. Das Vorhandensein von Proteasen wurde ebenfalls durch
das Anson'sche Verfahren mit den 24-stündigen lebendigen Kulturen ermittelt.
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Gleichfalls hat man die Untersuchung der Erzeugung von Immunitätsmodulatoren
ausgehend von der erfindungsgemäßen Zubereitung untersucht. Die 72-stündige
Kulturflüssigkeit, nach Ausscheidung der Bakterien der Bacillus subtilis 534- und
Bacillus sp. 538-Stämme, in einer Menge von 0,1 cm³ wirkt in derselben Weise wie
das Phytohämagglutinin bei der Reaktion der Umwandlung in Blasten.
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Man hat 6 Versuche durchgeführt.
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Der Prozentsatz der Bildung von Blasten bei dem Bezugsversuch beträgt 0,05% und
nach der Einführung der Kulturflüssigkeit des Bacillus subtilis 534-Stammes: 42±2%,
nach der Einführung der Kulturflüssigkeit des Bacillus sp. 538-Stammes: 54±2%.
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Im Laufe der Behandlung mit der bakteriellen Zubereitung aufgrund von Bacillus
subtilis 534,- Bacillus pulvifaciens 535,- Bacillus sp. 538-, E. coli M17-,Lactobacillus
plantarum 8-PA-3-, B.bifidum nº 1-Stämmen beobachtet man die Zunahme des
Volumens der lymphoiden Follikeln in der Milz, der Leber, dem Darm. Diese Tatsache
bestätigt die Immunomodulatorenwirkung der Zubereitung.
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Die heilende Wirkung der erfindungsgemäßen Zubereitung aufgrund des Bacillus
subtilis 534-Stammes (3 Reihen) wurde an experimentellen Infektionsmustern
untersucht. Zu diesem Zweck wurden weiße Mäuse mit einem Gewicht von 19,2±
0,1 g auf intraperitonealem Wege mit einer derartigen Menge von Mikroorganismen
infiziert, daß sie den Verlust von fast allen Tieren (DL&sub1;&sub0;&sub0;) zur Folge hatte. Der
Staphylokokkus aureus in einer Dosis von 100 bis 200 Millionen Zellen mit 0,8 cm³ von
0,4%-peptonisierten Ochsenagar die Salmonellen in einer Dosis von 500 Tausend bis
2 Millionen Zellen mit 0,9 cm³ von peptonisierten Ochsenagar und 100-500 Millionen
Zellen in 1 cm³ einer 9%-Sodiumchloridlösung, der pyocyanische Bacillus in einer
Dosis von 500 Millionen Zellen in 1 cm³ einer 9%-Sodiumchloridlösung wurden
eingeführt.
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Der Bacillus subtilis 534-Stamm wurde auf intraperitonealem Wege mit Wasser in einer
täglichen Dosis von 200 Millionen Zellen während 10 Tagen eingeführt. Die Ergebnisse
der Behandlung der experimentellen Infektion sind in der Tafel 1 dargestellt.
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Nach der intraperitonealen Einführung der Zubereitung wurde der Prozentsatz am
Verlust von Tieren von 89-100% auf 25-30% und nach der Verabreichung auf dem
inneren Weg von 92-100% auf 16,7% herabgesetzt. Die Heilwirkung jeder der drei
untersuchten Laborreihen war ungefähr die gleiche.
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Die Ergebnisse der Untersuchung der erfindungsgemäße Zubereitung aufgrund der
Bacillus pulvifaciens 535- und Bacillus sp. 538-Stämme an den ähnlichen
experimentellen Infektionsmustern sind in der Tafel 2 dargestellt.
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Der Prozentsatz am Verlust der Tiere bei der Behandlung der Infektionen durch den
Staphylokokkus, die Salmonellose und den pyocyanischen Bacillus wurde von 100-
87,5% (Bezug) bis auf 40-12,5% (Versuch) (p < 0,001) herabgesetzt. Nach der
intraperitonealen Einführung der erfindungsgemäßen Zubereitung wurden
durchschnittlich 28,1% weißer Mäuse und bei der Behandlung per os 17,0% von
deren
verloren.
Tafel 1 Ergebnisse der Behandlung der experimentellen Infektion bei den weißen Mäusen mit der erfindungsgemäßen Zubereitung
aufgrund des Bacillus subtilis 534-Stammes
Nr. Art der Infektion Anzahl von Mäusen Bezugstiere Behandlung Anzahl in % von verlorenen Tieren I. Reihe Staphylokokkus (intraperitoneale Einführung der Zubereitung) Salmonellose (intraperitoneale Einführung der Zubereitung) pyocyanische Bacillus (intraperitoneale Einführung der Zubereitung) Staphylokokkus (Einführung der Zubereitung auf innerem Weg) Salmonelose (Einführung der Zubereitung auf innerem Weg)
Tafel 1 (Fortsetzung)
Nr. Behandlung 2. Reihe Anzahl von Mäusen Getötete Mäuse
Tafel 2 Ergebnisse der Behandlung der experimentellen Infektion bei den Mäusen mit der erfindungsgemäßen Zubereitung aufgrund
der Bacillus pulvifaciens 535- und Bacillus sp.538-Stämme
Nr. Zubereitung Infektion durch Staphylokokkus Anzahl von Tieren Getötete Tiere (Anzahl, %) Gruppe von Bezugstieren Versuchsgruppe für die intraperitoneale Einführung der Zubereitung aufgrund des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes Gruppe von Bezugstieren Versuchsgruppe für die intraperitoneale Einführung der erfindungsgemäßen Zubereitung aufgrund des Bacillus sp.538-Stammes Gruppe von Bezugstieren Versuchsgruppe für die Einführung der erfindungsgemäßen Zubereitung aufgrund des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes Gruppe von Bezugstieren Versuchsgruppe für die Einführung der erfindungsgemäßen Zubereitung aufgrund des Bacillus sp.538
Tafel 2 (Fortsetzung)
Nr. Salmonellose pyocyanischer Bacillus Menge von Tieren Gestorbene Tiere (Anzahl, %)
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Die Salmonelle in einer Dosis von 2 Milliarden Zellen in 1 cm³ einer 9%-
Sodiumchloridlösung wurde in 12 Ratten des Wistar Geschlechtes eingeführt. 6 Tiere
empfingen während 7 Tagen die erfindungsgemäße Zubereitung auf
intraperitonealem Weg in einer täglichen Dosis von 500 Millionen Zellen der
lebendigen Kultur des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes. In der Gruppe von
Bezugstieren sind alle Tiere gestorben; in der Versuchs-(Behandlungs-) Gruppe ist nur
eine Ratte gestorben.
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Bei 12 Kaninchen mit einem Gewicht von 1,5-2,2 kg machte man 4 lineare Wunden
(bis zu den Muskeln) auf deren Rücken. In die Ränder jeder Wunde wurde 1 ml von 5
Milliarden von sich in Suspension befindenden Zellen von der 24-stündigen
lebendigen Kultur des in der eitrigen Wunde des Kranken abgesonderten
Staphylokokkus aureus eingesickert; 6 Tiere empfingen je Tag mit der Nahrung
Milliarde Zellen der aufgrund des Bacillus subtilis 534-Stammes erhaltenen
erfindungsgemäßen Zubereitung. Im Vergleich mit den Bezugskaninchen
beobachtete man bei den mit der bakteriellen Zubereitung behandelten Kaninchen
eine von 2 bis 2,8 mal kleinere Abmessung der Entzündungsinfiltrate. Am zehnten Tag
betrug der Flächeninhalt der abgestorbenen Haut im Durchschnitt 5,7 cm² bei dem
Bezugstieren und 1,3 cm² bei den behandelten Tieren.
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Sich vernarbende Wunden wurden durch histologische Analyse am 4. und am 12.
Tag untersucht. Histologische Schnitte wurden mit hämatoxylin-Eosin gefärbt. Bei den
am 4. Tag genommenen histologischen Schnitt gab es keine wahrnehmbare
Unterschiede. Am 12. Tag waren die Granulationen in den Wunden der behandelten
Kaninchen reifer im Vergleich mit den Bezugskaninchen; die senkrechte
Anisomorphotropie verschwand dort, sie hatten ihr Gefüge schichtweise verloren.
Man beobachtete eine intensivere Überhäutung, eine breitere Epithelschicht.
Zusammen mit den klinischen Beobachtungen und den histologischen
Untersuchungen wurden die Aussaaten der Haut, des Blutes und der Wunden
durchgeführt. Nach der Absonderung der Reinkultur der Bacillusgattung wurden
deren physiologischen- Färbe-, biochemischen und antigenen Eigenschaften
untersucht. Auf der Haut fand man nicht den Bacillus subtilis 534-Stamm. Die
Ergebnisse der Entdeckung des Bacillus subtilis 534-Stammes in dem Blut und in den
Wunden sind in der Tafel 3 angegeben.
Tafel 3
Ergebnisse der Aufspürung der Bakterien des Bacillus subtilis 534-Stammes Menge von Tieren bei welchen die Bakterien des Bacillus subtilis 534-Stammes abgesondert worden sind Nach 24 h Nach 4 Tagen Wunde Blut Gruppe von 6 Bezugstieren Gruppe von 6 behandelten (Versuchs-)Tieren
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Um die Heilwirkung der drei Laborreihen der erfindungsgemäßen Zubereitung
aufgrund des Bacillus subtilis 534-Stammes zu untersuchen, wurden Experimente an
weißen Mäusen, an welchen man lineare Wunden von ungefähr 8 mm (bis zu den
Muskeln) mit dem Skalpel gemacht hat, durchgeführt. In die Ränder der Wunden
wurde 0,25 cm³ einer 2 Milliarden Zellen der 24-stündigen lebendigen Kultur des in
der eitrigen Wunde des Kranken abgesonderten Staphylokokkus Aureus
enthaltenden 0,9%-Sodiumchloridlösung eingesickert. Die Gruppe von Bezugstieren
wurde aus 18 Männchen und Weibchen gebildet. 24 Mäuse empfingen jeden Tag
200 Millionen Zellen des angegebenen Stammes auf innerem Weg.
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In der Gruppe von Bezugstieren, 2 bis 6 Tage später wurden 7 Mäuse (nach den
Angaben der Autopsie-wegen Blutvergiftung) verloren. Sämtliche Tiere der
Versuchsgruppe sind am Leben geblieben. Sie wurden am 4. und am 12. Tag
getötet. Nach der histologischen Untersuchung der Leber, der Milz am 4. und am 12.
Tag und der Gewebe der Wunde am 4. Tag hatte man keine Unterschiede zwischen
den Tieren der Versuchsgruppe und der Gruppe von Bezugstieren gefunden. Am 12.
Tag beobachtete man die Epithelisation bei 11 unter 15 mit der erfindungsgemäßen
Zubereitung behandelten Mäusen, während die Bezugstiere nur ihre ursprünglichen
Elemente hatten.
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Im Rücken der 12 Kaninchen mit einem Gewicht von 1,5 bis 2,2 kg machte man 4
lineare Wunden (bis zu den Muskeln). In die Ränder jeder Wunde wurde 1 ml einer
Aufschwemmung von 5 Milliarden Zellen der lebendigen Kultur des in der eitrigen
Wunde des Kranken abgesonderten Staphylokokkus aureus eingesickert. 6 Tiere
empfingen jeden mit der Nahrung die 1 Milliarde Zellen der lyophilisierten
lebendigen Kultur des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes enthaltenden
erfindungsgemäßen Zubereitung. Gegenüber den Bezugskaninchen beobachtete
man während den 5 ersten Tagen bei den mit der erfindungsgemäßen bakteriellen
Zubereitung behandelten Kaninchen 1,9-2,8 mal kleinere Abmessungen der
Entzündungsinfiltrate. Am 10. Tag hatten die Bezugstiere einen Flächeninhalt der
abgestorbenen Haut von ungefähr 5,8 cm² und die Versuchstiere von 1,5 cm². Bei
den Bezugstieren entwickelten sich ausgeprägten Eiterungsvorgänge mit einer
großen Absonderungsmenge, während nach der Behandlung mit der
erfindungsgemäßen Zubereitung die Vernarbung unter dem trockenen Schorf
erfolgte.
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Bei der Beobachtung der Tiere wurden die Aussaaten des der Vene des Ohres und
der Wunde entnommenen Blutes auf einer 5%-Glukoselösung durchgeführt. Am 4.
und 12. Tag hatte man die Wunde zweimal mit der alkoholischen Chlorhexidinlösung
behandelt und mit einem keimfreien Skalpel seziert. Die Aussaaten wurden aus der
tiefen Wunde entnommen. Die Ergebnisse der bakteriologischen Untersuchungen
sind in der Tafel 4 dargestellt.
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Die Untersuchungen der morphologischen, Färbe-, biochemischen und antigenen
Eigenschaften der Bakterien und deren Empfindung gegen die Antibiotiken haben
gezeigt, daß aus dem Blut und aus der Wunde der Bezugskaninchen, man die
Bakterien des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes abgesondert hat.
Tafel 4
Ergebnisse der Absonderung der Bakterien des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes in der bei Kaninchen experimentell infizierten Wunde Menge von Tieren, bei welchen die Bakterien des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes abgesondert worden sind Nach 24 h Nach 4 Tagen Wunde Blut Bezugsgruppe (11 Tiere) Versuchsgruppe
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Auf dem Rücken der 8 Kaninchen mit einem Gewicht von 1,5-2,2 kg machte man
cm lange lineare Wunden. In die Ränder jeder Wunde wurden 5 Milliarden von in 1
cm³ einer 0,9%-Sodiumchloridlösung enthaltene Zellen des Staphylokokkus aureus
eingesickert. Die Wunden wurden mit ärztlichem Klebstoff überdeckt. Für die
Behandlung führte man in die 4 Kaninchen einmal je 24 Stunden die
erfindungsgemäße Zubereitung aufgrund des B. bifidum Nr. 1-Stammes in einer
Menge von 200-500 Millionen von lebendigen Zellen ein. 10 Tage später betrug der
Flächeninhalt der Wunden bei den Bezugstieren 6,1±0,3 cm² und derjenige, der mit
der erfindungsgemäßen Zubereitung behandelten Tieren: 3,4±0,2 cm².
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Der B. bifidum Nr. 1-Stamm wurde in einem Zeitabstand von 0,5 bis 24 Stunden bei 2
Kaninchen, in einem Zeitabstand von 48 bis 72 Stunden erneut bei 2 Kaninchen, die
die Zubereitung empfingen abgesondert. Der Stamm wurde in der Wunde bei 3
Kaninchen abgesondert.
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Man hat Untersuchungen des Wirkungsmechanismus der erfindungsgemäßen
Zubereitung mit Hilfe der Historadiographie durchgeführt.
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In den den peptonisierten Ochsenagar zusammen mit 1 cm³ mit 14C markierten
Leucin (Dosis von 1 Mikron je Probierglas) enthaltenden probiergläsern ließ man die
Bacillus subtilis 534- und Bacillus sp. 538-Stämme während 48 Stunden bei der
Temperatur von 37ºC wachsen.
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Für den Versuch hatte man 8 Kaninchen mit einem Gewicht von 2-2,5 kg
genommen. An 4 Tieren machte man unter Inhalationsnarkose in dem
Rückenbereich 4 cm lange Wunden auf der Haut. Die Wunden wurden mit einem
Seidenfaden vernäht und mit einer ärztlichen Kleberschicht bedeckt.
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Die gezüchteten Mikroorganismen wurden auf intragastrischem Weg mittels einer
Magensonde in jedes Kaninchen in einer Dosis von 1 Milliarde von Zellen in 10 cm³
einer 0,9%-Sodiumchloridlösung am Anfang des Versuches und dann am Ende von
24 Stunden eingeführt.
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Der Ohrenvene hat man Blut 24 und 48 Stunden nach der Einführung der
Mikroorganismen entnommen. Am Ende von 48 Stunden wurden die Kaninchen
geköpft. Für die historadiographischen Untersuchungen hatte man die Gewebe der
Wunde, der Haut (bei den Kaninchen ohne Wunde), der Leber, der Milz, des
Magens, des Dickdarmes und des Dünndarmes usw. genommen. Die Stoffe wurden
in die 10%-Formalinlösung gestellt. Später durchführte man Schnitte, die Anwendung
der Photo-Emulsion mit Belichtung während einem Monat, die Färbung der Schnitte
und die Lichtbildaufnahmen. Bei allen Tieren verzeichnete man die Erscheinung von
Bakterien in dem Blut 24 Stunden nach der Einführung. Außerdem wurden Bakterien
in den lymphoiden Follikeln des Dünndarmes und in dem Bindegewege im Bereich
der Wunden nachgewiesen. Die Bakterien vermehrten sich in den Geweben um die
Wunde herum. Dies bestätigt das Vorhandensein von Ketten von Bakterien. Man
fand keine Bakterien in dem Bindegewebe der Haut der Kaninchen ohne Wunden.
Die Bakterien können in andere Gewebe, z. B. in die Milz eindringen und erhalten
bleiben. Es ist wichtig, das keine pathologischen Veränderungen in den
histologischen Schnitten der Gewebe, trotz des Vorhandenseins von Bakterien,
nachgewiesen worden ist.
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Die Ergebnisse der vorher durchgeführten Untersuchungen sind natürlich bestätigt
worden. Die Bakterien eines selben Stammes können von dem Dünndarm mit dem
Blutstrom in die Wunde eindringen. Sie können in die Wunde mit dem Blutstrom aus
anderen endogenen Quellen, z. B. aus der Milz eindringen.
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Um die akute Toxizität der erfindungsgemäßen Zubereitung zu ermitteln, hatte man
3 Reihen der aufgrund der lebenden Kultur des Bacillus subtilis 534-Stammes
gewonnenen Zubereitung verwendet. Jede Reihe wurde einmal auf
intraperitonealem Weg in 3 weißen Mäusen und in 3 Ratten der Wistar-
Nachkommenschaft jeweils in Dosen von 10 und 20 Milliarden von Zellen in 1 cm³
einer 0,9%-Sodiumchloridlösung eingeführt. Sämtliche Tiere blieben am Leben. Sie
aßen gut die Nahrung. Die Tiere wurden 3, 7, 14 Tage nach dem Versuch getötet. Die
histologische Untersuchung des Gehirnes, der Lungen, der Nieren, der Leber, des
Herzens zeigte weder Entzündungsänderungen noch Dystrophien. In der Milz
beobachtete man, eine Zunahme der Abmessungen der Follikeln und der Menge
von lymphozytischen Histiozyten und der Milzpulpa.
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Um den Grad der akuten Toxizität zu untersuchen wurden drei Reihen der
Zubereitung des Bacillus subtilis 534-Stammes jeweils einmal mit der Nahrung
zusammen in 5 weißen Mäusen und 6 weißen Ratten des Wistar-Geschlechtes
jeweils in Dosen von 10 und 20 Milliarden von Zellen eingeführt. Alle Tiere blieben am
Leben. Am nächsten Tag wurden die Tiere getötet. Nach den histologischen
Untersuchungen des Gehirnes, des Myokards, der Lungen, der Nieren, des Magens,
des Dünndarmes und des Dickdarmes hatte man keine Änderungen im Vergleich
mit den Bezugstieren (10 Mäusen und 10 Ratten) gefunden. In der Leber
beobachtete man, eine gewisse Zunahme der Menge von histio-lymphocytischen
Infiltraten in dem portal-hepatischen System. Bei der Ratte wies man die Zunahme
der Abmessungen der Follikeln, eine große Menge von lymphocytischen histiozyten
in der Milzpulpa und von Sterberg-Zellen nach.
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In 20 weißen Mäusen wurden auf intraperitonealem Weg die vorher mit den
Formalindämpfen getöteten Bacillus pulvifaciens 535- und Bacillus sp. 538-Stämme in
einer Dosis von 2 Milliarden von Zellen in 1 cm³ einer 0,9%-Sodiumchloridlösung
eingeführt. Erneut wurden lebendige Kulturen dieser selben Stämme in Dosen von 10
und 20 Milliarden von Zellen in 30 Mäusen und in 30 weißen Ratten der Wistar-
Nachkommenschaft eingeführt. Sämtliche Tiere blieben am Leben. Sie aßen die
Nahrung gut. Die Tiere wurden 37,14 Tage nach dem Versuch getötet. Bei der
histologischen Untersuchung des Gehirnes, der Lungen, der Nieren, des Herzens, der
Leber fand man keine Entzündungsänderungen und Dystrophien. In der Milz
beobachtete man, die Zunahme der Abmessungen der Follikeln und der Menge von
lymphocytischen Histiocyten in der Milzpulpa.
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In 15 weißen Mäusen und in 15 weißen Ratten des Wistar-Geschlechtes wurden
jeweils 10 und 20 Milliarden von sich in Suspension befindenden Zellen einer
lyophilisierten lebendigen Kultur des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes per os
eingeführt. Alle Tiere blieben am Leben. Am nächsten Tag wurden sie getötet. Bei
der histologischen Untersuchung des Gehirnes, des Myokardes, der Lungen, der
Nieren, des Magens, des Dünndarmes und des Dickdarmes wies man keine
Änderungen im Vergleich mit den Bezugstieren nach. In der Leber beobachtete
man, eine gewisse Zunahme der Menge von histiolymphocytischen Infiltraten in dem
portal-hepatischen System. In der Milz wies man die Zunahme der Abmessungen der
Follikeln und eine große Menge von lymphocylischen Histiocyten in der Milzpulpa
und von Sterberg-Zellen nach.
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In 12 Kaninchen wurden 24-stündige lebendige Kulturen der Bacillus pulvifaciens 535-
und Bacillus sp. 538-Stämme auf subkutanem Weg jeweils in Dosen von 100 Tausend,
1 Millionen, 10 Millionen, 1 Milliarde, 5 Milliarden von Zellen in 1 cm³ einer 0,9%-
Sodiumchloridlösung eingeführt. Der Allgemeinzustand der Tiere wurde nicht
geändert; alle Tiere blieben am Leben. Man beobachtete keine örtlichen
Veränderungen an der Einführungsstelle aber in dem Infektionsbereich wies man
während 2 Wochen Sporen erzeugende Bakterien nach.
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Für die Ermittlung der chronischen Toxizität wurden die drei Reihen der Zubereitung
aufgrund des Bacillus subtilis 534-Stammes jeweils während 30 Tagen auf
intraperitonealem Wege in 3 weißen Mäusen und in 3 weißen Ratten des Wistar-
Geschlechtes jeweils in Dosen von 20 Millionen und von 1 Milliarde von Zellen in 1 ml
einer 0,9%-Sodiumchloridlösung eingeführt. Außerdem wurde jede der drei Reihen
der Zubereitung in gleichwärtigen Dosen in 6 weißen Mäusen und in 6 weißen
Ratten des Wistar-Geschlechtes eingeführt. Sämtliche Tiere blieben am Leben. Das
Gewicht der Tiere in der Versuchsgruppe im Vergleich mit demjenigen der
Bezugstiere (je 10 Mäusen und Ratten) war um 11-17% (p< 0,05) größer. Das Haar bei
den Mäusen und den Ratten in der Versuchsgruppe war hellweiß, flaumig. Die Tiere
wurden am 31. Tag getötet. Nach der histologischen Untersuchung des Gehirnes,
des Myokards, der Nieren, der Lungen, des Magens, des Dünndarmes und des
Dickdarmes wies man keine Änderungen nach. In der Leber gab es eine große
Menge, im Vergleich mit den Bezugstieren, von sich in dem portal-hepatischen
System befindenden histiolymphocytischen Infiltraten. Bei der Milz der Tiere in der
Versuchsgruppe wurde die Lymphoidisierung der Milzpulpa und die Zunahme der
Abmessungen der Follikeln beobachtet; dagegen wies man keine Sterberg-Zellen
nach.
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Bei der Durchführung der die Untersuchung der chronischen Toxizität betreffenden
Versuche hatten nach 11-21 Tagen 6 weiße Mäuse 23 Mäuschen ohne Mißgeburt
zur Welt gebracht. Später hatten diese letzteren 7 Mäuschen ohne Mißgeburt zur
Welt gebracht.
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Um die chronische Toxizität zu ermitteln wurden die 24-stündigen lebendigen
Kulturen der Bacillus pulvifaciens 535- und Bacillus sp. 538-Stämme während 30
Tagen auf intraperitonealem Wege in 40 weißen Mäusen in einer täglichen Dosis
von 200-500 Millionen von Zellen und in 30 Raten der Wistar-Nachkommenschaft in
einer täglichen Dosis von 2 Milliarden von Zellen in 1 cm³ einer 0,9%-
Sodiumchloridlösung eingebracht. Außerdem empfingen 48 weiße Mäuse und 30
Ratten des Wistar-Geschlechtes zusammen mit Wasser während 30 Tagen, 200
Millionen und 1 Milliarde von Zellen der lyopholisierten Kultur der angegebenen
Stämme täglich. Alle Tiere blieben am Leben. Es wird betont, daß das Gewicht der
Tiere in der Versuchsgruppe im Vergleich mit demjenigen der Bezugstiere um 11,19%
und darüber hinaus zunahm. Das Haar bei den Tieren in der Versuchsgruppe war
hellweiß und flaumig. Die Tiere wurden getötet. Nach der histologischen
Untersuchung des Gehirnes, des Myokards, der Nieren, des Magens, des
Dünndarmes und und des Dickdarmes wies man keine Änderungen nach. In der
Leber wies man eine große Menge, im Vergleich mit den Bezugstieren, von in dem
portal-hepatischen System oder außerhalb gelegenen histiolymphocytischen
Infiltraten nach. Es wurde beobachtet, daß in der Milz der Bezugstiere die
Lymphoidisierung der Milzpulpa und die Zunahme der Abmessungen der Follikeln
stattfanden; wogegen man keine Sterberg-Zellen nachwies.
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Im Laufe der Durchführung der auf die Untersuchung der chronischen Toxizität
gerichteten Versuche hatten nach 11-21 Tagen, 9 weiße Mäuse 54 Mäuschen ohne
Mißgeburt zur Welt gebracht. Diese letzteren hatten 9 Mäuschen ohne Mißgeburt
zur Welt gebracht. In dieser Weise üben die lebendigen Kulturen der Stämme, selbst
bei intraperitonealen Einführung keinen Einfluß auf die Entwicklung des Fötus aus
und verursachen keine genetische Störungen.
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Die drei Reihen der Zubereitung aufgrund des Bacillus subtilis 534-Stammes wurden
jeweils in 4 Meerschweinchen in Dosen von 2 Milliarden von Zellen in 1 cm³ einer 0,9
%-Sodiumchloridlösung 6 mal auf subkutanem Weg jeden zweiten Tag eingeführt.
Nach Ablauf von 31 Tagen machte man in allen Meerschweinchen intramuskuläre
Einspritzungen der Zubereitung in Dosen von 2 Milliarden von Zellen in 1 cm³ einer 0,9
%-Sodiumchloridlösung. Man beobachtete keine örtliche bzw. allgemeine
Erscheinungen der allergischen Reaktionen.
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Die lebendigen Kulturen der Bacillus pulvifaciens 535- und Bacillus sp. 538-Stämme
wurden in Dosen von 2 Milliarden von Zellen in 1 ml einer 0,9%-Sodiumchloridlösung 6
mal jeden zweiten Tag auf subkutanem Weg in 24 Meerschweinchen (ein Stamm für
12 Tiere) eingeführt. 31 Tage später machte man in allen Meerschweinchen
subkutane Einspritzungen in Dosen von 2 Milliarden von Zellen der Mikroorganismen
dieser selben Stämme in 1 cm³ einer 0,9%-Sodiumchloridlösung. Man beobachtete
keine örtlichen bzw. allgemeinen Erscheinungen der allergischen Reaktionen.
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Um die Stabilität (Widerstandsfähigkeit) der erfindungsgemäßen Zubereitung zu
ermitteln, wurden 9 Kapseln der aufgrund der Bacillus subtilis 534-, Bacillus sp. 538-,
Bacillus pulvifaciens 535-Stämme in dichten Flaschen bei Umgebungstemperatur
während 7 Jahren gelagert. Erneut wurden 9 Kapseln während 3 Monaten bei einer
Temperatur von weniger als 20-22ºC gelagert; 9 Kapseln wurden während 2
Monaten bei der Temperatur von 110ºC gelagert. Die Menge von lebenden
Bakterien in den Kapseln wurde durch das Verfahren zum Besäen der verdünnten
Reihen ermittelt.
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Der Gehalt an Bakterien der Kapsel betrug 5,4 ± 0,5 Milliarden von Zellen vor dem
Anfang der Versuche, 5,2 ± 0,5 Milliarden von Zellen nach der siebenjährigen
Lagerung 5,4 ± 0,6 Milliarden von Zellen nach der Lagerung bei einer Temperatur
von weniger als 20-22ºC, 5,3 ± 0,6 Milliarden von Zellen nach der Lagerung bei der
Temperatur von 110ºC. In dieser Weise bezeugen die erhaltenen Daten, daß die
erfindungsgemäße Zubereitung sich bis zu 7 Jahre in einem breiten Bereich von
Temperaturen aufbewahren lassen kann.
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Verschiedene Formen der erfindungsgemäßen bakteriellen Zubereitung sind in der
Klinik für die Prophylaxe und die Behandlung der eitrigen Entzündungsvorgängen,
der allergischen Beschwerden, der Verdauungsstörungen, der Dysbakteriosen bei 117
Kranken verwendet worden.
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Zum Zweck der Vorbeugung der Vereiterung hat man die aufgrund des Bacillus
subtilis 534-Stammes erhaltene Zubereitung in Dosen von 50-500 Tausend Zellen nach
einer chirurgischen Primärbehandlung bei 8 Kranken mit offenen Brüchen der
Glieder und bei 5 Kranken mit akzidentellen Verletzungen der Muskelgewebe
verwendet. Die Eiterung entwickelte sich nur bei einem Kranken. Für die örtliche
Behandlung der Vereiterungsvorgänge wurde die erfindungsgemäße Zubereitung in
denselben Dosen örtlich während 10 Tagen bei 3 Kranken mit einer akuten
posttraumatischen Knochenmarkenentzündung, bei 2 Kranken mit Wunden in den
Muskelgeweben und bei 2 Kranken mit der Entzündung an der Stelle der Stäbe des
Illizarov'schen Gerätes verwendet. Die Eiterung hat ohne Gebrauch der Antiseptiken
bei 5 Kranken aufgehört. Es gab keine Komplikationen.
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Zusammen mit der positiven Wirkung hat man die negative Wirkung der örtlichen
Verwendung der erfindungsgemäßen Zubereitung nachgewiesen. Bei diesem
Verwendungsverfahren werden die Erscheinungen, wie Lymphadenitis,
Lymphangitis, Thrombophlebitis beibehalten und Komplikationen bei der
Behandlung der anderen Entzündungsvorgängen, z. B. der Lungenentzündungen
tauchen auf. Deswegen hat man die örtliche Verwendung der erfindungsgemäßen
Zubereitung abgelehnt und die Versuche durch Verabreichung auf innerem Weg
durchgeführt.
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Um die chirurgische eitrige Infektion vorzubeugen, wurde die Zubereitung auf
innerem Weg in Dosen von 5 Milliarden von Zellen je 24 Stunden während 10 Tagen
an 9 Kranken mit offenen Brüchen der Glieder,an 7 Kranken mit akzidentellen
Wunden der Muskelgewebe, an 12 Kranken nach chirurgischen Eingriffen
(Osteosynthese) verabreicht. Für die Behandlung wurde die erfindungsgemäße
Zubereitung in Dosen von 1-10 Milliarden von Zellen, 1 bis 2mal täglich auf innerem
Weg während 10 Tagen bei 14 von akuter und chronischer Osteomyelitis leidenden
Kranken, bei 14 Kranken mit eitrigen Wunden, bei 6 Kranken mit eitrigen
Entzündungsvorgängen in dem Bereich der Stäbe der Geräte mit Kompression-
Erweiterung, bei einem Kranken mit einem Gehirntrauma und einer hypostatischen
Lungenentzündung bei einem Kranken mit einem Gehirntrauma, einer
Lungenentzündung einer Gehirnhautentzündung, Druckbrandschorfen bei einem
Kranken mit einer auf die Zuckerkrankheit zurückzuführenden chronischen Sepsis, bei
2 Kranken mit einer Mandelentzündung bei einem Kranken mit
Nebenhöhlenentzündung eingeführt. Gemäß den Anzeigestellungen ist die
Behandlung ausgehend von der erfindungsgemäßen Zubereitung während 3 bis 7
Tagen bei 12 Kranken mit starken eiternden Vorgängen wiederholt worden.
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Es ist zu melden, daß 9 Kranken, die vorher die Antibiotiken empfingen, klinische
Erscheinungen von Dysbakteriosis hatten: Bauchschmerzen und Bauchgrimmen,
Wechselfolge der Konstipationen und der flüssigen Defäkation. Außerdem zeigten 7
Kranken eine Unverträglichkeit gegenüber einem Antibiotikum oder mehreren
Antibiotiken, gegenüber Sulfanylamidzubereitungen; ein Kranker hatte durch Fisch,
durch die Zitronenbäume, durch die Karotten, durch die Tomaten verursachte
allergische Reaktionen.
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Im Laufe der Behandlung mit der erfindungsgemäßen Zubereitung empfingen nicht
alle Kranken Antibiotiken oder andere antiseptische Zubereitungen. Für das
Waschen der Wunden und die Verbände verwendete man eine 10%-
Sodiumchloridlösung, eine 40%-Glukoselösung und eine 30%-Harnstofflösung.
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Zusammen mit der klinischen Untersuchung und der Beobachtung hatte man die
Radiographie des verletzten Gliedes, die Radioskopie und die Radiographie des
Brustkastens, die Thermometrie, die allgemeine Analyse des Blutes und des Harnes
die Ermittlung des Reststickstoffes, des Bilirubins, des Zuckers und der Menge von
Proteinen des Blutes durchgeführt. Außerdem untersuchte man die bakterizide
Wirkung des Blutserums, sein Gehalt an Lysozym, an Beta-Lysin; absonderte man in
den Wunden und in dem Blut die Aussaaten mit einer nachträglichen Ermittlung der
Zusammensetzung der Mikroflora, ihrer physiologischen, biochemischen,
antigenischen Eigenschaften und ihre Empfindlichkeit gegen den Antibiotiken.
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Bei Verabreichung auf innerem Weg der erfindungsgemäßen Zubereitung wurde
die Eiterung der Wunde nur bei einem Kranken unter 28 beobachtet. Bei diesem
Kranken mit dem offenen Bruch des Beines nach der Nekrose der Haut hatte sich die
Kruste, die sich allmählich abblätterte, gebildet. Die Wunde hatte sich mit einer
Nebenspannung vernarbt. Bei denjenigen Kranken, die die erfindungsgemäße
Zubereitung nicht empfingen, kamen die eiternden Entzündungsvorgänge häufiger
vor: Vereiterung der offenen Brüche bei 36% der Fälle, akzidentelle Wunden der
Muskelgewebe bei 14% der Fälle, der postoperativen Wunden nach der
Osteosynthese bei 7% der Fälle.
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Die Dynamik der Körpertemperatur war die folgende: 1 Tag 38,1 ± 0,2ºC; 72
Stunden 37,1 ± 0,1ºC; 7 TAGE 36,7 ± 0,1ºC; 11 Tage 36,4 ± 0,1ºC.
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Die Blutanalysen vor dem Beginn der Behandlung mit der erfindungsgemäßen
Zubereitung: Hämoglobin 101 ± 11 g/l, Anzahl von Leukocyten 8,9 ± 0,4 g/l,
Senkungsgeschwindigkeit 11 ± 0,4 mm/h Eosinocyten 0,9 + 0,1%, allgemeine
Proteine 56,1 ± 0,8 g/l; Bilirubin 15,4 ± 0,3 mmol/l; Zucker 4,1 ± 0,1 mmol/l;
Reststickstoff 19,9 ± 0,4 mmol/l. Gegen den 11. Tag nach Vollendung des Verlaufes
der prophylaktischen Therapie hatten die Anzahl von Leukocyten (6,8 ± 0,2 g/l) und
die Senkungsgeschwindigkeit (7,2 ± 0,3 mm/h) abgenommen (p< 0,01), hatte die
Menge von allgemeinem Protein (68 ± 0,6 g/l) und von Hämoglobin (139 ± 8 g/l)
zugenommen (p< 0,05) und der Prozentsatz von Eosinocyten (0,9 ± 0,1), die Menge
von Bilirubin (13,9 ± 0,2 mmol/l), von Zucker (3,9 ± 0,1 mmol/l), des Reststickstoffes
(20,2 ± 0,3 mmol/l) änderten sich wenig und unterscheideten sich nicht von den
Kennziffern der gesunden Menschen. Die bakterizide Tätigkeit des Blutserums war
ungefähr stabil: 88,2 ± 1,9% und 86,4 ± 1,8%. Der Gehalt an Lisozym des Blutserums
hatte von 7,9 ± 0,5 mg/ml je 24 Stunden bis 5,4 ± 0,7 mg/l gegen den 11. Tag
abgenommen (p< 0,05). Die Dynamik der Beta-Lysinen war ähnlich: 52,1 ± 2,1% und
44,6 ± 1,8% (p< 0,05). Derartige Schwankungen der Kennziffern der
Naturwiderstandsfähigkeit sind kennzeichnend des nicht komplizierten Verlaufes des
Traumas. Vor dem Beginn der Behandlung wurde in den Analysen des Hames von 7
Kranken die Zunahme der Menge von Leukocyten und die Erscheinung der
Erythrocyten festgestellt. Gegen den 11. Tag waren die Analysen des Harnes normal.
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Der Bacillus subtilis 534-Stamm wurde in dem Blut von 27 unter 28 Kranken und in der
Wunde bei 26 unter 28 Kranken abgesondert. Nach der prophylaktischen
Verwendung der erfindungsgemäßen Zubereitung hatte man keine Komplikationen
beobachtet; diese Tatsache wurde durch klinische Beobachtungen und Angaben
von Analysen bestätigt.
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Unter 36 Kranken mit eiternden Wunden (einschließlich Osteomyelitis und
chronischer Sepsis) wurde der Staphylokokkus in der Monokultur und der
Zusammensetzung von mikrobiellen Vereinigungen bei 26 Kranken, der
pyocyanische Bazille bei 6 Kranken, der Colibacillus bei 4 Kranken, der Protea bei 3,
andere Bakterien bei 8 Kranken abgesondert. 76% der erhaltenen Stämme waren
gegenüber der Wirkung von 5 und mehr Antibiotiken widerstandsfähig.
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24 Stunden nach dem Beginn der Behandlung beobachtete man, eine deutliche
Zunahme der eitrigen Sekretion. Die Wunden wurden schnell von den
abgestorbenen Geweben los. Später veränderte sich der Charakter des Sektors der
Wunde; die Menge von eiternden Sekretion nahm ab; sie wurde allmählich
seroeitrig mit einer leichten Verunreinigung aus zersetztem Blut. 1 bis 3 Tage nach dem
Beginn der Behandlung hatte sich das Granulationsgewebe gebildet; das Ödem,
die Lymphadenitis, die Lymphangitis waren verschwunden; die Epithelisation hatte
sich aktiviert.
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Die Vernarbung der eitrigen Wunden fand bei 23 unter 36 Kranken statt; bei 1
Kranken beobachtete man, die Besänftigung des Entzündungsvorganges
(Normalisierung der Körpertemperatur, die Säuberung der Wunden von den
abgestorbenen Geweben, die Abnahme der Menge der eitrigen Sekretion usw.
Während den folgenden Tagen hatten sich die Narben vernarbt, hatten sich die
Fisteln geschlossen bei 9 unter 11 Kranken. Die Behandlung mit der bakteriellen
Zubereitung war nur bei 2 Kranken erfolgreich (Verschlimmerung der chronischen
Osteomyelitis und Eiterung an der Stelle des Stabes des Ilizarov'schen Gerätes). Bei
diesem letzten Kranken beruhigte sich die Vereiterung an der Stelle eines Stabes,
aber sie tauchte an der Stelle des anderen Stabes auf. Nach der Behandlung der
Lungenentzündungen, der Gehirnhautentzündung, der chronischen Sepsis, der
Mandelentzündung der Nebenhöhlenentzündung waren alle Kranken vollständig
geheilt.
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Man beobachtete keine allergischen Reaktionen, trotz der Anlage für dieselben von
gewissen Kranken. Am Ende von 1 bis 4 Tagen hatten sich die klinischen
Erscheinungen der Dysbakteriosis bei 9 Kranken besänftigt. Unter Berücksichtigung
der Tatsache, daß 21 Kranken vor der Verwendung der erfindungsgemäßen
Zubereitung ohne positive Wirkung während 6 bis 42 Tagen mit den proteolytischen
Enzymen, den Antibiotiken und anderen Antiseptiken behandelt worden sind,
dürfen die erhaltenen Ergebnisse als positiv anerkannt werden.
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Die Dynamik der Körpertemperatur bei den Kranken mit den eiternden
Entzündungsvorgängen war die folgende: vor der Behandlung 38,3 ± 0,3ºC, am 3.
Tag 37,6 ± 0,3ºC, am 7. Tag 37,0 ± 0,2ºC, am 11. Tag 36,8 ± 0,1ºC. Blutanalysen vor der
Behandlung: Hämoglobin: 122 ± 13 g/l, Menge von Leukocyten: 9,1 ± 0,5% g/l,
Senkungsgeschwindigkeit: 16 ± 0,9 mm/h, Eosinocyten: 1,5 ± 0,2%, allgemeines
Protein; 52,4 ± 3,1 g/l, Bilirubin: 18,6 ± 0,4 mmol/l, Zucker: 4,6 ± 0,1 mmol/l,
Reststickstoff: 17,8 ± 0,6 mmol/l. Nach der Vollendung des Ablaufes der Behandlung
wurde die Menge von Leukocyten (6,9 ± 0,4 g/l) und die Senkungsgeschwindigkeit
(9,2 ± 0,8 mm/h) herabgesetzt (p< 0,001) der Gehalt an allgemeinem Protein nahm
bis 72 ± 4,4 g/l (p< 0,001) zu. Der Prozentsatz an Eosinocyten (1,0 ± 0,2%), die Menge
von Hämoglobin (138 ± 9 g/l), von Bilirubin (16,9 ± 0,3 mmol/l), von Zucker (4,8 ± 0,2
mmol/l) von Reststickstoff (17,4 ± 0,6 mmol/l) blieben zwischen den Grenzen der
Norm.
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Die bakterizide Tätigkeit des Blutserums nahm von 72,7 ± 2,8% bis 84,6 ± 2,1% (p< 0,01)
zu, der Gehalt an Lysozym, an Beta-Lysin nahm jeweils von 8,6 ± 0,6 mg/l bis 6,9 ± 0,5
mg/l und von 57,1 ± 2,4% bis 47,8 ± 2,7% (p< 005) ab, was die Besänftigung des
Entzündungsvorganges bezeugt.
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Vor der Behandlung mit der erfindungsgemäßen bakteriellen Zubereitung
beobachtete man in den Harnanalysen bei 12 Kranken, die Zunahme der Menge
von Leukocyten, die Erscheinung des Proteins und der Zylinder. Gegen den 11. Tag
waren die Harnanalysen bei 11 unter 12 Kranken normal. Der Bacillus subtilis 534-
Stamm wurde in dem Blut bei 38 unter 40 Kranken und in der Wunde bei 34 unter 36
Kranken, bei welchen die gegebenen Untersuchungen durchgeführt wurden,
abgesondert.
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Die aufgrund des Bacillus sp. 538-Stammes erhaltene bakterielle Zubereitung wurde
für die Behandlung des Ekzemes und der Diathesis bei 5 Kindern, des eiternden
Vorganges der Glieder bei 9 Kranken verwendet. Nach dem Kontrollprüfungen
wurde der Stamm in dem Blut bei allen Kindern 0,5 bis 48 Stunden nach der ersten
Verabreichung auf dem inneren Weg abgesondert. Man führte die Biopsie der Haut
an der Stelle der Verletzung mit den bakteriologischen Untersuchungen durch. Der
Stamm wurde von der Haut nach 2 bis 4 Tagen bei 4 unter 5 Kranken abgesondert.
Sämtliche Kinder waren geheilt. Bei 7 unter 9 Kranken wurde der eiternde Vorgang
ohne zusätzliche Behandlung aufgehalten.
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Die erfindungsgemäße Zubereitung aufgrund des E. Coli M17-Stammes mit Dosen
von 1-5 Milliarden von Zellen wurden zweimal täglich auf dem inneren Weg an 6
Kranken mit eiternden Vorgängen in den Muskelgeweben der Glieder verabreicht.
Die Verbände wurden mit einer 10%-Sodiumchloridlösung gemacht. Sie empfingen
keine anderen antibakteriellen Zubereitungen. 2 Tagen nach dem Beginn der
Behandlung beobachtete man die Senkung der Temperatur und die Abnahme der
eiternden Sekretion bei 4 unter 6 Menschen. An 2 Kranken ohne günstigen klinischen
Symptome verabreichte man die Antibiotiken.
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Bei der bakteriologischen Untersuchung des Blutes vor dem Beginn der Behandlung
waren die Aussaaten des Blutes keimfrei. 1 bis 2 Tage nachher wurde der E. coli M17-
Stamm in dem Blut bei 5 unter 6 Kranken abgesondert.
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Vor der Behandlung wurde in der Wunde: der Staphylokokkus aureaus in der
Monokultur und in den Vereinigungen mit dem pyocyanischen Bazillen, die Protea (2
Beobachtungen) abgesondert. Der Colibacillus wurde in der Sekretion der Wunden
mit dem Staphylokokkus am Ende von 2 bis 5 Tagen der Behandlung bei 4 unter 6
Kranken abgesondert. Die Identifizierung zeigte, daß es der E. coli M17-Stamm war.
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Die aufgrund der Bacillus subtilis 534-, Bacillus pulvifaciens 535-, Bacillus sp. 538-
Stämme erhaltene erfindungsgemäße bakterielle Zubereitung wurde für die
Behandlung der Pyelonephritis bei 2 Kranken verwendet. Die Zubereitung wurde auf
innerem Weg mit Dosen von 1 bis 10 Milliarden Zellen je 24 Stunden während 7 bis 10
Tagen in 1 bis 3 Mal verabreicht. Bei 2 Kranken war die Remission des Leidens
unverkennlich.
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Die erfindungsgemäße Zubereitung wurde ebenfalls in der tierärztlichen Medizin
erprobt.
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Die aufgrund des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes erhaltene Zubereitung wurde für
die Prophylaxe und die Behandlung der Dyspepsien der Ödemkrankheiten der
Mastiten verwendet. Für die Prophylaxe wurde sie mit der Nahrung oder mit Wasser
in Dosen von 100-200 Millionen von Zellen je kg Gewicht 1 Mal je 24 Stunden
während 10 Tagen und dann in gleichwärtigen Dosen 2 Mal wöchentlich verwendet.
Für die Behandlung wurde sie in Dosen von 100-200 Millionen von Zellen je kg
Gewicht jede 24 Stunden während 10 Tagen verabreicht. Man verwendete keine
anderen Antibiotiken für die Behandlung.
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Die erfindungsgemäße Zubereitung wurde in einer Gruppe von 3270 Schweinchen
im Alter von 2 Wochen bis 2 Monaten versucht. 164 Tiere wurden verloren (5,0%). In
der Gruppe von Bezugstieren, bei welcher die Prophylaxe und die Behandlung mit
den vorher bekannten Verfahren durchgeführt worden ist, wurden 74 unter 500 Tiere
verloren (14,3%). Die tägliche Gewichtszunahme in der Versuchsgruppe betrug
248 g, diejenige in der Gruppe von Bezugstieren: 230 g.
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Die erfindungsgemäße Zubereitung wurde bei der Gruppe von 1781 Schweine im
Alter von 2 bis 4 Monaten versucht. 26 Schweine sind gefallen (1,5%). In der Gruppe
von Bezugstieren mit der Ödemkrankheit und der Dyspepsie mit denselben Fristen
sind 140 (5,9%) unter 2387 Tieren gefallen. Bei einer gleichen Nahrungsration betrug
die tägliche Gewichtszunahme 346 g in der Versuchsgruppe und 283 g in der
Gruppe von Bezugstieren.
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Gewisse Fälle der Ödemkrankheit und der Dyspepsie liefen im allgemeinen in einer
leichten Form ohne Gewichtsverlust nach der prophylaktischen Verwendung der
erfindungsgemäßen Zubereitung ab. Man beobachtete weder Mastiten bei den
Sauen während der ganzen Versuchsperiode noch Komplikationen.
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Die erfindungsgemäße Zubereitung wurde in einer Menge von 0,5 bis 2 g trockenem
Pulver in die Nahrung für alle Tiere eingeführt. Es gab keine Komplikationen bei der
Verwendung der Zubereitung.
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Die in der tierärztlichen Praxis verwendete erfindungsgemäße Zubereitung erhöht
das Gewicht der Tiere beträchtlich. Man kann sie also für prophylaktische Zwecke
während der Zucht von jungen Tieren und für die Verbesserung der Assimilation des
Viehfutters verwenden.
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Die erfindungsgemäße Zubereitung wird gemäß der folgenden Technologie
gewonnen.
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Man züchtet die Kultur von Bakterien auf 3%-peptonisierten Ochsenagar, auf der
Milch oder auf dem Blaurokk-Medium bei einer Temperatur von 36-37ºC während 24
Stunden. Dann wird die Kultur mit einer 0,9% Sodiumchloridlösung gewaschen. Die
erhaltene Suspension wird während 24 bis 36 Stunden bei einem Druck von 40 bis 80
Pa und bei einem Temperaturunterschied von -20 bis 40ºC lyophilisiert. Man
unterwirft die erhaltene Zubereitung Untersuchungen, mit dem Ziel, das Ausbleiben
von mechanischen Verunreinigungen, der Kontamination mit einer fremden
Mikroflora, den Gehalt an lebendigen Bakterien in 1 mg, deren antagonistische
Tätigkeit, die Unschädlichkeit bei Experimenten mit den Tieren gemäß den
allgemein bekannten Verfahren festzustellen.
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Die für die Verwendung fähige Reihe wird eingetragen und verpackt.
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Um das Wesentliche der Erfindung besser zu verstehen, gibt man die folgenden nicht
einschränkenden Beispiele der Gewinnung der bakteriellen Zubereitung und Ihrer
Versuche, an.
Beispiel 1
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Man gießt 200 bakteriologische Kissen aus 250 cm³ von 3%-keimfreien
peptonisierten Ochsenagar. Unter Befolgung der Asepsis führt man in jedes Kissen 10
cm³ einer 100 Millionen von Zellen des Bacillus subtilis 534-Stammes enthaltenden
Suspension in 1 cm³ einer 0,9%-Sodiumchloridlösung ein. Die Kissen werden mit
Stöpsel aus Watte-Gaze geschlossen und in Thermostaten bei einer Temperatur von
36 bis 37ºC gestellt.
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Am Ende von 24 Stunden unter Befolgung der Asepsis wäscht man die erhaltene
Kultur mit einer 0,9%-Sodiumchloridlösung in einer Menge von 100 cm³ für 1
bakteriologisches Kissen. Man gießt die erhaltene Aufschwemmung in Glasflaschen
von 500 cm³ ein. Man führt die Lyophilisierung während 24 Stunden unter dem Druck
von 70 Pa durch.
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1 mg der gewonnenen Zubereitung enthält 250 Millionen von lebendigen Zellen des
Bacillus subtilis 534-Stammes. Die Untersuchungen haben gezeigt, daß die
Kontamination mit einer fremden Mikroflora und die mechanischen
Verunreinigungen in der enthaltenen Zubereitung ausbleiben.
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Die Zubereitung hemmt das Wachstum des Staphylokokkus aureaus in dem Bereich
von 30 mm, der Protea in dem Bereich von 28 mm, der Saccharomyceten in dem
Bereich von 32 mm. Die Einführung auf innerem Weg der Zubereitung in 12 weißen
Mäusen hat ihre Unschädlichkeit bestätigt. Die erzeugte Reihe wurde eingetragen
und verpackt. Ihr Volumen beträgt 10 tausend Dosen für den Menschen.
Beispiel 2
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Die Kranke A., 59 Jahre. Diagnostik: Verschlimmerung der chronischen
Mandelentzündung. Sie leidet seit 48 Stunden; sie verträgt nicht die Antibiotiken, die
Sulfanylamiden. Die Milch und die Karotte verursachen Durchfall und
Nesselausschlag (Ausschläge auf der Haut). Man hat ihr die Zubereitung aufgrund
der lebendigen Kultur des Bacillus subtilis 534-Stammes in einer Dosis von 5 Milliarden
von Zellen einmal jede 24 Stunden verabreicht. Die Verschlimmerung der
Mandelentzündung wurde am Ende von 4 Tagen aufgehalten. Man hat die
Behandlung erneut während 6 Tagen verlängert. Man hat die Kranke am Ende von 6
Monaten besichtigt. Sie war klinisch gesund. Sie ißt die Milch und die Karotten in
mäßigen Mengen und weist keine Nahrungsallergie auf.
Beispiel 3
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Die Kranke M., 56 Jahre. Diagnostik: Panaritium osseum des zweiten Fingers der
linken Hand, Lymphadenitis. Sie ist seit zwei Monaten krank. Man hat die Abcision des
Abszesses und die Sequestrektomie zweimal durchgeführt. Sie empfing Antibiotiken
mit breitem Wirkungsspektrum und Verbände mit den Antibiotiken. Man hat der
Kranken die Amputation des Fingers vorgeschlagen. Der zweite Finger ist deutlich
ödematös, cyanotisch. In dem Bereich der Mittelphalanxe gibt es eine Wunde mit
einem Durchmesser von 1 cm. Die Granulationen sind blaß, mit Fibrin überdeckt. Die
Sekretion ist sero-eitrig. Die lymphatischen Knoten sind vergrößert und schmerzhaft.
Nach der bakteriologischen Untersuchung sind der Staphylokokkus und die Bakterien
der Pseudomonasgattung abgesondert worden. Auf innerem Weg hat man ihr die
Zubereitung aufgrund der lebendigen Kultur des Bacillus subtilis 534-Stammes in
Dosen von 5 Milliarden von Zellen zweimal jede 24 Stunden verabreicht. Die
Verbände waren mit einer 10%-Sodiumchloridlösung gemacht. Am Ende von 24
Stunden ist der Bacillus subtilis 534-Stamm in der Wunde abgesondert worden. Am
Ende von 3 Tagen hatte sich die Wunde gereinigt; am Ende von 9 Tagen war die
Wunde epithelisiert.
Beispiel 4
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Die Kranke G., 48 Jahre. Diagnostik: chronische Sepsis, Entzündungsinfiltrat des linken
Unterarmes, Zuckerkrankheit mittlerer Gefährlichkeit, Dysbakteriosis.
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Sie ist seit anderthalb Jahren krank. Nach den mikroskopischen Traumata sind
Abszessen, Furunkeln und Phlegmone der Glieder und des Brustkorbs aufgetaucht.
Sie hat 9 Operationen der Abcision und der Drainage der Abszessen ertragen. Nach
einer langen Verwendung der Antibiotiken hat sich die Dysbakteriosis entwickelt; sie
war durch die Wechselfolge der Durchfälle und der Konstipationen, den
Meteorismus beunruhigt; sie überwachte die Diät und empfing ständig Insulin. Sie
wurde nach einer Verschimmerung und einer Bildung des Entzündungsinfiltrates in
der Klinik untersucht. Der Staphylokokkus aureaus wurde in dem Blut abgesondert.
Man hat die Behandlung während 10 Tagen mit der bakteriellen Zubereitung
aufgrund der lebendigen Kultur des Bacillus subtilis 534-Stammes in Dosen von 5
Milliarden von Zellen 2 Mal jede 24 Stunden durchgeführt. Die Zubereitung wurde ihr
auf dem inneren Weg verabreicht. Die Kranke empfing dann keinen anderen
antibakteriellen Zubereitungen. Nach 48 Stunden war das Entzündungsinfiltrat
verschwunden. In der Aussaat des Blutes hat man nur den Bacillus subtilis 534-Stamm
festgestellt. Normale Defäkation.
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Nach 5 Wochen hatte sich die Kranke an der rechten Hand gestochen; es hatte
sich das Entzündungsinfiltrat gebildet. Man hat die Behandlung des Armes während
10 Tagen ausgehend von der erfindungsgemäßen Zubereitung aufgrund der
lebendigen Kultur des Bacillus sp. 538-Stammes durchgeführt, die man ihr auf
innerem Weg in Dosen von 5 Milliarden von Zellen 2 Mal jede 24 Stunden verabreicht
hat. Das Entzündungsinfiltrat ist am Ende von 5 Tagen verschwunden.
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Die Kranke wurde 2 Jahre später untersucht; sie befolgt die Diät, empfängt Maninil
anstatt Insulin. Die Abszessen erscheinen nicht mehr; die Defäkation findet täglich
statt, ist normal.
Beispiel 5
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Der Kranke K.; 44 Jahre. Diagnostik: linke Bronchopneumonie, krank seit 6 Tagen.
Beschwerden wegen der Steigerung der Temperatur bis 38,5ºC, wegen Husten mit
Sputum, wegen Schwäche. Die Diagnostik ist durch die radiologischen Angaben
bestätigt. Man hat die Behandlung mit der erfindungsgemäßen Zubereitung
aufgrund der lebendigen Kultur des Bacillus sp. 538-Stammes in Dosen von 2
Milliarden von Zellen jede 24 Stunden durchgeführt. Man verabreichte die
Zubereitung per os während 10 Tagen. Der Kranke wurde geheilt.
Beispiel 6
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Die Kranke M., 53 Jahre. Diagnostik: chronische zweiseitige Pyelonephritis,
Verschlimmerung. Sie ist seit 9 Jahren krank. Die Verschlimmerungen wiederholen
sich 5 bis 8 Mal jährlich. Die letzte seit 2 Wochen. Die Behandlung mit den bekannten
antibakteriellen Zubereitungen war nicht wirksam. Bei der Untersuchung hatte sie
Schmerzen in der Lendengegend, häufige Harnabsonderungen, eine Erhöhung der
Temperatur am Abend. Man hat eine große Menge von Leukocyten und der
gramnegativen Bakterien durch mikroskopische Analyse in dem Harn festgestellt. Für
die Behandlung hat man die 15% der Zellen des Bacillus subtilis 534-Stammes, 20%
der Zellen des Bacillus pulvifaciens 535, 65% der Zellen des Bacillus sp. 538
enthaltende Zubereitung verwendet. Sie wurde ihr in Dosen von 0,5 Milliarde von
Zellen 2 Mal während 15 Tagen verabreicht. Die Temperatur normaiisierte sich am
Ende von 6 Tagen; die Schmerzen haben sich gelindert. Die Pyurie ist gegen den 9.
Tag verschwunden. Man hat die Bakterien der Bacillus-Gattung in dem Blut nach 24
Stunden und in dem Harn 72 Stunden nach der Verabreichung der ersten
Zubereitung abgesondert.
Beispiel 7
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Die Kranke K., 46 Jahre. Diagnostik: Bronchialasthma, krank seit 11 Jahren. Diesen
letzten Monat fanden die Erstickungsanfälle 3 bis 5 Mal jede 24 Stunden statt. Die
pathogenetische Behandlung mit den bekannten Zubereitungen ergab nur eine
kurzfristige Erleichterung. Man hat die Behandlung mit der erfindungsgemäßen
Zubereitung aufgrund der lebendigen Kultur des Bacillus sp. 538-Stammes
durchgeführt. Die Zubereitung wurde ihr auf innerem Weg in Dosen von 3 Milliarden
von Zellen während 10 Tagen verabreicht. Die Menge von Sputum hat am Ende von
2 bis 4 Tagen zugenommen. Die Häufigkeit des Erstickungsanfalls wurde allmählich
vermindert. Sie wurde während 2 Monaten untersucht. Sie beobachtete die
Verbesserung des Zustandes. Das Atmen ist freier. Die Erstickungsanfälle werden nur
noch 1 bis 2 Mal wöchentlich beim Vorhandensein von starken Gerüchen
beobachtet.
Beispiel 8
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Der Kranke V., 15 Jahre. Diagnostik: eitrige Wunde des rechten Fußes. Er hat sich
den Fuß mit Glas eingeschnitten. Gegen den 3. Tag erschien die eiternde Sekretion,
die Körpertemperatur stieg an. In der Wunde sonderte man den Staphylokokkus
aureaus ab. Man führte die Behandlung mit der von dem E. coli M17-Stammes
ausgehenden, auf dem inneren Weg in Dosen von 1 Milliarde von Zellen 2 Mal
während 12 Tagen verabreichten erfindungsgemäßen Zubereitung durch. Man
verwendete die Verbände mit einer 10%-Sodiumchloridlösung. Die Heilung fand 11
Tage später statt. Der E. coli-Stamm wurde in dem Blut und in der Wunde 48 Stunden
nach der Behandlung abgesondert.
Beispiel 9
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Der Kranke P., im Alter von 14 Monaten. Diagnostik: Diathesis. Während 4 Monaten
gab es einen hellroten Ausschlag auf der Haut des Gesichtes und der Hände. Das
Jucken hat ihn ständig gequält. Das Kind empfing die diätetische Nahrung. Die
Behandlung mit desensibilisierenden Erzeugnissen war unwirksam. Die
erfindungsgemäße Zubereitung aufgrund der lebendigen Kultur des Bacillus sp. 538-
Stammes in Dosen von 200 Millionen von Zellen wurde ihm auf innerem Weg mit der
Nahrung 2 mal während 10 Tagen verabreicht. Der Ausschlag und das Jucken
verschwanden am Ende von 7 Tagen. Der Bacillus sp. 538-Stamm wurde in dem Blut
und den Biopsiestoffen 24 Stunden nach der ersten Einführung abgesondert.
Beispiel 10
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Die Kranke R., 3 Jahre. Diagnostik: Ekzem des Kindes. Sie ist seit zwei ein halb Jahren
krank. Die Krankheit ist zum ersten Mal als Diathesis erschienen. Die Behandlung mit
den desensibilisierenden Zubereitungen, den proteolytischen Enzymen, Salben mit
corticosteroiden und die Diät war unwirksam. Sie war kachektisch. Die Haut des
Gesichtes, des Körpers und der Glieder war gänzlich mit weißlichen Schuppen in
Abwechslung mit den Bläschen überdeckt. Die Haut trug Spuren von Kratzwunden.
Man hat die Behandlung (4 Reihen) mit der erfindungsgemäßen Zubereitung
aufgrund der Bacillus sp. 538- und Bacillus subtilis 534-Stämme durchgeführt. Die
Zubereitungen wurden ihr auf innerem Weg in Dosen von 1 Milliarde von Zellen
während 10 Tagen verabreicht. Die Zwischenräume zwischen den Reihen betrugen
10 bis 20 Tage. Die Kranke wurde geheilt. Man hat die Bakterien der Bacillus Gattung
in dem Blut und den Biopsiestoffen der Haut nach 2 Tagen Behandlung
abgesondert.
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Die Kranke wurde am Ende eines Jahres untersucht. Die Haut war sanft, elastisch; es
gab keine Ausschläge. Man hatte sie von der Diät dispensiert. Die Kranke steigerte
ihr Gewicht; ihre Entwicklung entspricht der physiologischen Norm.
Beispiel 11
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Die aufgrund des Bacillus subtilis 534-Stammes gewonnene Zubereitung wurde bei
drei Gruppen von Kälbern im Alter von 1 bis 15 Tagen erprobt.
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Die erste Gruppe (38 Tiere) empfing je 5 mg (20 Milliarden von Mikrobiellkörpern) der
Zubereitung mit der Milch 1 Mal täglich während 10 Tagen und dann in
gleichwärtigen Dosen 2 Mal wöchentlich. Die tägliche Zunahme des Gewichtes in
der Gruppe betrug 715 g; 100% der Tiere sind unversehrt geblieben.
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Die Tiere der zweiten Gruppe (37 Tiere) empfingen die Kultur in einer
propionischenacidophilen Brühe in täglichen Dosen von 50-100 je Tier ein Mal täglich. Die tägliche
Zunahme des Gewichtes in dieser Gruppe betrug 511 g. Zwei Tiere wurden mit der
Diagnostik der Bronchopneumonie verloren.
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Die dritte Gruppe (31 Tiere) galt als Bezug. Während zwei Monaten hat man eine
tägliche Zunahme des Gewichtes von 391 g erzielt; ein Kalb wurde mit der
Diagnostik der Bronchopneumonie verloren.
Beispiel 12
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Die erfindungsgemäße Zubereitung aufgrund des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes
in Dosen von 50 bis 100 Milliarden von Zellen wurde 2 Mal jede 24 Stunden mit dem
Viehfutter an 16 von Endometritis leidenden Kühen verabreicht. 13 Tiere wurden am
Ende von 7 bis 8 Tagen ohne zusätzliche Behandlung geheilt. 4174 Kühe empfingen
vor dem Kalben diese Zubereitung in Dosen von 10 bis 50 Milliarden von Zellen mit
dem Viehfutter 1 Mal täglich: die Endometritis hatte sich bei 17% der Tiere
entwickelt, während bei 5065 Kühe der Bezugsgruppe: bei 80% der Fälle.
Beispiel 13
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Für die Erprobung der aufgrund des Bacillus pulvifaciens 535-Stammes erzielten
erfindungsgemäßen bakteriellen Zubereitung hat man zwei Gruppen von Küken des
eierlegenden Geschlechtes im Alter von einem Tag genommen.
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Die erste Gruppe (1368 Küken) empfing die Zubereitung in Dosen von 500 Millionen
von Mikrobiellkörpern je kg lebender Masse mit der Nahrung 1 Mal täglich während
10 Tagen und dann mit gleichen Dosen 1 Mal jeden dritten Tag.
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Die zweite Gruppe (1420 Küken) war die Bezugsgruppe.
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Es wurde festgestellt, daß im Alter von 10 Tagen, die Zunahme des
Durchschnittsgewichtes in der Versuchsgruppe 11,5% betrug und im Alter von 20
Tagen um 10,2% höher war als diejenige der Bezugsgruppe.
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Der Verlust an Küken während 20 Tagen Zucht stellte 6,36% in der Versuchsgruppe
und 7,32 in der Bezugsgruppe dar.
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Die erfindungsgemäße bakterielle Zubereitung findet in der Medizin und in der
tierärztlichen Medizin Anwendung. Die erfindungsgemäße Zubereitung kann für die
Prophylaxe und die Behandlung der folgenden pathologischen Vorgängen
verwendet werden:
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a) durch grampositive und gramnegative Bakterien, die Myceten (eitrige Wunden,
Abszessen Phlegmonen Lymphangitis. Furunkeln Karbunkeln Sepsis,
Lungenentzündungen Bauchfällentzündungen, Gallenblasenentzündung,
Endometritis, Pyelonephritis, Durchfall usw.)
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b) allergische Krankheiten (Diathesen, Ekzemen, Bronchialasthmen, Unverträglichkeit
gegenüber medizinische Zubereitungen und Nahrungserzeugnissen);
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c) durch das Defizit an eigenen proteolytischen Enzymen verursachte Störungen der
Verdauung;
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d) Dysbakteriosen.
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Außerdem kann die Zubereitung in tierärztlicher Medizin für die Verbesserung der
Assimilation des Viehfutters verwendet werden. Sie ermöglicht die Verminderung des
für die Ernährung unerläßlichen Rationsvolumens.