DE3875852T2 - Gereinigtes igm. - Google Patents
Gereinigtes igm.Info
- Publication number
- DE3875852T2 DE3875852T2 DE8888111931T DE3875852T DE3875852T2 DE 3875852 T2 DE3875852 T2 DE 3875852T2 DE 8888111931 T DE8888111931 T DE 8888111931T DE 3875852 T DE3875852 T DE 3875852T DE 3875852 T2 DE3875852 T2 DE 3875852T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- igm
- preparation according
- less
- nucleic acid
- acid content
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 26
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims abstract description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 28
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 7
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 6
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 abstract description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101000766306 Homo sapiens Serotransferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000008570 general process Effects 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1214—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Pseudomonadaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
- Diese Offenbarung betrifft allgemein gereinigte Immunglobuline und insbesondere ein hochgereinigte Immunglobulin der IgM-Klasse, welches im wesentlichen frei von Nukleinsäuren ist.
- IgM ist ein gut bekanntes 19S-Immunglobulin, welches ca. 7% der Immunglobuline im Menschen ausmacht. IgM-Antikörper haben eine Antikörpervalenz von mindestens fünf, und sind die Antikörper, die am frühesten während einer Immunantwort erzeugt werden. Obwohl IgM-Antikörper besonders bei der Bekämpfung bakterieller Infektionen sehr effektiv sind, haben sie eine relativ kurze Halbwertszeit in vivo von ca. 5 Tagen. Ferner sind IgM-Antikörper labil und sind insbesondere in gereinigter Form relativ schwierig zu stabilisieren.
- Es sind eine Reihe verschiedener Reinigungswege für aus Plasma gewonnenem IgM und, in jüngster Zeit, monoklonal hergestelltem IgM vorgeschlagen worden. Im Falle des IgM aus Plasma ist es seit den 40er Jahren bekannt, daß Alkoholfraktionierungstechniken eingesetzt werden können, um ein relativ konzentriertes IgM aus der als Cohn III bekannten Fraktion zu gewinnen. Siehe z. B. U.S.-Patent 4,318,902 (und die Literaturverweise) von W. Stephan, das die Verwendung von beta-Propriolacton zur Herstellung von konzentriertem IgM, welches zur intravenösen (IV) Verabreichung geeignet ist, betrifft. Zusätzlich siehe EPO-Anmeldung 0 038 667 von Miura et al (IgM-Acylierung). Siehe ebenfalls U.S.-Patent Nr. 4,272,521 von Zuffi, das allgemein die Reinigung von Immunserumglobulinen unter Verwendung von Ionenaustauscherharzen bei einem alkalischen pH betrifft. Andere IgM-Reinigungs- oder -Herstellungsverfahren sind bei U. Sugg et al, Vox Sang. 36 : 25-28 (1979); M. Steinbach et al, Preparative Biochemistry 3(4), 363-373 (1973) und A. Wichman et al, Biochem. Biophys. Acta 490 : 363-69 (1977) offenbart. Verfahren zur Herstellung spezifischer monoklonaler Antikörper des IgM-Typs werden im U.S.-Patent 4,271,145 von Wands et al gezeigt. Ein spezifischer Immuntest unter Verwendung hochaffiner IgM-Antikörper ist in WO 82/01072, veröffentlicht von Wands et al, offenbart. Siehe ebenfalls I. A. Sampson et al, J. Immuno. Meth. 69, Seiten 9-15, 1984. Aus einer Vielzahl technischer Gründe ist IgM aus dem Plasma relativ schwierig zu reinigen, und die bis heute am höchsten bekannte Reinheit ist ca. 90 Gew.-% IgM. Ebenfalls wurde bislang der Nukleinsäuregehalt von solchem IgM aus dem Plasma im allgemeinen nicht als wichtig angesehen, da das IgM aus einer menschlichen Plasmaquelle gewonnen wird.
- Man nimmt an, daß typische Nukleinsäuregehalte für IgM aus dem Plasma im Bereich von 1 ng bis 10 ug pro mg liegen. Seit der Veröffentlichung von Köhler und Milstein, "Continuous Cultures of Fused Cells Secreting Antibody of Predefined Specificity", Nature 256 : 495-497 (1975), ist die Gewinnung von monoklonalen Antikörpern bekannt. Monoklonale Antikörper mit einer gegebenen Spezifität werden nun routinemäßig unter Verwendung somatischer Zellhybride (siehe z. B. U.S.-Patent Nr. 4,172,124 von H. Koprowski et al), unter Verwendung von EBV transformierter Zellen (siehe z. B. U.S.-Patent Nr. 4,446,465 von M. Lostrom), einer Kombination der beiden Verfahren, oder durch Elektrofusion von Zellen hergestellt. Monoklonale Antikörper von sowohl der IgG- wie der IgM-Klassen sind hergestellt, gereinigt und charakterisiert worden. Solche IgM-Präparationen werden von D. Nau, Biochromatography, 1, No. 2, Seiten 83-84 (95% reines IgM aus Gewebekulturen); M. Fishner, U.S.-Patent Nr. 4,604,235 (90% reines IgM aus Mausascitesflüssigkeit, welches als im wesentlichen reiner Antikörper charakterisiert wurde), J. R. Wands et al, WO 82/01072 (Hochaffinititäts-IgM monoklonale Antikörper für Diagnostika, wie oben zitiert); S. Burchiel et al, J. Immuno. Meth., 69, S. 33, 1984 (IgG gereinigt aus Mausascitesflüssigkeit, J. Deschamps et al, Anal. Biochem. 147, S. 451, 1985 (IgG aus Mausascitesflüssigkeit); und T. Brooks et al, Amer. Lab., Oktober 1985 (Verwendung von Hydroxyapatit zur Reinigung von Maus und menschlichem IgG und IgM) beschrieben. Obwohl Anstrengungen unternommen wurden, IgM aus monoklonalen Quellen zu reinigen, liegt die bis heute am höchsten berichtete IgM-Reinheit bei ca. 95% (siehe Nau oben).
- Die Herstellung eines monoklonalen IgM gegen P. aeruginosa ist offenbart, und IgM aus einer menschlichen Lymphoblastoidgewebekultur und DEAE SephacelTM ist als erster Reinigungsschritt für IgM eingesetzt worden. Therapeutisch annehmbare isotonische Lösungen von IgM mit einer Konzentration von 0,005 bis 0,5 ug pro ml sind bekannt, es existieren jedoch keine Daten über die relative Reinheit des IgM-Produkts oder seiner Formulierung.
- Obwohl der Nukleinsäuregehalt von IgM aus Plasma keinen Anlaß zu erhöhter Sorge gibt, ist der Nukleinsäuregehalt von monoklonalem IgM sehr bedeutsam, daß die potentielle Gefahr des Einführens fremder (nichtmenschlicher) Nukleinsäure in den Menschen über ein parenteral verabreichtes Produkt besteht. Daher ist zusätzlich zu der Absicht, ein gereinigtes und konzentriertes IgM-Produkt zu erhalten, es auch wünschenswert, ein solches Produkt ohne oder mit sehr wenig Nukleinsaure zu gewinnen. Wir haben nun gefunden, daß ein solch gereinigtes Produkt durch sorgfältige Kontrolle der Verfahrensschritte und Lagerungsbedingungen hergestellt und stabilisiert werden kann. Einzelheiten unseres hochgereinigten IgM sind im folgenden beschrieben.
- Unsere Offenbarung betrifft ein im wesentlich reines und stabilisiertes IgM-Antikörperprodukt, das IgM-Antikörper mit einer Reinheit größer als ca. 98 Gew.-% und einen Nukleinsäuregehalt von weniger als ca. 200 pg pro mg IgM enthält. In bevorzugten Ausführungsformen ist die IgM-Reinheit größer als 98 Gew.-% und der Nukleinsäuregehalt weniger als 10 pg pro mg IgM, besonders bevorzugt ist eine IgM-Reinheit von größer als ca. 99 Gew.-%, ein Nukleinsäuregehalt von weniger als ca. 4 pg pro mg IgM, und Stabilisierung der Präparation durch Einhaltung eines pH-Wertes im Bereich von ca. 4 bis 10, vorzugsweise eines pH-Wertes von ca. 8 in Gegenwart von NaCl, Albumin, Aminosäuren oder Kohlenhydraten als Stabilisatoren. Eine typische Präparation mit den obigen Eigenschaften enthält einen oder mehrere IgM-Antikörper, die spezifisch gegen serotypische Determinanten, wie sie auf der Oberfläche von gramnegativen Mikroorganismen gefunden werden, sind. In einer bevorzugten Ausführungsform enthält die Praparation IgM-Antikörper aus einem oder mehreren Klonen, und man nimmt an, daß sie geeignet zur Behandlung von P. aeruginosa-Infektionen ist. Die Präparation kann durch Kultur einer Quelle für monoklonale Antikörper, Gewinnung der monoklonalen Antikörper und anschließendem Unterwerfen der gewonnenen Antikörper einer sorgfältig kontrollierten Reihe von Verfahrensschritten, die Ionenaustausch- und Größenausschlußchromatographie umfassen, erhalten werden.
- Die Figur zeigt ein Flußdiagramm der allgemeinen Verfahrensschritte zur Herstellung einer Ausführungsform dieser Offenbarung. Ebenfalls gezeigt wird der allmähliche Anstieg der Reinheit und Abnahme des Nukleinsäuregehalts über die einzelnen Schritte des Gesamtprozesses.
- Ein sehr wichtiger Aspekt dieser Offenbarung ist die Gesamtreinheit, Stabilität und niedriger Nukleinsäuregehalt unserer IgM-Präparation. Hierin bedeutet der Ausdruck "im wesentlichen reines und stabilisiertes IgM" eine IgM-Präparation, die IgM-Antikörper mit einer Reinheit größer als ca. 98 Gew.-% und einem Nukleinsäuregehalt von weniger als ca. 200 pg pro mg IgM enthält. Eine "stabilisierte IgM-Präparation" bedeutet eine Präparation, für die eine Veränderung von weniger als 10% (+ oder -) in der Molekulargewichtsverteilung, gemessen durch Größenausschlußchromatographie über einen Zeitraum von 6 Monaten (z. B. Pharmacia FPLC - SuperoseTM 6 peak area) gefunden wird. Die IgM-Antikörper sind biologisch aktiv (fähig zur Bildung von Immunkomplexen) und werden stabilisiert durch Lagerung bei einem pH im Bereich von ca. 4 bis 10 in Gegenwart eines geeigneten Stabilisierungsmittels wie NaCl, Albumin, Kohlenhydraten oder Aminosäuren. Beispiele für einen Kohlenhydratstabilisator kann Dextrose, Saccharose oder Maltose sein. Obwohl ein verminderter Nukleinsäuregehalt angestrebt wird, um eine beinahe homogene IgM-Präparation unabhängig von der IgM-Quelle zu erhalten, ist dies besonders bei einem IgM-Produkt aus Kulturen (z. B. Hybridoma oder transformierten Zellen) erwünscht, da es wichtig ist, die Abwesenheit oder beinahe Abwesenheit von Nukleinsäuren (DNA oder RNA) aus einer fremden Quelle (tierischer Ursprung oder sogar menschliche, die genetisch verändert wurden, wie z. B. durch EBV-Transformation) sicherzustellen.
- Die erläuternden Beispiele im folgenden zeigen einen im wesentlichen reinen und stabilisierten IgM, der spezifisch gegen bestimmte Serotypen von Pseudomonas aeruginosa-Bakterien ist. Die IgM-Antikörper, die gereinigt und stabilisiert werden konnten, wurden aus den folgenden A.T.C.C.-Klonen gewonnen: Linie 6F11, Fisher Typ 2, A.T.C.C. Hinterlegungsnummer CRL 8562, Linie 5G2, Fisher Typ 6, A.T.C.C.-Hinterlegungsnummer CRL 8797, und Linie 13Cl, Fisher Typ 5, A.T.C.C.-Hinterlegungsnummer CRL 8796.
- Die folgenden Beispiele demonstrieren, daß monoklonale Antikörper der Klasse M und verschiedener Fisher Typen in einem hohen Grade aus Gewebekulturmedien gereinigt werden können.
- Zellinie 6F11, A.T.C.C.-Hinterlegungsnummer CRL-8562 ist eine menschliche Lymphoblastoidzelle, die monoklonale Antikörper der M-Klasse spezifisch gegen Fisher Typ 2 Pseudomonas aeruginosa produziert. Diese Linie wurde in einer Mischung von Hana Biologics Komplexmedien, ergänzt mit menschlichem Serumalbumin, Insulin und Transferrin, kultiviert. Der Fermenter war ein mit Rührer ausgerüsteter Tank.
- Ein Volumen von 40 l mit 50 mg/l IgM aus der obigen Kultur wurde durch ein 0,2 um-Filter (MicrogonTM) filtriert. Das Filtrat wurde auf einer tangentialen Flußmembran mit einem Molekulargewichtsausschluß von 100.000 (MilliporeTM) auf 1 Liter konzentriert. Das Konzentrat wurde auf 5ºC abgekühlt und der pH auf 7,4 eingestellt. Es wurden 100 g PEG zugegeben und 1 h gerührt. Die Lösung wurde bei 10.000·g 30 min zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und das Präzipitat bei -35ºC eingefroren.
- Das Präzipitat wurde in 1 l Puffer resuspendiert (0,05 M TRIS, 0,08 M NaCl, pH 8,0). Der pH wurde auf 4,5 abgesenkt. Die Lösung wurde bei 10.000·g 30 min zentrifugiert und das Präzipitat verworfen. Der Überstand wurde nochmals auf pH 8 eingestellt. Die Lösung wurde an eine Anionenaustauschersäule mit 1 l DEAE-SepharoseTM Fast-Flow (Pharmacia), die mit Puffer äquilibriert worden war (0,05 M TRIS, 0,08 M NaCl, 2% TWEENTM, pH 8,0) gebunden. Das IgM wurde durch einen linearen Gradienten mit einem Puffer (0,05 M TRIS, 1,0 M NaCl, pH 8,0) eluiert. Das Eluat wurde auf einer Membran mit einem Molekulargewichtsausschluß von 100.000 auf 0,5 l konzentriert. Das Konzentrat wurde auf einer Größenausschlußsäule mit SepharoseTM CL-6B (Pharmacia), die mit Puffer äquilibriert war (0,5 M NaCl, 0,05 M Tris, 0,01 M Glycin, pH 8,0) fraktioniert. Das IgM-Eluat betrug 6 Liter. Es wurden 0,5 g menschliches Serumalbumin zugegeben und die Fraktion auf 0,1 l mit einer Membran mit einem Ausschlußmolekulargewicht von 10.000 konzentriert. Die Lösung wurde mit 0,5 l Puffer (0,15 M NaCl, 0,05 M TRIS, 0,01 M Glycin, pH 8,0) diafiltriert. Die Lösung wurde steril filtriert. Ein Aliquot wurde eingefroren und in einem 80 h-Zyklus lyophilisiert (10 h bei -40ºC, 20 h bei -20ºC, 20 h bei 00, 10 h bei 200 und 20 h bei 37ºC). Die kumulative Ausbeute ist 30-35%. Die Flüssigkeit bleibt klar ohne Präzipitation über mehr als ein Jahr bei 5ºC. Das lyophilisierte Produkt ist weiß und rekonstituiert sich innerhalb 3 min mit Wasser. Die Reinheit nach SDS-PAGE und Pharmacia FPLC-SepharoseTM 6 ist größer als 98%. Der Nukleinsäuregehalt nach Hybridisierungssondentest ist geringer als 67 pg/mg IgM.
- Die Zellinie 5G2, A.T.C.C.-Hinterlegungsnummer CRL 8797 ist eine menschliche Lymphoblastoidzelle, die monoklonale Antikörper der M-Klasse spezifisch gegen Fisher Typ 6 vom Pseudomonas aeruginosa produziert. Die Linie wurde nach im wesentlichen denselben Methoden kultiviert wie die Linie im Beispiel 1.
- Der Kulturüberstand wurde zu einem Endprodukt nach im wesentlichen identischen Methoden wie in Beispiel 1 gereinigt, mit der Ausnahme, daß das ursprüngliche 0,2 um-Filtrat auf pH 4,0 eingestellt wurde und 2 h dort belassen wurde. Der pH der Lösung wurde auf neutral eingestellt und die übrigen Schritte weitergeführt (z. B. Konzentrierung usw.). Das Volumen des Kulturüberstandes betrug jedoch 10 l mit 80 mg/l und andere Volumina wurden entsprechend skaliert. Der Endformulierungspuffer war 0,15 M NaCl, 0,01 M Glycin, pH 8,0.
- Die kumulative Ausbeute ist 30-35%. Die Flüssigkeit bleibt klar ohne Präzipitation über mehr als 6 Monaten bei 5ºC. Das lyophilisierte Produkt ist weiß und rekonstituiert sich innerhalb 3 min mit Wasser. Die Reinheit nach SDS-PAGE und Pharmacia FPLC-SepharoseTM 6 ist größer als 98%. Der Nukleinsäuregehalt nach Hybridisierungssondentest ist weniger als 8,5 Picogramm/mg IgM.
- Die Zellinie 13C1. A.T.C.C.-Hinterlegungsnummer 8796 ist eine menschliche Lymphoblastoidzelle, die monoklonale Antikörper der Klasse M spezifisch gegen Fisher Typ 5 Pseudomonas aeruginasa produziert. Die Linie wurde nach im wesentlichen identischen Verfahren wie im Beispiel 1 kultiviert.
- Der Kulturüberstand wurde zu einem Endprodukt nach im wesentlichen identischen Verfahren wie in Beispiel 2 gereinigt. Das Volumen des Kulturüberstands betrug jedoch 10 Liter mit 100 mg/l und andere Volumina wurden entsprechend skaliert. Der Endformulierungspuffer war 0,15 M NaCl, 0,01 M Glycin, pH 8,0.
- Die kumulative Ausbeute ist 30-35%. Die Flüssigkeit bleibt klar ohne Präzipitation über mehr als 6 Monaten bei 5ºC. Das lyophilisierte Produkt ist weiß und rekonstituiert sich innerhalb 3 min mit Wasser. Die Reinheit nach SDS-PAGE und Pharmacia FPLC-SepharoseTM 6 ist größer als 98%. Der Nukleinsäuregehalt nach Hybridisierungssondentest ist geringer als 4 Picogramm/mg IgM.
- Unser allgemeines Verfahren ist in der Figur dargestellt. Es wurde gefunden, daß das hochgereinigte Produkt durch Einstellung auf eine Konzentration im Bereich von 0,01 mg/ml bis 50 mg/ml und einen pH im Bereich von 4 bis 10, vorzugsweise in Gegenwart von NaCl, Albumin, Aminosäuren oder Kohlenhydraten besonders bevorzugt in Gegenwart von ca. 0 bis 5 Gew.-% menschlichem Serumalbumin, ca. 0 bis 10% Maltose, ca. 0,0 bis 0,5 M NaCl und ca. 0 bis 0,01 M Glycin stabilisiert werden konnte. Das Endprodukt kann eine Flüssigkeit (siehe oben) sein oder lyophilisiert sein und den üblichen Verfahren zur Inaktivierung infektiöser Erreger unterworfen werden.
Claims (15)
1. Hochgereinigte Antikörperpräparation, enthaltend Antikörper
vom IgM-Typ mit einer Reinheit größer als 98 Gew.-% und einem
Nukleinsäuregehalt von weniger als 200 pg/mg IgM.
2. Präparation nach Anspruch 1, worin die Menge an Nukleinsäuren
weniger als ca. 10 pg/mg IgM ist.
3. Präparation nach Anspruch 1, worin die Menge an Nukleinsäuren
weniger als ca. 4 pg/ml IgM ist.
4. Präparation nach Anspruch 1, worin die IgM-Antikörper
spezifisch gegen Antigene auf pathogenen gramnegativen Mikroorganismen
gerichtet sind.
5. Hochgereinigte monoklonale Antikörperpräparation, enthaltend
monoklonale Antikörper vom IgM-Typ mit einer Reinheit größer als ca.
98 Gew.-% und einem Nukleinsäuregehalt von weniger als ca. 200 pg/mg IgM.
6. Präparation nach Anspruch 5 mit einem Nukleinsäuregehalt von
weniger als ca. 10 pg/mg IgM.
7. Präparation nach Anspruch 5 mit einem Nukleinsäuregehalt von
weniger als ca. 4 pg/mg IgM.
8. Präparation nach Anspruch 5 mit einer IgM-Reinheit größer als
ca. 99 Gew.-%.
9. Präparation nach Anspruch 5, worin der Antikörper spezifisch
gegen Antigene von gramnegativen Mikroorganismen gerichtet ist.
10. Präparation nach Anspruch 5, worin der Antikörper spezifisch
gegen Antigene vom Pseudomonas aeruginosa-Bakterien gerichtet ist.
11. Präparation nach Anspruch 5, die stabilisierende Mengen von
humanem Serumalbumin enthält.
12. Präparation nach Anspruch 5, die stabilisierende Mengen eines
Kohlenhydrats enthält.
13. Präparation nach Anspruch 5 in einer wäßrigen Form mit einem
pH im Bereich von ca. 4 bis ca. 10.
14. Präparation nach Anspruch 5, worin das Kohlenhydrat ausgewählt
ist aus Dextrose, Saccharose und Maltose.
15. Präparation nach Anspruch 5 in wäßriger Form mit einem pH im
Bereich von ca. 4 bis ca. 10,0 bis 5 Gew.-% menschlichem Serumalbumin,
ca. 0 bis 10% Maltose, ca. 0,0 bis 0,5 M NaCl und ca. 0 bis 0gen Form mit einem
pH im Bereich von ca. 4 bis ca. 10.
14. Präparation nach Anspruch 5, worin das Kohlenhydrat ausgewählt
ist aus Dextrose, Saccharose und Maltose.
15. Präparation nach Anspruch 5 in wäßriger Form mit einem pH im
Bereich von ca. 4 bis ca. 10,0 bis 5 Gew.-% menschlichem Serumalbumin,
ca. 0 bis 10% Maltose, ca. 0,0 bis 0,5 M NaCl und ca. 0 bis 0,01 M
Glycin.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US8313687A | 1987-08-10 | 1987-08-10 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE3875852D1 DE3875852D1 (de) | 1992-12-17 |
DE3875852T2 true DE3875852T2 (de) | 1993-03-18 |
Family
ID=22176414
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE8888111931T Expired - Lifetime DE3875852T2 (de) | 1987-08-10 | 1988-07-25 | Gereinigtes igm. |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0303088B1 (de) |
JP (1) | JP2730913B2 (de) |
AT (1) | ATE82136T1 (de) |
AU (1) | AU618745B2 (de) |
CA (1) | CA1341474C (de) |
DE (1) | DE3875852T2 (de) |
ES (1) | ES2045027T3 (de) |
GR (1) | GR3006536T3 (de) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01197500A (ja) * | 1988-01-29 | 1989-08-09 | Sumitomo Chem Co Ltd | ヒトモノクローナル抗体 |
DE3825429C2 (de) * | 1988-07-27 | 1994-02-10 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verabreichbaren polyklonalen Immunglobulin-Präparates mit hohem IgM-Gehalt |
EP0382031A3 (de) * | 1989-02-10 | 1991-06-26 | Miles Inc. | Monoklonal-Antikörper in einer Zusammensetzung von Globulin aus Immunserum |
CA2049342A1 (en) * | 1989-03-27 | 1990-09-28 | Sally Bolmer | Formulations for stabilizing of igm antibodies |
JPH05507924A (ja) * | 1990-07-03 | 1993-11-11 | アクゾ・エヌ・ヴエー | 免疫反応性化合物 |
JPH0565233A (ja) * | 1991-03-08 | 1993-03-19 | Mitsui Toatsu Chem Inc | モノクローナル抗体含有凍結乾燥製剤 |
EP0852951A1 (de) | 1996-11-19 | 1998-07-15 | Roche Diagnostics GmbH | Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern |
EP1428537B1 (de) | 2001-08-29 | 2008-11-19 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antikörper enthaltende stabilisierte zubereitungen |
JP5452835B2 (ja) | 2003-07-15 | 2014-03-26 | 中外製薬株式会社 | 形質転換細胞によるIgMの産生とその定量方法 |
JP4671864B2 (ja) | 2003-10-09 | 2011-04-20 | 中外製薬株式会社 | タンパク質溶液の安定化方法 |
ATE518888T1 (de) | 2003-10-09 | 2011-08-15 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Stabilisierte lösung mit hoher igm-konzentration |
CN102811737A (zh) * | 2010-01-29 | 2012-12-05 | 阿克西斯股份有限公司 | 骨关节炎治疗及预防药物组合物和上述组合物的制造方法 |
US10570194B2 (en) | 2015-08-06 | 2020-02-25 | Grifols Worldwide Operations Limited | Method for treating infectious diseases using a composition comprising plasma-derived immunoglobulin M (IgM) |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS591691B2 (ja) * | 1981-05-29 | 1984-01-13 | 株式会社ミドリ十字 | 静注用γ−グロブリン製剤 |
JPS59184133A (ja) * | 1983-04-01 | 1984-10-19 | Teijin Ltd | IgMの調製法 |
US4604235A (en) * | 1984-05-23 | 1986-08-05 | J. T. Baker Chemical Company | Purification of monoclonal antibodies |
US4834975A (en) * | 1984-05-25 | 1989-05-30 | Genetics Corporation | Human monoclonal antibodies to serotypic lipopolysaccharide determinants on gram-negative bacteria and their production |
JPH0669961B2 (ja) * | 1984-09-25 | 1994-09-07 | 株式会社ミドリ十字 | 免疫グロブリンの加熱処理方法 |
-
1988
- 1988-07-25 DE DE8888111931T patent/DE3875852T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-25 AT AT88111931T patent/ATE82136T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-07-25 ES ES88111931T patent/ES2045027T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-25 EP EP88111931A patent/EP0303088B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-02 AU AU20315/88A patent/AU618745B2/en not_active Expired
- 1988-08-09 JP JP63197281A patent/JP2730913B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-09 CA CA000574199A patent/CA1341474C/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-12-14 GR GR920402910T patent/GR3006536T3/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATE82136T1 (de) | 1992-11-15 |
DE3875852D1 (de) | 1992-12-17 |
AU2031588A (en) | 1989-06-08 |
GR3006536T3 (de) | 1993-06-30 |
ES2045027T3 (es) | 1994-01-16 |
JP2730913B2 (ja) | 1998-03-25 |
EP0303088A3 (en) | 1989-05-17 |
JPH02493A (ja) | 1990-01-05 |
CA1341474C (en) | 2005-03-08 |
AU618745B2 (en) | 1992-01-09 |
EP0303088B1 (de) | 1992-11-11 |
EP0303088A2 (de) | 1989-02-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE69223641T2 (de) | Stabilisierte antikörper | |
DE69735295T2 (de) | Verfahren zur Aufkonzentrierung von Antikörperlösungen | |
DE68929061T2 (de) | Herstellung humanähnlicher Immunoglobuline und entsprechender Polynukleotide | |
DE3875852T2 (de) | Gereinigtes igm. | |
DE69232617T2 (de) | Gefriergetrocknete Zubereitung, die einen monoklonalen Antikörper enthält | |
DE68928857T2 (de) | Monoklonale Antikörper, die mit Cachectin reagieren | |
DE69128774T3 (de) | GEREINIGTE IgG ANTIKÖRPER | |
DE69228474T2 (de) | STABILISIERTE AUFBEREITUNG MONOKLONALER MENSCHLICHER CLN-IgG ANTIKÖRPER | |
DE4118912C1 (de) | ||
DE2826075C2 (de) | ||
DE3631229A1 (de) | Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung | |
EP0659767B2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Konzentrates von Anti-D-Immunoglobulin G und pharmazeutische Zusammensetzung, die dieses enthält | |
DE69333447T2 (de) | Antikörper mit spezifikäten gegen mehrere adhäsionsmoleküle | |
DE69028095T2 (de) | M-csf-monoklonale antikörper, die ein neutralisierendes konformationales epitop erkennen | |
DE3939706C1 (de) | ||
EP0085747B2 (de) | Intravenös verabreichbares humanes Immunglobulin und Verfahren zu dessen Herstellung | |
DE68917338T2 (de) | Monoklonaler Antikörper mit selektiver Bindung an ein neues g-csf-Derivat. | |
DE68918761T2 (de) | Therapeutische IgM-Konzentrate. | |
DE69430846T2 (de) | Für natürliche killerzellen spezifische antigene und sie identifizierende antikörper | |
CH684164A5 (de) | Intravenös anwendbare Immunglobulinlösung. | |
DE3752184T2 (de) | Herstellung und Verwendungen von gamma-Interferon | |
DE69126727T2 (de) | Warm-behandelte IGM-Antikörper-Zusammensetzungen | |
DE68907933T2 (de) | Therapeutisches Mittel für Thrombocytopenia. | |
DE3852236T2 (de) | Verfahren zur Kontrolle der Leukozyten-Extravasation. | |
DE3539775C2 (de) | Neues Lymphokin, gegen dieses Lymphokin spezifische Antikörper, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8364 | No opposition during term of opposition |