DE3127979A1 - Verfahren zur erzeugung von cholesterase und deren anwendung - Google Patents

Verfahren zur erzeugung von cholesterase und deren anwendung

Info

Publication number
DE3127979A1
DE3127979A1 DE19813127979 DE3127979A DE3127979A1 DE 3127979 A1 DE3127979 A1 DE 3127979A1 DE 19813127979 DE19813127979 DE 19813127979 DE 3127979 A DE3127979 A DE 3127979A DE 3127979 A1 DE3127979 A1 DE 3127979A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
cholesterase
cholesterol
culture
enzyme
microorganism
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE19813127979
Other languages
English (en)
Other versions
DE3127979C2 (de
Inventor
Paolo Branduzzi
Nadia Cimini
Ludwig Roma Degen
Pasquale Monterotondo Sacceddu
Vincenza Vitobello
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eni SpA
Original Assignee
Eni SpA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eni SpA filed Critical Eni SpA
Publication of DE3127979A1 publication Critical patent/DE3127979A1/de
Application granted granted Critical
Publication of DE3127979C2 publication Critical patent/DE3127979C2/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/025—Achromobacter
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/824—Achromobacter

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

1A-54 984
Anm. : E.N.I. ENTE NAZIONALE IDROCARBURI
Beschreibung
Verfahren zur Erzeugung von Cholesterase und deren Anwendung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Erzeugung des Enzyms Cholesterase (E.C.3.1.1'.13) durch Züchtung eines Mikroorganismus der Gattung Achromobacter sowie die Hydrolyse von Cholesterinestern von Fettsäuren mit Hilfe dieses Enzyms. Cholesterin, ein wesentlicher Bestandteil des menschlichen Organismus ist eine wichtige Verbindung für den Aufbau von Zellmembranen in allen Geweben sowie zur Bildung von zahlreichen Hormonen. Es ist ο bekannt, daß die Bestimmung des Gesamt-Cholesterins im Blut von großer Bedeutung für die klinische Diagnose ist und da Cholesterin im Serum im wesentlichen in Form seiner Fettsäureester vorliegt, ist das Enzym Cholesterase erforderlich, um Cholesterin aus den Estern freizusetzen, damit es anschließend bestimmt werden kann.
In einigen Veröffentlichungen sind Verfahren zur Hydrolyse von Cholesterinestern mit Hilfe von Enzymen aus Mikroorganismen der Art Fusarium, Nocardia, Pseudomonas, Saccharomyces und Streptomyces angegeben. Im allgemeinen wird das Enzym jedoch aus tierischen Geweben erhalten.
/2
1A-54 984 «. - χ -
- 3·
Es wurde nun ein Verfahren zur Erzeugung von
Cholesterase gefunden, bei dem ein neuer Mikroorganismus angewandt wird, der zur Gattung Achromobacter gehört.
Ein wichtiger Vorteil des erfindungsgemäßen Verfahrens besteht darin, daß das von diesem Mikroorganismus unter den unten angegebenen Kulturbedingungen gebildete Enzymexocellulär ist und es
daher nicht erforderlich ist, es zu extrahieren, sondern daß es lediglich konzentriert zu werden
braucht.
Außerdem besitzt dieser Mikroorganismus , da er
ein Bakterium ist, eine Verdoppelungszeit, die
geringer ist als diejenige von Schimmelpilzen
und Actinomycetes, was ebenfalls einen erheblichen Vorteil bedeutet,
Dieser Mikroorganismus, der aus pflanzlichen Produkten (Zelltrümmern) vom Tiberufer isoliert worden ist, wurde als Achromobacter delicatulus SM-1307 identifiziert und beim Northern Regional Center, U.So Department of Agriculture, Peoria (J 11)
unter der Nummer NRRL, B„=12115 hinterlegt.
Im folgenden sind die Charakteristika seiner Kultur, Morphologie und Physiologie angegeben.
A.KuItur-Charakteristika
1* Festes Mediums
a) Auf Nähr-Agers Kolonien von 2 mm 0 nach
24 h langer Inkubation bei 30 0C mit ganzen (glatten) Rändern, die nach 7-tägigem Altern
dazu neigen, sich zu wellen. Konvexe weißliche
1A-54 984 -Jf-
• 4-
Kolonien von feuchter cremeartiger Konsistenz, leicht leuchtend. Kein Ausschwärmen aus agarisierten Medien.
b) Auf Agar-Gelatine: Glänzende weiche gelatinöse Kolonien.
2. Flüssiges Medium:
a) Auf Salzlösung-Hefeextrakt:Cremeartige Trübung mit geringem Sediment.
b) Auf peptonisierten Wasser: Starke Trübung nach 24 h bei 30 0C. Kein Sediment oder Oberflächenfilm erkennbar.
B.morphologische Charakteristika
1. Gram -negative Stäbchen mit einer mittleren Länge von 2 μπι.
2. Selbstbeweglich (Beobachtung eines hängenden Tropfens)
3. Flimmerhärchen. Eine Verdichtung an den Polen wurde nicht beobachtet
C.physiologische Charakteristika
1. Optimale Wachstumstemperatur zwischen 25 und 30 0C; wächst auch bei 20 0C; wächst nicht bei 42 0C.
2. Greift Agar nicht an.
3. Bildet keine Säure oder Gas aus Glucose.
4. Verwertet Harnstoff nicht.
/4
1A-54 984 p» -Ar-
5 ο Besitzt (bildet)keine Cytochrom-C-Oxidase . 6. Reduziert Nitrate zu Nitriten. 7. Ist inert im OX/F-Test.
8ο Bildet kein Indol aus Tryptophan«
9. Negative Methylrot-Reaktion,
10.Positive Katalyse.
11»Bildet keine Säure oder Gas aus Lactose« 12.Verflüssigt Gelatine.
13.Lackmusmilch: Leichte Ansäuerung nach 7 Tagen.
Zu Identifikationszwecken wurde das in "Methods of detection and identification of bacteria" von BoM. MITRUKA und M.J. BONNER, CRC PRESS INC. 1976 und in "Bergey Manual of Determinative Bacteriology" 7* Auflage angegebene Verfahren angewant.
Der erfindungsgemäß angewandte Stamm kann unter aeroben Bedingungen als Submerskultur in bewegten Fermentatoren gezüchtet werden.
Ein flüssiges Kulturmedium enthält eine Quelle für 0 assimilierbaren Kohlenstoff, eine Quelle für Stickstoff und Mineralsalze= Kohlenstoffquellen8die angewandt xtferden können^, sind unter anderem Aminosäuren,, Glucose,, ölsäure, Linolsäure, Cholesterinester und Natriumacetat, Stickstofiquellen^die angewandt werden können sind unter anderem organische und anorganische
/5
-:- :': : : :~.- J. 3T27979 •6·
1A-54 984 -Sf-
stickstoffhaltige Verbindungen,wie Fleischextrakt, Hefeextrakt, Pepton, Triptan, Aminosäuren, hydrolysiertes Casein, Sojamehl, Nitrate und Ammoniumsalze.
Ein geeignetes Kulturmedium besitzt die folgende Zusammensetzung:
10 K2HPO4
Hefeextrakt 1-5 g/l
Sojamehl 1-5 g/l
(Spuren bis zu 1 g/l
NaNO3, MgSO4
Der pH-Bereich für die Kultur liegt zwischen 6 und 8, vorzugsweise zwischen 6,8 und 7,2. Der Temperaturbereich liegt zwischen 20 und 37 0C, vorzugsweise zwischen 28 und 32 0C.
Das Enzym wird gebildet durch Zugabe von Cholesteryloleat oder natürlichen pflanzlichen ölen zu dem
Kulturmedium vor dem Beimpfen. Die Hydrolyse dieser Ester in dem Kulturmedium mit Hilfe von Cholesterase, die von Achromobacter delicatulus SM 1307 gebildet worden ist, fällt ebenfalls unter die Erfindung.
Die Induktionszeit kann von 24 bis zu 72 h, vorzugsweise 40 bis 48 h betragen.
Die während oder am Ende der Kultur gewonnene Fermentationsbrühe kann als solche angewandt werden.
Wahlweise kann die überstehende Flüssigkeit oder die abfiltrierte oder abzentrifugierte Kulturbrühe angewandt werden.
/6
1A-54 984 - β' -
Eine weitere technische und wirtschaftliche Verbesserung kann erreicht werden durch Immobilisieren des Enzyms oder eine Kombination mit makromolekularen Verbindungen unter Bildung chemischer Bindungen mit der Matrix oder ionischer Bindungen.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert.
ο Beispiel 1
Es wurde eine Kulturbrühe der folgenden Zusammen= setzung hergestellt
NaNO3 0, 2 g/i
K2HPO4 0, 2 g/i
KCl 10 5 g/i
MgSO4'7H2O 5 5 g/i
Hefeextrakt g/i
Cholesteryloleat g/l
durch Zugabe dieser Verbindungen zu entionisiertem Wasser.
Der pH-Wert der Brühe wurde mit verdünnter HCl auf 7,0 eingestellt. Das so hergestellte Medium wurde durch Einbringen von 50 ml in jeden Kolben in 250 ml Kolben verteilt«, Diese wurden 30 min bei 116 0C sterilisiert.
Sie wurden mit 1 ml einer Suspension des Achromobacter delicatulus SM-1307 beimpft„ der erhalten worden war durch Waschen der "Patina" einer Kultur von 20 ml Nähr-Agar in 200 · 20 mm Röhrchen, die 48 h bei 30 0C gewachsen war, mit 10 ml physiologischer Kochsalzlösung.
1Α-54 984 λ - ff -
Die Fermentations-Kolben wurden unter Orbitalschütteln (180 bis 200 UpM) bei 30 0C inkubiert.
Die Kulturbrühe wurde 48 h nach dem Beimpfen gewonnen und auf die Enzymaktivität untersucht. 1 ml Kulturbrühe enthielt 0,2 Enzymeinheiten.
Die Enzymäktivität wurde folgendermaßen bestimmt:
1 ml Kulturbrühe, die mit 0,1 m Phosphatpuffer-Lösung, pH 6,7# entsprechend verdünnt war, wurde zu 5 ml einer Lösung von Cholesteryloleat, enthaltend 0,3 μΐηοΐ/ml in 0,1 m Phosphatpuffer pH"6,7, enthaltend 0,5 % Triton X-100, gegeben. Die Reaktion wurde 10 min bei 37 0C in einem .bewegten Wasserbad durchgeführt und durch 3 min langes Erhitzen der von dem Reaktionsgemisch abgezogenen Probe zum Sieden abgebrochen.
Die Konzentration des durch Hydrolyse von Cholesteryloleat entstandenen Cholesterins wurde ccolorimetrisch bestimmt, wobei das freie Cholesterin mit Cholesterinoxidase zu Cholest-4-en-3-on oxidiert wurde unter gleichzeitiger Bildung von Wasserstoffperoxid. Dieses reagiert oxidativ mit 4-Aminoantipyrin und Phenol in Gegenwart von Peroxidase unter Bildung eines Chromogens mit Absorptionsmaximum bei 500 nm.
Die optische Dichte der gefärbten Proben wurde in einem DB-GT Beckmann-Gitters pektrophotometer gemessen, bei dem die Küvette einen optischen Weg von 1 cm (0,1 dm) bei einer Wellenlänge von 500 nm besaß.
Wenn eine Einheit als die Menge an Enzym definiert wird, die 1 flmol Cholesterin pro Minute unter den oben angegebenen Testbedingungen bildet, berechnen
/8
1A-54 984 - Ji -
sich die Enzymeinheiten pro ml Kulturbrühe nach der folgenden Formel:
U 4 · 6 · (Ε,η-ΕΛ)
ml Kulturbrühe 5,45 · 0,1 · D
in der
E,. 0 = optische Dichte der nach 10 min entnommenen Probe
Eq = optische Dichte der nach 0 min entnommenen Probe
5,45= optische Dichte einer Lösung, enthaltend 1 μΐηοΐ Cholesterin pro ml und
D = die Enzymverdünnung bedeutet. Beispiel 2
Es wurde eine Kulturbrühe der folgenden Zusammensetzung hergestellt
NaNO3 0, 2 g/i
K2HPO3 0, 2 g/i
KCl 10 5 g/i
MgSO4-7H2O 5 5 g/i
Hefeextrakt g/i
Olivenöl g/i
durch Zugabe dieser Bestandteile zu entxonisxertem Wasser und Einstellung des pH-Wertes mit Salzsäure auf 6,7.
/9
1A-54 984
/to·
Kulturen von Achromobacter delicatulus SM-1307 in diesem Medium und entsprechend Beispiel 1 hergestellt, wurden unter Orbxtalschütteln (180 UpM) bei 3 0 0C inkubiert.
Die Kulturbrühe wurde 72 h nach dem Beimpfen gesammelt und auf die Cholesterase-Aktivität untersucht. 1 ml der Kulturbrühe enthielt 0,4 Enzymeinheiten.
Beispiel 3
Es wurde eine Kulturbrühe mit der in Beispiel 2 angegebenen Zusammensetzung hergestellt.
Kulturen von Achromobacter delicatulus SM-1307 in diesem Medium und entsprechend Beispiel 1 hergestellt, wurden unter Orbitalschütteln (180 UpM) bei 30 0C inkubiert.
Die Kulturbrühe wurde 72 h nach dem Beimpfen gewonnen, zentrifugiert und die Cholesterase in der überstehenden Flüssigkeit angewandt zur Bestimmung des Gesamt-Cholesterins in einer Probe von menschlichem Blutserum.
Zu diesem Zweck wurde das folgende Reagens hergestellt:
Natriumcholat Triton X-100 Phenol
4-Aminoantipyrin z.: . .Peroxidase
6 mM 15 g 7,5 mM 0,5 mM 16 400 E (Boehringer Nr.
127361 im Katalog)
/10
1A-54 984 - yg -
Das Cholesterin wurde auf folgende Weise bestimmt?
50 μΐη menschliches Serum und 0,25 ml des Kulturmediums wurden zu 2,5 ml Reagens gegeben. 5
Die Reaktion fand direkt in der Glasküvette statt, die einen optischen Weg von 1 cm aufwies und die Entwicklung des Chromogens wurde direkt in einem DB-GT Beckmann-Gitterspektrophotometer· bei einer Wellenlänge von 500 nm beobachtet bis zur vollständigen Umwandlung des in dem Serum vorhandenen Cholesterins.
Unter diesen Bedingungen erhielt man am Ende eine optische Dichte von 0,500,- entsprechend 164 mg Gesamt-Cholesterin pro 100 ml der untersuchten Serumprobe.
6246

Claims (3)

  1. r ü c h e
    1 ο Verfahren zur Erzeugung von Cholesterase durch Züchten eines Mikroorganxsmus, dadurch g e k e η η zeichnet, daß man als Mikroorganismus den Stamm Achromobacter delicatulus NRRL B-12115 5 verwendet.
  2. 2. Verfahren nach Anspruch \, dadurch gekennzeichnet, ' daß man den Mikroorganismus bei einem pH-Wert im Bereich von 6 10 bis 8„ vorzugsweise 6,8 bis 7r2 züchtet.
  3. 3 β Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet,, daß man den Mikroorganismus bei einer Temperatur im Bereich 15 von 20 bis 37 0C , vorzugsweise zwischen 28 und 32 0C züchtet»
    4- Verwendung der nach Anspruch 1 bis 3 erhaltenen Cholesterase zur Hydrolyse von Cholesterin-20 F@ttsäure-Estern durch direktes Zusammenbringen der Ester mit dem Kulturmedium,,
    6246
DE3127979A 1980-07-24 1981-07-15 Verwendung einer bestimmten Cholesterase zur Hydrolyse von Cholesterin-Fettsäure-Estern Expired DE3127979C2 (de)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT23656/80A IT1132230B (it) 1980-07-24 1980-07-24 Procedimento per la produzione dell'enzima colesterolo-esterasi e per idrolisi degli esteri con acidi grassi del colesterolo mediante l'impiego dell'enzima stesso

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE3127979A1 true DE3127979A1 (de) 1982-02-25
DE3127979C2 DE3127979C2 (de) 1983-02-03

Family

ID=11208924

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE3127979A Expired DE3127979C2 (de) 1980-07-24 1981-07-15 Verwendung einer bestimmten Cholesterase zur Hydrolyse von Cholesterin-Fettsäure-Estern

Country Status (19)

Country Link
US (2) US4387163A (de)
JP (1) JPS5754587A (de)
AR (1) AR227056A1 (de)
AT (1) AT374827B (de)
BE (1) BE889728A (de)
CA (1) CA1166986A (de)
CH (1) CH654025A5 (de)
DE (1) DE3127979C2 (de)
DK (1) DK148827C (de)
ES (2) ES504384A0 (de)
FI (1) FI70924C (de)
FR (1) FR2487375A1 (de)
GB (1) GB2080311B (de)
IE (1) IE51745B1 (de)
IT (1) IT1132230B (de)
NL (1) NL8103522A (de)
NO (1) NO158948C (de)
PT (1) PT73420B (de)
SE (1) SE446405B (de)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4767735A (en) * 1987-02-02 1988-08-30 Cosden Technology, Inc. Catalyst pretreatment process
US5143883A (en) * 1987-09-21 1992-09-01 Quantum Chemical Corporation Modified silica based catalyst
US5098969A (en) * 1987-09-21 1992-03-24 Quantum Chemical Corporation Propylene polymerization using modified silica based catalyst
US5145821A (en) * 1990-05-09 1992-09-08 Quantum Chemical Corporation Silica supported polymerization catalyst system
US5034365A (en) * 1990-05-09 1991-07-23 Quantum Chemical Corporation Silica supported polymerization catalyst
US5238891A (en) * 1989-06-15 1993-08-24 Phillips Petroleum Company Olefin polymerization catalyst and process
US5037789A (en) * 1990-03-23 1991-08-06 Quantum Chemical Corporation Non-supported catalyst
US5232998A (en) * 1990-05-09 1993-08-03 Quantum Chemical Corporation Olefin polymerization using silica supported catalyst
IT1252041B (it) * 1990-10-11 1995-05-29 Enimont Anic Srl Componente solido di catalizzatore per la (co)polimerizzazione dell'etilene
JP3311780B2 (ja) * 1991-07-23 2002-08-05 三菱化学株式会社 オレフィン重合体の製造方法
US5424263A (en) * 1993-04-23 1995-06-13 Quantum Chemical Corporation Supported polymerization catalyst
EP1847555A1 (de) * 2006-04-18 2007-10-24 Borealis Technology Oy Mehrfach verzweigtes Polypropylen

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL135604C (de) * 1965-06-25
LU65587A1 (de) 1972-06-22 1973-12-27
DE2315501C3 (de) * 1973-03-28 1980-02-21 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur Bestimmung von Cholesterin
JPS50157588A (de) * 1974-06-17 1975-12-19
US4052263A (en) * 1975-12-11 1977-10-04 Eastman Kodak Company Production of cholesterol esterase using Nocardia cholesterolicum
JPS591286B2 (ja) * 1976-02-05 1984-01-11 三井東圧化学株式会社 α−オレフインの重合方法
US4042461A (en) * 1976-09-10 1977-08-16 Eastman Kodak Company Method for purifying cholesterol esterase
IT1078995B (it) * 1977-05-24 1985-05-08 Montedison Spa Catalizzatori per la polimeriazzazione di olefine
US4199475A (en) * 1978-09-22 1980-04-22 Phillips Petroleum Company Catalyst for producing polymers of ethylene

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NICHTS-ERMITTELT *

Also Published As

Publication number Publication date
JPS5754587A (en) 1982-04-01
FI70924C (fi) 1986-10-27
IT8023656A0 (it) 1980-07-24
DK326681A (da) 1982-01-25
US4387163A (en) 1983-06-07
DE3127979C2 (de) 1983-02-03
FI70924B (fi) 1986-07-18
CA1166986A (en) 1984-05-08
GB2080311A (en) 1982-02-03
SE446405B (sv) 1986-09-08
NO812519L (no) 1982-01-25
PT73420B (en) 1982-10-08
ES8306504A1 (es) 1983-06-01
ES8301501A1 (es) 1982-12-01
IE51745B1 (en) 1987-03-18
IT1132230B (it) 1986-06-25
GB2080311B (en) 1983-06-29
PT73420A (en) 1981-08-01
DK148827C (da) 1986-03-24
AR227056A1 (es) 1982-09-15
SE8104535L (sv) 1982-01-25
ES504384A0 (es) 1982-12-01
NO158948B (no) 1988-08-08
US4390454A (en) 1983-06-28
JPH0364105B2 (de) 1991-10-03
DK148827B (da) 1985-10-14
CH654025A5 (it) 1986-01-31
AT374827B (de) 1984-06-12
ATA315081A (de) 1983-10-15
FR2487375B1 (de) 1984-04-27
ES514674A0 (es) 1983-06-01
FI812288L (fi) 1982-01-25
BE889728A (fr) 1982-01-25
NO158948C (no) 1988-11-16
IE811662L (en) 1982-01-24
NL8103522A (nl) 1982-02-16
FR2487375A1 (fr) 1982-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2413963C3 (de) Verfahren zur Herstellung von 2-Keto-L-gulonsäure und deren Salzen auf mikrobiologischem Wege
DE3127979C2 (de) Verwendung einer bestimmten Cholesterase zur Hydrolyse von Cholesterin-Fettsäure-Estern
DE2343587A1 (de) Verfahren zur herstellung von 2-ketol-gulonsaeure
DE2631048C3 (de) Verfahren zur Herstellung von D-Phenylglycin
DE2252364A1 (de) Verfahren zur herstellung von zeaxanthin
DE2939269C2 (de) Verfahren zur optischen Trennung von DL-2-Amino-4-hydroxy(methyl)phosphinoylbuttersäure
DE3049308C2 (de) Enzymatische Hydrolyse von Raffinose unter Verwendung dieses Enzyms
EP0164573B1 (de) Verfahren zur Herstellung von Cyclopropancarbonsäuren
EP0082114A1 (de) Mikroorganismen des Genus Hyphomicrobium und Verfahren zum Abbau von Methylgruppen-haltigen Verbindungen in wässrigen Lösungen
DE2811303C3 (de) Enzymatische Komplexe, die zur Umwandlung racemischer Hydantoine in optisch aktive Aminosäuren geeignet sind, sowie deren Anwendung
DE3600563A1 (de) Waermebestaendige sarcosinoxidase n und verfahren zu deren herstellung
DE2363285B2 (de) Verfahren zur Herstellung von 1-Apfelsäure aus Fumarsäure
DE3024915A1 (de) Verfahren zur gewinnung von kreatinase
EP0024345A1 (de) Verfahren zur Gewinnung von Cholesterinesterase
DE2600682A1 (de) Verfahren zur herstellung von l(+)-weinsaeure
DE3137049C2 (de) Verfahren zur Gewinnung von Uricase mit Mikroorganismen
AT386005B (de) Verfahren zur hydrolyse von cholesterinfettsaeureestern
DE2554407A1 (de) Herstellung thermostabiler lactase
DE2164018A1 (de) Verfahren zur biotechnischen Herstellung von Uricase
DE2107461A1 (de) Verfahren zum Herstellen von alkali schem Dextranase Enzym
DE2917891A1 (de) Verfahren zur herstellung von acyl-coa- synthetase lcf-18
DE2038693B2 (de) Verfahren zum Züchten von Hefe
DE2413939C3 (de) Verfahren zur Herstellung von Fructose und Sirups, die Fructose und Glucose enthalten
DE3728321A1 (de) Verfahren zur herstellung von carnitin, l-carnitinamid-hydrolase und verfahren zu ihrer gewinnung
DE3032377A1 (de) Verfahren zur bestimmung von gesamtcholesterin

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
D2 Grant after examination
8364 No opposition during term of opposition
8339 Ceased/non-payment of the annual fee