DE2740699A1

DE2740699A1 - Pentapeptide, solche enthaltende arzneimittel sowie verfahren zur herstellung derselben

Info

Publication number: DE2740699A1
Application number: DE19772740699
Authority: DE
Inventors: Sandor Dr Bajusz; Laszlo Dr Graf; Geb Nagy Zsuzsa Mohai; Andras Dr Ronai; Jozsef Dr Szekely
Original assignee: Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar RT
Current assignee: Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Nyrt
Priority date: 1976-09-16
Filing date: 1977-09-09
Publication date: 1978-03-23
Also published as: JPS5340735A; FR2364890A1; FR2364890B1; PL200857A1; SU772481A3; NL7709636A; CH636599A5; DK149077C; CS199708B2; DD132127A5; JPS602319B2; ATA632377A; GB1584968A; SE7709913L; US4465625A; PL114062B1; AT360184B; SE440658B; HU178001B; DK149077B

Description

DR. STEPHAN G. BESZEDES PATENTANWALT

8060 DACHAU BEI MÖNCHEN

POSTFACH ItSO

AM HEIDEWE

5^40699

TELEPHON: OACHAU 437t Postscheckkonto MOndwn (BLZ 70010t 00)

Konto-Nr. 1368 71

Bankkonto Nr. 906 370 bei dar Kiel·- und 8tadt-Oachau-lndarMiorf (BLZ TWtK 40t (VIA Bayerisch· I

p 1 017

Beschreibung

zur Patentanmeldung

RICHTEH GEDEON VEGYESZETI GYAR

Budapest, Ungarn

betreffend

Pentapeptide, solche enthaltende Arzneimittel sowie Verfahren zur Herstellung derselben

Die Erfindung betrifft neue Pentapeptide einschließlich ihrer Derivate und Salze, solche enthaltende Arzneimittel, insbesondere solche mit morphinartiger Wirkung, sowie ein Verfahren zur Herstellung derselben.

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In dieser Beschreibung sind die Aminosäureeinheiten der Pq?- tide den Empfehlungen der IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature (Biochemistry^ fl966], 2 485; 6 [1967] 322; J. Biol. Chem. 241 [ΐ96β], 2 491; 242 [ΐ967], 555· 24£ [ 977) entsprechend am endständigen Stickstoffatom beginnend numeriert. (Beispielsweise ist die mittlere Aminosäureeinheit

ρ des Tripeptides L-Tyrosyl-glycyl-glykokoll Glycyl und die Glykokolleinheit mit der endständigen Carboxylgruppe GlykotaLL

Bekanntlich haben die natürlich vorkommenden L-Methionin-Encephalin der Formel

Tyr - GIy - GIy - Phe - Met - OH II und L-Leucin-Encephalin der Formel

Tyr - GIy - GIy - Phe - Leu - OH III

in welchen Formeln

Tyr für einen Rest von L-Tyrosin steht,

GIy einen Best von Glykokoll bedeutet,

Phe einen Rest von L-Phenylalanin darstellt,

Met für einen Rest von L-Methionin steht und

Leu einen Rest von L-Leucin bedeutet^

von denen das Pentapeptid L-Methionin-Encephalin der Formel II dem Fragment 61-65 des ß-Lipotropines entspricht, eine morphinartige Wirkung (J. Hughes und Mitarbeiter: Nature 258 £1975J» 577)· Die morphinartige Wirkung dieser Verbindungen äußert sich darin, daß sie sich in vitro an Opiat-Rezeptoren binden. Ihre Wirksamkeit in vivo dagegen

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ist bereits strittig, die für das Morphin charakteristische analgetische beziehungsweise schmerzlindernde Wirkung konnte nar im Falle von ß-Lipotropinfragmenten mit höherer Gliederzahl, zum Beispiel bei den Fragmenten 61-67 und 61-91» eindeutig nachgewiesen werden (L. Graf und Mitarbeite*: Nature 1976, im Druck). Bisher ist es nicht gelungen, irgendein Pentapeptidderivat oder -analog herzustellen, dessen Wirksamkeit in vitro diejenige des L-Methionin-Encephalines oder sogar nur des weniger wirksamen L-Leucin-Encephalines übertroffen hätte (L. Terentius und Mitarbeiter: Biochem. Biophys. Res. Commun. 22. ^976I, 175) beziehungsweise dessen analgetische Wirkung eindeutig nachgewiesen werden konnte.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, neue Pentapeptide mit überlegenen pharmakologischen Wirkungen, insbesondere einer morphinartigen Wirkung, die sich auch in vivo zeigt, Arzneimittel mit einem Gehalt an ihnen und ein Verfahren zur Herstellung derselben zu schaffen.

Es wurde nun überraschenderweise festgestellt, daß

gegenüber den Molekülen der Encephaline der Formeln II und

III durch Ersatz der jeweiligen Glykokoll -Aminosäureeinheit durch einen D-Aminosäurerest mit einer, gegebenenfalls verzweigten, niederen Alkylseitenkette oder einer, gegebenenfalls S-methylsubstituierten, Thioalkylseüjenkette bei einer Aminosäuregruppe mit einer, gegebenenfalls verzweigten, niederen Alkylseitenkette oder einer cyclischen Iminosäuregruppe, gegebenenfalls mit einer niederen Alkylseitenkette, als Aminosäureeinheit^ (an der Stelle der L-Methioniir- beziehungsweise L-Leucin -Aminosäureeinheit) abgewandelte Moleküle aufweisende Pentapeptide aet >c*r\i geo Pentapeptidamidderivate und Penta-

peptideeterderivate, eine mit der analgetischen Wirkung

ι nachträglich ! geändert

-V=

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des Morphines vergleichbare analgetische Wirkung haben.

Gegenstand der Erfindung sind daher Pentapeptide/ ^Q!'^{tlh r}-

r allgemeinen Formel

Tyr - A - GIy - Phe - B - X - Y I , worin

A für einen D-Aminosäurerest mit einer, gegebenenfalls verzweigten, niederen Alkylseitenkette oder einer, gegebenenfalls S-methy1-substituierten, niederen Thioalkyleeitenkette steht,

B einen Aininosäurerest mit einer, gegebenenfalls verzweigten, niederen Alkylseitenkette oder einen cyclischen Iminosäurerest, gegebenenfalls mit einer niederen Alkylseitenkette, bedeutet,

X Sauerstoff oder eine Gruppe der Formel - N - H darstellt,

Y für Wasserstoff oder einen niederen Alkylrest steht,

Tyr einen Rest von L-Tyrosin bedeutet, GIy einen Best von Glykokoll darstellt und Phe für einen Best von L-Phenylalanin steht, sowie ihre Dii>in>>i ί«ί"ίηηηηι1ηι ■ Amidderiva te, und Salze.

809812/07*3 ["Χ^^| -5-

Unter niederen Alkylaeitenketten und niederen Thioalkylaeitenketten sind aolche mit 1 bia 4 Kohlenatoffatomen zu verstehen (wobei natürlich das die Amino- und Carboxylgruppe aufweisende Kohlenstoffatom nicht mitgezahlt wird).

Vorzugsweise ist die Alkylseitenkette beziehungsweise Thioalkylseitenkette des D-Aminosäurerestes, für den A steht, eine solche mit 1 bis 3, insbesondere 1 oder 3, Kohlenstoffatomen.

Besonders bevorzugt ist der D-Aminosäurerest, für den A steht, ein D-Alanyl-, D-Methionyl- oder D-Norleucylre st.

Vorzugsweise ist die Alkylseitenkette des Aminosäurerestes, für den B stehen kann, eine solche mit 3 oder 4, insbesondere 4, Kohlenstoffatomen.

Besondere bevorzugt ist der Aminosäurerest, für den B stehen kann, ein Rest von L-Norleucin oder L-l8oleucin, von dem 1 Wasserstoffatom am Stickstoffatom und die Hydroxy gruppe der Carboxylgruppe fehlt.

Vorzugsweise weist der cyclische Iminosäurerest, für den B stehen kann, einen 5- oder 6-gliedrigen, insbesondere 5-gliedrigen, Hing auf.

Besonders bevorzugt ist der cyclische Iminosäurerest, für den B stehen kann, ein Rest von L-Prolin, von dem 1 Wasserstoffatom am Stickstoffatom und die Hydroxygruppe der Carboxylgruppe fehlt·

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AO

Vorzugsweise ist der niedere Alkylrest, für den Ϊ stehen kann, ein solcher mit 1 oder 2 Kohlenstoffatomen, insbesondere ein Methylrest.

Es ist auch bevorzugt, daß die Amidderivate solche, welche am Amidstickstoffatom nicht substituiert oder durch 1 oder 2 niedere Alkylreste, insbesondere mit 1 oder 2 Kohlenstoffatomen, ganz besonders einen

Ää$rlrest, substituiert sind, sind.

Ferner sind erfindungsgemäß Arzneimittel, weiche 1 oder mehr der erfindungsgemäßen Verbindungen als Wirkstoff beziehungsweise Wirkstoffe, zweckmäßigerweise zusammen mit üblichen pharmazeutischen Konfektionierungsmitteln, enthalten, vorgesehen.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben nämlich wie bereits erwähnt wertvolle pharmakologische Eigenschaften, insbesondere morphinartige Wirkungen.

Die morphinartige Wirkung in vivo von erfindungsgemäßen Verbindungen sowie von L-Methionin-Encephalin und Morphin als Vergleichssubstanzen sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt, wobei die Wirkung des Morphines als 100 zugrundegelegt ist.

Die Untersuchungen wurden nach dem Verfahren von D'Amour und Smith (J. Pharm. Ther. 22. fWi] , 7*0 beziehungsweise Chermat und Simon (J. Pharmacol. £ParieJ 6 [i975j , W) durchgeführt.

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- 7 Tabelle

Verbindung

Beispiel

Nr.

Bezeichnung

Morphinartige Wirkung in vivo

L-1yr osyl -D -norleucyl-glycyl-L-pheyl alanyl -L- ρ ro 1 inhydr ο chi ori d

100

L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-pbenylalanyl-L-piDlinhydrochlorid

133

11

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolinamid

390

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phe nylalanyl-L-proün-(N-äthyl)-amid

1 690

L-Tyro syl-D-me t hi ony 1 - gly c y 1-L-phaiy 1 alanyl-L-prolin-(N-äthy 1) - am id

1 690

10

L-Tyrosyl-D-methionyl-glyoyl- L- phenylalanyl-L-prolinamid

5 000

Vergleichsversuca L-Tyrosyl-gl^cyl-gly^l-I^pherylalanyl-L-methiccdn (L-Methionin-Encephalin) Vetsleicheveisuch Morphin

O 100

cn

CD CO

Aus den Untersuchungsergebnissen der obigen Tabelle geht hervor, daß im Gegensatz zur Vergleichssübstanz L-Tyrosyl-glycyl-glycyl-L-phenylalanyl-L- -methionin (L-Methionin-Encephalin) die morphinartige Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen auch in vivo zur Geltung kommt und daß die Wirkung eines großen Teiles von ihnen sogar diejenige des als Vergleichssubstanz verwendeten Morphines übertrifft.

Gegenstand der Erfindung ist auch ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß in in der Peptidchemie an sich bekannter Weise eine Aminosäure mit einer niederen Alkylseitenkette oder cyclische Iminosäure, gegebeneafalLs mit einer niederen Alkylseitenkette, oder ein Ester- oder Amidderivat einer solchen mit de.r nachfolgend einzubauenden an ihrem endständigen Stickstoffatom eine abspaltbare Schutzgruppe aufweisenden Aminosäure und/oder dem nachfolgend einzubauenden an seinem endständigen Stickstoffatom eine abspaltbare Schutzgruppe aufweisenden Peptidfragment beziehungsweise einem Esterderivat desselben kondensiert wird und gegebenenfalls mit dem erhaltenen am endständigen Stickstoffatom geschützten Peptidzwischenprodukt und dem beziehungsweise den durch etwaige weitere derartige Kondensationen erhaltenen am endständigen Stickstoffatom geschützten weiteren Peptidzwischenprodukt(en) nach in an sich bekannter Weise erfolgendem Entfernen der Schutzgruppe des endständigen Stickstoffatomes eine weitere beziehungsweise weitere Kondensation(en) mit beziehungsweise jeweils mit der nachfolgend einzubau enden an ihren endständigen Stickstoffatom eine ab-

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epaltbare Schutzgruppe aufweisenden Aminosäure und/oder dem nachfolgend einzubauenden an seinem endständigen Stickstoffatom eine abspaltbare Schutzgruppe aufweisenden Peptidfragment beziehungsweise einem Esterderivat desselben vorgenommen wird beziehungsweise werden, wobei so viele Kondensationen durchgeführt werden, wie es zum Einbau aller gewünschten Aminosäureeinheiten erforderlich ist, sowie danach in an sich bekannter Weise, gegebenenfalls nach in an sich bekannter Weise erfolgendem Überführen des am endständigen Stickstoffatom geschützten Peptidzwischenproduktes in ein Ester- oder Amidderivat, die Schutzgruppe des endständigen Stickstoffatomes entfernt wird, worauf gegebenenfalls in an sich bekannter Weise das erhaltene Pentapeptid in ein Salz überführt wird.

Das erfindungsgemäße Verfahren wird an Hand der folgenden Beispiele näher erläutert. In diesen sind die Temperaturen in Celsiusgraden angegeben. Die R~-Werte wurden mittels Dünnschichtchromatographie auf Silicagel (Kieselgel G, REANAL, Budapest) in den folgenden Loeungsmittelgemischen bestimmt:

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1. Chloroform/Methanol (9 : 1),

2. Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasaer (240 : 20 : 6 : 11).

3. Äthylacetat/Pyridin/EBsigaäure/Waaaer (120 : 20 : 6 : 11).

4. Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasaer (6.0 : 20 : 6 : 11).

5. Äthylacetat/Pyridin/Eaaigaäure/Waaeer (30 : 20 : 6 : 11).

Die Lösungen wurden unter vermindertem Druck in einem Wasaerbad von 40°C eingedampft. Die Aminosäureanalyae der Peptide wurde in einem Analysator JLC-5AH nach vollatändiger Hydrolyse (6 η HCl, 24 Stunden, 110⁰C) durchgeführt.

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Beiapiel 1

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L- -phenylalanyl-L-norleucin

1. Stufe

N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylalanyl-L- -norleucinmethylester

Es wurden 4,8 g (10 Millimol) N-Benzyloxycarbonyl-L- -phenylalanin^^^-trichlorphenylester (J. Pleas und R. A. Boissonnas: HeIv. Chim. Acta 46 f 19β33» 1 ⁶°9) und. 2 g (11 Millimol) L-Norleucinmethylesterhydrochlorid (H. N. Flowers and W. S. Reith: Biochem. J. j?3_ pI953j, 657) in 10 cnr Pyridin gelöst. Nach Zugabe von 1,2 cm* (11 Millimol) N-Methylmorpholin wurde das Reaktionsgemisch 3 Stunden lang stehengelassen und dann eingedampft. Der Rückstand wurde in 50 cm eines Gemisches von Äthylacetat und Wasser im Volumverhältnis von 1 : 1 gelöst tnd die organische Phase wurde mit einer η Salzsäure und mit Wasser gewaschen und dann über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde mit Äther verrieben, filtriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. So wurden als Produkt 3»6 g (85% der Theorie) N-Benzyloxycarbonyl-L- -phenylalanyl-L-norleucinmethylester mit einem Schmelzpunkt von 123 bis 124⁰O und einem H^-Wert von 0,89 bis 0,93 erhalten.

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27A0699 - *r-

2. Stufe

N-Benzyloxycarbonyl-glycyl-L-phenylalanyl- -L-norleucinmethylester

Es wurden 5,55 g (13 Millimol) des in der obigen 1. Stufe erhaltenen N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylalanyl-L- -norleucinmethylesters in 100 cnr Methanol gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion (R^-Wert »0,23 bis 0,25) wurde der Katalysator abfiltriert, die Lösung eingedampft und der Rückstand in 25 cnr Pyridin gelöst. Dann wurden 4,66 g (12 Millimol) N-Benzyloxycarbonyl-glykokoll^^^-trichlorphenylester (J. Pless und R. A. Boissonnas: HeIv. Chim.Acta 46 fi963ll, 1 609) zugesetzt und das Gemisch wurde 3 Stunden lang stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde eingedampft , der Rückstand wurde mit ither verrieben, filtriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. So wurden als Produkt 5,28 g (91$ der Theorie) N-Benzyloxycarbonyl-glycyl-L- -jbesijrlalenyl-L-norleucinmethylester mit einem Schmelzpunkt von 110 bis H2°C und einem R^-Wert von 0,80 bis 0,90 erhalten.

3. Stufe

N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl- -L-phenylalanyl-L-norleucinmethylester

Es wurden 1,93 g (4 Millimol) des in der obigen 2. Stufe erhaltenen N-Benzyloxycarbonyl-glycyl-L-

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phenylalanyl-L-norleucinmethylesters in 30 cnr Methanol gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion (R^-Wert =■ 0,10 bis 0,20) wurde der Katalysator abfiltriert, die Lösung eingedampft und der Rückstand in 8 cm Pyridin gelöst. Dann wurden 1»6 8 (^ Millimol) N-Benzyloxycarbonyl-D-alanin-2,4,5- -trichlorphenylester (seine Synthese ist mit derjenigen des L-Isomers identisch: J. Pless und R. A. Boissonnas: HeIv. Chim. Acta 46 Γ.19633, 1 609) zugesetzt und das Gemisch wurde 3 Stunden lang stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde eingedampft und der Rückstand wurde mit Äther verrieben, filtriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. Das so erhaltene Produkt (R^-Wert - 0,67 bis 0,70) wurde in 50 cm' eines Gemisches von Methanol, Wasser und Dimethylformamid im Volumverhältnis von 1 : 1 : 1 gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion (R^-Wert =0,24 bis 0,29) wurde der Katalysator abfiltriert, die Lösung eingedampft und der Rückstand in 8 cm Pyridin gelöst. Dann wurden 1,75 g (3»5 Millimol) N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosin^^^-trichlorphenylester zugesetzt (J. Pless und R. A. Boissonnas: HeIv. Chim. Acta 46 Ϊ1963j , 1 609) und das Gemisch wurde 5 Stunden lang stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde eingedampft und der Rückstand wurde in 30 cm* Äthylacetat gelöst, mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und dann eingedampft. Der Rückstand wurde mit einem Gemisch von Äther und n-Heptan im Volumverhältnis von 1 : 1 verrieben, filtriert, mit dem genannten Gemisch gewaschen und getrocknet, üo wurden als Produkt 2,0 g (80% der Theorie) Ii-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D- -alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-norleucinmethyleeter mit

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einem Schmelzpunkt von 195 C (sinterte bei 190 C) vmd einem fi^-Wert von 0,73 bis 0,78 erhalten.

4. Stufe

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-norleucin

Es wurden 1,15 g (1»6 Millimol) des in der obigen 3. Stufe erhaltenen N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D- -alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-norleucinmethylesters

Z Z

in einem Gemisch von 4 cm Methanol und 2 cnr Aceton suspendiert, worauf das Gemisch in Gegenwart eines Thymolphthaleinindikators mit einer 0,5 η Natronlauge verseift wurde. Nachdem sich der Laugenverbrauch verlangsamt hatte, wurde das Gemisch mit 10 cm Wasser verdünnt und mit 3x5 cm Äthylacetat extrahiert. Durch Eindampfen der Äthylacetatphasen wurde 0,3 g (26% der Theorie) geschützter Pentapeptidester N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L- -norleucinmethylester rückgewonnen. Die wäßrige Phase wurde mit einer 0,5 η Schwefelsäure angesäuert und die ausgeschiedene Substanz (R_f-Wert » 0,25 bis 0,35) wurde in 50 cm einer 80%-igen Essigsäure suspendiert und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Im Laufe der Reaktion ging die Substanz in Lösung. Am Ende der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert, die Lösung wurde eingedampft und der Rückstand wurde mit etwa 4 car kaltem Wasser verrieben. Die gebildete

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kristalline Substanz wurde abfiltriert, mit kaltem Wasser gewaschen und getrocknet. So wurde als Produkt 0,^-7 g (70% der Theorie) L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L- -phenylalanyl-L-norleucin erhalten.

R^-Wert - 0,19 bis 0,23. Aminosäureanalyse:

Glykokoll	1,0,
D-Alanin -	1,02,
L-Norleucin	1,02,
L-Tyrosin ■	0,98
L-Phenylalanin -	1 (Bezugsbasis).
Beispiel	2

und

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L- -norleucinmethylesterhydrochlorid

Es wurde 0,36 g (0,5 Millimol) in der 3. Stufe dee Beispieles 1 erhaltener N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D- -alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-norleucinmethylester in 30 cnr einer 80%-igen Essigsäure suspendiert und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert, die Lösung eingedampft und der Rückstand in 1 cm einer methanolischen η Chlorwasserstofflösung gelöst und dann mit Äther verdünnt. Das ausgeschiedene Produkt wurde abfiltriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. So wurde als Produkt 0,3 g (93# der Theorie) des Pentapeptideeterhydro-

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chlorides L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L- -norleucinmethylesterhydrochlorid mit einem R»-Wert von 0,55 bis 0,60 erhalten.

Beispiel 3

L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L- -phenylalanyl-L-norleucin

Es wurden 1,8 g (3,7 Millimol) wie in der 2. Stufe des Beispieles 1 beschrieben erhaltener N-Benzyloxycarbonyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-norleucinmethylester in 30 cnr Methanol gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion (R?-Wert =0,10 bis 0,20) wurde der Katalysator abfiltriert und die Lösung eingedampft. Der Rückstand wurde in 4 cnr Pyridin gelöst, es wurden 1,56 g (3»65 Millimol) N-tert.Butyloxycarbonyl-D-methionin-2,4,5-trichlorphenylester (W. Broadbent und Mitarbeiter: J. Chem. Soc. 1967« 2 632) zugesetzt und die Lösung wurde 5 Stunden lang stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde eingedampft und der Rückstand wurde mit einem Gemisch aus Äther und n-Heptan im Volumverhältnis von 1 : 1 verrieben, filtriert, mit dem genannten Gemisch gewaschen

und getrocknet. Dem so erhaltenen Produkt (R--Wert » 0,70 bis 0,75) wurden 5 cnr einer äthylacetatischen 2 η Chlorwaeeeretofflösung zugesetzt und das erhaltene Re- '

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aktionsgemisch wurde 30 Minuten lang stehengelassen. Es wurde mit n-Heptan verdünnt und der Niederschlag wurde abfiltriert, mit n-Heptan gewaschen und dann unter Vakuum über Kaliumhydroxyd getrocknet. Das erhaltene Produkt (1,5 g; R?-Wert = 0,17 bis 0,2?) wurde

\ 7

\ 7.

in einem Gemisch aus 2 cm? Pyridin und 2 cm Dimethylformamid suspendiert und dann wurden 1,6 g (3 Millimol) N-tert.Butyloxycarbonyl-L-tyrosin-2,4,5-trichlorphenylester (D. A. Jones und Mitarbeiter: J. Org. Chem. Jfi [19733, 2 865) und 0,7 cm⁵ (6 Millimol) N-Methylmorpholin zugesetzt. Das Gemisch wurde bis zur Erreichung einer Lösung gerührt und über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde unter Vakuum eingedampft und

3 · 3

dann mit 30 cm Athylacetat und 30 cm einer 0,5 η Schwefelsäure verdünnt. Die organische Phase wurde mit einer 0,5 η Schwefelsäure und mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und dann eingedampft. Der Rückstand wurde in 5 cm Aceton gelöst und in Gegenwart eines Thymolphthaleinindikators mit einer η Natronlauge verseift. Am Ende der Reaktion wurde die Lösung angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Die Äthylacetatphase wurde eingedampft und dann wurden 10 cnr einer äthylacetatischen 2 η Chlorwasserstofflösung auf den Rückstand gegossen und es wurde gerührt. Nach -^ Stunde wurde die gebildete Suspension mit 10 cm Wasser verdünnt und die wäßrige Phase wurde mit N-Methylmorpholin neutralisiert. Nach dem Abkühlen wurden die ausgeschiedenen Kristalle abfiltriert, mit wenig kaltem Wasser gewaschen und getrocknet. So wurden ale Produkt 1,13 g (60% der Theorie) des Pentapeptidee

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L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-norleucin erhalten.

R^-Wert - 0,3 bis 0,4. Aminosavire analyse:

Glykokoll	- 1,0,
D-Methionin	- 0,98,
L-Norleucin	- 1,0,
L-Tyrosin	- 0,96
L-Phenylalanin	- 1 (Bezugsbasis).
Beispiel	4

und

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L- -phenylalanyl-L-isoleucin

1. Stufe Glycyl-L-phenylalanyl-L-ieoleucin

Es wurden 1,95 g (7 Millimol) L-Phenylalanyl-L-isoleucin (J. T. Hill und W. P. Dunn: J. Med. Chem. Λ2.
f1969j, 737) in 10 cm Pyridin suspendiert und dann wur de das Beaktionsgemisch nach Zugabe von 0,98 car

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-1fr-

(7 Millimol) Triäthylamin und 2,72 g (7 Millimol) N-Benzyloxycar"bonyl-glycyl-2,^,5-trichlorphenylester bis zum Erreichen einer Lösung gerührt und über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde eingedampft, der Rückstand wurde in 50 cnr Äthylacetat und so viel 0,5 η Schwefelsäure gelöst, daß sich der pH-Wert der wäßrigen Phase auf 2 bis 3 einstellte. Die organische Phase wurde mit Wasser gewaschen und dann wurde das in Lösung befindliche N-Benzyloxycarbonyltripeptid N-Benzyloxycarbonyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-isoleucin mit 3 χ 20 cnr einer 5%-igen Natriumbicarbonatlösung extrahiert. Diese Lösung wurde mit einer 0,5 η Schwefelsäure angesäuert, das ausgeschiedene Tripeptid Glycyl-L- -phenylalanyl-L-isoleucin wurde mit Äthylacetat extrahiert und diese Lösung wurde eingedampft. Der Rückstand (R„-Wert a 0,5 ^is 0,6) wurde in 60 cm⁹ Wethanox gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert und mit Essigsäure gewaschen und dann wurden das FiI-trat und die Waschflüssigkeit vereinigt und eingedampft. Der Rückstand wurde mit Äther verrieben, filtriert, mit Äther gewaschen und unter Vakuum über Kaliumhydroxyd getrocknet. So wurden 1,87 6 (80% der Theorie) des Tripeptides Glycyl-L-phenylalanyl-L-isoleucin mit einem R^-Wert von 0,35 bis 0,45 erhalten.

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2. St vif β

D-Alanyl-glycyl-L-phenylalanyl- -L-iaoleucin

Es wurden 1,68 g (5 Millimol) dea in der obigen 1. Stufe erhaltenen Glycyl-L-phenylalanyl-L-isoleucines in 5 cm Pyridin suspendiert und nach Zugabe von 0,7 cm (5 Millimol) Triäthylamin sowie 2,02 g (5 Millimol) N-Benzyloxycarbonyl-D-alanin-2,4,5-trichlorphenylester wurde das Gemisch bis zum Erreichen einer Lösung gerührt und dann über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde in der in der obigen 1. Stufe angegebenen Weise aufgearbeitet. Der gewonnene Destillationsrückstand (R^-Wert - 0_%5Q bis 0,55) wurde in 50 cm' einer 80%-igen Essigsäure gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert und mit Essigsäure gewaschen. Sie Essigsäurelösungen wurden vereinigt und eingedampft und der Rückstand wurde mit Äther verrieben, filtriert, ait Äther gewaschen und unter Vakuum über Kaliumhydroxyd getrocknet. So wurden als Produkt 1,7 g (84% der Theorie) dee Tetrapeptides D-Alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L- -isoleucin mit einem R_f-Wert von 0,10 bis 0,15 erhalten.

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3. Stufe

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-isoleucin

Ea wurden 1,22 g (3 Millimol) des in der obigen 2. Stufe erhaltenen D-Alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L- -isoleucinea in 3 cm Pyridin suspendiert und nach Zugabe von 0,42 cm' (3 Millimol) Triethylamin sowie 1,48 g (3 Millimol) N-Benzyloxycarbonyl-L-tyroain- -2,4,5-trichlorphenylester wurde das Gemisch bis zum Erreichen einer Lösung gerührt und dann über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde in der in der obigen 1. Stufe beschriebenen Weise aufgearbeitet. Der gewonnene Destillationsrückstand (R»-Wert ■ 0,55 bis 0,60) wurde in 50 cnr einer 80%-igen Essigsäure gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion wurde der Katalysator äbfiltriert und mit Essigsäure gewaschen. Die Essigsäurelösungen wurden vereinigt und eingedampft und der Rückstand wurde mit Äther verrieben, filtriert, mit Äther gewaschen und unter Vakuum über Kaliumhydroxyd getrocknet. So wurden als Produkt 1,4 g (80% der Theorie) des Pentapeptides L-Tyrosyl-D-alenyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-isoleucin erhalten.

- 22 -

809812/0743

- 32- -

B^-Wert - 0,08 bis 0,12,

Aminosäureanalyse:

Glykokoll - 1,0,

D-Alanin - 1,0,

L-Norleucin ■ 1,02,

L-Tyrosin » 0,96 und

L-Phenylalanin ■ 1 (Bezugsbasis).

Beispiel 5

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L- -phenylalanyl-L-prolin

1. Stufe

Glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin

Es wurden 5,25 g (20 Millimol) L-Phenylalanyl-L- -prolin (S. Bajusz und T. Läzar: Acta Chim. ^BudapestJ 48 J1966}, 111) in 20 cm Pyridin suspendiert und nach Zugabe von 2,8 cnr (20 Hillimol) Triäthylamin sowie 7,77 g (20 Millimol) li-Benzyioxycarbonyl-glykokoll-■2,4,5-trichlorpb.enylester wurde das Gemisch bis zum

- 23 -809812/0743

27A0699

Erreichen einer Lösung gerührt und dann über Nacht stehengelassen. Sas Reaktionsgemisch wurde in der in der 1. Stufe des Beispieles 4 angegebenen Weise aufgearbeitet. Das als Destillationsrückstand erhaltene Produkt (R^-Wert = 0,5 bis 0,6) wurde in 100 cnr Methanol gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert und mit Methanol gewascbm. Die methanolischen Lösungen wurden nach dem Vereinigen eingedampft. Der Rückstand wurde in Äther kristallisiert, filtriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. So wurden als Produkt 5,43 g (85% der Theorie) des Tripeptides Glycyl-L-phenylalanyl- -L-prolin mit einem R-.-Wert von 0,31 bis 0,38 erhalten.

2. Stufe

D-Alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin

Es wurden 3,2 g (10 Millimol) des in der obigen 1. Stufe erhaltenen Glycyl-L-phenylalanyl-L-prolinee in 10 cmr Pyridin suspendiert und nach Zugabe von 1,4 car (10 Millimol) Triethylamin sowie 4,03 g (10 Millimol) N-Benzyloxycarbonyl-D-alanin-2,4,5-trichlorphenylester wurde das Gemisch bis zum Erreichen einer Lösung gerührt und dann über Nacht stehengelsassen. Das Reaktionsgemisch wurde in der in der 1. Stufe des Beispieles 4· angegebenen Weise aufgearbeitet. Der gewonnene Destillationsrückstand (R^-Wert - 0,42 bie 0,52) wurde in

809812/0743

80 cur Methanol gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert und mit Nethanoi gewaschen. Die methanolischen Lösungen wurden vereinigt und eingedampft. Der Rückstand wurde mit Äther verrieben, filtriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. So wurden als Produkt 3,2 g (82% der Theorie) des Tetrapeptides D-Alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin mit einem RJ.-Wert von 0,07 bis 0,11 erhalten.

3. Stufe

N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D-alanyl· -glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin

Es wurden 3,12 g (8 Millimol) des in der obigen 2. Stufe erhaltenen D-Alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L- -prolines in 15 cm Pyridin suspendiert und nach Zugabe von 1,12 cm (8 Millimol) Triethylamin sowie 3,95 g (8 Millimol) N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosin-2,^,5-trichlorphenyleeter wurde das Gemisch bis zum Erreichen einer Lösung gerührt und dann über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde in der in der 1. Stufe dee Beispieles 4 angegebenen Weise aufgearbeitet. Das als Destillationsrückstand gewonnene Produkt wurde mit Äther verrieben, filtriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. So wurden als Produkt 4,4 g (80% der Theorie) des geschützten Pentapeptides N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin mit einem R^-Wert von 0,3 bis 0,4 erhalten.

- 25 809812/0743

A-. Stufe

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin

Es wurden 2,06 g (3 Millimol) des in der obigen 3. Stufe erhaltenen N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D- -alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolines in einem Ge-

3 3

misch von A-O cnr Methanol und 10 cm Dimethylformamid gelöst und dann in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert und mit einem Gemisch von Methanol und Dimethylformamid im Volumverhältnis von 1 : 1 gewaschen. Dann wurden die Lösungen vereinigt und eingedampft und der Rückstand wurde mit Äther verrieben, filtriert, mit Äther gewaschen, nach dem Trocknen noch einmal in 4- cm Äthanol gelöst und mit Athylacetat gefällt. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Äthylacetat gewaschen und getrocknet. So wurden als Produkt 1,16 g (70% der Theorie) des Pentapeptides L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin erhalten.

R^-Wert - 0,3 bis 0,4.

Aminosäureanalyse:

L-Prolin	- 1,02,
Glykokoll	- 1,0,
D-Alanin	- 0,98,
L-Tyrosin	- 1,0

und

L-Phenylalanin ■ 1 (Bezugsbasis).

809812/0743 " ²⁶"

Beispiel 6

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin-(N-äthyl)-amid

Es wurden 0,7 g (1 Millimol) des in der 3. Stufe des Beispieles 5 erhaltenen N-Benzyloxycarbonyl-L- -tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolines in 2 cnr Dimethylformamid gelöst und 0,1 g (1,24 Millimol) Äthylaminhydrochlorid, 0,17 cm⁵ (1,24 Millimol) Triethylamin sowie 0,21 g (1 Millimol) Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 1 Tag lang stehengelassen und dann nach dem Filtrieren mit 30 cm Äthylacetat verdünnt. Die Lösung wurde mit einer 0,5 η Schwefelsäure, Wasser, einer 5%-igen Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen und dann getrocknet und eingedampft. Der Destillationsrückstand (R^-Wert - 0,80 bis 0,85) wurde in 30 cnr Methanol gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am finde der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert, die Lösung eingedampft und der Rückstand mit ^ther verrieben, filtriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. So wurde als Produkt 0,43 g (75% der Theorie) des Pentapeptid-(N-äthyl)- -amideβ L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L- -pro]in-$J-äthyl)-amid mit einem R_f-Wert von 0,3^ bis 0,44 erhalten.

- 27 809812/0743

- Vf-

Beistdel 7

^-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolinhydrochlorid

Es wurde 0,96 g (3 Millimol) des in der 1. Stufe des Beispieles 5 erhaltenen Glycyl-L-phenylalanyl-L- -prolines in 5 cnr Pyridin suspendiert und nach Zugabe von 0,42 cnr (3 Millimol) Triethylamin sowie 1»27 g (3 Millimol) N-tert.Butyloxycarbonyl-D-methionin-2,4,5-trichlorphenylester wurde das Gemisch bis zum Erreichen einer Lösung gerührt und über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde in der in der 1. Stufe des Beispieles 4 beschriebenen Weise aufgearbeitet. Auf die als Destillationsrückstand gewonnene Substanz (R_f-Wert - 0,30 bis 0^35) wurden 10 cm^ einer äthylacetatischen 2 η Chlorwasserstofflösung gegossen und es wurde gerührt. Nach -i Stunde wurde das Reaktionsgemisch mit n-Heptan verdünnt, filtriert, mit n-Heptan gewaschen und unter Vakuum über Kaliumhydroxyd getrocknet. Das so gewonnene Produkt (R»-Wert ■ 0,16 bis 0,24) wurde in 5 cm Pyridin suspendiert und nach Zugabe von 0,84 cnr (6 Millimol) Triethylamin sowie 1,32 g (2,5 Millimol) N-tert.Butyloxycarbonyl-L- -■tyrosinpentachlorphenylester bis zum Erreichen einer Lösung gerührt und dann über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde in der in der 1. Stufe des Beispieles 4 angegebenen Weise aufgearbeitet. Der Destillationsrückstand wurde in 10 cnr einer athyl-

- 28 809812/0743

acetatischen 2 η Chlorwasserstofflösung gelöst und

1 5 ■·

nach ^^- Stunde langem Hühren mit 10 cnr Athylacetat verdünnt und dann filtriert, mit Äthylacetat gewaschen und getrocknet. So wurden als Produkt 1,14 g (70% der Theorie) des Pentapeptidhydrochloridea L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolinhydrochlorid erhalten.

R^-Wert - 0,35 bie 0,45.

Aminosäureanalyse:

L-Prolin	0,98,
Glykokoll	1,0,
D-Methionin	0,95,
L-Tyrosin »	1,0
L-Phenylalanin ■	1 (Bezugsbasis).
Beispiel 8

und

L-Tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolinhydrochlorid

Es wurde ausgehend von 0,96 g (3 Millimol) wie in der 1. Stufe des Beispieles 5 beschrieben erhaltenem Glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin in der im Beispiel 7 beschriebenen Weise vorgegangen, jedoch mit

- 29 -809812/0743

dem Unterschied, daß an Stelle der 1,27 g N-tert.ßutyloxycarbonyl-D-methionin-2,4-, 5-trichlorphenylester 1,06 g (3 Millimol) N-tert.Butyloxycarbonyl-D-norleucin-4-nitrophenylester (R. Rocchi und Mitarbeiter: J. Am. Chem. Soc. ^I [1969^, 492) verwendet wurden. So wurden als Produkt 1,18 g (75% der Theorie) des Pentapeptidhydrochlorides L-Tyrosyl-D-norleucyl-glycyl- -L-phenylalanyl-L-prolinhydrochlorid erhalten.

R^-Wert - 0,35 bis 0,45.

Aminosäureanalyse:

L-Prolin « 1,0,

Glykokoll »1,0,

D-Norleucin · 1»05»

L-Tyrosin » 0,98 und

L-Phenylalanin =· 1 (Bezugsbasis).

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Beispiel 9

L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenyl· alanyl-L-prolin-(N-äthyI)-amid

1. Stufe

Glycy1-L-pheny1alanyl-L-prolin- -(N-äthyl)-amidoxalat

Ea wurden 3*7 g (13 Millimol) N-Benzyloxycarbonyl- -prolin-(N-äthyl)-amid (S. Shinagawa und M. Fujino: Chem. Pharm. Bull. 23_ p975l· 229) in 50 cm⁵ Methanol gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion (R^-Wert -0,2 bis 0,3) wurde der Katalysator abfiltriert und mit Methanol gewaschen, die vereinigten Lösungen wurden eingedampft und der Rückstand wurde in 10 cm* Dimethylformamid gelöst. Nach Zugabe von 3»9 g (13 Millimol) N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylalanin, 1,75 g (13 Millimol) 1-Hydroxybenztriazol und 2,7 g (13 Millimol) Dicyclohexylcarbodiimid wurde das Reaktionsgemisch über Nacht stehengelassen und dann zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde in 50 cm Äthylacetat gelöst und mit einer 5%-igen Natriumbicarbonatlösung, Wasser, einer 0,5 η Schwefelsäure und noch einmal mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Das er-

- 31 809812/0743

haltene Produkt (R--Wert « 0,63 bis 0,68) wurde in 50 cnr Methanol gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert und mit Methanol gewaschen. Der nach dem Eindampfen der methanolischen Lösung gewonnene Rückstand (R^-Wert = 0,1 bis 0,2) wurde in 10 cm Pyridin gelöst und es wurden 2,09 g (10 Millimol) N-Benzyloxycarbonyl-glykokoll-2,4,5-trichlorphenylester zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht stehengelassen und dann zur Trockne eingedampft. Der Destillationsrückstand wurde in 50 cnr Äthylacetat gelöst, mit einer 0,5 η Schwefelsäure gewaschen und dann wurde die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde in 50 cnr Methanol gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am &nde der Reaktion wurde der Katalysator abfiltriert und dann wurde die Lösung eingedampft. Der Destillationsrückstand wurde in einem Gemisch von 2 cnr Äthanol und 2 cm Äthylacetat gelöst, es wurde 0,9 g (10 Millimol) Oxalsäure zugesetzt und das Gemisch wurde mit 50 cnr Äthylacetat verdünnt. Das ausgeschiedene Produkt wurde abfiltriert, mit Äthylacetat gewaschen und getrocknet. So wurden als Produkt 2,7 β (62% der Theorie) des Tripeptid-(N-äthyl)-amidoxalatee Glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin-(N-äthyl)-amidoxalat mit einem Schmelzpunkt von 98 bis 10O⁰C und einen R_f-Wert von 0,4 bis 0,5 erhalten.

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2. Stufe

L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin-(N-äthyl)-amid

Es wurden 0,9 g (2 Millimol) des in der obigen 1. Stufe erhaltenen Glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin- -(N-äthyl)-amidoxalates in 3 cm Pyridin gelöst und 0,86 g (2 Millimol) N-tert.Butyloxycarbonyl-D-methionin-2,4,5-trichlorphenylester und 0,56 ca (4 Millimol) Triäthylamin zugesetzt und dann wurde das Gemisch über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde eingedampft, der Rückstand wurde in 50 cm Äthylacetat gelöst, mit einer 0,5 n Schwefelsäure gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Auf den Rückstand (R~-Wert » 0,80 bis 0,85) wurden 10 car einer äthylacetatischen 3 η Chlorwasserstofflösung gegossen und nach ^r Stunde wurde das Gemisch mit 30 cm n-Heptan verdünnt. Der auegeschiedene Niederschlag wurde abfiltriert, mit n-Heptan gewaschen und unter Vakuum über Kaliumhydroxyd getrocknet. Das

so gewonnene Produkt wurde in 5 car Pyridin gelöst
und es wurden 1,06 g (2 Millimol) N-tert.Butyloxycarbonyl-tyrosinpentachlorphenylester sowie 0,56 cm
(4 Millimol) Triäthylamin zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht stehengelassen und dann eingedampft. Der Rückstand wurde in 50 cm Äthylacetat gelöst, mit einer 0,5 η Schwefelsäure gewaschen und nach dem Trocknen über Natriumsulfat zur Trockne eingedampft. Der Rückstand (R^-Vert - 0,65 bis 0,90) wurde

- 33 -

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3 1

in 3 cm Trifluoressigsaure gelöst und -j Stunde lang stehengelassen. Die einen Niederschlag enthaltende Lösung wurde eingedampft und der Rückstand wurde mit einem Gemisch von Äthylacetat und Benzol im Volumverhältnis von 1 : 1 verrieben. Das so gewonnene Produkt wurde in einem Gemisch von 5 cm einer 10%-igen Natriumcarbonatlösung und 50 cnr Athylacetat gelöst, die wäßrige Phase wurde mit 3 χ 10 ca Äthylacetat extrahiert und dann wurden die vereinigten Äthylacetatlösungen über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Destillationsrückstand wurde mit einem Gemisch von n-Heptan und Äthylacetat im Volumverhältnis von 1 : 1 verrieben, filtriert, mit dem genannten Gemisch und mit n-Heptan gewaschen und dann getrocknet. So wurden als Produkt 1,02 g (80% der Theorie) des Pentapeptid-(N-äthyl)-amide8 L-Tyrosyl-D-methionyl- -glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin-(N-äthyl)-amid erhalten.

R^-Wert - 0,45 bis 0,55.

Aminosäureanalyse:

L-Prοlin	- 1,0,
Glykokoll	- 1,0,
D-Methionin	= 0,98,
L-Tyrosin	- 1,02

und

L-Phenylalanin * 1 (Bezugsbasis).

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Beispiel 10

L-Tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L- -phenylalanyl-L-pro1inamid

Es wurde 0,96 g (3 Millimol) wie in der 1. Stufe des Beispieles 5 beschrieben erhaltenes Glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin in 5 cm Pyridin suspendiert und nach Zugabe von 0,42 cm (3 Millimol) Triethylamin sowie 1,27 g (3 Millimol) N-tert.Butyloxycarbonyl-D- -methionin^^^-trichlorphenylester wurde das Gemisch bis zum Erreichen einer Lösung gerührt und dann über Nacht stehengelassen. Bas Reaktionsgemisch wurde in der in der 1. Stufe des Beispieles 4 beschriebenen Weise aufgearbeitet. Auf die als Destillationsrückstand gewonnene Substanz (R_f-Wert = 0,30 bis 0,35) wurden 10 cm einer äthylacetatischen 2 η Chlorwasserstofflösung gegossen und es wurde gerührt. Nach -^ Stunde wurde das Reaktionsgemisch mit n-Heptan verdünnt und dann filtriert, mit n-Heptan gewaschen und unter Vakuum über Kaliumhydroxyd getrocknet. Das so gewonnene Produkt (R^-Wert = 0,16 bis 0,24) wurde in 5 cm' Pyridin suspendiert und nach Zugabe von 0,84 cnr (6 Millimol) Triäthylamin sowie 1,32 g (2,5 Millimol) N-tert.Butyloxycarbonyl-L-tyrosinpentachlorphenylester bis zum Erreichen einer Lösung gerührt und dann über Nacht stehengelassen. Das Reaktionsgemisch wurde in der in der 1. Stufe des Beispieles 4 angegebenen Weise aufgearbeitet. Der Destillationerückstand wurde mit n-Heptan

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verrieben, filtriert, mit n-Heptan gewaschen und getrockent. Das so erhaltene N-tert.Butyloxycarbonyl- -L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolin (R^-Wert * 0,60 bis 0,66) wurde in 5 cm⁵ Dimethylformamid gelöst und es wurden 0,52 g (2,5 Willimol) Dicyclohexylcarbodiimid sowie 0,4 g (2,5 Millimol) des Ammoniumsalzes von 1-Hydroxybenzotriazol zugesetzt. (Das letztere ist in der Weise hergestellt worden, daß eine mit konzentrierter wäßriger Ammoniak' lösung bereitete Lösung von 1-Hydroxybenztriazol [p »5 g/cm J mit Aceton verdünnt wurde und dann die ausgeschiedenen Kristalle abfiltriert, mit Aceton gewaschen und getrocknet wurden). Das Amidierungereaktionsgemisch wurde, nachdem es über Nacht stehengelassen worden war, filtriert und eingedampft. Der Destillationsrückstand wurde in Methylenchlorid gelöst, mit einer 5%-igen Natriumbicarbonatlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und dann eingedampft. Der Destillationsrückstand (R~~Wert « 0,53 bis

■χ I

0,58) wurde in 10 cht Trifluoressigsäure gelöst und 50 Minuten lang bei Zimmertemperatur stehengelassen und dann zur Trockne eingedampft. Der Rückstand (R_f-Wert » 0,50 bis 0,60) wurde unter Vakuum über Kaliumhydroxyd getrocknet. Das so gewonnene Produkt wurde in 30 bis 40 cnr eines Gemisches von Chloroform und n-Butanol im Volumverhältnis von 3 ' 1 und 5 bis Wasser gelöst. Die wäßrige Phase wurde mit festem Natriumbicarbonat neutralisiert, mit dem genannten Gemisch aus Chloroform und n-Butanol extrahiert, dann wurden die vereinigten organischen Phasen but Trockne

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eingedampft und der Rückstand wurde mit n-Heptan verrieben. So wurden als Produkt 1,25 g L-Tyrosyl-D- -methionyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolinamid erhalten.

Aminosäureanalyse:

L-Prolin » 1,0,

Glykokoll = 1,0,

D-Methionin » 1,0,

L-Tyrosin * 0,98 und

L-Phenylalanin - 1 (Bezugsbasie).

Beispiel 11

L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L-phenylalanyl-L-prolinamid

Es wurden 2,06 g (3 Millimol) wie in der 3. Stufe des Beispieles 5 erhaltenes N-Benzyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D-alenyl-glycyl-L-phenylälanyl-L-prolin in 5 cm Dimethylformamid gelöst, und es wurden 0,46 g (3 Millimol) des Ammoniumsalzes von 1-Hydroxybenztriazol sowie 0,62 g (3 Millimol) Dicyclohexylcarbodiimid zugesetzt. Das lieaktionsgemisch wurde über Nacht stehengelassen und dann wurde es filtriert und eingedampft. Der Destillationsrückstand wurde in Methylenchlorid gelöst, mit einer 5#-igen Na tr iumhicarbcnatlöaung gewaschen, über Natriumsulfat

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•Μ

-JW -

getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Destillationsrückstand (R^-Wert » 0,60 bis 0,65) wurde in 40 bis 50 cm Methanol gelöst und in Gegenwart von Palladium als Katalysator hydriert. Am Ende der Reaktion (R^-Wert - 0,33 bis 0,38) wurde der Katalysator abfiltriert, die Lösung zur Trockne eingedampft und der Rückstand mit Äther verrieben. So wurden als Produkt 1,2 g (70% der Theorie) L-Tyrosyl-D-alanyl-glycyl-L- -phenylalanyl-L-prolinamid erhalten.

Aminosäureanalyse:

L-Prolin	1,0,
Glykokoll	1,0,
D-Alanin -	1,0,
L-Tyrosin »	0,97
L-Phenylalanin ■	1 (Bezugsbasis).

und

Patentansprüche

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Claims

Patentansprüche

^t-v-ι* ■ L^-i (; j. -^v ^!' ^:!Λ : '.'.!!iah ) Pentapeptide\der allgemeinen Formel *.

Tyr - A - GIy -Phe -B-X-Y I , worin

A für einen D-Aminosäurerest mit einer, gegebenenfalls verzweigten, niederen Alkylseitenkette oder einer, gegebenenfalls S-methylsubstituierten, niederen Thioalkylseitenkette steht,

B einen Aminosäurerest mit einer, gegebenenfalls verzweigten, niederen Alkylseitenkette oder einen cyclischen Iminosäurerest, gegebenenfalls mit einer niederen Alkylseitenkette, bedeutet,

X Sauerstoff oder eine Gruppe der Formel - N - H darstellt,

Y für Wasserstoff oder einen niederen Alkylrest steht,

Tyr einen Rest von L-Tyrosin bedeutet,

GIy einen Rest von Glykokoll darstellt und

Phe für einen Rest von L-Phenylalanin steht,

sowie ihre eaer Amidderivate, und Salze.

8098

nachtrug!!*: 12/0743 ^L ■ ^^'^
2.) Pentapeptide nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Alkylseitenkette beziehungsweise Thioalkylseitenkette des D-Aminosäurerestes, für den A steht, eine solche mit 1 bis 3» insbesondere 1 oder 3, Kohlenstoffatomen ist.
3·) Pentapeptide nach Anspruch 1 oder 2, dedurch gekennzeichnet, daß der D-Aminosäurerest, für den A steht, ein D-Alanyl-, D-Methionyl- oder D-Norleu-Cylrest ist.
4.) Pentapeptide nach Anspruch 1 bis 3» dadurch gekennzeichnet, daß die Alkylseitenkette des Aminosäurerestes, für den B stehen kann, eine solche mit 3 oder 4, insbesondere 4, Kohlenstoffatomen ist,
5·) Pentapeptide nach Anspruch 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß der Aminosäurerest, für den B stehen kann, ein Rest von L-Norleucin oder L-Ieoleucin ist.
6.) Pentapeptide nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß der cyclische Iminosäurerest, für den B stehen kann, einen 5- oder 6-gliedrigen, insbesondere 5-gliedrigenj Ring aufweist.
7.) Pentapeptide nach Anspruch 1 bis 3 oder 6, dadurch gekennzeichnet, daß der cyclische Iminosäurerest, für den B stehen kann, ein Rest von L-Prolin ist.
8.) Pentapeptide nach Anspruch 1 bis 7» dadurch ge-

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kennzeichnet, daß der niedere Alkylrest, für den Y stellen kann, ein solcher mit 1 oder 2 Kohlenstoffatomen, insbesondere ein Methylreet, ist.
9·) Pentapeptide nach Anspruch 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß die Amidderivate solche, welche am Amidstickstoffatom nicht substituiert oder durch 1 oder 2 niedere Alkylreste^ insbesondere mit 1 oder 2 Kohlenstoffatomen, ganz besondere einen Äthylrest, substituiert sind, sind.
10.) Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehelt an 1 oder mehr Verbindungen nach Anspruch 1 bis als Wirkstoff beziehungsweise Wirkstoffen, zweckmäßigerweise zusammen mit üblichen pharmazeutischen Konfektionierungsmitteln.
11.) Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1 bis 9» dadurch gekennzeichnet, daß man in in der Peptidchemie an sich bekannter Weise eine Aminosäure mit einer niederen Alkylseitenkette oder cyclische Iminosäure, gegebenenfalls mit einer niederen Alkylsettenkette, oder ein Ester- oder Amidderivat einer solchen mit der nachfolgend einzubauenden an ihrem endständigen Stickstoffatom eine abspaltbare Schutzgruppe aufweisenden Aminosäure und/oder dem nachfolgend einzubauenden an seinem endständigen Stickstoffatom eine abspaltbare Schutzgruppe aufweisenden Peptidfragment beziehungsweise einem Esterderivat desselben kon-

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deneiert und gegebenenfalls ait dem erhaltenen am endständigen Stickstoffatom geschützten Peptidzwischenprodukt und dem beziehungsweise den durch etwaige weitere derartige Kondensationen erhaltenen am endständigen Stickstoffatom geschützten weiteren FeptidzwiechenproduktCen) nach in an sich bekannter Weise erfolgendem Entfernen der Schutzgruppe des endständigen Stickstoffatomes eine weitere beziehungsweise weitere EbnäensatLcnCen.) mit beziehungsweise jeweils mit der nachfolgend einzubauenden an ihrem endstän*- digen Stickstoffatom eine abspaltbare Schutzgruppe aufweisenden Aminosäure und/oder dem nachfolgend einzubauenden an seinem endständigen Stickstoffatom eine abspaltbare Schutzgruppe aufweisenden Peptidfragment beziehungsweise einem Esterderivat desselben vornimmt, wobei man so viele Kondensationen durchführt, wie es zum Einbau aller gewünschten Aminosäureeinheiten erforderlich ist, sowie danach in an sich bekannter Weise, gegebenenfalls nach in an sich bekannter Weise erfolgendem überführen des am endständigen Stickstoffatom geschützten Peptidzwischenproduktes in ein Ester- oder Amidderivat, die Schutsgruppe des endständigen Stickstoffatomes entfernt, worauf man gegebenenfalls in en eich bekannter Weise das erhaltene Pentapeptid in ein SaIs überführt.

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