DE2735480C2 - A method for selectively inactivating the proteolytic enzyme activity in a bacterial α-amylase enzyme preparation, a bacterial α-amylase preparation made therefrom and its use for the manufacture of a starch hydrolyzate - Google Patents

Description

B) Bacillus licheniformis-a-AinylasepräparatenB) Bacillus licheniformis a-ainylase preparations

a) ein wasserlösliches Kalziumsalz in das Präparat einführt, Ia) introduces a water-soluble calcium salt into the preparation, I

b) die dabei erhaltene Mischung auf eine Temperatur innerhalb des Bereiches von 70 bis 90⁰C erhitzt undb) the mixture obtained in this way is heated to a temperature within the range from 70 to 90 ^° C. and

c) die Temperatur für einen solchen Zeitraum aufrechterhält, der ausreicht, um das Verhältnis vonc) maintains the temperature for a period of time sufficient to achieve the ratio of

proteolytischer Enzymaktivität (U/g) zu amylolytischer Enzymaktivität (U/g) auf weniger als 2 ein- j|proteolytic enzyme activity (U / g) to amylolytic enzyme activity (U / g) to less than 2 one j |

zustellen.to deliver.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man bei Bacillus subtilis-ar-Amylasepräparaten die Temperatur 30 bis 90 Minuten aufrechterhält.2. The method according to claim 1, characterized in that one in Bacillus subtilis-ar-amylase preparations maintain the temperature for 30 to 90 minutes.

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man bei Bacillus subtilis-cr-Amylasepräparaten den Maissirup in einer Menge von 0,5 bis 2,0 Teilen pro Volumenteil Enzympräparat einsetzt.3. The method according to claim 1, characterized in that one in Bacillus subtilis-cr-amylase preparations uses the corn syrup in an amount of 0.5 to 2.0 parts per part by volume of the enzyme preparation.

4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man bei Bacillus licheniformis-a-Amylasepräparaten das wasserlösliche Kalziumsalz in einer Menge einsetzt, die eine Kalziumionen-Gssamtkonzentration von 0,5 bis 1,5%, bezogen auf das trockene Material, ergibt.4. The method according to claim 1, characterized in that one in Bacillus licheniformis-a-amylase preparations employs the water-soluble calcium salt in an amount which has a total calcium ion concentration from 0.5 to 1.5%, based on the dry material.

5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß man die Temperatur 30 Minuten bis 3 Stunden lang aufrechterhält.5. The method according to claim 4, characterized in that the temperature is 30 minutes to 3 hours long lasting.

6. Bakterielles σ-AmyIasepräparat, hergestellt nach einem der Ansprüche 1 bis 5.6. Bacterial σ-AmyIase preparation, produced according to one of claims 1 to 5.

7. Bakterielles a-Amylasepräparat nach Anspruch 6 mit einem Verhältnis von proteolytischer Enzymaktivität (U/g) zu amylolytischer Enzymaktivität (U/g) von weniger als 0,8.7. A bacterial α-amylase preparation according to claim 6 having a ratio of proteolytic enzyme activity (U / g) to amylolytic enzyme activity (U / g) of less than 0.8.

8. Verwendung des a-Amylasepraparates nach Anspruch 6 oder 7 zur Herstellung eines Stärkehydrolysats.8. Use of the α-amylase preparation according to claim 6 or 7 for the production of a starch hydrolyzate.

Die ß-Amylase ist ein Enzym, das zur Verflüssigung von Stärken durch Aufspaltung derselben in eine Vielzahl von Bruchstücken niedrigeren Molekulargewichten verwendet wird, aus denen Dextrose, Lävulose, Maltose oder Maissirupe mit einem hohen Dextroseäquivalent (D. E.) hergestellt werden können, wobei zu diesem Zweck weitere Enzyme, wie Glucoamylase^-Amylase und Glucoseisomerase, zugesetzt werden können. Der Zusatz dieser zusätzlichen Enzyme kann auch gleichzeitig mit der a-Amylase erfolgen.The ß-amylase is an enzyme which liquefies starches by splitting them into a multitude of fragments of lower molecular weights, making up dextrose, levulose, maltose or corn syrups with a high dextrose equivalent (D.E.) can be made to this Purpose further enzymes such as glucoamylase ^ -amylase and glucose isomerase can be added. Of the These additional enzymes can also be added at the same time as the α-amylase.

Die ff-Amylase kann aus einer Vielzahl von Ausgangsmaterialien hergestellt werden; in zweckmäßiger Weise wird sie von Bakterien gebildet, wie Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis oder dergleichen, die in großen Behältern kultiviert werden, worauf die Zellen zerstört werden und das Enzym von der Kulturbrühe abgetrennt und gereinigt wird. Die gereinigte a-Amylase enthält jedoch noch bestimmte Verunreinigungen, deren Entfernung schwierig und kostspielig ist. Eine dieser Verunreinigungen wird als Protease oder proteolytisches Enzym bezeichnet Dieses biologische aktive Material kann mit verstniedenen, in Stärke vorhandenen proteinhaltigcn Materialien unter Bildung von Hydrolysaten reagieren, welche Peptide, Polypeptide und Aminosäuren enthalten.
Das Vorliegen von Protease in a-Amylase ist bei der Hydrolyse von Stärke-enthaitenden Materialien nachtci-Iig. Die verschiedenen Stärken enthalten verschiedene Mengen an proteinhaltigen Materialien; beispielsweise kann eine gereinigte Maisstärke nur 0.3% Protein enthalten, ein trockenes gemahlenes Produkt, wie Maisgnes, kann einen Gehalt von bis zu 8 oder 10% aufweisen, und ungereinigte Stärken, die als Mühlenstärken bezeichnet werden, können bis zu 20% proteinhaltige Materialien enthalten. Wird die Stärke unter Verwendung von a-Amylase hydrolysiert, dann bedingt die Proteaseaktivität eine Aufspaltung des Proteinmaterials, das gleichzeitig mit der Starke hydrolisiert wird. Dies wiederum bedingt einen Verlust an wirtschaftlich wertvollen Proteinprodukten. Außerdem müssen derartige unerwünschte Nebenprodukte aus dem Endprodukt, beispielsweise einem Süßungsmittel, entfernt werden, wodurch zusätzliche Kosten entstehen. |The ff-amylase can be prepared from a variety of starting materials; it is conveniently formed by bacteria such as Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis or the like, which are cultivated in large containers, whereupon the cells are destroyed and the enzyme is separated from the culture broth and purified. However, the purified α-amylase still contains certain impurities which are difficult and costly to remove. One of these impurities is called a protease or proteolytic enzyme. This biologically active material can react with various proteinaceous materials present in starch to form hydrolysates which contain peptides, polypeptides and amino acids.
The presence of protease in α-amylase is negligible in the hydrolysis of starch-containing materials. The different starches contain different amounts of proteinaceous materials; For example, a purified corn starch can contain only 0.3% protein, a dry milled product such as corn gnes can contain up to 8 or 10%, and unpurified starches, referred to as mill starches, can contain up to 20% proteinaceous materials. If the starch is hydrolyzed using α- amylase, then the protease activity causes a breakdown of the protein material, which is hydrolyzed at the same time as the starch. This in turn causes a loss of economically valuable protein products. In addition, such undesirable by-products must be removed from the end product, for example a sweetener, which creates additional costs. |

Aus wirtschaftlichen Gründen will man zur Herstellung von Stärkehydrolysaten möglichst billige Ausgangs- ί For economic reasons, one wants the cheapest possible starting ί for the production of starch hydrolysates

materialien verwenden. Daher ist eine Mühlenstärke, aus der nur die Fasern und Keimlinge entfernt worden i use materials. Therefore, a mill strength from which only the fibers and seedlings have been removed i

sind, gegenüber einer gereinigten Stärke, die einen niedrigen Proteingehalt aufweist, bevorzugt. Bei der Verwendung einer or-Amylase, die beträchtliche Menge an Proteaseaktivität aufweist, ist es erforderlich, verhältnismäßig kostspielige gereinigte Stärken wegen ihrer niedrigen Proteingehalte zu verwenden. Der Einsatz von σ-Amy- | läse, die eine erhebliche Proteaseaktivität aufweist, zur Verflüssigung von wenig gereinigten Stärken fuhrt /.urare preferred over a purified starch that is low in protein. When using an or-amylase which has a considerable amount of protease activity is required, proportionately to use expensive purified starches because of their low protein content. The use of σ-Amy- | Lässe, which has considerable protease activity, leads to the liquefaction of poorly purified starches /.ur

Bildung von überschüssigen Proteinhydrolysate^ welche die nachfolgende Verwendung und Umwandlung des Stärkehydrolysate stören.Formation of excess protein hydrolysates ^ which the subsequent use and conversion of the Interfere with starch hydrolysates.

Ist die p-Amylase im wesentlichen frei von proteolytischer Enzymaktivität, dann werden die in der Stärke enthaltenen Proteine nur in einem unmerklichen Ausmaße hydrolysiert und bleiben in dem unlöslichen Material zurück und können wieder zurückgewonnen werden.If the p-amylase is essentially free of proteolytic enzyme activity, then those contained in the starch are Proteins are only hydrolyzed to an imperceptible extent and remain in the insoluble material back and can be regained.

Es ist nicht notwendig, die gesamte proteolytische Aktivität in der c-Amylase zu entfernen oder zu inaktivieren, vorzugsweise soll jedoch diese Aktivität auf möglichst niedrige Werle herabgesetzt werden. Es hat sich herausgestellt, daß dann, wenn das Verhältnis von proteolytischer Enzymaktivität (U/g) zu arnylolytischer Enzyniaktivität (U/g), das heißt das P/a-Verhältnis, weniger als 2 beträgt, ein für die Zwecke der vorliegenden Erfindung geeignetes Enzym vorliegt. In besonders bevorzugter Weise sollte dieses Verhältnis weniger als 0,8 betragen. Unter dem im vorliegenden Falle verwendetem Begriff »von Protease freie ar-Amylase« ist eine σ-AmyIase zu verstehen, in der dieses Verhältnis weniger als 2 beträgtIt is not necessary to remove or inactivate all of the proteolytic activity in the c-amylase, however, this activity should preferably be reduced to the lowest possible level. It turned out that if the ratio of proteolytic enzyme activity (U / g) to amylolytic enzyme activity (U / g), i.e. the P / a ratio, is less than 2, one for the purposes of the present invention suitable enzyme is present. In a particularly preferred manner, this ratio should be less than 0.8. The term "ar-amylase free of protease" used in the present case is a σ-amylase in which this ratio is less than 2

Es gibt bereits einige Verfahren zu Entfernung, Herabsetzung und Inaktivierung von proteolytischen cder ! anderen Enzymverunreinigungen in c-Amylase sowie andere η Enzymen. So wird beispielsweise in der US-PSSeveral methods of removal, degradation and inactivation of proteolytic cder already exist ! other enzyme impurities in c-amylase as well as other η enzymes. For example, in the US-PS

32 49 512 die Inaktivierung von Verflüssigungsenzymen in einem Amyloglucosidase-Präparat durch Erhitzen auf etwa 100⁰C beschrieben. Die US-PS 26 83 682 beschreibt die differenzielle Inaktivierung von ff-Amylase- und Proteasemischungen durch Einstellung des pH-Wertes der Mischung und Erhitzen, um eines der Enzyme selektiv zu inaktivieren. Die US-PS 39 12 590 lehrt, daß die Protease in einer von Bacillus licheniformis stammendes a-Amyia je während der Stärkeverflüssigung inaktiviert werden kann, wenn man mindestens den ersten Teil des Verfahrens bei einer Temperatur von 100 bis 115°C durchführt. Die US-PS ?-i 03 102 beschreibt die Vcr-Wendung eines Stärkehydroylsats zum Abpuffern eines Pilz-Amylase-Präparats gegenüber einer Inaktivierung bei der Säureinaktivierung von Transglucosidase.32 49 512, the inactivation of liquefaction enzymes in an amyloglucosidase preparation described by heating to about 100 ⁰ C. US Pat. No. 2,683,682 describes the differential inactivation of ff-amylase and protease mixtures by adjusting the pH of the mixture and heating in order to selectively inactivate one of the enzymes. US Pat. No. 3,912,590 teaches that the protease in an α-Amyia derived from Bacillus licheniformis can be inactivated during starch liquefaction if at least the first part of the process is carried out at a temperature of 100 to 115.degree. The US-PS ? -I 03 102 describes the Vcr-use of a starch hydrolyzate for the buffering of a fungal amylase preparation against inactivation during the acid inactivation of transglucosidase.

Die Erfindung hat sich die Aufgabe gestellt, ein gegenüber den bekannten Verfahren noch wirksameres Verfahren zur selektiven Inaktivierung der proteolytischen Enzymaktivität in einem bakteriellen a-Amylaseenzym-Präparat zu schaffen.The invention has set itself the task of providing a method that is even more effective than the known methods for the selective inactivation of the proteolytic enzyme activity in a bacterial α-amylase enzyme preparation to accomplish.

Diese Aufgabe wird durch ein Verfahren gemäß dem Patentanspruch 1 bzw. duiih ein bei diesem Verfahren erhaltenes bakterielles e-Amylasepräparat gemäß Patentanspruch ό gelöst.This object is achieved by a method according to patent claim 1 or a duiih in this method obtained bacterial e-amylase preparation according to claim ό solved.

Die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten a-Amylaseenzym-Präparate eignen sich für die Herstellung von Stärkehydrolysaten aus den verschiedensten stärkehaltigen Materialien, die beispielsweise aus Mais, Weizen, Re-, Kartoffeln und Getreide stammen können. Es können auch wachsartige Materialien eingesetzt werden.The α-amylase enzyme preparations produced by the process according to the invention are suitable for Production of starch hydrolysates from a wide variety of starchy materials, for example from Corn, wheat, re, potatoes and grain can come from. Waxy materials can also be used will.

Bei dem stärkehaltigen Materiai kann es sich um teilweise gereinigte Materialien, das heißt um trockene Materialien, wie beispielsweise Mahgrieß, Maisabfälle, Maismehl, Weizenmehl oder dergleichen, oder um nasse Produkte, wie beispielsweise Mühlenstärke, oder um gereinigte Produkte, aus denen ein Teil des Glutens entfernt worden ist, handeln Der Regriff »Mühlenstärke« umfaßt sowohl irgendeine teilweise gereinigte Starkeaufschlämmung, aus der nur die Fasern und Keimlinge entfernt worden sind, als auch gereinigte Materialien, die weniger als etwa 0,3% proteinhaltige Materialien enthalten. Unter dem Begriff »leichte Mühlenstärke« ist die Stärkeaufschlämmung zu verstehen, die in den Fasern- und Keimlingseparatoren anfällt, während unter »schwere Mühlenstärke« ein ähnliches Material fällt, aus dem ein Teil des Wassers entfernt worden ist. Es können auch reine Stärken verwendet werden.The starchy material can be partially cleaned, i.e. dry Materials such as groats, corn scraps, corn flour, wheat flour or the like, or around wet products, such as mill starch, or cleaned products that make up some of the gluten has been removed, act The rule "mill starch" includes any partially purified starch slurry, from which only the fibers and seedlings have been removed, as well as cleaned materials, which contain less than about 0.3% proteinaceous materials. Under the term "light mill strength" is to understand the starch slurry that accumulates in the fiber and seedling separators while under "Heavy mill strength" falls a similar material from which some of the water has been removed. It can pure starches can also be used.

Die an Protease freien tr-Amylasen gemäß vorliegende Erfindung eignen sich zur Herstellung von Stärkehydrolysaten nach üblichen Verfahren und sind besonders geeignet für die Verwendung zur Durchführung von Verfahren, bei denen die zurückbleibende, nicht umgewandelte Stärke in ihrer körnigen Form verbleibt. Derartige Verfahren werden in den US-Patentschriften 39 22 196, 39 22 197, 39 22 198, 39 22 199, 39 22 200 und 39 22 201 beschrieben.The protease-free tr-amylases according to the present invention are suitable for the production of starch hydrolysates according to conventional methods and are particularly suitable for use to carry out Processes in which the remaining, unconverted starch remains in its granular form. Such Methods are in US Patents 39 22 196, 39 22 197, 39 22 198, 39 22 199, 39 22 200 and 39 22 201.

Bei den Verfahren unter Einsatz einer körnigen Stärke wird mindestens die ^nfangssolubilisierung des stärkehaltigen Materials bei einer verhältnismäßig niedrigen Temperatur, das heißt unterhalb der jeweiligen Gelatinisierungstemperatur der in dem Stärkematerial enthaltenen jeweiligen Stärke, durchgeführt. Bei diesen Temperaturen stellt die Proteaseaktivität ein besonderes Problem dar, da sie nicht bis zu einem wesentlichem Grade inaktiviert wird. Bei der Anwendung von herkömmlichen Verfahren, bei deren Durchführung höhere Temperatüren angewendet werden, werden die proteolytischen Enzyme ·· ährend der Verwendung bis zu einem gewissen Grade inaktiviert.In the case of the method using a granular starch, at least the initial solubilization of the starch-containing Material at a relatively low temperature, i.e. below the respective gelatinization temperature the respective starch contained in the starch material. At these temperatures protease activity poses a particular problem because it is not to a substantial degree is inactivated. When using conventional methods, when carrying out higher temperatures are applied, the proteolytic enzymes ·· during use to a certain extent Grade inactivated.

Unter der Inaktivierung der proteolytischen Enzymaktivierung ist erfindungsgemäß die Herabsetzung der definierten Aktivität des Proteaseenzyms auf'ein Verhältnis zu verstehen, das unterhalb des oben angegebenen Verhältnisses liegt. Die a-Amylaseaktivität des Enzympräparats wird nach dem in der US-PS 39 22 199 beschriebcnen Verfuhren bestimmt. Die Einheit der Proteaseenzymaktivität wird definiert als die Enzymmenge, die in Trichloressigsüure lösliche Bruchstücke bildet, welche bei den nachfolgend angegebenen Teuverfahren eine blaue 1 arbe entsprechend 0,5 ug Tyrosin ergeben.According to the invention, the inactivation of the proteolytic enzyme activation is the reduction of the defined activity of the protease enzyme to understand a ratio below that given above Relationship lies. The α-amylase activity of the enzyme preparation is described in accordance with US Pat. No. 3,922,199 Seduction determined. The unit of protease enzyme activity is defined as the amount of enzyme contained in Trichloroacetic acid forms soluble fragments, which in the following processes a blue 1 color corresponding to 0.5 µg tyrosine.

[■ine Standurd-Caseinlösung wird hergestellt durch Auflösen von 2,00 g Casein in 20,0 ml 1,OnNaOH. Es werden 50 ml Wasser zugegeben und der pH-Wert wird mit verdünnter Phosphorsäure (1 Teil 85%ige Säure auf 3 Teile Wasser, bezogen auf das Volumen) aufC,J eingestellt. Es wird Wasser zum Auffüllen auf 100 ml zugegeben. Eine Tyrosinvorratslösung wird hergestellt durch Auflösen von 250,0 mg 1-Tyrosin in 0,2 η HCl zur Herstellung von 500 ml Lösung. Diese Lösung enthält pro ml 500 μg Tyrosin. Eine Folin-Phenol-Reagenslösung wird hergestellt durch Verdünnen von 100 ml Phenolreagens (2 η Folin und Ciocalteau) mit 300 ml Wasser. Eine Standardkurve wird wie folgt hergestellt: 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0 und 6,0 ml der Tyrosin-Vorratslösung werden in jeden von sechs 50 ml-Meßkolben einpipcttierl und mit 0,2 η HCI bis zur Markierung verdünnt. Die dabei erhaltenen Lösungen enthalten 10,20,30,40, 50 und 60 |*g Tyrosin/ml. 3,0 ml jeder Lösung werden in ein 25 X 150 mm-Testrohreinpipettiert. Es wird eineA Standard Casein solution is prepared by dissolving 2.00 g of casein in 20.0 ml of 1, OnNaOH. It will 50 ml of water are added and the pH is adjusted with dilute phosphoric acid (1 part 85% acid 3 parts of water, based on the volume) set to C, J. Water is added to make up to 100 ml. A tyrosine stock solution is prepared by dissolving 250.0 mg of 1-tyrosine in 0.2 η HCl for preparation of 500 ml of solution. This solution contains 500 μg tyrosine per ml. A Folin Phenol reagent solution will prepared by diluting 100 ml of phenol reagent (2 η Folin and Ciocalteau) with 300 ml of water. A standard curve is prepared as follows: 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 and 6.0 ml of the tyrosine stock solution are pipetted into each of six 50 ml volumetric flasks and diluted to the mark with 0.2 η HCl. The resulting solutions contain 10, 20, 30, 40, 50 and 60 | * g tyrosine / ml. 3.0 ml of each solution is pipetted into a 25 X 150 mm test tube. It will be a

Blindptobe hergestellt, die 3,0 ml 0,2n HCl enthält. In jedes Testrohr werden 15,0 ml 0,4 M Na,CO, und 3,0 ml Folin-Phenol-Reagens einpipettiert und mit einem WIrbelmischcr durchgemischt. Das Ganze wird 20 Minuten lang in ein Wasserbad von 37 °C gestellt, um die Farbe zu entwickeln. Dann wird die Extinktion jeder Probe im Verhältnis zu destilliertem Wasser in einer 1 cm-Cuvette bei 660 nm bestimmt. Die Extinktion der Blindprobe wird von der Extinktion jeder Probe abgezogen und die korrigierte Extinktion wird gegen die Tyrosinmenge in ug/ml aufgetragen. Die Extinktionswerte sollten innerhalb des Bereiches von 0,10 bis 0,60 liegen.Prepare a blank sample containing 3.0 ml 0.2N HCl. 15.0 ml of 0.4 M Na, CO, and 3.0 ml Folin phenol reagent was pipetted in and mixed with a vortex mixer. The whole thing will be 20 minutes placed in a 37 ° C water bath for a long time to develop color. Then the absorbance of each sample is im The ratio to distilled water was determined in a 1 cm cuvette at 660 nm. The absorbance of the blank is subtracted from the absorbance of each sample and the corrected absorbance is plotted against the amount of tyrosine in µg / ml applied. The absorbance values should be within the range of 0.10 to 0.60.

Es wird das folgende Protease-Testverfahren durchgeführt: Durch Zugabe einer bekannten Gewichtsmenge des Enzympräparats zu einem 500 ml-Meßkolben und Verdünnen mit einer 0,1 gew./vol.%igen Calciumacetatlösung bis zur Markierung wird eine Enzymlösung hergestellt, die 20 bis 100 U/ml Protease enthält. 1,0 ml Enzymlösung werden in jede von zwei 15 ml-Zentrifugenröhrchen in einem Wasserbad bei einer konstanten Temperatur von 37 °C (ein Röhrchen wird für die Probe, das andere für eine Blindprobe verwendet) einpipettiert. Man läßt 5 Minuten lang äquilibrieren. Unter Verwendung von Ausblas-Pipetten gibt man 1,0 ml einer Caseinlösung zu der Probe und 2,0 ml 0,4 M Trichloressigsäure zu der Blindprobe zu und mischt unter Verwendung eines Wirbelmischers. Nach einer Reaktionszeit von genau 10 Minuten pipettiert man 2,0 ml 0,4 M Trichloressigsäure in die Probe und i,0 ml Caseinlösung in die Blindprobe.The following protease test procedure is performed: By adding a known amount by weight the enzyme preparation to a 500 ml volumetric flask and dilute with a 0.1% w / v calcium acetate solution An enzyme solution containing 20 to 100 U / ml protease is prepared up to the mark. 1.0 ml Enzyme solution is poured into each of two 15 ml centrifuge tubes in a water bath at a constant A temperature of 37 ° C (one tube is used for the sample, the other for a blank sample) with a pipette. Allow to equilibrate for 5 minutes. Using blow-out pipettes, add 1.0 ml of a Add casein solution to the sample and 2.0 ml of 0.4 M trichloroacetic acid to the blank and mix using a vortex mixer. After a reaction time of exactly 10 minutes, 2.0 ml of 0.4 M trichloroacetic acid are pipetted in the sample and 1.0 ml of casein solution in the blank.

Man mischt jede Probe wie oben angegeben und setzt die Inkubation weitere 20 Minuten lang bei 37°C fort. Nach dem Herausnehmen der Proben aus dem Bad wird sofort 10 Minuten lang bei 2000 UpM zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit wird in ein 25 x 150 mm-Testrohr dekantiert und gründlich durchgemischt. 2,0 ml jeder überstehenden Flüssigkeit werden in ein 25 x 150 mm-Testrohr einpipettiert. In jedes Testrohr werden 10.0 ml 0.4 M Na_:CO: und 2.0 m; Folin-Phenol-Reagens einpipettiert und gemischt. Die Tea*, ohrchen werden in ein Wasserbad von 37°C gestellt und gevau 20 Minuten lang inkubien, um die Farbe zu entwickeln. Es wird die Extinktion in bezug auf destilliertes Wasser in einer 1 cm-Cuvette bei 660 nm bestimmt. Nach dem Abziehen der Extinktion der Blindprobe von der Extinktion der Probe erhält man die Nettoextinktion und aus dt'r Standardkurve bestimmt man die scheinbare Tyrosinkonzentration. Die Proteaseaktivität wird dann wie folgt berechnet: Proteaseakiivität (U/g) = scheinbare Tyrosinkon^cntration (pg/m\) χ 2 x 2 (Verdünnungsfaktor). Die gemäß der Ausführungsform A) eingesetzten Bacillus suptilis-a-Amylase-Präparate sind beispielsweise unter den Warenzeichen Rapidase und Tenase erhältlich. Der in das Präparat eingeführte Maissirup mit einem D. E. von bis zu 50 ist beispielsweise ein hydrolysiertes festes Getreideprodukt mit einem D. E. von 9 bis 1 !,beispielsweise ein Maltodextrin, oder ein Maissirup mit einem D. E. von 42. Dieser Maissirup vermindert, wenn er in einem Volumenverhältnis von Sirup zu Enzym innerhalb des Bereiches von etwa 2 :1 bis etwa 1:2 vorliegt, die Geschwindigkeit der Wärmeinaktivierung der j-Amylaseaktivität beträchtlich. Das Volumenverhältnis ist vorgegeben bei Verwendung eines Sirups mit 30% Trockensubstanz mit dem Enzympräparat. Da im Handel erhältliche Enzympräparate im allgemeinen etwa 30% Trockensubstanz aufweisen, sind die Volumenverhältnisse im wesentlichen die gleichen wie die Gewichtsverhältnisse, bezogen auf die Trockensubstanz. Eine bevorzugte Menge des Sirups beträgt etwa 70%, bezogen auf die Trockensubstanz.Mix each sample as indicated above and continue incubation for an additional 20 minutes at 37 ° C. After removing the samples from the bath, centrifugation is carried out immediately for 10 minutes at 2000 rpm. The supernatant liquid is decanted into a 25 x 150 mm test tube and mixed thoroughly. 2.0 ml of each supernatant liquid is pipetted into a 25 x 150 mm test tube. 10.0 ml of 0.4 M Na _: CO: and 2.0 m; Folin phenol reagent pipetted in and mixed. The tea ears are placed in a 37 ° C water bath and incubated for 20 minutes to develop the color. The extinction in relation to distilled water is determined in a 1 cm cuvette at 660 nm. After subtracting the extinction of the blank sample from the extinction of the sample, the net absorbance is obtained and the apparent tyrosine concentration is determined from the standard curve. The protease activity is then calculated as follows: Protease activity (U / g) = apparent tyrosine concentration (pg / m2) χ 2 x 2 (dilution factor). The Bacillus suptilis-α-amylase preparations used according to embodiment A) are available, for example, under the trademarks Rapidase and Tenase. The corn syrup with a DE of up to 50 introduced into the preparation is, for example, a hydrolyzed solid cereal product with a DE of 9 to 1!, For example a maltodextrin, or a corn syrup with a DE of 42. This corn syrup decreases when it is in a volume ratio from syrup to enzyme is within the range of about 2: 1 to about 1: 2, the rate of heat inactivation of the α-amylase activity is substantial. The volume ratio is given when using a syrup with 30% dry matter with the enzyme preparation. Since commercially available enzyme preparations generally have about 30% dry matter, the volume ratios are essentially the same as the weight ratios, based on the dry matter. A preferred amount of the syrup is about 70%, based on the dry substance.

Nach dem Einmischen des Sirups in das Präparat wird die Mischung auf eine Temperatur von 70 bis 90^uL erhitzt, wobei im allgemeinen eine Temperatur von 80⁰C bevorzugt wird. Die Erhitzungszeit beträgt im allgemeinen 15 bis 60 Minuten, kann jedoch bis zu 3 Stunden betragen. Beispielsweise ist bei WC eine Zeitspanne von 15 bis 30 Minuten ausreichend.After the mixing of the syrup in the preparation the mixture to a temperature of 70 is heated to 90 ^u L, preferably being generally a temperature of 80 ⁰ C. The heating time is generally 15 to 60 minutes, but can be up to 3 hours. For example, a period of 15 to 30 minutes is sufficient for a toilet.

Die Einführung des Maissirups mi? dem angegebenen Π. E. hat den Vorteil, daß praktisch keine Verunreinigungen eingeführt werden, die in späteren Stufen entfernt werden müssen.The introduction of the corn syrup mi? the specified Π. E. has the advantage that practically no impurities that will need to be removed in later stages.

Die gemäß der Ausführungsform B) eingesetzten licheniformis-ir-Amylase-Präparate stammen von Stämmen von Bacillus hcheniformis ab, wie in der GB-PS 12 96 839 beschrieben wird, und besitzen eine verhältnismäßig hohe Wärmebeständigkeit. Besonders geeignet sind diejenigen a-Amylase-Präparate, die unter dem Warenzcichen Thermarr.yl in den Handel gebracht werden. Bei dieser Ausführungsform werden im Gegensatz zu der Ausfühiungsform A) Kalziumionen als Schutzmaterial verwendet. Diese Ausführungsform ist besonders dann geeignet, wenn das c-Amylaseenzympräparat eine hohe Wärmebeständigkeit besitzt, was bei Bacillus licheniformis-a-Amylase-Praparaten der Fall ist Bei dieser Ausführungsfcrm muß die Gesamtmenge der in diesem System vorhanden*:.! Kalziumionen berücksichtigt werden, und zwar einschließlich derjenigen, die bereits in dem Rohpräparat enthalten sind. Da der Kalziumionengehalt von Charge zu Charge variiert, müssen die vorhandene:. Kalziumioner· bestimmt werden Dann wird wasserlösliches Kalziumsalz zugesetzt, um die Kalziuinionenkonzentration bis einen vorher testgelegten Wert zu bringen. Dabei ist wesentlich, daß die Gegenwart der Kalziumionen dazu ausreicht, die Proteaseaktivitut sowie die a-Amylaseaktivität zu schützen. Deshalb kann bei höheren Kalziumgehalten eine verhältnismäßig lange Wä>mebehandlunpsdauer erforderlich seir, um da_a Proteaseenzym praktisch vollständig zu inaktivierenThe licheniformis-ir-amylase preparations used according to embodiment B) are derived from strains of Bacillus hcheniformis, as described in GB-PS 12 96 839, and have a relatively high heat resistance. Those α-amylase preparations which are marketed under the trade mark Thermarr.yl are particularly suitable. In this embodiment, in contrast to embodiment A), calcium ions are used as protective material. This embodiment is particularly suitable when the c-amylase enzyme preparation has a high heat resistance, which is the case with Bacillus licheniformis-a-amylase preparations. Calcium ions are taken into account, including those already contained in the raw preparation. Since the calcium ion content varies from batch to batch, the existing ones must :. Calcium ions are then determined. Water-soluble calcium salt is then added to bring the calcium ion concentration up to a previously tested value. It is essential that the presence of the calcium ions is sufficient to protect the protease activity and the α-amylase activity. Therefore, at higher calcium levels may be a relatively long Wä> mebehandlunpsdauer required seir to as _a protease enzyme almost completely inactivate

Die Konzentration der Kalziumionen, die der a-Amylaseaktivität einen ausreichenden Schutz bietet, liegt innerhalb des Bereiches von 0,5 bis 1,5%, bezogen auf die Trockensubstanz. Die Konzentration beträgt vorzugsweise mindestens etwa 1,0''... bezogen aut die Trockensubstanz. Konzent ationen von 2,0% Kalziumionen oder mehr scheinen einen nachteiligen Einfluß zu haben. Im allgemeinen wird der Proteasegehalt in einer Bacillus licheniformis-ff-Amylase, beispielsweise in Thermamyl, um etwa 90% verringert, werm man das Enzym in der vorliegenden Form mit etwa l,0%Ca⁺⁺ nur60 Minuten lang bei 80⁰C Wärme behandelt. Dabei is't ein Verlustan a-Amylaseaktivität von nur 5% festzustellen.The concentration of calcium ions, which offers the α-amylase activity sufficient protection, is within the range from 0.5 to 1.5%, based on the dry substance. The concentration is preferably at least about 1.0 ″ ... based on the dry substance. Concentrations of 2.0% calcium ions or more appear to have an adverse effect. In general, the protease content in a Bacillus licheniformis-ff-amylase, for example in Thermamyl is approximately 90% decreased, werm to the enzyme in the present form having about l, 0% of Ca ⁺⁺ treated at 80 ⁰ C heat nur60 minutes . A loss of α-amylase activity of only 5% was found.

Die Temperaturbehandlung bei dieser zweiten Ausführungsform entspricht derjenigen der Ausführungsform A). The temperature treatment in this second embodiment corresponds to that of embodiment A).

Die nach einer der beiden Ausführungsformen hergestellten, von Protease befreiten a-Amylase-Präparatc können zur Herste&ang von Stärkehydrolysaten aus den verschiedensten Stärken mit hohem Proteingehalt, wie Mais. MiIo, Weizen oder dergleichen, verwendet werden. In Frage kommen sowohl trocken als auch naß gemahlene Produkte, wie Maisgrieß, verschiedene Sorten von Mühlenstärke, Weizenabfalle und dgl. Bei VerwendungThe protease-freed α-amylase preparations produced according to one of the two embodiments can be used to manufacture starch hydrolysates from a wide variety of starches with a high protein content, such as Corn. MiIo, wheat or the like can be used. Both dry and wet milled mills can be used Products such as corn grits, various types of mill starch, wheat waste and the like. When used

der ff-Amylase, deren Proteaseaktivität erfindungsgemäß inaktiviert worden ist, für die Hydrolyse der verschiedenen Stärkequellen ergibt Hydrolysate, die in ihrer Kohlehydratzusammensetzung äquivalent zu denjenigen sind, die aus Primärstärke hergestellt werden. Es ist auch möglich, ff-Amylase-Enzympräparate zu verwenden, die bereits frei von einer beträchtlichen Menge an proteolytischer Aktivität sind, wie z. B. das unter dem Warenzeichen Maxamyl LX 6000 vertriebene Präparat (das von Bacillus subtilis stammt). Zufriedenstellende Ergebnisse werden erzielt bei Anwendung sowohl der Hydrolyseverfahren, bei denen eine Galatinierung der Stärke vermieden wird, wie in den oben genannten Patentschriften beschrieben, als auch bei Anwendung der konventionellen Enzymhydrolyseverfahren. Zur Herstellung von Hydrolysaten aus den Stärkequellen wurden die folgenden Enzympräparate verwendet:the ff-amylase, the protease activity of which has been inactivated according to the invention, for the hydrolysis of the various Sources of starch yields hydrolysates that are equivalent to those in their carbohydrate composition that are made from primary starch. It is also possible to use ff-amylase enzyme preparations, which are already devoid of a significant amount of proteolytic activity, such as e.g. B. that under the trademark Maxamyl LX 6000 (derived from Bacillus subtilis). Satisfying results are achieved using both the hydrolysis process, in which a galatinization of the starch is avoided, as described in the above-mentioned patents, as well as when using the conventional Enzyme hydrolysis process. To prepare hydrolyzates from the starch sources, the following were used Enzyme preparations used:

I Thermamyl 60-σ-Amylase, Charche AN-1009 von Bacillus licheniformis. Die ursprüngliche Proteaseaktivität betrug 33 084 U/g und die a- Amy läse- Aktivität betrug 1006 U/g. Ein Volumenteil Enzym wurde mit zwei Volumenteilen eines Maissirups mit 30% Trockensubstanz (TS) und einem D. E. von42 verdünnt. Die Mischung wurde innerhalb von 30 min von Raumtemperatur auf 80⁰C erhitzt, 75 min lang bei 80⁰C gehalten unrl dann in einem Eisbad abgekühlt. Dies führte zu einer a^Amylaseaktivität von 323 U/g und einer Proteaseaktivität von 520 U/g.I Thermamyl 60 σ-amylase, Charche AN-1009 from Bacillus licheniformis. The initial protease activity was 33084 U / g, and the a-Amy läse- activity was 1,006 U / g. One volume of enzyme was diluted with two volumes of a corn syrup with 30% dry matter (DM) and a DE of 42. The mixture was heated within 30 min from room temperature to 80 ⁰ C, held for 75 minutes at 80 ⁰ C UNRL then cooled in an ice bath. This resulted in an a ^ amylase activity of 323 U / g and a protease activity of 520 U / g.

2. Maxamyl LX 6000-fl-Amylase von Bacillus subtilis mit einer ö-Amyiaseaktivität von 14 955 U/g. Dieses Enzym wies ein Protease/oAmylase-Verhältnis von wenißer als 1 auf und wurde so verwendet, wie es vorlag.2. Maxamyl LX 6000-fl amylase from Bacillus subtilis with an δ-amyase activity of 14,955 U / g. This Enzyme had a protease / o amylase ratio of less than 1 and was used as it was.

3. Glucoamylase von Aspergillus niger mit einer Aktivität von 284 Glucoamylase-U/g.3. Aspergillus niger glucoamylase with an activity of 284 glucoamylase-U / g.

Es wurden die folgenden Stärkequellen verwendet, wobei zufriedenstellende Ergebnisse erzielt wurden:The following sources of starch have been used with satisfactory results:

1. Maisgrieß: ein trocken gemahlenes Maisprodukt,1. Corn grits: a dry milled corn product,

2. Maisabfälle: die Feinteile aus dom Aussieben von Maiskernen,2. Maize waste: the fine parts from dom sieving of maize kernels,

3. Weizenkleie: ein trocken gemahlenes Weizenprodukt,3. Wheat bran: a dry milled wheat product,

4. leichte Mühlenstärke: ein von Keimlingen befreite Stärkeaufsdilämmung mit 10 bis 12% Protein,4. light mill starch: a starch dilution with 10 to 12% protein, freed from seedlings,

5. schwere Mühlenstärke: eine konzentrierte Aufschlämmung,5. heavy mill strength: a concentrated slurry,

6. zweiter Hydroclon-Ablauf: eine Mühlenstärkeaufschlämmung, in der das Protein auf etwa 1 bis etwa 1,5% herabgesetzt worden ist.6. Second hydroclone run: a mill starch slurry in which the protein is reduced to about 1 to about 1.5% has been lowered.

Die Stürkematerialien müssen vor der Einführung des ir-Amylase-Enzympräparats vorgewasc.hen werden, um lösliche Materialien, in erster Linie Asche und Protein, daraus zu entfernen. Vorzugsweise wird das Vorwaschen bei etwa Raumtemperatur durchgeführt, da bei höheren Temperaturen die Solubilisierung der proteinhaltigen und Kohlehydrat-Materialien erhöht werden kann. Bei Verwendung von trockengemahlenen Produkten, wie Maisgrieß oder Maiskleie, wird das Vorwaschen in der Weise durchgeführt, daß man 1 Gew.-Teil des Stärkematerials in zwei Gew.-T<.;len Wasser, das etwa 200 bis etwa 1000, vorzugsweise etwa 500 ppm SO₂ enthält, etwa 1/2 Stunde lang bei Raumtemperatur aufschlämmt. Die Aufschlämmung wird filtriert und mit mindestens |The starch materials must be prewashed prior to introducing the ir-amylase enzyme preparation to remove soluble materials, primarily ash and protein. Preferably, the pre-wash is carried out at about room temperature, since at higher temperatures the solubilization of the proteinaceous and carbohydrate materials can be increased. When using dry-milled products such as corn grits or corn bran, the pre-washing is carried out in such a way that 1 part by weight of the starch material is mixed with two parts by weight of water containing about 200 to about 1000, preferably about 500 Contains ppm SO ₂ , slurried for about 1/2 hour at room temperature. The slurry is filtered and filled with at least |

einem weiteren Gew.-Teil der SO₂-Lösung gewaschen. Bei Verwendung von naßgemahlenen Materialien, die in |washed another part by weight of the SO ₂ solution. When using wet-milled materials in |

Form einer Aufschlämmung vorliegen, die bereits SO₂ enthält, braucht diese nur filtriert und mit Wasser gewaschen zu werden. Alternativ können auch diese Materialien mit der SO₂-Lösung gewaschen werden. Das körnige Stärke-Enzym-Umwandlungsverfahren (GS-EHE) wird wie folgt durchgeführt:In the form of a slurry that already _{contains SO 2} , it only needs to be filtered and washed with water. Alternatively, these materials can also be _{washed with the SO 2} solution. The Granular Starch Enzyme Conversion Procedure (GS-EHE) is carried out as follows:

Der erhaltene Kuchen wird im Wasser abgeschlämmt bis zu einem FeststofTgehalt von 30% und wie folgt umgewandelt: man bringt die Aufschlämmung auf 60⁰C, gibt 50 ppm Ca⁺\ bezogen auf das Trockengewicht der Stärke, zu, stellt den pH-Wert ein und gibt 1 U P. I. (inaktivierte Protease) Thermamyl/g TS zu. Man erwärmt auf 75°C mit l°C/5 min bis zu 70⁰C und dann mit 1°C/15 min bis auf 75°C. Man stellt in ein Bad mit siedendem Wasser, laßt 15 min lang bei 75°C stehen, führt eine Wärmebehandlung bei 100⁰C durch und hält 15 min lang. Man kühlt auf 60⁰C ab, stellt den pH-Wert auf 4,3 ein und gibt 0,14 U Glucoamylase/g TS zu oder stellt den pH-Wert auf 5,5 ein und gibt 0,2% Malzextrakt zu. Man stellt alle Endhydrolysate vor dem Filtrieren auf einen pH-Wert von 4,3 ein. Die anfängliche pH-Werteinstellung sollte auf etwa 6,5 erfolgen, wenn naßgemahlene Materialien mit hohem Pro^ingehalt verwendet werden, und sie sollte auf etwa 5,5 erfolgen, wenn trockengemahlene Materialien oder Stärken verwendet werden, die von Proteinen befreit worden sind.The cake obtained is slurried in water up to a solids content of 30% and converted as follows: the slurry is brought to 60 ^° C., 50 ppm Ca ⁺ \ based on the dry weight of the starch are added, the pH is adjusted and adds 1 U PI (inactivated protease) Thermamyl / g TS. The mixture is heated to 75 ° C with l ° C / 5 min up to 70 ⁰ C and then 1 ° C / 15 min to 75 ° C. It is placed in a bath with boiling water, left to stand for 15 minutes at 75.degree. C., a heat treatment is carried out at ^100.degree. C. and held for 15 minutes. It is cooled to 60 ^° C., the pH value is adjusted to 4.3 and 0.14 U glucoamylase / g DM is added or the pH value is adjusted to 5.5 and 0.2% malt extract is added. All final hydrolyzates are adjusted to a pH of 4.3 before filtering. The initial pH adjustment should be made to about 6.5 when using wet milled materials with a high percentage of protein, and it should be done to about 5.5 when using dry milled materials or starches that have been deproteinized.

Da der Gelatinierungstemperaturbereich für Weizenstärke um etwa 10⁰C niedriger ist als derjenige für Maisstärke, ändert sich das Verdünnungstemperaturprofil in einen 50 bis 65°C-Cyclus. Der Gerstenmalzextrakt wurde hergestellt durch Rühren von 10,38 g gemahlenen Malz in 79,26 g H₂O für einen Zeitraum von 1 Stunde und anschließendes Filtrieren unter dem Einfluß der Schwerkraft durch ein Whatman-Papier Nr. 1. Dabei entsprechen 10 ml des Filtrats 1,2 g (Trockenbasis, TB) Malz. Auf ähnliche Weise kann die oben angegebene andere körnige Stärke oder ein körniges konventionelles Verfahren verwendet werden.Since the gelatinization temperature for wheat starch is lower by about 10 ⁰ C than that for corn starch, the dilution temperature profile will change in a 50 to 65 ° C cycle. The barley malt extract was prepared by stirring 10.38 g of ground malt in 79.26 g of H ₂ O for a period of 1 hour and then filtering under the influence of gravity through a No. 1 Whatman paper. 10 ml of the filtrate correspond to this 1.2 g (dry basis, TB) malt. Similarly, the above-mentioned other granular starch or a granular conventional method can be used.

Die an Protease freien e-Amylase-Präparate können auch in körnigen Stärken- oder konventionellen Verfahren verwendet werden, in denen eine Primärstärke als Ausgangsmaterial verwendet wird. Diese Stärken haben im allgemeinen einen Proteingehalt von etwa 0,30 bis etwa 0,35% oder weniger. Die Verwendung von von Protease freien or-Amylase-Präparaten führt im allgemeinen zu Hydrolysaten mit weniger als etwa 0,10% Protein. Bei Verwendung einer Primärstärke ist das Vorwaschen nicht erforderlich, es ist jedoch bevorzugt zur Erzielung eines Hydrolysats bester QualitätThe protease-free e-amylase preparations can also be used in granular starch or conventional methods in which a primary starch is used as the starting material. Have these strengths generally a protein content of from about 0.30 to about 0.35 percent or less. The use of protease free oramylase preparations generally result in hydrolysates with less than about 0.10% protein. When using a primary starch, pre-washing is not necessary, but is preferred to achieve this of a hydrolyzate of the best quality

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert.The invention is illustrated in more detail by the following examples.

3030th

Beispiel 1example 1

Das Beispiel 1 erläutert den Einfluß der Konzentration und der Art des Substratmaterials auf die Inaktivierung der proteolytischen Enzym-Aktivität während der Wärmebehandlung eines cr-Amylase-Enzymprüparats, das von Bacillus licheniformis stammt. Das Präparat wird mit dem Substratmaterial gemischt und dann für die angegebene Zeitspanne bei 80⁰C gehalten. Aus den nachfolgend angegebenen Daten ist zu ersehen, daß der 11 D. E.-fyjnissirup und der 42 D. E.-Maissirup die a-Amylase-Aktivität gegen Hitzeinaktivierung schützen, wodurch Produkte entstehen, <iie ein P/a-Aktivitätsverhältnis innerhalb des gewünschten Bereiches haben. Die Dextrose schützt jedoch die ff-Amylaseaktivität nicht so gut.Example 1 illustrates the influence of the concentration and the type of substrate material on the inactivation of the proteolytic enzyme activity during the heat treatment of a cr-amylase enzyme preparation derived from Bacillus licheniformis. The preparation is mixed with the substrate material and then kept ^{at 80 ° C. for the specified period of time.} From the data given below, it can be seen that the 11 DE fyjnis syrup and the 42 DE corn syrup protect the α-amylase activity against heat inactivation, resulting in products which have a P / a activity ratio within the desired range. However, the dextrose does not protect the ff-amylase activity as well.

Bezüglich des Beispiels 1 und auch bezüglich der nachfolgenden Beispiele ist es wesentlich, daß der Protease-Assay bei einem pH-Wert innerhalb des Bereiches von etwa 6,2 bis etwa 6,4 durchgeführt wird, auch wenn während der Verwendung der pH-Wert möglicherweise niedriger ist, beispielsweise einen Wert von etwa 5,5 hat. Dies hat sich jedoch als notwendig erwiesen, da die Protease-Assays bei einem pH-Wert von 5,5 nicht linear mit der Probengroße sind.With regard to Example 1 and also with regard to the following examples, it is essential that the protease assay is carried out at a pH within the range of about 6.2 to about 6.4, even if during using the pH may be lower, for example a value of about 5.5. However, this has been found to be necessary because the protease assays are not linear with a pH of 5.5 the sample size.

In der folgenden Tabelle I sind die Ergebnisse des Beispiels 1 angegeben. Die Wärmebehandlung in Gegenwart des 11 D. E.- oder 42 D. E.-Substrats führt zu einer Protease-Inaktivierung von etwa 93% bzw. etwa 96% bei Enzym/Substrat-Verhältnissen von 1:1 bzw. 1:2. Bei keinem Verhältnis ist ein merklicher Verlust an a-Amylasc-Aktivität zu beobachter.. Wenn jedoch Dextrose als Schutz-Substratmaieria! verwende·? wird, wird nur eine Protease-Inaktivierung von 89 bis 92% erzielt bei einer Abnahme der e-Amylase-Aktivität von etwa 12%.The results of Example 1 are given in Table I below. The heat treatment in the presence of the 11 D. E. or 42 D. E. substrate results in protease inactivation of about 93% and about 96%, respectively Enzyme / substrate ratios of 1: 1 or 1: 2. At no ratio is there a noticeable loss of α-amylasc activity to be observed .. However, if dextrose as a protective substrate maieria! use ·? becomes, becomes only one Protease inactivation of 89 to 92% achieved with a decrease in e-amylase activity of about 12%.

Es wurde nun gefunden, daß die Gegenwart von Maissirup bei Erhöhung der Wännebehandlungszeit von 60 auf 75 oder auf 90 min die Protease-Inaktivierung nur schwach ansteigt, d. h. von etwa 91 aufetwa 95%, ohne daß ein signifikanter Verlust an a-Amylase-Aktivität auftritt. Die Verringerung der Wärmebehandlungszeit führt jedoch zu einer beträchtlichen Abnahme der Protease-Inaktivierung auf nur 73% nach 30 min. Es ist wesentlich, daß praktisch der gleiche Grad der Protease-Aktivierung auch bei Verwendung von Maissirup erzielt wurde, der auf einen pH-Wert von 5,5 oder 7,0 eingestellt war.It has now been found that the presence of corn syrup with increasing the tub treatment time from 60 on 75 or 90 min the protease inactivation increases only slightly, d. H. from about 91 to about 95% without a significant loss of α-amylase activity occurs. The reduction in heat treatment time leads to however, to a considerable decrease in protease inactivation to only 73% after 30 min. It is essential that that practically the same degree of protease activation was achieved using corn syrup that was adjusted to pH 5.5 or 7.0.

Tabelle ITable I.

Einfluß des Substrat-Typs und der Konzentration auf die Inaktivierung der Protease während der Wärmebehandlung von ThermamyP) bei 80⁰CInfluence of the substrate type and concentration on the inactivation of the protease during the heat treatment of ThermamyP) at 80 ⁰ C.

3535 Substrat¹¹)Substrate ¹¹ ) Vol-Verhalt.
Enzym !Sub
stratVol-behavior.
Enzyme! Sub
strat Wärme
behandlung
Zeit pH
(min)warmth
treatment
Time pH
(min) 6,46.4 Protease-Aktivität^c)
(U/ml)
unbe- wärmebe
handelt handeltProtease activity ^c )
(U / ml)
unheated
acts acts 13251325 Protease-
Inaktiv.
(%)Protease
Inactive.
(%) a^Amylase-Aktivität
(U/ml)
unbe- wärmebe
handelt handelta ^ amylase activity
(U / ml)
unheated
acts acts 585585 a-Amy-
lase-
inakt.
(%)a-Amy-
read
inact.
(%) P/ff-Ak-
tivit.-
Verhält-
nis P / ff-Ak-
tivit.-
Relationship
nis 11 D. E.
Maissirup11 DE
Corn syrup 1:11: 1 6060 6,46.4 17 08017 080 485485 92,292.2 591591 391391 00 2,32.3 ■40■ 40 11 D. E.
Maissirup11 DE
Corn syrup 1:21: 2 6060 6,46.4 1138711387 11901190 957957 394394 603603 00 1,21.2 42 D. E.
Maissirup42 DE
Corn syrup 1:11: 1 6060 6,46.4 17 08017 080 465465 93,093.0 591591 396396 00 2,02.0 4545 42 D. E.
Maissirup42 DE
Corn syrup 1:21: 2 6060 6,36.3 1138711387 18501850 95,995.9 394394 522522 00 1,21.2 DextroseDextrose 1:11: 1 6060 6,26.2 17 08017 080 870870 89,289.2 591591 346346 HJHJ 3,53.5 DextroseDextrose 1:21: 2 6060 1138711387 92,492.4 394394 12,212.2 2,52.5

^a) Charge AN 1005, 2,01% Calcium TS, P/a-Aktivitäts-Verhältnis = 28,9. ^a ) Batch AN 1005, 2.01% calcium TS, P / a activity ratio = 28.9.

^b) Substrat bei 30% TS., eingestellt auf pH 5,5 vor der Zugabe des Enzyms. ^b ) substrate at 30% dry matter, adjusted to pH 5.5 before adding the enzyme.

^c) Bestimmt bei pH 6,3. ^c ) Determined at pH 6.3.

Beispiel 2Example 2

Das Verfahren des Beispiels 1 wurde wiederholt unter Verwendung von TENASE als ar-Amylase-Enzympräparat. Das Erhitzen wurde mit und ohne. Zugabe des 42 D. E.-Maissirups als Schutzsubstratmaterial durchgeführt. Die dabei erhaltenen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle II zusammengefaßt.The procedure of Example 1 was repeated using TENASE as an ar-amylase enzyme preparation. The heating was with and without. Addition of the 42 D. E. corn syrup carried out as protective substrate material. The results obtained are summarized in Table II below.

6060 6565

P/ff-Aktivitätsverhältnis P / ff activity ratio

Tabelle IITable II

Einfluß der Wärmebehandlungszeit auf die Inaktivierung der Protease in T.RNASEInfluence of the heat treatment time on the inactivation of the protease in T.RNASE

Wärmebehandlung Aktivität") (U/g) Inaktivierung (%)Heat treatment activity ") (U / g) inactivation (%)

Temp. (⁰C) 7.cit (min) Protease¹") o-Amylase Protease a Temp. ( ⁰ C) 7.cit (min) Protease ¹ ") o-Amylase Protease a

TENASE (Charche LF-2155-C)^d) verdünnt mit 2 pbv Maissirup^c)TENASE (Charche LF-2155-C) ^d ) diluted with 2 pbv corn syrup ^c )

unbehandelt 3328untreated 3328

80 15 23080 15 230

80 30 Nil80 30 Nile

unverdünnte TENASE (Charche LF 2427-L)^e)undiluted TENASE (Charche LF 2427-L) ^e )

unbehandelt 9410untreated 9410

SO 15 0967SO 15 0967

80 30 321380 30 3213

80 45 205180 45 2051

") Aktivitäten des verdünnten LF-2155-C, bestimmt auf Vol.-Basis, berechnet auf Gewichtsbasis unter Verwendung des vorher bestimmten spezifischen Gewichts von 1,15. ") Activities of the diluted LF-2155-C, determined on a volume basis, calculated on a weight basis using the predetermined specific gravity of 1.15.

^b) Proteascaktivität, bestimmt bei pH 6,5 für die Charge LF-2155-C und bei 6,3 für die Charge LF-2427-L. ^b ) Proteasc activity, determined at pH 6.5 for batch LF-2155-C and at 6.3 for batch LF-2427-L.

^c) 30 Cew.-/Gew.-% 42 D. E.-Maissirup, enthaltend 200 ppm TS zugesetztes Calcium. ^c ) 30 wt .- / wt .-% 42 DE corn syrup, containing 200 ppm TS of added calcium.

^d) 1,55 ~ Ca^{+ +} ,TS.
^c) 1,94% Ca'*. TS.
^r) Nicht bestimmt. ^d) 1.55 ~ Ca ^{+ +,} TS.
^c ) 1.94% Ca '*. TS.
^r ) Not determined.

Beispiel 3Example 3

Proben von THERMAMYL (Charge AN 1050)-a-Amylase, die, bezogen auf das Trockengewicht, 0,50% Calcium enthielten, wurden für verschiedene Zeitspannen bei 80⁰C wärmebehandelt. Die Versuche wurden sowohl bei dem Anfangs-pH-Wert des a-Amylase-Präparats als auch bei einem auf 5,5 eingestellten pH-Wert durchgeführt. In der folgenden Tabelle III sind die Ergebnisse zusammengefaßt.Samples of THERMAMYL (batch AN 1050) -α-amylase, which, based on the dry weight, contained 0.50% calcium, were heat-treated ^{at 80 ° C. for various periods of time.} The experiments were carried out both at the initial pH of the α-amylase preparation and at a pH adjusted to 5.5. The results are summarized in Table III below.

Die Ergebnisse zeigen, daß eine 60minütige Wärmebehandlung bei jedem pH-Wert Protease/or-Amylase-Aktivitätsverhältnisse von weniger als 2 ergab. Bei der Verlängerung der Wärmebehandlungszeit auf 120 min erhielt man ein Verhältnis von 0,6, jedoch auf Kosten von 11 bis 13% der a-Amylase-Aktivität. Eine etwas höhere Inaktivierung sowohl der Protease als auch der a-Amylase wurde bei einem pH-Wert von 5,5 als bei einem pH-Wert von 6,4 erzielt aufgrund der allgemein geringeren Enzymstabilität in dem stärker sauren MediumThe results show that a 60 minute heat treatment at each pH has protease / or-amylase activity ratios of less than 2. When the heat treatment time is extended to 120 min a ratio of 0.6 was obtained, but at the expense of 11-13% of the α-amylase activity. A slightly higher one Inactivation of both protease and α-amylase was observed at pH 5.5 rather than pH of 6.4 achieved due to the generally lower enzyme stability in the more acidic medium

589589 —- —- 5,75.7 570570 92,892.8 4,94.9 0,40.4 574574 100100 2,52.5 <0,l<0, l 17241724 -- -- 5,55.5 N. D.^f)ND ^f ) 2ΰ,02ΰ, 0 N. D.N. D. N. D.N. D. 904904 65,965.9 55,155.1 3,63.6 662662 78,278.2 69,469.4 3,33.3

Tabelle IIITable III 19 52819 528 pH 6,4pH 6.4 Inaktivierung (%)
Protease a-AmylaseInactivation (%)
Protease α-amylase -- P/a-Aklivi-
tätsverhältnisP / a-Aklivi-
relationship 45174517 10751075 7,17.1 2 9602,960 999999 -- 4,64.6 18,218.2 19801980 10261026 76,976.9 4,94.9 4,54.5 15981598 10221022 84,884.8 6,76.7 2,92.9 1 1521 152 10031003 89,889.8 10,310.3 1,91.9 Einfluß der Wärmebehandlungszeit und des pH-Wertes auf die Inaktivierung der Pro
tease in THERMAMYL^a)Influence of the heat treatment time and the pH value on the inactivation of the Pro
tease in THERMAMYL ^a ) 708708 964964 91,891.8 11,111.1 1,61.6 Wärmebehandlung Aktivität (U/g)
Temp. (⁰C) Zeit (min) Protease c-AmylaseHeat treatment activity (U / g)
Temp. ( ⁰ C) Time (min) Protease c-amylase 956956 94,194.1 1,21.2 20 93720 937 pH 5,5pH 5.5 96,396.3 -- 0,70.7 unbehandeltuntreated 2 0382 038 10051005 8,38.3 80 3080 30 15201520 992992 -- 8.58.5 20,820.8 80 4580 45 920920 90,390.3 2,22.2 80 6080 60 92.792.7 1.71.7 80 7580 75 80 9080 90 80 12080 120 unbehandeltuntreated 80 4580 45 80 6080 60

Fortsetzungcontinuation

Wärmebehandlung Aktivität fU/g) Inaktivierung (%)Heat treatment activity fU / g) inactivation (%)

Temp. (⁰C) Zeit (min) Protease α-Amylase Protease a-AmylaseTemp. ( ⁰ C) Time (min) Protease α-amylase Protease α-amylase

P/a-Aktivitätsverhältnis P / a activity ratio

7575 10721072 pH 5,5pH 5.5 94,994.9 8,98.9 1,21.2 8080 9090 762762 916916 96,496.4 10,810.8 0,90.9 8080 120120 356356 896896 98,398.3 13,413.4 0,40.4 8080 870870

^a) Charge AN 1050,0,50% d. b. Calcium, wärmebehandelt in Abwesenheit von Kohlehydraten. ^a ) Batch AN 1050.0.50% db calcium, heat-treated in the absence of carbohydrates.

Beispiel 4Example 4

Proben von verschiedenen Chargen THRRMAMYI.. wurden 60 min lang hei ßO°C wärmebehahdelt. Vor der Wärmebehandlung wurde der Calciumionengehalt jeder Charge durch Zugabe von CaCl₂ auf einen vorher festgelegte; Prozentsatz eingestellt. Die restlichen Protease- und a-Amylase-Aktivitäten sind in der folgenden Tabelle IV angegeben. Bei zunehmenden THERMAMYL-Calcium-Gehalt von 0,04% auf 2,0% nimmt die Proteaseinaktivierung von 100% auf 91 % ab. In jedem Falle nimmt die a-Amylase-Inaktivierung von 25% bei 0,04% Calcium auf etwa 5% bei 1% Calcium ab. Der zunehmende Calciumgehaltauf2% führt zu einer erhöhten Inaktivierung von 7 bis 16%.Samples from different batches of THRRMAMYI .. were heat-treated for 60 min. Before the heat treatment, the calcium ion content of each batch was adjusted to a predetermined level _{by adding CaCl 2;} Percentage set. The remaining protease and α-amylase activities are given in Table IV below. With increasing THERMAMYL calcium content from 0.04% to 2.0%, the protease inactivation decreases from 100% to 91%. In each case the α-amylase inactivation decreases from 25% with 0.04% calcium to about 5% with 1% calcium. The increasing calcium content to 2% leads to an increased inactivation of 7 to 16%.

Verschiedene Chargen von THERMAMYX, die 0,4 bis 2,21% Calcium enthielten, wurden mit 2 Teilen 30% TS-42 D. E.-Maissirup mit einem pH-Wert von 5,5 verdünnt und 30,60 und 90 min lang bei 80⁰C und 10,20 und 30 min lang bei 85°C wärmebehandelt. In allen Fällen betrug der pH-Wert während der Wärmebehandlung 6,2 55 bis 6,6. Die Daten in der folgenden Tabelle V zeigen, daßDifferent batches of THERMAMYX containing 0.4 to 2.21% calcium, were diluted with 2 parts of 30% TS-42 DE corn syrup having a pH value of 5.5 and 30,60 and 90 min at 80 ⁰ C and heat treated at 85 ° C for 10.20 and 30 minutes. In all cases the pH during the heat treatment was 6.2 55 to 6.6. The data in Table V below show that

a) die Wärmebehandlung von Thermamyl (Charge AN 1001) bei 80 oder 85°C zu einer praktisch vollständigen Protease-Inaktivierung bei einem ar-Amylase-Aktivitätsverlust von weniger als 7% führt,a) the heat treatment of Thermamyl (batch AN 1001) at 80 or 85 ° C to a practically complete Protease inactivation leads to an ar-amylase activity loss of less than 7%,

b) bei der Charge AN 1002 eine stärkere ar-Amylase-Inaktivierung, jedoch eine geringere Protease-Inaktivie-60 rang erhalten wird als bei den anderen Chargen von THERMAMYL; der Grund dafür ist noch nichtb) with batch AN 1002 a stronger ar-amylase inactivation, but a lower protease inactivation-60 rank is retained than with the other batches of THERMAMYL; the reason for this is not yet

bekannt;known;

c) die mit den Chargen AN 1005 und 1009 erhaltenen Ergebnisse zeigen, daß (1) durch 90minütige Behandlung bei 80⁰C eine Inaktivierung der Protease von 93 bis 94% bei einem or-Amylaseverlust von 8% oder weniger erzielt wird, während (2) bei einer 10 bis 30minütigen Behandlung bei 85°C eine Inaktivierung derc) the batches of 1005 and 1009 obtained results show that (1) inactivation of the protease 93-94% with a or-Amylaseverlust of 8% or less is achieved by 90-minute treatment at 80 ⁰ C, while (2 ) inactivation of the 10 to 30 minutes treatment at 85 ° C

65 Protease von 97 bis 100% bei einem a-Amylase-Verlust von etwa 7 bis etwa 16% auftritt.65 protease from 97 to 100% occurs with an α-amylase loss of about 7 to about 16%.

Tabelle IVTable IV Calciumgehaltes auf die Inaktivierung von Protease in THERMAMYL")Calcium content on the inactivation of protease in THERMAMYL ") %TS% TS Protease-Aktivität
(U/g)
unbe- wärmebe
handelt handeltProtease activity
(U / g)
unheated
acts acts 27
6427
64 a-Amylase-Aktivität
(U/g)
• unbe- wärmebe
handelt handeltα-amylase activity
(U / g)
• unheated
acts acts 802
805802
805 Inaktivierung
Protease a-AmylaseInactivation
Protease α-amylase 25,0
21,925.0
21.9 P/a-Aktivi-
vitäts-Vcr-
hültnisP / a activi-
vity-Vcr-
shine Einfluß desInfluence of Gesamt
gehalt
Ca⁺⁺
(% TB)total
salary
Ca ⁺⁺
(% TB) 35,4
34,335.4
34.3 16 178
15 21816 178
15 218 597
1980597
1980 1069
10311069
1031 904
1022904
1022 99,8
99,699.8
99.6 10,5
4,910.5
4.9 0,03
0,080.03
0.08 ChargeBatch 0,04
0,250.04
0.25 34,3
26,034.3
26.0 15 173
19 52815 173
19 528 853
2229853
2229 1010
10751010
1075 935
1000935
1000 96,1
89,896.1
89.8 3,7
5,73.7
5.7 0,66
1,940.66
1.94 AN 1001
AN 1001AN 1001
AN 1001 0,50
0,500.50
0.50 34,6
29,034.6
29.0 15 659
19 74615 659
19 746 869
2645869
2645 971
1061971
1061 911
834911
834 94,6
88,794.6
88.7 7,4
16,57.4
16.5 0,9?
2,230.9?
2.23 AN 1001
AN 1050AN 1001
AN 1050 1,00
1,001.00
1.00 33,9
30,433.9
30.4 15 899
29 21115 899
29 211 984
999984
999 60 min langFor 60 minutes 94,5
90,994.5
90.9 bei 80°C durchgeführt.carried out at 80 ° C. 0,95
3,170.95
3.17 AN 1001
AN 1069AN 1001
AN 1069 2,00
2,012.00
2.01 ^a) Die Wärmebehandlung wurde ^a ) The heat treatment has been in Abwesenheit von Kohlehydratenin the absence of carbohydrates AN 1001
AN 1005AN 1001
AN 1005 Beispiel 5Example 5

Tabelle VTable V

Parameter, weiche die selektive Inaktivierung von Proteasen in der THERMAMYL-a-Amylase steuern^a)Parameters that control the selective inactivation of proteases in THERMAMYL-a-amylase ^a )

Wärmebehandlung
Temp. (⁰C) Zeit (minHeat treatment
Temp. ( ⁰ C) Time (min AN 1001 {0,04%AN 1001 {0.04% Aktivität nach der
Wärmebehandlung (U/ml)
I Protease α-AmylaseActivity after the
Heat treatment (U / ml)
I protease α-amylase N. D.N. D. Inaktivierung (%)
ProteaseInactivation (%)
Protease a"Amylasea "amylase P/fl-Verhält-
nisP / fl ratio
nis <■ 5 <■ 5 ]] 2020th ii 3535 ¹¹ 4040 ChargeBatch 3030th TB Calcium)TB calcium) 409409 inin II. 8080 1010 3030th 417417 99,699.6 0^c)0 ^c ) 0,10.1 IUIU 8585 2020th 5555 444444 99,299.2 7,37.3 0,10.1 2525th 8585 3030th 00 100100 5,45.4 0,00.0 8585 AN 1002 (0,89%AN 1002 (0.89% 3030th N. D.N. D. 99,699.6 00 0,10.1 1515th ChargeBatch 3030th TB Calcium)TB calcium) N. D.N. D. 8080 6060 28602860 385385 69,869.8 N. D.N. D. 6,5^b)6.5 ^b ) 3030th 8080 9090 19651965 361361 79,279.2 N. D.N. D. 4,5^b)4.5 ^b ) 8080 1010 10551055 341341 88,988.9 12,312.3 2,72.7 8585 2020th 13851385 356356 85,385.3 17,817.8 3,83.8 8585 3030th 405405 95,795.7 22,322.3 1,21.2 8585 AN 1005 (2,01%AN 1005 (2.01% 270270 N. D.N. D. 97,897.8 18,918.9 0,80.8 ChargeBatch 3030th TB Calcium)TB calcium) 396396 8080 6060 3291")3291 ") N. D.N. D. 71,171.1 00 8,48.4 8080 9090 465¹·)465 ¹ ) 363363 95,995.9 00 1,21.2 8080 IOIO 774^L)774 ^L ) 342
359342
359 93,293.2 00 2,02.0 8585 20
3020th
30th 400400 96,596.5 7,97.9 1,11.1 85
8585
85 AN 1009 (2,21%AN 1009 (2.21% 0
400
40 N. D.N. D. 100
99,6100
99.6 13,2
8,913.2
8.9 0,0
0,10.0
0.1 ChargeBatch 3030th TB Calcium}TB calcium} N. D.N. D. 8080 6060 36803680 369369 73,073.0 N. D.N. D. 9,19.1 8080 9090 14601460 346346 89,389.3 N. D.N. D. 3,63.6 8080 1010 475475 337337 96,596.5 8,48.4 1,31.3 8585 2020th 430430 376376 96,896.8 14,114.1 1,21.2 8585 3030th 00 100100 16,416.4 0,00.0 8585 3030th 99,899.8 6,76.7 0,10.1

^a) hnzym verdünnt mit 2 pbv 30% 24 D. E.-Maissirup vor der Wärmebehandlung. ^a ) hnzym diluted with 2 pbv 30% 24 DE corn syrup before heat treatment.

^h) Es wurde angenommen, daß kein Verlust der e^Amylase-Aktivität der Proben auftrat. ^h ) It was assumed that there was no loss of the e ^ amylase activity of the samples.

^w) Bestimmt bei pH 5,5. ^w ) Determined at pH 5.5.

Beispiel 6Example 6

Das Protease-Inaktivierungsverfahren wurde in größerem Maßstab durchgeführt für die Herstellung von 2 großen Chargen Enzym für Umwandlungsuntersuchungen. Die Chargengrößen betrugen 2600 und 6655 ml Tl IERM AM YL (Charge AN 1009), verdünnt mit 2 Volumenteilen (VT) 42 D. E.-Maissirup mit 30% Feststoffen und einem pH-Wert von 5,5. Das verdünnte Enzym (pH 6,2} wurde innerhalb von 30 min in einem mit Wasserdumpf erhitzten Wasserbad auf 80⁰C erhitzt, 75 min lang bei dieser Temperaturgehalten und innerhalb von etwa 30 min auf Raumtemperatur abgekühlt. Der End-pH-Wert betrug 5,9. Die Protease-lnaktivierung betrug 93 bis 96% bei einem a-Amylase-Aktivitäts-Verlust von nur etwa 3%. Diese beiden Chargen von wärmebehandelten TIIERMAMYL wurden zur Umwandlung von Primärstärke bzw. Mühlenstärke in Dextrosehydrolysate unter Anwendung des körnigen Stärke-Enzym-Wärme-Enzym (EHE)-Verfahrens verwendet.The protease inactivation process was carried out on a larger scale for the production of 2 large batches of enzyme for conversion studies. The batch sizes were 2600 and 6655 ml Tl IERM AM YL (Batch AN 1009) diluted with 2 parts by volume (VT) 42 DE corn syrup with 30% solids and a pH of 5.5. The diluted enzyme (pH 6.2} was heated to 80 ^° C. within 30 minutes in a steam-heated water bath, held at this temperature for 75 minutes and cooled to room temperature within about 30 minutes 9. Protease inactivation was 93 to 96% with a loss of α-amylase activity of only about 3% .These two batches of heat-treated TIIERMAMYL were used to convert primary starch and mill starch, respectively, to dextrose hydrolysates using the granular starch enzyme - Heat Enzyme (EHE) method used.

Beispiel 7Example 7

Maisgrieß (Maisschrot) wurde in Wasser aufgeschlämmt und mit THERMAMYL-Enzym-Präparaten verdünnt, die wärmebehandelt worden waren, wobei verschiedene Grade der Protease-lnaktivierung erzielt wurden. Ein Präparat wurde dann bei einem pH-Wert von 5,5 mit Giucoamylase von Aspergiilus niger in Saccharose umgewandelt und das andere wurde mit a-Amylase in Saccharose umgewandelt. Die Ergebnisse sind in den folgenden Tabellen VI und VII zusammengefaßt.Corn grits (maize meal) was slurried in water and diluted with THERMAMYL enzyme preparations, which had been heat treated to achieve various degrees of protease inactivation. A preparation was then at a pH of 5.5 with Giucoamylase from Aspergiilus niger in sucrose and the other was converted to sucrose with α-amylase. The results are in the following Tables VI and VII summarized.

Tabelle VITable VI Versuch Nr.Attempt no. 6262 6363 6464 6565 6161 AN 1005AN 1005 AN 1009AN 1009 AN 1009AN 1009 AN 1001AN 1001 AN 1001AN 1001 8080 8080 8080 unbehandeltuntreated 8080 6060 6060 3030th unbehandeltuntreated 3030th 1,21.2 3,63.6 9,19.1 15,515.5 Einfluß des THERMAMYL-Protease/ar-Amylase-AJctivitätsverhältnisses auf die Her
stellung von Dextrosehydrolysat aus Maisgrieß^a)Influence of the THERMAMYL protease / amylase activity ratio on the her
Preparation of dextrose hydrolyzate from corn grits ^a ) 0,10.1 29,529.5 29,529.5 29,729.7 29,729.7 29,429.4 93,893.8 94,094.0 94,094.0 93,693.6 THERMAMYL-
BehandlungTHERMAMYL
treatment 93,893.8 0,220.22 0,250.25 0,340.34 0,480.48 ChargeBatch 0,180.18 3636 4242 5757 «9«9 Temperatur (⁰C)Temperature ( ⁰ C) 3131 IIII 1010 1010 1111th Zeit (min)Time (min) SS. Ρ/σ-Aktivitätsverh.Ρ / σ activity ratio 97,097.0 97,297.2 98,098.0 98,298.2 Hydrolysat-Analysen TBHydrolyzate analyzes TB 97,097.0 66,166.1 66,466.4 66,766.7 66,966.9 %TS% TS 65,765.7 6,86.8 7,27.2 7,27.2 7,17.1 Dextrose ^%*Dextrose ^% * 7,07.0 Protein (%)Protein (%) 99,299.2 nn ιnn ι
77,177.1 nn ι nn ι
77,177.1 99,199.1 Amino N. (ppm)Amino N. (ppm) 99,199.1 88,288.2 88,288.2 Uo₁ZUo ₁ Z 89,189.1 Filtriergeschw.
(Liter/min/m²)Filter speed
(Liter / min / m ² ) 88,588.5 Rückstands-Analysen,
an löslichen Stoffen,
freie Basis, TBResidue analyzes,
of soluble substances,
free base, TB %TS% TS Protein (%)Protein (%) Stärke (%)Strength (%) Solubilisierung (% TB.)Solubilization (% TB.) Stärkestrength Gesamtmengetotal quantity

^a) Die Versuche wurden nach dem 75°C-GS-EHE-Verfahren unter Anwendung einer 0,05% SO₂-Vorwaschung, unter Verwendung von 50 ppm Calcium und einer Umwandlung in Saccharose bei pH 5,5 durchgeführt. Die Dosierung der Glucoamylase betrug 0,14 U/g TS. ^a ) The tests were carried out according to the 75 ° C-GS-EHE method using a 0.05% SO ₂ pre-wash, using 50 ppm calcium and converting to sucrose at pH 5.5. The dosage of glucoamylase was 0.14 U / g DM.

Tabelle VIITable VII auf die Herstel-on the manufacturing Versuch Nr.Attempt no. 5656 5757 5858 (TB)(TB) 8080 8080 unbehandeltuntreated lung eines Sirups mit hohem Maltose/Maltotriose-Gehalt aus Maisschrot (Maisgrieß)^a)Development of a syrup with a high maltose / maltotriose content from maize meal (maize grits) ^a ) 54 5554 55 27,9 27,927.9 27.9 3030th 3030th unbehandeltuntreated 47 4647 46 3,63.6 9,19.1 15,515.5 AN 1001 AN 1005 AN 1009 AN 1009 AN 1001AN 1001 AN 1005 AN 1009 AN 1009 AN 1001 3 43 4 Einfluß des Thermamyl-Protease/or-Amylase-AktivitätsverhältnissesInfluence of the Thermamyl protease / oramylase activity ratio THERMAMYL-THERMAMYL 80 8080 80 53 5253 52 27,827.8 27,827.8 27,927.9 Behandlungtreatment 30 6030 60 22 2422 24 4646 4646 4646 ChargeBatch P/a-Aktivitätsverhältnis 0,1 1,2P / a activity ratio 0.1 1.2 0,12 0,160.12 0.16 44th 44th 44th Temperatur (⁰C)Temperature ( ⁰ C) Hydrolysat-AnalysenHydrolyzate analyzes 20 2620 26 5151 5353 5353 Zeit (min)Time (min) %TS% TS 2424 2424 2424 D.E.D.E. 0,180.18 0,250.25 0,480.48 DP-I (%)DP-I (%) 3232 4747 8383 DP-2 (%)DP-2 (%) DP-3 (%)DP-3 (%) Protein (%)Protein (%) Amino N. (ppm)Amino N. (ppm)

Fortsetzungcontinuation

Versuchattempt Nr.No. 5555 5656 5757 5858 5454 1010 1111th 1111th 1111th Filtriergeschw.
Liter/min/m² Filter speed
Liters / min / m ² 1010 Rückstandsanalysen,
von löslichen Anteilen,
freie Basis, TBResidue analysis,
of soluble parts,
free base, TB 96,696.6 96,796.7 97,697.6 •97,3• 97.3 %TS% TS 96,696.6 62,962.9 64,364.3 63,663.6 64,464.4 Protein (%)Protein (%) 63,863.8 11,011.0 6,96.9 10,010.0 9,59.5 Stärke (%)Strength (%) 11,011.0 2,42.4 1,21.2 0,80.8 1,21.2 Lösliche Anteile (%)Soluble fractions (%) 1,31.3 Solubilisierung (% TB)Solubilization (% TB) 98.698.6 99.199.1 98.798.7 98.898.8 Stärkestrength 98,698.6 88,688.6 88,588.5 88,688.6 88,988.9 Gesamtmengetotal quantity 88,488.4

^a) Die Versuche wurden bei Anwendung des 75°C-GS-EHE-Verfahrens unter Verwendung eines
0,2% Gerstenmalzextraktes durchgeführt. ^a ) The experiments were carried out using the 75 ° C-GS-EHE method using a
0.2% barley malt extract carried out.

Beispiel 8Example 8

Der Einfluß des Protease-Gehaites bei der Hochtemperatur-Verflüssigung wurde kurz untersucht unter Verwendung von THERMAMYL (Charge AN 1009), das entweder wärmebehandelt wurde, um die Proteasen zu inaktivieren (Ρ/σ-Verhältnis = 1,4) oder »so wie es vorlag« ohne Protease-Inaktivierung verwendet wurde (P/ar-Verhältnis = 32,9). 25 gew.-/gew.-%ige Stärkeaufschlämmungen, pH 6,2, enthaltend 200 ppm TB, zugesetztes Calcium, wurden mit2 U/g TS THLXMAMYL inokuliert. Die Aufschlämmungen wurden vorder Verflüssigung 30 min oder 24 Stunden lang Lei 50⁰C gehalten. Die lange Haltezeit wurde verwendet, um einen Extremfall der tatsächlichen Verfahrensbedingunge zu simulieren. Jede Aufschlämmung wurde durch indirektes Erhitzen für einen Zeitraum von 90 min auf90°C bei einem pH-Wert von 6,2 verdünnt und 96 Stunden lang bei pH 4,3 und bei 60⁰C mit 14 Glucoseamylase-U/100 g/TS in Saccharose überführt. Die bei diesen Versuchsreihen und bei einer Wiederholung der Versuchsreihen erhaltenen durchschnittlichen Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle VIII angegeben. Die Ergebnisse zeigen, daß durch Erhöhung der Haltezeit von 30 min aj»f 24 Stunden etwas mehr lösliches Protein in den End-Hydrolysaten erhalten wird. Der Hauptfaktor, der den Hydrolysat-Proteingehalt beeinflußt, ist jedoch der Protease-Gehalt in der a-Amylase. Durch Verwendung des behandelten THERMAMYLS (mit einem geringen Protease-Gehalt) wird der Proteingehalt von durchschnittlich 0,21% auf 0,13% herabgesetzt, dies entspricht einer Verminderung um 38%.The influence of protease content on high temperature liquefaction was briefly investigated using THERMAMYL (Lot AN 1009) which was either heat treated to inactivate the proteases (Ρ / σ ratio = 1.4) or as it is present «was used without protease inactivation (P / ar ratio = 32.9). 25 w / w% starch slurries, pH 6.2, containing 200 ppm TB, added calcium, were inoculated with 2 U / g TS THLXMAMYL. The slurries were held at ^{50 °} C. for 30 minutes or 24 hours before liquefaction. The long hold time was used to simulate an extreme case of actual process conditions. Each slurry was diluted by indirect heating for a period of 90 min to 90 ° C at a pH value of 6.2 and 96 hours at pH 4.3 and at 60 ⁰ C with 14-glucoamylase U / 100 g / in TS Sucrose transferred. The average results obtained in these series of tests and in a repetition of the series of tests are given in Table VIII below. The results show that by increasing the holding time from 30 minutes to 24 hours, somewhat more soluble protein is obtained in the final hydrolysates. However, the main factor influencing the hydrolyzate protein content is the protease content in the α-amylase. By using the treated THERMAMYLS (with a low protease content) the protein content is reduced from an average of 0.21% to 0.13%, which corresponds to a reduction of 38%.

Tabelle VIIITable VIII

Einfluß des THERMAMYL-Protease-Gehaltes in einem Enzym-Enzym-Dextrose-Verfahren Influence of the THERMAMYL protease content in an enzyme-enzyme-dextrose process

Versuch Nr.
1 und 5Attempt no.
1 and 5

2 und 62 and 6

3 und 73 and 7

4 und 84 and 8

THERMAMYL
Protease/ar-Aktiv.-Verh.THERMAMYL
Protease / ar-activ.-ratio

Stärkeaufschlämmung-Haltezeit bei 50⁰C)Starch slurry holding time at 50 ⁰ C)

Verflüssigung") % TS
D.E.Liquefaction ")% TS
DE

Überführung in Saccharose') % d. s.Conversion into sucrose ')% d. s.

unbehandelt behandelt unbehandelt behandeltuntreated treated untreated treated

32,9 24 Std.32.9 24 hours

26,8 22,226.8 22.2

28,528.5

1,4
24 Std.1.4
24 hours

32,9
30 min32.9
30 min

26,7
19,226.7
19.2

28,528.5

1,4
30 min1.4
30 min

26,5
19,126.5
19.1

28,528.5

1111th

27 3527 35 480480 3 und 73 and 7 4 und 84 and 8 Fortsetzungcontinuation 95,4
0,20
1,3195.4
0.20
1.31 95,3
0,11
1,4295.3
0.11
1.42 Versuch Nr.
1 und 5Attempt no.
1 and 5 2 und 62 and 6 Dextrose (% TB)
Protein (% TB)
Unlöslicher Anteil (% TB)Dextrose (% TB)
Protein (% TB)
Insoluble part (% TB) 94,9
0,22
1,1694.9
0.22
1.16 95,4
0,15
1,3195.4
0.15
1.31

^a) Eine 25gew.-/gew.-%ige Aufschiämmung von Maisstärke, die 2 U/g TS Thermamyl + 200 ppm TB zugesetztes Calcium enthielt, wurde bei 5O⁰C und einem pH-Wert von 6,2 vor der Verflüssigung tür die angegebene Zeit gehalten.
^b) Indirektes Erhitzen auf 9G°C für einen Zeitraum von 90 min bei pH 6,2. ^a ) A 25 wt .- / wt .-% slurry of corn starch containing 2 U / g TS Thermamyl + 200 ppm TB added calcium, was at 50 ⁰ C and a pH of 6.2 before liquefaction for the specified time held.
^b ) Indirect heating to 9G ° C for a period of 90 min at pH 6.2.

^c) 60⁰C. pH 4,3, 96 Stunden, 0,14 GA U/g TS. ^c ) 60 ^° C. pH 4.3, 96 hours, 0.14 GA U / g TS.

Beispiel 9Example 9

Das 75°C-GS-EHE-Verfahren wurde zur Beurteilung von Maisgrieß (Maisschrot) und Ma' -ibfällen angewendet. Die erhaltenen Ergebnisse sind in den folgenden Tabellen IX und X zusammengefaßt. Zu Vsrgieichszwekken wurde Maisschrot nach dem 90°C-i£nzym-Enzym-Verfahren umgewandelt. Der Schrot wurde mit einer ppm SO₂-Lösung vorgewaschen, durch 90minütiges Erhitzen auf 90⁰C verflüssigt und dann mit Glucoamylase oder Malzextrakt umgewandelt. Die Ergebnisse der folgenden Tabelle XI zeigen, daß die Hydrolysatzusammensetzung und die Qualität die gleichen sind wie sie bei d*m 75°C-Verfahren erhalten wurden. Die Stärkesolubilisierung und die Filtriergeschwindigkeit sind jedoch höher bei Anwendung des 75°C-Verfahrens, so daß das 75°C-Verfahren das bevorzugte Umwandlungsverfahren ist.The 75 ° C-GS-EHE method was used to assess corn grits (corn meal) and maize debris. The results obtained are summarized in Tables IX and X below. For comparison purposes, maize meal was converted by the 90 ° Cenzyme enzyme process. The shot was scoured with a solution ppm SO _2, 90 minute liquefied by heating to 90 ⁰ C and then converted with glucoamylase or malt extract. The results in Table XI below show that the hydrolyzate composition and quality are the same as those obtained in the d * m 75 ° C process. However, the starch solubilization and the rate of filtration are higher using the 75 ° C process, so the 75 ° C process is the preferred conversion process.

Tabelle IXTable IX

Umwandlung von MaißgrießConversion of wheat semolina

GEH-32GO-32

VorwäschenPre-wash

Entfernung der löslichen Bestandteile (% TB) 0,05 % SO₂ Removal of soluble components (% TB) 0.05% SO ₂

Überführung in Saccharose GATransfer to sucrose GA

Hydrolysat-Analysen (TB)Hydrolyzate analysis (TB)

% TS 29,4% TS 29.4

Dextrose (%) 94,5 Protein (%) 0,33Dextrose (%) 94.5 protein (%) 0.33

Amino N. ppm 75 Filtriergeschwindigkeit (Liter/min/m') 3Amino N. ppm 75 Filtration rate (liters / min / m ') 3

Rückstands-Analysen (TB)^a)Residue analyzes (TB) ^a )

% TS 97,5% TS 97.5

Stärke (%) 13,8Strength (%) 13.8

Protein (%) 67,3Protein (%) 67.3

Lösliche Bestandteile (%) 2,0Soluble Ingredients (%) 2.0

Solubilisierung (TB)Solubilization (TB)

Gesamtmenge (%)^b) 88,1Total amount (%) ^b ) 88.1

Stärke (%) 98,2Strength (%) 98.2

Bedingungen:Conditions:

30 gew.-/gew.-%ige, mit SO₂ gewaschener Maisschrot, verdünnt mit 1 U P. I. THERMAMYL/g TS * mit 50 ppm Ca⁺⁺, pH 6,5, erhitzt innerhalb von 2 Stunden von 60 auf 75°C, wärmebehandelt bei ICW⁰C, umgewandelt mit 0,14 U GA/g TS ■ pH 4,3, 95 Stunden bei bO^C.30% by weight / weight% _{corn meal, washed with SO 2} , diluted with 1 U PI THERMAMYL / g TS * with 50 ppm Ca ⁺⁺ , pH 6.5, heated from 60 to 75 ° C. within 2 hours , heat-treated at ICW ⁰ C, converted with 0.14 U GA / g TS ■ pH 4.3, 95 hours at bO ^ C.

^a) Koirij'ert auf eine an löslichem Material freie Basis. ^a ) Koirij'ert on a soluble material free basis.

^b) Enthäft unlösliche Materialien, die beim Vorwaschen entfernt wurden. ^b ) Eliminates insoluble materials removed during prewash.

^c) Es wurde angenommen, daß kein Stärkeverlusit beim Vorwaschen auftrat. ^c ) It was assumed that no starch loss occurred during the pre-wash.

Tabelle XTable X

Umwandlung von MaisabfallenConversion of maize waste

GEH-21GO-21

GEH-25GO-25

VorwaschenPre-wash

Entfernte lösliche Bestandteile (% TB)Soluble matter removed (% TB)

Umwandlung in SaccharoseConversion to sucrose

Hydrolysat-Analysen, TBHydrolyzate analysis, TB

%TS% TS

Dextrose (%)Dextrose (%)

D.E.D.E.

DP-I (%)DP-I (%)

DP-2 (%)DP-2 (%)

DP-3 (%)DP-3 (%)

DP-4 + (%)DP-4 + (%)

Protein (%)Protein (%)

Amino N. (ppm)Amino N. (ppm)

Filtriergeschwindigkeit (Liter/min/m²)Filtration speed (liter / min / m ² )

Rückstandsanalysen, TB^a)Residue analyzes, TB ^a )

%TS% TS

Stärke (%)Strength (%)

Protein (%)Protein (%)

Lösliche Bestandteile (%)Soluble Ingredients (%)

Solubilisierung, TBSolubilization, TB

Gesamtmenge (%}^b) Stärke (%)*) Total amount (%} ^b ) Starch (%) *)

Bedingungen:Conditions:

30 gew.-/gew.-%ige, mit SO₂ gewaschene Maisabfalle, verdünnt mit 1 U P. I. THERM AM YL/g TS mit 50 ppm Ca⁺*, pH 6,5, erhitzt innerhalb von 2 Stunden von 6O⁰C auf 75°C, wärmebehandelt bei 100⁰C, umgewandelt mit 0,14 U GA/gTS., pH 4,3,96 Stunden bei 60⁰C (GEH-25) oder 0,2% Malzextrakt, pH 5,5, 24 Stunden bei 60⁰C (GEH-24).30 wt .- / wt .-% strength, washed with SO ₂ corn waste, diluted with 1 U PI THERM AM YL / g TS with 50 ppm Ca ⁺ *, pH 6.5, heated to within 2 hours of 6O ⁰ C 75 ° C, heat-treated at 100 ⁰ C, converted with 0.14 U GA / GTS., pH 4,3,96 hours at 60 ⁰ C (GEH-25) or 0.2% malt extract, pH 5.5, 24 Hours at 60 ⁰ C (GEH-24).

³) Korrigiert auf eine an löslichem Material freie Basis. ³ ) Corrected on a soluble matter free basis.

^b) Enthält die beim Vorwaschen entfernten löslichen Bestandteile. ^b ) Contains the soluble components removed during pre-washing.

^c) Es wurde angenommen, daß beim Vorwaschen keine Stärkeverluste auftraten. ^c ) It was assumed that no starch losses occurred during the pre-wash.

Tabelle XITable XI

Umwandlung von Nf nisschrot unter Anwendung des 90°C-Enzym-Enzym-VerfahrensConversion of Nf nish meal using the 90 ° C enzyme-enzyme method

0,05% SO₂ 0.05% SO ₂ 0,05% SO₂ 0.05% SO ₂ 2,22.2 6,26.2 6,36.3 360360 MaItXMaItX GAGA 0,70.7 24,224.2 25,325.3 97,997.9 -- 91,291.2 4,34.3 44,144.1 -- 30,830.8 5,95.9 -- 1,21.2 54,554.5 -- 75,575.5 22,622.6 -- 98,598.5 17,017.0 -- 0,80.8 N. D.N. D. 0,70.7 98,798.7 4,74.7 32,332.3 1,11.1 75,875.8 98,498.4

Versuch Nr. GEH-59Experiment no. GEH-59

GEH-92 GEH-60GO-92 GO-60

GEH-IGEH-I

Verfahrenprocedure

Umwandlung in SaccharoseConversion to sucrose

Hydrolysat-Analysen, TBHydrolyzate analysis, TB

Trockensubstanz (%) Dextrose (%)Dry matter (%) Dextrose (%)

DP-I (%)DP-I (%)

DP-2 (%)DP-2 (%)

DP-3 (%)DP-3 (%)

DP-4 + (%)DP-4 + (%)

90⁰C E-E GS-EHE 90°C E-E GS-EHE MaItX MaItX GA GA90 ⁰ C EE GS-EHE 90 ° C EE GS-EHE MaItX MaItX GA GA

26,626.6 28,228.2 28,928.9 29,629.6 jj N. D.N. D. N. D.N. D. 96,296.2 94,994.9 e
ie
i 41,041.0 44,644.6 N. D.N. D. N. D.N. D. 2,02.0 2,82.8 N. D.N. D. N. D.N. D. 53,253.2 51,651.6 N. D.N. D. N. D.N. D. 24,724.7 27,027.0 N. D.N. D. N. D.N. D. 20,120.1 18,618.6 N. D.N. D. N. D.N. D.

Fortsetzungcontinuation

Versuch Nr.
GEH-59Attempt no.
GO-59

GEH-92 GEH-60GO-92 GO-60

1010

1515th

2020th

2525th

3030th

3535

4040

0,100.10 0,140.14 0,370.37 0,350.35 2020th N. D.N. D. 9595 8787 147147 RD.RD. 102102 4747 <1<1 99 33 1010 96,596.5 97,897.8 96,696.6 97,297.2 11,311.3 9,69.6 17,617.6 9,69.6 56,156.1 66,866.8 57,457.4 72,972.9 1,71.7 1,51.5 3,23.2 1,61.6 86,386.3 88,388.3 87,087.0 98,898.8 98,398.3 98,798.7 97,597.5 98,898.8

Protein (%) Aiufno N. (ppm) Ca⁺⁺ (ppm) Filtriergeschwindigkeit (Liter/min/m²)Protein (%) Aiufno N. (ppm) Ca ⁺⁺ (ppm) Filtration speed (liter / min / m ² )

Rückstands-Analysen, TB")Residue analysis, TB ")

Trockensubstanz (%) Stärke (%) Protein (%) Lösliche Bestandteile (%)Dry matter (%) Starch (%) Protein (%) Soluble components (%)

Solubilisierung, TBSolubilization, TB

Gesamtmenge (%)^b) Stärke (%Γ)Total amount (%) ^b ) Starch (% Γ)

Bedingungen:Conditions:

Mit 30 gew.-/gew.-%igem SO₂ gewaschener Maisschrot, verdünnt mit 1 U P. I. THERMAMYL/gTS mit 50 ppm Ca⁺⁺, pH 6,5, erhitzt 2 Stunden auf 90°C, umgewandelt mit 0,14 U GA/g TS, 96 Stunden bei 60⁰C oder 0,2% Malzextrakt, 24 Stunden beiCorn meal washed with 30% by weight SO ₂ , diluted with 1 U PI THERMAMYL / gTS with 50 ppm Ca ⁺⁺ , pH 6.5, heated to 90 ° C for 2 hours, converted with 0.14 U GA / g TS, 96 hours at 60 ⁰ C or 0.2% malt extract, 24 hours at

6O⁰C.6O ⁰ C.

^a) Korrigiert auf eine an löslichen Materialien freie Basis. ^a ) Corrected on a soluble matter free basis.

^b) Umfaßt nicht die beim Vorwaschen verlorenen löslichen Bestandteile (mit Ausnahme von GEH-92). ^b ) Does not include the soluble components lost in the prewash (with the exception of GEH-92).

^c) Es wurde angenommen, daß beim Vorwaschen kein Stärkeverlust auftrat. ^c ) It was assumed that there was no starch loss in the pre-wash.

Beispiel 10Example 10

Schwere Mühlenstärke und eine Stärkeaufschlämmung, aus der das Protein teilweise entfernt worden war (zweiter Hydroclon-Abstrom) wurden unter Anwendung des GS-EHE-Verfahrens umgewandelt, um die Verwendung von naßgemahlenen Stärkeque-lien mit hohem Proteingehalt zu erläutern. Die erhaltenen Ergebnisse sind in den folgenden Tabellen XII, XIII und XIV angegeben.Heavy mill starch and a starch slurry from which the protein had been partially removed (second hydroclone effluent) were converted to use using the GS-EHE process of wet-milled starch sources with a high protein content. The results obtained are given in Tables XII, XIII and XIV below.

Tabelle XIITable XII

Umwandlung von schwerer MühlenstärkeConversion of heavy mill strength

4545

Versuch Nr.
GEH-78 80Attempt no.
GEH-78 80

8282

8383

5050

5555

6060

6565

pH-Wert der Umwandlung in Saccharose Struktur-Trockensubstanz (%)pH of the conversion to sucrose structure dry matter (%)

Hydrolysat-Analysen, TBHydrolyzate analysis, TB

Trockensubstanz (%) Dextrose (%) Protein (%) Amino N. (ppm) Calcium (ppm) Filtriergeschwindigkeit Filtriergeschwindigkeit (Liter/min/m²)Dry matter (%) Dextrose (%) Protein (%) Amino N. (ppm) Calcium (ppm) Filtration speed Filtration speed (liter / min / m ² )

Rückstands-Analysen TB^a)Residue analysis TB ^a )

Trockensubstanz (%) Stärke (%) Protein (%) Lösliche Bestandteile (%)Dry matter (%) Starch (%) Protein (%) Soluble components (%)

4,34.3 4,34.3 33,133.1 33,133.1 33,533.5 33,033.0 94,494.4 94,394.3 0,480.48 0,480.48 190190 180180 4848 5555 77th 66th 55 44th 94,594.5 95,095.0 9,09.0 8,48.4 71,271.2 72,872.8 0,80.8 1,21.2

4,3 5,5 5,5 5,5 33,3 33,1 33,1 33,34.3 5.5 5.5 5.5 33.3 33.1 33.1 33.3

33,5 33,2 33,0 33,733.5 33.2 33.0 33.7

94,7 93,5 93,5 93,694.7 93.5 93.5 93.6

0,49 0,40 0,40 0,400.49 0.40 0.40 0.40

205 95 90 95205 95 90 95

38 64 60 6038 64 60 60

10 2 7 710 2 7 7

7 15 57 15 5

96,0 92,6 96,0 95,796.0 92.6 96.0 95.7

7,8 10,6 6,5 7,67.8 10.6 6.5 7.6

72,9 68,6 72,7 72,272.9 68.6 72.7 72.2

1,5 2,5 0,9 0,81.5 2.5 0.9 0.8

Fortsetzungcontinuation

Versuchattempt Nr.No. 8282 7979 8181 8383 GEH-78GO-78 8080 90,290.2 90,090.0 89,689.6 90,190.1 90,490.4 89,689.6 99,199.1 98,898.8 99,299.2 99,199.1 99,099.0 99,099.0

Solubilisierung TBSolubilization TB

Gesamtmenge (%)
Stärke (%)
Bedingungen:Total quantity (%)
Strength (%)
Conditions:

30 gew.-/gcw.-%ige gewaschene Mühlenstärke, verdünnt mit 1 U P. I. THERMAMYL/g TS mit 50 ppm Ca⁺ \ pH 6,5, erhitzt innerhalb von 2 Stunden von 6O⁰C auf 75⁰C, wärmebehandelt bei 100⁰C. Umgewandelt mit 0,14 U GA/gTS, pH 4,3,96 Stunden bei 60⁰C oder 0,18 U GA/g TS, pH 5,5, 96 Stunden bei 60⁰C.30 wt .- / gcw .-% strength washed mill starch, diluted with 1 U PI THERMAMYL / g TS with 50 ppm Ca ⁺ \ pH 6.5, heated within 2 hours from 6O ⁰ C to 75 ⁰ C, heat-treated at 100 ⁰ C. Transformed with 0.14 U GA / GTS, pH 4,3,96 hours at 60 ⁰ C or 0.18 U GA / g TS, pH 5.5, for 96 hours at 60 ⁰ C.

^a) Korrigiert auf eine an löslichen Materialien freie Basis. ^a ) Corrected on a soluble matter free basis.

^h) Enthält nicht die beim Vorwaschen entfernten löslichen Bestandteile. ^h ) Does not contain the soluble components removed during pre-washing.

"·■) Es wurde angenommen, daß beim Vorwaschen kein Stärkeverlust auftrat."· ■) It was assumed that there was no starch loss in the pre-wash.

Tabelle XIIITable XIII

Dextrose-Hydrolysate, hergestellt aus dem zweiten Hydrocion-AbstromDextrose hydrolysates made from the second hydrocion effluent

Versuch Nr.Attempt no.

DU-I DU-2 DU-3 DU-4 DU-5DU-I DU-2 DU-3 DU-4 DU-5

IX IX IX 3X 3XIX IX IX 3X 3X

P. I. THERMAMYL P. I. THERMAMYL

11111 5,5 6,5 5,5 6,5 5,5 50 50 50 5011111 5.5 6.5 5.5 6.5 5.5 50 50 50 50

0,14 0,14 0,14 0,14 0,18 4,3 4,3 4,3 4,3 5,50.14 0.14 0.14 0.14 0.18 4.3 4.3 4.3 4.3 5.5

H₂O-Vorwaschen VerdünnenH ₂ O pre-wash, dilute

Enzymenzyme

Dosis U/g TS pH-Wert Zugegebenes Ca⁺⁺ (ppm TB)Dose U / g TS pH value Added Ca ⁺⁺ (ppm TB)

Umwandlung in SaccharoseConversion to sucrose

GA (U/g TS) pH-WertGA (U / g TS) pH value

Hydrolysat-Anafysen, TBHydrolyzate analyzes, TB

Trockensubstanz (%) Dextrose (%) Protein (%) Amino N. (ppm) Ca⁺⁺ (ppm TB) Filtriergeschwindigkeit (Liter/min/m²)Dry matter (%) Dextrose (%) Protein (%) Amino N. (ppm) Ca ⁺⁺ (ppm TB) Filtration speed (liter / min / m ² )

Gesamtmenge der unlöslichen Materialien (% TB)Total amount of insoluble materials (% TB)

Bedingungen:Conditions:

30%iger gewaschener zweiter Hydrocion-Abstrom, dosiert und erhitzi innerhalb von 2 Stunden auf 60 bis 75°C, wärmebehandelt bei 100⁰C, umgewandelt mit GA - 96 Stunden bei 60⁰C.30% washed Hydrocion second effluent dosed and erhitzi within 2 hours at 60 to 75 ° C, heat-treated at 100 ⁰ C, converted with GA - 96 hours at 60 ⁰ C.

33,733.7 33,733.7 32,932.9 32,932.9 32,732.7 94,894.8 94,494.4 94,694.6 65,165.1 95,095.0 0,190.19 0,240.24 0,160.16 0,220.22 0,130.13 6060 8585 5555 7575 2020th 6060 5858 5858 6262 6868 55 33 99 55 66th 2,82.8 3,13.1 2,82.8 3,03.0 2,72.7

1515th

Tabelle XIVTable XIV

Malzumwandlung des zweiten Hydroclon-AbstromsMalt conversion of the second hydroclone effluent

Versuch Nr.Attempt no.

LK-106 LK-107 LK-108 GEH-22LK-106 LK-107 LK-108 GEH-22

0,90.9 0,90.9 0,80.8 1,31.3 57,057.0 56,656.6 58,058.0 54,754.7 20,820.8 ιο,υιο, υ ineine
1O,J1O, J. 22,822.8 21,321.3 23,923.9 22,722.7 21,221.2 0,470.47 0,100.10 0,090.09 0,160.16

Vorwaschen - 6X-H₂O 12X-H₂O 0,05% SO₂ Prewash - 6X-H ₂ O 12X-H ₂ O 0.05% SO ₂

Entfernte lösliche Bestandteile (% TB) - 0,7 0,7 0,9Soluble matter removed (% TB) - 0.7 0.7 0.9

Hydrolysat-Analysen, TBHydrolyzate analysis, TB

Trockensubstanz (%) 31,0 31,0 31,0 30,9Dry matter (%) 31.0 31.0 31.0 30.9

D. E. (%) 43,4 43,6 42,1 43,1D. E. (%) 43.4 43.6 42.1 43.1

DP-I (%)DP-I (%)

DP-2 (%)DP-2 (%)

DP-3 (%) 20 DP-4 + (%)DP-3 (%) 20 DP-4 + (%)

Protein (%)Protein (%)

Solubilisierung, TB
Gesamtmenge (%) 96,9 96,8 96,7 96,8Solubilization, TB
Total amount (%) 96.9 96.8 96.7 96.8

Bedingungen:Conditions:

30 gew.-/gew.-%iger gewaschener zweiter Hydroclon-Abstrom, verdünnt mit 1 P. I. THERMA-MYL U/g TS., pH i,5, mit 50 ppm zugegebenen Calcium, die Temperatur wurde innerhalb von 2 Stunden auf60 bis 75⁰C erhöht, wärmebehandelt bei 100⁰C, umgewandelt mit0,2% Gersten-30% w / w% washed second hydroclone effluent, diluted with 1 PI THERMA-MYL U / g TS., PH 1.5, with 50 ppm added calcium, the temperature increased to 60 to 75 within 2 hours ⁰ C increased, heat treated at 100 ⁰ C, converted with 0.2% barley

stärkeextrakt, pH 5,5, 6O⁰C, 24 Stunden.starch extract, pH 5.5, 6O ⁰ C, 24 hours.

Beispiel 11Example 11

Leichte Mühlenstärke wurde unter Anwendung des 75°C-GS-EHE-Verfahrens umgewandelt durch Variieren von verschiedenen Verfahrensparametern.Light mill starch was converted by varying using the 75 ° C GS-EHE method of various process parameters.

Die folgende Tabelle XV erläutert den Einfluß der Zeit der Umwandlung in Saccharose auf die Hydrolysat-Zusammensetzung. Die Tabelle XVI erläutert den Einfluß auf den pH-Wert der Saccharoseumwandlung. Die Tabelle XVII, Versuch GEH-71, erläutert den Einfluß der zusätzlichen Zugabe von a-Amylase auf die Stufe der Umwandlung in Saccharose. In dem Versuch GEH-72 wird MAXAMYL anstelle von THERMAMYL als a-Amylase verwendet. Der Versuch GEH-73 erläutert das Erhitzen der verdünnten Stärke auf 121⁰C anstatt auf 'ψ den Standardwert von 100⁰C. Die leichte Mühlenstärke wurde auch mit einer Kombination von THERM AM YLThe following Table XV illustrates the influence of the time of conversion to sucrose on the hydrolyzate composition. Table XVI explains the influence on the pH of the sucrose conversion. Table XVII, experiment GEH-71, illustrates the influence of the additional addition of α-amylase on the stage of conversion to sucrose. In the experiment GEH-72 MAXAMYL is used as a- amylase instead of THERMAMYL. The experiment GEH-73 illustrates the heating of the thinned starch to 121 ⁰ C instead of 'ψ the default value of 100 ⁰ C. The light mill starch was also with a combination of AM YL THERM

und Glucoamylase bei einer Temperatur von 60⁰C umgewandelt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle XVII^l angegeben. and converted to glucoamylase at a temperature of 60 ^° C. The results are given in Table ^l XVII.

Tabelle XVTable XV

Umwandlung von leichter Mühlenstäike: Einfluß der Zeit der Umwandlung in SaccharoseConversion of light mills: influence of the time of conversion to sucrose

Dextrose, Protein, Amino Nit,Dextrose, protein, amino nit,

% TS % TB % TB ppm TB% TS% TB% TB ppm TB

pH-Wert der Umwandlung in Saccharose 4,3 5,5 4,3 5,5 4,3 5,5 4,3 5,5pH of conversion to sucrose 4.3 5.5 4.3 5.5 4.3 5.5 4.3 5.5

Zeit der Umwandlung in SaccharoseTime of conversion to sucrose

24 Stunden
48 Stunden
72 Stunden
96 Stunden
115 Stunden 31,2 30,9 94,5 94,2 0,50 0,42 190 10024 hours
48 hours
72 hours
96 hours
115 hours 31.2 30.9 94.5 94.2 0.50 0.42 190 100

Bedingungen:Conditions:

30 gew.-/gew.-%ige gewaschene gemahlene Stärke (3X-H₂O), verdünnt mit 1 U P. 1. THERMAMYL/gTS mit 50 ppm CV ', pH 6,5, erhitzt innerhalb von 2 Stunden von 60 auf 75°C, wärmebehandelt bei 100⁰C. Umgewandelt mit 0,14 G A/g TS bei pH 4,3, 96 Stunden bei 60⁰C oder 0,18 U GA/g TS, bei pH 5,5, 96 Stunden bei 60⁰C. if Versuch Nr. GEH-74 für pH 4,3, Versuch Nr. GEH-75 <Pr pH 5,5.30 wt .- / wt .-% washed ground starch (3X-H ₂ O), diluted with 1 U P. 1. THERMAMYL / gTS with 50 ppm CV ', pH 6.5, heated within 2 hours of 60 to 75 ° C, heat-treated at 100 ⁰ C. Transformed with 0.14 GA / g TS at pH 4.3, for 96 hours at 60 ⁰ C or 0.18 U GA / g TS, at pH 5.5, 96 hours at 60 ^° C. if experiment no. GEH-74 for pH 4.3, experiment no. GEH-75 <Pr pH 5.5.

30,630.6 30,730.7 90,290.2 86,186.1 0,410.41 0,350.35 130130 8080 31,331.3 30,830.8 93,993.9 91,991.9 0,460.46 0,380.38 160160 8080 30,930.9 30,830.8 94,794.7 93,693.6 0,470.47 0,400.40 170170 8585 31,231.2 30,930.9 945945 93,493.4 0,490.49 0,410.41 180180 8585

Tabelle XVITable XVI

Umwandlung von leichter Mühlenstärke: Einfluß des pH-Wertes der Umwandlung in SaccharoseConversion of light mill starch: Influence of the pH value of the conversion into Sucrose

Versuch Nr.Attempt no.

GEH-66 GEH-70 GEH-67 GEH-6GO-66 GO-70 GO-67 GO-6

Vorwaschen Entfernte lösliche Best-Teile Struktur-Trockensubstanz pH-Wert der Umwandl. in Sacch.Prewash Removed soluble best parts Structure dry matter pH value of the conversion. in Sacch.

Hydrolysat-Analysen, TBHydrolyzate analysis, TB

Trockensubstanz (%) Dextrose (%) Protein (%) Amino N. (ppm) Filtriergeschw. (Liter/min/m²)Dry matter (%) Dextrose (%) Protein (%) Amino N. (ppm) Filtration speed. (Liter / min / m ² )

R-ickstands-Analysen, TB^a)Residue analyzes, TB ^a )

Trockensubstanz (%) Stärke (%) Protein (%) Lösliche Bestandteile (%)Dry matter (%) Starch (%) Protein (%) Soluble components (%)

Solubilisierung, TBSolubilization, TB

Gesamtmenge (%)^b) Stärke (%)')Total amount (%) ^b ) Starch (%) ')

Bedingungen:Conditions:

30 gew.-/gew.-%ige gewaschene Mühlenstärke, verdünnt mit 1 U P. I. THERMAMYL/g TS mit 50 ppm Ca*\ pH 6,5, erhitzt innerhalb von 2 Stunden von 60 auf 75°C, wärmebehandelt bei 100⁰C, umgewandelt mit 0,14 U GA/gTS, bei pH 4,3,96 Stunden bei 60⁰C oder 0,18 U GA/g TS bei pH 5,5, 96 Stunden bei 6O⁰C.30 wt .- / wt .-% strength washed mill starch, diluted with 1 U PI THERMAMYL / g TS with 50 ppm Ca * \ pH 6.5, heated within 2 hours from 60 to 75 ° C, heat-treated at 100 ⁰ C converted with 0.14 U GA / GTs, at pH 4,3,96 hours at 60 ⁰ C or 0.18 U GA / g TS at pH 5.5, for 96 hours at 6O ⁰ C.

^a) Korrigiert auf eine an löslichem Material freie Basis. ^a ) Corrected on a soluble material free basis.

^h) Umfaßt nicht die beim Vorwaschen entfernten löslichen Bestandteile. ^h ) Does not include the soluble components removed during the pre-wash.

^ci Fs wurde angenommen, daß beim Vorwaschen keine Stärke entfernt wurde. ^c i Fs it was assumed that the prewash did not remove any starch.

Tabelle XVlITable XVlI

Umwandlung von leichter Mühlenstärke: Einfluß der ar-Amylase und der Wärrr.ebehandlungstemperatur Conversion of light mill starch: influence of ar-amylase and heat treatment temperature

3X-H₂O3X-H ₂ O 3X-H₂O3X-H ₂ O 3X-H₂O3X-H ₂ O 3X-H₂ 3X-H ₂ 8,88.8 9,39.3 8,78.7 9,39.3 32,732.7 30,530.5 33,133.1 30,530.5 5,55.5 5,55.5 4,34.3 4,34.3 33,833.8 31,031.0 34,034.0 30,930.9 94,294.2 93,593.5 95,395.3 94,794.7 0,290.29 0,470.47 0,380.38 0,50.5 6060 110110 160160 215215 33 33 66th 77th 96,996.9 95,895.8 97,897.8 96,596.5 10,610.6 4,74.7 11,611.6 4,04.0 70,070.0 75,975.9 67,967.9 76,476.4 2,32.3 6,06.0 2,02.0 5,45.4 90,990.9 91,991.9 91,391.3 92,092.0 98,998.9 99,699.6 98,898.8 99,699.6

Versuch Nr.Attempt no. GEH-72^b)GEH-72 ^b ) GEH-73")GEH-73 ") GEH-71^a)GEH-71 ^a ) 4,34.3 4,34.3 pH-Wert der Umwandlung in SaccharosepH of conversion to sucrose 5,55.5 Hydrolysat-Analysen, TBHydrolyzate analysis, TB 30,630.6 31,431.4 Trockensubstanz (%)Dry matter (%) 31,031.0 94,994.9 90,790.7 Dextrose (%)Dextrose (%) 93,593.5 0,490.49 0,620.62 Protein (%)Protein (%) 0,560.56 200200 450450 Amino N. (ppm)Amino N. (ppm) 135135 217217 109109 Ca^{+ v} (ppm)Ca ^{+ v} (ppm) 6969 <1<1 44th FiltrisrgeschwindigkeitFiltration Rate 66th <1<1 33 Filtriergeschwindigkeit (Liter/min/m²)Filtration speed (liter / min / m ² ) 44th Rückstands-Analysen TB^d)Residue analyzes TB ^d ) verworfendiscarded 95,595.5 Trockensubstanz (%)Dry matter (%) 95,895.8

Fortsetzungcontinuation

Versuch Nr.Attempt no. GEH-72^b)GEH-72 ^b ) GEH-Walk GEH-71^a)GEH-71 ^a ) verworfendiscarded 12,112.1 3,93.9 verworfendiscarded 71,771.7 76,976.9 verworfendiscarded 6,66.6 6,16.1 verworfendiscarded 91,591.5 91,991.9 verworfendiscarded 98,998.9 99,699.6

Stärke (%) Protein (%) 10 Lösliche Bestandteile (%)Starch (%) Protein (%) 10 Soluble Ingredients (%)

Solubilisierung, TBSolubilization, TB

Gesamtmenge (%)') _I5 Stärke (%)Total amount (%) ') _I5 Starch (%)

^a) 0,5 U P. I. THERMAMYL/g TS, zugegeben während der Umwandlung in Saccharose. ^a ) 0.5 U PI THERMAMYL / g TS, added during the conversion to sucrose.

^b) Verdünnt mit 3 U MAXAMYL/g TS - 200 ppm TS Ca⁺⁺. ^b ) Diluted with 3 U MAXAMYL / g TS - 200 ppm TS Ca ⁺⁺ .

^c) 15 min wärmebehandeh bei 121°C. ^c ) Heat treatment for 15 min at 121 ° C.

^d) Korrigiert auf eine an löslichen Materialien freie Basis. ^d ) Corrected on a soluble matter free basis.

^e) Umfaßt nicht die beim Vorwaschen entfernten löslichen Bestandteile. ^e ) Does not include the soluble components removed during the pre-wash.

^r) Es wurde angenommen, daS beim Vorwäschen kein Stärkeveriust auftrat. ^r ) It was assumed that no starch was lost during the pre-wash.

Tabelle XVIIITable XVIII

Umwandlung von leichter Mühlenstärke unter Anwendung des 60°C-VerfahrensConversion of light mill starch using the 60 ° C process

Bedingungen:Conditions:

15'¹MgC gewaschene Mühlenstärke, umgewandelt mit 2 U P. I. THERMAMYL/g TS - 0,25 U15 ' ¹ MgC washed mill starch, converted with 2 U PI THERMAMYL / g TS - 0.25 U

GA/g TSGA / g TS

^a) Korrigiert aul· eine an löslichen Materialien freie Basis. ^a ) Corrects on a base free of soluble materials.

^b) Umfaßt nicht die beim Vorwaschen entfernten löslichen Bestandteile. ^b ) Does not include the soluble components removed during the pre-wash.

^c) Es wurde angenommen, daß beim Vorwaschen kein Stärkeverlust auftrat. ^c ) It was assumed that there was no starch loss in the pre-wash.

Beispiel 12 * Example 12 *

Unter Anwendung des 75°C-GS-EHE-Verfahrens wurde Maisschrot (Maisgrieß) umgewandelt. Eine ChargeCorn grits (maize grits) were converted using the 75 ° C GS-EHE process. One batch

wurde unter Verwendung von Süßwasser vorgewaschen und dann wurde die zweite unter Verwendung einer 0,l%igen SO₂-Lösung vorgewaschen. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle XIX angegeben.was prewashed using fresh water and then the second was prewashed using a _{0.1% SO 2} solution. The results are given in Table XIX below.

Versuch Nr.Attempt no. GEH-77GO-77 GEH-76GO-76 15,215.2 Struktur-Trockensubstanz (%)Structure dry matter (%) 15,215.2 24 Std. bei pH 5,524 hours at pH 5.5 Digerier-BedingungenDigerier conditions 96 Std. bei pH 5,596 hours at pH 5.5 24 Std. bei pH 4,324 hours at pH 4.3 Hydrolysat-Analysen, TBHydrolyzate analysis, TB 10,010.0 Trockensubstanz (%)Dry matter (%) 9,39.3 94,494.4 Dextrose (%)Dextrose (%) 93,793.7 1,31.3 Protein (%)Protein (%) 1,51.5 450450 Amino N. (ppm)Amino N. (ppm) 600600 3333 Ca" (ppm)Ca "(ppm) 3333 1414th Filtriergeschwindigkeit (Liter/min/m²)Filtration speed (liter / min / m ² ) 1212th Rückstands-Analysen, TB^a)Residue analyzes, TB ^a ) 93,493.4 Trockensubstanz (%)Dry matter (%) 94,294.2 81,781.7 Stärke (%)Strength (%) 81,781.7 15,415.4 Protein (%)Protein (%) 14,414.4 0,20.2 Lösliche Bestandteile (%)Soluble Ingredients (%) 00 Solubilisierung, TBSolubilization, TB 56,156.1 Gesamtmenge¹¹)Total quantity ¹¹ ) 52,752.7 61,761.7 Stärke (%)Strength (%) 58,758.7

Tabelle XIXTable XIX

Vergleich zwischen dem Waschen des Maisschrotes mit H₂O und SO₂ Comparison between washing the corn meal with H ₂ O and SO ₂

Vorwaschen Typ des Vorwaschens ,Prewash type of prewash,

H₂O 0,1% SO₂ H ₂ O 0.1% SO ₂

Lösliche Kornbestandteile (%) TB 2,2 3,4Soluble grain components (%) TB 2.2 3.4

Hydrolysat-Analysen ¹⁰ Hydrolyzate analyzes ¹⁰

■■■■ % TS% TS

: Dextrose (%) TB: Dextrose (%) TB

! Protein (%) TB u^j „,jj _]5 ! Protein (%) TB u ^ j ", jj _{] 5}

ι Amino N (ppm) TBι Amino N (ppm) TB

Ca⁺⁺ (ppm TB) j Filtriergeschwindigkeit (Liter/min/m²)Ca ⁺⁺ (ppm TB) j Filtration speed (liters / min / m ² )

29,4429.44 29,5029.50 92,292.2 95,495.4 0,250.25 0,350.35 5353 112112 225225 173173 4,34.3 10,410.4 95,895.8 95,595.5 63,363.3 62,962.9 13,113.1 11,011.0 7.17.1 1,71.7 1,81.8 1,41.4

EPC-Analysen·¹) 20EPC analysis ¹ ) 20

%TS% TS

Protein (% TB)Protein (% TB)

Stärke (% TB) >„,. , .,„ _2S Strength (% TB)>",. ,., " _2S

Lösliche Bestandteile 1% TB)Soluble constituents 1% TB)

Nicht-umgewandelte Stärke (% TB)")Unconverted starch (% TB) ")

Bedingungen:')Conditions:')

30% Schrot (Grit Nr. 1,6/3/74), verdünnt mit 1 U P. I. THERMAMYL/g TS., pH 6,5 mit 200 ppm 3030% grist (Grit No. 1,6 / 3/74), diluted with 1 U P. I. THERMAMYL / g TS., PH 6.5 with 200 ppm 30

Ca⁺⁺, .lach einem Programm erhitzt von 60 auf 75°C, wärmebehandelt bei 100⁰C, umgewandelt mit 0,14 U GA/f TS, be' pH 4,3, 96 Stunden bei 6O⁰C.Ca ⁺⁺ .lach, a program heated from 60 to 75 ° C, heat-treated at 100 ⁰ C, converted with 0.14 U GA / f TS, 'pH be 4.3, for 96 hours at 6O ⁰ C.

^a) Werte korrigiert auf eine an löslichen Materialien freie Basis. ^a ) Values corrected on a soluble material free basis.

^h) Bezogen auf in EPC zu ickgewonnene Stärke, es wurde angenommen, daß beim Waschen ^h ) In relation to the starch recovered in EPC, it was assumed that during washing

a kein Verlust auftrat. 35 a no loss occurred. 35

') Dosierungen bezogen auf StärRctiücRciiSubsiäiU. ') Dosages based on starch rate subsiäiU.

Beispiel 13Example 13

Primärstärke wurde unter Anwendung des nachfolgend beschriebenen Verfahrens in ein lösliches Stärkehy- 40 drolysat umgewandelt:Primary starch was converted into a soluble starch hy- 40 using the procedure described below drolysate converted:

Es wurde eine 30gew -/gew.-%ige wäßrige Aufschlämmung hergestellt, der pH-Wert wurde auf 6,2 eingestellt, es wurden 300 ppm Calciumionen zugegeben und die Aufschlämmung wurde mit 1,2 U a-Amylase/g TS (MAMA-MYL, P/ff = 0,9) inokuliert. Die Aufschlämmung wurde auf 88°C erhitzt und 2 Stunden lang bei dieser Temperaturgehalten. Dann wurde sie auf 127°C erhitzt und 15 min lang bei dieser Temperatur gehalten. Die Aufschläm- 45 mung wurde anschließend auf 85°C abgekühlt, mit 0,6 U α-Amylase/g TS inokuliert und 3 Stunden lang bei dieser Temperatur gehalten. Dann wurde sie auf 60⁰C abgekühlt, wobei genügend Süßwasser zugegeben wurde, um den Feststoffgehalt auf 25 Gew.-/Gew.-% zu verringern, der pH-Wert wurde auf 4,3 eingestellt und die Aufschlämmung wurde mit 0,18 U Glucoamylase/gTS inokuliert. Diese Bedingungen wurden 95 Stunden lang aufrechterhalten. Das Hydrolysat enthielt 95,9% Dextrose, TB, es wies einen Proteingehalt vor auf 0,08% TB und es 50 enthielt eine Gesamtmenge von 1,4% TB unlösliche Materialien.A 30 wt / wt% aqueous slurry was prepared, the pH was adjusted to 6.2, 300 ppm calcium ions were added and the slurry was treated with 1.2 U α-amylase / g TS (MAMA- MYL, P / ff = 0.9) inoculated. The slurry was heated to 88 ° C and held at that temperature for 2 hours. It was then heated to 127 ° C and held at that temperature for 15 minutes. The slurry was then cooled to 85 ° C., inoculated with 0.6 U α-amylase / g DM and kept at this temperature for 3 hours. Then it was cooled to 60 ⁰ C, wherein sufficient fresh water was added to reduce the solids content to 25 wt .- / wt .-%, the pH value was adjusted to 4.3 and the slurry was mixed with 0.18 U Glucoamylase / gTS inoculated. These conditions were maintained for 95 hours. The hydrolyzate contained 95.9% dextrose, TB, it had a protein content of 0.08% TB, and it contained a total of 1.4% TB insoluble materials.

Claims (1)

Patentansprüche:Patent claims: 1. Verfahren zur selektiven Inaktivierung der proteolytischen Enzymaktivität in einem bakteriellen a- | Amylaseenzympräparat, dadurch gekennzeichnet, daß man bei1. Method for the selective inactivation of the proteolytic enzyme activity in a bacterial a- | Amylase enzyme preparation, characterized in that at A) Bacillus subtilis-ör-AmylasepräparatenA) Bacillus subtilis-ör-amylase preparations a) einen Maissirup mit einem D. E. von bis zu 50 in das Präparat einführt,a) introduces a corn syrup with a D.E. of up to 50 into the preparation, b) die dabei erhaltene Mischung auf eine Temperatur innerhalb des Bereichs von 70 bis 90°C erhitzt ίο undb) the mixture obtained in this way is heated to a temperature within the range from 70 to 90.degree ίο and c) die Temperatur für einen solchen Zeitraum aufrechterhält, der ausreicht um das Verhältnis von proteolytischer Enzymaktivitäi (U/g) zu amylolytischer Enzymaktivität (U/g) auf weniger als 2 einzustellen, und beic) maintains the temperature for a period of time sufficient by the ratio of adjust proteolytic enzyme activity (U / g) to amylolytic enzyme activity (U / g) to less than 2, and at