DE2635558A1 - SOMATOSTATINALOGS - Google Patents
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Description
Somatostatin ist ein Tetradekapeptid mit der Struktur:Somatostatin is a tetradecapeptide with the structure:
S— SS— S
Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OHAla-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH
und inhibiert bekanntlich die Wachstumshormonfreisetzung. Somatostatin selbst besitzt eine kurzzeitige Wirkung, da es unter anderem durch die in vivo vorhandenen Aminopeptidasen und Carboxypeptidasen inaktiviert wird. Eine Teillösung dieses Problems der kurzzeitigen Wirkung wurde bisher durch Herstellung von Somatostatinderivaten mit geringer Löslichkeit erzielt, wodurch eine langsame Freigabe beiand is known to inhibit growth hormone release. Somatostatin itself has a short-term effect because it is inactivated, among other things, by the aminopeptidases and carboxypeptidases present in vivo. A partial solution this problem of the short-term effect has so far been reduced by producing somatostatin derivatives with Achieved solubility, resulting in slow release
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subkutaner Injektion gewährleistet wird. Wenn die Derivate jedoch einmal in Lösung gegangen sind, widerstehen sie der Inaktivierung durch Aminopeptidasen und Carboxypeptidasen nicht mehr als Somatostatin selbst. Die vorliegende Erfindung stellt Somatostatinanaloge mit der biologischen Wirksamkeit von Somatostatin und längerer Wirkungsdauer sowie ein neues Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen zur Verfügung.subcutaneous injection is ensured. However, once the derivatives go into solution, they resist Inactivation by aminopeptidases and carboxypeptidases no longer than somatostatin itself. The present invention provides somatostatin analogs with the biological effectiveness of somatostatin and longer duration of action as well a new process for the preparation of these compounds is available.
Gegenstand der Erfindung sind somit neue, eine längere Wirkung als natürlich vorkommendes Somatostatin aufweisende Somatostatinanaloge der nachstehenden allgemeinen Formeln:The invention thus relates to new somatostatin which have a longer effect than naturally occurring somatostatin Somatostatin analogs of the following general formulas:
CH2-X : _ *-cH2 jCH 2 -X : _ * -cH 2 j
R-CH-C-Lys-R"'-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 jR-CH-C-Lys-R "'- Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1 j
CH2-X-CH 2 -X-
R-CH-C-Lys-R1" -Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 IR-CH-C-Lys-R 1 "-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1 I
in denen:in which:
X CH2, S, S1 SO2 oder [X]n (wobei η = 0),X CH 2 , S, S 1 SO 2 or [X] n (where η = 0),
Y CH2, S, S, SO2 oder [Y]n (wobei η = 0),Y CH 2 , S, S, SO 2 or [Y] n (where η = 0),
R H, NH2 oder R"NH, wobei R" Ala-Gly-, ein Nieder-Acylrest mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen oder ein Aroylrest mit 7 bis 21 Kohlenstoffatomen ist,RH, NH 2 or R "NH, where R" is Ala-Gly-, a lower acyl radical with 2 to 6 carbon atoms or an aroyl radical with 7 to 21 carbon atoms,
R1 H oder COOH undR 1 H or COOH and
R"1 Asparagin, Alanin oder cc-Aminobuttersäure sind, wobei nicht beide Reste X und Y Heteroatome darstellen.R " 1 are asparagine, alanine or cc-aminobutyric acid, where both radicals X and Y do not represent heteroatoms.
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Die erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen unterscheiden sich von Somatostatin dahingehend, daß die beiden benachbarten Heteroatome der Disulfidbrücke (-S-S-) des Cystinaminosäurerests des Somatostatins in der nachstehenden Strukturformel:The somatostatin analogs according to the invention differ from somatostatin in that the two neighboring Heteroatoms of the disulfide bridge (-S-S-) of the cystine amino acid residue of somatostatin in the following structural formula:
Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OHAla-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH
entfallen oder durch die stabileren, C und S enthaltenden Gruppen, wie -CH2-CH2-, -S-, -CH2-S-, -S-CH2-, -(omitted or by the more stable groups containing C and S, such as -CH 2 -CH 2 -, -S-, -CH 2 -S-, -S-CH 2 -, - (
0 0 0
-S-, -CH9-S-, -S-CH9-, -SO9-, -CH9-SO9- oder -SO9-0 0 0
-S-, -CH 9 -S-, -S-CH 9 -, -SO 9 -, -CH 9 -SO 9 - or -SO 9 -
C- C. £. C. C- C-C-C- C. £. C. C- C-C-
welche keine benachbarten Heteroatome aufweisen, ersetzt sind. Beispiele für die erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen sind jene Verbindungen, bei welchen Ala-Gly und die Aminogruppe von Cys des Somatostatins wegfallen und durch ein Wasserstoffatom, eine Aminogruppe, einen Nieder-Acylaininorest (wobei der Nieder-Acylrest 2 bis 6 Kohlenstoffatome aufweist, wie im Falle der Acetylaminogruppe) oder einen Aroylaminorest (wobei der Aroylrest 7 bis 21 Kohlenstoffatome aufweist, wie im Falle der Benzoylaminogruppe) ersetzt ist, sowie jene Verbindungen, bei welchen ein Wasserstoffatom an die Stelle der C-endständigen Carboxylgruppe des Cystins tritt. Weitere Beispiele für die erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen sind jene, bei welchen das in 8-Stellung befindliche L-Tryptophan (Trp) durch D-Tryptophan (D-Trp) ersetzt ist.which have no neighboring heteroatoms are replaced. Examples of the somatostatin analogs of the invention are those compounds in which Ala-Gly and the amino group of Cys of the somatostatin are omitted and by a hydrogen atom, an amino group, a lower acyl amino group (the lower acyl radical having 2 to 6 carbon atoms, as in the case of the acetylamino group) or one Aroylamino radical (where the aroyl radical has 7 to 21 carbon atoms has, as in the case of the benzoylamino group) is replaced, as well as those compounds in which a hydrogen atom takes the place of the C-terminal carboxyl group of cystine. Further examples of the invention Somatostatin analogs are those in which the 8-position L-tryptophan (Trp) is replaced by D-tryptophan (D-Trp) is replaced.
Die bevorzugten erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen besitzen die nachstehenden allgemeinen Formeln:The preferred somatostatin analogs according to the invention have the following general formulas:
irr _y V-PH H2 X Y t.li2 ,irr _y V-PH H 2 XY t.li 2 ,
H-C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R'H-C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R '
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CH9-XCH 9 -X
R-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 R-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1
in denen:in which:
X-Y = CH2-CH2, R=H, R*=- H, oderXY = CH 2 -CH 2 , R = H, R * = - H, or
X-Y __ CH2-CH2, R=KH2 und R1= COOH oderXY __ CH 2 -CH 2 , R = KH 2 and R 1 = COOH or
X-Y = CH2-S, R= H und R1= COOH oderXY = CH 2 -S, R = H and R 1 = COOH or
X-Y - S-CH2, R= H und R1= COOH.XY - S-CH 2 , R = H and R 1 = COOH.
Bei weiteren bevorzugten erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen sind X-Y CH2-CH2, R ein Wasserstoffatom und R' ein Wasserstoffatom oder eine Carboxylgruppe. Die Struktur dieser weiteren bevorzugten Somatostatinanalogen wird somit durch die nachstehenden Formeln und Bezeichnungen wiedergegeben: In further preferred somatostatin analogs according to the invention, XY CH 2 —CH 2 , R is a hydrogen atom and R 'is a hydrogen atom or a carboxyl group. The structure of these further preferred somatostatin analogs is thus represented by the following formulas and designations:
CH2-CH2 CH 2 -CH 2
H^-C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOHH ^ -C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH
mit der Bezeichnung Cyclo (ω-Asu-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser) oder Des(Ala ,GIy )-desamino[Cys ]dicarba^' somatostatin; with the designation Cyclo (ω-Asu-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser) or Des (Ala, GIy) -desamino [Cys] dicarba ^ 'somatostatin;
CH2-CH2 :-NH-CH-(CH 2 -CH 2 : -NH-CH- (
CH2-C-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH , mit der Bezeichnung Des(Ala ,GIy )-desamino[Cys^]dicarba»CH 2 -C-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH, with the designation Des (Ala, GIy) -desamino [Cys ^] dicarba »
[D-Trp ]-somatostatin und[D-Trp] somatostatin and
CH0-CH9 CH 0 -CH 9
2"S~2 "S ~
mit der Bezeichnung Des(AIa , GIy )-desamino[Cys^]-descarboxy[Cys ]-dicarba·^» -[D-Trp ]-soma to statin.with the designation Des (AIa, GIy) -desamino [Cys ^] - descarboxy [Cys ] -dicarba ^ "- [D-Trp] -soma to statin.
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Die erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen unterscheiden sich von Somatostatin dahingehend, daß die KomponenteThe somatostatin analogs according to the invention differ differ from somatostatin in that the component
Cys14-OHCys 14 -OH
des Somatostatins entfällt und durch die Komponente I:of somatostatin is omitted and component I:
rH2r H 2
R-CH-C- -NH-CH-R1 ! (i)R-CH-C- -NH-CH-R 1! (i)
in der X, Y, R und R1 jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung haben, ersetzt ist . Die neuen Somatostatinanalogen, welche cc-Aminokorksäure enthalten, z.B. Des(Ala , GIy )-desamino[Cys jdicarba^' -somatostatin, Des(Ala , GIy )-desamino[Cys Jdicarba^' -[D-Trp ]-somatostatin und Des-(AIa1, Gly2)-desamino[Cys^]descarboxy[Cys ]dicarba^f [D-Trp ]-somatostatin, besitzen keine N-endständige Aminogruppe; eine der von der enzymatischen Spaltung des Moleküls durch Aminopepfcidasen betroffenen Gruppen entfällt somit. Die Somatostatinanalogen, welche, ^j -Aminoheptansäure enthalten, z.B. Des(Ala , GIy )-desamino[Cys Jdescarboxy-[Cys Jdicarba5' -somatostain und Des(Ala ,GIy )-desamino-[Cys^]descarboxy[Cys Jdicarba^* -[D-Trp ]-somatostatin, besitzen keine C-endständige Carboxylgruppe, wodurch eine der von der enzymatischen Molekülspaltung durch Carboxypeptidasen betroffenen Gruppen wegfällt. Durch den Ersatz der benachbarten Heteroatome der Disulfidbrücke des Somatostatins durch die Gruppe -CH2-CH2-, -S-CH2 oder -CH2-S-wird ferner die Stabilität der betreffenden analogen Verbindung in vivo durch Verlangsamung des enzymatischen Abbaus durch reduzierende Spaltung erhöht. Daher weisen diese analogen Verbindungen eine stärkere Widerstandsfähigkeitin which X, Y, R and R 1 each have the meaning given above, is replaced. The new somatostatin analogs, which contain cc-aminocork acid, e.g. Des (Ala, GIy) -desamino [Cys jdicarba ^ '-somatostatin, Des (Ala, GIy) -desamino [Cys Jdicarba ^' - [D-Trp] -somatostatin and Des - (AIa 1 , Gly 2 ) -desamino [Cys ^] descarboxy [Cys] dicarba ^ f [D-Trp] -somatostatin, have no N-terminal amino group; one of the groups affected by the enzymatic cleavage of the molecule by aminopepidases is thus omitted. The somatostatin analogs containing, ^ j -aminoheptanoic acid, e.g. des (Ala, GIy) -desamino [Cys Jdescarboxy- [Cys Jdicarba 5 '-somatostain and Des (Ala, GIy) -desamino- [Cys ^] descarboxy [Cys Jdicarba ^ * - [D-Trp] -somatostatin, have no C-terminal carboxyl group, which means that one of the groups affected by the enzymatic breakdown of molecules by carboxypeptidases is omitted. By replacing the neighboring heteroatoms of the disulfide bridge of the somatostatin with the group -CH 2 -CH 2 -, -S-CH 2 or -CH 2 -S-, the stability of the analogous compound in question is also increased in vivo by slowing down the enzymatic degradation by reducing Cleavage increased. Therefore, these analog connections are more resilient
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gegenüber der Spaltung in vivo auf und besitzen somit eine langzeitigere Wirkung.compared to the cleavage in vivo and thus have a longer-term effect.
Die Erfindung umfaßt auch die nachfolgenden, zur Herstellung der erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen geeigneten neuen, geschützten bzw. blockierten Peptidzwischenprodukte: The invention also encompasses the following which are suitable for the preparation of the somatostatin analogs according to the invention new, protected or blocked peptide intermediates:
:h2-x: h 2 -x
R-CH-C-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-( ^r-INOC)Lys-Thr-Y-CH0 Phe-Thr-Ser-NH-CH-R'R-CH-C- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (^ r-INOC) Lys-Thr-Y-CH 0 Phe-Thr-Ser-NH-CH-R '
SH2-X H-C-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-SH 2 -X HC- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-
Y-CH2 Y-CH 2
Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1
CBZ-NH-CH-C-( £;-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-CBZ-NH-CH-C- (£; -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-
Y-CH3 Y-CH 3
Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 CH2-XPhe-Thr-Ser-NH-CH-R 1 CH 2 -X
CBZ-NH-CH-C- {£. -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- (^ -INOC) Lys-Thr-CBZ-NH-CH-C- {£. -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- (^ -INOC) Lys-Thr-
Phe-Thr-Ser-NH-CH-R'Phe-Thr-Ser-NH-CH-R '
CH-X Y jCH-X Y j
CH2-C-(^-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe CH CH 2 -C - (^ - INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe CH
BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1
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CH2-X YCH 2 -XY
0-C-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe ' 2 O T 2 0 -C- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe ' 2 OT 2
BOC-D-Trp-(£ -INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 BOC-D-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1
CH2-X γCH 2 -X γ
CBZ-NH-CH-C-(£ -INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe ICBZ-NH-CH-C- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe I.
BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1
CBZ-NH-CH-C-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMeCBZ-NH-CH-C- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe
BOC-D-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 BOC-D-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1
CH2-C-(6-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMeCH 2 -C- (6-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe
-Y-CH2 -Y-CH 2
CH1--XCH 1 --X
CBZ-NH-CH-C-{ €: -INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe NH0-CH-R1 CBZ-NH-CH-C- {€: -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe NH 0 -CH-R 1
l2 l 2
H_-X Y-CH9 H_-X Y-CH 9
2 I 2 2 I 2
I -C-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R"" jI -C- ( £ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R "" j
CH2-X ■ Y~9H2 jCH 2 -X ■ Y ~ 9 H 2 j
CBZ-NH-CH-C-(^-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R"" ■CBZ-NH-CH-C - (^ - INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R "" ■
In den obigen Formeln haben X, Y, R und R» jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung, während.R"" ein Wasserstoff atom oder -COO-tert.-Butyl ist.In the above formulas, X, Y, R and R »each have the meaning given above, while.R "" is hydrogen atom or -COO-tert-butyl.
Im erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzte Aminosäure-Komponenten, bestimmte bevorzugte Schutzgruppen, Aminosäure-Aktivierungsgruppen, Kondensationsmittel, Reagentien und Lösungsmittel werden durch folgende Kurzbezeichnungen angegeben: Amino acid components used in the process according to the invention, certain preferred protecting groups, amino acid activating groups, condensing agents, reagents, and Solvents are indicated by the following abbreviations:
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757Y757Y
Aminosäureamino acid
Ly sLy s
AsnAsn
Ph8Ph8
TrpTrp
D-Tr ρD-Tr ρ
ThrThr
SerSer
Asu L-LysinAsu L-lysine
L-Asparagin L-Phenylalanin L-Tryptophan D-Tryptophan L-Threonin L-SerinL-asparagine L-phenylalanine L-tryptophan D-tryptophan L-threonine L-serine
α-Aminokorksäureα-aminocork acid
INOCINOC
BOCBOC
OMeOMe
tButBu
CBZCBZ
Kur zb e ζ e i chnungShort example
NPE H3E HBTNPE H3E HBT
DCCIDCCI
KurzbezeichnungShort name
TFA TEA DIPEATFA TEA DIPEA
EPAW Isonicotinyloxycarbonyl tert.-Butyloxycarbonyl Methylester tert.-Butyl BenzyloxycarbonylEPAW isonicotinyloxycarbonyl tert-butyloxycarbonyl methyl ester tert-butyl benzyloxycarbonyl
aktivierende Gruppen p-Nitrophenylester N-Hydroxysuccinimidester 1-Hydroxybenzotriazol activating groups p-nitrophenyl ester N-hydroxysuccinimide ester 1-hydroxybenzotriazole
Kondensationsmittel DicyclohexylcarbodiimidDicyclohexylcarbodiimide condensing agent
Trifluoressigsäure Triethylamin DiisopropyläthylaminTrifluoroacetic acid triethylamine diisopropylethylamine
Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Vasser Ethyl acetate / pyridine / acetic acid / water
70980 7/123870980 7/1238
BAVi Butanol/Essigsäure/WasserBAVi butanol / acetic acid / water
CIW Chloroform/Methanol/WasserCIW chloroform / methanol / water
DMF DimethylformamidDMF dimethylformamide
THF TetrahydrofuranTHF tetrahydrofuran
Die erfindungsgemäßen neuen Somatostatinanalogen können nach dem Verfahren der Erfindung durch Blocksynthese hergestellt werden. Dabei werden verschiedene Peptidsegmente des Somatostatinanalogen gesondert hergestellt und anschließend in der gewünschten Reihenfolge mit den Verbindungen der allgemeinen Formeln II und III:The novel somatostatin analogs according to the invention can according to can be prepared by block synthesis according to the process of the invention. Different peptide segments of the somatostatin analog are thereby used prepared separately and then in the desired order with the compounds of the general Formulas II and III:
CH2- X-Y -CH2 CH2- X-Y -CH2 CH 2 - XY -CH 2 CH 2 - XY -CH 2
CH2-COOH NH2-CH-R1 NH2-CH-COOH NH3-CH-R1 (II) (HDCH 2 -COOH NH 2 -CH-R 1 NH 2 -CH-COOH NH 3 -CH-R 1 (II) (HD
in denen X, Y und R1 jeweils die. vorstehend angegebene Bedeutung haben, zur Erzeugung der offenkettigen,Form der gewünschten Verbindung verknüpft. Die offenkettige Verbindung wird dann einem Ringschluß unterworfen und von den Schutzgruppen befreit. Gewünschtenfalls wird das Sulfidanaloge zum SuIfoxid oder SuIfon oxidiert, wodurch jene Verbindungen erhalten werden, bei welchen -X-Y- eine Grup-O in which X, Y and R 1 each have the. have the meaning given above, linked to produce the open-chain form of the desired compound. The open-chain compound is then subjected to a ring closure and freed from the protective groups. If desired, the sulfide analog is oxidized to the sulfoxide or sulfon, whereby those compounds are obtained in which -XY- a group -O
pe -S- oder SO2 beinhaltet. Wenn R R"NH ist, wird an dem cyclisierten Zwischenprodukt eine selektive Schutzgruppenabspaltung vorgenommen, bei welcher lediglich die Schutz- . gruppe des N-endständigen Amins entfernt wird. Das erhaltene N-endständige Amin wird in geeigneter Weise mit einer R"-Gruppe kondensiert. Die bevorzugte Gesamtmethode zur Herstellung der erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen, beicontains pe -S- or SO 2 . When RR "is NH, selective deprotection is carried out on the cyclized intermediate in which only the protecting group of the N-terminal amine is removed. The resulting N-terminal amine is suitably condensed with an R" group. The preferred overall method for producing the somatostatin analogs of the invention, at
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15 757Y15 757Y
welchen X, Y und R' jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung haben und R ein Wasserstoffatom darstellt, geht schematisch aus Tabelle I hervor. Diese Tabelle erläutert die Herstellung von L-Tryptophan enthaltenden Somatostatinanalogen; es sei festgestellt, daß D-Tryptophan enthaltende Analoge nach der aus Tabelle I ersichtlichen Methode mit der Ausnahme hergestellt werden können, daß D-Tryptophan anstelle von L-Tryptophan eingesetzt wird.which X, Y and R 'each have the meaning given above and R represents a hydrogen atom schematically from Table I. This table illustrates the preparation of L-tryptophan containing somatostatin analogs; it should be noted that D-tryptophan-containing analogs according to the method shown in Table I. with the exception that D-tryptophan is used in place of L-tryptophan.
2EU-COOCH-2EU COOCH
tert.-Butylacetat, HClO^, wenn R1 = COOHtert-butyl acetate, HClO ^ when R 1 = COOH
CECE
-Y-CH,-Y-CH,
H0-COOCH-, HCl-NH0-CH-R"11 ! 2 3 2 '.H 0 -COOCH-, HCl-NH 0 -CH-R " 11 ! 2 3 2 '.
^, tert. -Butyltrichlorphenylcarbonat; ^ , tert. -Butyl trichlorophenyl carbonate;
2)2)
NaOHNaOH
-Y-CH,-Y-CH,
:h2-cooh: h 2 -cooh
BOC-NH-CH-R"" DCCI/p-NitrophenolBOC-NH-CH-R "" DCCI / p-nitrophenol
-Y-CH,-Y-CH,
BOC-NH-CH-R""BOC-NH-CH-R ""
-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe*2HCl j-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe * 2HCl j
- 10 -- 10 -
709807/1238709807/1238
15 757Y15 757Y
"1TJ _" 1 TJ _
rH2r H 2
-Y-CH-Y-CH
-C-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R""-C- ( £ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R ""
ι 1) TFA;ι 1) TFA;
! 2) BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N.! 2) BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N.
H2-X-H 2 -X-
CH2-C-((= -INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMeCH 2 -C - ((= -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe
BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R ·;BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R •;
1) N22 1) N 22
2) HCl;2) HCl;
3) Isoamylnitrit3) isoamyl nitrite
CH2-C1- ( £.-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- ( e -INOC) Lys-Thr-CH 2 -C 1 - (£.-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (e -INOC) Lys-Thr-
-Y-CH2 -Y-CH 2
Phe-Thr-Ser-NH-CH-R'Phe-Thr-Ser-NH-CH-R '
ZnZn
H2-X-H 2 -X-
-Y-CH-Y-CH
R-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 R-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1
In den obigen Formeln haben X, Y und R' jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung, R stellt ein WasserstoffatomIn the above formulas, X, Y and R 'each have the above meaning given, R represents a hydrogen atom
, wenn R1 eine Carboxyl-if R 1 is a carboxyl
dar und R"" ist die Gruppedar and R "" is the group
gruppe ist, und die Aminosäure Trp kann durch D-Trp ersetzt sein.group, and the amino acid Trp can be replaced by D-Trp.
- 11 -- 11 -
70980 7/123870980 7/1238
¥enn die Gruppe -X-Y- eine Gruppe -S- oder -SOp- beinhaltet, ist eine weitere Oxidationsstufe unter Vervrendung eines geeigneten Oxidationsmittels, wie Perameisensäure oder Wasserstoffperoxid, erforderlich.If the group -X-Y- contains a group -S- or -SOp-, another oxidation state is used a suitable oxidizing agent such as performic acid or hydrogen peroxide is required.
Die erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen, bei welchen X, Y und R1 die jeweils vorstehend angegebene Bedeutung haben und R -NHp und R" ( wobei R" die vorgenannte Definition aufweist) ist, werden nach dem in Tabelle II dargestellten Verfahren hergestellt. Tabelle II erläutert die Synthese von L-Tryptophan enthaltenden Somatostatinanalogen; es sei festgestellt, daß D-Tryptophan enthaltende Analoge nach dem aus Tabelle II ersichtlichen Verfahren mit der Ausnahme, daß D-Tryptophan anstelle von L-Tryptophan eingesetzt wird,hergestellt werden können.The somatostatin analogs according to the invention, in which X, Y and R 1 have the meanings given above and R -NHp and R ″ (where R ″ has the above definition), are prepared according to the process shown in Table II. Table II illustrates the synthesis of L-tryptophan containing somatostatin analogs; it should be noted that analogs containing D-tryptophan can be prepared by the procedure shown in Table II with the exception that D-tryptophan is used in place of L-tryptophan.
ch: ch :
l2
CBZ-Nh-CH-COOH3 l 2
CBZ-Nh-CH-COOH 3
Itert.-Butylacetat, HClO^ ,Itert-butyl acetate, HClO ^,
jwenn R' = COOHif R '= COOH
CBZ-Nh-CH-COOCH3 HCl-NH2-CH-R"" :CBZ-Nh-CH-COOCH 3 HCl-NH 2 -CH-R "":
j 1,) tert.-Butyltrichlorphenylcarbonat; 2) NaOHj 1,) tert-butyl trichlorophenyl carbonate; 2) NaOH
CBZ-NH-CH-COOHCBZ-NH-CH-COOH
DCCI/p-N itrophenolDCCI / p-nitrophenol
- 12 -- 12 -
70980 7/123870980 7/1238
15 757Y15 757Y
BOC-NH-CH-R""BOC-NH-CH-R ""
-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe *2HCl-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe * 2HCl
-Y-CH-Y-CH
CBZ-NH-CH-C1- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R" "CBZ-NH-CH-C 1 - (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R ""
1) TFA;1) TFA;
2) BOC-Trp- (^r-INOC) Lys-Thr-Phe-rThr-Ser-N,2) BOC-Trp- (^ r-INOC) Lys-Thr-Phe-rThr-Ser-N,
H2-X-H 2 -X-
CBZ-NH-CH-C-(£ -INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMeCBZ-NH-CH-C- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe
CH2 CH 2
BOC-Trp-(e: -INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 BOC-Trp- (e: -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1
1) NH2NH2;1) NH 2 NH 2 ;
2) HCl;2) HCl;
3) Isoamylriitrit3) isoamyl riitrite
TY _TY _
CBZ-NH-CH-C-(β -INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(^-INOC)Lys-Thr- -Y-CHn CBZ-NH-CH-C- ( β- INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp - (^ - INOC) Lys-Thr- -Y-CH n
Phe-Thr-Ser-NH-CH-R'Phe-Thr-Ser-NH-CH-R '
H2-X-H 2 -X-
NH2-CH-C-(ζ-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-NH 2 -CH-C- ( ζ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-
-Y-CH,-Y-CH,
Phe-Thr-Ser-NH-CH-R·Phe-Thr-Ser-NH-CH-R
- 13 -- 13 -
709807/ 1238709807/1238
, Acetyl-A, Benzoyl-A oder CBZ-AIa-GIy-A und HF, Acetyl-A, Benzoyl-A or CBZ-AIa-GIy-A and HF
.Zn.Zn
Y-CH IY-CH I
E_v C 2 I^E_v C 2 I ^
«C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 «C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1
In den obigen Formeln haben X, Y, R1, R" und R»fI jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung, A stellt eine beliebige geeignete, bekannte Gruppe zur Erzeugung einer Amidbindung (wie ein Halogenatom oder eine Anhydrid- oder aktive Estergruppe) dar und die Aminosäure Trp kann durch D-Trp ersetzt sein.In the above formulas, X, Y, R 1 , R "and R» fI are each as defined above, A represents any suitable known group for creating an amide bond (such as a halogen atom or an anhydride or active ester group) and the amino acid Trp can be replaced by D-Trp.
0 η0 η
Wenn die Gruppe -X-Y- die Gruppe -S- oder -SO2- enthält,If the group -XY- contains the group -S- or -SO 2 -,
ist eine weitere Oxidationsstufe mit einem geeigneten Oxidationsmittel, wie Perameisensäure oder Wasserstoffperoxid, erforderlich.is a further oxidation stage with a suitable oxidizing agent, such as performic acid or hydrogen peroxide.
Die für das in Tabelle I dargestellte Verfahren verwendeten Ausgangsverbindungen der nachstehenden allgemeinen Formel: The starting compounds of the following general formula used for the process shown in Table I:
C
C C.
C.
H2 X H 2 X
CH2-COOCH3 NH2-CH-R1 CH 2 -COOCH 3 NH 2 -CH-R 1
in der R' COOH und -X-Y- -CH2-S- oder -S-CH2- bedeuten, sind in folgenden Veröffentlichungen beschrieben: K. Jost, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), Seite 223 und K. Jos't und F. sOrm, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), Seite 238.in which R 'COOH and -XY- -CH 2 -S- or -S-CH 2 - are described in the following publications: K. Jost, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), page 223 and K. Jos't and F. sOrm, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), p. 238.
- 14 -- 14 -
709807/1238709807/1238
15 757Y 4s*15 757Y 4s *
Die für das in Tabelle I dargestellte Verfahren verwendeten Ausgangsmaterialien der nachstehenden allgemeinen Formel: The starting materials used for the process shown in Table I have the following general formula:
9H29 H 2
CH2-COOCH3 NH2- CH-R'CH 2 -COOCH 3 NH 2 - CH-R '
in der R1 ein Wasserstoffatom und -X-Y- -CH2-CHp- bedeuten, sind aus folgenden Literaturstellen bekannt: CF. Horn et al., Angew. Chem. 74 (1962), Seite 531 und Chemical Abstract, Band 57, 11411(c).in which R 1 is a hydrogen atom and -XY- -CH 2 -CHp- are known from the following literature references: CF. Horn et al., Angew. Chem. 74 (1962), page 531 and Chemical Abstract, vol. 57, 11411 (c).
Die für das aus Tabelle II ersichtliche Verfahren verwendeten Ausgangsverbindungen der nachstehenden allgemeinen Formel:The starting compounds used for the process shown in Table II of the following general ones Formula:
H2 H 2
CBZ-Nh-CH-COOCH3 CBZ-Nh-CH-COOCH 3
in der R1 COOH und -X-Y CH2-S- oder -S-CH2- bedeuten, sindin which R 1 is COOH and -XY CH 2 -S- or -S-CH 2 - are
in folgenden Veröffentlichungen beschrieben: K. Josrt und F. §orm, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), Seite 238 und K. Jo^t und J. Rudinger, Collect. Czech. Chem. Comm. 32 (1967), Seite 2488.described in the following publications: K. Josrt and F. §Orm, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), page 238 and K. Jo ^ t and J. Rudinger, Collect. Czech. Chem. Comm. 32 (1967), p. 2488.
Alle übrigen erfindungsgemäß benötigten Aminosäurederivate (vgl. die Tabellen I und II) sind mit Ausnahme der aus Tabelle II ersichtlichen Zwischenprodukte! der nachstehenden allgemeinen Formel:All other amino acid derivatives required according to the invention (cf. Tables I and II), with the exception of those from Table II apparent intermediates! the following general formula:
- 15 -- 15 -
709807/1238709807/1238
CH9 X Y CH9 CH 9 XY CH 9
CBZ-NH-CH-COOH BOC-NH-CH-C^CBZ-NH-CH-COOH BOC-NH-CH-C ^
OtBuOtBu
in der -X-Y- -CH2-CH2- ist, ebenfalls bekannt. Die genannten Zwischenprodukte werden durch elektrolytische oxidative Decarboxylierung (nach Kolbe) von zwei Molekülen von in geeigneter Weise geschlitzter Glutaminsäure gemäß folgendem Reaktionsschema hergestellt:in which -XY- -CH 2 -CH 2 - is also known. The intermediate products mentioned are produced by electrolytic oxidative decarboxylation (according to Kolbe) of two molecules of appropriately split glutamic acid according to the following reaction scheme:
CiU-CH0-COOH HOOC-CH0-CHCiU-CH 0 -COOH HOOC-CH 0 -CH
ι2 2 2Tι 2 2 2 T
CBZ-NH-CH-COOMe + BOC-NH-CH-CfCBZ-NH-CH-COOMe + BOC-NH-CH-Cf
OtBuOtBu
(IV)(IV)
(V)(V)
Kolbe CHo-CH.Kolbe CHo-CH.
CH0-CH5 CH9-CCH 0 -CH 5 CH 9 -C
T 'T '
CBZ-NII-CH-COOMe BOC-NH-CH-C^CBZ-NII-CH-COOMe BOC-NH-CH-C ^
OtBuOtBu
(IV + V)(IV + V)
CH2~CH2 CH 2 ~ CH 2
CBZ-NH-CH-COOMe CBZ-NH-CH-COOMECBZ-NH-CH-COOMe CBZ-NH-CH-COOME
(IV + IV)(IV + IV)
L_9 -^n5 CH2-CH 2 -C BOC-NH-CH-CL_ 9 - ^ n 5 CH 2 -CH 2 -C BOC-NH-CH-C
^OtBu OtBu^ OtBu OtBu
(V + V)(V + V)
- 16 -- 16 -
70980 7/123870980 7/1238
verdünnte Base Säuredilute base acid
CH9-CH9 CH 9 -CH 9
ι Iι I
CBZ-NH-CH-COOH BOC-NH-CH-CCBZ-NH-CH-COOH BOC-NH-CH-C
OtBuOtBu
(IV + V) ' j(IV + V) 'j
ι +ι +
CH0-CH,CH 0 -CH,
ΔΔ ΔΔ ΔΔ
CBZ-NH-CH-CCOH CBZ-NH-CH-COOHCBZ-NH-CH-CCOH CBZ-NH-CH-COOH
(IV + IV)'(IV + IV) '
ηη _CH_ -CH9-CH9 ηη _CH_ -CH 9 -CH 9
f2 I2 f 2 I 2 2I2 2 I 2
ru-c^ BOC-NH-CH- ru-c ^ BOC-NH-CH-
BOC-NH-CH-BOC-NH-CH-
OtBOtB
Die gewünschte Monocarbonsäure (IV + V) * läßt sich von der
Dicarbonsäure (IV + IV)· und der neutralen Verbindung
(V + V)' leicht nach herkömmlichen Methoden abtrennen. Die Verbindung (IV + V)' wird nach der in Tabelle II dargestellten
Methode zur Herstellung vonThe desired monocarboxylic acid (IV + V) * can be derived from the dicarboxylic acid (IV + IV) · and the neutral compound
Easily separate (V + V) 'by conventional methods. The compound (IV + V) 'is according to the method shown in Table II for the preparation of
CH2-CH2 CH2-CH2 CH 2 -CH 2 CH 2 -CH 2
,-CH-C-, -CH-C-
NH^-CH-g-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH undNH ^ -CH-g-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH and
L2
NH2-CH-C-LyS-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH ; L 2
NH 2 -CH-C-LyS-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH;
verwendet.used.
- 17 -- 17 -
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15 757Y *% 15 757Y *%
Die in den Tabellen I und II dargestellten Peptidsegmente (e-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe·2HCl, BOC-Trp-(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N^ und BOC-D-Trp-(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N, werden selbst zweckmäßig durch stufenweise Synthese in Lösung unter Anwendung der HSE-, NPE- oder HBT-Aktivestermethode oder der Azidmethode hergestellt.The peptide segments shown in Tables I and II (e-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe · 2HCl, BOC-Trp- (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N ^ and BOC-D-Trp- (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N, are themselves expedient by stepwise synthesis in solution using the HSE, NPE or HBT active ester method or the azide method.
Bei der Durchführung dieser stufenweisen oder Blocksynthesen, welche auf der Umsetzung einer Carboxylgruppe (oder aktivierten Carboxylgruppe) einer Aminosäure mit einer Aminogruppe einer anderen Aminosäure beruhen, werden die Aminogruppen der Aminosäure oder des Peptids, die (das) an der endständigen Carboxylgruppe des Moleküls reagieren, sowie andere funktioneile Gruppen beider 'Reaktionskomponenten, welche bei den Bedingungen solcher Synthesen reaktiv sind, vorzugsweise geschützt. Die Schutzgruppen müssen ihre Schutzwirkung unter den Bedingungen der Peptidverknüpfung beibehalten und ohne Beeinflussung der Peptidbindungen selektiv abspaltbar sein. Die nach einer bestimmten Stufe abzuspaltenden Schutzgruppen müssen ebenfalls selektiv abgetrennt werden können, ohne daß andere, für spätere Verknüpfungsstufen beizubehaltende Schutzgruppen erfaßt werden.When carrying out these step-wise or block syntheses, which are based on the conversion of a carboxyl group (or activated carboxyl group) of an amino acid with an amino group of another amino acid are based, the amino groups the amino acid or peptide reacting on the terminal carboxyl group of the molecule, as well as other functional groups of both reaction components, which are reactive under the conditions of such syntheses, preferably protected. The protective groups must have their protective effect maintained under the conditions of the peptide linkage and selectively without affecting the peptide bonds be cleavable. The protective groups to be split off after a certain stage must also be removed selectively can be detected without other protective groups to be retained for later linkage stages being detected.
Beispiele für üblicherweise verwendete Amino-Schutzgruppen sind Substituenten vom Acyltyp, wie die Formyl-, Phthalyl-, Trifluoracetyl-, Toluolsulfonyl-, Dibenzylphosphoryl-, Nitrophenylsulfenyl-, Tritylsulfenyl- oder o-Nitrophenoxyacetylgruppe, und Substituenten vom Urethantyp, wie die Benzyloxycarbonyl- (Carbobenzoxy-), p-Methoxycarbobenzoxy-, p-Nitrocarbobenzoxy-, tert.-Butyloxycarbonyl-, 2-(p-Biphenylyl)-2-isoprop'yloxycarbonyl- oder Isonicotinyloxycarbonylgruppe, sowie Substituenten vom Alkyltyp, wie die Triphenylmethylgruppe, Trialkylsilylreste oder die Trimethylsilyl-Examples of commonly used amino protecting groups are substituents of the acyl type, such as the formyl, phthalyl, trifluoroacetyl, toluenesulfonyl, dibenzylphosphoryl, nitrophenylsulfenyl, Tritylsulfenyl or o-nitrophenoxyacetyl group, and substituents of the urethane type, such as the benzyloxycarbonyl (carbobenzoxy), p-methoxycarbobenzoxy, p-nitrocarbobenzoxy-, tert-butyloxycarbonyl-, 2- (p-biphenylyl) -2-isoprop'yloxycarbonyl- or isonicotinyloxycarbonyl group, as well as substituents of the alkyl type, such as the triphenylmethyl group, Trialkylsilyl radicals or the trimethylsilyl
- 18 -- 18 -
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gruppe. Die bevorzugte Schutzgruppe für die ε-Aminogruppe von Lysin ist die Isonicotinyloxycarbonylgruppe. Zum Schutz
der a-Aminogruppe der am Carboxylende des Moleküle an der
Umsetzung teilnehmenden Aminosäuren (oder Peptide) dient
vorzugsweise die tert.-Butyloxycarbonylgruppe (BOC), da
diese sich nach der erwähnten Umsetzung und vor der anschließenden Stufe (wo die a-Aminogruppe selbst reagiert)
leicht durch relativ milde Säureeinwirkung (beispielsweise mit Hilfe von Trifluoressigsäure oder HCl in Äthylacetat)
abspalten läßt, wobei die zum Schutz anderer Aminogruppen (wie der basischen Aminogruppe von Lysin) dienenden Gruppen,
wie die Carbobenzoxygruppe (CBZ) und die Isonicotinyloxycarbonylgruppe, nicht nennenswert angegriffen werden. Die
Carbobenzoxygruppe läßt sich mit Hilfe von Bromwasserstoff in Eisessig oder Fluorwasserstoff abspalten, wodurch die
Isonicotinyloxycarbonylgruppe nicht wesentlich angegriffen wird. Die Abspaltung mit Fluorwasserstoff wird durch die
Gegenwart von Anisol erleichtert. Die Isonicotinyloxycarbonylgruppe ist mit Hilfe von Zink abspaltbar.group. The preferred protecting group for the ε-amino group of lysine is the isonicotinyloxycarbonyl group. The amino acids (or peptides) participating in the conversion at the carboxyl end of the molecule serve to protect the α-amino group
preferably the tert-butyloxycarbonyl group (BOC), since
after the mentioned reaction and before the subsequent stage (where the α-amino group itself reacts), this can easily be split off by relatively mild acid action (for example with the help of trifluoroacetic acid or HCl in ethyl acetate), the protection of other amino groups (such as the basic amino group by lysine) serving groups, such as the carbobenzoxy group (CBZ) and the isonicotinyloxycarbonyl group, are not significantly attacked. The carbobenzoxy group can be split off with the aid of hydrogen bromide in glacial acetic acid or hydrogen fluoride, whereby the
Isonicotinyloxycarbonyl group is not significantly attacked. The elimination with hydrogen fluoride is achieved by the
Presence of anisole facilitates. The isonicotinyloxycarbonyl group can be split off with the help of zinc.
Der Schutz der Carboxylgruppen erfolgt üblicherweise u.a. durch Bildung von Amiden, Salzen oder Estern, wie den Methyl- und Äthylestern (welche man bevorzugt, wenn eine anschließende Umwandlung über das Hydrazid in das Azid gewünscht wird), den Benzyl-, p-Nitrobenzyl- oder tert.-Butylestern. Die Hydroxylgruppen werden bei der Synthese der erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen, bei welcher die Verknüpf ungsreaktionen in Lösung erfolgen, in der Regel nicht geschützt. Nach Bedarf kann man jedoch zum Schutz der Hydroxylgruppen z.B. eine Tetrahydropyranyl-, Benzyl-, Trifluoracetyl- oder tert.-Butylgruppe anwenden.The carboxyl groups are usually protected by the formation of amides, salts or esters, such as the methyl and ethyl esters (which are preferred if a subsequent conversion via the hydrazide to the azide is desired is), the benzyl, p-nitrobenzyl or tert-butyl esters. The hydroxyl groups are used in the synthesis of the Somatostatin analogs according to the invention, in which the linkage reactions take place in solution, generally not protected. If necessary, however, to protect the hydroxyl groups, e.g. a tetrahydropyranyl, benzyl, trifluoroacetyl or use tert-butyl group.
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Die Wahl der Schutzgruppen wird teilweise durch die speziellen Verknüpfungs- bzw. Kupplungsbedingungen und teilweise durch die an der Umsetzung teilnehmenden Aminosäure- und Peptidkomponenten bestimmt.The choice of protective groups is partly due to the specific linking or coupling conditions and partly determined by the amino acid and peptide components participating in the conversion.
Detaillierte Richtlinien für die Wahl bestimmter, erfindungsgemäß zu verwendender Schutzgruppen können der FR-PS 1 496 536 entnommen werden; auf die in dieser Patentschrift beschriebenen Schutzgruppen wird hier ausdrücklich BezugDetailed guidelines for the choice of certain protective groups to be used according to the invention can be found in FR-PS 1,496,536; to those in this patent protective groups described is expressly referred to here
genommen.taken.
Es folgt eine Erläuterung der bevorzugten erfindungsgemäßen Ausführungsformen.The following is an explanation of the preferred embodiments of the present invention.
Die bevorzugte Gesamtmethode zur Herstellung der bevorzuget pThe preferred overall method of making the preferred p
ten erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen Des(Ala , GIy )-desamino[Cys Jdicarba^* -somatostatin und Des(AIa , GIy )-desamino[Cys ]dicarba^' -[D-Trp ]-somatostatin ist schematise}! in Tabelle III dargestellt. Diese Tabelle erläutert die Herstellung eines L-Tryptophan enthaltenden Somatostatinanalogen; es sei festgestellt, daß die D-Tryptophan enthaltende Verbindung nach der aus Tabelle III ersichtlichen Methode unter der Ausnahme hergestellt werden kann, daß in Stufe 5a BOC-D-Tryptophan-HSE anstelle von BOC-L-Tryptophan-HSE verwendet wird.th somatostatin analogs according to the invention Des (Ala, GIy) -desamino [Cys Jdicarba ^ * -somatostatin and Des (AIa, GIy) -desamino [Cys ] dicarba ^ '- [D-Trp] -somatostatin is schematise}! shown in Table III. This table illustrates the preparation of a somatostatin analog containing L-tryptophan; it is noted that the D-tryptophan-containing compound according to that shown in Table III Method can be produced with the exception that in stage 5a BOC-D-tryptophan-HSE instead of BOC-L-tryptophan-HSE is used.
Die übrigen neuen erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen werden analog der in Tabelle III dargestellten Methode hergestellt, indem man anstelle der in Stufe 10 eingesetzten a-Aminokorksäure eLne Verbindung der allgemeinen Formeln VI und VII:The other new somatostatin analogs according to the invention are prepared analogously to the method shown in Table III, by using a compound of the general formulas instead of the α-aminocork acid used in step 10 VI and VII:
- 20-- 20-
7 0 9 8 0 7/12387 0 9 8 0 7/1238
H- χ_γ CH2 CH2- X Y CH2 H - χ_γ CH 2 CH 2 - XY CH 2
CH2-COOCH3 NH2-CH-R1 CBZ-NH-COOCH3 CH 2 -COOCH 3 NH 2 -CH-R 1 CBZ-NH-COOCH 3
(VI) (VII)(VI) (VII)
in denen X, Y und R1 jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung haben, verwendet und die in den Stufen 10 bis 15 und 17 bis 19 beschriebenen Umsetzungen durchführt. Wenn R R" ist, sind jedoch weitere Synthssestufen zur Kondensation des N-endständigen Amins mit einer Acetyl- oder Benzoylgruppe oder mit CBZ-Ala-Gly erforderlich. Im letzteren Falle muß die Schutzgruppe der a-Aminogruppe von AIa in" einer Zusaiz3,tufe abgespalten werden. Ferner muß in jenem Falle, wenn die Gruppe -X-Y- eine Sulfoxidgruppe, Oin which X, Y and R 1 each have the meaning given above, is used and the reactions described in steps 10 to 15 and 17 to 19 are carried out. If RR "is, however, further synthesis steps are required for the condensation of the N-terminal amine with an acetyl or benzoyl group or with CBZ-Ala-Gly. In the latter case, the protective group of the α-amino group of AIa must be split off in an additional step will. Furthermore, in the case where the group -XY- is a sulfoxide group, O
-S- oder -SOp- enthält, eine Oxidation mit Hilfe eines geeigneten Oxidationsmittels (wie Perameisensäure oder Wasserstoffperoxid) als weitere Stufe erfolgen. Die entsprechenden D-Tryptophananalogen können dadurch hergestellt werden, daß man in Stufe 5a BOC-D-Tryptophan-HSE anstelle von BOC-L-Tryptophan-HSE einsetzt.-S- or -SOp- contains, an oxidation with the help of a suitable Oxidizing agent (such as performic acid or hydrogen peroxide) take place as a further stage. The corresponding D-tryptophan analogs can be produced by that in stage 5a BOC-D-tryptophan-HSE is used instead of BOC-L-tryptophan-HSE.
- 21 -- 21 -
709807/1238709807/1238
α-Arainokorksäure 9 CH3OH, HClα-Arainocorkic acid 9 CH 3 OH, HCl
10ψ tert.-Butylacetat, HClO^ α-tert.-Butyl-tJ-methyl-a-aminosuberai:10ψ tert-butyl acetate, HClO ^ α-tert-butyl-tJ-methyl-a-aminosuberai:
—α ο co—Α ο co
tert.-Butyltrichlorphenylcarbonat NaOH Phe-Ofe'HCltert-butyl trichlorophenyl carbonate NaOH Phe-Ofe'HCl
el a.) BOC-PheHSE; b) HCl el a.) BOC-PheHSE; b) HCl
Phe-Phe-CMa-HClPhe-Phe-CMa-HCl
J, a) BOC-AsnNPE; b) HClJ, a) BOC-AsnNPE; b) HCl
Asn-Phe-Phe-OMß·HClAsn-Phe-Phe-OMß · HCl
Ser-Otfe'HClSer-Otfe'HCl
li-a) BOC-ThrHSE; b) TPAli-a) BOC-ThrHSE; b) TPA
Thr-Ser-QMa · TFAThr-Ser-QMa • TFA
2 I a) BOC-PheHSE; b) TPA2 I a) BOC-PheHSE; b) TPA
Phe-Olir-Ser-OMe · TPAPhe-Olir-Ser-OMe • TPA
b) HClb) HCl
.α-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat.α-tert-butyl-BOC-α-aminosuberate
13 J, DCCl/p-Nitrophenol α-tert.-Butyl-o-p-nitrophenyl BOC-α-Aminosuberat13 J, DCCl / p-nitrophenol α-tert-butyl-o-p-nitrophenyl BOC-α-amino acid
14 I (ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe*2HCl a-tert.-Butyl-BOC-^Asu-U-INOOLys-Asn-Phe-Phe-OMe 15 Itfa ω-Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe·2TFA 171 BOC-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3^-14 I (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe * 2HCl a-tert-butyl-BOC- ^ Asu-U-INOOLys-Asn-Phe-Phe-OMe 15 Itfa ω-Asu- (ε- INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe 2TFA 17 1 BOC-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N 3 ^ -
a) a-BOC-(^~IigOC)LySHBT; 3 j, a) BOC-ThrHSE; b) HCla) a-BOC - (^ ~ IigOC) LySHBT; 3 j, a) BOC-ThrHSE; b) HCl
Tlhr-Phe-Thr-Ser-OMs «HClTlhr-Phe-Thr-Ser-OMs «HCl
41 a) a-BOC- (^-INOC) LysHBT; b)TFA41 a) a-BOC- (^ -INOC) LysHBT; b) TFA
-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Ofe ·-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Ofe
ι ? ΦΤ? Λι? ΦΤ? Λ
51 a) BOC-TrpHSE; b) NHNH51 a) BOC-TrpHSE; b) NHNH
BOC-Trp- (6 -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-SerBOC-Trp- ( 6- INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser
1616
Isoan^lnitritIsoan ^ lnitrite
H2NHIiH 2 NHIi
BOC-Trp- (e-INOCjLys-Thr-Phe-Thr-Ser-U-Asu-Ce-INOCjLys-Asn-Ehe-Phe'-Oii'e" 18J,a) NH2NH2; b) HCl; c) Isoamylnitrit Cyclo [co-Asu-( ε-INOC )Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-( ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser]BOC-Trp- (e-INOCjLys-Thr-Phe-Thr-Ser-U-Asu-Ce-INOCjLys-Asn-Ehe-Phe'-Oii'e "18J, a) NH 2 NH 2 ; b) HCl; c ) Isoamyl nitrite cyclo [co-Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser]
19| Zn Des(Ala1, Gly2)-desamino[Cys^]di'Carba*'' -somatostatin K5 CJ) GO (Jl19 | Zn Des (Ala 1 , Gly 2 ) -desamino [Cys ^] di'Carba * '' -somatostatin K5 CJ) GO (Jl
cn cn OOcn cn OO
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In Tabelle III beziehen sich die links von den Pfeilen stehenden Zahlen jeweils auf das Ausführungsbeispiel, aus welchem die bei der angeführten Umwandlung angegebenen Bedingungen im einzelnen hervorgehen.In Table III, the numbers to the left of the arrows relate to the exemplary embodiment from which the conditions specified for the conversion are detailed.
Die erwähnte bevorzugte Gesamtmethode beruht auf Kombi-, nationen einer Stufen- und einer Blocksynthese, wobei bestimmte Peptidsegmente von Des(AIa , GIy )-desamino[Cys ]-dicarba^» -somatostatin und Des(Ala , GIy ^desaminoCCys^]-The preferred overall method mentioned is based on combination, nations of a step and a block synthesis, with certain peptide segments of Des (AIa, GIy) -desamino [Cys] -dicarba ^ » -somatostatin and Des (Ala, GIy ^ desaminoCCys ^] -
^5 AL· c P-,^ 5 AL · c P-,
dicarba^* -[D-Trp^J-somatostatin anfangs nach der Stufenmethode durch aufeinanderfolgende Synthese in Lösung erzeugt, diese Segmente anschließend.in der richtigen Reihenfolge verknüpft und die beiden Enden des erhaltenen Peptids unter Bildung des gewünschten cyclischen Peptids vereinigt werden. Bei dieser Methode dienen der BOC-Substituent zum Schutz der α-Aminogruppen, die Isonicotinyloxycarbonylgruppe (INOC) zum Schutz der ε-Aminogruppe des Lysins und die Methylestergruppe zum Schutz der Carboxylgruppe von Phenylalanin, Phenylalanylphenylalanin, Asparaginylphenylalanylphenylalanin, (ε-INOC)-Lysylasparaginylphenylalanylphenylalanin und a-tert.-Butylester-BOC-Cu—Asu-(e-INOC)lysylasparaginylphenylalanylphenylalanin. Im Falle von a-tert.-Butylester-BOC-w -Asu-(ε-INOC)lysylasparaginylphenylalanylphenylalanin-OMe dient der Methylester ferner zur Bereitstellung des Zwischenprodukts für die Herstellung (über das Hydrazid) von Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-O-Asu-(ε-INOC)lysylasparaginylphenylalanylphenylalaninazid oder D-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Co-Asu-(ε-INOC)Iysylasparaginylphenylalanylphenylalaninazid. Außer diesem bevorzugten Verfahren umfaßt die Erfindung jedoch auch verschiedene Abwandlungen oder Alternativmethoden sowie die Anwendung anderer, die vorgenannten Kriterien erfüllenderdicarba ^ * - [D-Trp ^ J-somatostatin initially by the step method generated by successive synthesis in solution, these segments then in the correct order and the two ends of the obtained peptide are combined to form the desired cyclic peptide will. In this method, the BOC substituent is used to protect the α-amino groups, the isonicotinyloxycarbonyl group (INOC) to protect the ε-amino group of lysine and the methyl ester group to protect the carboxyl group of phenylalanine, phenylalanylphenylalanine, asparaginylphenylalanylphenylalanine, (ε-INOC) -lysylasparaginylphenylalanylphenylalanine and a-tert-butyl ester-BOC-Cu-Asu- (e-INOC) lysylasparaginylphenylalanylphenylalanine. In the case of a-tert-butyl ester-BOC-w -Asu- (ε-INOC) lysylasparaginylphenylalanylphenylalanine-OMe the methyl ester is also used to provide the intermediate for production (via the hydrazide) of Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-O-Asu- (ε-INOC) lysylasparaginylphenylalanylphenylalanine azide or D-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Co-Asu (ε-INOC) lyzylasparaginylphenylalanylphenylalanine azide. In addition to this preferred method, however, the invention also encompasses several Modifications or alternative methods as well as the use of other methods that meet the aforementioned criteria
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Schutzgruppen. Die Alternativmethoden beruhen ebenfalls auf stufenweisen Synthesen in Lösung sowie Kombinationen von stufenweisen und Blocksynthesen.Protecting groups. The alternative methods are also based on stepwise syntheses in solution as well as combinations of stepwise and block syntheses.
Wie aus Tabelle III hervorgeht, beinhaltet eine bevorzugte Gesamtmethode zur Herstellung von. Des(Ala , GIy )-desamino-[Cys Jdicarba ' -somatostatin oder Des(Ala , GIy )-desamino[Cys^]dicarba^' -[D-Trp ]-somatostatin speziell (a) die stufenweise Synthese der N-endständigen Hexapeptidsegmente BOC-Trpne-INO^Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azid und BQC-D-Trp(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azid und (b) des C-endständigen Pentapeptidsegments Lo-Asu-(e-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe, (c) die Kondensation der in den Stufen (a) und (b) hergestellten Peptide zum Peptid BOC-Trp-(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-w-Asu-(e-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe oder BOC-D-Trp(E-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-o> Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe, (d) die Umwandlung von -OMe in das Hydrazid, die Abspaltung der BOC-Schutzgruppe und (f) die Cyclisierung und Befreiung von den Schutzgruppen des erhaltenen Undekapeptids, wobei das neue Somatostatinanaloge Des(AIa , GIy )■ desaminofCys^Jdicarba^» -somatostatin oder Des(AIa , GIy )-desamino[Cys jdicarba^' -[D-Trp ]-somatostatin erhalten wird.As can be seen from Table III, a preferred overall method for making. Des (Ala, GIy) -desamino- [Cys Jdicarba '-somatostatin or Des (Ala, GIy) -desamino [Cys ^] dicarba ^' - [D-Trp] -somatostatin specifically (a) the step-wise synthesis of the N-terminal hexapeptide segments BOC-Trpne-INO ^ Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azide and BQC-D-Trp (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azide and (b) the C-terminal pentapeptide segment Lo-Asu- (e-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe, (C) the condensation of the peptides produced in steps (a) and (b) to the peptide BOC-Trp- (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-w-Asu- (e-INOC) Lys- Asn-Phe-Phe-OMe or BOC-D-Trp (E-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-o> Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe, (d) the conversion of -OMe into the hydrazide, the cleavage of the BOC protecting group and (f) the cyclization and liberation of the protective groups of the undecapeptide obtained, the new somatostatin analog Des (AIa, GIy) ■ desaminofCys ^ Jdicarba ^ »-somatostatin or Des (AIa, GIy) -desamino [Cys jdicarba ^ '- [D-Trp] somatostatin will.
Das N-endständige Hexapeptidsegment wird durch Umsetzung von Ser-OH-HCl mit BOC-ThrHSE hergestellt. Das Ser-OMe-Hydrochlorid wird mit Hilfe einer schwachen Base in das freie Amin übergeführt, welches in einem geeigneten organischen Lösungsmittel mit BOC-ThrHSE zur Reaktion gebracht wird. Zur Durchführung der Umsetzung vereinigt man die Lösungen und rührt den Ansatz bei Raumtemperatur und ungefähr neutralem pH-Wert, vorzugsweise jedoch bei einem pH-The N-terminal hexapeptide segment is made by reaction made of Ser-OH-HCl with BOC-ThrHSE. The Ser-OMe hydrochloride is converted with the help of a weak base in the free amine, which in a suitable organic Solvent is reacted with BOC-ThrHSE. The solutions are combined to carry out the implementation and stirs the batch at room temperature and approximately neutral pH, but preferably at a pH
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1-5 75 7Y1-5 75 7Y
Wert von 6,8 bis 8, unter welchen Bedingungen die Reaktion gewöhnlich nach etwa 4 std abgeschlossen ist. Anschließend extrahiert man das Produkt mit Wasser und dampft die Lösung zur Trockene ein. Man löst den Rückstand in einem geeigneten organischen Lösungsmittel und filtriert das unlösliche Salz ab. Das Rohprodukt wird chromatographisch gereinigt, wodurch man im wesentlichen reines BOC-Thr-Ser-OMe er- ; hält. Dieses Dipeptid wird mit TFA umgesetzt, wodurch der BOC-Substituent unter.Bildung von Thr-Ser-OMe.TFA abgespalten wird.Value from 6.8 to 8, under which conditions the reaction is usually complete after about 4 hours. The product is then extracted with water and the solution is evaporated to dryness. The residue is dissolved in a suitable organic solvent and the insoluble salt is filtered off. The crude product is purified by chromatography, whereby essentially pure BOC-Thr-Ser-OMe is obtained ; holds. This dipeptide is reacted with TFA, as a result of which the BOC substituent is cleaved under formation of Thr-Ser-OMe.TFA.
Das Dipeptid Thr-Ser-OMe.TFA wird mit Hilfe einer schwachen Base in das freie Amin umgewandelt, welches mit einer Aufschlämmung von BOC-PheHSE in einem geeigneten organischen Lösungsmittel zur Umsetzung gebracht wird. Zur Durchführung der Umsetzung werden die Reaktionsteilnehmer 2 std bis über Nacht bei Raumtemperatur kräftig bewegt. Anschließend wird die Reaktionslösung mit Wasser gewaschen und die organische Schicht zur Trockene eingedampft. Das erhaltene Rohprodukt \<rird chromatographisch gereinigt; dabei erhält man im wesentlichen reines BOC-Phe-Thr-Ser-OMe. Dieses Tripeptid wird durch Umsetzung mit TFA zum im wesentlichen reinen Tripeptid Phe-Thr-Ser-OMe.TFA umgewandelt.The dipeptide Thr-Ser-OMe.TFA is converted into the free amine with the aid of a weak base, which is made to react with a slurry of BOC-PheHSE in a suitable organic solvent. To carry out the reaction, the reactants are agitated vigorously at room temperature for 2 hours to overnight. The reaction solution is then washed with water and the organic layer is evaporated to dryness. The crude \ <obtained rird chromatography; essentially pure BOC-Phe-Thr-Ser-OMe is obtained. This tripeptide is converted to the essentially pure tripeptide Phe-Thr-Ser-OMe.TFA by reaction with TFA.
Das Tripeptid Phe-Thr-Ser-OMe.TFA wird mit Hilfe einer schwachen Base in die freie Base übergeführt, welche in einem geeigneten organischen Lösungsmittel mit BOC-ThrHSE zur Reaktion gebracht wird. Zur Durchführung der Umsetzung werden die Reaktionsteilnehmer etwa 1 std bis über Nacht bei Raumtemperatur kräftig bewegt. Das ausgefallene Rohprodukt wird isoliert und aus Methanol/Äther umgefällt; dabei erhält man das im wesentlichen reine TetrapeptidThe tripeptide Phe-Thr-Ser-OMe.TFA is converted into the free base with the help of a weak base, which is converted into a suitable organic solvent is reacted with BOC-ThrHSE. To carry out the implementation the reactants are agitated vigorously for about 1 hour to overnight at room temperature. The unusual one The crude product is isolated and reprecipitated from methanol / ether; the essentially pure tetrapeptide is obtained in this way
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BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. Das Tetrapeptid wird mit wasserfreiem Chlorwasserstoff in Äthylacetat umgesetzt, wodurch der BOC-Substituent abgespalten wird; man erhält Thr-Phe-Thr-Ser-OMe-hydrochlorid. BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. The tetrapeptide is reacted with anhydrous hydrogen chloride in ethyl acetate, whereby the BOC substituent is split off; Thr-Phe-Thr-Ser-OMe hydrochloride is obtained.
cc-BOC-(ε-INOC)LyS-OH wird in Gegenwart von DCCI mit N-Hydroxybenzotriazolmonohydrat umgesetzt. Das erhaltene cc-BOC-(e-INOC)LysHBT wird mit dem Tetrapeptid Thr-Phe-Thr-Ser-OMe-hydrochlorid zur Umsetzung gebrächt. Zu diesem Zweck werden die Reaktionsteilnehmer in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, wie frisch entgastem DMF/Methylenchlorid, während eines Zeitraums von etwa 1 std bis über Nacht reagieren gelassen. Anschließend filtriert man die unlöslichen Anteile ab und engt das Filtrat stark ein. Das Produkt wird durch Zugabe von Petroläther zur Ausfällung gebracht. Man reinigt das Rohprodukt durch Chromatographie; dabei erhält man das im wesentlichen reine geschützte Pentapeptid a-BOC-Ce-INOCjLys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. Das geschützte Pentapeptid wird mit TFA zur Umsetzung gebracht, wodurch der BOC-Substituent abgespalten wird. Man erhält das Pentapeptid u-IN0C)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-0Me.2TFA.cc-BOC- (ε-INOC) LyS-OH is treated with N-hydroxybenzotriazole monohydrate in the presence of DCCI implemented. The obtained cc-BOC- (e-INOC) LysHBT becomes with the tetrapeptide Thr-Phe-Thr-Ser-OMe-hydrochloride used for implementation. For this purpose, the reactants are in a suitable organic Solvents such as freshly degassed DMF / methylene chloride, allowed to react for a period of about 1 hour to overnight. The insoluble ones are then filtered off Shares off and the filtrate is strongly concentrated. The product is precipitated by adding petroleum ether. The crude product is purified by chromatography; the essentially pure protected pentapeptide is obtained a-BOC-Ce-INOCjLys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. The protected Pentapeptide is reacted with TFA, whereby the BOC substituent is split off. You get the pentapeptide u-IN0C) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-0Me.2TFA.
Das Pentapeptid (e-IN0C)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-0Me.2TFA wird mit Hilfe einer schwachen Base in die freie Base umgewandelt, welche in einem geeigneten organischen Lösungsmittel (wie DMF) bei etwa neutralem pH-Wert (vorzugsweise bei etwa 7,5 bis etwa 7,1) mit BOC-D-TrpHSE oder BOC-TrpHSE umgesetzt wird. Unter den genannten Bedingungen ist die Reaktion abgeschlossen, nachdem man den Ansatz über Nacht gerührt hat. Das Produkt wird anschließend durch Zugabe von Äther ausgefällt. Das Rohprodukt wird chromatographiert; dabei erhält man das im wesentlichen reine geschützte Hexa-The pentapeptide (e-IN0C) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-0Me.2TFA will with the help of a weak base converted into the free base, which in a suitable organic solvent (such as DMF) at about neutral pH (preferably about 7.5 to about 7.1) with BOC-D-TrpHSE or BOC-TrpHSE is implemented. Under the conditions mentioned, the reaction is complete after the batch has been allowed to stand overnight has stirred. The product is then precipitated by adding ether. The crude product is chromatographed; the essentially pure protected hexa-
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peptid BOC-Trp-CB-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe oder BOC-D-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. Das geschützte Hexapeptid wird mit wasserfreiem Hydrazin in Methanol umgesetzt, wobei man im wesentlichen reines B0C-Trp-(6-IN0C)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid oder BOC-D-Trp-(E-INOC)LyS-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid erhält.peptide BOC-Trp-CB-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe or BOC-D-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. The protected hexapeptide is reacted with anhydrous hydrazine in methanol, essentially pure BOC-Trp- (6-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide or BOC-D-Trp- (E-INOC) LyS-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide receives.
DasC-endständige Tetrapeptid (s-IN0C)Lys-Asn-Phe-Phe-0Me.2HCl wird durch Umsetzung von Phe-OMe-hydrochlorid mit BOC-PheHSE hergestellt. Die Umsetzung wird über Nacht im alkalischen pH-Gebiet in Gegenwart eines geeigneten organischen Lösungsmittels, wie Chloroform oder Methylenchlorid, durchgeführt. Anschließend werden die unlöslichen Anteile abgetrennt. Man dampft die organische Lösung zur Trockene ein und kristallisiert den Rückstand um. Das geschützte Dipeptid wird mit wasserfreiem Chlorwasserstoff in Äthylacetat zur Reaktion gebracht, wodurch der BOC-Substituent unter Bildung von Phe-Phe-OMe-hydrochlorid abgespalten wird.The C-terminal tetrapeptide (s-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-0Me.2HCl is produced by reacting Phe-OMe hydrochloride with BOC-PheHSE. The reaction is in the alkaline overnight pH range in the presence of a suitable organic solvent such as chloroform or methylene chloride. The insoluble fractions are then separated off. The organic solution is evaporated to dryness and recrystallizes the residue. The protected dipeptide is dissolved with anhydrous hydrogen chloride in ethyl acetate reacted, whereby the BOC substituent under Formation of Phe-Phe-OMe hydrochloride is split off.
Das Dipeptld Phe-Phe-OMe-hydrochlorid wird in Gegenwart eines geeigneten organischen Lösungsmittels (wie DMF) bei neutralem pH-Wert (vorzugsweise bei einem pH-Wert von etwa 7,2) über Nacht mit BOC-AsnNPE umgesetzt. Anschließend wird die Reaktionslösung eingedampft und der Rückstand in Chloroform gelöst. Die organische Lösung wird gewaschen und zur Trockene eingedampft. Durch Umkristallisation des Rückstands erhält man im wesentlichen reines BOC-Asn-Phe-Phe-OMe. Dieses geschützte Tripeptid wird mit wasserfreiem Chlorwasserstoff in Äthylacetat umgesetzt, wodurch der BOC-Substituent abgespalten wird; dabei erhält man Asn-Phe-Phe-OMe-hydrochlorid .The Dipeptld Phe-Phe-OMe-hydrochloride is in the presence a suitable organic solvent (such as DMF) at neutral pH (preferably at a pH of about 7.2) reacted overnight with BOC-AsnNPE. The reaction solution is then evaporated and the residue is dissolved in chloroform solved. The organic solution is washed and evaporated to dryness. By recrystallizing the residue essentially pure BOC-Asn-Phe-Phe-OMe is obtained. This protected tripeptide is made with anhydrous hydrogen chloride reacted in ethyl acetate, whereby the BOC substituent is split off; this gives Asn-Phe-Phe-OMe hydrochloride .
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α-BOC- ( G-INOC)LtTS wird in Gegenwart von DCCI in einem geeigneten organischen Lösungsmittel (wie DMF) mit 1-Hydroxybenzotriazol (HBT) zu a-BOC-(E-INOC)LysHBT umgesetzt. Die erhaltene Lösung wird mit Asn-Phe-Phe-OMe-hydrochlorid versetzt. Dann stellt man den Ansatz auf einen etwa neutralen pH-Wert ein und rührt ihn über Nacht. Hierauf filtriert man den Dicyclohexylharnstoff vom Reaktionsgemisch ab und dampft das Filtrat zur Trockene ein. Der Rückstand wird in einem geeigneten organischen Lösungsmittel suspendiert und sodann abfiltriert. Man setzt das geschützte Tetrapeptid mit wasserfreiem Chlorwasserstoff in Äthylacetat um, wodurch der BOC-Substituent abgespalten wird; man erhält (ε-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe-dihydrochlorid. α-BOC- (G-INOC) LtTS is in the presence of DCCI in a suitable organic solvents (such as DMF) reacted with 1-hydroxybenzotriazole (HBT) to form a-BOC- (E-INOC) LysHBT. Asn-Phe-Phe-OMe hydrochloride is added to the solution obtained. Then you set the approach to a roughly neutral one pH value and stir it overnight. The dicyclohexylurea is then filtered off from the reaction mixture and the filtrate evaporates to dryness. The residue is suspended in a suitable organic solvent and then filtered off. The protected tetrapeptide is reacted with anhydrous hydrogen chloride in ethyl acetate, whereby the BOC substituent is split off; (ε-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe-dihydrochloride is obtained.
a-tert. -Butyl-oa-p-nitrophenylester-BOC-oc-aminosuberat wird dadurch hergestellt, daß man zunächst a-Aminokorksäure während 30 min bei 250C mit einer Methanollösung von wasserfreiem HCl zu l~> -Methyl -a- amino sub er at. HCl umsetzt. Das HydroChlorid wird in tert.-Butylacetat mit Perchlorsäure zur Reaktion gebracht. Durch Extraktion der Reaktionslösung bei neutralem pH-Wert mit einem organischen Lösungsmittel erhält man a-tert.-Butyl-w-methyl-a-aminosuberat.a-tert. -Butyl-oa-p-nitrophenyl-BOC-oc-aminosuberat is prepared by first a-Aminokorksäure for 30 min at 25 0 C with a methanol solution of anhydrous HCl to ~ l> -methyl-a- amino sub he at HCl converts. The hydrochloride is reacted with perchloric acid in tert-butyl acetate. By extracting the reaction solution at neutral pH with an organic solvent, a-tert-butyl-w-methyl-a-aminosuberate is obtained.
Die a-Aminogruppe des a-tert.-Butyl-üJ-methyl-a-aminosuberats wird durch Umwandlung in das BOC-Derivat, zu welchem Zweck man die Verbindung mit tert.-Butyltrichlorphenylcarbonat umsetzt, geschützt. Die Umsetzung wird über Nacht bei 250C in Gegenwart eines geeigneten organischen Lösungsmittels (wie DMF) im schwach-alkalisehen pH-Gebiet von etwa 8 bis 9 (vorzugsweise bei einem pH-Wert von 8,5) durchgeführt. Die Reaktionslösung wird anschließend zur Trockene eingedampft. Man löst den Rückstand in einer möglichst geringen Menge eines geeigneten organischen Lösungsmittels,The α-amino group of the α-tert-butyl-uJ-methyl-α-aminosuberate is protected by conversion into the BOC derivative, for which purpose the compound is reacted with tert-butyl trichlorophenyl carbonate. The reaction is overnight at 25 0 C in the presence of a suitable organic solvent (such as DMF) in the weakly-alkaline see pH range of about 8 to 9 (preferably at a pH value of 8.5) is performed. The reaction solution is then evaporated to dryness. The residue is dissolved in the smallest possible amount of a suitable organic solvent,
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15 757Y15 757Y
wäscht die Lösung mit verdünnter Säure und Base und dampft das organische Lösungsmittel ab. Dabei erhält man im wesentlichen rines a-tert.-Butyl-w-methyl-N-BOC-a-aminosuberat.the solution was washed with dilute acid and base and the organic solvent was evaporated. This essentially gives Pure a-tert-butyl-w-methyl-N-BOC-a-aminosuberate.
Die ω-Methylestergruppe des a-tert.-Butyl-lO-methyl-N-BOC-a-aminosuberats wird durch eine 1 1/4 std lange Umsetzung bei 250C mit In-NaOH in Dioxan selektiv verseift. Anschließend dampft man das organische Lösungsmittel ab, säuert die verbleibende Lösung an und extrahiert mit einem geeigneten organischen Lösungsmittel. Das bei der Lösungsmittelabdampfung erhaltene Rohprodukt wird chromatographisch gereinigt; dabei erhält man reines a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat. The ω-methyl ester group of the a-tert-butyl-10-methyl-N-BOC-a-aminosuberate is selectively saponified by a 1 1/4 hour long reaction at 25 ° C. with In-NaOH in dioxane. The organic solvent is then evaporated off, the remaining solution is acidified and extracted with a suitable organic solvent. The crude product obtained in the solvent evaporation is purified by chromatography; this gives pure a-tert-butyl-BOC-a-aminosuberate.
Die CD-Carboxy!gruppe des a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberats wird durch Umsetzung mit p-Nitrophenol in Gegenwart von DCCI in eine aktive Estergruppe umgewandelt. Anschließend filtriert man die festen Anteile ab und engt das Filtrat stark ein. Dabei erhält man das gewünschte a-tert.-Butyl-O-p-nitrophenyl-BOC-a-aminosuberat in Form eines Öls.The CD carboxy group of the a-tert-butyl-BOC-a-aminosuberate is converted into an active ester group by reaction with p-nitrophenol in the presence of DCCI. Afterward the solid components are filtered off and the filtrate is strongly concentrated. This gives the desired a-tert-butyl-O-p-nitrophenyl-BOC-a-amino suberate in the form of an oil.
Eine Lösung von (ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe-dihydrochlorid wird im alkalischen pH-Gebiet (vorzugsweise bei einem pH-Wert von etwa 8) über Nacht mit a-tert.-Butyl-ω-p-nitrophenyl-a-aminosuberat umgesetzt. Anschließend wird die Reaktionslösung eingedampft und der Rückstand chromatographisch gereinigt; dabei erhält man das im wesentlichen reine Pentapeptid a-tert.-Butyl-BOC-o-Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe. Das geschützte Pentapeptid wird durch Umsetzung mit TFA sowohl von der a-N-BOC- als auch von der a-tert.-Butylgruppe befreit; dabei erhält man t»3-Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.2TFA. A solution of (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe-dihydrochloride is in the alkaline pH range (preferably at a pH of about 8) overnight with a-tert-butyl-ω-p-nitrophenyl-a-aminosuberat implemented. The reaction solution is then evaporated and the residue is chromatographed cleaned; the essentially pure pentapeptide a-tert-butyl-BOC-o-Asu (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe is obtained. The protected pentapeptide is obtained from both the a-N-BOC and the a-tert-butyl group by reaction with TFA exempted; this gives t »3-Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.2TFA.
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Eine Lösung des Pentapeptids u-Asu-^-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.2TFA wird mit einer kalten Lösung von BOC-Trp-(e-IN0C)Ly3-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 oder BOC-D-Trp-(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N,, welche durch Umsetzung von BOC-Trp-(e-IN0C)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NHNH2 oder BOC-D-Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NHNH2 mit Isoamylnitrit bei -25°C frisch zubereitet wurden, zum neuen geschützten Undekapeptid BOC-Trp-(E-IKOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-iO-Asu-(e-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OI4e oder BOC-D-Trp-(s-INOC)Lys~Thr-Phe-Thr-Ser-C3-Asu-(e-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe umgesetzt.A solution of the pentapeptide u-Asu - ^ - INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.2TFA is mixed with a cold solution of BOC-Trp- (e-IN0C) Ly3-Thr-Phe-Thr-Ser-N 3 or BOC-D-Trp- (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N ,, which by conversion of BOC-Trp- (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NHNH 2 or BOC-D-Trp- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NHNH 2 with isoamyl nitrite at -25 ° C, to the new protected undecapeptide BOC-Trp- (E-IKOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-iO-Asu- (e-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OI4e or BOC-D-Trp- (s-INOC) Lys ~ Thr-Phe-Thr-Ser- C3-Asu- (e-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe implemented.
Das Undekapeptid 30C-Trp-(e-IN0C)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-CJ-Asu-(E-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe oder BOC-D-Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-CO-Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe wird durch Erzeugung einer Peptidbindung zwischen der Carboxylgruppe des Phenylalanine und der a-Aminogruppe des L-Tryptophans oder D~Tryptophans cyclisiert. Der Ringschluß wird dadurch vorgenommen, daß man (a) die -OMe-Gruppe durch Umsetzung mit einer Methanollösung von Hydrazin in eine Hydrazidgruppe überführt, (b) die BOC-Schutzgruppe von L-Tryptophan oder D-Tryptophan durch Umsetzung des Undekapeptid-hydrazids mit wasserfreiem HCl in Gegenwart von Merdaptoäthanol abspaltet, wobei man Trp(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Ui-Äsu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazid.4HCl oder D-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-iO-Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazid.4HCl mit der Struktur:The undekapeptide 30C-Trp- (e-IN0C) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-CJ-Asu- (E-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe or BOC-D-Trp- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-CO-Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe is created by creating a peptide bond between the carboxyl group of phenylalanine and the α-amino group of L-tryptophan or D ~ tryptophan cyclized. The ring closure is carried out by (a) the -OMe group converted into a hydrazide group by reaction with a methanol solution of hydrazine, (b) the BOC protecting group of L-tryptophan or D-tryptophan through conversion of the undekapeptide hydrazide with anhydrous HCl in the presence of merdaptoethanol, Trp (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Ui-Äsu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazide.4HCl or D-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-iO-Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazide.4HCl with the structure:
(J1H2-CH5 ■ CH2-, ,(J 1 H 2 -CH 5 ■ CH 2 -,,
CH0-C-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-NHNH0 L_·4HCl \ CH 0 -C- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-NHNH 0 L_ · 4HCl \
2O \2 Ω 1 2 O \ 2 Ω 1
Trp-(^- -INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-C^ jTrp - (^ - -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-C ^ j
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15 757Y15 757Y
oderor
CH2-CH5 CH2-, ;CH 2 -CH 5 CH 2 -,;
CH0-C-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-NHNH- ' * 4HCl 2B 2 CH2 Ώ CH 0 -C- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-NHNH- '* 4HCl 2 B 2 CH 2 Ώ
D-Trp( £ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-C^D-Trp (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-C ^
OHOH
erhält und (c) das gewünschte cyclische Peptid erzeugt, indem man die Hydrazidgruppe durch Umsetzung mit Isoamylnitrit bei -250C im stark sauren pH-Gebiet in eine Azidgruppe überführt, die Lösung mit einem geeigneten organischen Lösungsmittel bis auf eine Konzentration von etwa 1 mg/ml verdünnt, um die Cyclisierung gegenüber der Polymerisation zu begünstigen, und einen schwach alkalischen pH-Wert einstellt, um die a-Aminogruppe des L-Tryptophans oder D-Tryptophans freizusetzen und die Ringschlußreaktion in Gang zu bringen. Der Ringschluß ist abgeschlossen, nachdem man den Ansatz etwa 4 Tage bei -200C stehen gelassen hat.receives and (c) generates the desired cyclic peptide, by converting the hydrazide group by reaction with isoamyl nitrite at -25 0 C in a strongly acidic pH region to an azide group, the solution with a suitable organic solvent to a concentration of about 1 mg / ml in order to favor the cyclization over the polymerization, and adjusts a weakly alkaline pH value in order to release the α-amino group of the L-tryptophan or D-tryptophan and to initiate the ring closure reaction. The ring closure is complete, after leaving the approach to stand for about 4 days at -20 0C.
Anschließend dampft man das Lösungsmittel ab und fällt den Rückstand aus Methanol/Äthylacetat um; dabei erhält man das im wesentlichen reine, geschützte cyclische Undekapeptid Cyclo [to-Asu-( ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-( ε-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] oder Cyclo [to-Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser]. The solvent is then evaporated and the residue is precipitated from methanol / ethyl acetate; thereby receives the essentially pure, protected cyclic undekapeptide cyclo [to-Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (ε-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] or cyclo [to-Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser].
Das geschützte Undekapeptid wird in 50%iger wäßrige Essigsäure mit frisch aktiviertem Zinkstaub behandelt, wodurch die -INOC-Substituenten der Lysinbausteine abgespalten werden. Man filtriert das nicht-umgesetzte Zink vom Gemisch ab und reinigt das im Filtrat enthaltene Rohprodukt chromatographisch; dabei erhält man die neuen Somatostatin-The protected undekapeptide is dissolved in 50% aqueous acetic acid treated with freshly activated zinc dust, whereby the -INOC-substituents of the lysine building blocks are split off will. The unreacted zinc is filtered off from the mixture and the crude product contained in the filtrate is purified chromatographic; you get the new somatostatin
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analogen Des (Ala , GIy )-desamino[Cys jdicarba^* -somatostatin oder Des(Ala , GIy )-desamino[Cys^]dicarba^j1 [D-Trp ]soinatostatin in im wesentlichen reiner Form.analogous Des (Ala, GIy) -desamino [Cys jdicarba ^ * -somatostatin or Des (Ala, GIy) -desamino [Cys ^] dicarba ^ j1 [D-Trp] soinatostatin in essentially pure form.
Weitere neue erfindungsgemäße Somatostatinanaloge können analog zur vorstehend beschriebenen Methode hergestellt werden, wobei man anstelle der cc-Aminokorksäure jeweils die äquivalente Menge einer Verbindung der nachstehenden allgemeinen Formel:Further new somatostatin analogs according to the invention can be prepared analogously to the method described above be, where one instead of the cc-aminocork acid in each case the equivalent amount of a compound of the following general formula:
Hj-XHj-X
R-CH-COOH NH2-CH-R1 ,R-CH-COOH NH 2 -CH-R 1 ,
in der X, Y, R und R1 jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung haben, verwendet.in which X, Y, R and R 1 each have the meaning given above, is used.
Die nachstehenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern, ohne sie jedoch zu beschränken. ¥enn in den Beispielen L-Tryptophan erwähnt wird, kann dieses stets durch D-Tryptophan ersetzt werden.The following examples are intended to explain the invention in more detail without, however, restricting it. ¥ enn in the examples L-tryptophan is mentioned, this can always be replaced by D-tryptophan.
Herstellung von Thr-Ser-OMe.TFA Stufe aProduction of Thr-Ser-OMe.TFA Stage a
Ein Gemisch von 3,50 g Ser-OMe.HCl und 7,47 g BOC-ThrHSE in 70 ml Methylenchlorid wird in einen 250-ml-Rundkolben durchgerührt. Anschließend stellt man die Lösung mit Triethylamin auf einen pH-Wert von 7 ein und rührt den AnsatzA mixture of 3.50 g Ser-OMe.HCl and 7.47 g BOC-ThrHSE in 70 ml of methylene chloride is placed in a 250 ml round bottom flask stirred. The solution is then adjusted to a pH of 7 with triethylamine and the batch is stirred
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90 min. Danach wird das Reaktionsgemisch dreimal mit jeweils 75 ml Wasser extrahiert. Die das Produkt enthaltenden
wäßrigen Extrakte werden vereinigt und einmal mit 45 ml Methylenchlorid reextrahiert. Durch Gefriertrocknung erhält
man 14,2 g des Rohprodukts. Man löst dieses in 200 ml
10bigem Methanol (in Äther) und filtriert das Salz von
der Lösung ab. Das dabei erhaltene Rohprodukt wird auf
eine 725 g Kieselgel-60 enthaltende Säule aufgegeben und
mit einem Chloroform/Methanol/Wasser-Gemisch (80 : 20 : 2) eluiert. Jene Fraktionen, welche aufgrund der Dünnschichtchromatographie
das Produkt enthalten, werden vereinigt
und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in Wasser gelöst. Durch Gefriertrocknung erhält man 6,2 g BOC-Thr-Ser-OMe.
90 minutes The reaction mixture is then extracted three times with 75 ml of water each time. The aqueous extracts containing the product are combined and re-extracted once with 45 ml of methylene chloride. Freeze drying gives 14.2 g of the crude product. This is dissolved in 200 ml of 10bigem methanol (in ether) and the salt is filtered off
the solution. The crude product obtained is on
applied to a column containing 725 g of silica gel 60 and eluted with a chloroform / methanol / water mixture (80: 20: 2). Those fractions which contain the product on the basis of thin layer chromatography are combined
and evaporated to dryness. The residue is dissolved in water. Freeze drying gives 6.2 g of BOC-Thr-Ser-OMe.
Stufe bStage b
5,9 g BOC-Thr-Ser-OMe v/erden in 55 ml Trifluoressigsäure
bei 00C suspendiert. Durch 10-minütiges Rühren bei Raumtemperatur
geht der Peststoff in Lösung. Man rührt die
Lösung weitere 3 min, kühlt sie dann im Eisbad ab und
bringt das Produkt durch Zugabe von jevreils 230 ml Äther
un kaltem Petroläther zur Ausfällung. Der Feststoff wird abfiltriert, mit einem Gemisch aus gleichen Teilen Äther
und Petroläther ausgewaschen und über Nacht im Vakuum getrocknet. Man erhält 6,2 g Thr-Ser-OMe.TFA.5.9 g of BOC-Thr-Ser-OMe are suspended in 55 ml of trifluoroacetic acid at 0 ° C. The pesticide dissolves by stirring for 10 minutes at room temperature. One stirs them
Solution for another 3 min, then cools in an ice bath and
causes the product to precipitate by adding jevreils 230 ml of ether and cold petroleum ether. The solid is filtered off, washed with a mixture of equal parts of ether and petroleum ether and dried in vacuo overnight. 6.2 g of Thr-Ser-OMe.TFA are obtained.
Stufe a
6,2 g Thr-Ser-OMe.TFA und 6,7 g BOC-Phe-HSE werden in 100 ml Stage a
6.2 g Thr-Ser-OMe.TFA and 6.7 g BOC-Phe-HSE are in 100 ml
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15 757Y 3«f 253555815 757Y 3 «f 2535558
Methylenchlorid suspendiert. Nach Einstellung des pH-Yfertes auf .7 mit Triäthylamin rührt man das Reaktionsgemisch 2 std bei 25°C und extrahiert es anschließend dreimal mit jeweils 100 ml Wasser. Das ausgefallene Rohprodukt wird at>filtriert. Die vereinigten wäßrigen Lösungen werden mit 100 ml Methylendichlorid reextrahiert und die Extrakte vereinigt, über Magnesiumsulfat getrocknet und filtriert. Beim Eindampfen des Filtrats zur Trockene erhält man weiteres Rohprodukt. Das vereinigte Rohprodukt (7,9 g) wird in einer möglichst geringen Menge eines Chloroform/Isopropanol-Gemisches (95 : 5) gelöst und die Lösung auf eine Säule mit 1200 g Kieselgel-60 aufgegeben. Man eluiert mit Chloroform/lsopropanol (95 : 5), bis kein weiteres Produkt mehr abläuft. Anschließend eluiert man mit einem Chloroform/Methanol/Wasser-Gemisch (90 : 10 : 1), wobei das (durch Dünnschichtchromatographie identifizierte) Produkt ausläuft. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 6,73 g BOC-Phe-Thr^-Ser-OMe. .Methylene chloride suspended. After adjusting the pH value to .7 with triethylamine, the reaction mixture is stirred for 2 hours at 25 ° C and then extracted three times with each 100 ml of water. The precipitated crude product is filtered at>. The combined aqueous solutions are mixed with 100 ml of methylene dichloride re-extracted and the extracts combined, dried over magnesium sulfate and filtered. When evaporating the filtrate to dryness gives further crude product. The combined crude product (7.9 g) is in a possible a small amount of a chloroform / isopropanol mixture (95: 5) and the solution on a column with 1200 g of silica gel-60 given up. It is eluted with chloroform / isopropanol (95: 5) until no further product runs off. Then eluted one with a chloroform / methanol / water mixture (90: 10: 1), whereby the (identified by thin layer chromatography) Product expires. The fractions containing the product are combined and evaporated to dryness. You get 6.73 g BOC-Phe-Thr ^ -Ser-OMe. .
Stufe bStage b
6,63 g BOC-Phe-Thr-Ser-OMe werden in 67 ml Trifluoressigsäure suspendiert. Die Suspension wird bis zur vollständigen Lösung bei 25 C gerührt. Anschließend wird die Losung auf O0C abgekühlt und das Produkt durch Zugabe von 300 ml Äther und 600 ml Petroläther zur Ausfällung gebracht. Das Produkt wird abfiltriert, mit Äther/Petroläther ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 6,4 g im wesentlichen reines Phe-Thr-Ser-OMe.TFA.6.63 g of BOC-Phe-Thr-Ser-OMe are suspended in 67 ml of trifluoroacetic acid. The suspension is stirred at 25 ° C. until it is completely dissolved. The solution is then cooled to 0 ° C. and the product is precipitated by adding 300 ml of ether and 600 ml of petroleum ether. The product is filtered off, washed with ether / petroleum ether and dried in vacuo. 6.4 g of essentially pure Phe-Thr-Ser-OMe.TFA are obtained.
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Stufe aStage a
6,4 g Phe-Thr-Ser-OMe.TFA und 4,6 g BOC-Thr-HSE werden in 100 ml Methylendichlorid suspendiert. Nach Einstellung des pH-Wertes auf 7 mit Triäthylamin rührt man das Reaktionsgemisch 90 min bei 25°C Anschließend wird das Rohprodukt abfiltriert, teilweise in 50 ml Methanol gelöst und durch Zugabe von 450 ml Äther zur Ausfällung gebracht. Man filtriert das teilweise gereinigte Produkt ab und wiederholt den Umfällprozeß viermal. Danach erhält man 6,04 g im wesentlichen reines BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.6.4 g of Phe-Thr-Ser-OMe.TFA and 4.6 g of BOC-Thr-HSE will be suspended in 100 ml of methylene dichloride. After adjusting the pH to 7 with triethylamine, the reaction mixture is stirred 90 min at 25 ° C. The crude product is then filtered off and partially dissolved in 50 ml of methanol and precipitated by adding 450 ml of ether. The partially purified product is filtered off and repeated the reprecipitation process four times. Thereafter, 6.04 g of essentially pure BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe are obtained.
Stufe bStage b
5,93 g BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe werden in 45 ml Äthylacetat suspendiert. Man kühlt die Suspension in Eisbad auf O0C ab und leitet 9 min einen kräftigen Strom von wasserfreiem Chlorwasserstoffgas und anschließend 4 min einen Stickstoff strom ein. Zur vollständigen Ausfällung des Produkts werden dann 170 ml Äther und 285 ml Petroläther zugegeben. Das Produkt wird abfiltriert, mit einem Äther/Petroläther-Gemisch ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 5,66 g Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.HCl.5.93 g of BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe are suspended in 45 ml of ethyl acetate. The suspension is cooled to 0 ° C. in an ice bath and a vigorous stream of anhydrous hydrogen chloride gas is passed in for 9 min and then a stream of nitrogen for 4 min. To completely precipitate the product, 170 ml of ether and 285 ml of petroleum ether are then added. The product is filtered off, washed with an ether / petroleum ether mixture and dried in vacuo. 5.66 g of Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.HCl are obtained.
Herstellung von (s-IN0C)Lys~Thr-Phe--Thr-Ser-0Me.2TFA ■ Stufe a Production of (s-IN0C) Lys ~ Thr-Phe - Thr-Ser-0Me.2TFA ■ Stage a
Ein Gemisch von 5,63 g Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.HCl, 4,27 g BOC-(e-INOC)Lys, 2,57 g N-Hydroxybenzotriazolmonohydrat, 20 ml DMF und 30 ml Methylendichlorid wird durchgerührt.A mixture of 5.63 g Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.HCl, 4.27 g BOC- (e-INOC) Lys, 2.57 g N-hydroxybenzotriazole monohydrate, 20 ml of DMF and 30 ml of methylene dichloride are stirred through.
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Dann fügt man unter Rühren eine Lösung von 2,42 g Dicyclohexylcarbodiimid in 4,S ml Methylendichlorid hinzu. Anschließend werden innerhalb von 90 min unter kräftigem Rühren 3,7 ml Triäthylamin in Form von drei Teilmengen zugesetzt. Man filtriert den ausgefällten Dicyclohexy!harnstoff vom Reaktionsgemisch ab und wäscht mit Chloroform nach. Die vereinigten Filtrate und Waschwässer werden bis auf 20 ml eingeengt. Man bringt das Produkt durch Zugabe von Petroläther zur Abscheidung. Das abgeschiedene Öl wird fünfmal durch Dekantieren mit Petroläther gewaschen und dann in etwa 100 ml Chloroform suspendiert. Man wäscht das. organische Gemisch durch Dekantieren mit drei 100-ml-Portionen Wasser. Die organische Phase wird filtriert und das feste Produkt mit Äther gewaschen und im Vakuum getrocknet. Dabei erhält man 8,62 g Rohprodukt. Dieses wird in 150 ml eines Chloroforn/Isopropanol/Wasser-Gemisches (85 : 19 : 1,2) gelöst und die Lösung auf eine mit 1,3 kg Kieselgel-60 gefüllte Säule aufgegeben. Man eluiert das Produkt mit demselben Lösungsmittelgemisch. Die das Produkt (aufgrund der Dünnschichtchromatographie identifiziert) enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum eingedampft. Dabei erhält man 6,72 g im wesentlichen reines BOC-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. A solution of 2.42 g of dicyclohexylcarbodiimide is then added with stirring in 4.5 ml of methylene dichloride added. Afterward 3.7 ml of triethylamine are added in the form of three portions over the course of 90 minutes with vigorous stirring. The precipitated dicyclohexyurea is filtered off from the reaction mixture and washed with chloroform. The combined filtrates and wash water are up to concentrated to 20 ml. The product is caused to separate by adding petroleum ether. The separated oil will washed five times by decanting with petroleum ether and then suspended in about 100 ml of chloroform. You wash that. organic mixture by decanting with three 100 ml servings Water. The organic phase is filtered and the solid product is washed with ether and dried in vacuo. This gives 8.62 g of crude product. This is dissolved in 150 ml of a chloroform / isopropanol / water mixture (85: 19: 1.2) dissolved and the solution to a filled with 1.3 kg of silica gel-60 Pillar abandoned. The product is eluted with the same mixture of solvents. The product (due to the Thin-layer chromatography identified) containing fractions are combined and evaporated in vacuo. Included 6.72 g of essentially pure BOC- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe are obtained.
Stufe bStage b
6,65 g BOC-(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe werden in 65 ml Trifluoressigsäure gelöst. Man rührt die Lösung 3 min bei 250C, kühlt sie dann im Eisbad und bringt das Produkt durch Zugabe von 250 ml kaltem Äther und 400 ml kaltem Petroläther zur Ausfällung. Danach filtriert man das Gemisch und wäscht den Filterrückstand mit einem Äther/Petroläther-6.65 g of BOC- (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe are dissolved in 65 ml of trifluoroacetic acid. The solution is stirred for 3 min at 25 ° C., then cooled in an ice bath and the product is precipitated by adding 250 ml of cold ether and 400 ml of cold petroleum ether. The mixture is then filtered and the filter residue is washed with an ether / petroleum ether
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15 757Y *\\ ^" 15 757Y * \\ ^ "
Gemisch aus. Nach Trocknung des Feststoffs im Vakuum erhält man 8,1 g im wesentlichen reines (e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.2TFA. Mixture of. After drying the solid in vacuo, 8.1 g of essentially pure (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.2TFA are obtained.
Herstellung von BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydraz idProduction of BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydraz id
Stufe aStage a
8>1 g (ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.2TFA werden in einer möglichst geringen DMF-Menge gelöst. Man versetzt die Lösung unter Rühren mit 2,98 g BOC-Trp-HSE, stellt sie mit Triäthylamin auf einen pH-Wert von 7 ein und rührt das Reaktionsgemisch 3 1/2 std bei 250C. Dann stellt man das Reaktionsgemisch durch Zugabe von weiterem Triäthylamin auf einen pH-Wert von 7 ein und rührt es 18 std bei 25°C. Nach neuerlicher pH-Einstellung auf 7 mit Triäthylamin rührt man den Ansatz weitere 3 std bei 25°C, wonach die Umsetzung im wesentlichen abgeschlossen ist. Danach bringt man das Produkt durch Zugabe von Äther zur Ausfällung und dekantiert das Lösungsmittel ab. Man regt die Verfestigung des ölartigen Produkts durch Anreiben mit Äther an. Dann wird das Produkt abfiltriert und im Vakuum getrocknet} es werden 8,31 g Rohprodukt isoliert. Man löst das Rohprodukt in einer möglichst geringen Menge eines Chloroform/ Methanol/Wasser-Gemisches (85 : 15 : 1,5), gibt die Lösung auf eine mit 1 kg Kieselgel-60 beschickte Säule auf und eluiert mit demselben Lösungsmittelgemisch. Die das Produkt (aufgrund der dünnschichtchromatographischen Identifizierung) enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und 8 > 1 g (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.2TFA are dissolved in the smallest possible amount of DMF. 2.98 g of BOC-Trp-HSE are added to the solution while stirring, the pH is adjusted to 7 with triethylamine and the reaction mixture is stirred for 3 1/2 hours at 25 ° C. The reaction mixture is then adjusted by addition of further triethylamine to a pH value of 7 and it is stirred at 25 ° C. for 18 hours. After adjusting the pH to 7 again with triethylamine, the batch is stirred for a further 3 hours at 25 ° C., after which the reaction is essentially complete. The product is then precipitated by adding ether and the solvent is decanted off. The solidification of the oily product is stimulated by rubbing it with ether. The product is then filtered off and dried in vacuo} 8.31 g of crude product are isolated. The crude product is dissolved in the smallest possible amount of a chloroform / methanol / water mixture (85: 15: 1.5), the solution is applied to a column loaded with 1 kg of silica gel-60 and eluted with the same solvent mixture. The fractions containing the product (based on thin-layer chromatographic identification) are pooled and
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im Vakuum zur Trockene eingedampft. Dabei erhält man 5 g im wesentlichen reines BOC-Trp(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. evaporated to dryness in vacuo. This gives 5 g of essentially pure BOC-Trp (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.
Stufe bStage b
2 g BOC-Trp(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe werden in 3 ml eines Methanol/Hydrazin-Gemisches (2:1) bei 00C suspendiert. Die Suspension wird so large gerührt, bis sie homogen ist. Dann tropft man bis zur vollständigen Lösung wasserfreies Hydrazin zu. Die Reaktionslösung wird anschließend weitere 15 min bei 250C gerührt und danach im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der feste Rückstand wird im Vakuum zweimal mit jeweils 5 ml Methanol gespült. Man suspendiert das Produkt in Methanol, rührt die Suspension und zentrifugiert das Produkt ab. Danach wäscht man das Produkt mit 30 ml Methanol, isoliert es durch fünfmaliges Zentrifugieren und trocknet es im Vakuum. Dabei erhält man 1,6 g im wesentlichen reines BOC-Trp(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid. 2 g of BOC-Trp (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe are suspended in 3 ml of a methanol / hydrazine mixture (2: 1) at 0 ° C. The suspension is stirred until it is homogeneous. Anhydrous hydrazine is then added dropwise until it is completely dissolved. The reaction solution is then stirred for a further 15 min at 25 ° C. and then evaporated to dryness in vacuo. The solid residue is rinsed twice with 5 ml of methanol each time. The product is suspended in methanol, the suspension is stirred and the product is centrifuged off. The product is then washed with 30 ml of methanol, isolated by centrifugation five times and dried in vacuo. This gives 1.6 g of essentially pure BOC-Trp (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide.
Herstellung von BOC-D-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-SerhydrazidProduction of BOC-D-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Serhydrazide
Die Verbindung wird analog Beispiel 5, Stufen a und b, wobei man BOC-D-Trp-HSE anstelle von BOC-Trp-HSE einsetzt, hergestellt.The compound is analogous to Example 5, steps a and b, using BOC-D-Trp-HSE instead of BOC-Trp-HSE, manufactured.
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Stufe aStage a
Eine Suspension von 10,78 g Phe-OMe-hydrochlorid in 500 ml MethylendiChlorid wird mit 18 g BOC-PheHSE versetzt. Man stellt den pH-Wert mit Triethylamin auf 9 ein, wobei eine klare Lösung entsteht. Man läßt die Lösung über Nacht stehen, wonach man die ausgefällten Feststoffe abfiltriert und mit Methylendichlorid auswäscht. Das Filtrat und die Waschwässer, welche das Produkt enthalten, werden vereinigt und mit gesättigter Natriumchloridlösung (2 χ 500 ml), 10biger Natriumbicarbonatlösung (2 χ 500 ml) und 0,1n-Schwefelsäure (2 χ 250 ml) gewaschen. Die Waschwässer werden mit Methylendichlorid (200 ml) rückgewaschen. Die vereinigten Methylendichloridlösungen werden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Der beim Eindampfen des Filtrats zur Trockene erhaltene Rückstand wird aus Methylendichlorid/Hexan umkristallisiert. Dabei erhält man 9 g des geschützten Dipeptide BOC-Phe-Phe-OMe vom Fp. 122,0A suspension of 10.78 g of Phe-OMe hydrochloride in 500 ml Methylene chloride is mixed with 18 g of BOC-PheHSE. Man adjusts the pH value to 9 with triethylamine, whereby a clear solution is formed. The solution is left to stand overnight, after which the precipitated solids are filtered off and washed with methylene dichloride. The filtrate and the Wash waters which contain the product are combined and 10biger with saturated sodium chloride solution (2 × 500 ml) Sodium bicarbonate solution (2 × 500 ml) and 0.1N sulfuric acid (2 × 250 ml) washed. The wash waters are backwashed with methylene dichloride (200 ml). The combined methylene dichloride solutions are dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The evaporation of the The residue obtained filtrate to dryness is made from methylene dichloride / hexane recrystallized. This gives 9 g of the protected dipeptide BOC-Phe-Phe-OMe with a melting point of 122.0
Aus den Filtraten wird eine zweite Kristallausbeute (11 g) gewonnen.A second crop of crystals (11 g) is obtained from the filtrates.
Stufe bStage b
3 g des geschützten Dipeptids werden in 100 ml Äthylacetat suspendiert. Man kühlt die Suspension im Eisbad und leitet 15 min wasserfreies Chlorwasserstoffgas ein. Der Chlorwasserstoff wird danach mit Stickstoff ausgespült.3 g of the protected dipeptide are dissolved in 100 ml of ethyl acetate suspended. The suspension is cooled in an ice bath and anhydrous hydrogen chloride gas is passed in for 15 minutes. Of the Hydrogen chloride is then flushed out with nitrogen.
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Anschließend wird der Feststoff abfiltriert, mit Äthylacetat ausgewaschen und im Vakuum bei Raumtemperatur getrocknet. Man erhält 2,1 g Phe-Phe-OMe-hydrochlorid.The solid is then filtered off with ethyl acetate washed out and dried in vacuo at room temperature. 2.1 g of Phe-Phe-OMe hydrochloride are obtained.
CHN Phe-Phe-OMe.HCl: berechnet: 63,06 6,41 7,74CHN Phe-Phe-OMe.HCl: Calculated: 63.06 6.41 7.74
gefunden: 63,00 6,52 7,66.found: 63.00 6.52 7.66.
!Herstellung von Asn-Phe-Phe-QMe-hydrochlorid Stufe a! Production of Asn-Phe-Phe-QMe hydrochloride Stage a
12,3 g Phe-Phe-OMe-hydrochlorid werden in 102 ml frisch entgastem DMF gelöst. Man versetzt die Lösung mit 12,86 g (7% Überschuß) BOC-AsnNPH. Dann stellt man die Reaktionslösung durch Zugabe von 4,73 ml TEA auf einen pH-Wert von 7,2 ein und rührt sie über Wacht. Danach dampft man die Reaktionslösung ira Vakuum zur Trockene ein und nimmt den Rückstand in Chloroform auf. Die Chloroformlösung wird mit Wasser, gesättigter Natriumbicarbonatlösung, O,1m-Schwefelsäure und nochmals Wasser gewaschen. Dann trocknet man die Lösung über wasserfreiem Magnesiumsulfat und dampft sie zur Trockene ein. Das zurückbleibende feste Rohprodukt wird in einer möglichst geringen Menge von heißem Äthanol gelöst. Beim Abkühlen kristallisiert das Produkt aus der Lösung aus. Die Kristalle werden abgenutscht, mit kaltem Äthanol ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Dabei erhält man 9,18 g BOC-Asn-Phe-Phe-OMe.12.3 g of Phe-Phe-OMe hydrochloride are dissolved in 102 ml of freshly degassed DMF. The solution is mixed with 12.86 g (7% excess) BOC-AsnNPH. The reaction solution is then adjusted to a pH of 7.2 by adding 4.73 ml of TEA and stirred overnight. The reaction solution is then evaporated to dryness in a vacuum and the residue is taken up in chloroform. The chloroform solution is washed with water, saturated sodium bicarbonate solution, 0.1 M sulfuric acid and again with water. The solution is then dried over anhydrous magnesium sulfate and evaporated to dryness. The remaining solid crude product is dissolved in the smallest possible amount of hot ethanol. The product crystallizes out of the solution on cooling. The crystals are filtered off with suction, washed out with cold ethanol and dried in vacuo. This gives 9.18 g of BOC-Asn-Phe-Phe-OMe.
Stufe bStage b
8,5 g BOC-Asn-Phe-Phe-OMe werden in 110 ml wasserfreiem8.5 g of BOC-Asn-Phe-Phe-OMe are in 110 ml of anhydrous
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Äthylacetat aufgeschlämmt. Man kühlt die Aufschlämmung im Eisbad auf O C ab und leitet 15 min einen kräftigen Strom von wasserfreiem Chlorv/asserstoffgas ein. Dabei entsteht eine klare Lösung, welche man mit Hilfe eines Stickstoffstroms spült. Nach Zugabe von 100 ml Äther scheidet sich das feste Produkt aus der Lösung ab. Der Feststoff wird abgenutscht, mit Äther (3 x 100 ml) ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 7,27 g Asn-Phe-Phe-OMe-hydrochlorid. Slurried ethyl acetate. The slurry is cooled in the Turn the ice bath to OC and pass a vigorous stream of anhydrous chlorine / hydrogen gas in for 15 min. This creates a clear solution which is flushed with the aid of a stream of nitrogen. After adding 100 ml of ether it separates the solid product from the solution. The solid is filtered off with suction, washed with ether (3 x 100 ml) and im Vacuum dried. 7.27 g of Asn-Phe-Phe-OMe hydrochloride are obtained.
Herstellung von (e-INOC^Lys-Asn-Phe-Phe-OMe-dihydrochlorid Stufe a Production of (e-INOC ^ Lys-Asn-Phe-Phe-OMe-dihydrochloride stage a
1,9 g Ct-BOC-(F-IHOC)LyS werden in 50 ml frisch entgastem DMF gelöst. Man versetzt die Lösung mit 0,675 g 1-Hydroxybenzotriazol, rührt 3ie und kühlt sie im Eisbad. Die abgekühlte Lösung wird mit 1,15 g DCCI versetzt. Man entfernt das Eisbad und rührt das Reaktionsgemisch weitere 30 min. Anschließend fügt man 2,33 g Asn-Phe-Phe-OMe-hydrochlorid hinzu. Danach stellt man das Reaktionsgemisch durch Zugabe von 1,92 ml TEA auf einen pH-Wert von 7,6 ein und rührt es über Nacht bei Raumtemperatur. Anschließend werden jegliche Feststoffe vom Reaktionsgemisch abfiltriert. Das FiItrat wird im Vakuum zur Trockene eingedampft._Man verrührt den Rückstand mit 800 ml Chloroform, nutscht die Masse ab, wäscht den gelatinösen Feststoff mit Chloroform aus und trocknet ihm im Vakuum. Dabei erhält man 1,8 g Ct-BOC-(E-INOC) Ly s-Asn-Phe-Phe-OMe. Das FiItrat und die Waschwässer werden im Vakuum zur Trockene eingedampft. Man suspendiert den Rück-1.9 g of Ct-BOC- (F-IHOC) LyS are dissolved in 50 ml of freshly degassed DMF solved. The solution is mixed with 0.675 g of 1-hydroxybenzotriazole, stirs them and cools them in an ice bath. 1.15 g of DCCI are added to the cooled solution. The ice bath is removed and the reaction mixture is stirred for a further 30 minutes, then 2.33 g of Asn-Phe-Phe-OMe hydrochloride are added. The reaction mixture is then adjusted to a pH of 7.6 by adding 1.92 ml of TEA and stirred over it Night at room temperature. Any solids are then filtered off from the reaction mixture. The FiItrat will evaporated to dryness in vacuo. The residue is stirred with 800 ml of chloroform, the mass is filtered off with suction, the gelatinous solid was washed out with chloroform and dried him in a vacuum. This gives 1.8 g of Ct-BOC- (E-INOC) Ly s-Asn-Phe-Phe-OMe. The filtrate and the washing water are evaporated to dryness in a vacuum. The return is suspended
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stand neuerlich in Chloroform, nutscht die Suspension ab, wäscht den Feststoff mit Chloroform aus und trocknet ihn im Vakuum. Dabei erhält man weitere 1,82 g des Produkts.was again in chloroform, the suspension sucks off, washes the solid with chloroform and dries it in a vacuum. This gives a further 1.82 g of the product.
Stufe bStage b
1 g a-BOC-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe wird in 13 ml wasserfreiem Äthylacetat aufgeschlämmt. In die Suspension wird unter Rühren und Eisbadkühlung 15 min ein kräftiger Strom von wasserfreiem Chlorwasserstoffgas eingeleitet. Anschließend spült man die Suspension 15 min mit Stickstoff. Das feste Produkt wird abgenutscht, mit Äthylacetat ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Produktausbeute beträgt 1,04 g.1 g of a-BOC- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe is anhydrous in 13 ml Slurried ethyl acetate. A vigorous stream is poured into the suspension for 15 min while stirring and cooling with an ice bath initiated by anhydrous hydrogen chloride gas. Afterward the suspension is flushed with nitrogen for 15 min. The solid product is filtered off with suction and washed out with ethyl acetate and dried in vacuo. The product yield is 1.04 g.
Herstellung Manufacturing -von i£ -of i £ -Methyl-a-aminosuberat. HCl-Methyl-a-aminosuberate. HCl
Eine Suspension von 22,8 g a-Aminokorksäure in 450 ml Methanol wird mit 72 ml gesättigter methanolischer Salzsäure versetzt. Man rührt den Ansatz 30 min bei 25°C, wobei eine vollständige Lösung erfolgt. Danach dampft man die Reaktionslösung zur Trockene ein und spült den Rückstand durch dreimaliges Verdampfen von Methanol. Das Produkt wird aus Methanol durch Zugabe von Äther zur Kristallisation gebracht, abfiltriert und bei 25°C im Vakuum getrocknet. Das Rohprodukt (18 g) wird aus Methanol/Äther umkristallisiert; dabei erhält man 13 g im wesentlichen reines to-Methyl-a-aminosuberat.HCl.A suspension of 22.8 g of α-aminocork acid in 450 ml of methanol is mixed with 72 ml of saturated methanolic hydrochloric acid offset. The batch is stirred for 30 minutes at 25 ° C., complete dissolution taking place. Then you steam the reaction solution to dryness and rinses the residue by three evaporation of methanol. The product is made to crystallize from methanol by adding ether, filtered off and dried at 25 ° C in a vacuum. The crude product (18 g) is recrystallized from methanol / ether; this essentially gives 13 g pure to-methyl-a-aminosuberate.HCl.
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tete
13 g LD-Methyl-a-aminosuberat.HCl werden in einem Gemisch von 811 ml tert.--Butylacetat und 8,65 ml Perchlorsäure gelöst. Man läßt die Lösung 4 Tage bei 25°C stehen und extrahiert dann zweimal mit jeweils 600 ml 0,5n-HCl. Die vereinigten wäßrigen Lösungen werden mit Natriumbicarbonat auf einen pH-Wert von 7 eingestellt und dreimal mit jeweils 700 ml Äther extrahiert. Man trocknet die vereinigten Ätherextrakte über wasserfreiem Natriumsulfat, filtriert und dampft das Filtrat ein. Dabei erhält man 5,5 g a-tert.-Butyl-U)-methyl-a-aminosuberat in Form eines Öls.13 g of LD -Methyl-a-aminosuberat.HCl are dissolved in a mixture of 811 ml of tert-butyl acetate and 8.65 ml of perchloric acid. The solution is left to stand for 4 days at 25 ° C. and then extracted twice with 600 ml of 0.5N HCl each time. The combined aqueous solutions are adjusted to a pH of 7 with sodium bicarbonate and extracted three times with 700 ml of ether each time. The combined ether extracts are dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and the filtrate is evaporated. This gives 5.5 g of a-tert-butyl-U) -methyl-a-aminosuberate in the form of an oil.
5,5 g a-tert.-Butyl-Ui-methyl-a-aminosuberat werden in 80 ml DMF gelöst. Man versetzt die Lösung mit 6 g tert.-Butyltrichlorphenylcarbonat und stellt sie mit Triäthylamin auf einen pH-Wert von 8,5 ein. Durch Zugabe von weiterem Triäthylamin während 1 std wird der pH-Wert von 8,5 aufrechterhalten. Das Reaktionsgemisch wird dann über Nacht bei 250C gerührt und anschließend im Vakuum zu einem schweren Öl eingedampft. Man löst das Öl in 600 ml Äther, extrahiert die Lösung dreimal mit jeweils 600 ml gesättigter Natriumbicarbonatlösung, dreimal mit jeweils 600 ml 0,1n-Schwefelsäure und zuletzt einmal mit 600 ml gesättigter Natriumchloridlösung. Dann dampft man die Ätherlösung zur Trockene ein. Man erhält 8,6 g a-tert.-Butyl-to-methyl-N-BOC-a-aminosuberat in Form eines schweren Öls.5.5 g of a-tert-butyl-Ui-methyl-a-aminosuberate are dissolved in 80 ml of DMF. 6 g of tert-butyl trichlorophenyl carbonate are added to the solution and the pH is adjusted to 8.5 with triethylamine. The pH of 8.5 is maintained by adding more triethylamine over the course of 1 hour. The reaction mixture is then stirred at 25 ° C. overnight and then evaporated to a heavy oil in vacuo. The oil is dissolved in 600 ml of ether, the solution is extracted three times with 600 ml of saturated sodium bicarbonate solution each time, three times with 600 ml of 0.1N sulfuric acid each time and finally once with 600 ml of saturated sodium chloride solution. Then the ethereal solution is evaporated to dryness. 8.6 g of a-tert-butyl-to-methyl-N-BOC-a-aminosuberate are obtained in the form of a heavy oil.
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Herstellung^,yon .a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat Production ^ , yon .a-tert-butyl-BOC-a-aminosuberate
5 g a-tert.-Butyl-ω -methyl-N-BOC-a-aminosuberat werden in einem Gemisch von 208 ml Dioxan und 133 ml 1n-Natriumhydroxid gelöst. Man rührt den Ansatz 75 min bei 250C und dampft anschließend das organische Lösungsmittel im Vakuum ab. Nach Zugabe von 150 ml Wasser stellt man die Lösung mit verdünnter Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 4,6 ein und extrahiert dreimal mit jeweils 150 ml Äther. Die vereinigten Ätherextrakte v/erden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zu einem schweren Sirup eingedampft. Das Rohprodukt (4,5 g) wird in einer möglichst geringen Menge Methylendichlorid gelöst. Man gibt die Lösung auf eine mit 400 g Kieselgel-60 beschickte Säule auf und eluiert die Nebenprodukte mit Methylendichlorid. Wenn im Eluat aufgrund der Dünnschxchtchromatographie keine weiteren Nebenprodukte festgestellt werden, verwendet man zur Elution des Produkts ein Methylendichlorid/Isopropanol-Gemisch (98 :2). Die das Produkt (aufgrund der dünnschichtchromatographisehen Analyse) enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Durch Umkristallisation aus Hexan erhält man 1,5 g α-tert.-Butylester-BOC-a-aminosuberat vom Fp. 72 bis 73°C.5 g of a-tert-butyl-ω-methyl-N-BOC-a-aminosuberate are dissolved in a mixture of 208 ml of dioxane and 133 ml of 1N sodium hydroxide. The batch is stirred for 75 min at 25 ° C. and the organic solvent is then evaporated off in vacuo. After adding 150 ml of water, the solution is adjusted to pH 4.6 with dilute sulfuric acid and extracted three times with 150 ml of ether each time. The combined ether extracts are dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated in vacuo to a heavy syrup. The crude product (4.5 g) is dissolved in the smallest possible amount of methylene dichloride. The solution is applied to a column charged with 400 g of silica gel-60 and the by-products are eluted with methylene dichloride. If no further by-products are found in the eluate on the basis of thin-layer chromatography, a methylene dichloride / isopropanol mixture (98: 2) is used to elute the product. The fractions containing the product (based on thin-layer chromatography analysis) are combined and evaporated to dryness in vacuo. Recrystallization from hexane gives 1.5 g of α-tert-butyl ester BOC-α-aminosuberate with a melting point of 72 to 73 ° C.
Beispiel 13 . . Example 13 . .
Herstellung von a-tert.-Butyl- Production of a-tert-butyl U) U) -p-nitrophenyl-BOC-a-aminosuberat-p-nitrophenyl-BOC-a-aminosuberate
Ein Gemisch von 1,38 g a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat, 0,556 g p-Nitrophenol und 0,865 g DCCI in 30 ml Methylen-A mixture of 1.38 g of a-tert-butyl-BOC-a-aminosuberate, 0.556 g p-nitrophenol and 0.865 g DCCI in 30 ml methylene
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dichlorid wird 4 std bei 25°C gerührt. Anschließend wird . der ausgefallene Dieyclohexy !harnstoff vom Reaktionsgemisch abfiltriert und mit Methylendichlorid ausgewaschen. Die das Produkt enthaltenden vereinigten organischen Lösungen werden im Vakuum zu einem schweren Öl eingedampft. Man löst das Öl in 20 ml Äther,. versetzt die Lösung mit 0,1 ml Essigsäure, rührt sie 2 std bei 25 C, dampft sie zu einem schweren Öl ein und trocknet den Rückstand im Vakuum. Dabei erhält man 1,7 g a-tert.-Butyl-ω-p-nitrophenyl-BOC~aaminosuberat. dichloride is stirred at 25 ° C. for 4 hours. Then will. the precipitated dieyclohexy urea from the reaction mixture filtered off and washed with methylene dichloride. the Combined organic solutions containing the product are evaporated in vacuo to a heavy oil. Man dissolves the oil in 20 ml of ether. add 0.1 ml of acetic acid to the solution, stir it for 2 hours at 25 ° C. and evaporate it to one heavy oil and dry the residue in vacuo. 1.7 g of a-tert-butyl-ω-p-nitrophenyl-BOC-amino suberate are obtained in this way.
Herstellung von a-tert.-Butylester-BOC-OJ-Asu-Cs-INOCQLys-Asn-Phe-Phe-OHeProduction of a-tert-butyl ester-BOC-OJ-Asu-Cs-INOCQLys-Asn-Phe-Phe-OHe
Eine Lösung von 1 g (e-IN0C)Lys-Asn-Phe-Phe-0Me.2;HCl in 20 ml DMF wird mit einer Lösung von 0,755 g oc-tert.-Butyl-Q-p-nitrophenyl-DOC-a-aminosuberat in 3,5 ml THF bei 25°C unter Rühren eingetragen. Man stellt die erhaltene Lösung mit Diisopropyläthylamin auf einen pH-Wert von 8 ein und rührt sie 18 std bei 25°C. Anschließend dampft man das Reaktionsgemisch im Vakuum zu einem schweren Öl ein und löst dieses in 50 ml Methylendichlorid. Die Lösung wird mit Wasser und anschließend mit gesättigter Natriumbicarbonatlösung bis zur Beseitigung des gesamten p-Nitrophenols extrahiert. Anschließend wäscht man di.e_ Lösung mit weiterem Wasser und trocknet sie über wasserfreiem Natriumsulfat. Hierauf filtriert man, dampft das Filtrat im Vakuum zur Trockene ein, löst das erhaltene Rohprodukt in einer möglichst geringen Menge eines Chloroform/Methanol/Wasser-Gemisches (80 : 20 : 2) und gibt die Lösung auf eine mit 150 gA solution of 1 g (e-IN0C) Lys-Asn-Phe-Phe-0Me.2; HCl in 20 ml of DMF is mixed with a solution of 0.755 g of oc-tert-butyl-Q-p-nitrophenyl-DOC-a-aminosuberate registered in 3.5 ml of THF at 25 ° C with stirring. The solution obtained is presented with diisopropylethylamine to a pH of 8 and stir for 18 hours at 25 ° C. The reaction mixture is then evaporated in vacuo to a heavy oil and dissolved this in 50 ml of methylene dichloride. The solution is made with water and then with saturated sodium bicarbonate solution extracted until all p-nitrophenol is eliminated. The solution is then washed with more Water and dry them over anhydrous sodium sulfate. It is then filtered and the filtrate is evaporated in vacuo Dry, dissolves the crude product obtained in the smallest possible amount of a chloroform / methanol / water mixture (80: 20: 2) and add the solution to a 150 g
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Kieselgel-60 beschickte Säule auf. Das Produkt wird mit demselben Lösungsmittelgemisch eluiert. Die das Produkt (aufgrund der dünnschichtchromatographisehen Analyse) enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Dabei erhält man 0,885 g a-tert.-Butylester-B0C-tO-Asu-(e-IN0C)Lys-Asn-Phe-Phe-0Me. Silica gel-60 loaded column. The product comes with eluted in the same solvent mixture. Those containing the product (based on thin-layer chromatographic analysis) Fractions are combined and evaporated to dryness in vacuo. This gives 0.885 g of a-tert-butyl ester-B0C-to-Asu (e-IN0C) Lys-Asn-Phe-Phe-0Me.
0,855 g des Produkts von Beispiel 14 werden in 5 ml Trifluoressigsäure gelöst. Man rührt die Lösung 90 min bei 250C und bringt dann das Produkt durch Zugabe von Petroläther zur Ausfällung. Der abzentrxfugierte Feststoff wird mit Petroläther (3 x 10 ml) ausgewaschen, nochmals abzentrifugiert und im Vakuum getrocknet. Man erhält 0,725 g CO-Asu-(ε-inoC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.2TFA. 0.855 g of the product from Example 14 are dissolved in 5 ml of trifluoroacetic acid. The solution is stirred 90 min at 25 0 C and then puts the product by addition of petroleum ether to precipitate. The centrifuged solid is washed out with petroleum ether (3 × 10 ml), centrifuged again and dried in vacuo. 0.725 g of CO-Asu (ε-inoC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.2TFA are obtained.
0,667 g BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid (hergestellt gemäß Beispiel 5) werden bei -25°C unter Rühren in 6,3 ml DMF gelöst. Man versetzt die Lösung mit 0,585 ml 5,5n-HCl in THF und fügt danach innerhalb von 2 std unter Rühren bei -250C 75 mg Isoamylnitrit in Form von 7 Teilmengen hinzu. Dadurch erhält man eine Lösung des Hexapeptidazids. 0.667 g of BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide (prepared according to Example 5) are dissolved in 6.3 ml of DMF at -25 ° C. with stirring. The solution is mixed with 0.585 ml 5,5n-HCl in THF and then added within 2 hours under stirring at -25 0 C 75 mg of isoamyl nitrite in the form of 7 subsets added. This gives a solution of the hexapeptide azide.
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Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 16 hergestellt, wobei man jedoch anstelle von BOC-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid gemäß Beispiel 5a hergestelltes BOC-D-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid einsetzt.The desired compound is produced analogously to Example 16, however, instead of BOC-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide BOC-D-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide prepared according to Example 5a is used.
Herstellung von BOC-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-to-Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe Production of BOC-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-to-Asu (ε-INOC) Lys-Asn- Phe-Phe-OMe
Die gemäß Beispiel 16 hergestellte Lösung des Hexapeptidazids wird bei -300C unter Rühren mit einer Lösung von 0,554 g O3-Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.2TFA (hergestellt gemäß Beispiel 15) in 6 ml DMF versetzt. Man stellt die Lösung mit Diisopropyläthylamin auf einen pH-Wert von 7,8 ein und läßt sie 18 std bei -200C stehen. Anschließend dampft man das Reaktionsgemisch im Vakuum zu einem schweren Öl ein und reibt dieses mit 30 ml Methanol an. Das feste Produkt wird abzentrifugiert und sechsmal mit jeweils 30 ml warmem Methanol ausgewaschen. Nach Trocknung im Vakuum erhält man 0,855 g des im wesentlichen reinen, geschützten Undekapeptids BOC-Trp-fe-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-^-Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe. The solution of the Hexapeptidazids prepared according to Example 16 is carried out at -30 0 C under stirring with a solution of 0.554 g-O3 ASU (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.2TFA (prepared according to Example 15) in 6 ml of DMF added. The solution is prepared with diisopropylethylamine to a pH value of 7.8 and lets them for 18 hours at -20 0 C are. The reaction mixture is then evaporated in vacuo to a heavy oil and this is rubbed with 30 ml of methanol. The solid product is centrifuged off and washed six times with 30 ml of warm methanol each time. After drying in vacuo, 0.855 g of the essentially pure, protected undecapeptide BOC-Trp-fe-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser - ^ - Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe- OMe.
Herstellung von BOC-D-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-tQ -Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMeProduction of BOC-D-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-tQ -Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe
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Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 17 hergestellt, wobei man anstelle des Hexapeptidazids BOC-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azid gemäß Beispiel 16a erzeugtes BOC-D-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azid einsetzt. The desired compound is prepared analogously to Example 17, using Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azide instead of the hexapeptide azide BOC-Trp- (ε-INOC) BOC-D-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azide produced according to Example 16a is used.
Herstellung von CyclofGa -Asu-(s-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser1Production of CyclofGa -Asu- (s-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser1
Stufe aStage a
Der gemäß Beispiel 17 hergestellte geschützte Undekapeptidmethylester (0,85 g) wird bei 00C unter Rühren in 1 ml eines Methanol/Hydrazin-Gemisches (2:1) suspendiert. Man versetzt die Suspension bis zur vollständigen Lösung tropfenweise mit wasserfreiem Hydrazin und rührt die Lösung dann 15 min bei 25°C. Anschließend dampft man die Reaktionslösung im Vakuum zur Trockene ein und reibt das feste Produkt mit Methanol an. Danach wird der Feststoff abzentrifugiert, mehrmals mit Methanol ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 0,8 g im wesentlichen reines, geschütztes Undekapeptidhydrazid.Of Example 17 protected Undekapeptidmethylester (0.85 g) prepared according to at 0 0 C under stirring in 1 ml of a methanol / hydrazine mixture (2: 1) were suspended. Anhydrous hydrazine is added dropwise to the suspension until it is completely dissolved, and the solution is then stirred at 25 ° C. for 15 min. The reaction solution is then evaporated to dryness in vacuo and the solid product is rubbed with methanol. The solid is then centrifuged off, washed out several times with methanol and dried in vacuo. 0.8 g of essentially pure, protected undecapeptide hydrazide is obtained.
Stufe bStage b
Das gemäß Beispiel 18, Stufe a, hergestellte geschützte Undekapeptidhydrazid (0,8 g) wird bei O0C unter Rühren in einem Gemisch von 8 ml Äthylacetat und 0,8 ml Mercaptoäthanol suspendiert. Man leitet in die Suspension 25 min bei 00C einen kräftigen Strom von wasserfreiem Chlorwas-The protected undecapeptide hydrazide (0.8 g) prepared according to Example 18, stage a, is suspended at 0 ° C. with stirring in a mixture of 8 ml of ethyl acetate and 0.8 ml of mercaptoethanol. A vigorous stream of anhydrous chlorine water is passed into the suspension for 25 min at 0 ° C.
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serstoff und anschließend einen kräftigen Stickstoffstrom ein. Das ausgefallene Produkt wird abfiltriert, mit 75 ml Äthylacetat ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Dabei erhält man 0,85 g im wesentlichen reines Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Ehe-Thr-Ser-cJ -Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazid.4HCl.hydrogen and then a vigorous stream of nitrogen a. The precipitated product is filtered off, with 75 ml Washed out ethyl acetate and dried in vacuo. This gives 0.85 g of essentially pure Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Ehe-Thr-Ser-cJ -Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazid.4HCl.
Stufe cStage c
Das gemäß Beispiel 18, Stufe b, hergestellte Undekapeptidhydrazid (0,425 g) wird unter Rühren bei -25°C in 3 ml DMF gelöst. Die Lösung wird mit 0,25 ml 5n-HCl in THF versetzt. Dann fügt man innerhalb von 90 min bei -25°C 28 mg Isoamylnitrit in Form von 6 Teilmengen hinzu, wobei eine Lösung des Undekapeptidazids erhalten wird. Diese Lösung wird bei -500C in 420 ml DMF eingetragen, wodurch eine Gesamtkonzentration von 1 mg/ml erzielt wird. Man stellt die Lösung mit Diisopropyläthylamin auf einen pH-Wert von 7,6 ein und läßt sie vier Tage bei -2O0C stehen. Anschließend dampft man die Lösung im Vakuum zur Trockene ein. Der Rückstand wird zusätzlich 18 std im Vakuum getrocknet. Man löst das erhaltene Öl in einer möglichst geringen Menge Methanol, bringt das feste Produkt durch Zugabe von Äthylacetat zur Ausfällung und zentrifugiert es ab. Anschließend wird der Feststoff dreimal mit jeweils 10 ml Äthylacetat ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 0,272 g des im wesentlichen reinen, geschützten cyclischen Undekapeptids Cyclo[os-Asu-(ε-INOC)L2rs-Asn-Phe-Phe-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-SerJ. The undecapeptide hydrazide (0.425 g) prepared according to Example 18, stage b, is dissolved in 3 ml of DMF at -25 ° C. with stirring. 0.25 ml of 5N HCl in THF are added to the solution. Then 28 mg of isoamyl nitrite in the form of 6 partial amounts are added over the course of 90 minutes at -25 ° C., a solution of the undekapeptide azide being obtained. This solution is added at -50 0 C in 420 ml of DMF, is achieved ml whereby a total concentration of 1 mg / ml. The solution is prepared with diisopropylethylamine at a pH of 7.6, and let them stand for four days at -2O 0 C. The solution is then evaporated to dryness in a vacuum. The residue is dried in vacuo for an additional 18 hours. The oil obtained is dissolved in the smallest possible amount of methanol, the solid product is precipitated by adding ethyl acetate and centrifuged. The solid is then washed three times with 10 ml of ethyl acetate each time and dried in vacuo. 0.272 g of the essentially pure, protected cyclic undecapeptide cyclo [os-Asu (ε-INOC) L2 r s-Asn-Phe-Phe-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-SerJ is obtained.
Herstellung von Cycloftp-Asu-(ε-INOC)Lys-Asn-Rie-Phe-D-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-SerlProduction of Cycloftp-Asu- (ε-INOC) Lys-Asn-Rie-Phe-D-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Serl
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Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 18, Stufen a, b und c, hergestellt, wobei man den geschützten Undekapeptidmethylester BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-W _ Asu-(e-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe von Stufe a durch BOC-D-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-£o-Asu-(e-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe (hergestellt gemäß Beispiel 17a) ersetzt.The desired compound is prepared analogously to Example 18, steps a, b and c, using the protected undekapeptide methyl ester BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-W _ Asu- (e-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe from stage a through BOC-D-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser- £ o-Asu- (e-INOC ) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe (produced according to Example 17a) replaced.
Herstellung von Des (AIa y GIy )-desamino[Cys ]dicarba * -spmatostatinProduction of Des (AIa y GIy) -desamino [Cys] dicarba * -spmatostatin
0,3 g des gemäß Beispiel 18, Stufe c, hergestellten Produkts werden in 3 nil 50%iger wäßriger Essigsäure gelöst. Nach Zugabe von 300 mg aktiviertem Zink wird das Gemisch 2 std kräftig gerührt. Anschließend filtriert man das überschüssige Zink ab, gibt das Filtrat auf eine Säule von Sephadex-Gel-25 Superfine auf und eluiert mit 50%iger wäßriger Essigsäure. Es werden 1O-ml-Fraktionen aufgefangen. Die das Produkt (aufgrund der dünnschichtchromatographischen Analyse) enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in Wasser gelöst. Durch Gefriertrocknung erhält man 0,157 g im wesentlichen reines Des(AIa , GIy )-desamino[Cys ]dicarba * somatostatin. Das UV-Spektrum zeigt ein Maximum bei 280 nm. Nach der Säurehydrolyse ergibt die Aminosäurenanalyse folgendes Resultat: Lys2 Q^;_ Asp^ q^ Thr2 16; SerQ ggQ;0.3 g of the product prepared according to Example 18, stage c, is dissolved in 3 nil of 50% strength aqueous acetic acid. After adding 300 mg of activated zinc, the mixture is stirred vigorously for 2 hours. The excess zinc is then filtered off, the filtrate is applied to a column of Sephadex-Gel-25 Superfine and eluted with 50% aqueous acetic acid. 10 ml fractions are collected. The fractions containing the product (based on thin-layer chromatographic analysis) are combined and evaporated to dryness. The residue is dissolved in water. Freeze-drying gives 0.157 g of essentially pure des (AIa, GIy) -desamino [Cys] dicarba * somatostatin. The UV spectrum shows a maximum at 280 nm. After the acid hydrolysis, the amino acid analysis gives the following result: Lys 2 Q ^; _ Asp ^ q ^ Thr 2 16 ; Ser Q ggQ ;
fP-Trp ~l-somatostatinfP-Trp ~ l-somatostatin
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Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 19 hergestellt, wobei man das Cyclo[k) -Asn-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(e-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] durch Cyclo[u>-Asn-(ε-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-(ε-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] (hergestellt gemäß Beispiel 18a) ersetzt.The desired compound is prepared analogously to Example 19, using the cyclo [k) -Asn- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (e-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] by cyclo [u> -Asn- (ε-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- (ε-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] (produced according to Example 18a) replaced.
Herstellung von α'-tert.-Butyl-N(a)-CBZ-NCa')-Β00-α,α»- diaminosuberat Production of α'-tert-butyl-N (a) -CBZ-NCa ') - Β00-α, α »- diaminosuberate
8 g Cbz-Glu-ct-methylester und 8,6 g .BOC-Glu-oc-tert.-butylester v/erden in 240 ml Methanol und 80 ml Pyridin gelöst. Man versetzt die Lösung.mit 250 mg (0,2 Äquivalenten) Natrium und elektrolysiert sie 55 min bei 23 bis 280C (4,0 A; 100 V; 2 mm voneinander entfernte Platinelektroden einer Größe von 2,5 x 4 cm). Die Umsetzung erfolgt unter Rühren in einem Metallbecher; zur Kühlung dient ein Trockeneis/ Isopropanol-Bad von -400C. Der durch feuchtes pH-Papier bestimmte pH-Wert des Reaktionsgemisches ändert sich von 6,8 auf 7,2 bis 7,6,- Man dampft die Lösung im Vakuum ein, suspendiert den öligen Rückstand in 100 ml Chloroform/Äthylacetat (95 : 5) und filtriert die unlöslichen Natriumsalze der Ausgangsverbindungen ab. Beim Eindampfen des Filtrats erhält man 16,77 g eines dunklen Öls.8 g of Cbz-Glu-ct-methyl ester and 8.6 g .BOC-Glu-oc-tert-butyl ester dissolved in 240 ml of methanol and 80 ml of pyridine. Is added to the Lösung.mit 250 mg (0.2 equivalents) of sodium and electrolyzed them 55 min at 23 to 28 0 C (4.0 A; 100 V; 2 mm apart platinum electrodes a size of 2.5 x 4 cm) . The reaction takes place with stirring in a metal beaker; a dry ice / isopropanol bath used for cooling of -40 0 C. The determined by moist pH paper pH of the reaction mixture varies from 6.8 to 7.2 to 7.6, - the solution is evaporated in vacuo , suspended the oily residue in 100 ml of chloroform / ethyl acetate (95: 5) and filtered off the insoluble sodium salts of the starting compounds. Evaporation of the filtrate gives 16.77 g of a dark oil.
Das Öl, welches ein aus drei Komponenten bestehendes Diaminokorksäure-Derivatgemisch enthält, wird in Chloroform/ Äthylacetat (95 : 5) auf eine mit 1700 g Kieselgel-60 beschickte Säule aufgegeben und mit demselben Lösungsmittel isoliert. Nachdem man einen Vorlauf von 1200 ml aufgefangen hat, nimmt man alle 45 see 70-ml-Fraktionen ab. DasThe oil, which is a mixture of diaminocorkic acid derivatives consisting of three components contains, is charged in chloroform / ethyl acetate (95: 5) on a with 1700 g of silica gel-60 Abandoned column and isolated with the same solvent. After having collected a forerun of 1200 ml all 45 see 70 ml fractions are removed. That
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Dreikomponenten-Produkt wird mit den Fraktionen 125 bis 290 eluiert. Nach dem Eindampfen erhält man 7,82 g des Produkts.Three-component product is with the fractions 125 to 290 eluted. After evaporation, 7.82 g of product are obtained.
Der rohe N(a)-CBZ-N(af)-BOC-a,a'-diaminokorksäure-a-methylester-a'-tert.-butylester (7,82 g) wird in 157 ml Dioxan gelöst. Man versetzt die Lösung während 15 min bei Räumtemperatur mit 78,5 ml In-NaOH. Dann fügt man 4 ml Essigsäure hinzu und dampft die Lösung im Vakuum ein. Der Rückstand wird in ¥asser gelöst. Durch Gefriertrocknung erhält man 14,28 g rohen NCa)-CBZ-NCa')-B0C-a,cc1-diaminokorksäurea'-tert.-butylester. Das Rohprodukt wird in einer Lösung von 20 ml Methanol, 4 ml konzentriertem Ammoniumhydroxid und 70 ml Chloroform suspendiert. Man filtriert die Suspension, dampft das Filtrat ein und löst den Rückstand neuerlich in einer Lösung von 15 ml Methanol, 2 ml konzentriertem NH.OH und 45 ml CHCl^. Die dabei erhaltene Lösung wird auf eine mit 1500 g Kieselgel-60 beschickte Säule in CHCl3/ CH^OH/NH^OH (80 : 20 : 2) aufgegeben und mit demselben Lösungsmittel eluiert. Nachdem man einen Vorlauf von 2100 ml aufgefangen hat, entnimmt man alle 30 see 70-ml-Fraktionen. Das gewünschte Produkt wird mit den Fraktionen 35 bis 82 eluiert. Diese Fraktionen werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man suspendiert den Rückstand in Wasser, säuert mit Zitronensäure an und extrahiert das Produkt mit Äthylacetat. Der Extrakt wird getrocknet. Nach dem Eindampfen zur Trockene erhält man 2,17 g des gewünschten a'-tert.-Butyl-N-CaJ-CBZ-NtaO-BOC-aja'-diaminosuberats.The crude N (a) -CBZ-N (a f ) -BOC-a, a'-diaminocorkic acid-a-methyl ester-a'-tert-butyl ester (7.82 g) is dissolved in 157 ml of dioxane. 78.5 ml of In NaOH are added to the solution over the course of 15 minutes at room temperature. Then 4 ml of acetic acid are added and the solution is evaporated in vacuo. The residue is dissolved in water. Freeze-drying gives 14.28 g of crude NCa) -CBZ-NCa ') -B0C-a, cc 1 -diaminocorkic acid a'-tert-butyl ester. The crude product is suspended in a solution of 20 ml of methanol, 4 ml of concentrated ammonium hydroxide and 70 ml of chloroform. The suspension is filtered, the filtrate is evaporated and the residue is redissolved in a solution of 15 ml of methanol, 2 ml of concentrated NH.OH and 45 ml of CHCl ^. The solution obtained in this way is applied to a column in CHCl 3 / CH ^ OH / NH ^ OH (80: 20: 2) charged with 1500 g of silica gel-60 and eluted with the same solvent. After a first run of 2100 ml has been collected, all 30 see 70 ml fractions are removed. The desired product is eluted with fractions 35-82. These fractions are combined and evaporated to dryness. The residue is suspended in water, acidified with citric acid and the product extracted with ethyl acetate. The extract is dried. After evaporation to dryness, 2.17 g of the desired a'-tert-butyl-N-CaJ-CBZ-NtaO-BOC-aja'-diaminosuberate are obtained.
Das at-tert.-Butyl-N(a)-CBZ-N(al)-BOC-a,a'-diaminosuberat wird zur Herstellung vonThe a t -tert-butyl-N (a) -CBZ-N (a l ) -BOC-a, a'-diaminosuberate is used for the production of
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CH2~CH2 CH 2 ~ CH 2
2C2 2-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH2 C 2 2-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH
nach dem in den Beispielen 13 Ms 15 und 17 Ms 19 beschriebenen Verfahren sowie zur Herstellung vonaccording to that described in Examples 13 Ms 15 and 17 Ms 19 Process and for the production of
2-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH 2 -CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH
IH2-CH2- CH2-CH2 IH 2 -CH 2 - CH 2 -CH 2
nach dem in den Beispielen 13 bis 15 und 17a bis 19a beschriebenen Verfahren verwendet.according to that described in Examples 13 to 15 and 17a to 19a Procedure used.
Herstellung; von Des(AIa , GIy^-desaminoiCys'HdescarboxyfCys1 ^ "jdicarba3' - ("P-Trp81-somato statin Manufacture; of Des (AIa, GIy ^ -desaminoiCys'Hdescarboxy fCys 1 ^ "j dicarba 3 '- (" P-Trp 8 1-somato statin
Die gewünschte Verbindung wird gemäß dem in Tabelle III dargestellten Verfahren hergestellt, wobei man jedoch anstelle der oc-Aminokorksäure in Stufe 11 Methyl-7-aminoheptanoat, hergestellt nach der von CF. Horn et al., Angew. Chem. 74 (1962), Seite 531; Chemical Abstracts, Band 57, 11411(c), beschriebenen Methode, einsetzt und die in den Beispielen 11 bis 15 sowie 17a, 18a und 19a beschriebenen Umwandlungen durchführt. Bei der Kieselgel-Dünnschichtchromatographie unter Verwendung von Äthylacetat/Pyridin/ Essigsäure/Wasser (10 : 5 ' 1 : 3) als Lösungsmittel ergibt die Verbindung einen R--Wert von 0,32.The desired compound is prepared according to the method shown in Table III, except that instead of the oc-aminocorkic acid in step 11, methyl 7-aminoheptanoate, prepared according to the method of CF. Horn et al., Angew. Chem. 74: 531 (1962); Chemical Abstracts, Volume 57, 11411 (c), and the conversions described in Examples 11 to 15 and 17a, 18a and 19a are carried out. Silica gel thin-layer chromatography using ethyl acetate / pyridine / acetic acid / water (10: 5 ' 1: 3) as the solvent gives the compound an R value of 0.32.
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SHSH
Herstellung des SuIfons von Des(Ala , GIy )-desamino[CysJJ-carba^-s omatοstatinPreparation of the sulphon of Des (Ala, GIy) -desamino [Cys J J-carba ^ -s omatοstatin
Eine Lösung von 14 mg Des(Ala , GIy )-desamino[Cys^]carba somatostatin und 0,1 mg Ammoniummolybdat in 0,2 ml öO^iger Perchlorsäure wird mit 50 u. 1 3O?oigem H2O2 versetzt. Man reinigt das Produkt, indem man die Lösung durch eine Säule von Sephadex-G-25 laufen läßt, wobei man 50^ige Essigsäure als Elutionsmittel verwendet. Die Elution des Produkts wird dünnschichtchroinatographisch unter Verwendung von Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasser (10 : 5 : 1 : 3) als Lösungsmittel system festgestellt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden zur Trockene eingedampft. Man erhält das SuIfon von Des (AIa , .GIy )-desamino[Cys^]carba -somatostatin. A solution of 14 mg des (Ala, GIy) -desamino [Cys ^] carba somatostatin and 0.1 mg ammonium molybdate in 0.2 ml oil perchloric acid is mixed with 50 and 130% H 2 O 2 . The product is purified by passing the solution through a column of Sephadex-G-25 using 50% acetic acid as the eluant. The elution of the product is determined by thin-layer chromatography using ethyl acetate / pyridine / acetic acid / water (10: 5: 1: 3) as the solvent system. The fractions containing the product are evaporated to dryness. The sulfon of Des (AIa, .GIy) -desamino [Cys ^] carba -somatostatin is obtained.
Herstellung des SuIfons von Des (AIa ? GIy )-desamino[CysJ1-· carba -[D-Trp J-somatostatin Preparation of the sulfon of Des (AIa ? GIy) -desamino [Cys J 1- · carba - [D-Trp J-somatostatin
Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 22 hergestellt, wobei man das Des(Ala , GIy )desamino[Cys Jcarba -The desired compound is produced analogously to Example 22, where the Des (Ala, GIy) desamino [Cys Jcarba -
"1 ? TT-X"1? TT-X
somatostatin durch Des(AIa , GIy )-desamino[Cys]carba [D-Trp ]-somatostatin ersetzt.somatostatin by Des (AIa, GIy) -desamino [Cys] carba [D-Trp ] -somatostatin replaced.
Herstellung des Sulfoxide von Des(Ala , GIv )-desaminofCys^icarba -somato statinPreparation of the sulfoxides of Des (Ala, GIv) -desaminofCys ^ icarba -somato statin
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Eine Lösung von 14 mg Des(Ala , GIy )-desamino[Cys:?]carba -somatostatin in 0,5 ml eines O,2m-Phosphatpuffers vom pH-Wert 7,0 wird mit 0,2 ml einer 0,05m~äthanolisehen Jodlösung und 0,1 ml 0,1m-Natronlauge versetzt. Man läßt den Ansatz 5 Tage bei 25°C stehen. Anschließend isoliert man das Produkt, indem man die Lösung durch eine Säule von Sephadex-G-25 laufen läßt, wobei man mit 50%iger Essigsäure eluiert. Die Produktelution wird dünnschichtchromatographisch unter Verwendung von Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasser (10 : 5 : 1 : 3) als Lösungsmittelsystem festgestellt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden zur Trockene eingedampft. Dabei erhält man das SuIfoxid von Des(Ala , GIy )-desamino[Cysjcarba -somatostatin.A solution of 14 mg Des (Ala, GIy) -desamino [Cys :? ] carba-somatostatin in 0.5 ml of an O, 2m phosphate buffer with a pH of 7.0 is mixed with 0.2 ml of a 0.05m ~ ethanolic iodine solution and 0.1 ml of 0.1m sodium hydroxide solution. The batch is left to stand at 25 ° C. for 5 days. The product is then isolated by running the solution through a column of Sephadex G-25, eluting with 50% acetic acid. The product elution is determined by thin layer chromatography using ethyl acetate / pyridine / acetic acid / water (10: 5: 1: 3) as the solvent system. The fractions containing the product are evaporated to dryness. This gives the sulfoxide of des (Ala, GIy) -desamino [Cysjcarba -somatostatin.
Herstellung des Sulfoxide von Des (AIa , GIy )-desamino[Cys ]-carba -[D-Trp ]-somatostatinPreparation of the sulfoxide of des (AIa, GIy) -desamino [Cys] -carba - [D-Trp] -somatostatin
Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 23 hergestellt, wobei man das Des (AIa , GIy )-desamino[Cys:>]-carba^- somatostatin durch Des(AIa , GIy )-desamino[Cys ]carba [D-Trp ]-somatostatin ersetzt.The desired compound is prepared analogously to Example 23, the des (AIa, GIy) -desamino [Cys :> ] -carba ^ - somatostatin being replaced by des (AIa, GIy) -desamino [Cys] carba [D-Trp] -somatostatin replaced.
Die erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen, welche Alanin oder a-Aminobuttersäure anstelle von Asn enthalten, können nach der in den Tabellen I, II und III dargestellten Methode hergestellt werden, indem man das Peptid (ε-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.2HCl durch die Peptide (e-INOC)Lys-Ala-Phe-Phe-0Me.2HGl bzw. (e-INOC)Lys-[a-aminobuttersäure]-Phe-Phe-OMe.2HCl ersetzt. Die Peptide (E-INOC)Lys-Ala-Phe-Phe-0Me.2HCl und (e-INOC)Lys-[a-aminobuttersäure]-Phe-Phe-OMe.2HCl werden gemäß den aus Tabelle III ersichtlichenThe somatostatin analogs of the invention which contain alanine or α-aminobutyric acid in place of Asn can be prepared by the method shown in Tables I, II and III by adding the peptide (ε-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.2HCl by the peptides (e-INOC) Lys-Ala-Phe-Phe-0Me.2HGl or (e-INOC) Lys- [a-aminobutyric acid] -Phe-Phe-OMe.2HCl replaced. The peptides (E-INOC) Lys-Ala-Phe-Phe-0Me.2HCl and (e-INOC) Lys- [α-aminobutyric acid] -Phe-Phe-OMe.2HCl are as shown in Table III
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SeSe
Stufen 6, 7 und 8 mit der Ausnahme hergestellt, daß in Stufe 7a BOC-AsnNPE durch BOC-AIaNPE bzw. BOC-[α-aminobuttersäure ]NPE ersetzt wird.Levels 6, 7 and 8 except that in Stage 7a BOC-AsnNPE by BOC-AIaNPE or BOC- [α-aminobutyric acid ] NPE is replaced.
Ein spezielles Beispiel der erfindungsgemäßen Somatosta-A specific example of the somatostasis according to the invention
1 P "Ί1 P "Ί
tinanalogen, nämlich Des (AIa , GIy )-desamino[Cys ]-descarboxy[Cys jdicarba^' -£Ala J-somatostatin, wird nach der in Tabelle III dargestellten Methode hergestellt, indem man in Stufe 12 a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat durch BOC- to -aminoheptansäure und in Stufe 7 BOC-AsnNPE durch BOC-AIaNPE ersetzt.tin analog, namely des (AIa, GIy) -desamino [Cys] -descarboxy [Cys jdicarba ^ '- £ Ala J-somatostatin, will after the method shown in Table III prepared by a-tert-butyl-BOC-a-aminosuberate in step 12 BOC-to -aminoheptanoic acid and in stage 7 BOC-AsnNPE BOC-AIaNPE replaced.
Ein weiteres spezielles Beispiel der erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen, nämlich Des(AIa , GIy )-desamino[Cys ]-descarboxy[Cys Jdicarba-*' -[a-aminobuttersäure ]-[D-Trp ]-somatostatin, wird nach der in Tabelle III veranschaulichten Methode hergestellt, indem man in Stufe 12 a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat , durch BOC-u)-aminoheptansäure, in Stufe 7 BOC-AsnNPE durch BOC-[a-aminobuttersäureJNPE und in Stufe 5a BOC-TrpHSE durch BOC-D-TrpHSE ersetzt.Another specific example of the somatostatin analogs according to the invention, namely Des (AIa, GIy) -desamino [Cys] -descarboxy [Cys Jdicarba- * '- [a-aminobutyric acid] - [D-Trp] -somatostatin, is prepared according to the method illustrated in Table III by adding α-tert-butyl-BOC-α-aminosuberate in step 12 , by BOC-u) -aminoheptanoic acid, in step 7 BOC-AsnNPE by BOC- [a-aminobutyric acidJNPE and in stage 5a BOC-TrpHSE replaced by BOC-D-TrpHSE.
Die erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen können in der Human- und Veterinärmedizin zur Inhibierung der Magensekretion bei der Therapie von Magengeschwüren, zur Inhibierung der Wachstumshormonfreigabe (wie bei der Behandlung der Akromegalie), zur Hemmung der Glucagonfreigabe und - allein oder zusammen mit Insulin - zur Senkung des Blutzuckerspiegels (z.B. bei der Diabetestherapie) eingesetzt werden. Bei der Behandlung von Diabetes werden Anzahl und Größe der täglichen Dosen sowie die Verabreichungszeit anhand einer individuellen Untersuchung des jeweiligen Patienten bestimmt. Die Methode zur Bestimmung dieser Paktoren ist dem Fachmann geläufig.The somatostatin analogs of the invention can be used in the Human and veterinary medicine for the inhibition of gastric secretion in the therapy of gastric ulcers, for inhibition the release of growth hormone (as in the treatment of acromegaly), to inhibit the release of glucagon and - used alone or together with insulin - to lower blood sugar levels (e.g. in diabetes therapy) will. In the treatment of diabetes, the number and size of daily doses as well as the time of administration will be considered determined on the basis of an individual examination of the respective patient. The method for determining these factors is familiar to the person skilled in the art.
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7 0 9 8 0 7/12387 0 9 8 0 7/1238
Die hier beschriebenen Somatostatinanalogen können Warmblütern (unter Einschluß des Menschen) intravenös, subkutan, intramuskulär oder oral verabreicht werden. Im Falle von großen Warmblütern beträgt der Dosisbereich für die orale Verabreichung in Form von Tabletten oder Kapseln etwa 0,001 bis etv/a 7 mg/kg Körpergewicht/Tag. Die erfindungsgemäßen Somatostatinanalogen werden vorzugsweise durch Injektion verabreicht. Eine therapeutisch wirksame Menge einer solchen Verbindung liegt in der Regel im Dosisbereich von etwa 0,001 bis etwa 2 mg/kg Körpergewicht vor. Bevorzugt wird der Bereich von etwa 0,00142 bis etwa 0,428 mg/kg Körpergewicht, wobei die Verabreichung durch intravenöse Infusion oder subkutane Injektion erfolgt. Die erforderliche Dosis hängt von der speziellen zu behandelnden Erkrankung, ihrer Schwere und von der Dauer der Therapie ab.The somatostatin analogs described here can be used in warm-blooded animals (including humans) can be administered intravenously, subcutaneously, intramuscularly or orally. In the event of of large warm-blooded animals, the dose range for oral administration is in the form of tablets or capsules about 0.001 to about 7 mg / kg body weight / day. The somatostatin analogs of the invention are preferred administered by injection. A therapeutically effective amount of such a compound is usually in the dose range from about 0.001 to about 2 mg / kg body weight. Preferred is the range from about 0.00142 to about 0.428 mg / kg body weight, administration being by intravenous infusion or subcutaneous injection. The dose required will depend on the particular condition being treated, its severity, and the Duration of therapy.
Wenn der Wirkstoff in Tablettenform verabreicht wird, können die Tabletten ein Bindemittel, wie Traganth, Maisstärke oder Gelatine, einen Füllstoff (excipient), wie Dicalciumphosphat, ein Sprengmittel, wie Maisstärke oder Alginsäure, ein Gleitmittel, wie Magnesiumstearat, und einen Süßstoff und/oder ein Geschmacks- bzw. Geruchskorrigens (bzw. einen Farbstoff), wie Rohrzucker, Milchzucker oder Wintergrün, enthalten. Geeignete flüssige Träger (Verdünnungsmittel) für die intravenöse Verabreichung sind z.B. steriles Wasser, isotonische Kochsalzlösung und Phosphatpufferlösungen oder andere pharmakologisch verträgliche injizierbare Träger.If the active ingredient is administered in tablet form, the tablets can contain a binding agent such as tragacanth, corn starch or gelatin, a filler (excipient) such as dicalcium phosphate, a disintegrant such as corn starch or alginic acid, a lubricant such as magnesium stearate and a sweetener and / or a flavor corrector (or a coloring agent), such as cane sugar, milk sugar or Wintergreen, included. Suitable liquid carriers (diluents) for intravenous administration are e.g. sterile water, isotonic saline and phosphate buffer solutions or other pharmacologically acceptable injectable carriers.
Das nachstehende· Beispiel erläutert die Rezeptur einer typischen, zur subkutanen Injektion geeigneten Dosis vonThe following example explains the recipe for a typical dose suitable for subcutaneous injection of
- 57 -- 57 -
709807/1238709807/1238
757Y 5ί 263555S757Y 5ί 263555S
Des(Ala , GIy"")-desamino[Cys Jdicarba^' -somatostatin. Beispiel 24 Des (Ala, GIy "") -desamino [Cys Jdicarba ^ '-somatostatin. Example 24
sterile Natriuinchloridlösung 1 mlsterile sodium chloride solution 1 ml
Des(Ala1, G^J-desaminotCys^Jdicartia5»1^-Des (Ala 1 , G ^ J-desaminotCys ^ Jdicartia 5 » 1 ^ -
somatostatin 1 mg,somatostatin 1 mg,
709807/1238709807/1238
Claims (37)
Thr-Ser-NH-CH ^
Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 2
Phe-Thr-Ser-NH-CH-R 1
:H2 ~CH2~ — — CH „ -CHand
: H 2 ~ CH 2 ~ - - CH "-CH
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