CH626328A5 - Process for the preparation of somatostatin analogues - Google Patents

Description

Gegenstand der Erfindung ist somit die Herstellung neuer, eine längere Wirkung als natürlich vorkommendes Somatostatin aufweisender Somatostatinanaloger der nachstehenden allgemeinen Formeln: The invention thus relates to the preparation of new somatostatin analogs having a longer action than naturally occurring somatostatin and having the following general formulas:

ÇH -X Y-CH- ÇH -X Y-CH-

I I I I

R-CH-g-Lys-R"'-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 R-CH-g-Lys-R "'- Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1

und and

CH _X Y-ÇH„ CH _X Y-ÇH "

I 2 I , I 2 I,

R-CH-Ç-Lys-R"1-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R' R-CH-Ç-Lys-R "1-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R '

in denen: in which:

O O

X CH2, S, S, S02 oder [X]n (wobei n = O), X CH2, S, S, S02 or [X] n (where n = O),

O O

Y CH2, S, S, S02 oder [Y]n (wobei n = O), Y CH2, S, S, S02 or [Y] n (where n = O),

R H, NH2 oder R"NH, wobei R" Ala-Gly-, ein Nieder-Acylrest mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen oder ein Aroylrest mit 7 bis 21 Kohlenstoffatomen ist, R H, NH2 or R "NH, where R" is Ala-Gly, a lower acyl radical with 2 to 6 carbon atoms or an aroyl radical with 7 to 21 carbon atoms,

20 R' H oder COOH und 20 R 'H or COOH and

R'" Asparagin, Alanin oder a-Aminobuttersäure sind, wobei nicht beide Reste X und Y Heteroatome darstellen. R '"are asparagine, alanine or a-aminobutyric acid, where not both X and Y are heteroatoms.

Die erfindungsgemäss hergestellten Somatostatinanalogen unterscheiden sich von Somatostatin dahingehend, dass die 25 beiden benachbarten Heteroatome der Disulfidbrücke (-S-S-) des Cystinaminosäurerests des Somatostatins in der nachstehenden Strukturformel: The somatostatin analogs produced according to the invention differ from somatostatin in that the 25 two adjacent heteroatoms of the disulfide bridge (-S-S-) of the cystine amino acid residue of somatostatin have the following structural formula:

S S S S

t l t l

Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH

entfallen oder durch die stabileren, C und S enthaltenden Gruppen, wie —CH2—CH2—, —S—, —CH2—S—, —S—CH2—, —CH2—, omitted or by the more stable groups containing C and S, such as —CH2 — CH2—, —S—, —CH2 — S—, —S — CH2—, —CH2—,

9 9 9 9 9 9

-S-, -CH2-S-, -S-CH2-, -S02-, -CH2-S02- oder -S02-CH2-, welche keine benachbarten Heteroatome aufweisen, ersetzt sind. Beispiele für die erfindungsgemässen Somatostatinanalogen sind jene Verbindungen, bei welchen Ala-Gly und die Aminogruppe von Cys3 des Somatostatins wegfallen und durch ein Wasserstoffatom, eine Aminogruppe, einen Nieder-Acylaminorest (wobei der Nieder-Acylrest 2 bis 6 Kohlenstoffatome aufweist, wie im Falle der Acetylamino- -S-, -CH2-S-, -S-CH2-, -S02-, -CH2-S02- or -S02-CH2-, which have no adjacent heteroatoms, are replaced. Examples of the somatostatin analogs according to the invention are those compounds in which Ala-Gly and the amino group of Cys3 of somatostatin are eliminated and, by means of a hydrogen atom, an amino group, a lower acylamino radical (the lower acyl radical having 2 to 6 carbon atoms, as in the case of Acetylamino

gruppe) oder einen Aroylaminorest (wobei der Aroylrest 7 bis 35 21 Kohlenstoffatome aufweist, wie im Falle der Benzoylami-nogruppe) ersetzt ist, sowie jene Verbindungen, bei welchen ein Wasserstoffatom an die Stelle der C-endständigen Carbo-xylgruppe des Cystins tritt. Weitere Beispiele für die erfindungsgemässen Somatostatinanalogen sind jene, bei welchen 40 das in 8-Stellung befindliche L-Tryptophan (Trp) durch D-Tryptophan (D-Trp) ersetzt ist. group) or an aroylamino radical (the aroyl radical having 7 to 35-21 carbon atoms, as in the case of the benzoylamino group), and those compounds in which a hydrogen atom takes the place of the C-terminal carboxyl group of the cystine. Further examples of the somatostatin analogs according to the invention are those in which 40 the L-tryptophan (Trp) located in the 8-position is replaced by D-tryptophan (D-Trp).

Die bevorzugten erfindungsgemäss erhältlichen Somatostatinanalogen besitzen die nachstehenden allgemeinen Formeln: The preferred somatostatin analogs obtainable according to the invention have the following general formulas:

45 45

CÜ2-X R-CH-C-: CÜ2-X R-CH-C-:

-Y-CH, -Y-CH,

-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R' -Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R '

in denen: X-Y = X-Y = X-Y = X-Y = in which: X-Y = X-Y = X-Y = X-Y =

und and

;H2-X Y"9H2 ; H2-X Y "9H2

R-CH-Ç-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R' R-CH-Ç-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R '

Somatostatinanalogen sind X-Y CH2-CH2, R ein Wasserstoffatom und R' ein Wasserstoffatom oder eine Carboxyl-60 gruppe. Die Struktur dieser weiteren bevorzugten Somatostatinanalogen wird somit durch die nachstehenden Formeln und Bezeichnungen wiedergegeben: Somatostatin analogs are X-Y CH2-CH2, R is a hydrogen atom and R 'is a hydrogen atom or a carboxyl-60 group. The structure of these further preferred somatostatin analogs is thus represented by the formulas and designations below:

CH2-CH2, R = H, R'= H, oder CH2-CH2, R = NH2 und R' = COOH oder CH2-S, R = H und R'= COOH oder S-CH2, R = H und R'= COOH. CH2-CH2, R = H, R '= H, or CH2-CH2, R = NH2 and R' = COOH or CH2-S, R = H and R '= COOH or S-CH2, R = H and R' = COOH.

Bei weiteren bevorzugten erfindungsgemäss hergestellten ch2-ch2- In further preferred ch2-ch2-

L L

2~g-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr 2 ~ g-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr

—6H0-CH -6H0-CH

I 2 I 2

-Ser-NH-CH-COOH -Ser-NH-CH-COOH

7 7

626 328 626 328

mit der Bezeichnung Cyclo(cy-Asu-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser) oder Des-(Ala',Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3a4-somatostatin; with the designation Cyclo (cy-Asu-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser) or Des- (Ala ', Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3a4-somatostatin;

ch2-ch2- ch2-ch2-

CH2-<jZ-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser mit der Bezeichnung Des(Ala1, Gly2)-desamino[Cys3] -dicarba3'14-[D-Trp8]-somatostatin und [D-Trp8]-somatostatin und CH2- <jZ-Lys-Asn-Phe-P-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser with the designation Des (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] -dicarba3'14- [D-Trp8] -somatostatin and [D-Trp8] -somatostatin and

CH0-CH0 2 i 2 CH0-CH0 2 i 2

-NH-CH- -NH-CH-

COOH COOH

Ì2 2 H „-C- Ì2 2 H „-C-

CH2"j:H2 CH2 "j: H2

2-C-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2 2-C-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2

mit der Bezeichnung Des(Ala\ Gly2)-desamino[Cys3]-descarboxy[Cys14]-dicarba3,14-[D-Trp8]-somatostatin. called Des (Ala \ Gly2) -desamino [Cys3] -descarboxy [Cys14] -dicarba3,14- [D-Trp8] -somatostatin.

Die erfindungsgemäss hergestellten Somatostatinanalogen unterscheiden sich von Somatostatin dahingehend, dass die Komponente The somatostatin analogs produced according to the invention differ from somatostatin in that the component

1 2 ~£s^ 3 1 2 ~ £ s ^ 3

Ala -Gly -Cys" Ala -Gly -Cys "

. 14 C^S -OH . 14 C ^ S -OH

des Somatostatins entfällt und durch die Komponente I: of somatostatin is eliminated and by component I:

^H'2 ^ H'2

R-CH-C- R-CH-C-

X- X-

-CH, -CH,

-NH-CH-R1 -NH-CH-R1

(I) (I)

in der X, Y, R und R' jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung haben, ersetzt ist. Die neuen Somatostatinanalogen, welche a-Aminokorksäure enthalten, z.B. Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3,14-somatostatin, Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3,14-[D-Trp8]- in which X, Y, R and R 'each have the meaning given above is replaced. The new somatostatin analogs containing a-amino acid, e.g. Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3,14-somatostatin, Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3,14- [D-Trp8] -

somatostatin und Des-(AIa1Gly2)-desamino[Cys3]descarboxy[Cys14]-dicarba3,14-[D-Trp8]-somatostatin, somatostatin and des- (AIa1Gly2) -desamino [Cys3] descarboxy [Cys14] -dicarba3,14- [D-Trp8] -somatostatin,

besitzen keine N-endständige Aminogruppe; eine der von der 20 enzymatischen Spaltung des Moleküls durch Aminopeptidasen betroffenen Gruppen entfällt somit. Die Somatostatinanalogen, welche co-Aminoheptansäure enthalten, z.B. Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]descarboxy-[Cys14]dicarba3,14-somatostatin und 25 Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]descarboxy-[Cys14]dicarba3'14-[D-Trp8]-somatostatin, do not have an N-terminal amino group; one of the groups affected by the enzymatic cleavage of the molecule by aminopeptidases is thus eliminated. The somatostatin analogs containing co-aminoheptanoic acid, e.g. Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] descarboxy- [Cys14] dicarba3,14-somatostatin and 25 Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] descarboxy- [Cys14] dicarba3'14- [D-Trp8] -somatostatin,

besitzen keine C-endständige Carboxylgruppe, wodurch eine der von der enzymatischen Molekülspaltung durch Carboxy-30 peptidasen betroffenen Gruppen wegfällt. Durch den Ersatz der benachbarten Heteroatome der Disulfidbrücke des Somatostatins durch die Gruppe -CH2-CH2-, -S-CH2 oder —CH2—S— wird ferner die Stabilität der betreffenden analogen . Verbindung in vivo durch Verlangsamung des enzymatischen 35 Abbaus durch reduzierende Spaltung erhöht. Daher weisen diese analogen Verbindungen eine stärkere Widerstandsfähigkeit gegenüber der Spaltung in vivo auf und besitzen somit eine langzeitigere Wirkung. do not have a C-terminal carboxyl group, which means that one of the groups affected by the enzymatic cleavage by carboxy-30 peptidases is omitted. By replacing the neighboring heteroatoms of the disulfide bridge of somatostatin with the group -CH2-CH2-, -S-CH2 or —CH2-S—, the stability of the analogue in question is also made. Compound increased in vivo by slowing enzymatic degradation through reducing cleavage. Therefore, these analog compounds are more resistant to cleavage in vivo and thus have a longer-term effect.

Im erfindungsgemässen Verfahren werden auch die nach-40 folgenden, zur Herstellung der erfindungsgemässen Somatostatinanalogen geeigneten neuen, geschützten bzw. blockierten Peptidzwischenprodukte verwendet: The following new, protected or blocked peptide intermediates which are suitable for producing the somatostatin analogs according to the invention are also used in the process according to the invention:

rH2"x rH2 "x

R-CH-Ç-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-( ^f-INOC)Lys-Thr- R-CH-Ç- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (^ f-INOC) Lys-Thr-

Y-CH-, Y-CH-,

Phe-Thr-Ser-NH-CK-R' Phe-Thr-Ser-NH-CK-R '

R-CH-g- ( £ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- ( €. -INOC) Lys-Thr- R-CH-g- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- (€. -INOC) Lys-Thr-

V V

x x

Phe-Thr-Ser-NH-CH-R' Phe-Thr-Ser-NH-CH-R '

ch2-x- ch2-x-

CH2~Ç- ( é. -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe CH2 ~ Ç- (é. -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe

CH, CH,

BOC-Trp BOC Trp

- ( éZ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-^H-R1 - (éZ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH- ^ H-R1

626 328 626 328

fH2 fH2

CH„-X— CH "-X"

| |

CH ç- ( £-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe O CH ç- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe O

BOC-D-Trp-(£ -INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R ÇH2-X Y-CH, BOC-D-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R ÇH2-X Y-CH,

l2* l2 *

CH-j-Ç- ( 6 -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-CMe NH^CH-R' CH-j-Ç- (6-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-CMe NH ^ CH-R '

In den obigen Formeln haben X, Y, R und R' jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung, während R"" ein Wasserstoffatom oder -COO-tert.-Butyl ist. In the above formulas, X, Y, R and R 'each have the meaning given above, while R "" is a hydrogen atom or -COO-tert-butyl.

Im erfindungsgemässen Verfahren eingesetzte Aminosäu-re-Komponenten, bestimmte bevorzugte Schutzgruppen, Ami-nosäure-Aktivierungsgruppen, Kondensationsmittel, Reagen-tien und Lösungsmittel werden durch folgende Kurzbezeichnungen angegeben: Amino acid components used in the process according to the invention, certain preferred protective groups, amino acid activation groups, condensing agents, reagents and solvents are indicated by the following short names:

Kurzbezeichnung Short name

Aminosäure amino acid

Lys Lys

L-Lysin L-lysine

Asn Asn

L-Asparagin L-asparagine

Phe Phe

L-Phenylalanin L-phenylalanine

Trp Trp

L-Tryptophan L-tryptophan

D-Trp D-Trp

D-Tryptophan D-tryptophan

Thr Thr

L-Threonin L-threonine

Ser Ser

L-Serin L-serine

Asu a-Aminokorksäure Asu a-amino acid

Kurzbezeichnung Short name

Schutzgruppen Protecting groups

INOC INOC

Isonicotinyloxycarbonyl Isonicotinyloxycarbonyl

BOC BOC

tert.-Butyloxycarbonyl tert-butyloxycarbonyl

OMe OMe

Methylester tBu tert.-Butyl Methyl ester tBu tert-butyl

CBZ CBZ

Benzyloxycarbonyl Benzyloxycarbonyl

Kurzbezeichnung aktivierende Gruppen Short name activating groups

NPE NPE

p-Nitrophenylester p-nitrophenyl ester

HSE HSE

N-Hydroxysuccinimidester N-hydroxysuccinimide ester

HBT HBT

1-Hydroxybenzotriazol 1-hydroxybenzotriazole

15 15

20 20th

Kurzbezeichnung Short name

Reagentien Reagents

TFA TFA

Trifluoressigsäure Trifluoroacetic acid

TEA TEA

Triäthylamin Triethylamine

DIPEA DIPEA

Diisopropyläthylamin Diisopropylethylamine

Kurzbezeichnung Short name

Lösungsmittel solvent

EPAW EPAW

25 BAW CMW DMF THF 25 BAW CMW DMF THF

Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/ Wasser Ethyl acetate / pyridine / acetic acid / water

Butanol/Essigsäure/Wasser Chloroform/Methanol/Wasser Dimethylformamid Tetrahydrofuran Butanol / acetic acid / water chloroform / methanol / water dimethylformamide tetrahydrofuran

30 30th

35 35

40 40

Die neuen Somatostatinanalogen werden nach dem erfindungsgemässen Verfahren durch Blocksynthese hergestellt. Dabei werden verschiedene Peptidsegmente des Somatostatinanalogen gesondert hergestellt und anschliessend in der gewünschten Reihenfolge zur Erzeugung der offenkettigen Form der gewünschten Verbindung verknüpft. Die offenkettige Verbindung wird dann einem Ringschluss unterworfen und von den Schutzgruppen befreit. Gewünschtenfalls wird das Sulfidanaloge zum Sulfoxid oder Sulfon oxidiert, wodurch jene Verbindungen erhalten werden, bei welchen -X-Y- eine Gruppe The new somatostatin analogs are produced by block synthesis using the process according to the invention. Different peptide segments of the somatostatin analog are produced separately and then linked in the desired order to produce the open-chain form of the desired compound. The open chain connection is then subjected to a ring closure and freed from the protective groups. If desired, the sulfide analog is oxidized to sulfoxide or sulfone, thereby obtaining those compounds in which -X-Y- is a group

Kurzbezeichnung DCCI Short designation DCCI

Kondensationsmittel Dicyclohexylcarbodiimid Condensing agent dicyclohexylcarbodiimide

O O

—Ì- oder S02 beinhaltet. Die Gesamtmethode zur Herstellung der erfindungsgemässen Somatostatinanalogen, bei welchen X, Y und R' jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung haben und R ein Wasserstoffatom darstellt, geht schematisch aus Ta-45 belle I hervor. Diese Tabelle erläutert in den ersten drei Verfahrensstufen eine mögliche Herstellung von Ausgangsprodukten und dann die Herstellung von L-Tryptophan enthaltenden Somatostatinanalogen; es sei festgestellt, dass D-Tryptophan enthaltende Analoge nach der aus Tabelle I ersichtlichen Me-50thode mit der Ausnahme hergestellt werden können, dass D-Tryptophan anstelle von L-Tryptophan eingesetzt wird. —Ì- or S02 included. The overall method for producing the somatostatin analogs according to the invention, in which X, Y and R 'each have the meaning given above and R represents a hydrogen atom, is shown schematically in Table 45, Table I. In the first three process steps, this table explains a possible production of starting materials and then the production of somatostatin analogs containing L-tryptophan; it should be noted that analogs containing D-tryptophan can be prepared according to the Me-50 method shown in Table I, with the exception that D-tryptophan is used instead of L-tryptophan.

-Y-CH, -Y-CH,

Tabelle I Table I

H„-COOCH-, NH„-CH-R' H "-COOCH-, NH" -CH-R '

tert.-Butylacetat, HCIO^, wenn R' = COOH tert-butyl acetate, HCIO ^ when R '= COOH

f f

H2."X" H2. "X"

-Y-CH, -Y-CH,

CH2-COOCH3 HCl „«2 CH2-COOCH3 HCl "« 2

I ' I '

•NH„-CH-R"" NH "-CH-R" "

V V

626 328 626 328

^j tert.-Butyltrichlorphenylcarbonat; 2)!NaOH ^ j tert-butyltrichlorophenyl carbonate; 2)! NaOH

:k2-x — :h2-cooh : k2-x -: h2-cooh

-Y-CH, -Y-CH,

BOC-NH-CH-R"" DCCI/p-Nitrophenol BOC-NH-CH-R "" DCCI / p-nitrophenol

CH2-X- CH2-X-

x> x>

ch0-c/ ch0-c /

2 \ 2 \

-y-ch, -y-ch,

BOC-NH-CH-R' BOC-NH-CH-R '

°~A /~N°2 ° ~ A / ~ N ° 2

(é-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe * 2HC1 (é-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe * 2HC1

çh2-x çh2-x

1 1

ch0-ç-(é-ln ch0-ç- (é-ln

-y-ch, -y-ch,

INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R"" INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R ""

: 1) TFA; : 1) TFA;

2) BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N, 2) BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N,

f hj-x- f hj-x-

CH2~Ç-{£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe CH2 ~ Ç- {£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe

:h. :H.

BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R,: BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R ,:

1) NH2NH2; 1) NH2NH2;

2) KCl; 2) KCl;

3) ïsoamylnitrit 3) isoamyl nitrite

î î

:h2-x- : h2-x-

CH,-Ç-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(é-INOC)Lys-Thr- Y-CH- CH, -Ç- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (é-INOC) Lys-Thr- Y-CH-

I I.

Phe-Thr-Ser-NH-CH-R* Phe-Thr-Ser-NH-CH-R *

Zn Zn

? ?

:h2-x- : h2-x-

-Y-CH, -Y-CH,

R-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R' R-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R '

626 328 626 328

10 10th

In den obigen Formeln haben X, Y und R' jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung, R stellt ein Wasserstoffatom dar und R"" ist Wasserstoff oder die Gruppe C In the above formulas, X, Y and R 'each have the meaning given above, R represents a hydrogen atom and R "" is hydrogen or the group C.

/0 / 0

'OtBu und die Aminosäure Trp kann durch D-Trp ersetzt sein. 'OtBu and the amino acid Trp can be replaced by D-Trp.

Wenn die Gruppe —X—Y— eine Gruppe -S— oder -S02-beinhaltet, ist eine weitere Oxidationsstufe unter Verwendung eines geeigneten Oxidationsmittels, wie Perameisensäure oder Wasserstoffperoxid, erforderlich. If the group —X — Y— includes a group -S— or -S02-, an additional oxidation step using a suitable oxidizing agent such as performic acid or hydrogen peroxide is required.

Die Somatostatinanalogen, bei welchen X, Y und R' die jeweils vorstehend angegebene Bedeutung haben und R —NH2 5 und R"NH ist, können nach dem in Tabelle II dargestellten Verfahren hergestellt werden. Tabelle II erläutert die Synthese von L-Tryptophan enthaltenden Somatostatinanalogen; es sei festgestellt, dass D-Tryptophan enthaltende Analoge nach dem aus Tabelle II ersichtlichen Verfahren mit der Ausnahme, dass 10 D-Tryptophan anstelle von L-Tryptophan eingesetzt wird, hergestellt werden können. The somatostatin analogs in which X, Y and R 'each have the meaning given above and R is -NH2 5 and R "NH can be prepared by the process shown in Table II. Table II illustrates the synthesis of somatostatin analogs containing L-tryptophan It should be noted that analogs containing D-tryptophan can be prepared according to the procedure shown in Table II, with the exception that 10 D-tryptophan is used instead of L-tryptophan.

Tabelle II Table II

fH2- fH2-

X- X-

ÇH- ÇH-

cbz-nh-ck-cooh. cbz-nh-ck-cooh.

nh2-ch-r* nh2-ch-r *

tert.-Butylacetat, HCIO^ , wenn R' = COOH tert-butyl acetate, HCIO ^ when R '= COOH

:H; :H;

•X • X

T: T:

cbz-nh-ch-cooch3 hcl*nh2-ch-r"" cbz-nh-ch-cooch3 hcl * nh2-ch-r ""

i 1.) tert. -Butyltrichlorphenylcarbonat ; 2) NaOH i 1.) tert. -Butyltrichlorophenyl carbonate; 2) NaOH

:H; :H;

-X- -X-

:h. :H.

CBZ-NH-CH-COOH BOC-NH-CH-R"" CBZ-NH-CH-COOH BOC-NH-CH-R ""

DCCI/p-N itrophenol DCCI / p-N itrophenol

CR~ X CR ~ X

boc-nh-ch-r"" boc-nh-ch-r ""

(é-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe^2HC1 (é-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe ^ 2HC1

f f

H2-x- H2-x-

-y-çh f -y-çh f

CBZ-NH-CH-Ç-(é-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R"" CBZ-NH-CH-Ç- (é-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-NH-CH-R ""

1) TFA; 1) TFA;

2) BOC-Trp-(é-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N, 2) BOC-Trp- (é-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N,

11 11

626 328 626 328

CBZ-NH-CH-Ç- ( é. -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe CBZ-NH-CH-Ç- (é. -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe

<fH2 <fH2

BOC-Trp-(é: -INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 BOC-Trp- (é: -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1

1) NH2NH2; 1) NH2NH2;

2) HCl; 2) HCl;

v 3) Isoamylriitrit f v 3) isoamylriitrite f

H--X- H - X-

cbz-nh-ch-^-(£ -inoc)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp--inoc)Lys-Thr- ¥-ch„ cbz-nh-ch - ^ - (£ -inoc) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp - inoc) Lys-Thr- ¥ -ch "

Phe-Thr-Ser-NH-CH-R * Phe-Thr-Ser-NH-CH-R *

f f

H2-x- H2-x-

hf y hf y

NH2~CH-g- ( £ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- ( -INOC) Lys-Thr- Y-CH- NH2 ~ CH-g- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (-INOC) Lys-Thr- Y-CH-

Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1

VK VK

Acetyl-A, Benzoyl-A oder CBZ-Ala-Gly-A und HF Zn Acetyl-A, Benzoyl-A or CBZ-Ala-Gly-A and HF Zn

î î

H2-x- H2-x-

•y-ch, • y-ch,

r" -nh-ch-c-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-nh-ch-r' r "-nh-ch-c-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-nh-ch-r '

In den obigen Formeln haben X, Y, R', R" und R"" jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung, A stellt eine beliebige geeignete, bekannte Gruppe zur Erzeugung einer Amidbindung (wie ein Halogenatom oder eine Anhydrid- oder aktive Estergruppe) dar und die Aminosäure Trp kann durch D-Trp ersetzt sein. q u In the above formulas, X, Y, R ', R "and R" "each have the meaning given above, A represents any suitable known group for forming an amide bond (such as a halogen atom or an anhydride or active ester group) and the amino acid Trp can be replaced by D-Trp. qu

Wenn die Gruppe -X-Y- die Gruppe —S- oder -S02-enthält, ist eine weitere Oxidationsstufe mit einem geeigneten Oxidationsmittel, wie Perameisensäure oder Wasserstoffperoxid, erforderlich. If the group -X-Y- contains the group -S- or -S02-, an additional oxidation step with a suitable oxidizing agent such as performic acid or hydrogen peroxide is required.

Die für das in Tabelle I dargestellte Verfahren verwendeten Ausgangsverbindungen der nachstehenden allgemeinen Formel: The starting compounds of the following general formula used for the process shown in Table I:

X- X-

CH, CH,

ch2-cooch3 ch2-cooch3

nh2-ch-r' nh2-ch-r '

Jost und F. Sorm, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), Seite 238. Jost and F. Sorm, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), page 238.

Die für das in Tabelle I dargestellte Verfahren verwendest) ten Ausgangsmaterialien der nachstehenden allgemeinen Formel: The starting materials of the general formula below used for the process shown in Table I:

ch; ch;

-X -X

-ch, -ch,

ss ch2-cooch3 ss ch2-cooch3

nh2- ch-r' nh2- ch-r '

60 60

in der R' ein Wasserstoffatom und -X-Y CH2-CH2- bedeuten, sind aus folgenden Literaturstellen bekannt: C.F. in which R 'is a hydrogen atom and -X-Y CH2-CH2- are known from the following references: C.F.

Horn et al., Angew. Chem. 74 (1962), Seite 531 und Chemical Abstract, Band 57,11411(c). Horn et al., Angew. Chem. 74 (1962), page 531 and Chemical Abstract, volume 57, 11411 (c).

Die für das aus Tabelle II ersichtliche Verfahren verwendeten Ausgangsverbindungen der nachstehenden allgemeinen Formel: The starting compounds of the following general formula used for the process shown in Table II:

in der R' COOH und -X-Y CH2-S- oder -S-CH2- bedeuten, sind in folgenden Veröffentlichungen beschrieben: K. Jost, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), Seite 223 und K. in which R 'denotes COOH and -X-Y CH2-S- or -S-CH2- are described in the following publications: K. Jost, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), page 223 and K.

T'd T'd

X- X-

:h. :H.

cbz-nh-ch-c00ch, cbz-nh-ch-c00ch,

nh2-ch-r' nh2-ch-r '

626 328 626 328

12 12th

in der R' COOH und —X-Y CH2-S- oder —S-CH2- bedeu- Alle übrigen erfindungsgemäss benötigten Aminosäure- in the R 'COOH and —X-Y CH2-S- or —S-CH2- mean- all other amino acid required according to the invention

ten, sind in folgenden Veröffentlichungen beschrieben: K. Jost derivate (vgl. die Tabellen I und II) sind mit Ausnahme der und F. Sorm, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), Seite aus Tabelle II ersichtlichen Zwischenprodukte der nachste-238 und K. Jost und J. Rudinger, Collect, Czech. Chem. henden allgemeinen Formel: ten, are described in the following publications: K. Jost derivatives (see Tables I and II), with the exception of and F. Sorm, Collect. Czech. Chem. Comm. 36 (1971), page from Table II intermediate products of the next-238 and K. Jost and J. Rudinger, Collect, Czech. Chem. General formula:

Comm. 32 (1967), Seite 2488. s ch; Comm. 32 (1967), page 2488. s ch;

-X- -X-

cbz-nh-ch-cooh cbz-nh-ch-cooh

-CH, -CH,

boc-nh-ch-c boc-nh-ch-c

^DtBu in der -X-Y CH2-CH2- ist, ebenfalls bekannt. Die genannten Zwischenprodukte können durch elektrolytische oxi-dative Decarboxylierung (nach Kolbe) von zwei Molekülen ^ DtBu in which -X-Y CH2-CH2- is also known. The intermediates mentioned can be obtained by electrolytic oxidative decarboxylation (according to Kolbe) of two molecules

CH2-CH2-COOH CH2-CH2-COOH

von in geeigneter Weise geschützter Glutaminsäure gemäss folgendem Reaktionsschema hergestellt werden hooc-ch2-ch2 of suitably protected glutamic acid are produced according to the following reaction scheme hooc-ch2-ch2

CBZ-NH—CH-COOMe (IV) CBZ-NH-CH-COOMe (IV)

BOC-NH-CH-C BOC-NH-CH-C

'OtBu 'OtBu

(V) (V)

V V

ÇH^CHj- ÇH ^ CHj-

Kolbe ch--çh Kolbe ch - çh

CBZ-NH—CH-COOMe boc CBZ-NH-CH-COOMe boc

2 f'V 2 f'V

-nh-ch-cç -nh-ch-cç

UtBu UtBu

(IV + V) + (IV + V) +

Î Î

H2-CH2" H2-CH2 "

CB Z-NH-CH-COOMe CB Z-NH-CH-COOMe

(IV + IV) + (IV + IV) +

— CH2-^2 - CH2- ^ 2

CBZ-NH-CH-COOME CBZ-NH-CH-COOME

CH2-CH2 CH2-CH2

BOC-NH- BOC-NH-

UtBu UtBu

-ch2-ch2 -ch2-ch2

BOC-NH-CH-C BOC-NH-CH-C

OtBu OtBu

(V + V) (V + V)

verdünnte Base diluted base

Säure ch2-ch2- Acid ch2-ch2-

■ch2-ch2 ■ ch2-ch2

cbz-nh-ch-cooh boc cbz-nh-ch-cooh boc

L / L /

-nh-ch-c^ -nh-ch-c ^

T3tBu T3tBu

(IV + V) 1 + (IV + V) 1 +

CH^CH^- CH ^ CH ^ -

-CH2-ÇH2 -CH2-ÇH2

cbz-nh-ch-cooh cbz-nh-ch-cooh cbz-nh-ch-cooh cbz-nh-ch-cooh

(IV + IV) ' (IV + IV) '

13 13

626 328 626 328

ch2-c% ch2-c%

boc-nh-Ch boc-nh ch2-çh2 boc-nh-Ch boc-nh ch2-çh2

-LS -LS

OtBu OtBu

Die gewünschte Monocarbonsäure (IV + V)' lässt sich von Die Verbindung (IV + V)' wird nach der in Tabelle II darge- The desired monocarboxylic acid (IV + V) 'can be obtained from The compound (IV + V)' is shown in Table II

der Dicarbonsäure (IV + IV)' und der neutralen Verbindung (V + V)' leicht nach herkömmlichen Methoden abtrennen. the dicarboxylic acid (IV + IV) 'and the neutral compound (V + V)' easily by conventional methods.

stellten Methode zur Herstellung von ch2-ch2 presented method for the production of ch2-ch2

nh. nh.

r r

,-ch-c- , -ch-c-

-ch0-ch0 2 | 2 -ch0-ch0 2 | 2nd

-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH -Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH

und and

Î Î

K2~CE2 K2 ~ CE2

NH0-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser ch~-ch0 2 î 2 NH0-CH-C-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser ch ~ -ch0 2 î 2

-nh-ch-' -nh-ch- '

cooh verwendet. used cooh.

Die in den Tabellen I und II dargestellten Peptidsegmente (£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2HC1, BOC-Trp-(e- . INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 und BOC-D-Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 werden selbst zweckmässig durch stufenweise Synthese in Lösung unter Anwendung der HSE-, NPE- oder HBT-Aktivestermethode oder der Azid-methode hergestellt. The peptide segments shown in Tables I and II (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2HC1, BOC-Trp- (e-. INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 and BOC-D-Trp- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 are themselves expediently prepared by stepwise synthesis in solution using the HSE, NPE or HBT active ester method or the azide method.

Bei der Durchführung dieser stufenweisen oder Blocksynthesen, welche auf der Umsetzung einer Carboxylgruppe (oder aktivierten Carboxylgruppe) einer Aminosäure mit einer Aminogruppe einer anderen Aminosäure beruhen, werden die Aminogruppen der Aminosäure oder des Peptids, die (das) an der endständigen Carboxylgruppe des Moleküls reagieren, sowie andere funktionelle Gruppen beider Reaktionskomponenten, welche bei den Bedingungen solcher Synthesen reaktiv sind, vorzugsweise geschützt. Die Schutzgruppen müssen ihre Schutzwirkung unter den Bedingungen der Peptidverknüpfung beibehalten und ohne Beeinflussung der Peptidbindungen selektiv abspaltbar sein. Die nach einer bestimmten Stufe abzuspaltenden Schutzgruppen müssen ebenfalls selektiv abgetrennt werden können, ohne dass andere, für spätere Verknüpfungsstufen beizubehaltende Schutzgruppen erfasst werden. When performing these step-by-step or block syntheses, which are based on the reaction of a carboxyl group (or activated carboxyl group) of an amino acid with an amino group of another amino acid, the amino groups of the amino acid or peptide that react on the terminal carboxyl group of the molecule become as well as other functional groups of both reaction components which are reactive under the conditions of such syntheses are preferably protected. The protective groups must retain their protective action under the conditions of the peptide linkage and must be able to be split off selectively without influencing the peptide bonds. The protective groups to be split off after a certain level must also be able to be selectively separated without other protective groups to be retained for later linkage levels being recorded.

Beispiele für üblicherweise verwendete Amino-Schutz-gruppen sind Substituenten vom Acyltyp, wie die Formyl-, Phthalyl-, Trifluoracetyl-, Toluolsulfonyl-, Dibenzylphospho-ryl-, Nitrophenylsulfenyl-, Tritylsulfenyl- oder o-Nitrophen-oxyacetylgruppe, und Substituenten vom Urethantyp, wie die Benzyloxycarbonyl-, (Carbobenzoxy-), p-Methoxycarbobenz-oxy-, p-Nitrocarbobenzoxy-, tert.-Butyloxycarbonyl-, 2-(p-Bi-phenylyl)-2-isopropyloxycarbonyl- oder Isonicotinyloxycarbo-nylgruppe, sowie Substituenten vom Alkyltyp, wie die Triphe-nylmethylgruppe, Trialkylsilylreste oder die Trimèthylsilyl-gruppe. Die bevorzugte Schutzgruppe für die e-Aminogruppe von Lysin ist die Isonicotinyloxycarbonylgruppe. Zum Schutz der a-Aminogruppe der am Carboxylende dés Moleküle an der Umsetzung teilnehmenden Aminosäuren (oder Peptide) dient vorzugsweise die tert.-Butyloxycarbonylgruppe (BOC), da diese sich nach der erwähnten Umsetzung und vor der anschliessenden Stufe (wo die a-Aminogruppe selbst reagiert) leicht durch relativ milde Säureeinwirkung (beispielsweise mit Examples of commonly used amino protecting groups are acyl-type substituents such as the formyl, phthalyl, trifluoroacetyl, toluenesulfonyl, dibenzylphosphoryl, nitrophenylsulfenyl, tritylsulfenyl or o-nitrophenoxyacetyl group, and urine substituents, such as the benzyloxycarbonyl, (carbobenzoxy), p-methoxycarbobenz-oxy, p-nitrocarbobenzoxy, tert-butyloxycarbonyl, 2- (p-bi-phenylyl) -2-isopropyloxycarbonyl or isonicotinyloxycarbo-nyl group, and substituents from Alkyl type, such as the triphenylmethyl group, trialkylsilyl radicals or the trimethylsilyl group. The preferred protecting group for the e-amino group of lysine is the isonicotinyloxycarbonyl group. To protect the a-amino group of the amino acids (or peptides) participating in the reaction at the carboxyl end of the molecules, the tert-butyloxycarbonyl group (BOC) is preferably used, since this occurs after the reaction mentioned and before the subsequent step (where the a-amino group itself reacts) easily due to relatively mild exposure to acid (e.g. with

Hilfe von Trifluoressigsäure oder HCl in Äthylacetat) abspalten lässt, wobei die zum Schutz anderer Aminogruppen (wie 30 der basischen Aminogruppe von Lysin) dienenden Gruppen, wie die Carbobenzoxygruppe (CBZ) und die Isonicotinyloxycarbonylgruppe, nicht nennenswert angegriffen werden. Die Carbobenzoxygruppe lässt sich mit Hilfe von Bromwasserstoff in Eisessig oder Fluorwasserstoff abspalten, wodurch die Isoni-35 cotinyloxycarbonylgruppe nicht wesentlich angegriffen wird. Die Abspaltung mit Fluorwasserstoff wird durch die Gegenwart von Anisol erleichtert. Die Isonicotinyloxycarbonylgruppe ist mit Hilfe von Zink abspaltbar. With the help of trifluoroacetic acid or HCl in ethyl acetate), whereby the groups serving to protect other amino groups (such as the basic amino group of lysine), such as the carbobenzoxy group (CBZ) and the isonicotinyloxycarbonyl group, are not significantly attacked. The carbobenzoxy group can be split off with the help of hydrogen bromide in glacial acetic acid or hydrogen fluoride, whereby the Isoni-35 cotinyloxycarbonyl group is not attacked significantly. Elimination with hydrogen fluoride is facilitated by the presence of anisole. The isonicotinyloxycarbonyl group can be split off with the help of zinc.

Der Schutz der Carboxylgruppen erfolgt üblicherweise u. a. 40 durch Bildung von Amiden, Salzen oder Estern, wie den Methyl- und Äthylestern (welche man bevorzugt, wenn eine anschliessende Umwandlung über das Hydrazid in das Azid gewünscht wird), den Benzyl-, p-Nitrobenzyl- oder tert.-Butyl-estern. Die Hydroxylgruppen werden bei der Synthese der er-45 findungsgemässen Somatostatinanalogen, bei welcher die Verknüpfungsreaktionen in Lösung erfolgen, in der Regel nicht geschützt. Nach Bedarf kann man jedoch zum Schutz der Hydroxylgruppen z.B. eine Tetrahydropyranyl-, Benzyl-, Trifluor-acetyl- oder tert.-Butylgruppe anwenden. The protection of the carboxyl groups is usually u. a. 40 by forming amides, salts or esters, such as the methyl and ethyl esters (which is preferred if a subsequent conversion via the hydrazide to the azide is desired), the benzyl, p-nitrobenzyl or tert-butyl esters . The hydroxyl groups are generally not protected in the synthesis of the somatostatin analogs according to the invention, in which the linking reactions take place in solution. If necessary, however, to protect the hydroxyl groups e.g. use a tetrahydropyranyl, benzyl, trifluoroacetyl or tert-butyl group.

so Die Wahl der Schutzgruppen wird teilweise durch die speziellen Verknüpfungs- bzw. Kupplungsbedingungen und teilweise durch die an der Umsetzung teilnehmenden Aminosäure- und Peptidkomponenten bestimmt. The choice of protective groups is determined in part by the special linking or coupling conditions and in part by the amino acid and peptide components participating in the implementation.

Detaillierte Richtlinien für die Wahl bestimmter, erfin-55 dungsgemäss zu verwendender Schutzgruppen können der FR-PS 1 496 536 entnommen werden; auf die in dieser Patentschrift beschriebenen Schutzgruppen wird hier ausdrücklich Bezug genommen. Detailed guidelines for the selection of certain protective groups to be used according to the invention can be found in FR-PS 1 496 536; reference is expressly made here to the protective groups described in this patent.

Eine Gesamtmethode zur Herstellung der bevorzugten 60 neuen Somatostatinanalogen An overall method for making the preferred 60 new somatostatin analogs

Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3'14- Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3'14-

somatostatin und Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3'14-[D-Trp8]-somatostatin 65 ist schematisch in Tabelle III dargestellt. Diese Tabelle erläutert die Herstellung eines L-Tryptophan enthaltenden Somatostatinanalogen; es sei festgestellt, dass die D-Tryptophan enthaltende Verbindung nach der aus Tabelle III ersichtlichen somatostatin and Des- (Ala1, Gly2) desamino [Cys3] dicarba3'14- [D-Trp8] somatostatin 65 is shown schematically in Table III. This table illustrates the preparation of a somatostatin analog containing L-tryptophan; it should be noted that the compound containing D-tryptophan is as shown in Table III

626 328 626 328

14 14

Methode unter der Ausnahme hergestellt werden kann, dass in Stufe 5a BOC-D-Tryptophan-HSE anstelle von BOC-L-Tryptophan-HSE verwendet wird. Method can be produced with the exception that in step 5a BOC-D-tryptophan-HSE is used instead of BOC-L-tryptophan-HSE.

Die übrigen neuen Somatostatinanalogen können analog der in Tabelle III dargestellten Methode hergestellt werden, indem man anstelle der in Stufe 10 eingesetzten a- Aminokorksäure eine Verbindung der allgemeinen Formeln VI und VII: The remaining new somatostatin analogs can be prepared analogously to the method shown in Table III, by using a compound of the general formulas VI and VII instead of the a-amino acid used in step 10:

V' V '

x- x-

-ch. -ch.

ch2-cooch3 ch2-cooch3

nh2-ch-r* nh2-ch-r *

ch; ch;

-x- -x-

-ch. -ch.

cbz-nh-cooch3 nh2-ch-r' cbz-nh-cooch3 nh2-ch-r '

(vi) (vi)

(vii) (vii)

in denen X, Y und R' jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung haben, verwendet und die in den Stufen 10 bis 15 und 17 bis 19 beschriebenen Umsetzungen durchführt. Wenn R R" ist, sind jedoch weitere Synthesestufen zur Kondensation s des N-endständigen Amins mit einer Acetyl- oder Benzoyl-gruppe oder mit CBZ-Ala-Gly erforderlich. Im letzteren Falle muss die Schutzgruppe der a-Aminogruppe von Ala in einer Zusatzstufe abgespalten werden. Ferner muss in jenem Falle, in which X, Y and R 'each have the meaning given above, and carry out the reactions described in steps 10 to 15 and 17 to 19. If RR "is, however, further synthesis steps for the condensation of the N-terminal amine with an acetyl or benzoyl group or with CBZ-Ala-Gly are required. In the latter case, the protective group of the a-amino group of Ala must be split off in an additional step Furthermore, in that case,

O O

10 wenn die Gruppe —X-Y- eine Sulfoxidgruppe, -S- oder —S02— enthält, eine Oxidation mit Hilfe eines geeigneten Oxi-dationsmittels (wie Perameisensäure oder Wasserstoffperoxid) als weitere Stufe erfolgen. Die entsprechenden D-Tryptophan-analogen können dadurch hergestellt werden, dass man in 15 Stufe 5a BOC-D-Tryptophan-HSE anstelle von BOC-L-Tryp-tophan-HSE einsetzt. 10 If the group —X-Y- contains a sulfoxide group, -S- or —S02—, oxidation is carried out as a further step using a suitable oxidizing agent (such as performic acid or hydrogen peroxide). The corresponding D-tryptophan-analogs can be prepared by using BOC-D-tryptophan-HSE instead of BOC-L-tryp-tophan-HSE in stage 5a.

Tabelle III Table III

Phe-OMe/m > | a) BOC-PheHSE; b) HCl Phe-Phe-OMe • HCl 7 1 a) BOC-AsnNPE; b) HCl Asn-Phe-Phe-OMe • HCl Phe-OMe / m> | a) BOC-PheHSE; b) HCl Phe-Phe-OMe • HCl 7 1 a) BOC-AsnNPE; b) HCl Asn-Phe-Phe-OMe • HCl

8 8th

a) a-BOC-(e-INOC)LysHBT ; a) a-BOC- (e-INOC) LysHBT;

b) HCl a- Aminokorksäure 9 | CH3OH, HCl 10 X tert.-Butylacetat, HCIO4 a-tert.-Butyl-cu-methyl-aaminosuberat 11| tert.-Butyltrichlorphenylcarbonat b) HCl a-amino acid 9 | CH3OH, HCl 10 X tert-butyl acetate, HCIO4 a-tert-butyl-cu-methyl-aaminosuberate 11 | tert-butyltrichlorophenyl carbonate

12 I NaOH 12 l NaOH

a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat a-tert-butyl-BOC-a-aminosuberate

13 l DCCI/p-Nitrophenol a-tert.-Butyl-<o-p-nitrophenyl BOC-a-Aminosuberat 13 l DCCI / p-nitrophenol a-tert-butyl- <o-p-nitrophenyl BOC-a-aminosuberate

14 I (f-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2HCK a-tert.-Butyl-BOC-cü-Asu-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe 14 I (f-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2HCK a-tert-butyl-BOC-cü-Asu- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe

15 1TFA 15 1TFA

ai -Asu-(f-IN OC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA ai -Asu- (f-IN OC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA

17 i BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3< = 17 i BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 <=

BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-cü-Asu-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-cu-Asu (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe

18 4 a) NH2NH2; b) HCl; c) Isoamylnitrit 18 4 a) NH2NH2; b) HCl; c) isoamyl nitrite

Cyclo[co-Asu-(£-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] Cyclo [co-Asu- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser]

19 iZn 19 iZn

Des(Ala1, Gly2)-desamino[Cys3"dicarba3'14-somatostatin Des (Ala1, Gly2) desamino [Cys3 "dicarba3'14-somatostatin

Ser-OMeHCl Ser-OMeHCl

1 4 a) BOC-ThrHSE; b) TFA Thr-Ser-OMe • TFA 1 4 a) BOC-ThrHSE; b) TFA Thr-Ser-OMe • TFA

2 4 a) BOC-PheHSE; b) TFA Phe-Thr-Ser-OMe • TFA 2 4 a) BOC-PheHSE; b) TFA Phe-Thr-Ser-OMe • TFA

3 4 a) BOC-ThrHSE; b) HCl Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • HCl 3 4 a) BOC-ThrHSE; b) HCl Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • HCl

4 4 a) a-BOC-(£-INOC)LysHBT; b) TFA (£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • 2TFA 4 4 a) a-BOC- (£ -INOC) LysHBT; b) TFA (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • 2TFA

5 4 a) BOC-TrpHSE; b) NH2NH2 BOC-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser 5 4 a) BOC-TrpHSE; b) NH2NH2 BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser

16 16

Isoamylnitrit Isoamyl nitrite

H2NHN H2NHN

In Tabelle III beziehen sich die links von den Pfeilen stehenden Zahlen jeweils auf das Ausführungsbeispiel, aus welchem die bei der angeführten Umwandlung angegebenen Bedingungen im einzelnen hervorgehen. In Table III, the numbers to the left of the arrows each relate to the exemplary embodiment from which the conditions specified in the conversion mentioned are apparent.

Die erwähnte Gesamtmethode beruht auf Kombinationen einer Stufen- und einer Blocksynthese, wobei bestimmte Pep-tidsegmente von The overall method mentioned is based on combinations of a step and a block synthesis, with certain peptide segments of

Des(AIa\Gly2)-desamino[Cys3]-dicarba3'14-somatostatin und Des (AIa \ Gly2) -desamino [Cys3] -dicarba3'14-somatostatin and

Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]-dicarba3'14- Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] -dicarba3'14-

[D-Trp8]-somatostatin anfangs nach der Stufenmethode durch aufeinanderfolgende Synthese in Lösung erzeugt, diese Segmente anschliessend in der richtigen Reihenfolge verknüpft und die beiden Enden des erhaltenen Peptids unter Bildung des gewünschten cyclischen Peptids vereinigt werden. Bei dieser Methode dienen der BOC-Substituent zum Schutz der a-Aminogruppen, die Isoni-cotinyloxycarbonylgruppe (INOC) zum Schutz der £-Amino-gruppe des Lysins und die Methylestergruppe zum Schutz der Carboxylgruppe von Phenylalanin, Phenylalanylphenylalanin, Asparaginylphenylalanylphenylalanin, (E-INOC)-Lysylasparaginylphenylalanylphenylalanin und a-tert.-Butylester-BOC-to-Asu-(£-ÌNOC)-lysyl-asparaginylphenylalanyïphenylalanin. [D-Trp8] somatostatin was initially prepared by the step method by successive synthesis in solution, these segments were then linked in the correct order and the two ends of the peptide obtained were combined to form the desired cyclic peptide. In this method, the BOC substituent serves to protect the a-amino groups, the isoni-cotinyloxycarbonyl group (INOC) to protect the £ -amino group of lysine and the methyl ester group to protect the carboxyl group of phenylalanine, phenylalanylphenylalanine, asparaginylphenylalanylphenylalanine, (E- ) -Lysylasparaginylphenylalanylphenylalanin and a-tert-butyl ester-BOC-to-Asu- (£ -ÌNOC) -lysyl-asparaginylphenylalanyïphenylalanin.

45 Im Falle von «-tert.-Butylester-BOC-o»-Asu-(£-INOC)-lysyI-asparaginylphenylalanylphenylalanin-OMe dient der Methylester ferner zur Bereitstellung des Zwischenprodukts für die Herstellung (über das Hydrazid) von Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-ai-Asu-(g-INOC)-50 lysylasparaginylphenylalanylphenylalaninazid oder D-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-ai-Asu-(£-INOC)- 45 In the case of "-tert.-butyl ester-BOC-o" -Asu- (£ -INOC) -lysyI-asparaginylphenylalanylphenylalanin-OMe, the methyl ester is also used to provide the intermediate for the preparation (via the hydrazide) of Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-a-Asu (g-INOC) -50 lysylasparaginylphenylalanylphenylalaninazid or D-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-ai-Asu - (£ -INOC) -

lysylasparaginylphenylalanylphenylalaninazid. lysylasparaginylphenylalanylphenylalaninazid.

Ausser diesem bevorzugten Verfahren umfasst die Erfindung jedoch auch verschiedene Abwandlungen oder Alternativme-55 thoden sowie die Anwendung anderer, die vorgenannten Kriterien erfüllender Schutzgruppen. Die Alternativmethoden beruhen ebenfalls auf stufenweisen Synthesen in Lösung sowie Kombinationen von stufenweisen und Blocksynthesen. In addition to this preferred method, the invention also encompasses various modifications or alternative methods and the use of other protective groups which meet the aforementioned criteria. The alternative methods are also based on step-by-step syntheses in solution as well as combinations of step-by-step and block syntheses.

Wie aus Tabelle III hervorgeht, beinhaltet eine Gesamtme-60 thode zur Herstellung von As can be seen from Table III, an overall method involves the production of

Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba314- Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] dicarba314-

somatostatin oder Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3-14-[D-Trp8]-somatostatin 65 speziell (a) die stufenweise Synthese der N-endständigen He-xapeptidsegmente BOC-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azid und BOC-D-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azid und (b) des C-endständigen Pentapeptidsegments m- somatostatin or Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3-14- [D-Trp8] -somatostatin 65 specifically (a) the step-by-step synthesis of the N-terminal He-xapeptide segments BOC-Trp- (£ -INOC) - Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azide and BOC-D-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azide and (b) the C-terminal pentapeptide segment m-

15 15

626 328 626 328

Aus-(e-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe, (c) die Kondensation der in den Stufen (a) und (b) hergestellten Peptide zum Peptid BOC-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-oj-Asu- Aus (e-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe, (c) the condensation of the peptides produced in steps (a) and (b) to form the peptide BOC-Trp- (£ -INOC) -Lys- Thr-Phe-Thr-Ser-oj-Asu-

£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe oder BOC-D-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-a»-Asu- £ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe or BOC-D-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-a »-Asu-

f-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe, f-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe,

(d) die Umwandlung von -OMe in das Hydrazid, die Abspaltung der BOC-Schutzgruppe und (f) die Cyclisierung und Befreiung von den Schutzgruppen des erhaltenen Undekapeptids, wobei das neue Somatostatinanaloge Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3,14- (d) the conversion of -OMe to the hydrazide, the elimination of the BOC protective group and (f) the cyclization and deprotection of the undecapeptide obtained, the new somatostatin analogue Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3 , 14-

somatostatin oder Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3,14- somatostatin or Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3,14-

[D-Trp8]-somatostatin erhalten wird. [D-Trp8] somatostatin is obtained.

Das N-endständige Hexapeptidsegment wird durch Umsetzung von Ser-OH • HCl mit BOC-ThrHSE hergestellt. Das Ser-OMe-Hydrochlorid wird mit Hilfe einer schwachen Base in das freie Amin übergeführt, welches in einem geeigneten organischen Lösungsmittel mit BOC-ThrHSE zur Reaktion gebracht wird. Zur Durchführung der Umsetzung vereinigt man die Lösungen und rührt den Ansatz bei Raumtemperatur und ungefähr neutralem pH-Wert, vorzugsweise jedoch bei einem pH-Wert von 6,8 bis 8, unter welchen Bedingungen die Reaktion gewöhnlich nach etwa 4 Std. abgeschlossen ist. Anschliessend extrahiert man das Produkt mit Wasser und dampft die Lösung zur Trockene ein. Man löst den Rückstand in einem geeigneten organischen Lösungsmittel und filtriert das unlösliche Salz ab. Das Rohprodukt wird chromatographisch gereinigt, wodurch man im wesentlichen reines BOC-Thr-Ser-OMe erhält. Dieses Dipeptid wird mit TFA umgesetzt, wodurch der BOC-Substituent unter Bildung von Thr-Ser-OMe TFA abgespalten wird. The N-terminal hexapeptide segment is produced by reacting Ser-OH • HCl with BOC-ThrHSE. The Ser-OMe hydrochloride is converted into the free amine using a weak base, which is reacted with BOC-ThrHSE in a suitable organic solvent. To carry out the reaction, the solutions are combined and the mixture is stirred at room temperature and approximately neutral pH, but preferably at a pH of 6.8 to 8, under which conditions the reaction is usually complete after about 4 hours. The product is then extracted with water and the solution is evaporated to dryness. The residue is dissolved in a suitable organic solvent and the insoluble salt is filtered off. The crude product is purified by chromatography, whereby essentially pure BOC-Thr-Ser-OMe is obtained. This dipeptide is reacted with TFA, which cleaves the BOC substituent to form Thr-Ser-OMe TFA.

Das Dipeptid Thr-Ser-OMe ■ TFA wird mit Hilfe einer schwachen Base in das freie Amin umgewandelt, welches mit einer Aufschlämmung von BOC-PheHSE in einem geeigneten organischen Lösungsmittel zur Umsetzung gebracht wird. Zur Durchführung der Umsetzung werden die Reaktionsteilnehmer 2 Std. bis über Nacht bei Raumtemperatur kräftig bewegt. Anschliessend wird die Reaktionslösung mit Wasser gewaschen und die organische Schicht zur Trockene eingedampft. Das erhaltene Rohprodukt wird chromatographisch gereinigt; dabei erhält man im wesentlichen reines BOC-Phe-Thr-Ser-OMe. Dieses Tripeptid wird durch Umsetzung mit TFA zum im wesentlichen reinen Tripeptid Phe-Thr-Ser-OMe • TFA umgewandelt. The dipeptide Thr-Ser-OMe ■ TFA is converted with the help of a weak base into the free amine, which is reacted with a slurry of BOC-PheHSE in a suitable organic solvent. To carry out the reaction, the reactants are vigorously agitated for 2 hours to overnight at room temperature. The reaction solution is then washed with water and the organic layer is evaporated to dryness. The crude product obtained is purified by chromatography; essentially pure BOC-Phe-Thr-Ser-OMe is obtained. This tripeptide is converted to the essentially pure tripeptide Phe-Thr-Ser-OMe • TFA by reaction with TFA.

Das Tripeptid Phe-Thr-Ser-OMe - TFA wird mit Hilfe einer schwachen Base in die freie Base übergeführt, welche in einem geeigneten organischen Lösungsmittel mit BOC-ThrHSE zur Reaktion gebracht wird. Zur Durchführung der Umsetzung werden die Reaktionsteilnehmer etwa 1 Std. bis über Nacht bei Raumtemperatur kräftig bewegt. Das ausgefallene Rohprodukt wird isoliert und aus Methanol/Äther umgefällt; dabei erhält man das im wesentlichen reine Tetrapeptid BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. Das Tetrapeptid wird mit wasserfreiem Chlorwasserstoff in Äthylacetat umgesetzt, wodurch der BOC-Substituent abgespalten wird; man erhält Thr-Phe-Thr-Ser-OMe-hydrochlorid. The tripeptide Phe-Thr-Ser-OMe - TFA is converted into the free base using a weak base, which is reacted with BOC-ThrHSE in a suitable organic solvent. To carry out the reaction, the reactants are vigorously agitated for about 1 hour to overnight at room temperature. The precipitated crude product is isolated and reprecipitated from methanol / ether; the essentially pure tetrapeptide BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe is obtained. The tetrapeptide is reacted with anhydrous hydrogen chloride in ethyl acetate, whereby the BOC substituent is split off; Thr-Phe-Thr-Ser-OMe hydrochloride is obtained.

a-BOC-(£-INOC)-Lys-OH wird in Gegenwart von DCCI mit N-Hydroxybenzotriazolmonohydrat umgesetzt. Das erhaltene ct-BOC-(e-INOC)-LysHBT wird mit dem Tetrapeptid Thr-Phe-Thr-Ser-OMe-hydrochlorid zur Umsetzung gebracht. Zu diesem Zweck werden die Reaktionsteilnehmer in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, wie frisch entgastem DMF/Methylenchlorid, während eines Zeitraums von etwa 1 Std. bis über Nacht reagieren gelassen. Anschliessend filtriert man die unlöslichen Anteile ab und engt das Filtrat stark ein. Das Produkt wird durch Zugabe von Petroläther zur Ausfällung gebracht. Man reinigt das Rohprodukt durch Chromatographie; dabei erhält man das im wesentlichen reine geschützte Pentapeptid a-BOC-(E-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. Das geschützte Pentapeptid wird mit TFA zur Umsetzung gebracht, wodurch der BOC-Substituent abgespalten wird. Man erhält das Pentapeptid (£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • 2TFA. a-BOC- (£ -INOC) -Lys-OH is reacted with N-hydroxybenzotriazole monohydrate in the presence of DCCI. The ct-BOC- (e-INOC) -LysHBT obtained is reacted with the tetrapeptide Thr-Phe-Thr-Ser-OMe hydrochloride. To this end, the reactants are allowed to react in a suitable organic solvent, such as freshly degassed DMF / methylene chloride, for a period of about 1 hour to overnight. The insoluble constituents are then filtered off and the filtrate is concentrated considerably. The product is precipitated by adding petroleum ether. The crude product is purified by chromatography; the essentially pure protected pentapeptide a-BOC- (E-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe is obtained. The protected pentapeptide is reacted with TFA, which cleaves the BOC substituent. The pentapeptide (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • 2TFA is obtained.

Das Pentapeptid (e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe -2TFA wird mit Hilfe einer schwachen Base in die freie Base umgewandelt, welche in einem geeigneten organischen Lösungsmittel (wie DMF) bei etwa neutralem pH-Wert (vorzugsweise bei etwa 7,5 bis etwa 7,1) mit BOC-D-TrpHSE oder BOC-TrpHSE umgesetzt wird. Unter den genannten Bedingungen ist die Reaktion abgeschlossen, nachdem man den Ansatz über Nacht gerührt hat. Das Produkt wird anschliessend durch Zugabe von Äther ausgefällt. Das Rohprodukt wird chromatographiert; dabei erhält man das im wesentlichen reine geschützte Hexapeptid BOC-Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe oder BOC-D-Trp-(e-ESIOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. Das geschützte Hexapeptid wird mit wasserfreiem Hydrazin in Methanol umgesetzt, wobei man im wesentlichen reines BOC-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid oder BOC-D-Trp-(e-INOC)-Lys-Tfir-Phe-Thr-Ser-hydrazid erhält. The pentapeptide (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe -2TFA is converted into the free base with the help of a weak base, which is dissolved in a suitable organic solvent (such as DMF) at approximately neutral pH ( preferably at about 7.5 to about 7.1) with BOC-D-TrpHSE or BOC-TrpHSE. Under the conditions mentioned, the reaction is complete after stirring the mixture overnight. The product is then precipitated by adding ether. The crude product is chromatographed; the essentially pure protected hexapeptide BOC-Trp- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe or BOC-D-Trp- (e-ESIOC) -Lys-Thr-Phe-Thr is obtained -Ser-OMe. The protected hexapeptide is reacted with anhydrous hydrazine in methanol, whereby essentially pure BOC-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide or BOC-D-Trp- (e-INOC) - Lys-Tfir-Phe-Thr-Ser hydrazide obtained.

Das C-endständige Tetrapeptid (£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2HC1 wird durch Umsetzung von Phe-OMe-hy-drochlorid mit BOC-PheHSE hergestellt. Die Umsetzung wird über Nacht im alkalischen pH-Gebiet in Gegenwart eines geeigneten organischen Lösungsmittels, wie Chloroform oder Methylenchlorid, durchgeführt. Anschliessend werden die unlöslichen Anteile abgetrennt. Man dampft die organische Lösung zur Trockene ein und kristallisiert den Rückstand um. Das geschützte Dipeptid wird mit wasserfreiem Chlorwasserstoff in Äthylacetat zur Reaktion gebracht, wodurch der BOC-Substituent unter Bildung von Phe-Phe-OMe-hydrochlo-rid abgespalten wird. The C-terminal tetrapeptide (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2HC1 is produced by reacting Phe-OMe-hydrochloride with BOC-PheHSE. The reaction is carried out overnight in the alkaline pH range in the presence of a suitable organic solvent, such as chloroform or methylene chloride. The insoluble parts are then separated off. The organic solution is evaporated to dryness and the residue is recrystallized. The protected dipeptide is reacted with anhydrous hydrogen chloride in ethyl acetate, whereby the BOC substituent is split off to form Phe-Phe-OMe-hydrochloride.

Das Dipeptid Phe-Phe-OMe-hydrochlorid wird in Gegenwart eines geeigneten organischen Lösungsmittels (wie DMF) bei neutralem pH-Wert (vorzugsweise bei einem pH-Wert von etwa 7,2) über Nacht mit BOC-AsnNPE umgesetzt. Anschliessend wird die Reaktionslösung eingedampft und der Rückstand in Chloroform gelöst. Die organische Lösung wird gewaschen und zur Trockene eingedampft. Durch Umkristallisation des Rückstands erhält man im wesentlichen reines BOC-Asn-Phe-Phe-OMe. Dieses geschützte Tripeptid wird mit wasserfreiem Chlorwasserstoff in Äthylacetat umgesetzt, wodurch der BOC-Substituent abgespalten wird; dabei erhält man Asn-Phe-Phe-OMe-hydrochlorid. The dipeptide Phe-Phe-OMe hydrochloride is reacted with BOC-AsnNPE overnight in the presence of a suitable organic solvent (such as DMF) at neutral pH (preferably at a pH of about 7.2). The reaction solution is then evaporated and the residue is dissolved in chloroform. The organic solution is washed and evaporated to dryness. By recrystallization of the residue, essentially pure BOC-Asn-Phe-Phe-OMe is obtained. This protected tripeptide is reacted with anhydrous hydrogen chloride in ethyl acetate, whereby the BOC substituent is split off; this gives Asn-Phe-Phe-OMe hydrochloride.

a-BOC-(£-INOC)-Lys wird in Gegenwart von DCCI in einem geeigneten organischen Lösungsmittel (wie DMF) mit 1-Hydroxybenzotriazol (HBT) zu a-BOC-(£-INOC)-LysHBT umgesetzt. Die erhaltene Lösung wird mit Asn-Phe-Phe-OMe-hydrochlorid versetzt. Dann stellt man den Ansatz auf einen etwa neutralen pH-Wert ein und rührt ihn über Nacht. Hierauf filtriert man den Dicyclohexylharnstoff vom Reaktionsgemisch ab und dampft das Filtrat zur Trockene ein. Der Rückstand wird in einem geeigneten organischen Lösungsmittel suspendiert und sodann abfiltriert. Man setzt das geschützte Tetrapeptid mit wasserfreiem Chlorwasserstoff in Äthylacetat um, wodurch der BOC-Substituent abgespalten wird; man erhält (£-INOC)-Lys-Asn-OMe-dihydrochlorid. a-BOC- (£ -INOC) -Lys is reacted with 1-hydroxybenzotriazole (HBT) in the presence of DCCI in a suitable organic solvent (such as DMF) to a-BOC- (£ -INOC) -LysHBT. The solution obtained is mixed with Asn-Phe-Phe-OMe hydrochloride. Then the mixture is adjusted to an approximately neutral pH and stirred overnight. The dicyclohexylurea is then filtered off from the reaction mixture and the filtrate is evaporated to dryness. The residue is suspended in a suitable organic solvent and then filtered off. The protected tetrapeptide is reacted with anhydrous hydrogen chloride in ethyl acetate, as a result of which the BOC substituent is split off; one obtains (£ -INOC) -Lys-Asn-OMe-dihydrochloride.

a-tert.-Butyl-(w-p-nitrophenylester-BOC-a-amino-suberat wird dadurch hergestellt, dass man zunächst a-Amino-korksäure während 30 Min. bei 25 °C mit einer Methanollösung von wasserfreiem HCl zu œ-Methyl-a -aminosuberat • HCl umsetzt. Das Hydrochlorid wird in tert.-Butylacetat mit Perchlorsäure zur Reaktion gebracht. Durch Extraktion der Reak5 a-tert.-Butyl- (wp-nitrophenyl ester-BOC-a-amino-suberate is prepared by first a-amino-coric acid for 30 min at 25 ° C with a methanol solution of anhydrous HCl to œ-methyl- a -aminosuberat • HCl The hydrochloride is reacted in tert-butyl acetate with perchloric acid by extraction of the Reak5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

626 328 626 328

16 16

tionslösung bei neutralem pH-Wert mit einem organischen Lösungsmittel erhält man a-tert.-Butyl-&> -methyl-a-aminosube-rat. tion solution at neutral pH with an organic solvent gives a-tert-butyl - &> -methyl-a-amino-SUBATE.

Die a-Aminogruppe des a-tert.-Butyl-a>-methyl-a-amino-suberats wird durch Umwandlung in das BOC-Derivat, zu welchem Zweck man die Verbindung mit tert.-Butyltrichlorphe-nylcarbonat umsetzt, geschützt. Die Umsetzung wird über Nacht bei 25 °C in Gegenwart eines geeigneten organischen Lösungsmittels (wie DMF) im schwach-alkalischen pH-Gebiet von etwa 8 bis 9 (vorzugsweise bei einem pH-Wert von 8,5) durchgeführt. Die Reaktionslösung wird anschliessend zur Trockene eingedampft. Man löst den Rückstand in einer möglichst geringen Menge eines geeigneten organischen Lösungsmittels, wäscht die Lösung mit verdünnter Säure und Base und dampft das organische Lösungsmittel ab. Dabei erhält man im wesentlichen reines a-tert.-Butyl-cy-methyl-N-BOC-a-amino-suberat. The a-amino group of the a-tert-butyl-a> -methyl-a-amino-suberate is protected by conversion into the BOC derivative, for which purpose the compound is reacted with tert-butyltrichlorophenyl carbonate. The reaction is carried out overnight at 25 ° C. in the presence of a suitable organic solvent (such as DMF) in the weakly alkaline pH range from about 8 to 9 (preferably at a pH of 8.5). The reaction solution is then evaporated to dryness. The residue is dissolved in the smallest possible amount of a suitable organic solvent, the solution is washed with dilute acid and base and the organic solvent is evaporated off. Essentially pure a-tert-butyl-cy-methyl-N-BOC-a-amino-suberate is obtained.

Die w-Methylestergruppe des a-tert.-Butyl-cy-methyl-N-BOC-a-aminosuberats wird durch eine 1V4 Std. lange Umsetzung bei 25 °C mit ln-NaOH in Dioxan selektiv verseift. Anschliessend dampft man das organische Lösungsmittel ab, säuert die verbleibende Lösung an und extrahiert mit einem geeigneten organischen Lösungsmittel. Das bei der Lösungsmittelabdampfung erhaltene Rohprodukt wird chromatographisch gereinigt; dabei erhält man reines a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat. The w-methyl ester group of the a-tert.-butyl-cy-methyl-N-BOC-a-aminosuberate is selectively saponified by reaction for 1 4 hours at 25 ° C. with lN NaOH in dioxane. The organic solvent is then evaporated off, the remaining solution is acidified and extracted with a suitable organic solvent. The crude product obtained in the solvent evaporation is purified by chromatography; this gives pure a-tert-butyl-BOC-a-aminosuberate.

Die üj - Carboxylgruppe des a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosu-berats wird durch Umsetzung mit p-Nitrophenol in Gegenwart von DCCI in eine aktive Estergruppe umgewandelt. Anschliessend filtriert man die festen Anteile ab und engt das Filtrat stark ein. Dabei erhält man das gewünschte a-tert.-Butyl-co-p-nitrophenyl-BOC-a-aminosuberat in Form eines Öls. The üj - carboxyl group of the a-tert-butyl-BOC-a-aminosu-berate is converted into an active ester group by reaction with p-nitrophenol in the presence of DCCI. The solid fractions are then filtered off and the filtrate is strongly concentrated. The desired a-tert-butyl-co-p-nitrophenyl-BOC-a-aminosuberate is obtained in the form of an oil.

Eine Lösung von (e-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe-dihy-drochlorid wird im alkalischen pH-Gebiet (vorzugsweise bei einem pH-Wert von etwa 8) über Nacht mit a-tert.-Butyl-w-p-nitro-phenyl-a-aminosuberat umgesetzt. Anschliessend wird die Reaktionslösung eingedampft und der Rückstand chromatographisch gereinigt; dabei erhält man das im wesentlichen reine Pentapeptid a-tert.-Butyl-BOC-w-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe. A solution of (e-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe-dihydrochloride is in the alkaline pH range (preferably at a pH of about 8) overnight with a-tert-butyl-wp -nitro-phenyl-a-aminosuberat implemented. The reaction solution is then evaporated and the residue is purified by chromatography; the essentially pure pentapeptide a-tert-butyl-BOC-w-Asu (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe is obtained.

Das geschützte Pentapeptid wird durch Umsetzung mit TFA sowohl von der a-N-BOC- als auch von der a-tert.-Butyl-s gruppe befreit; dabei erhält man w-Asu-(f-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA. The protected pentapeptide is freed from both the a-N-BOC and the a-tert-butyl group by reaction with TFA; this gives w-Asu (f-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA.

Eine Lösung des Pentapeptids a> -Asu- (t-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA wird mit einer kalten Lösung von BOC-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 oder BOC-D-10 Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3, welche durch Umsetzung von BOC-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NHNH2 oder BOC-D-Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NHNH2 mit Isoamylnitrit bei -25 °C frisch zubereitet wurden, zum neuen geschützten Undekapeptid 15 BOC-Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-{o-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-OMe oder BOC-D-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-cü-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe Lys-Asn-Phe-Phe-OMe 20 umgesetzt. A solution of the pentapeptide a> -Asu- (t-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA is mixed with a cold solution of BOC-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr- Ser-N3 or BOC-D-10 Trp- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3, which by reaction of BOC-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr -Ser-NHNH2 or BOC-D-Trp- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NHNH2 with isoamyl nitrite freshly prepared at -25 ° C, to the new protected undecapeptide 15 BOC-Trp- (e -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser- {o-Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-OMe or BOC-D-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe -Thr-Ser-cü-Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe Lys-Asn-Phe-Phe-OMe 20 implemented.

Das Undekapeptid BOC-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-«>-Asu-(£-INOC)- The undecapeptide BOC-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser - «> - Asu- (£ -INOC) -

Lys-Asn-Phe-Phe-OMe oder BOC-D-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-a>-Asu-25 (£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe wird durch Erzeugung einer Peptidbindung zwischen der Carboxylgruppe des Phenylalanins und der a-Aminogruppe des L-Tryptophans oder D-Tryptophans cyclisiert. Der Ringschluss wird dadurch vorgenommen, dass man (a) die 30 —OMe-Gruppe durch Umsetzung mit einer Methanollösung von Hydrazin in eine Hydrazidgruppe überführt, (b) die BOC-Schutzgruppe von L-Tryptophan oder D-Tryptophan durch Umsetzung des Undekapeptid-hydrazids mit wasserfreiem HCl in Gegenwart von Mercaptoäthanol abspaltet, wo-35 bei man Lys-Asn-Phe-Phe-OMe or BOC-D-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-a> -Asu-25 (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe- Phe-OMe is cyclized by creating a peptide bond between the carboxyl group of phenylalanine and the a-amino group of L-tryptophan or D-tryptophan. The ring closure is carried out by (a) converting the 30 —OMe group into a hydrazide group by reaction with a methanol solution of hydrazine, (b) converting the BOC protective group of L-tryptophan or D-tryptophan by reacting the undecapeptide hydrazide with anhydrous HCl in the presence of mercaptoethanol, where-35 at man

Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-a>-Asu-(£-INOC)- Trp- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-a> -Asu- (£ -INOC) -

Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazid-4HCl oder D-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-w-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazid • 4HC1 40 mit der Struktur: Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazide-4HCl or D-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-w-Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe- hydrazide • 4HC1 40 with the structure:

f f

H2""CH2 H2 "" CH2

ch2-, ch2-,

L L

4HC1 4HC1

§- ( & -INOC) Lys-Asn-Piie-Pne-NHNH2 £H • 4hc §- (& -INOC) Lys-Asn-Piie-Pne-NHNH2 £ H • 4hc

I 2 iJ I 2 iJ

Trp-(&-INOC)Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-C^ Trp - (& - INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-C ^

NîH NîH

oder or

<jH2-CHs CH2] <jH2-CHs CH2]

CH2-C--INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-NHNH2 *4HC1 CH2-C - INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-NHNH2 * 4HC1

ö l 2 X) oil 2 X)

D-Tro { Ç. -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-C' D-Tro {Ç. -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-C '

uh erhält und (c) das gewünschte cyclische Peptid erzeugt, indem man die Hydrazidgruppe durch Umsetzung mit Isoamylnitrit bei —25 °C im stark sauren pH-Gebiet in eine Azidgruppe überführt, die Lösimg mit einem geeigneten organischen Lösungsmittel bis auf eine Konzentration von etwa 1 mg/ml verdünnt, um die Cyclisierung gegenüber der Polymerisation zu begünstigen, und einen schwach alkalischen pH-Wert einstellt, um die a-Aminogruppe des L-Tryptophans oder D-Tryptophans freizusetzen und die Ringschlussreaktion in Gang zu bringen. Der Ringschluss ist abgeschlossen, nachdem man den Ansatz etwa 4 Tage bei —20 °C stehengelassen hat. uh is obtained and (c) the desired cyclic peptide is produced by converting the hydrazide group into an azide group by reaction with isoamyl nitrite at −25 ° C. in the strongly acidic pH range, the solution with a suitable organic solvent to a concentration of about 1 mg / ml diluted to favor cyclization over polymerization, and adjusted to a weakly alkaline pH to release the a-amino group of L-tryptophan or D-tryptophan and to initiate the ring closure reaction. The ring closure is complete after the batch has been left at −20 ° C. for about 4 days.

Anschliessend dampft man das Lösungsmittel ab und fällt den Rücksrand aus Methanol/Äthylacetat um; dabei erhält 60 man das im wesentlichen reine, geschützte cyclische Undekapeptid The solvent is then evaporated off and the rear edge is overturned from methanol / ethyl acetate; this gives 60 the essentially pure, protected cyclic undecapeptide

Cyclo[tu-Asu-(f-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(£-INOC)- Cyclo [tu-Asu- (f-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (£ -INOC) -

Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] oder Cyclo[(u-Asu-(f-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-65 (£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser]. Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] or Cyclo [(u-Asu- (f-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-65 (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr -Ser].

Das geschützte Undekapeptid wird in 50%iger wässriger Essigsäure mit frisch aktiviertem Zinkstaub behandelt, wodurch die -INOC-Substituenten der Lysinbausteine abgespal The protected undecapeptide is treated in 50% aqueous acetic acid with freshly activated zinc dust, whereby the -INOC substituents of the lysine building blocks are split off

17 17th

626 328 626 328

ten werden. Man filtriert das nicht-umgesetzte Zink vom Gemisch ab und reinigt das im Filtrat enthaltene Rohprodukt chromatographisch; dabei erhält man die neuen Somatostatinanalogen be. The unreacted zinc is filtered off from the mixture and the crude product contained in the filtrate is purified by chromatography; the new somatostatin analogs are obtained

Des-(Ala',Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3-14- Des- (Ala ', Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3-14-

somatostatin oder Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3'14- somatostatin or Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3'14-

[D-Trp8] somatostatin in im wesentlichen reiner Form. [D-Trp8] somatostatin in essentially pure form.

Weitere neue erfindungsgemässe Somatostatinanaloge können analog zur vorstehend beschriebenen Methode hergestellt werden, wobei man anstelle der a-Aminokorksäure jeweils die äquivalente Menge einer Verbindung der nachstehenden allgemeinen Formel: Further new somatostatin analogs according to the invention can be prepared analogously to the method described above, the equivalent amount of a compound of the following general formula being used instead of a-aminocorkic acid:

R-CH-COOH NH2-CH-R' R-CH-COOH NH2-CH-R '

in der X, Y, R und R' jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung haben, verwendet. in which X, Y, R and R 'each have the meaning given above.

Wenn in den Beschreibungen und Beispielen L-Trypto-phan erwähnt wird, kann dieses stets durch D-Tryptophan ersetzt werden. If L-tryptophane is mentioned in the descriptions and examples, this can always be replaced by D-tryptophan.

Herstellung von Thr-Ser-OMe • TFA Stufe a Production of Thr-Ser-OMe • TFA stage a

Ein Gemisch von 3,50 g Ser-OMe • HCl und 7,47 g BOC-ThrHSE in 70 ml Methylenchlorid wird in einem 250-ml-Rundkolben durchgerührt. Anschliessend stellt man die Lösung mit Triäthylamin auf einen pH-Wert von 7 ein und rührt den Ansatz 90 Min. Danach wird das Reaktionsgemisch dreimal mit jeweils 75 ml Wasser extrahiert. Die das Produkt enthaltenden wässrigen Extrakte werden vereinigt und einmal mit 45 ml Methylenchlorid reextrahiert. Durch Gefriertrocknung erhält man 14,2 g des Rohprodukts. Man löst dieses in 200 ml 10%igem Methanol (in Äther) und filtriert das Salz von der Lösung ab. Das dabei erhaltene Rohprodukt wird auf eine 725 g Kieselgel-60 enthaltende Säule aufgegeben und mit einem Chloroform/Methanol/Wasser-Gemisch (80:20:2) eluiert. Jene Fraktionen, welche aufgrund der Dünnschichtchromatographie das Produkt enthalten, werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in Wasser gelöst. Durch Gefriertrocknung erhält man 6,2 g BOC-Thr-Ser-OMe. A mixture of 3.50 g Ser-OMe • HCl and 7.47 g BOC-ThrHSE in 70 ml methylene chloride is stirred in a 250 ml round bottom flask. The solution is then adjusted to a pH of 7 with triethylamine and the batch is stirred for 90 minutes. The reaction mixture is then extracted three times with 75 ml of water each time. The aqueous extracts containing the product are combined and re-extracted once with 45 ml of methylene chloride. Freeze drying gives 14.2 g of the crude product. It is dissolved in 200 ml of 10% methanol (in ether) and the salt is filtered off from the solution. The crude product obtained is applied to a column containing 725 g of silica gel 60 and eluted with a chloroform / methanol / water mixture (80: 20: 2). Those fractions which contain the product on the basis of thin layer chromatography are combined and evaporated to dryness. The residue is dissolved in water. Freeze drying gives 6.2 g of BOC-Thr-Ser-OMe.

Stufe b Stage b

5,9 g BOC-Thr-Ser-OMe werden in 55 ml Trifluoressig-säure bei 0 °C suspendiert. Durch lOminutiges Rühren bei Raumtemperatur geht der Feststoff in Lösung. Man rührt die Lösung weitere 3 Min., kühlt sie dann im Eisbad ab und bringt das Produkt durch Zugabe von jeweils 230 ml Äther und kaltem Petroläther zur Ausfällung. Der Feststoff wird abfiltriert, mit einem Gemisch aus gleichen Teilen Äther und Petroläther ausgewaschen und über Nacht im Vakuum getrocknet. Man erhält 6,2 g Thr-Ser-OMe - TFA. 5.9 g of BOC-Thr-Ser-OMe are suspended in 55 ml of trifluoroacetic acid at 0 ° C. The solid goes into solution by stirring for 10 minutes at room temperature. The solution is stirred for a further 3 minutes, then cooled in an ice bath and the product is precipitated by adding 230 ml of ether and cold petroleum ether. The solid is filtered off, washed out with a mixture of equal parts of ether and petroleum ether and dried in vacuo overnight. 6.2 g of Thr-Ser-OMe - TFA are obtained.

Herstellung von Phe-Thr-Ser-OMe • TFA Stufe a Production of Phe-Thr-Ser-OMe • TFA stage a

6,2 g Thr-Ser-OMe TFA und 6,7 g BOC-Phe-HSE werden in 100 ml Methylenchlorid suspendiert. Nach Einstellung des pH-Wertes auf 7 mit Triäthylamin rührt man das Reaktionsgemisch 2 Std. bei 25 °C und extrahiert es anschliessend dreimal mit jeweils 100 ml Wasser. Das ausgefallene Rohprodukt wird abfiltriert. Die vereinigten wässrigen Lösungen werden mit 100 ml Methylendichlorid reextrahiert und die Extrakte vereinigt, über Magnesiumsulfat getrocknet und filtriert. 6.2 g of Thr-Ser-OMe TFA and 6.7 g of BOC-Phe-HSE are suspended in 100 ml of methylene chloride. After adjusting the pH to 7 with triethylamine, the reaction mixture is stirred for 2 hours at 25 ° C. and then extracted three times with 100 ml of water each time. The precipitated crude product is filtered off. The combined aqueous solutions are re-extracted with 100 ml of methylene dichloride and the extracts are combined, dried over magnesium sulfate and filtered.

Beim Eindampfen des Filtrats zur Trockene erhält man weiteres Rohprodukt. Das vereinigte Rohprodukt (7,9 g) wird in einer möglichst geringen Menge eines Chloroform/Isopropa-nol-Gemisches (95:5) gelöst und die Lösung auf eine Säule mit 1200 g Kieselgel 60 aufgegeben. Man eluiert mit Chloro-form/Isopropanol (95:5), bis kein weiteres Produkt mehr abläuft. Anschliessend eluiert man mit einem Chloroform/Me-thanol/Wasser-Gemisch (90:10:1), wobei das (durch Dünnschichtchromatographie identifizierte) Produkt ausläuft. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man erhält 6,73 g BOC-Phe-Thr-Ser-OMe. When the filtrate is evaporated to dryness, further crude product is obtained. The combined crude product (7.9 g) is dissolved in the smallest possible amount of a chloroform / isopropanol mixture (95: 5) and the solution is added to a column with 1200 g of silica gel 60. It is eluted with chloroform / isopropanol (95: 5) until no further product runs off. The mixture is then eluted with a chloroform / methanol / water mixture (90: 10: 1), the product (identified by thin layer chromatography) running out. The fractions containing the product are combined and evaporated to dryness. 6.73 g of BOC-Phe-Thr-Ser-OMe are obtained.

Stufe b Stage b

6,63 g BOC-Phe-Thr-Ser-OMe werden in 67 ml Trifluor-essigsäure suspendiert. Die Suspension wird bis zur vollständigen Lösung bei 25 °C gerührt. Anschliessend wird die Lösung auf 0 °C abgekühlt und das Produkt durch Zugabe von 300 ml Äther und 600 ml Petroläther zur Ausfällung gebracht. Das Produkt wird abfiltriert, mit Äther/Petroläther ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 6,4 g im wesentlichen reines Phe-Thr-Ser-OMe TFA. 6.63 g of BOC-Phe-Thr-Ser-OMe are suspended in 67 ml of trifluoroacetic acid. The suspension is stirred at 25 ° C. until completely dissolved. The solution is then cooled to 0 ° C. and the product is precipitated by adding 300 ml of ether and 600 ml of petroleum ether. The product is filtered off, washed with ether / petroleum ether and dried in vacuo. 6.4 g of essentially pure Phe-Thr-Ser-OMe TFA are obtained.

Herstellung von Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • TFA Production of Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • TFA

Stufe a Stage a

6,4 g Phe-Thr-Ser-OMe • TFA und 4,6 g BOC-Thr-HSE werden in 100 ml Methylendichlorid suspendiert. Nach Einstellung des pH-Wertes auf 7 mit Triäthylamin rührt man das Reaktionsgemisch 90 Min. bei 25 °C. Anschliessend wird das Rohprodukt abfiltriert, teilweise in 50 ml Methanol gelöst und durch Zugabe von 450 ml Äther zur Ausfällung gebracht. Man filtriert das teilweise gereinigte Produkt ab und wiederholt den Umfällprozess viermal. Danach erhält man 6,04 g im wesentlichen reines BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. 6.4 g of Phe-Thr-Ser-OMe • TFA and 4.6 g of BOC-Thr-HSE are suspended in 100 ml of methylene dichloride. After adjusting the pH to 7 with triethylamine, the reaction mixture is stirred at 25 ° C. for 90 minutes. The crude product is then filtered off, partially dissolved in 50 ml of methanol and precipitated by adding 450 ml of ether. The partially purified product is filtered off and the reprecipitation process is repeated four times. 6.04 g of essentially pure BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe are then obtained.

Stufe b Stage b

5,93 g BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe werden in 45 ml Äthylacetat suspendiert. Man kühlt die Suspension im Eisbad auf 0 °C ab und leitet 9 Min. einen kräftigen Strom von wasserfreiem Chlorwasserstoffgas und anschliessend 4 Min. einen Stickstoffstrom ein. Zur vollständigen Ausfällung des Produkts werden dann 170 ml Äther und 285 ml Petroläther zugegeben. Das Produkt wird abfiltriert, mit einem Äther/Petroläther-Gemisch ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 5,66 g Thr-Phe-Thr-Ser-OMe HCl. 5.93 g of BOC-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe are suspended in 45 ml of ethyl acetate. The suspension is cooled to 0 ° C. in an ice bath and a strong stream of anhydrous hydrogen chloride gas is passed in for 9 minutes and then a stream of nitrogen for 4 minutes. 170 ml of ether and 285 ml of petroleum ether are then added to completely precipitate the product. The product is filtered off, washed out with an ether / petroleum ether mixture and dried in vacuo. 5.66 g of Thr-Phe-Thr-Ser-OMe HCl are obtained.

Herstellung von (e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • 2TFA Production of (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • 2TFA

Stufe a Stage a

Ein Gemisch von 5,63 g Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • HCl, 4,27 g BOC-(e-INOC)-Lys, 2,57 g N-Hydroxybenzotriazol-monohydrat, 20 ml DMF und 30 ml Methylendichlorid wird durchgerührt. Dann fügt man unter Rühren eine. Lösung von 2,42 g Dicyclohexylcarbodiimid in 4,8 ml Methylendichlorid hinzu. Anschliessend werden innerhalb von 90 Min. unter kräftigem Rühren 3,7 ml Triäthylamin in Form von drei Teilmengen zugesetzt. Man filtriert den ausgefällten Dicyclohexyl-harnstoff vom Reaktionsgemisch ab und wäscht mit Chloroform nach. Die vereinigten Filtrate und Waschwässer werden bis auf 20 ml eingeengt. Man bringt das Produkt durch Zugabe von Petroläther zur Abscheidung. Das abgeschiedene öl wird fünfmal durch Dekantieren mit Petroläther gewaschen und dann in etwa 100 ml Chloroform suspendiert. Man wäscht das organische Gemisch durch Dekantieren mit drei 100-ml-Por-tionen Wasser. Die organische Phase wird filtriert und das feste Produkt mit Äther gewaschen und im Vakuum getrocknet. A mixture of 5.63 g Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • HCl, 4.27 g BOC- (e-INOC) -Lys, 2.57 g N-hydroxybenzotriazole monohydrate, 20 ml DMF and 30 ml methylene dichloride is carried out. Then add one while stirring. Solution of 2.42 g of dicyclohexylcarbodiimide in 4.8 ml of methylene dichloride. Then 3.7 ml of triethylamine in the form of three portions are added within 90 minutes with vigorous stirring. The precipitated dicyclohexylurea is filtered off from the reaction mixture and washed with chloroform. The combined filtrates and washings are concentrated to 20 ml. The product is separated by adding petroleum ether. The separated oil is washed five times by decanting with petroleum ether and then suspended in about 100 ml of chloroform. The organic mixture is washed by decanting with three 100 ml portions of water. The organic phase is filtered and the solid product washed with ether and dried in vacuo.

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

626 328 626 328

18 18th

Dabei erhält man 8,62 g Rohprodukt. Dieses wird in 150 ml eines Chloroform/Isopropanol/Wasser-Gemisches (85:19:1,2) gelöst und die Lösung auf eine mit 1,3 kg Kiesel-gel-60 gefüllte Säule aufgegeben. Man eluiert das Produkt mit demselben Lösungsmittelgemisch. Die das Produkt (aufgrund der Dünnschichtchromatographie identifiziert) enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum eingedampft. Dabei erhält man 6,72 g im wesentlichen reines BOC-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. This gives 8.62 g of crude product. This is dissolved in 150 ml of a chloroform / isopropanol / water mixture (85: 19: 1.2) and the solution is applied to a column filled with 1.3 kg of silica gel 60. The product is eluted with the same solvent mixture. The fractions containing the product (identified on the basis of thin layer chromatography) are combined and evaporated in vacuo. This gives 6.72 g of essentially pure BOC- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.

Stufe b Stage b

6,65 g BOC-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe werden in 65 ml Trifluoressigsäure gelöst. Man rührt die Lösung 3 Min. bei 25 °C, kühlt sie dann im Eisbad und bringt das Produkt durch Zugabe von 250 ml kaltem Äther und 400 ml kaltem Petroläther zur Ausfällung. Danach filtriert man das Gemisch und wäscht den Filterrückstand mit einem Äther/Petrol-äther-Gemisch aus. Nach Trocknung des Feststoffs im Vakuum erhält man 8,1 g im wesentlichen reines (e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • 2TFA. 6.65 g of BOC- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe are dissolved in 65 ml of trifluoroacetic acid. The solution is stirred for 3 minutes at 25 ° C., then cooled in an ice bath and the product is precipitated by adding 250 ml of cold ether and 400 ml of cold petroleum ether. The mixture is then filtered and the filter residue is washed out with an ether / petroleum ether mixture. After drying the solid in vacuo, 8.1 g of essentially pure (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • 2TFA are obtained.

Herstellung von BOC-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid Preparation of BOC-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser hydrazide

Stufe a Stage a

8,1 g (£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • 2TFA werden in einer möglichst geringen DMF-Menge gelöst. Man versetzt die Lösung unter Rühren mit 2,98 g BOC-Trp-HSE, stellt sie mit Triäthylamin auf einen pH-Wert von 7 ein und rührt das Reaktionsgemisch 3V2 Std. bei 25 °C. Dann stellt man das Reaktionsgemisch durch Zugabe von weiterem Triäthylamin auf einen pH-Wert von 7 ein und rührt es 18 Std. bei 25 °C. Nach neuerlicher pH-Einstellung auf 7 mit Triäthylamin rührt man den Ansatz weitere 3 Std. bei 25 °C, wonach die Umsetzung im wesentlichen abgeschlossen ist. Danach bringt man das Produkt durch Zugabe von Äther zur Ausfällung und dekantiert das Lösungsmittel ab. Man regt die Verfestigung des ölar-tigen Produkts durch Anreiben mit Äther an. Dann wird das Produkt abfiltriert und im Vakuum getrocknet; es werden 8,31 g Rohprodukt isoliert. Man löst das Rohprodukt in einer möglichst geringen Menge eines Chloroform/Methanol/Was-ser-Gemisches (85:15:1,5), gibt die Lösung auf eine mit 1 kg Kieselgel-60 beschickte Säule auf und eluiert mit demselben Lösungsmittelgemisch. Die das Produkt (aufgrund der dünn-schichtchromatographischen Identifizierung) enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Dabei erhält man 5 g im wesentlichen reines BOC-Trp(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe. 8.1 g (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe • 2TFA are dissolved in the smallest possible amount of DMF. 2.98 g of BOC-Trp-HSE are added to the solution while stirring, it is adjusted to a pH of 7 with triethylamine and the reaction mixture is stirred at 25 ° C. for 3 hours. The reaction mixture is then adjusted to a pH of 7 by adding further triethylamine and the mixture is stirred at 25 ° C. for 18 hours. After renewed pH adjustment to 7 with triethylamine, the mixture is stirred for a further 3 hours at 25 ° C., after which the reaction is essentially complete. The product is then precipitated by adding ether and the solvent is decanted off. The solidification of the oil-like product is stimulated by rubbing with ether. Then the product is filtered off and dried in vacuo; 8.31 g of crude product are isolated. The crude product is dissolved in the smallest possible amount of a chloroform / methanol / water mixture (85: 15: 1.5), the solution is added to a column loaded with 1 kg of silica gel 60 and eluted with the same solvent mixture. The fractions containing the product (based on thin-layer chromatographic identification) are combined and evaporated to dryness in vacuo. This gives 5 g of essentially pure BOC-Trp (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe.

Stufe b Stage b

2 g BOC-Trp-(f-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe werden in 3 ml eines Methanol/Hydrazin-Gemisches (2:1) bei 0 °C suspendiert. Die Suspension wird so lange gerührt, bis sie homogen ist. Dann tropft man bis zur vollständigen Lösung wasserfreies Hydrazin zu. Die Reaktionslösung wird anschliessend weitere 15 Min. bei 25 °C gerührt und danach im Vakuum zur Trockene eingedampft. Der feste Rückstand wird im Vakuum zweimal mit jeweils 5 ml Methanol gespült. Man suspendiert das Produkt in Methanol, rührt die Suspension und zentrifu-giert das Produkt ab. Danach wäscht man das Produkt mit 30 ml Methanol, isoliert es durch fünfmaliges Zentrifugieren und trocknet es im Vakuum. Dabei erhält man 1,6 g im wesentlichen reines BOC-Trp(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydra-zid. 2 g of BOC-Trp- (f-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-OMe are suspended in 3 ml of a methanol / hydrazine mixture (2: 1) at 0 ° C. The suspension is stirred until it is homogeneous. Then anhydrous hydrazine is added dropwise until the solution is complete. The reaction solution is then stirred for a further 15 minutes at 25 ° C. and then evaporated to dryness in vacuo. The solid residue is rinsed twice with 5 ml of methanol in vacuo. The product is suspended in methanol, the suspension is stirred and the product is centrifuged off. The product is then washed with 30 ml of methanol, isolated by centrifugation five times and dried in vacuo. This gives 1.6 g of essentially pure BOC-Trp (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide.

Herstellung von Production of

BOC-D-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid BOC-D-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser hydrazide

Die Verbindung wird wie oben beschrieben, Stufen a und b, wobei man BOC-D-Trp-HSE anstelle von BOC-Trp-HSE einsetzt, hergestellt. The compound is prepared as described above, stages a and b, using BOC-D-Trp-HSE instead of BOC-Trp-HSE.

Herstellung von Phe-Phe-OMe-hydrochlorid Manufacture of Phe-Phe-OMe hydrochloride

Stufe a Stage a

Eine Suspension von 10,78 g Phe-OMe-hydrochlorid in 5 500 ml Methylendichlorid wird mit 18 g BOC-PheHSE versetzt. Man stellt den pH-Wert mit Triäthylamin auf 9 ein, wobei eine klare Lösung entsteht. Man lässt die Lösung über Nacht stehen, wonach man die ausgefällten Feststoffe abfiltriert und mit Methylendichlorid auswäscht. Das Filtrat und io die Waschwässer, welche das Produkt enthalten, werden vereinigt und mit gesättigter Natriumchloridlösung (2 x 500 ml), 10%iger Natriumbicarbonatlösung (2 x 500 ml) und 0,InSchwefelsäure (2 x 250 ml) gewaschen. Die Waschwässer werden mit Methylendichlorid (200 ml) rückgewaschen. Die ver-15 einigten Methylendichloridlösungen werden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Der beim Eindampfen des Filtrats zur Trockene erhaltene Rückstand wird aus Me-thylendichlorid/Hexan umkristallisiert. Dabei erhält man 9 g des geschützten Dipeptids BOC-Phe-Phe-OMe vom Fp. 122,0 20 bis 122,5 °C. A suspension of 10.78 g of Phe-OMe hydrochloride in 5,500 ml of methylene dichloride is mixed with 18 g of BOC-PheHSE. The pH is adjusted to 9 with triethylamine, a clear solution being formed. The solution is left to stand overnight, after which the precipitated solids are filtered off and washed with methylene dichloride. The filtrate and the washing water containing the product are combined and washed with saturated sodium chloride solution (2 x 500 ml), 10% sodium bicarbonate solution (2 x 500 ml) and 0, in sulfuric acid (2 x 250 ml). The washings are washed back with methylene dichloride (200 ml). The combined methylene dichloride solutions are dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The residue obtained by evaporating the filtrate to dryness is recrystallized from methylene dichloride / hexane. This gives 9 g of the protected dipeptide BOC-Phe-Phe-OMe, mp. 122.0 20 to 122.5 ° C.

BOC-Phe-Phe-OMe: BOC-Phe-Phe-OMe:

berechnet: C 67,57 H 7,09 N 6,57 gefunden: C 67,67 H 7,37 N 6,31 calculated: C 67.57 H 7.09 N 6.57 found: C 67.67 H 7.37 N 6.31

Aus den Filtraten wird eine zweite Kristallausbeute (11g) 25 gewonnen. A second crystal yield (11 g) 25 is obtained from the filtrates.

Stufe b Stage b

3 g des geschützten Dipeptids werden in 100 ml Äthylacetat suspendiert. Man kühlt die Suspension im Eisbad und leitet 15 Min. wasserfreies Chlorwasserstoffgas ein. Der Chlorwas-30 serstoff wird danach mit Stickstoff ausgespült. 3 g of the protected dipeptide are suspended in 100 ml of ethyl acetate. The suspension is cooled in an ice bath and anhydrous hydrogen chloride gas is passed in for 15 minutes. The hydrochloric acid is then flushed out with nitrogen.

Anschliessend wird der Feststoff abfiltriert, mit Äthylacetat ausgewaschen und im Vakuum bei Raumtemperatur getrocknet. Man erhält 2,1 g Phe-Phe-OMe-hydrochlorid. Phe-Phe-OMe • HCl: The solid is then filtered off, washed with ethyl acetate and dried in vacuo at room temperature. 2.1 g of Phe-Phe-OMe hydrochloride are obtained. Phe-Phe-OMe • HCl:

35 berechnet: C 63,06 H 6,41 N 7,74 gefunden: C 63,00 H 6,52 N 7,66 35 calculated: C 63.06 H 6.41 N 7.74 found: C 63.00 H 6.52 N 7.66

Herstellung von Asn-Phe-Phe-OMe-hydrochlorid Production of Asn-Phe-Phe-OMe hydrochloride

40 Stufe a 40 level a

12,3 g Phe-Phe-OMe-hydrochlorid werden in 102 ml frisch entgastem DMF gelöst. Man versetzt die Lösung mit 12,86 g (7 % Überschuss) BOC-AsnNPE. Dann stellt man die Reaktionslösung durch Zugabe von 4,73 ml TEA auf einen 45 pH-Wert von 7,2 ein und rührt sie über Nacht. Danach dampft man die Reaktionslösung im Vakuum zur Trockene ein und nimmt den Rückstand in Chloroform auf. Die Chloroformlösung wird mit Wasser, gesättigter Natriumbicarbonatlösung, 0,lm-Schwefelsäure und nochmals Wasser gewaschen. Dann so trocknet man die Lösung über wasserfreiem Magnesiumsulfat und dampft sie zur Trockene ein. Das zurückbleibende feste Rohprodukt wird in einer möglichst geringen Menge von heis-sem Äthanol gelöst. Beim Abkühlen kristallisiert das Produkt aus der Lösung aus. Die Kristalle werden abgenutscht, mit kal-55 tem Äthanol ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Dabei erhält man 9,18 g BOC-Asn-Phe-Phe-OMe. 12.3 g of Phe-Phe-OMe hydrochloride are dissolved in 102 ml of freshly degassed DMF. The solution is mixed with 12.86 g (7% excess) BOC-AsnNPE. The reaction solution is then adjusted to a pH of 7.2 by adding 4.73 ml of TEA and stirred overnight. The reaction solution is then evaporated to dryness in vacuo and the residue is taken up in chloroform. The chloroform solution is washed with water, saturated sodium bicarbonate solution, 0.1 µm sulfuric acid and again water. Then the solution is dried over anhydrous magnesium sulfate and evaporated to dryness. The remaining solid crude product is dissolved in the smallest possible amount of hot ethanol. Upon cooling, the product crystallizes out of the solution. The crystals are filtered off, washed with cold ethanol and dried in vacuo. This gives 9.18 g of BOC-Asn-Phe-Phe-OMe.

Stufe b Stage b

8,5 g BOC-Asn-Phe-Phe-OMe werden in 110 ml wasser-60 freiem Äthylacetat aufgeschlämmt. Man kühlt die Aufschläm-mung im Eisbad auf 0 °C ab und leitet 15 Min. einen kräftigen Strom von wasserfreiem Chlorwasserstoffgas ein. Dabei entsteht eine klare Lösung, welche man mit Hilfe eines Stickstoffstroms spült. Nach Zugabe von 100 ml Äther scheidet sich das 65 feste Produkt aus der Lösung ab. Der Feststoff wird abgenutscht, mit Äther (3 x 100 ml) ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 7,27 g Asn-Phe-Phe-OMe-hydrochlo-rid. 8.5 g of BOC-Asn-Phe-Phe-OMe are slurried in 110 ml of water-60 free ethyl acetate. The slurry is cooled to 0 ° C in an ice bath and a strong stream of anhydrous hydrogen chloride gas is introduced for 15 minutes. This creates a clear solution, which is flushed using a nitrogen stream. After adding 100 ml of ether, the 65 solid product separates from the solution. The solid is filtered off, washed with ether (3 x 100 ml) and dried in vacuo. 7.27 g of Asn-Phe-Phe-OMe hydrochloride are obtained.

19 19th

626 328 626 328

Herstellung von (£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe-dihydrochlorid Production of (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe-dihydrochloride

Stufe a Stage a

1,9 g a-BOC-(£-INOC)-Lys werden in 50 ml frisch entgastem DMF gelöst. Man versetzt die Lösung mit 0,675 g 1-Hy-droxybenzotriazol, rührt sie und kühlt sie im Eisbad. Die abgekühlte Lösung wird mit 1,13 g DCCI versetzt. Man entfernt das Eisbad und rührt das Reaktionsgemisch weitere 30 Min. Anschliessend fügt man 2,38 g Asn-Phe-Phe-OMe-hydrochlo-rid hinzu. Danach stellt man das Reaktionsgemisch durch Zugabe von 1,92 ml TEA auf einen pH-Wert von 7,6 ein und rührt es über Nacht bei Raumtemperatur. Anschliessend werden jegliche Feststoffe vom Reaktionsgemisch abfiltriert. Das Filtrat wird im Vakuum zur Trockene eingedampft. Man verrührt den Rückstand mit 800 ml Chloroform, nutscht die Masse ab, wäscht den gelatinösen Feststoff mit Chloroform aus und trocknet ihn im Vakuum. Dabei erhält man 1,8 g a-BOC-(fi-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe. Das Filtrat und die Waschwässer werden im Vakuum zur Trockene eingedampft. Man suspendiert den Rückstand neuerlich in Chloroform, nutscht die Suspension ab, wäscht den Feststoff mit Chloroform aus und trocknet ihn im Vakuum. Dabei erhält man weitere 1,82 g des Produkts. 1.9 g of a-BOC- (£ -INOC) -Lys are dissolved in 50 ml of freshly degassed DMF. The solution is mixed with 0.675 g of 1-hydroxybenzotriazole, stirred and cooled in an ice bath. The cooled solution is mixed with 1.13 g DCCI. The ice bath is removed and the reaction mixture is stirred for a further 30 min. Then 2.38 g of Asn-Phe-Phe-OMe hydrochloride are added. The reaction mixture is then adjusted to a pH of 7.6 by adding 1.92 ml of TEA and stirred overnight at room temperature. Any solids are then filtered off from the reaction mixture. The filtrate is evaporated to dryness in vacuo. The residue is stirred with 800 ml of chloroform, the mass is filtered off, the gelatinous solid is washed out with chloroform and dried in vacuo. This gives 1.8 g of a-BOC- (fi-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe. The filtrate and the wash water are evaporated to dryness in vacuo. The residue is suspended again in chloroform, the suspension is filtered off, the solid is washed out with chloroform and dried in vacuo. This gives a further 1.82 g of the product.

Stufe b Stage b

1 g a-BOC-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe wird in 13 ml wasserfreiem Äthylacetat aufgeschlämmt. In die Suspension wird unter Rühren und Eisbadkühlung 15 Min. ein kräftiger Strom von wasserfreiem Chlorwasserstoffgas eingeleitet. Anschliessend spült man die Suspension 15 Min. mit Stickstoff. Das feste Produkt wird abgenutscht, mit Äthylacetat ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Die Produktausbeute beträgt 1,04 g. 1 g of a-BOC- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe is slurried in 13 ml of anhydrous ethyl acetate. A vigorous stream of anhydrous hydrogen chloride gas is introduced into the suspension with stirring and ice bath cooling for 15 minutes. The suspension is then flushed with nitrogen for 15 minutes. The solid product is filtered off with suction, washed out with ethyl acetate and dried in vacuo. The product yield is 1.04 g.

Herstellung von w -Methyl-a-aminosuberat • HCl Eine Suspension von 22,8 g a-Aminokorksäure in 450 ml Methanol wird mit 72 ml gesättigter methanolischer Salzsäure versetzt. Man rührt den Ansatz 30 Min. bei 25 °C, wobei eine vollständige Lösung erfolgt. Danach dampft man die Reaktionslösung zur Trockene ein und spült den Rückstand durch dreimaliges Verdampfen von Methanol. Das Produkt wird aus Methanol durch Zugabe von Äther zur Kristallisation gebracht, abfiltriert und bei 25 °C im Vakuum getrocknet. Das Rohprodukt (18 g) wird aus Methanol/Äther umkristallisiert; dabei erhält man 13 g im wesentlichen reines «-Methyl-a-aminosuberat • HCl. Preparation of w-methyl-a-amino suberate • HCl 72 ml of saturated methanolic hydrochloric acid are added to a suspension of 22.8 g of a-amino acid in 450 ml of methanol. The mixture is stirred for 30 minutes at 25 ° C., a complete solution taking place. The reaction solution is then evaporated to dryness and the residue is rinsed by evaporating methanol three times. The product is made to crystallize from methanol by adding ether, filtered off and dried at 25 ° C. in vacuo. The crude product (18 g) is recrystallized from methanol / ether; 13 g of essentially pure methyl a-amino suberate • HCl are obtained.

Herstellung von a-tert.-Butyl-fo-methyl-a-aminosuberat 13 gej-Methyl-a-aminosuberat-HCl werden in einem Gemisch von 811 ml tert.-Butylacetat und 8,65 ml Perchlorsäure gelöst. Man lässt die Lösung 4 Tage bei 25 °C stehen und extrahiert dann zweimal mit jeweils 600 ml 0,5n-HCl. Die vereinigten wässrigen Lösungen werden mit Natriumbicarbonat auf einen pH-Wert von 7 eingestellt und dreimal mit jeweils 700 ml Äther extrahiert. Man trocknet die vereinigten Ätherextrakte über wasserfreiem Natriumsulfat, filtriert und dampft das Filtrat ein. Dabei erhält man 5,5 g «-tert.-Butyl-w-me-thyl-a-aminosuberat in Form eines Öls. Preparation of a-tert-butyl-fo-methyl-a-amino suberate 13 ge-methyl-a-aminosuberate-HCl are dissolved in a mixture of 811 ml of tert-butyl acetate and 8.65 ml of perchloric acid. The solution is left to stand at 25 ° C. for 4 days and then extracted twice with 600 ml of 0.5N HCl in each case. The combined aqueous solutions are adjusted to a pH of 7 with sodium bicarbonate and extracted three times with 700 ml of ether each time. The combined ether extracts are dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and the filtrate is evaporated. 5.5 g of tert-butyl-w-methyl-a-aminosuberate are obtained in the form of an oil.

Herstellung von a-tert.-Butyl-w-methyl-N-BOC-a-aminosuberat 5,5 g a-tert.-Butyl-co-methyl-a-aminosuberat werden in 80 ml DMF gelöst. Man versetzt die Lösung mit 6 g tert.-Butyl-trichlorphenylcarbonat und stellt sie mit Triäthylamin auf einen pH-Wert von 8,5 ein. Durch Zugabe von weiterem Triäthylamin während 1 Std. wird der pH-Wert von 8,5 aufrechterhalten. Das Reaktionsgemisch wird dann über Nacht bei 25 °C gerührt und anschliessend im Vakuum zu einem schweren Öl eingedampft. Man löst das öl in 600 ml Äther, extrahiert die Lösung dreimal mit jeweils 600 ml gesättigter Natriumbicarbonatlösung, dreimal mit jeweils 600 ml 0, InSchwefelsäure und zuletzt einmal mit 600 ml gesättigter Natriumchloridlösung. Dann dampft man die Ätherlösung zur Trockene ein. Man erhält 8,6 ga-tert.-Butyl-w-methyl-N-BOC -a-aminosuberat in Form eines schweren Öls. Preparation of a-tert-butyl-w-methyl-N-BOC-a-amino suberate 5.5 g of a-tert-butyl-co-methyl-a-amino suberate are dissolved in 80 ml of DMF. 6 g of tert-butyl-trichlorophenyl carbonate are added to the solution, and the pH is adjusted to 8.5 with triethylamine. The pH of 8.5 is maintained by adding further triethylamine for 1 hour. The reaction mixture is then stirred at 25 ° C. overnight and then evaporated in vacuo to a heavy oil. The oil is dissolved in 600 ml of ether and the solution is extracted three times with 600 ml of saturated sodium bicarbonate solution, three times with 600 ml of 0, in sulfuric acid and finally once with 600 ml of saturated sodium chloride solution. Then you evaporate the ether solution to dryness. 8.6 ga-tert-butyl-w-methyl-N-BOC-a-aminosuberate is obtained in the form of a heavy oil.

Herstellung von a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat 5 g a-tert.-Butyl-oj-methyl-N-BOC-a-aminosuberat werden in einem Gemisch von 208 ml Dioxan und 133 ml ln-Na-triumhydroxid gelöst. Man rührt den Ansatz 75 Min. bei 25 °C und dampft anschliessend das organische Lösungsmittel im Vakuum ab. Nach Zugabe von 150 ml Wasser stellt man die Lösung mit verdünnter Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 4,6 ein und extrahiert dreimal mit jeweils 150 ml Äther. Die vereinigten Ätherextrakte werden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum zu einem schweren Sirup eingedampft. Das Rohprodukt (4,5 g) wird in einer möglichst geringen Menge Methylendichlorid gelöst. Man gibt die Lösung auf eine mit 400 g Kieselgel-60 beschickte Säule auf und eluiert die Nebenprodukte mit Methylendichlorid. Wenn im Eluat aufgrund der Dünnschichtchromatographie keine weiteren Nebenprodukte festgestellt werden, verwendet man zur Elution des Produkts ein Methylendichlorid/Isopropanol-Ge-misch (98:2). Die das Produkt (aufgrund der dünnschicht-chromatographischen Analyse) enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Durch Umkristallisation aus Hexan erhält man 1,5 g a-tert.-Butylester-BOC-a-aminosuberat vom Fp. 72 bis 73 °C. Preparation of a-tert-butyl-BOC-a-amino suberate 5 g of a-tert-butyl-oj-methyl-N-BOC-a-aminosuberate are mixed in a mixture of 208 ml dioxane and 133 ml ln-sodium hydroxide solved. The mixture is stirred for 75 minutes at 25 ° C. and the organic solvent is then evaporated off in vacuo. After adding 150 ml of water, the solution is adjusted to a pH of 4.6 with dilute sulfuric acid and extracted three times with 150 ml of ether each time. The combined ether extracts are dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated in vacuo to a heavy syrup. The crude product (4.5 g) is dissolved in the smallest possible amount of methylene dichloride. The solution is placed on a column charged with 400 g of silica gel 60 and the by-products are eluted with methylene dichloride. If no further by-products are found in the eluate due to thin-layer chromatography, a methylene dichloride / isopropanol mixture (98: 2) is used to elute the product. The fractions containing the product (based on thin-layer chromatographic analysis) are combined and evaporated to dryness in vacuo. By recrystallization from hexane, 1.5 g of a-tert-butyl ester-BOC-a-aminosuberate of mp 72 ° to 73 ° C.

Herstellung von a-tert.-Butyl-w-p-nitrophenyl-BOC-a-aminosuberat Ein Gemisch von 1,38 g a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosube-rat, 0,556 g p-Nitrophenol und 0,865 g DCCI in 30 ml Methylendichlorid wird 4 Std. bei 25 °C gerührt. Anschliessend wird der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff vom Reaktionsgemisch abfiltriert und mit Methylendichlorid ausgewaschen. Die das Produkt enthaltenden vereinigten organischen Lösungen werden im Vakuum zu einem schweren Öl eingedampft. Man löst das öl in 20 ml Äther, versetzt die Lösung mit 0,1 ml Essigsäure, rührt sie 2 Std. bei 25 °C, dampft sie zu einem schweren Öl ein und trocknet den Rückstand im Vakuum. Dabei erhält man 1,7 g a-tert.-Butyl-w-p-nitrophenyl-BOC-a-aminosube-rat. Preparation of a-tert-butyl-wp-nitrophenyl-BOC-a-amino suberate A mixture of 1.38 g of a-tert-butyl-BOC-a-amino suberate, 0.556 g of p-nitrophenol and 0.865 g of DCCI in 30 ml of methylene dichloride is stirred at 25 ° C. for 4 hours. The precipitated dicyclohexylurea is then filtered off from the reaction mixture and washed out with methylene dichloride. The combined organic solutions containing the product are evaporated in vacuo to a heavy oil. The oil is dissolved in 20 ml of ether, 0.1 ml of acetic acid is added to the solution, the mixture is stirred at 25 ° C. for 2 hours, evaporated to a heavy oil and the residue is dried in vacuo. This gives 1.7 g of a-tert-butyl-w-p-nitrophenyl-BOC-a-aminosube-rat.

Beispiel 1 Herstellung von a-tert.-Butylester-BOC-a>-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe Eine Lösung von 1 g (£-INOC)-Lys-Asn- Phe-Phe-OMe • 2HC1 in 20 ml DMF wird mit einer Lösung von 0,755 g a-tert.-Butyl-cu-p-nitrophenyl-BOC-a-aminosuberat in 3,5 ml THF bei 25 °C unter Rühren eingetragen. Man stellt die erhaltene Lösung mit Diisopropyläthylamin auf einen pH-Wert von 8 ein und rührt sie 18 Std. bei 25 °C. Anschliessend dampft man das Reaktionsgemisch im Vakuum zu einem schweren öl ein und löst dieses in 50 ml Methylendichlorid. Die Lösung wird mit Wasser und anschliessend mit gesättigter Natriumbicarbonatlösung bis zur Beseitigung des gesamten p-Nitrophe-nols extrahiert. Anschliessend wäscht man die Lösung mit weiterem Wasser und trocknet sie über wasserfreiem Natriumsulfat. Hierauf filtriert man, dampft das Filtrat im Vakuum zur Trockene ein, löst das erhaltene Rohprodukt in einer möglichst geringen Menge eines Chloroform/Methanol/Wasser-Gemisches (80:20:2) und gibt die Lösung auf eine mit 150 g Kieselgel-60 beschickte Säule auf. Das Produkt wird mit dem5 Example 1 Preparation of a-tert-butyl ester-BOC-a> -Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe A solution of 1 g (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe- Phe-OMe • 2HC1 in 20 ml DMF is introduced with a solution of 0.755 g of a-tert-butyl-cu-p-nitrophenyl-BOC-a-aminosuberate in 3.5 ml of THF at 25 ° C. with stirring. The solution obtained is adjusted to a pH of 8 with diisopropylethylamine and stirred at 25 ° C. for 18 hours. The reaction mixture is then evaporated in vacuo to give a heavy oil and this is dissolved in 50 ml of methylene dichloride. The solution is extracted with water and then with saturated sodium bicarbonate solution until all of the p-nitrophenol has been eliminated. The solution is then washed with further water and dried over anhydrous sodium sulfate. Then the mixture is filtered, the filtrate is evaporated to dryness in vacuo, the crude product obtained is dissolved in the smallest possible amount of a chloroform / methanol / water mixture (80: 20: 2) and the solution is poured onto a 150 g silica-60 mixture Pillar on. The product is

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

626 328 626 328

20 20th

selben Lösungsmittelgemisch eluiert. Die das Produkt (aufgrund der dünnschichtchromatographischen Analyse) enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und im Vakuum zur Trok-kene eingedampft. Dabei erhält man 0,885 g cc-tert.-Butylester-BOC-a>-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe. same solvent mixture eluted. The fractions containing the product (based on thin-layer chromatography analysis) are combined and evaporated to dryness in vacuo. This gives 0.885 g of cc-tert-butyl ester-BOC-a> -Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.

Beispiel 2 Herstellung von w-Asu-(e-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA 0,855 g des Produktes von Beispiel 1 werden in 5 ml Tri-fluoressigsäure gelöst. Man rührt die Lösung 90 Min. bei 25 °C und bringt dann das Produkt durch Zugabe von Petroläther zur Ausfällung. Der abzentrifugierte Feststoff wird mit Petroläther (3 x 10 ml) ausgewaschen, nochmals abzentrifugiert und im Vakuum getrocknet. Man erhält 0,725 gcy-Asu-(e-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA. Example 2 Preparation of w-Asu (e-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA 0.855 g of the product from Example 1 are dissolved in 5 ml of trifluoroacetic acid. The solution is stirred for 90 minutes at 25 ° C. and the product is then precipitated by adding petroleum ether. The centrifuged solid is washed out with petroleum ether (3 x 10 ml), centrifuged again and dried in vacuo. 0.725 gcy-Asu (e-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA is obtained.

Beispiel 3 Herstellung von BOC-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azid 0,667 g BOC-Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydra-zid (hergestellt gemäss Beispiel 5) werden bei -25 °C unter Rühren in 6,3 ml DMF gelöst. Man versetzt die Lösung mit 0,585 ml 5,5n-HCl in THF und fügt danach innerhalb von 2 Std. unter Rühren bei -25 °C 75 mg Isoamylnitrit in Form von 7 Teilmengen hinzu. Dadurch erhält man eine Lösung des He-xapeptidazids. Example 3 Preparation of BOC-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azide 0.667 g BOC-Trp- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide (prepared according to Example 5) are dissolved in 6.3 ml DMF at -25 ° C. with stirring. The solution is mixed with 0.585 ml of 5.5N HCl in THF and then 75 mg of isoamyl nitrite are added in the form of 7 portions with stirring at -25 ° C. in the course of 2 hours. This gives a solution of the He-xapeptidazids.

Beispiel 3 a Herstellung von BOC-D-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azid Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 3 hergestellt, wobei man jedoch anstelle von BOC-Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid gemäss Beispiel 5a hergestelltes BOC-D-Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazid einsetzt. Example 3 a Preparation of BOC-D-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azide The desired compound is prepared analogously to Example 3, but instead of BOC-Trp- (e-INOC ) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide uses BOC-D-Trp- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-hydrazide prepared according to Example 5a.

Beispiel 4 Example 4

Herstellung von BOC-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-a>-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe Die gemäss Beispiel 3 hergestellte Lösung des Hexapeptid-azids wird bei —30 °C unter Rühren mit einer Lösung von 0,554 g cy-Asu-(£-INOC)-Lys- Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA (hergestellt gemäss Beispiel 15) in 6 ml versetzt. Man stellt die Lösung mit Diisopropyläthylamin auf einen pH-Wert von 7,8 ein und lässt sie 18 Std. bei -20 °C stehen. Anschliessend dampft man das Reaktionsgemisch im Vakuum zu einem schweren öl ein und reibt dieses mit 30 ml Methanol an. Das feste Produkt wird abzentrifugiert und sechsmal mit jeweils 30 ml warmem Methanol ausgewaschen. Nach Trocknung im Vakuum erhält man 0,855 g des im wesentlichen reinen, geschützten Undekapeptids Preparation of BOC-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-a> -Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe The solution of the hexapeptide prepared according to Example 3 Azide is added at —30 ° C. while stirring with a solution of 0.554 g of cy-Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2TFA (prepared according to Example 15) in 6 ml. The solution is adjusted to a pH of 7.8 with diisopropylethylamine and left to stand at -20 ° C. for 18 hours. The reaction mixture is then evaporated in vacuo to a heavy oil and rubbed with 30 ml of methanol. The solid product is centrifuged off and washed out six times with 30 ml of warm methanol each time. After drying in vacuo, 0.855 g of the essentially pure, protected undecapeptide is obtained

BOC-Trp-(f-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-cy-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe. BOC-Trp- (f-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-cy-Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe.

Beispiel 4a Example 4a

Herstellung von BOC-D-Trp-(f-INOC)-Lys-Thr-Phe- Production of BOC-D-Trp- (f-INOC) -Lys-Thr-Phe-

Thr-Ser-cy-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 17 hergestellt, wobei man anstelle des Hexapeptidazids BOC-Trp-(f-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-azid gemäss Beispiel 16a erzeugtes BOC-D-Trp-(e-INOC)-Lys-Thr-Phe-TTir-Ser-azid einsetzt. Thr-Ser-cy-Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe The desired compound is prepared analogously to Example 17, but instead of the hexapeptide azide BOC-Trp- (f-INOC) -Lys-Thr -Phe-Thr-Ser-azide uses BOC-D-Trp- (e-INOC) -Lys-Thr-Phe-TTir-Ser-azide produced according to Example 16a.

Beispiel 5 Example 5

Herstellung von Cyclo[«-Asu-(t -INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] Production of Cyclo [«- Asu- (t -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser]

Stufe a Stage a

Der gemäss Beispiel 4 hergestellte geschützte Undekapep-tidmethylester (0,85 g) wird bei 0 °C unter Rühren in 1 ml eines Methanol/Hydrazin-Gemisches (2:1) suspendiert. Man versetzt die Suspension bis zur vollständigen Lösung tropfenweise mit wasserfreiem Hydrazin und rührt die Lösung dann 15 Min. bei 25 °C. Anschliessend dampft man die Reaktions-s lösung im Vakuum zur Trockene ein und reibt das feste Produkt mit Methanol an. Danach wird der Feststoff abzentrifugiert, mehrmals mit Methanol ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 0,8 g im wesentlichen reines, geschütztes Undekapeptidhydrazid. The protected undekapeptide methyl ester (0.85 g) prepared according to Example 4 is suspended at 0 ° C. with stirring in 1 ml of a methanol / hydrazine mixture (2: 1). Anhydrous hydrazine is added dropwise to the suspension until the solution is complete, and the solution is then stirred at 25 ° C. for 15 minutes. The reaction solution is then evaporated to dryness in vacuo and the solid product is rubbed with methanol. The solid is then centrifuged off, washed out several times with methanol and dried in vacuo. 0.8 g of essentially pure, protected undecapeptide hydrazide is obtained.

10 10th

Stufe b Stage b

Das gemäss Beispiel 5, Stufe a, hergestellte geschützte Undekapeptidhydrazid (0,8 g) wird bei 0 °C unter Rühren in einem Gemisch von 8 ml Äthylacetat und 0,8 ml Mercaptoätha-15 noi suspendiert. Man leitet in die Suspension 25 Min. bei 0 °C einen kräftigen Strom von wasserfreiem Chlorwasserstoff und anschliessend einen kräftigen Stickstoffstrom ein. Das ausgefallene Produkt wird abfiltriert, mit 75 ml Äthylacetat ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Dabei erhält man 0,85 g 20 im wesentlichen reines Trp- (f -INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-cu - Asu- (f-IN OC)-Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazid • 4HC1. The protected undecapeptide hydrazide (0.8 g) prepared according to Example 5, stage a is suspended at 0 ° C. with stirring in a mixture of 8 ml of ethyl acetate and 0.8 ml of mercaptoetha-15 noi. A vigorous stream of anhydrous hydrogen chloride and then a vigorous stream of nitrogen are introduced into the suspension for 25 minutes at 0 ° C. The precipitated product is filtered off, washed with 75 ml of ethyl acetate and dried in vacuo. This gives 0.85 g of 20 essentially pure Trp- (f -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-cu - Asu (f-IN OC) -Lys-Asn-Phe-Phe-hydrazide. 4HC1.

Stufe c Stage c

25 Das gemäss Beispiel 5, Stufe b, hergestellte Undekapeptidhydrazid (0,425 g) wird unter Rühren bei -25 °C in 3 ml DMF gelöst. Die Lösung wird mit 0,25 ml 5n-HCl in THF versetzt. Dann fügt man innerhalb von 90 Min. bei -25 °C 28 mg Isoamylnitrit in Form von 6 Teilmengen hinzu, wobei eine Lösung 30 des Undekapeptidazids erhalten wird. Diese Lösung wird bei —50 °C in 420 ml DMF eingetragen, wodurch eine Gesamtkonzentration von 1 mg/ml erzielt wird. Man stellt die Lösung mit Diisopropyläthylamin auf einen pH-Wert von 7,6 ein und lässt sie vier Tage bei -20 °C stehen. Anschliessend dampft 35 man die Lösung im Vakuum zur Trockene ein. Der Rückstand wird zusätzlich 18 Std. im Vakuum getrocknet. Man löst das erhaltene öl in einer möglichst geringen Menge Methanol, 25 The undecapeptide hydrazide (0.425 g) prepared according to Example 5, stage b is dissolved in 3 ml of DMF with stirring at -25 ° C. The solution is mixed with 0.25 ml of 5N HCl in THF. Then 28 mg of isoamyl nitrite in the form of 6 portions are added within 90 minutes at -25 ° C., a solution 30 of the undecapeptide azide being obtained. This solution is added to 420 ml DMF at -50 ° C to give a total concentration of 1 mg / ml. The solution is adjusted to a pH of 7.6 with diisopropylethylamine and left to stand at -20 ° C. for four days. The solution is then evaporated to dryness in vacuo. The residue is dried in vacuo for an additional 18 hours. The oil obtained is dissolved in the smallest possible amount of methanol,

bringt das feste Produkt durch Zugabe von Äthylacetat zur Ausfällung und zentrifugiert es ab. Anschliessend wird der 40 Feststoff dreimal mit jeweils 10 ml Äthylacetat ausgewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 0,272 g des im wesentlichen reinen, geschützten cyclischen Undekapeptids Cyclo[co-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(£-INOC)-^ Lys-Thr-Phe-Thr-Ser]. causes the solid product to precipitate by adding ethyl acetate and centrifuges it off. The 40 solid is then washed out three times with 10 ml of ethyl acetate each time and dried in vacuo. 0.272 g of the essentially pure, protected cyclic undecapeptide cyclo [co-Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (£ -INOC) - ^ Lys-Thr-Phe-Thr-Ser is obtained ].

Beispiel 5a Example 5a

Herstellung von Cyclo[co-Asu-(e-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] so Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 5, Stufen a, b und c, hergestellt, wobei man den geschützten Undeka-peptidmethylester Preparation of Cyclo [co-Asu- (e-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] so The desired compound is obtained analogously to Example 5 , Stages a, b and c, prepared using the protected undeka peptide methyl ester

BOC-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-w-Asu-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe 55 von Stufe a durch BOC-D-Trp-(£-INOC)-Lys-Thr-Phr-Thr-Ser-ft>-Asu-(£- BOC-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-w-Asu- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe 55 from stage a by BOC-D-Trp- (£ -INOC) -Lys-Thr-Phr-Thr-Ser-ft> -Asu- (£ -

INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe (hergestellt gemäss Beispiel 17a) ersetzt. f INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-OMe (prepared according to Example 17a). f

; ;

60 Beispiel 6 60 Example 6

Herstellung von Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3'14-somatostatin 0,3 g des gemäss Beispiel 5, Stufe c, hergestellten Produkts werden in 3 ml 50%iger wässriger Essigsäure gelöst. Nach Zu-65 gäbe von 300 mg aktiviertem Zink wird das Gemisch 2 Std. kräftig gerührt. Anschliessend filtriert man des überschüssige Zink ab, gibt das Filtrat auf eine Säule von Sephadex-Gel-25 Superfine auf und eluiert mit 50%iger wässriger Essigsäure. Es Preparation of Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3'14-somatostatin 0.3 g of the product prepared according to Example 5, stage c, is dissolved in 3 ml of 50% aqueous acetic acid. After adding 65 mg of activated zinc, the mixture is stirred vigorously for 2 hours. The excess zinc is then filtered off, the filtrate is applied to a column of Sephadex-Gel-25 Superfine and eluted with 50% aqueous acetic acid. It

21 21st

626 328 626 328

werden 10-ml-Fraktionen aufgefangen. Die das Produkt (aufgrund der dünnschichtchromatographischen Analyse) enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in Wasser gelöst. Durch Gefriertrocknung erhält man 0,157 g im wesentlichen reines Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3'14-somatostatin. Das UV-Spektrum zeigt ein Maximum bei 280 nm. Nach der Säurehydrolyse ergibt die Aminosäurenanalyse folgendes Resultat: Lys2,o4; Asplj03; Thr2!i6; Ser0j998 ; Phe3i03; Trpo,74. 10 ml fractions are collected. The fractions containing the product (based on thin-layer chromatography analysis) are combined and evaporated to dryness. The residue is dissolved in water. Freeze drying gives 0.157 g of essentially pure des (Ala1, Gly2) desamino [Cys3] dicarba3'14 somatostatin. The UV spectrum shows a maximum at 280 nm. After acid hydrolysis, the amino acid analysis gives the following result: Lys2, o4; Asplj03; Thr2! I6; Ser0j998; Phe3i03; Trpo, 74.

Beispiel 6a Herstellung von Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]dicarba3'14-[D-Trp8]-somatostatin Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 6 hergestellt, wobei man das Example 6a Preparation of Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] dicarba3'14- [D-Trp8] -somatostatin The desired compound is prepared analogously to Example 6, but using the

Cyclo[<y-Asn-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(e-INOC)- Cyclo [<y-Asn- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (e-INOC) -

Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] durch Cyclo[w-Asn-(£-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-(£-INOC)- Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] by Cyclo [w-Asn- (£ -INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- (£ -INOC) -

Lys-Thr-Phe-Thr-Ser] Lys-Thr-Phe-Thr-Ser]

(hergestellt gemäss Beispiel 18a) ersetzt. (prepared according to Example 18a) replaced.

Beispiel 7 Herstellung von a'-tert.-Butyl-N(a)-CBZ-N(a ')-BOC-a,a '-diaminosuberat 8 g Cbz-Glu-a-methylester und 8,6 g BOC-Glu-a-tert.-bu-tylester werden in 240 ml Methanol und 80 ml Pyridin gelöst. Man versetzt die Lösung mit 250 mg (0,2 Äquivalenten) Natrium und elektrolysiert sie 55 Min. bei 23 bis 28 °C (4,0 A; 100 V; 2 mm voneinander entfernte Platinelektroden einer Grösse von 2,5 x 4 cm). Die Umsetzung erfolgt unter Rühren in einem Metallbecher; zur Kühlung dient ein Trockeneis/Iso-propanol-Bad von -40 °C. Der durch feuchtes pH-Papier bestimmte pH-Wert des Reaktionsgemisches ändert sich von 6,8 auf 7,2 bis 7,6. Man dampft die Lösung im Vakuum ein, suspendiert den öligen Rückstand in 100 ml Chloroform/Äthyl-acetat (95:5) und filtriert die unlöslichen Natriumsalze der Ausgangsverbindungen ab. Beim Eindampfen des Filtrats erhält man 16,77 g eines dunklen Öls. Example 7 Preparation of a'-tert-butyl-N (a) -CBZ-N (a ') -BOC-a, a' -diaminosuberat 8 g Cbz-Glu-a-methyl ester and 8.6 g BOC-Glu a-tert-butyl ester are dissolved in 240 ml of methanol and 80 ml of pyridine. The solution is mixed with 250 mg (0.2 equivalents) of sodium and electrolyzed for 55 min at 23 to 28 ° C (4.0 A; 100 V; 2 mm apart platinum electrodes with a size of 2.5 x 4 cm) . The reaction takes place with stirring in a metal beaker; a dry ice / iso-propanol bath of -40 ° C is used for cooling. The pH of the reaction mixture, determined by moist pH paper, changes from 6.8 to 7.2 to 7.6. The solution is evaporated in vacuo, the oily residue is suspended in 100 ml of chloroform / ethyl acetate (95: 5) and the insoluble sodium salts of the starting compounds are filtered off. Evaporation of the filtrate gives 16.77 g of a dark oil.

Das Öl, welches ein aus drei Komponenten bestehendes Diaminokorksäure-Derivatgemisch enthält, wird in Chloroform/Äthyl acetat (95:5) auf eine mit 1700 g Kieselgel-60 beschickte Säule aufgegeben und mit demselben Lösungsmittel s isoliert. Nachdem män einen Vorlauf von 1200 ml aufgefangen hat, nimmt man alle 45 Sek. 70-ml-Fraktionen ab. Das Dreikomponenten-Produkt wird mit den Fraktionen 125 bis 290 eluiert. Nach dem Eindampfen erhält man 7,82 g des Produkts. The oil, which contains a three-component diaminocork acid derivative mixture, is added in chloroform / ethyl acetate (95: 5) to a column loaded with 1700 g of silica gel 60 and isolated with the same solvent. After a flow of 1200 ml has been collected, 70 ml fractions are removed every 45 seconds. The three-component product is eluted with fractions 125 to 290. After evaporation, 7.82 g of the product are obtained.

io Der rohe N(a)-CBZ-N(a')-BOC-a,a'-diaminokorksäure-a-methylester-a'-tert.-butylester (7,82 g) wird in 157 ml Di-oxan gelöst. Man versetzt die Lösung während 15 Min. bei Raumtemperatur mit 78,5 ml ln-NaOH. Dann fügt man 4 ml Essigsäure hinzu und dampft die Lösung im Vakuum ein. Der 15 Rückstand wird in Wasser gelöst. Durch Gefriertrocknung erhält man 14,28 g rohen The crude N (a) -CBZ-N (a ') - BOC-a, a'-diaminocorkic acid-a-methyl ester-a'-tert-butyl ester (7.82 g) is dissolved in 157 ml of di-oxane . 78.5 ml of In NaOH are added to the solution over 15 minutes at room temperature. Then add 4 ml of acetic acid and evaporate the solution in vacuo. The residue is dissolved in water. Freeze drying gives 14.28 g of crude

N(a)-CBZ-N(a')-BOC-a,a'-diaminokorksäure- N (a) -CBZ-N (a ') - BOC-a, a'-diaminocorkic acid-

a '-tert.-butylester. a'-tert.-butyl ester.

Das Rohprodukt wird in einer Lösung von 20 ml Methanol, 20 4 ml konzentriertem Ammoniumhydroxid und 70 ml Chloroform suspendiert. Man filtriert die Suspension, dampft das Filtrat ein und löst den Rückstand neuerlich in einer Lösung von 15 ml Methanol, 2 ml konzentriertem NH4OH und 45 ml CHC13. Die dabei erhaltene Lösung wird auf eine mit 1500 g 25 Kieselgel-60 beschickte Säule in CHCl3/CH3OH/NH4OH (80:20:2) aufgegeben und mit demselben Lösungsmittel eluiert. Nachdem man einen Vorlauf von 2100 ml aufgefangen hat, entnimmt man alle 30 Sek. 70-ml-Fraktionen. Das gewünschte Produkt wird mit den Fraktionen 35 bis 82 eluiert. 30 Diese Fraktionen werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Man suspendiert den Rückstand in Wasser, säuert mit Zitronensäure an und extrahiert das Produkt mit Äthylacetat. Der Extrakt wird getrocknet. Nach dem Eindampfen zur Trockene erhält man 2,17 g des gewünschten 35 a'-tert.-Butyl-N-(a)-CBZ-N(a')-BOC-a,a'-diaminosuberats. The crude product is suspended in a solution of 20 ml of methanol, 20 4 ml of concentrated ammonium hydroxide and 70 ml of chloroform. The suspension is filtered, the filtrate is evaporated and the residue is redissolved in a solution of 15 ml of methanol, 2 ml of concentrated NH4OH and 45 ml of CHC13. The solution obtained is applied to a column loaded with 1500 g of 25 silica gel-60 in CHCl3 / CH3OH / NH4OH (80: 20: 2) and eluted with the same solvent. After collecting a flow of 2100 ml, 70 ml fractions are taken every 30 seconds. The desired product is eluted with fractions 35 to 82. 30 These fractions are combined and evaporated to dryness. The residue is suspended in water, acidified with citric acid and the product extracted with ethyl acetate. The extract is dried. After evaporation to dryness, 2.17 g of the desired 35 a'-tert-butyl-N- (a) -CBZ-N (a ') - BOC-a, a'-diaminosuberate are obtained.

Das a'-tert.-Butyl-N(a)-CBZ-N(a')-BOC-a,a'-diamino-suberat wird zur Herstellung von The a'-tert.-butyl-N (a) -CBZ-N (a ') - BOC-a, a'-diamino-suberate is used to produce

:h2-ch7 : h2-ch7

"CH2-?H2 "CH2-? H2

NH2-CH-Ç-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH NH2-CH-Ç-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH

I ' I '

-CH-( -CH- (

nach dem in den Beispielen 1 bis 2 und 4 bis 6 beschriebenen Verfahren sowie zur Herstellung von by the process described in Examples 1 to 2 and 4 to 6 and for the preparation of

ÇH2-CH2- ÇH2-CH2-

•ch2-ch2 • ch2-ch2

NH2-CH-^-Lys-Asn—Phe-Phe-D-Trp—Lys-Thr NH2-CH - ^ - Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr

-Phe-Thr-Ser-nh-ch-cooh nach dem in den Beispielen 1 bis 2 und 4a bis 6a beschriebenen Verfahren verwendet. -Phe-Thr-Ser-nh-ch-cooh used according to the method described in Examples 1 to 2 and 4a to 6a.

Beispiel 8 Example 8

Herstellung von Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]des- Production of Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] des-

carboxy[Cys14]dicarba3'14-[D-Trp8]-somatostatin Die gewünschte Verbindung wird gemäss dem in Tabelle III dargestellten Verfahren hergestellt, wobei man jedoch anstelle der a-Aminokorksäure in Stufe 11 Methyl-7-aminohep-tanoat, hergestellt nach der von C.F. Horn et al., Angew. Chem. 74 (1962), Seite 531; Chemical Abstracts, Band 57, 1141 l(c), beschriebenen Methode, einsetzt und die in den Beispielen 1 bis 2 sowie 4a, 5a und 6a beschriebenen Umwandlungen durchführt. Bei der Kieselgel-Dünnschichtchromato- carboxy [Cys14] dicarba3'14- [D-Trp8] somatostatin The desired compound is prepared according to the process shown in Table III, but instead of the a-amino acid in step 11, methyl 7-aminohep-tanoate, prepared according to the by CF Horn et al., Angew. Chem. 74 (1962), page 531; Chemical Abstracts, Volume 57, 1141 l (c), uses the method described and carries out the conversions described in Examples 1 to 2 and 4a, 5a and 6a. With the silica gel thin layer chromato-

55 graphie unter Verwendung von Äthylacetat/Pyridin/Essigsäu-re/Wasser (10:5:1:3) als Lösungsmittel ergibt die Verbindung einen RrWert von 0,32. 55 graph using ethyl acetate / pyridine / acetic acid / water (10: 5: 1: 3) as solvent, the compound gives an Rr value of 0.32.

Beispiel 9 Example 9

60 Herstellung des Sulfons von Des-(Ala',Gly2)- 60 Production of the sulfone from Des- (Ala ', Gly2) -

desamino[Cys3]-carba3-somatostatin Eine Lösung von 14 mg Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]-carba3-somatostatin und 0,1 mg Ammoniummolybdat in 0,2 ml 60%iger Perchlorsäure wird mit 50 ,«1 30%igem H202 ver-65 setzt. Man reinigt das Produkt, indem man die Lösung durch eine Säule von Sephadex-G-25 laufen lässt, wobei man 50%ige Essigsäure als Elutionsmittel verwendet. Die Elution des Produkts wird dünnschichtchromatographisch unter Ver- desamino [Cys3] -carba3-somatostatin A solution of 14 mg Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] -carba3-somatostatin and 0.1 mg ammonium molybdate in 0.2 ml 60% perchloric acid is mixed with 50, «1 30% H202 ver-65 uses. The product is purified by passing the solution through a column of Sephadex-G-25 using 50% acetic acid as the eluent. The elution of the product is carried out by thin layer chromatography using

626 328 626 328

22 22

wendung von Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasser (10:5:1:3) als Lösungsmittelsystem festgestellt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden zur Trockene eingedampft. Man erhält das Sulfon von Des-(Ala1,Gly2)-desami-no[Cys3]carba3-somatostatin. Use of ethyl acetate / pyridine / acetic acid / water (10: 5: 1: 3) was found as the solvent system. The fractions containing the product are evaporated to dryness. The sulfone is obtained from Des- (Ala1, Gly2) -desami-no [Cys3] carba3-somatostatin.

Beispiel 9a Example 9a

Herstellung des Sulfons von Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]carba3-[D-Trp8]-somatostatin Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 9 hergestellt, wobei man das Des(Ala1,Gly2)desamino[Cys3]carba3-somatostatin durch Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]carba3-[D-Trp8]-somatostatin ersetzt. Preparation of the sulfone of Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] carba3- [D-Trp8] -somatostatin The desired compound is prepared analogously to Example 9, with the Des (Ala1, Gly2) desamino [Cys3] carba3-somatostatin replaced by Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] carba3- [D-Trp8] somatostatin.

Beispiel 10 Example 10

Herstellung des Sulfoxids von Des-(Ala\Gly2)-desamino[Cys3]carba3-somatostatin Eine Lösung von 14 mg Des-(Ala\Gly2)-desamino[Cys3] carba3-somatostatin in 0,5 ml eines O,2m-Phosphatpuffers vom pH-Wert 7,0 wird mit 0,2 ml einer 0,05m-äthanolischen Jodlösung und 0,1 ml O,lm-Natronlauge versetzt. Man lässt den Ansatz 5 Tage bei 25 °C stehen. Anschliessend isoliert man das Produkt, indem man die Lösung durch eine Säule von Sepha-dex-G-25 laufen lässt, wobei man mit 50%iger Essigsäure eluiert. Die Produktelution wird dünnschichtchromatographisch unter Verwendung von Äthylacetat/Pyridin/Essigsäure/Wasser (10:5:1:3) als Lösungsmittelsystem festgestellt. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden zur Trockene eingedampft. Dabei erhält man das Sulfoxid von Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]carba3-somatostatin. Preparation of the sulfoxide of Des- (Ala \ Gly2) -desamino [Cys3] carba3-somatostatin A solution of 14 mg of Des- (Ala \ Gly2) -desamino [Cys3] carba3-somatostatin in 0.5 ml of an O, 2m-phosphate buffer with a pH of 7.0, 0.2 ml of a 0.05m ethanolic iodine solution and 0.1 ml of 0.1m sodium hydroxide solution are added. The mixture is left to stand at 25 ° C. for 5 days. The product is then isolated by passing the solution through a column of Sepha-dex-G-25, eluting with 50% acetic acid. The product elution is determined by thin layer chromatography using ethyl acetate / pyridine / acetic acid / water (10: 5: 1: 3) as the solvent system. The fractions containing the product are evaporated to dryness. The sulfoxide of Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] carba3-somatostatin is obtained.

Beispiel 10a Herstellung des Sulfoxids von Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]carba3-[D-Trp8]-somatostatin Die gewünschte Verbindung wird analog Beispiel 10 hergestellt, wobei man das Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]carba3-somatostatin durch Des-(Ala\Gly2)-desamino[Cys3]carba3-[D-Trp8]-somatostatin ersetzt. Example 10a Preparation of the Sulfoxide of Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] carba3- [D-Trp8] -somatostatin The desired compound is prepared analogously to Example 10, the Des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3 ] carba3-somatostatin replaced by Des- (Ala \ Gly2) -desamino [Cys3] carba3- [D-Trp8] -somatostatin.

Die Somatostatinanalogen, welche Alanin oder a-Amino-buttersäure anstelle von Asn enthalten, können nach der in den Tabellen I, II und III dargestellten Methode hergestellt werden, indem man das Peptid (e-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-OMe • 2HC1 durch die Peptide (e-INOQ-Lys-Ala-Phe-Phe-OMe • 2HC1 bzw. (e-INOC)-Lys-[a-aminobuttersäure]-Phe-Phe-OMe • 2HC1 ersetzt. Die Peptide (£-INOC)-Lys-Ala-Phe-Phe-OMe-2HCl und (e-INOC)-Lys-[a-aminobuttersäure]-Phe-Phe-OMe • 2HC1 können gemäss den aus Tabelle III ersichtlichen Stufen 6, 7 und 8 mit der Ausnahme hergestellt werden, dass in Stufe 7a BOC-AsnNPE durch BOC-AlaNPE bzw. BOC-[a-aminobuttersäure]NPE ersetzt wird. The somatostatin analogs, which contain alanine or a-amino-butyric acid instead of Asn, can be prepared by the method shown in Tables I, II and III by using the peptide (e-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe- OMe • 2HC1 by the peptides (e-INOQ-Lys-Ala-Phe-Phe-OMe • 2HC1 or (e-INOC) -Lys- [a-aminobutyric acid] -Phe-Phe-OMe • 2HC1 replaced. The peptides ( £ -INOC) -Lys-Ala-Phe-Phe-OMe-2HCl and (e-INOC) -Lys- [a-aminobutyric acid] -Phe-Phe-OMe • 2HC1 can be carried out according to steps 6, 7 and 8 with the exception that in stage 7a BOC-AsnNPE is replaced by BOC-AlaNPE or BOC- [a-aminobutyric acid] NPE.

Ein spezielles Beispiel der Somatostatinanalogen, nämlich Des-(Ala\Gly2)-desamino[Cys3]-descarboxy[Cys14]-dicarba314-[AIa5]-somatostatin, kann nach der in Tabelle III dargestellten Methode hergestellt werden, indem man in A specific example of the somatostatin analogs, namely des- (Ala \ Gly2) -desamino [Cys3] -descarboxy [Cys14] -dicarba314- [AIa5] -somatostatin, can be prepared according to the method shown in Table III by using in

Stufe 12 a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat durch BOC-w-aminoheptansäure und in Stufe 7 BOC-AsnNPE durch BOC-AlaNPE ersetzt. Stage 12 a-tert-butyl-BOC-a-aminosuberat replaced by BOC-w-aminoheptanoic acid and in stage 7 BOC-AsnNPE by BOC-AlaNPE.

Ein weiteres spezielles Beispiel der erfindungsgemässen So-5 matostatinanalogen nämlich Des-(Ala1,Gly2)-desamino[Cys3]descarboxy- Another specific example of the So-5 matostatin analogs according to the invention, namely des- (Ala1, Gly2) -desamino [Cys3] descarboxy-

[Cys14]dicarba3,14-[a-aminobuttersäure5]- [Cys14] dicarba3,14- [a-aminobutyric acid5] -

[D-Trp8]-somatostatin, [D-Trp8] somatostatin,

kann nach der in Tabelle III veranschaulichten Methode herge-10 stellt werden, indem man in Stufe 12 a-tert.-Butyl-BOC-a-aminosuberat durch BOC-w-aminoheptansäure, in Stufe 7 BOC-AsnNPE durch BOC-[a-aminobuttersäure]NPE und in Stufe 5a BOC-TrpHSE durch BOC-D-TrpHSE ersetzt. can be prepared according to the method illustrated in Table III, by a-tert.-butyl-BOC-a-aminosuberate by BOC-w-aminoheptanoic acid in step 12 and BOC-AsnNPE by BOC- [a- aminobutyric acid] NPE and in stage 5a BOC-TrpHSE replaced by BOC-D-TrpHSE.

Die erfindungsgemässen Somatostatinanalogen können in 15 der Human- und Veterinärmedizin zur Inhibierung der Magensekretion bei der Therapie von Magengeschwüren, zur Inhibierung der Wachstumshormonfreigabe (wie bei der Behandlung der Akromegalie), zur Hemmung der Glucagonfreigabe und -allein oder zusammen mit Insulin — zur Senkung des Blut-20 Zuckerspiegels (z. B. bei der Diabetestherapie) eingesetzt werden. Bei der Behandlung von Diabetes werden Anzahl und Grösse der täglichen Dosen sowie die Verabreichungszeit anhand einer individuellen Untersuchung des jeweiligen Patienten bestimmt. Die Methode zur Bestimmung dieser Fak-25 toren ist dem Fachmann geläufig. The somatostatin analogs according to the invention can be used in human and veterinary medicine to inhibit gastric secretion in the treatment of gastric ulcers, to inhibit growth hormone release (as in the treatment of acromegaly), to inhibit glucagon release and, alone or together with insulin, to lower the blood -20 sugar levels (e.g. in diabetes therapy). In the treatment of diabetes, the number and size of the daily doses and the administration time are determined on the basis of an individual examination of the respective patient. The method for determining these factors is familiar to the person skilled in the art.

Die hier beschriebenen Somatostatinanalogen können Warmblütern (unter Einschluss des Menschen) intravenös, subkutan, intramuskulär oder oral verabreicht werden. Im Falle 30 von grossen Warmblütern beträgt der Dosisbereich für die orale Verabreichung in Form von Tabletten oder Kapseln etwa 0,001 bis etwa 7 mg/kg Körpergewicht/Tag. Die erfindungsgemässen Somatostatinanalogen werden vorzugsweise durch Injektion verabreicht. Eine therapeutisch wirksame 35 Menge einer solchen Verbindung liegt in der Regel im Dosisbereich von etwa 0,001 bis etwa 2 mg/kg Körpergewicht vor. Bevorzugt wird der Bereich von etwa 0,00142 bis etwa 0,428 mg/kg Körpergewicht, wobei die Verabreichung durch intravenöse Infusion oder subkutane Injektion erfolgt. Die 40 erforderliche Dosis hängt von der speziellen zu behandelnden Erkrankung, ihrer Schwere und von der Dauer der Therapie ab. The somatostatin analogs described here can be administered to warm-blooded animals (including humans) intravenously, subcutaneously, intramuscularly or orally. In the case of large warm-blooded animals, the dose range for oral administration in the form of tablets or capsules is about 0.001 to about 7 mg / kg of body weight / day. The somatostatin analogs according to the invention are preferably administered by injection. A therapeutically effective amount of such a compound is usually in the dose range from about 0.001 to about 2 mg / kg body weight. The range from about 0.00142 to about 0.428 mg / kg of body weight is preferred, the administration being carried out by intravenous infusion or subcutaneous injection. The dose required depends on the specific disease to be treated, its severity and the duration of the therapy.

Wenn der Wirkstoff in Tablettenform verabreicht wird, können die Tabletten ein Bindemittel, wie Traganth, Mais-45 stärke oder Gelatine, einen Füllstoff (excipient), wie Di-calciumphosphat, ein Sprengmittel, wie Maisstärke oder Algin-säure, ein Gleitmittel, wie Magnesiumstearat, und einen Süssstoff und/oder ein Geschmacks- bzw. Geruchskorrigens (bzw. einen Farbstoff), wie Rohrzucker, Milchzucker oder so Wintergrün, enthalten. Geeignete flüssige Träger (Verdünnungsmittel) für die intravenöse Verabreichung sind z.B. When the active ingredient is administered in tablet form, the tablets can contain a binder such as tragacanth, maize starch or gelatin, a filler (excipient) such as dicalcium phosphate, a disintegrant such as corn starch or alginic acid, a lubricant such as magnesium stearate , and contain a sweetener and / or a taste or smell correcting agent (or a coloring agent) such as cane sugar, milk sugar or wintergreen. Suitable liquid carriers (diluents) for intravenous administration are e.g.

steriles Wasser, isotonische Kochsalzlösung und Phosphatpufferlösungen oder andere pharmakologisch verträgliche injizierbare Träger. sterile water, isotonic saline and phosphate buffer solutions or other pharmacologically acceptable injectable carriers.

s s

Claims (3)

626 328 2 626 328 2 PATENTANSPRÜCHE 1. Verfahren zur Herstellung der Peptide der Formeln: PATENT CLAIMS 1. Process for the preparation of the peptides of the formulas: CH0-X- CH0-X- ï r Ì-CH-C- ï r Ì-CH-C- ■ Lys-R"'-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser ■ Lys-R "'- Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser -«-CH., -NH-CH-R' - «- CH., -NH-CH-R ' und and Î Î :H2-X- : H2-X- -Y-ÇH -Y-ÇH ? ? R-CH-C-Lys-R"'-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R' R-CH-C-Lys-R "'- Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R' in denen: in which: O O X CH2, S, S02 oder [X]n, wobei n = O; X CH2, S, S02 or [X] n, where n = O; O O Y CH2, S, â, S02 oder [Y]n, wobei n = O; Y CH2, S, â, S02 or [Y] n, where n = O; R H, NH2 oder R"NH, wobei R" Ala-Gly-, ein Nieder- R H, NH2 or R "NH, where R" Ala-Gly-, a lower acylrest mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen oder ein Aroylrest mit 7 bis 21 Kohlenstoffatomen ist; is an acyl group having 2 to 6 carbon atoms or an aroyl group having 7 to 21 carbon atoms; R' HoderCOOHund 20 R'" Asparagin, Alanin oder a-Aminobuttersäure sind, wobei nicht beide Reste X und Y Heteroatome darstellen, dadurch gekennzeichnet, dass man ein Peptid der Formeln: R 'HoderCOOH and 20 R' "are asparagine, alanine or a-aminobutyric acid, where not both X and Y are heteroatoms, characterized in that a peptide of the formulas: CH2-X- CH2-X- R-CH-Ç- ( £ -INOC) Lys-R" 1 -Phe-Phe-Trp- ( £ -INOC) Lys-Thr- Y-CH„ R-CH-Ç- (£ -INOC) Lys-R "1 -Phe-Phe-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr- Y-CH" f f Phe-Thr-Ser-NH-CH-R' Phe-Thr-Ser-NH-CH-R ' oder or Î Î H2-X- H2-X- R-CH-Ç-(^ -INOC)Lys-R"'-Phe-Phe-D-Trp-(^-INOC)Lys-Thr- Y-ÇH- R-CH-Ç - (^ -INOC) Lys-R "'- Phe-Phe-D-Trp - (^ - INOC) Lys-Thr- Y-ÇH- f f Phe-Thr-Ser-NH-CK-R1 Phe-Thr-Ser-NH-CK-R1 in denen X, Y, R, R', R" und R'" jeweils die vorstehend angegebene Bedeutung haben, mit Zinkstaub in einer wässrigen Lösung einer niederen Alkansäure umsetzt und, wenn man von einer Verbindung ausgegangen ist, worin O in which X, Y, R, R ', R "and R'" each have the meaning given above, reacted with zinc dust in an aqueous solution of a lower alkanoic acid and, if one started from a compound in which O X S oder S02 oder X S or S02 or O O Y S oder S02 Y S or S02 so ist, das Reaktionsprodukt mit Perameisensäure oder Wasserstoffperoxid oxidiert. so, the reaction product is oxidized with performic acid or hydrogen peroxide. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Peptide der Formeln: 2. The method according to claim 1, characterized in that the peptides of the formulas: ÇH2~CH2~ ÇH2 ~ CH2 ~ -ch2-ÇH2 -ch2-ÇH2 CH CH 2-g-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH 2 g Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH und and SH2~CH2~ SH2 ~ CH2 ~ ch2-ch2 ch2-ch2 CH2-£-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH CH2- £ -Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH 626 328 626 328 aus einem Peptid der Formeln: from a peptide of the formulas: CH^-CH- CH ^ -CH- CH _c- ( £-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-(£-INOC)Lys-Thr-Phe- CH _c- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe- 2 u 2 u 0 0 CH_-CH_ CH_-CH_ I I. Thr-Ser-NH-CH-COOH Thr-Ser-NH-CH-COOH bzw. respectively. ch0-ch0 — ch0-ch0 - | 2 | 2nd cl^-jjj- (£ -inoc) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- ( ^-inoc) Lys-Thr-Phe- cl ^ -jjj- (£ -inoc) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- (^ -inoc) Lys-Thr-Phe- ch2-(j:h2 ch2- (j: h2 Thr-Ser-NH-CH-COOH Thr-Ser-NH-CH-COOH herstellt. manufactures. 3. Anwendung des Verfahrens nach Patentanspruch 1 zur Herstellung der Peptide der Formeln: 3. Application of the method according to claim 1 for the preparation of the peptides of the formulas: CH2-X— Ï-ch2 CH2-X— Ï-ch2 E-CH-Ç-Lys-Asn -Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-Œ-R • E-CH-Ç-Lys-Asn -Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-Œ-R • und and Ï Ï h2-x- h2-x- -Y—<jH. -Y— <jH. H-CH-Ç-Lys- As n-phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R ' H-CH-Ç-Lys- As n-phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R ' dadurch gekennzeichnet, dass man ein Peptid der Formel y-ch. characterized in that a peptide of the formula y-ch. boc-nh-ch-r"" boc-nh-ch-r "" in der R"" ein Wasserstoffatom oder eine Gruppe cCbu darstellt, über Nacht mit einer (e-INOC)-Lys-Asn-Phe-Phe-Ome • 2HC1 enthaltenden Lösung im alkalischen pH-Gebiet zur Reaktion bringt und das erhaltene geschützte Pentapeptid 60 zur Abspaltung der BOC-Gruppe mit Trifluoressigsäure umsetzt, worauf man das erhaltene Peptid der Formel in which R "" represents a hydrogen atom or a group cCbu, reacted overnight with a solution containing (e-INOC) -Lys-Asn-Phe-Phe-Ome • 2HC1 in the alkaline pH range and the protected pentapeptide 60 obtained to split off the BOC group with trifluoroacetic acid, whereupon the peptide of the formula obtained ? ? :H2-X : H2-X -y-ch. -y-ch. CH„-C- ( £-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe NH--CH-R' CH "-C- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe NH - CH-R ' 626 328 626 328 4 4th in einem inerten Lösungsmittel mit einer Lösung von BOC- mittel bei etwa —30 °C zur Reaktion bringt, und worauf man Trp-(f-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 oder BOC-D-Trp- das erhaltene Peptid der Formeln (f-INOC)-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 in einem inerten Lösungs- in an inert solvent with a solution of BOC agent at about -30 ° C and then Trp- (f-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 or BOC-D-Trp- the peptide of the formula (f-INOC) -Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-N3 obtained in an inert solution Î Î H2-x- H2-x- CH2"^~ î Lys-Asn-Phe-Phe-OMe ^ CH2 "^ ~ î Lys-Asn-Phe-Phe-OMe ^ BOC-Trp- ( -INOC) Ly s-Thr-Phc—Thr-Ser-NH -CH-R ' BOC-Trp- (-INOC) Ly s-Thr-Phc-Thr-Ser-NH -CH-R ' oder or Ï Ï H2-x- H2-x- CH--C- ( -INOC) Lys -Asn-Phe-Phe-OMe CH - C- (-INOC) Lys -Asn-Phe-Phe-OMe 2 ö p2 2 ö p2 BOC-D-Trp- (é -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R* BOC-D-Trp- (é -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-R * 25 25th a) mit einer methanolischen Hydrazinlösung zur Umwand- sungsmittel bis auf eine Konzentration von etwa 1 mg/ml ver-lung der -OMe-Gruppe in eine Hydrazidgruppe umsetzt, dünnt, und b) die BOC-Schutzgruppe des Tryptophans durch Umset- d) den pH-Wert bis in den schwach alkalischen Bereich zung des Undekapeptidhydrazids mit wasserfreiem Chlorwas- einstellt, um die a-Amingruppe der Tryptophan-Aminosäure serstoff in Gegenwart von Mercaptoäthanol abspaltet, so in die freie a-Aminogruppe umzuwandeln und den Ringschluss c) das gewünschte cyclische Peptid erzeugt, indem man die zu initiieren, wobei der Ringschluss durch etwa 4 Tage langes Hydrazidgruppe durch Umsetzung mit Isoamylnitrit bei etwa Stehenlassen des Reaktionsgemisches bei etwa -20 °C abge--25 °C und stark saurem pH-Wert in eine Azidgruppe über- schlössen wird, a) with a methanolic hydrazine solution to convert to a concentration of about 1 mg / ml of the -OMe group in a hydrazide group, thins, and b) the BOC protective group of tryptophan by reaction d) den Adjust the pH to the weakly alkaline range of the undecapeptide hydrazide with anhydrous chlorine water in order to split off the a-amine group of the tryptophan-amino acid in the presence of mercaptoethanol, so converting it to the free a-amino group and the ring closure c) the desired cyclic Peptide is generated by initiating the ring closure through a hydrazide group of about 4 days by reaction with isoamyl nitrite with the reaction mixture left at about -20 ° C. and a strongly acidic pH value converted into an azide group. will close führt und die Lösung mit einem geeigneten organischen Lö- wobei die Peptide der Formel leads and the solution with a suitable organic Lö- whereby the peptides of the formula 35 35 CH -X — CH -X - | 2 | 2nd CH2-g- {é -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- ( £ -inoc) Lys-Thr- CH2-g- {é -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (£ -inoc) Lys-Thr- Phe-Thr-Ser-NK--CH-R1 Phe-Thr-Ser-NK - CH-R1 oder ch2-x. or ch2-x. ch2-g-(£-inoc)Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-(^-INOC)Lys-Thr- ch2-g- (£ -inoc) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp - (^ - INOC) Lys-Thr- -y-ch2 -y-ch2 T T Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 Phe-Thr-Ser-NH-CH-R1 erhalten werden, welche dann nach dem Verfahren des Patent- 4. Anwendung gemäss Patentanspruch 3, dadurch gekenn-anspruches 1 zum gewünschten Produkt umgesetzt werden. 60 zeichnet, dass man aus dem Peptid der Formel cz2-cz2 are obtained, which are then implemented according to the method of patent application 4. according to claim 3, thereby claim 1 to the desired product. 60 shows that the peptide of the formula cz2-cz2 î V î V -NH-CH-qf -NH-CH-qf XJtBu XJtBu 626 328 626 328 das Peptid der Formel f the peptide of formula f 2-ch2 — : — ch2-ch2 2-ch2 -: - ch2-ch2 I I. CH2-C-(£-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe NH2-CH-COOH CH2-C- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe NH2-CH-COOH herstellt, worauf dieses zu den Peptiden der Formeln which then adds to the peptides of the formulas I2~CH2 Œ2 I2 ~ CH2 Œ2 n n CH2-g-(é-INOC)Lys-Asn-Phe-Phe-OMe ' CH2-g- (é-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe ' BOC-Trp- ( £-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH BOC-Trp- (£ -INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH und f and f H2-CH2 CH2- H2-CH2 CH2- CH2-g- (é. -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe CH CH2-g- (é. -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-OMe CH BOC-D-Trp- ( (f-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH BOC-D-Trp- ((f-INOC) Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH-COOH \ \ umgesetzt wird und worauf man diese zu den Peptiden der Formeln is implemented and what to do with these to form the peptides of the formulas CH0-CH, : : : — CH0-CH,::: - I I. CH2-g- ( £-INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- ( ^-INOC) Lys-Thr-Phe- CH2-(j:H2 CH2-g- (£ -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-Trp- (^ -INOC) Lys-Thr-Phe-CH2- (j: H2 Thr-Ser-NH-CH-COOH Thr-Ser-NH-CH-COOH und rH2~CH 2 and rH2 ~ CH 2 2 2 2 2 -Ç- ( é -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- ( ^-INOC) Lys-Thr-Phe- -Ç- (é -INOC) Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp- (^ -INOC) Lys-Thr-Phe- CH2-CH2 CH2-CH2 Thr-Ser-NH-CH-COOH Thr-Ser-NH-CH-COOH umsetzt und worauf man diese nach dem Verfahren des Patentanspruches 2 weiter umsetzt. implements and what they are implemented according to the method of claim 2. Somatostatin ist ein Tetradekapeptid mit der Struktur: Somatostatin is a tetradecapeptide with the structure: Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH und inhibiert bekanntlich die Wachstumshormonfreisetzung. Herstellung von Somatostatinderivaten mit geringer Löslich- and is known to inhibit growth hormone release. Production of somatostatin derivatives with low solubility Somatostatin selbst besitzt eine kurzzeitige Wirkung, da es un- 65 keit erzielt, wodurch eine langsame Freigabe bei subkutaner ter anderem durch die in vivo vorhandenen Aminopeptidasen Injektion gewährleistet wird. Wenn die Derivate jedoch einmal und Carboxypeptidasen inaktiviert wird. Eine Teillösung die- in Lösung gegangen sind, widerstehen sie der Inaktivierung ses Problems der kurzzeitigen Wirkung wurde bisher durch durch Aminopeptidasen und Carboxypeptidasen nicht mehr als Somatostatin itself has a short-term effect because it achieves inability to ensure slow release with subcutaneous inter alia through the in vivo aminopeptidase injection. However, once the derivatives and carboxypeptidases are inactivated. A partial solution that has gone into solution, resist the inactivation of this short-term effect problem has so far not been achieved by aminopeptidases and carboxypeptidases 626 328 626 328 6 6 Somatostatin selbst. Die vorliegende Erfindung stellt Somato-statinanaloge mit der biologischen Wirksamkeit von Somatostatin und längerer Wirkungsdauer sowie ein neues Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen zur Verfügung. Somatostatin itself. The present invention provides somatostatin analogs with the biological activity of somatostatin and a longer duration of action, as well as a new process for the preparation of these compounds.