DE2610698C2

DE2610698C2 -

Info

Publication number: DE2610698C2
Application number: DE2610698A
Authority: DE
Inventors: Jan-Christer Djursholm Se Eriksson; Rolf Ekeroe Se Larsson; Aake Enskede Se Rosengren; Maj-Britt Huddinge Se Hjelte
Original assignee: Ird Biomaterial Stockholm Se AB
Current assignee: I.R.D. BIOMATERIAL AB, STOCKHOLM, SE
Priority date: 1975-03-20
Filing date: 1976-03-13
Publication date: 1989-04-13
Also published as: US4118485A; BR7601641A; DK119276A; FR2309245B1; JPS6028504B2; DE2610698A1; SE400173B; NL7602938A; SE7503240L; AU1195676A; GB1539215A; JPS51128439A; FR2309245A1

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Stabilisierung eines Thrombose verhindernden heparinhaltigen Oberflächenüberzuges auf medizinischen Gegenständen unter Verwendung eines primären Alkylammoniumsalzes und eines Dialdehyds.

Bekanntermaßen werden die Oberflächen medizinischer Gegenstände zur Verbindung der Koagulation von Blut heparinisiert, indem man das Heparin kovalent an diese Oberflächen bindet, was zu einem stabilen Überzug führt. Beispielsweise bindet das Verfahren der US-PS 36 73 612 das Heparin kovalent über Acetal- oder Halbacetalgruppen mit Hilfe eines Dialdehyds an die Oberfläche eines Polymers. Diese Methode ist aber nur bei bestimmten Oberflächenmaterialien möglich und führt zwingend zu einer Verminderung der Aktivität des Heparins.

Nach einer anderen bekannten Methode bindet man das Heparin ionisch mit seinen anionischen Gruppen an Oberflächen die kationische Gruppen enthalten (siehe J. Biomed. Mater. Res. Symposium, Nr. 3 (1972), Seite 77 und "Radiology" 109, Seite 585 (1973)). Eine solche Bindung des Heparins ist aber nur schwach und nicht stabil genug. Gemäß der US-PS 38 10 781 werden die Heparinmoleküle zu ihrer Stabilisierung über ihre OH-Gruppen mit einem Dialdehyd vernetzt. Eine solche Stabilisierung ist jedoch ungenügend.

Die der Erfindung zugrundeliegenden Aufgabe bestand somit darin, ein Verfahren zu bekommen, das zu einer verbesserten Stabilisierung eines heparinhaltigen Oberflächenüberzuges führt. Zur Lösung dieser Aufgabe ist das erfindungsgemäße Verfahren dadurch gekennzeichnet, daß man die heparinisierte Oberfläche des Gegenstandes zunächst mit dem primären Alkylammoniumsalz derart behandelt, daß im wesentlichen alle anionischen Gruppen des Heparins durch Alkylammoniumionen blockiert werden, und sodann mit dem Dialdehyd unter Bildung einer zwischen den Heparinmolekülen in der Oberflächenbeschichtung verteilten Schiff'schen Base mit geringer Löslichkeit behandelt oder daß man zunächst die Oberfläche des Gegenstandes mit einer Lösung eines Komplexes von Heparin mit einem primären Alkylammoniumsalz, in welchem im wesentlichen alle anionischen Gruppen des Heparins durch Alkylammoniumionen blockiert sind, behandelt und sodann nach Entfernen des Lösungsmittels mit dem Dialdehyd unter Bildung einer zwischen den Heparinmolekülen in der Oberflächenbeschichtung verteilten Schiff'schen Base mit geringer Löslichkeit behandelt, wobei die im wesentlichen vollständige Blockierung der anionischen Gruppen des Heparins nach dem Toluidinblautest feststellbar ist.

Eine Schiff'sche Base enthält die charakteristische Gruppe

und entsteht bei der Umsetzung zwischen einem Aldehyd und einem primären Amin.

Wenn ein primäres Amin RNH₂, worin R eine Alkylgruppe bedeutet, mit einem Dialdehyd, wie Glutardialdehyd OHC-CH₂-CH₂-CH₂-CHO, reagiert, können die folgenden Verbindungen gebildet werden:

Beide Verbindungen sind Schiff'sche Basen. Die Verbindung (1) hat jedoch einige Löslichkeit in Wasser, während die Verbindung (2) eine sehr geringe Wasserlöslichkeit besitzt. Es wird angenommen, daß im erfindungsgemäßen Verfahren die Verbindungen vom Typ (2), die keine unumgesetzten Aldehydgruppen enthalten, für die Stabilisierung verantwortlich sind.

Die Blockierung der anionischen Gruppen des Heparins kann man sich folgendermaßen vorstellen: Das Heparinmolekül enthält verschiedene anionische Gruppen, wie die Gruppen -OSO₃- und -NSO₃^-, die mit primären Alkylammoniumionen Ionenbindungen bilden.

Die Umsetzung des blockierten Heparins mit dem Dialdehyd kann auf folgende Weise dargestellt werden, wobei der Dialdehyd beispielsweise Glutardialdehyd ist und HEP^n- Heparin bedeutet:

Die erste Stufe der Umsetzung führt zu einer teilweisen "Entblockierung" des Heparins und somit zu einer Wiederherstellung der physiologischen Aktivität desselben und zur Bildung von primärem Alkylamin. Die zweite Stufe der Reaktion führt zur Bildung der Schiff'schen Base des in Formel (2) oben gezeigten Typs. Die Moleküle dieser Schiff'schen Base sind unter den Heparinmolekülen eingestreut. Sie haben hydrophobe Natur, was wohl der Grund ist, warum sie das Heparin daran hindern, gelöst zu werden. Die Moleküle der Schiff'schen Base stellen eine sterische Hinderung für die Entfernung der Heparinmoleküle dar.

Es ist wahrscheinlich, daß eine Vernetzungsreaktion zwischen dem Dialdehyd und den Aminogruppen zweier benachbarter Heparinmoleküle auch von einiger Wichtigkeit für die Stabilisierung des Heparins ist. Die Vernetzungsreaktion kann folgendermaßen wiedergegeben werden:

Nachfolgend werden fünf brauchbare Methoden zur Herstellung einer heparinisierten Oberfläche beschrieben, die erfindungsgemäß stabilisiert werden kann. Ein vollständigerer Überblick über Heparinisierungsmethoden findet sich in "L' Union Medical du Canada", 103, S. 71 (1974).

1. Eine Kunststoffoberfläche wird zunächst mit einer Lösung eines kationischen oberflächenaktiven Mittels und danach mit einer Heparinlösung gemäß der US-PS 36 34 123 oder nach "Trans. Amer. Soc. Artif. Intern. Organs", 15, S. 1 (1969) behandelt.
2. Eine Komplexverbindung von Heparin und eines kationischen oberflächenaktiven Mittels vom quaternären Ammoniumtyp wird in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Die Lösung wird dann auf der Oberfläche beispielsweise von Kunststoff, Glas oder Metall aufgebracht und das Lösungsmittel verdampft. Siehe "J. Biomed. Mater. Res. Symposium", 3, S. 77 (1972) und "Invest. Radiol." 6, S. 280 (1971).
3. Ein Kunststoffmaterial wird hergestellt, das Polymerketten enthält, an die quaternäre kationische Gruppen chemisch gebunden werden. Alternativ werden quaternäre kationische Gruppen kovalent an die Kunststoffoberfläche mit Hilfe einer chemischen Reaktion, wie beispielsweise gemäß der US-PS 36 17 344 gebunden. Danach wird Heparin über Ionenbindungen an die kationischen Gruppen in der Kunststoff oberfläche durch Behandlung mit einer Heparinlösung gebunden.
4. Ein Kupplungsmittel vom Aminosilantyp wird zunächst an die zu heparinisierende Oberfläche gebunden. Anschließend wird die Oberfläche mit einer Heparinlösung behandelt.
5. Eine konzentrierte Wasserlösung von Heparin wird auf der zu heparinisierenden Oberfläche aufgebracht, und das Wasser wird derart verdampft, daß ein zusammenhängender Heparinfilm auf der Oberfläche gebildet wird. Ein solcher Heparinüberzug wurde für Glasröhren für bestimmte klinische Blutanalysen verwendet, wenn eine Koagulation des Blutes verhindert werden muß.

Eine nach einer der Methoden 1 bis 5 heparinisierte Oberfläche kann nach der vorliegenden Erfindung stabilisiert werden. Diese Stabilisierungsbehandlung führt zu einer heparinisierten Oberfläche, in welcher das Heparin seine volle physiologische Aktivität besitzt und bei Berührung mit Blut oder Blutplasma nicht von der Oberfläche abgelöst wird. Die Methoden 2, 4 und 5 machen es möglich, Überzüge auch auf Glas oder Metallgegenständen zu bekommen, die dann erfindungsgemäß darauf stabilisiert werden.

Bei der Heparinisierungsmethode 2 besteht die Oberflächenschicht aus einer Komplexverbindung von Heparin und einer oberflächenaktiven quaternären Ammoniumverbindung. Wenn diese Komplexverbindung mit einer wäßrigen Lösung eines kationischen oberflächenaktiven Mittels vom primären Amintyp behandelt wird, findet eine Austauschreaktion statt, die zur Bildung eines Komplexes zwischen dem Heparin und dem ober flächenaktiven Mittel führt, während die oberflächenaktive quaternäre Ammoniumverbindung von der Oberfläche entfernt wird. Die Löslichkeit des Komplexes von primärer Alkylammonium verbindung und Heparin ist nämlich geringer als die des Komplexes von quaternärer Alkylammoniumverbindung und Heparin. Die beschriebene Austauschreaktion bedeutet daher, daß die anionischen Gruppen von Heparin durch langkettige Ammoniumkationen blockiert werden.

Den Komplex für die zweite Alternativmöglichkeit nach der Erfindung bekommt man zweckmäßig durch Umsetzung des Heparins mit einer wäßrigen Lösung des primären Alkylammoniumsalzes unter Bildung einer Heparin-Alkylammoniumkomplexverbindung mit geringer Löslichkeit. Um dabei eine im wesentlichen vollständige Blockierung zu bekommen, verwendet man zweckmäßig das Alkylammoniumsalz in einer Menge, die wenigstens der Zahl der anionischen Gruppen im Heparin entspricht, welche in der Lösung vorhanden sind, aus der der Komplex ausgefällt wird. Die so gebildete Komplexverbindung wird in einem Lösungsmittel aufgelöst, und die Lösung wird auf dem zu heparinisierenden Gegenstand aufgebracht. Das Lösungs mittel wird nunmehr verdampft und hinterläßt dabei eine dünne Schicht des Heparin-Alkylammoniumsalz-Komplexes auf der Oberfläche des Gegenstandes. Als Garantie, daß alle anionischen Gruppen des Heparins mit Alkylammoniumionen umgesetzt wurden, kann nun der Gegenstand noch mit einer wäßrigen Lösung des Alkylammoniumsalzes in Berührung gebracht werden.

Das Lösungsmittel für den Heparin-Alkylammoniumsalz-Komplex sollte ein Gemisch eines nichtpolaren Lösungsmittels, wie Cyclohexan, und eines polaren Lösungsmittels, wie eines nieder molekularen Alkohols, z. B. Ethanol oder Propanol, sein. Der Heparin-Alkylammoniumsalz-Komplex wird vorzugsweise in dem nichtpolaren Lösungsmittel dispergiert, und das polare Lösungsmittel wird dann langsam zugegeben. Der Komplex bildet zunächst eine Emulsion in dem nichtpolaren Lösungsmittel. Weitere Zugabe des polaren Lösungsmittels führt dazu, daß sich der Komplex auflöst. Es ist bevorzugt, eine kleine Menge eines löslichmachenden Mittels mit einer Polarität zwischen derjenigen der beiden Lösungsmittel zuzugeben, um die Lösung stabil zu machen und eine Phasentrennung zu verhindern. Wenn man ein Gemisch von Cyclohexan und Ethanol verwendet, kann das löslichmachende Mittel Dichlorethan sein.

Die Tatsache, daß alle anionischen Gruppen des Heparins durch Alkylammoniumionen blockiert sind, kann mit Toluidin blau festgestellt werden, welches ein Salz ist, das sich leicht in Wasser auflöst und eine blaue Lösung ergibt. Wenn eine heparinisierte Oberfläche mit dieser Lösung behandelt wird, ergibt die Umsetzung zwischen dem Toluidinblau und den anionischen Gruppen des Heparins eine rosa Farbe. Die Intensität dieser rosa Farbe ist ein Indikator für die physiologische Aktivität des Heparins. Ein mehr quantitativer Weg für die Messung der physiologischen Aktivität ist der, die Abnahme der Farbintensität der Toluidinblaulösung infolge einer Adsorption von Toluidinblau an der heparinisierten Oberfläche spektrophotometrisch zu messen. Es ist bevorzugt, die Umsetzung zwischen dem Heparin und dem primären Alkylammoniumsalz soweit ablaufen zu lassen, daß keine rosa Farbe beobachtet werden kann, wenn die Oberfläche mit dem Toluidinblau geprüft wird.

Der Toluidinblautest ist auch brauchbar für die Prüfung der heparinisierten Oberfläche nach der Stabilisierungsbehandlung mit dem Dialdehyd, um sicherzustellen, daß eine ausreichende Zahl der anionischen Gruppen des Heparins von der Blockierung befreit wurde. Wenn eine schwach rosa Farbe beobachtet werden kann, ist die Entblockierung zufriedenstellend. Der Toluidinblautest ist auch brauchbar für die Prüfung, ob das Stabilisierungsverfahren zu einer zufriedenstellenden Bindung des Heparins an die Oberfläche führte. Die fertige Oberfläche wird mit Blut oder Blutplasma während 60 min in Berührung gebracht. Nach dem Spülen wird nun der Toluidinblautest wiederholt. Wenn eine verminderte Farbintensität beobachtet wird, wurde zuviel Heparin von der Oberfläche freigegeben.

Von den im Handel erhältlichen primären Alkylammoniumsalzen wurden unter anderem Alkylaminhydrochloride mit 8 bis 22 Kohlenstoffatomen in der Alkylkette in dem Verfahren nach der Erfindung untersucht. Es wurde gefunden, daß solche mit einer kritischen Mizellkonzentration geringer als 5 · 10^-3 Mol je Liter bevorzugt sind.

Die kritische Mizellkonzentration ist die niedrigste Konzentration, bei der Mizellaggregate in einer wäßrigen Lösung eines oberflächenaktiven Stoffes auftreten. Weitere Informationen über die kritische Mizellkonzentration kann man beispielsweise bei Mukerjee & Mysels in "Critical Micelle Concentrations of Aqueous Surfactant Systems", herausgegeben von dem U. S. National Bureau of Standards (NSRDS-NBS 36) finden.

Primäre Alkylammoniumsalze mit 14 bis 22, besonders mit 16 bis 18 Kohlenstoffatomen in der Alkylgruppe sind bevorzugt. Hexadecylaminhydrochlorid ist ein besonders brauchbares primäres Alkylammoniumsalz.

Die Behandlung der heparinisierten Oberfläche des primären Alkylammoniumsalzes, wie Cetylaminhydrochlorid, kann in weiten Bereichen der Temperatur, der Zeit und der Konzentration der Lösung durchgeführt werden. Es ist jedoch bevorzugt, die Behandlung unter solchen Temperatur- und Konzentrations bedingungen durchzuführen, daß eine klare Lösung des primären Alkylammoniumsalzes erhalten wird. Wenn daher eine Konzentration unterhalb der kritischen Mizellkonzentration ausgewählt wird (für Cetylaminhydrochlorid liegt diese bei etwa 10^-3 Mol je Liter), kann die Behandlung bei Raumtemperatur durchgeführt werden. Eine Konzentration unterhalb 10^-5 Mol je Liter ist nicht allgemein geeignet, da ein relativ großes Volumen an Lösung verwendet werden muß, um die Oberfläche mit einer ausreichenden Menge des primären Alkylammoniumsalzes zu versorgen. Wenn es andererseits ratsam ist, ein kleineres Lösungsvolumen zu verwenden und daher eine Konzentration zwischen der kritischen Mizellkonzentration und der Sättigungskonzentration ausgewählt wird, sollte eine höhere Behandlungstemperatur als die Krafft-Temperatur verwendet werden. Das primäre Alkylammoniumsalz wird in Wasser bei einer Temperatur oberhalb der Krafft-Temperatur gelöst und bildet so eine klare Lösung. Für Cetylaminhydrochlorid liegt die Krafft-Temperatur bei etwa 50°C.

Die Umsetzung zwischen dem an die Oberfläche gebundenen Heparin und dem primären Alkylammoniumsalz findet in einer wäßrigen Lösung so schnell statt, daß eine Behandlungszeit von wenigen Minuten allgemein ausreichend ist.

Die Behandlung mit dem Dialdehyd kann in der in der US-PS 38 10 781 beschriebenen Weise durchgeführt werden, d. h. bei folgenden Bedingungen:

Zeit
1 min bis 3 h
Temperatur	20 bis 80°C
Konzentration	0,1 bis 25 Gew.-%
pH-Wert	zwischen 2 und 10

Es ist bevorzugt, einen Dialdehyd der Formel CH-CHO oder CHO-R-CHO zu verwenden, worin R 1 bis 4 CH₂-Gruppen bedeutet. Glutardialdehyd ist besonders bevorzugt. Wie in der US-PS 38 10 781 kann der Dialdehyd auch in der Form des entsprechenden Acetals zugegeben werden.

Eine zweckmäßige Ausführung des erfindungsgemäßen Verfahrens unter Stabilisierung einer durch Ionenbindungen an eine Polymer oberfläche gebundenen Heparinschicht besteht darin, daß man die Heparinschicht mit einer 0,5 mM wäßrigen Lösung von Cetylaminhydrochlorid oder Octadecylaminhydrochlorid bei 60°C während 15 min und dann mit einer 0,5%igen Lösung von Glutardialdehyd bei 55°C während 20 min behandelt. Eine andere bevorzugte Arbeitsweise besteht darin, daß man 100 Volumenteile einer wäßrigen Heparinlösung, die 300 mg (40 000 IE) je 100 ml enthält, bei 60°C mit 100 Volumenteilen einer wäßrigen Lösung von 17,6 mMol je Liter Alkylaminhydrochlorid mit 16 bis 18 Kohlenstoffatomen in der Alkylkette vermischt, die resultierende unlösliche Komplexverbindung von Heparin und Alkylaminhydrochlorid von der Lösung abtrennt, die Komplex verbindung in 120 Volumenteilen Cyclohexan dispergiert, nach und nach 64 Volumenteile Ethanol unter Rühren zusetzt, 40 Volumenteile Dichlorethan zu der so gebildeten Lösung zugibt, die resultierende Lösung filtriert, die so erhaltene Lösung auf die Oberfläche des Gegenstandes unter Ausbildung eines Oberflächenüberzuges aufbringt, das Lösungsmittel aus dem Oberflächenüberzug verdampft und den Oberflächenüberzug mit einer 0,5%igen wäßrigen Lösung von Glutardialdehyd bei 55°C 20 min behandelt.

Beispiel 1 Stabilisierung einer unter Verwendung einer Komplexverbindung von Heparin und eines primären Alkylammoniumsalz heparinisierten Oberfläche

Polyethylenkatheter wurden mit einer Lösung von Heparin- Alkylammoniumchloridkomplex in Isopropanol (1000 IE Heparin/ml) behandelt. Das Alkylammoniumchlorid war eine Verbindung der allgemeinen Formel

worin R einen Alkylrest mit 16 Kohlenstoffatomen bedeutet. Nach dem Trocknen in Luft wurden die Katheter mit 10 mMol einer wäßrigen Lösung von Alkylaminhydrochlorid mit unterschiedlichen Kohlenwasserstoffkettenlängen bei 65°C während 15 min behandelt. Die auf diese Weise behandelten Proben wurden dann mit einer 0,5%igen wäßrigen Lösung von Glutardialdehyd 20 min bei 55°C behandelt. Die Versuche Nr. 1 und 2 betreffen Vergleichsproben. Das Testen erfolgte durch Messung der Farbreaktion mit Toluidinblau und durch Messen der Heparinmenge, die nach 60 min in Berührung mit Blutplasma bei Raumtemperatur gemäß Eika, Godal und Keirulf freigesetzt wurde.

Wie aus Tabelle I ersichtlich ist, erhielt man zufrieden stellende Ergebnisse bei Verwendung von Alkylaminhydrochloriden mit einer Kettenlänge von C₁₄ und größer. Die kritische Mizellkonzentration von Tetradecylaminhydrochlorid liegt bei etwa 5 · 10^-3 Mol je Liter, während die für Dodecyl aminhydrochlorid etwa 10^-2 Mol je Liter beträgt. Vollständige Blockierung der anionischen Gruppen des Heparins bekam man nicht mit Kohlenwasserstoffkettenlängen von C₁₂ und kürzer. Bei dem Test Nr. 4 wurde NaCl während der Behandlung mit Glutardialdehyd zugegeben. Eine solche Zugabe von NaCl hat in diesem Fall eine günstige Wirkung, die ersichtlich ist, und vermindert den Heparinverlust. Entsprechende Testergebnisse wurden beim Heparinisieren und Stabilisieren von Oberflächen auch aus anderen Materialien, wie Glas, Metall und Polytetrafluorethylen, erhalten.

Tabelle I

Beispiel 2 Behandlung einer unter Verwendung einer Lösung einer Komplexverbindung von Heparin und Alkylaminhydrochlorid heparinisierten Oberfläche

300 mg Heparin entsprechend 40 000 IE wurden in 100 ml destilliertem Wasser aufgelöst. Diese Heparinlösung wurde mit 100 ml wäßriger Alkylaminhydrochlorid-Lösung (17,6 mMol) von 60°C vermischt. Es wurde eine Komplexverbindung von Heparin und Alkylaminhydrochlorid mit einer geringen Löslichkeit gebildet. Diese Komplexverbindung wurde durch Zentrifugalkraft von der Lösung abgetrennt und dann in 120 ml Cyclohexan dispergiert. 64 ml Ethanol wurden langsam zugegeben, wobei die ganze Zeit gerührt wurde. Schließlich wurden 40 ml Dichlorethan zugesetzt, worauf die Lösung filtriert wurde. Der resultierende Heparingehalt in der Lösung lag bei 165 IE/ml = 1,25 mg/ml. Auf diese Weise wurden mehrere Lösungen hergestellt, die Komplexverbindungen von Heparin und Alkylaminhydrochloriden unterschiedlicher Kohlenwasserstoffkettenlängen enthielten.

Polyethylenkatheter wurden durch Eintauchen in die so erhaltenen Lösungen behandelt. Das Lösungsmittel wurde durch Verdampfen entfernt. Stabilisierungsbehandlung erfolgte dann unter Verwendung einer 0,5%igen Glutardialdehydlösung in Wasser während 20 min bei 55°C. Die Oberflächen wurden durch Messung der Toluidinblauadsorption auf den Oberflächen vor und nach der Stabilisierungsbehandlung und nach 15minütiger Behandlung mit einer 25%igen NaCl-Lösung bei Raumtemperatur getestet. Der zuletzt erwähnte Test ist brauchbar, da eine 25%ige NaCl-Lösung Heparin von einer heparinisierten Oberfläche löst, die unzureichend stabilisiert wurde.

Wie aus Tabelle II ersichtlich ist, erhielt man vollständig zufriedenstellende Ergebnisse unter Verwendung von Komplexverbindungen von Heparin und Alkylaminhydrochloriden mit einer Alkylkettenlänge von C₁₄ oder mehr. Aus der Tabelle ist auch ersichtlich, daß eine Blockierung der anionischen Gruppen des Heparins durch die Alkylaminhydrochloride mit einer kritischen Mizellkonzentration von ungefähr 5 · 10^-3 Mol je Liter und darunter erfolgte.

Die Stabilisierungswirkung ist zufriedenstellend für C₁₄- Alkylaminhydrochlorid mit einer kritischen Mizellkonzentration von 5 · 10^-3 Mol, wenn NaCl während der Glutardialdehydbehandlung zugegeben wird. Entsprechende Testergebnisse bekommt man beim Heparinisieren und Stabilisieren von Oberflächen auch aus anderen Materialien, wie Glas, Metall und Polytetra fluorethylen.

Tabelle II

Beispiel 3 Stabilisierung einer durch Behandlung der Oberfläche zunächst mit einer Lösung von Cetylaminhydrochlorid und dann mit einer Heparinlösung heparinisierten Oberfläche

Die Heparinisierung erfolgte gemäß der US-PS 36 34 123. Polyethylen- und Polyurethan-Katheter wurden zunächst bei 75°C 15 min mit einer 0,5 mMol Cetylaminhydrochloridlösung in Wasser und danach bei 70°C während 55 min mit einer wäßrigen Lösung von 10 IE/ml Heparin behandelt. Die Katheter wurden nun erneut mit einer wäßrigen Lösung von 0,5 mMol Cetylaminhydrochlorid bzw. Octadecylaminhydrochlorid bei 60°C während 15 min behandelt. Die Stabilisierungsbehandlung erfolgte nunmehr mit einer 0,5%igen Glutardialdehydlösung während 20 min bei 55°C. Die so behandelten Katheter wurden mit Kathetern verglichen, die in gleicher Weise, doch mit Ausnahme der Behandlung mit Cetylaminhydrochlorid bzw. Octadecyl aminhydrochlorid behandelt worden waren. Wie aus Tabelle III ersichtlich ist, führte die Behandlung mit C₁₆- und C₁₈-Alkylaminhydrochloridlösung vor der Stabilisierungsbehandlung zu einer starken Verminderung des Heparinverlustes bei Berührung mit Blutplasma oder 25%iger NaCl-Lösung.

Tabelle III

Claims

1. Verfahren zur Stabilisierung eines Thrombose verhindernden heparinhaltigen Oberflächenüberzuges auf medizinischen Gegenständen unter Verwendung eines primären Alkylammoniumsalzes und eines Dialdehyds, dadurch gekennzeichnet, daß man die heparinisierte Oberfläche des Gegenstandes zunächst mit dem primären Alkylammoniumsalz derart behandelt, daß im wesentlichen alle anionischen Gruppen des Heparins durch Alkylammoniumionen blockiert werden, und sodann mit dem Dialdehyd unter Bildung einer zwischen den Heparinmolekülen in der Oberflächenbeschichtung ver teilten Schiff'schen Base mit geringer Löslichkeit behandelt oder daß man zunächst die Oberfläche des Gegenstandes mit einer Lösung eines Komplexes von Heparin mit einem primären Alkylammoniumsalz, in welchem im wesentlichen alle anionischen Gruppen des Heparins durch Alkylammoniumionen blockiert sind, behandelt und sodann nach Entfernen des Lösungsmittels mit dem Dialdehyd unter Bildung einer zwischen den Heparinmolekülen in der Oberflächenbeschichtung verteilten Schiff'schen Base mit geringer Löslichkeit behandelt, wobei die im wesentlichen vollständige Blockierung der anionischen Gruppen des Heparins nach dem Toluidinblautest feststellbar ist.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein primäres Alkylammoniumsalz verwendet, dessen kritische Mizellkonzentration geringer als 5 · 10^-3 Mol je Liter ist.

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man das Heparin mit einer wäßrigen Lösung des primären Alkylammoniumsalzes mit einer Konzentration oberhalb der kritischen Mizellkonzentration bei einer Temperatur oberhalb der Krafft-Temperatur behandelt.

4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man das Heparin mit einem primären Alkylammoniumsalz mit 14 bis 22, vorzugsweise 16 bis 18 Kohlenstoffatomen in der Alkylgruppe behandelt.

5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man die blockierte Heparin enthaltende Oberfläche mit einem Dialdehyd der Formel OHC-CHO oder OHC-R-CHO, worin R 1 bis 4 CH₂-Gruppen bedeutet, vorzugsweise mit Glutardialdehyd behandelt.

6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5 unter Stabilisierung einer durch Ionenbindungen an eine Polymeroberfläche gebundenen Heparinschicht, dadurch gekennzeichnet, daß man die Heparinschicht mit einer 0,5 mM wäßrigen Lösung von Cetylaminhydrochlorid oder Octadecylaminhydrochlorid bei 60°C während 15 min und dann mit einer 0,5%igen Lösung von Glutardialdehyd bei 55°C während 20 min behandelt.

7. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man 100 Volumenteile einer wäßrigen Heparinlösung, die 300 mg (40 000 IE) je 100 ml enthält, bei 60°C mit 100 Volumenteilen einer wäßrigen Lösung von 17,6 mMol je Liter Alkylaminhydrochlorid mit 16 bis 18 Kohlenstoffatomen in der Alkylkette vermischt, die resultierende unlösliche Komplexverbindung von Heparin und Alkylaminhydrochlorid von der Lösung abtrennt, die Komplexverbindung in 120 Volumenteilen Cyclohexan dispergiert, nach und nach 64 Volumenteile Ethanol unter Rühren zusetzt, 40 Volumenteile Dichlorethan zu der so gebildeten Lösung zugibt, die resultierende Lösung filtriert, die so erhaltene Lösung auf der Oberfläche des Gegenstandes unter Ausbildung eines Oberflächenüberzugs aufbringt, das Lösungsmittel aus dem Oberflächenüberzug verdampft und den Oberflächenüberzug mit einer 0,5%igen wäßrigen Lösung von Glutardialdehyd bei 55°C 20 min behandelt.