DE2442302A1 - Antibakterielle mittel und verfahren zu ihrer herstellung - Google Patents

Description

PATENTANWÄLTE PROF. DR. DR. J. REITSTÖTTSR

DR.-ING. WOLFRAM BUNTE 2442302

DR. WERNER KINZEBACH

D-BOOO MÜNCHEN 4O. BAUERSTRASSE 22 · FERNHUF (Οββ) 37 8S 83 · TELEX 82IB2OB ISAR D POSTANSCHRIFT: D-BOOO MÜNCHEN 43. POSTFACH 7βΟ

München, den 4. Sept. 1974 M/15 457

BRISTOL-MYERS COMPANY,

345 Park Avenue, New York, N.Y. / USA

Antibakterielle Mittel und Verfahren zu ihrer Herstellung

Die Erfindung betrifft neue 7-[a-(2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl- und -1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-heterocyclische Thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäuren und deren nicht-toxische, pharmazeutisch verträgliche Salze und'deren Schiffsche Basen, hergestellt beispielsweise durch Reaktion von Salicylaldehyd mit der freien Aminogruppe,

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die als antibakterielle Mittel und insbesondere als therapeutische Mittel bei Geflügel und Tieren, sowie dem Menschen, bei der Behandlung von durch viele gram-positive und gram-negative Bakterien hervorgerufenen infektiösen Erkrankungen, wertvoll sind.

Die neuen erfindungsgemäßen Cephalosporinderivate umfassen die Verbindungen der Formel

CH₂CONH

■ ■ ■ ■ (ι)

CH₂-S-R

worin R die Bedeutungen:

* OH N=-N

N—N

OO¹ C«C

N-N _N-_N I _N__N

CH₃

ii—1? S—3 ^N,—^N

Il Ii Il Il Ii

, l> ν , ILg^ , (J^ JL

CH-OH

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besitzt und deren nicht-toxische, pharmazeutisch verträgliche Salze und Schiffsche Basen, beispielsweise mit Salicylaldehyd.

In den bevorzugten Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung steht R für

— N

.N—N

—N

N N

Il " und insbesondere für -C JN

CH₃

Zu solchen Salzen gehören Carbonsäuresalze, einschließlich nicht-toxischer Metallsalze, wie den Natrium-, Kalium-, Kalzium- und Aluminiumsalzen, dem Ammoniumsalz und substituierten Ammoniumsalzen, beispielsweise Salze nicht-toxischer Amine, wie Trialkylamine, einschließlich Triäthylamin, Procain, Dibenzylamin, N-Benzyl-ß-phenäthylamin, 1-Ephenamin, N,N'-Dibenzyläthylendiamin, Dehydroabietylamin, N,N'-Bis-dehydroabietyl-äthylendiamin, N-(Niedrig)-alkyl-piperidine, beispielsweise N-Äthylpiperidin und andere Amine, die zur Bildung von Salzen mit Benzylpenicillin verwendet werden; und in allen Fällen die nicht-toxischen Säureadditionssalze davon (d.h. die Aminsalze) einschließlich der Mineralsäure-

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additionssalze, wie dem Hydrochlorid, Hydrobromid, Hydrojodid, Sulfat, Sulfamat und Phosphat und den organischen Säureadditionssalzen, wie dem Maleat, Acetat, Citrat, Oxalat, Succinat, Benzoat, Tartrat, Fumarat, Malat, Mandelat, Ascorbat und dergleichen.

Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man entweder

A) eine Verbindung der Formel

COOH ^(II)

worin R die obigen Bedeutungen besitzt, oder einen leicht spaltbaren Ester oder ein Salz davon mit einem Acylierungsderivat einer Säure der Formel

CH₂NHB

(III) CH₂COOH

worin B eine aminoschützende Gruppe darstellt, umsetzt, und die aminoschützende Gruppe entfernt, wobei die gewünschte Verbindung der Formel I oder ein leicht spaltbarer Ester oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon entsteht und gegebenenfalls entweder vor oder nach Entfernen von B

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(a) durch an sich bekannte Methoden das Produkt in Form der freien Säure oder eines Salzes davon in die entsprechende Schiffsche Base, einen leicht spaltbaren Ester oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon, oder

(b) durch an sich bekannte Methoden das Produkt in Form eines leicht spaltbaren Esters oder eines Salzes davon in die entsprechende freie Säureverbindung oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon überführt,

oder
(B) eine Verbindung der Formel

CH₂NH₂
O

CH₂C - NH η γ ^j (IV)

N Λ— CH₂OCOCH₃

CO₂H

oder einen leicht spaltbaren Ester oder ein Salz davon mit einem Thiol der Formel

HS-R

worin R die obigen Bedeutungen besitzt, oder einem Salz davon, zur Bildung einer Verbindung der Formel I oder eines leicht spaltbaren Esters oder pharmazeutisch verträglichen Salzes davon umsetzt und gegebenenfalls

(a) durch an sich bekannte Methoden das Produkt in Form der freien Säure oder eines Salzes davon in die ent-

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sprechende Schiffsche Base, einen leicht spaltbaren Ester oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon oder

(b) durch an sich bekannte Methoden das Produkt in Form eines leicht spaltbaren Esters oder eines Salzes davon in die entsprechende freie Säureverbindung oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon,

umwandelt.

Bei einer Methode zur Herstellung der neuen erfindungsgemäßen Cephalosporinverbindungen wird eine in 3-Stellung thiolierte 7-Amino-cephalosporansäure-Verbindung der Formel II oder ein leicht spaltbarer Ester oder ein Salz dieser Säure oder des Esters mit dem geeigneten ct-(2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl- oder 1,4-Cyclohexadienyl-essigsaure-Acylierungsderivat der Formel III acyliert.

Das in 3-Stellung thiolierte 7-Amino-cephalosporansäure-Zwischenprodukt der Formel II kann durch Verdrängen der 3-Acetoxygruppe der 7-Amino-cephalosporansäure oder eines Salzes davon mit dem geeigneten heterocyclischen Thiol oder einem Salz davon, hergestellt werden. Die Verdrängung einer Estergruppe durch eine Thiolgruppe ist eine bekannte Reaktion und sie wird vorzugsweise in wäßriger Lösung unter Erhitzen durchgeführt.

Die beanspruchten Verbindungen können dann durch Acylieren der 7-Aminogruppe des Zwischenprodukts II mit dem Acylierungsmittel der Formel III gemäß bekannten Methoden erhalten werden.

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Das Zwischenprodukt II kann gegebenenfalls vor der Acylierungsreaktion in einen leicht spaltbaren Ester oder ein Säureadditionssalz davon überführt werden. Die Verfahren zur Herstellung solcher Ester sind in der Literatur geoffenbart und sind dem Fachmann auf dem Gebiet der Penicillin- und Cephalosporinchemie wohl bekannt. Eine bevorzugte Methode, die insbesondere zur Herstellung der bevorzugtesten, leicht hydrolysierbaren Ester, d.h. der Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethyl-, Methoxymethyl-, Acetonyl- und Phenacylester gebraucht wird, ist in der US-PS 3 284 451 geoffenbart. Diese Literatur beschreibt die Veresterung von Natriumcephalothin mit der geeigneten aktiven Chlor- oder Bromverbindung (beispielsweise Phenacylbromid, Chloraceton, Chlormethylather, Pivaloyloxymethylchlorid, Acetoxymethylchlorid), gefolgt von enzymatischer Entfernung der Thienylessigsäure-Seitenkette. Bei einer v/eiteren guten Methode wird das Triäthylaminsalz der 7-Amino-cephalosporansäure direkt mit der aktiven Halogenverbindung umgesetzt, vergl. hierzu die GB-PS 1 229 453. Eine bevorzugtere Methode ist die Umwandlung der Verbindung der Formel II in einen Silylester, beispielsweise durch in der Literatur beschriebenen Methoden; vergl. hierzu US-PS 3 249 622. Die Silylestergruppe kann im Anschluß an die Acylierungsreaktion durch Hydrolyse oder Alkoholyse entfernt werden.

Vor der Acylierungsreaktion ist die Aminogruppe des Acylierungsmittels III durch eine gebräuchliche Aminoblockierungsgruppe B des Typs, der entweder bei Peptidsynthesen oder bei irgendeiner der zahlreichen Synthesen von a-Aminobenzylpenicillin aus 2-Phenylglycin verwendet wird, geschützt, die nach Beendigung der Reaktion leicht entfernt werden kann. Zu Beispielen geeigneter aminoschützender oder -blockierender Gruppen gehören t-Butoxycarbonyl,

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Carbobenzyloxy, 2-Hydroxy-1-naphthcarbonyl, Trichloräthoxycarbonyl, 2-Äthoxycarbonyl-i-methylvinyl und 2-Methoxycarbonyl-1-methylvinyl.

Eine besonders wertvolle Blockierungsgruppe ist ein Proton, wie in der Verbindung der Formel

CH₂NH₂-HCl O

Il

CH₂C-Cl

Die bevorzugten aminoschützenden Gruppen sind t-Butoxycarbonyl, das Proton und ein ß-Diketon oder ein ß-Ketoester, wie in der GB-PS 1 123 333 oder in den US-PSen 3 325 479 und 3 316 247, beispielsweise Acetessigsäuremethylester, oder ein ß-Ketoamid, wie in der jap. Patentschrift 71/24714. Wenn die t-Butoxycarbonyl-, ß-Ketoester-, ß-Diketon- oder ß-Ketoamid-Schutzgruppen verwendet werden, ist es bevorzugt, die acylierende Säure, die die blockierte Aminogruppe enthält, in ein gemischtes Anhydrid, beispielsweise mit Äthyl- oder Isobutylchlorformiat, vor der Reaktion mit Verbindung II oder einem Ester oder Salz davon, überzuführen. Nach der acylierenden Kupplungsreaktion kann die aminoschützende Gruppe B durch an sich bekannte Methoden entfernt werden, um das gewünschte Produkt der Formel I zu bilden. So kann beispielsweise die t-Butoxycarbonylgruppe durch Verwendung von Ameisensäure, die Carbobenzyloxygruppe durch katalytische Hydrierung, die 2-Hydroxy-i-naphthcarbonylgruppe durch saure Hydrolyse, die Trichloräthoxycarbonylgruppe durch Behandlung mit Zinkstaub in Eisessig, das Proton

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durch Neutralisation usw. entfernt werden.. Es ist offensichtlich, daß auch andere funktionell äquivalente Blockierungsgruppen für eine Aminogruppe verwendet werden können und solche Gruppen liegen im Rahmen der vorliegenden Erfindung.

Acylierung einer 7-Aminogruppe eines Cephalosporins ist eine wohl bekannte Reaktion und jedes der funktioneilen Äquivalente der Formel III, die allgemein als Acylierungsmittel für primäre Aminogruppen gebraucht werden, können verwendet werden. Zu Beispielen geeigneter acylierender Derivate der freien Säure gehören die entsprechenden Säureanhydride, die gemischten Anhydride, beispielsweise Alkoxyameisensäureanhydride, Säurehalogenide, Säureazide, aktive Ester und aktive Thioester. Die freie Säure kann mit Verbindung II gekuppelt werden, nachdem man zuerst die freie Säure mit N,N'-Dimethylchlorformiminiumchlorid oder unter Verwendung von Enzymen oder eines N,N^r-Carbonyldiimidazols oder eines Ν,Ν'-Carbonylditriazols oder eines CarbodiimidreaktionsmittelSs beispielsweise Ν,Ν'-Diisopropylcarbodiimid, NjN'-Dicyclohexylcarbodiimid oder N-Cyclohexyl-N'-(2-morpholinoäthyl)-carbodiimid [vergl. Sheehan und Hess, J. Amer. Chem. Soc, 77, 1967 (1955)] oder eines Alkylylaminreaktionsraittels [vergl. R. Buijle und H.G.Viehe, Angew.Chem.International Edition 3, 582 (1964)] oder eines Isoxazoliumsalzreagenzes [vergl. R.B. Woodward, R.A. Olofson und H. Mayer, J. Amer. Chem. Soc. 83, 1010 (1961)], oder eines Keteniminreaktionsmittels [vergl. CL. Stevens und M.F. Munk, J. Amer. Chem. Soc. 80, 4065 (1958)] oder Hexachlorcyclotriphosphatriazin oder Hexabromcyclotriphosphatriazin (US-PS 3 651 050) oder Diphenylphosphorylazid [DPPA; J. Amer. Chem. Soc._f 94, 6203-6205 (1972)] gekuppelt hat. Ein weiteres Äquivalent der freien Säure ist ein entsprechendes Azolid, d.h. ein

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Amid der entsprechenden Säure, deren Amidstickstoff ein Glied e.ines quasi-aromatischen 5-Rings ist, der mindestens zwei Stickstoffatome enthält, d.h. Imidazol, Pyrazol, . die Triazole, Benzimidazol, Benzotriazol und deren substituierte Derivate. Als Beispiel für die allgemeine Methode zur Herstellung eines Azolids wird Ν,Ν'-Carbonyldiimidazol mit einer Carbonsäure in äquimolaren Verhältnissen bei Raumtemperatur in Tetrahydrofuran, Chloroform, Dimethylformamid oder einem ähnlichen inerten Lösungsmittel umgesetzt, wobei das Carbonsäureimidazolid in praktisch quantitativer Ausbeute unter Freisetzung von Kohlendioxyd und einem Mol Imidazol anfällt. Dicarbonsäuren liefern Diimidazolide. Das Nebenprodukt Imidazol fällt aus und kann abgetrennt werden und das Imidazolid kann isoliert werden, Jedoch ist dies nicht wesentlich. Ein insbesondere bevorzugtes Acylierungsinittel ist das Säurechlorid-hydrochlorid der Formel

CH₂NH₂-HCl CH₂COCl

das eine zweifache Funktion in Form einer Carboxylaktivierung und eines Aminoschutzes erfüllt. Zuvor wurde die Verwendung von Enzymen zur Kupplung der freien Säure mit ihrer blockierten Aminogruppe mit Verbindungll erwähnt. In den Bereich solcher Verfahren fällt die Verwendung eines Esters, beispielsweise des Methylesters dieser freien Säure mit Enzymen, die durch zahlreiche Mikroorganismen, beispielsweise die von T. Takahashi et al., J. Arner. Chem. Soc, 94 (11) _t 4035-4037 (1972) und durch T. Nara et al., J. Antibiotics (Japan), 24 (5). 321-323 (1971) und in der DT-PS 2 216 113 beschriebenen, geliefert werden.

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-41.

Die besonderen Verfahrensbedingungen, beispielsweise Temperatur, Lösungsmittel, Reaktionszeit u.dgl., die für die Kupplungsreaktion gewählt werden, werden durch die Art der angewandten Acylier'ungsmethode bestimmt und sind dem Fachmann bekannt. Im allgemeinen ist es.brauchbar, ein organisches tertiäres Amin, beispielsweise Triäthylamin, N,N-Dimethylanilin, Äthylpiperidin, 2,6-Lutidin oder Chinolin zuzusetzen, das als Protonakzeptor oder als salzbildendes Mittel dient.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auf irgendeinen der allgemein zur Isolierung ähnlicher Cephalosporine gebrauchten Wege isoliert werden. So kann das Produkt als neutrales Molekül erhalten werden, obgleich es wahrscheinlich genauer als das Zwitteriori dargestellt wird, oder es kann als ein Salz isoliert werden. Die Bildung des gewünschten pharmazeutisch verträglichen Carbonsäuresalzes oder Säureadditionssalzes wird nach bekannten Methoden durchgeführt, beispielsweise Reaktion der Säure mit einer geeigneten Base oder Säure.

Am Ende der Acylierungsreaktion kann das erhaltene Produkt (vor oder nach Entfernung der aminoschützenden Gruppe) durch an sich bekannte Methoden in ein weiteres gewünschtes Produkt der Formel I überführt werden. So kann die Verbindung der Formel I in Form der freien Säure oder eines Salzes davon durch bekannte Methoden in die entsprechende Schiffsche Base, einen leicht spaltbaren Ester oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon überführt werden. In gleicher Weise kann das Produkt der Formel I in Form eines leicht spaltbaren Esters oder eines Salzes davon in das freie Säureprodukt oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon durch Entfernen der veresternden Gruppe, beispielsweise durch wäßrige oder enzymatische Hydrolyse

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(beispielsweise mit menschlichem oder tierischem Serum) oder durch saure oder alkalische Hydrolyse oder durch katalytische Hydrierung oder durch Behandeln mit Natriumthiophenoxyd gemäß der US-PS 3 284 451 überführt werden.

Bei einer weiteren Methode zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen wird 7-Amino-cephalosporansäure oder ein Salz davon mit der Säure der Formel III oder einem acylierenden Derivat davon acyliert, wobei eine in 7-Stellung acylierte Cephalosporinverbindung der Formel

CH₂NH₂

CH₂OCOCH₃

(IV)

entsteht.

Die Verbindung IV in Form der freien Säure oder eines leicht spaltbaren Esters oder eines Salzes davon wird anschliessend nach dem erfindungsgemäßen Verfahren mit einem heterocyclischen Thiol der Formel V oder einem Salz davon, am bevorzugtesten dem Natrium- oder Kaliumsalz, umgesetzt. Die Verdrängungsreaktion einer solchen Acetoxygruppe mit einem derartigen Thiol ist eine wohl bekannte Reaktion und kann in Lösung, wie in Wasser oder wäßrigem Aceton bei einer Temperatur von mindestens Raumtemperatur und vorzugsweise im Bereich von ungefähr 50 bis ungefähr 10O⁰C in Gegenvrart

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einer milden Base, wie Natriumbicarbonat, beispielsweise vorzugsweise bei annähernd neutralen Bedingungen, wie bei ungefähr pH 6, durchgeführt werden. Vorzugsweise wird ein Überschuß des Thiols verwendet. Das Reaktionsprodukt wird durch sorgfältiges Ansäuern der Reaktionsraischung," gefolgt von Extrahieren mit einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel isoliert. Das Produkt der Verdrängungsreaktion kann gegebenenfalls durch Behandeln mit einer geeigneten Säure oder Base in ein pharmazeutisch verträgliches Salz überführt werden. Wie dies der Fall für das oben beschriebene alternative Verfahren zur Herstellung der Verbindung der Formel I ist, kann das Produkt in Form der freien Säure oder eines Salzes davon in die entsprechende Schiffsche Base, einen leicht spaltbaren Ester oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon überführt werden, oder alternativ kann das Produkt in Form eines leicht spaltbaren Esters oder eines Salzes davon in die freie Säure oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon überführt werden.

Die Schiff'sehen Basen der Verbindung der Formel I, insbesondere die Salicylaldehyd-Schiff'sehe Base sind auch als aktive antibakterielle Mittel brauchbar. Sie werden durch Reaktion der freien Aminoverbindung der Formel I mit einem Aldehyd und vorzugsweise Salicylaldehyd hergestellt. Die Reaktion wird normalerweise bei Umgebungstemperatur oder erhöhten Temperaturen in einem inerten Lösungsmittel, beispielsweise Benzol oder Toluol, durchgeführt, indem Wasser durch azeotrope Destillation oder in Gegenwart eines Wasserfängers, beispielsweise Kaliumcarbonat, entfernt werden kann. -

- 13 -

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-■ft.

Die leicht spaltbaren Ester der Verbindung der Formel I sind brauchbar als Zwischenprodukte bei der Herstellung des freien Säureproduktes. Die Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethyl- und Methoxymethylester sind auch als aktive antibakterielle Mittel brauchbar, da sie bei oraler Verabreichung schnell zum aktiven Metaboliten hydrolysiert werden. Diese Ester sind von Interesse, da sie bei oraler Verabreichung verschiedene Geschwindigkeiten und Mengen an Absorption schaffen und verschiedene Konzentrationen des aktiven antibakteriellen Mittels in Blut und Geweben ergeben.

Die pharmazeutisch wirksamen Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind starke antibakterielle Mittel, die bei der Behandlung infektiöser Erkrankungen bei Geflügel und Tieren, sowie des Menschen, die durch viele gram-positive und gram-negative Bakterien verursacht sind, wertvoll sind. Die aktiven Verbindungen sind auch brauchbar als Beifuttermittel bei Tierfutter und als Mittel zur Behandlung von Mastitis bei Rindern. Es wurde auch unerwartet gefunden, daß die bevorzugten Verbindungen bei oraler Verabreichung wirksam absorbiert werden.

Die.durch die vorliegende Erfindung geschaffenen neuen Medikamente können als pharmazeutische Mittel formuliert werden, die zusätzlich zum aktiven Bestandteil einen pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel enthalten. Die Verbindungen können sowohl oral als auch parenteral verabreicht werden. Die pharmazeutischen Präparationen können in fester Form, wie Kapseln, Tabletten oder Dragees oder in flüssiger Form, wie Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen, vorliegen. Bei der Behandlung bakterieller Infektionen bei Menschen können die erfindungsgemäßen Verbindungen parenteral in einer Menge von ungefähr 5 bis

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2U2302 ^M/15 ■IS·

200 mg/kg/Tag und vorzugsweise ungefähr 5 "bis 20 mg/kg/Tag in aufgeteilter Dosierung, beispielsweise drei- oder viermal täglich, verabreicht werden. Sie werden in Dosierungsr einheiten, die beispielsweise 125, 250 oder 500 mg aktiven Bestandteil zusammen mit geeigneten physiologisch verträglichen Trägern oder Bindemitteln enthalten, verabreicht. Die Dosiseinheiten liegen in Form von flüssigen Präparationen, wie Lösungen oder Suspensionen vor.

Bestimmte, in 3-Stellung substituierte 7-[a-(2-Aminomethylphenyl)-acetamido]-cephalosporansäurederivate (A; vergl. NL-PS 72/06326, Farmdoc 76374T, entsprechend der U.S.-Patentanm. Ser.No. 142 337, eingereicht am 11. Mai 1971) schaffen eine Serie von Cephalosporinen für parenteralen Gebrauch, die sehr wirksame Derivate mit einem breiten Aktivitätsspektrum darstellen. Ihre beschränkte Wasserlöslichkeit (< 2 mg/ml) hat jedoch das Auftreten von Kristallurie verursacht, selbst wenn die Antibiotika in Form leicht diissoziierbarer löslicher Derivate parenteral verabreicht wurden. Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist somit, ebenso aktive Verbindungen zu erhalten, die eine höhere Wasserlöslichkeit als die zwitterionische Form aufweisen.

. - 15 509810/1154

OT₂NH₂

(A)

Die vorliegende Erfindung schafft bestimmte 7-[<x-(2-Aminomethyl-1 ,4-cyclohexemyl und 1,4-cyclohexadienyl)-acetamido ]-cephalosporansäuren (B).

CH₂NH₂

'CH₂CO-N

(B)

Es wurde gefunden, daß viele Vertreter der neuen Serien löslicher sind als die entsprechenden Phenylderivate und eine Löslichkeit von mehr als 7 mg/ml aufweise, die routinemäßig in 0,1 m Phosphatpuffer von pH 7,0 bestimmt wurden, wie unten im Vergleich mit der bestimmter entsprechender Phenylderivate gezeigt wird.

- 16 509810/1154

CK NH,

COOK O'' Ί ^υ I

COOH CCC

(B)

R = Löslichkeit* R = (mg/ml)

cn N-N N-N

_7~ OH Beisp. 1 16,0-16,8 -T J)-OH Beisp.

Nun/

<"' V/ \^-w Beisp. 2 3,0 /f ^N\^-n Beisp.

Löslichkeit* (mg/ml)	Löslichkeit* (mg/ml)	(1)	:302
			f
4,1	4,4	(2)
8,7	3,5

N -N _N- _N

J Il Beisp. 3 23-26 || || Beisp. 20 9,7 1,9 (3)

Ul

Ui

Löslichkeit* R = Löslichkeit* Löslichkeit*

(mg/ml) (rag/ml) . .(mg/ml)

Beisp. 4 4,3 - 4,6 N-IJ Beisp. 21 7,6 0,9 (4)

,N-X I Beisp. 5 8 -/Λ=*! Beisp. 22 7,7 3,6

Beisp. 23 9,0 CD

Beisp. 24 8,4

* 4 Std. in einer 0,1 m Phosphatpufferlösung von pH 7 "bei 25⁰C gerührt durch ein

Milliporen-Filter (0,45 /u) filtriert spektroskopisch gegen seinen eigenen Standard

untersucht.

2U2302 ^: .49.

M/15

BEMERKUNGEN:

(1) Diese Verbindung (auch als BB-S150 bezeichnet) ist in der U.S.-Patentanm. Ser.No. 285 764, eingereicht am 31. August 1972, beansprucht.

(2) Diese Verbindung (auch als BB-S226 bezeichnet) ist in der U.S.-Patentanm. Ser.No. 284 792, eingereicht am 30. August 1972, beansprucht. .

(3) Diese Verbindung (auch als MR-S94 bezeichnet) ist in der U.S.-Patentanm. Ser.No. 142 337, eingereicht am 11. Mai 1971 (vgl. niederl. Patentschrift 72/06326; Farmdoc 76 374T) beansprucht.

(4) Diese Verbindung (auch als MR-S96 bezeichnet) ist in der U.S.-Patentanm. Ser.No. 142 337, eingereicht am 11. Mai 1971 (vgl. niederl. Patentschrift 72/06326; Farmdoc 76 374T) beansprucht.

- 19 0 9 8 10/1154

Die nachfolgenden Beispiele dienen zur Erläuterung der Erfindung, wobei sie diese jedoch nicht beschränken. Alle Temperaturen sind in ⁰C angegeben. "Skellysolve B" ist eine Petrolätherfraktion mit Siedepunkt 60 bis 68⁰C, die im wesentlichen aus η-Hexan besteht. IR-120 wird auch als Amberlite IR-120 bezeichnet und ist ein starkes Kationenaustauscherharz, das Sulfonsäurereste enthält. Amberlite IR-120 ist ein im Handel erhältliches Kationenaustauscherharz des Polystyrolsulfonsäuretyps; es ist somit ein kernsulfoniertes Polystyrolharz, das mit Divinylbenzol vernetzt ist und das durch das von Kunin, Ion Exchange Resins, 2. Ausgabe (1958), John Wiley and Sons, Inc. beschriebene Verfahren erhalten wird.

2,4-Dinitrophenol wird als 2,4-DNP, N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid als DCC, Trifluoressigsäure als TFA, Tetrahydrofuran als THF, t-Butoxycarbonylazid als t-BuOCON, und t-Butoxycarbonyl als t-BOC dargestellt.

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Herstellung der Ausgangsmaterialien .

a-(2-Aminomethyl-1,4-cycÜ£>hexadienyl)-essigsäure (2)

Eine Lösung von 16,5 g (0,1 Mol) o-Aminomethylphenylessigsäure in 1,5 1 flüssigem Ammoniak (der mit 50 mg Li behandelt wurde, um eine Spur von Feuchtigkeit zu entfernen) v/ird langsam mit 500 ml trockenem t-BuOH verdünnt. Zur Lösung gibt man in kleinen Portionen 3,4 g (0,5 Tom) Lithium im Verlauf von 4 Std. und die Mischung wird 16 Std. bei Raumtemperatur gerührt, wobei das flüssige Ammoniak in einem Abzug entfernt wird und anschließend unterhalb 40⁰C zur Trockene eingedampft wird. Den Rückstand löst man in 500 ml Wasser und die Lösung wird auf einer Säule mit IR-120 (H⁺, 700 ml) Harz chromatographiert und mit 1 % NH^OH-Lösung eluiert. Die Ninhydrin-positiven Fraktionen des Eluats werden vereinigt und zur Trockene eingedampft. Den Rückstand wäscht man mit vier 50 ml-Portionen heißem Aceton und kristallisiert aus 500 ml Äthanol-Wasser (1:1) um, wobei man 11,2 g (67 %) farblose Nadeln, 2, vom Schmelzpunkt 183⁰C erhält.

IR-Spektrum:^^ 1630, 1520, 1380, 1356 cm"¹

NMR-Spektrum: cf D₂O + K₂CO, 2,72 (4H, s, H₂ ⁰C")» ⁵»⁰¹ (2H, s, CH₂CO), 3,20 (2H, s, CH₂-N), 5,78 (2H, s, H_x

Analyse CgH₁₃NO₂:

C HN

ber.: 64,65 7,84 8,38 %

gef.: 64,77 8,06 " 8,44 %

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Alternatives Verfahren zur Herstellung von ct-(2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-essigsäure

CH₂NH₂

XV-CH₂CO₂H Li, tert. BuOH

NH, - TEA-HCl

CH₂CO₂H ♦ LiCl

CH₂NH₂

Man v/endet das von Welch, Dolfini und Giarrusso in der US-PS 3 720 665 (Beispiel 1) zur Herstellung von D-2-Amino-2-(1,4-cyclohexadienyl)-essigsäure verwendete Verfahren an. Eine Lösung von 830 nü. destilliertem flüssigem AmnDniäk: wird mit 40 mg Lithium unter einer Argonatmosphäre getrocknet. Zu dieser gerührten Lösung gibt man 11,0 g (0,07 Mol) 2-Aminomethy!phenylessigsäure und 340 ml tert.-Butylalkohol. Insgesamt 1,6 g (0,225 Mol) Lithium wird im Verlauf von 2 Std. zu der heftig gerührten Lösung zugegeben. Die graue Mischung wird dann mit 35 g (0,215 Mol) Triethylamin (TEA) Hydrochlorid behandelt und bei Raumtemperatur 18 Std. über Nacht gerührt. Den tert.-Butylalkohol entfernt man bei 40° (I5 mm), wobei man einen weißen Rückstand erhält, der im Vakuum über P₂°5 ^über Nacht getrocknet wird. Den Feststoff löst man in 30 ml 1:1 Methanol-Wasser und gibt ihn unter Rühren zu 3,5 1 1:1 Chloroform-Aceton bei 5° zu. Die Mischung rührt man 20 Min. und die Aminosäure 2,

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-ί al« ·

2U2302

a-(2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-essigsäure, wird ge sammelt und 16 Std. im Vakuum über PpO 'getrocknet, wobei man 6,3 g (58 %) weiße Kristalle vom Schmelzpunkt 190° (Zersetzung) erhält. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur. ·

α-[2-(t-Butoxycarbonylaminomethyl)-!,4-cyclohexadienyl]-essigsäure (1)-

Zu einer gerührten Lösung von 8,0 g (0,048 Mol) <x-(2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-essigsäure und 3,8 g (0,096 Mol) NaOH in 150 ml Wasser gibt man eine Lösung von 10,3 g (0,072 Mol) t-Butoxycarbonylazid in 80 ml THF und rührt die Mischung 18 Std. bei Raumtemperatur. Das THF entfernt man unter vermindertem Druck und die zurückgebliebene Lösung wäscht man mit Äther (2 χ 100 ml), säuert mit 6n HCl an und extrahiert mit Äther (3 χ 100 ml). Die vereinigten Extrakte wäscht man mit Wasser (2 χ 100 ml) und einer gesättigten NaCl-Lösung (100 ml), trocknet mit Na₂SO^ und dampft zur Trockene ein. Den öligen Rückstand vertreibt man mit η-Hexan, wobei man 10,5 g (82 %) farbloses Pulver 1, das bei 113°C schmilzt, erhält.

IR-Spektrum:^™^ 3370, 1715, 1640, 1530, 1280, II60 cm"¹ IIMR-Spektrum: cf^CDC13 1,45 (9H, s, t-Bu-H), 2,73 (4H, s

)» 3,16 (2H, s, CH^CO), 3,76 (2H, d, 6Hz, CH₂N)V 4,90 (1H, m, NH), 5,66 (2H, s, -^₀-). 10,6 (1H, br-s, COOH)

Analyse C₁^₂₁^

C HN

ber.: 62,90 7,92 5,24 %

i 63,13 8,21 i. 5*26 %

- 23 -

509810/1154

[2-(N-t-Butoxycarbonylamino)-methyl-1-cyclohexen-1-yl]-essigsaure (2)

Eine Lösung von 1,33 g (5 mMol) [2-(N-t-Butoxycarbonylamino)-methyl-1^-cyclohexadien-i-ylj-essigsäure (1) in 10 ml 3 %igem Ammoniumhydroxyd wird mit 0,2 g 10 % Palladium auf Aktivkohle bei 2,81 kg/cm² (40 psi) hydriert. In 3 Std. wird eine theoretische Menge Wasserstoff aufgenommen. Den Katalysator entfernt man und das Filtrat wird mit verdünnter HCl auf pH 2 angesäuert und mit 2 χ 50 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit 20 ml Wasser gewaschen, mit Na₂SO^ getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei man 1,34 g eines Öles erhält, das bei mehrtägigem Stehen fest wird. Umkristallisation aus n-Hexan/Äthylacetat ergibt 1,2 g (90 %) Verbindung in Form farbloser Prismen, die bei 118 bis 119⁰C schmelzen.

IR: ^ ™j^o1 3450, 1730, 1660, 1510 cm""¹

IUcLa*

^ 1,58 (9H, s, t-Butyl-H), 1,50 - 1,90 (4H, m, -CH₂-), 1,90 - 2,20 (4H, m, allylisches Methylen-H), 3,18 (2H, s, CH₂-CO), 3,78 (2H, d, 6 Hz, CH₂-N), 5,00 (1H, br-s, NH), 8,98 (1H, br-s, COOH).

Analyse

	62	C	8	H	5	N
ber. ϊ	62	,43	8	,61	5	,20
gef.:	,12	,77	,37

-Zh-

509810/1154

α- [2-( t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienyl ]-essigsaure (3) . -- - - - - . ■ ~ -

Zu einer gerührten Lösung von 8,0 g (0,048 Mol) Verbindung und 3,8 g (0,096 Mol) NaOH in 150 ml Wasser gibt man eine
Lösung von 10,3 g (0,072 Mol) t-Butoxycarbonylazid in 80 ml THF und rührt die Mischung bei Raumtemperatur 18 Std. Das
THF entfernt man unter vermindertem Druck und die zurückgebleibene Lösung wäscht man zweimal mit 100 ml Äther, säuert mit 6n HCl an und extrahiert mit 3 x 100 ml Äther. Die vereinigten Extrakte werden mit 2 χ 100 ml Wasser und 100 ml
einer gesättigten NaCl-Lösung gewaschen, mit Na₂SO^ getrocknet und zur Trockene eingedampft» Den öligen Rückstand vertreibt man mit η-Hexan, wobei man 10,5 g (82 %) Verbindung 3 in Form eines farblosen Pulvers, das bei 113°C schmilzt,
erhält.

IR-Spektrum: Sl^ 3370, 1715, 1640, 1530, 1280, 1160 cm"¹.

^v max

NMR-Spektrum:cf ^PP-S 1,45 (9H, s, t-Bu-H), 2,73 (4H, s,

ppm —

H₂cC ), 3,16 (2H, s, CH₂CO), 3,76 (2H, d, 6Hz, CH₂N),

4,90 (1H, m, NH), 5,66 (2H, s, -^₀J, 10,6 (1H, br-s, COOH) Analyse C

	62	C	7	H	VJI	N
ber.:	63	,90	8	,92	5	,24
gef.:	,13	,21	,26

Natrium-£2-[N-(1-carbäthoxypropen-2-yl)-aminomethyl]-1,4-cyclohexadienyll-acetat (4) . . -

Zu einer gerührten Lösung von 460 mg (0,02 Mol) metallischem Natrium in 100 ml absolutem ÄtOH gibt man 3,34 g (0,02 MpI) Verbindung 2 und 3,1 g (0,024 Mol) Acetessigsäureäthylester

- 25 -509810/1154

und erhitzt die Mischung 4 Std. unter Rühren zum Rückfluß. Die heiße Reaktionsmischung wird filtriert und das Filtrat wird über Nacht in der Kälte gehalten, wobei man 2,0 g Verbindung 4 in Form farbloser Nadeln, die bei 264°C schmelzen, erhält. Das zusätzliche Produkt (3,3 g) wird durch Konzentrieren der Mutterlauge erhalten. Die Gesamtausbeute beträgt 5,3 g (88 %).

IR-Spektrum:^ ⁿ^ 3300, 1635, 1600, 1570, 1300, 1275, 1170,

1090 cm" .

NMR-SpektrumrcT ^D2° 1,23 (3H, t, 7Hz, CHpCH,), 1,96 und 2,25

ppm ^D

(3H, s, C=C-CH₃, eis und trans), 2,70 (4H, s, H₂CCT), 3,04 (2H, s, CH₂CO), 3,66 und 3,95 (2H, s, CH₂-N, eis und trans), 4,07 (2H, q, 7Hz, CH₂CH₅), 4,45 und 4,56 (1H, s =-^^H, eis und trans), 5,76 (2H, s, "T)).

Analyse C₁₂₀^

CHN

ber.:	59	,79	6	,69	4,	64	%
gef.:	59	,69	6	,76	4,	75	%

7-Amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4a)

0 ι

- 26 -509810/1154

M/15

3-Chlor-6-hydroxypyridazin

Eine Mischung von 22,47 g (0,15 Mol) 3,6-Bichlörpyridazin und 50 ml Essigsäure wird 2 Std. unter Rückfluß gehalten. Die Reaktionsmischung wird gekühlt und mit 50 ml Wasser verdünnt und anschließend unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Den Rückstand kristallisiert man aus Wasser, wobei man 15,8 g (80 %) 3-Chlor-6-hydroxypyridazin in Form farbloser Prismen erhält, die bei 133 bis 137°C schmelzen (Literatur 138 bis 140⁰C). Vergl. N, Takabayashi Yakugaku Zasshi, 75, 778 (1955).

3-Hydroxy-6-mercaptopyridazin

Eine Mischung von 2,6 g (0,02 Mol) 3-Chlor-6-hydroxypyridazin und 5,0 g (0,07 Mol) frisch hergestelltes Kaliumhydrogensulfid in 30 ml Äthanol wird in einem verschlossenen Rohr 6 Std. auf 130 bis 140°C erhitzt. Die Reaktionsmischung wird gekühlt und mit 200 ml Wasser verdünnt. Man entfernt durch Destillation unter vermindertem Druck beinahe das gesamte organische Lösungsmittel. Die·zurückgebliebene wäßrige Lösung wird mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 3 angesäuert und mit 6 χ 50 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden zur Trockene eingedampft und der Rückstand wird aus 30 ml Äthanol/Ligroin (1:1) ausgefällt, wobei man 2,2 g (87 %) amorphes 3-Hydroxy-6-mercaptopyridazin vom Schmelzpunkt 158 bis 159°C erhält (Literatur 157 bis 158°C).

Vergl. J. Druey et al., HeIv. Chem. Acta, 37, 121 (1954).

- 27 -

509810/1154

M/15 457

3-Hydroxy-6-mercäptopyridazin

Zu einer Lösung von 5,6 g (0,05 Mol) 3,6-Dihydroxypyridazin in 150 ml Pyridin gibt man portionsweise 2,70 g (0,012 Mol) Phosphorpentasulfid unter heftigem Rühren unter Rückfluß. Das Rückflußkochen wird 1 Std. fortgesetzt und anschließend wird die Reaktionsmischung mit 200 ml Wasser verdünnt und konzentriert, um das Pyridin zu entfernen. Der erhaltene ölige Rückstand wird in Wasser suspendiert und mit Äthylacetat extrahiert. Die organischen Extrakte werden vereinigt und wiederum konzentriert, wobei man ein öliges Material erhält, das mit einer kleinen Menge Wasser verrieben wird, wodurch man 3-Hydroxy-6-mercaptopyridazin in Form eines gelben Peststoffs erhält. Umkristallisation aus Wasser liefert 0,62 g (12 %) des Produkts, das mit dem oben hergestellten Produkt identisch ist.

3,6-Dihydroxypyridazin

Zu einer kochenden Lösung von 315 g (3 Mol) Hydrazindihydrochlorid in 2 Ltr. Wasser gibt man portionsweise 295 g (3 Mol) fein verriebenes Maleinanhydrid unter Rühren zu. Nach beendeter Zugabe wird noch weitere 4 Std. erhitzt und anschließend in einem Kühlschrank über Nacht stehen gelassen, wobei man 285 g (85 %) 3,6-Dihydroxypyridazin in Form massiver Säulen mit Schmelzpunkt > 290⁰C erhält.

3,6-Dichlorpyridazin

Eine Mischung von 150 g (1,33 Mol) 3,6-Dihydroxypyridazin und 250 g Phosphoroxychlorid wird 3 Std. unter Feuchtigkeitsausschluß rückflußgekocht. Den Überschuß an Phosphoroxychlorid entfernt man unter vermindertem Druck und man gießt

- 28 -

509810/1154

den dunklen Rückstand in 1 kg zerstoßenes Eis. Den erhaltenen Niederschlag sammelt man durch Filtrieren. Die zweite Kristallfraktion des Produkts erhält man aus der Mutterlauge durch Extraktion mit fünf 300 ml-Portionen Chloroform, gefolgt von Behandeln mit 1 g Aktivkohle und Eindampfen des Lösungsmittels. Die erste und zweite Kristallfraktion werden vereinigt, in 500 ml Chloroform gelöst und wiederum mit 1 g Aktivkohle behandelt und konzentriert, wobei man 165 g (83 %)3,6-Dichlorpyridazin in Form feiner Nadeln, die bei 60 bis 61⁰C (im verschlossenen Rohr) schmelzen» erhält.

6-Chlor-3-hydroxypyridazin

Eine Suspension von 60 g (0,4 Mol) 3,6^Dichlorpyridazin in 200 ml 10 ^iger Chlorwasserstoffsäure wird 2 Std. unter Rückfluß gehalten, bis man eine klare Lösung erhält. Die klare Lösung wird mit ungefähr 1,5 g Aktivkohle behandelt und filtriert. Das Filtrat konzentriert man unter vermindertem Druck, wobei man 6-Chlor-3-hydroxypyridazin in Form farbloser Nadeln erhält. Die Ausbeute beträgt 49,5 g (98 %). Schmelzpunkt 137 bis 139⁰C

3-Hydroxy-6-mercaptopyridazin

Eine Mischung von 50 g (0,38 Mol) 6-Chlor-3-hydroxypyridazin, 60 g (0,83 Mol) Kaliumhydrogensulfid in 250 ml Äthanol wird 14 Std. in einem 500 ml Autoklaven auf 14O°C unter magnetischem Rühren erhitzt. Der Druck erreicht hierbei 15 bis 20 kg/cm . Die Mischung wird zur Trockene eingedampft und der Rückstand wird in 300 ml Wasser gelöst. Die wäßrige Lösung säuert man mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 3 an und extrahiert mit zehn 200 ml-Portionen Äthylacetat. Die vereinigten Extrakte werden konzentriert, wobei man 34,3 g (70 %) amorphes 3-Hydroxy-6-mercaptopyridazin vom Schmelzpunkt 151 bis 152^OC erhält.

- 29 509810/1154

7-Amino-3-(6-hydroxypyridazin-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Mischimg von 0^60 g (0,0047 Mol) 3-Hydroxy-6-mercaptopyridazin, 1,27 g (0,0047 Mol) 7-Aminocephalosporansäure, 0,78 g (0,0094 Mol) Natriumbicarbonat in 25 ml 0,1 in Phosphatpuffer (pH 6,4) wird 5 Std. bei 60°C behandelt. Die Reaktionsmischung wird filtriert, um eine Spur unlösliches Material zu entfernen und das Filtrat wird mit Essigsäure auf pH 5 eingestellt, wobei man einen braunen Niederschlag erhält, der durch Filtrieren gesammelt, nacheinander mit Wasser und Aceton gewaschen und im Vakuum getrocknet wird, wobei man 1,03 g (71 %) 7-Amino-3-(6-hydroxypyridazin-3-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure vom Schmelzpunkt 290 bis 300⁰C (Zersetzung) erhält.

IR-Spektrum: Sj *?* 1805, 1680, 1650, 1580, 1415 cm"¹

UV-Spektrum:λ ?^a$'NaOH 249 nm ( £ 19 400). max

NMR-Spektrum:<f^D2 ⁰^⁰⁰S 3,22 (1H, d, 19Hz), 3,37 (1H, d,

ppm

14 Hz), 3,65 (1H, d, 14 Hz), 3,72 (1H, d, 19 Hz), 4,90 (1H, d, 4 Hz), 5,30 (1H, d, 4Hz), 6,75 (1H, d, 10 Hz), 7,30 (1H, d, 10 Hz).

Analyse

	41	C	3	H	16	N	1	S	36	%
ber.:	41	,25	3	.75	15	,04	1	8,	03	%
gef.:	,45	,70	,83	8,

7-Amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Mischung von 141 g (0,52 Mol) 7-ACA, 92 g (1,1 Mol) Natrimbicarbonat und 73 g (0,57 Mol) 3-Hydroxy-6-mercaptopyridazin in 1,5 Ltr. 0,1 m Phosphatpuffer (pH 6,4) wird unter einer Stickstoffatmosphäre 4 Std. auf 60 bis 65°C er-

- 30 509810/1154

M/15 457

hitzt. Die heiße Mischung wird mit 2 g Aktivkohle behandelt und filtriert. Das FiItrat wird auf Raumteperatür gekühlt und mit Eisessig auf pH 4,5 eingestellt, wobei der Niederschlag erhalten wird, der durch Filtrieren gesammelt, mit 1 Ltr. Aceton gewaschen und an der Luft bei Raumtemperatur getrocknet wird, wobei man 125 g (70 %) 7-Amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure mit Schmelzpunkt 2^0 bis 25O⁰C (Zersetzung) erhält.

509810/1154

Μ/15 457

7-Amino»3- (tetrazol [1,5-ΐ> ]pyridazin-6-yl-thiome thyl-3-cephem-4-carbonsäure (4b)

/,L-Ns. O

CO₂H

Herstelltmg von 6-Mercaptotetrazol[4,5--'b]pyridazin

Il

Il

Ν—Ή

ho/ V-OH

N—N

NHUNH —s—

U NaNO,

^-NHNH,

^ι2

Cl

Ii

Alk. KSH

<Ρ

- 32 -509810/115A

3,6-Dihydroxypyridazin (9)

Zu einer kochenden Lösung von 315 g (3 Mol) Hydrazindihydrochlorid in 2 Ltr. Wasser gibt man portionsweise 295 g (3 Mol) feinverriebenes Maleinanhydrid 8 unter Rühren zu. Nach beendeter Zugabe wird weitere 4 Std. erhitzt und anschliessend läßt man über Nacht in einem Kühlschrank stehen, wobei man 285 g (85 %) Verbindung 9 in Form massiver Säulen mit Schmelzpunkt >29O°C erhält.

3,6-Dichlorpyridazin (10)

Eine Mischung von 150 g (1,33 Mol) Verbindung 9 und 250 g Phosphoroxychlorid wird 3 Std. unter Feuchtigkeitsauschluß rückflußgekocht. Den Überschuß an Phosphoroxychlorid entfernt man unter vermindertem Druck und den dunklen Rückstand gießt man auf 1 kg zerstoßenes Eis. Den erhaltenen Nieder- · schlag sammelt man durch Filtrieren. Die zweite Kristallfraktion des Produktes wird aus der Mutterlauge durch Extraktion mit fünf 300 ml-Portionen Chloroform, gefolgt von Behandeln mit 1 g Aktivkohle und Eindampfen des Lösungsmittels, erhalten. Die erste und zweite Kristallfraktion werden vereinigt, in 500 ml Chloroform gelöst und wiederum mit 1 g Aktivkohle behandelt und konzentriert, wobei man 165 g (83 %) Verbindung 10 in Form feiner Nadeln, die bei 60 bis 61⁰C (in einem verschlossenen Rohr) schmelzen, erhält.

3-Chlor-6-hydrazinpyridazln (11)

Eine Mischung von 40 g (0,27 Mol) 3,6-Dichlorpyridazin (10) und 40 ml 80 %±ges Hydrazinhydrat in 80 ml Äthanol wird 1 Std, unter Rückfluß gehalten. Die Reaktionsmischung wird zur Trockene eingedampft und der Rückstand wird aus Benzol· umkristallisiert, wobei man 39 g (100 %) Verbindung 11 erhält, die bei 114 bis 115⁰C schmilzt.

- 33 509810/1154

M/15 457

6-Chlortetrazol[4,5-b]pyridazin (12)

Zu einer Lösung von 25,7 g (0,174 Mol) Verbindung 11 in 100 ml 15 9oiger Essigsäure gibt man tropfenweise eine Lösung von ¹3,8 g (0,2 Mol) Natriumnitrit in 50 ml Wasser unter heftigem Rühren bei 5 bis 10⁰C zu. Man rührt noch eine weitere Stunde bei derselben Temperatur. Der Niederschlag, der sich abscheidet, wird filtriert, mit 20 ml Wässer gewaschen und an der Luft getrocknet, wobei man 17,02 g Verbindung 12 erhält. Weiteres Produkt erhält man durch Eindampfen des Filtrats. Gesamtausbeute 18,32 g (64 %). Schmelzpunkt 104 bis 105°C.

6-Mercaptotetrazol[4,5-b]pyridazin (13)

Eine Mischung von 21,3 g (0,137 Mol) Verbindung 12 und 20 g ( 0,25 Mol) Kaliumhydrosulfid in 200 ml Äthanol wird 2 Std. unter Rückfluß gehalten und zur Trockene eingedampft. Den Rückstand löst man in 100 ml Wasser und filtriert, um eine kleine Menge unlösliches Material zu entfernen. Das Filtrat säuert man mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 1 an, um Verbindung 13 in Form farbloser Nadeln auszufällen, die durch Filtrieren gesammelt, mit 20 ml Wasser gewaschen und getrocknet werden. Ausbeute 9,80 g (47 %). Schmelzpunkt 140 bis 141⁰C (Zersetzung).

IR-Spektrum :>)??£ 2500, 1540, 1445, 1295, 840 cm"¹

111 CiJk

NMR-Spektrum:cf^D2^0+K2^C03 7,44 (1H, d, 10 Hz, Pyridazin-H),

PPm
7,77 (1H, d, 10 Hz, Pyridazin-H).

Analyse C^H^N^S:

CHNS ber.: 31,37 1,97 45,72 20,94 5

gef.: 31,52 1,70 46,01 20,95 5 31,66 1,69 46,01

- 34 509810/1154

^%α*ν 244231) 2 μ/15 457

Herstellung von 7-Amino-3-(tetrazolt4,:5_j-b3pyridazin^6-yl^ ; thiomethylj-3-cephem-4~carbonsäure __

-CIU-O-COCH, + HS

CO₂H

7-ACA

7-Amino-3-(tetrazol[4,5-b]pyridazin-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4b) -

(I) Zu einer heißen Lösung (5O-6O°C) von 9,56 g (0,062 Mol) Verbindung 13 und 10,42 g (0,124 Mol) Natriumbicarbonat in 300 ml Wasser gibt man vorsichtig 16,86 g (0,062 Mol) 7-ACA und erhitzt die Mischung 30 Min. auf 80 bis 85°C. Ungefähr 7 g Natriumbicarbonat werden zu der Reaktionsmischung zugesetzt, um unlösliches Material zu lösen. Die Lösung wird mit Aktivkohle behandelt, filtriert und das Filtrat wird mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 5 angesäuert. Den Niederschlag sammelt man durch Filtrieren, wäscht mit Äther, trocknet an der Luft und schließlich im Vakuum Über P₂O,-, wobei man 14,47 g (64 %) Verbindung 4b vom Schmelzpunkt 248 bis 25O°C (Zersetzung) erhält.

- 35 509810/1154

(II) Eine gerührte Lösung von 16,8 g (0,11 Mol) Verbindung und 18,48 g (0,22 Mol) NaHCO₃ in 1 Ltr. 0,1 m Phosphatpuffer (pH 6,4) wird auf 50⁰C erhitzt und zu der Lösung gibt man portionsweise 30 g (0,11 Mol) 7-ACA. Die Mischung wird 2,5 Std. auf 80⁰C erhitzt, wobei während dieser Zeit noch unlösliches Material zurückbleibt. Die Reaktionsmischung wird auf Raumtemperatur gekühlt und der Niederschlag 4b wird durch Filtrieren gesammelt, mit 200 ml Wasser gründlich gewaschen und an der Luft getrocknet.

Man erhält zusätzliche Verbindung 4b aus dem Filtrat und den Waschflüssigkeiten, indem man mit verdünnter HCl auf pH 5 ansäuert. Gesamtausbeute 32,9 g (83 %). Schmelzpunkt 245 "bis 250⁰C (Zersetzung).

1800, 1615, 1538, I36O cm"¹

UV-Spektrum:X^ ^NaHC03 237 nm (£19 500),

275 nm (£ 12 000), 310 nm (sh) (e 5700).

NMR-Spektrum:cf^D2^0+K2^C03 3,35 (1H, d, 18 Hz, 2-H),

ppm

3,76 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 4,00 (1H, d, 10 Hz, 3-CH₂),

4,48 (1H, d, 10 Hz, 3-CH₂), 4,93 (1H, d, 4 Hz, 6-H),

5,32 (1H, d, 4 Hz, 7-H), 7,46 (1H, d, 10 Hz, Pyridazin-H),

8,18 (1H, d, 10 Hz, Pyridazin-H).

Analyse u.Mpjxi.aJMnvJ-rOp:

CH NS

ber.: 39,44 3,03 26,83 17,55 % gef.: 39,19 2,71 26,84 17,35 %

- 36 -

509810/1154

7-Amino-3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl-thibmethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4d)

N -N-

2-Mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazol

Literatur: Vergl. US-PS 3 516 997 (1970);

J. Antibiotics, 2£, 131-136 (1970).

¹¹»5 g (0,1 MoI) 2-Amino-5-methyl-1,3,4-thiadiazol werden sorgfältig mit 32 g(0,45 Mol) Natriumnitrat verrieben und langsam zu 1βΟ ml 48 %iger HBr, die 50 mg gepulvertes Kupfer enthält, bei -1O°C unter Rühren zugesetzt. Nach beendeter Zugabe wird die Lösung 1 Std. bei -5°C und anschließend 11/2 Std. bei 20°C gerührt. Den pH stellt man durch Zugabe von 50 % KOH auf 9,5 ein und erhitzt die Lösung auf 60°C. Bei 60⁰C wird der pH durch Zusatz von 50 % KOH auf 9,5 neu eingestellt. Die Lösung wird gekühlt und filtriert. Den Niederschlag löst man in Äther und das Filtrat wird mit 2 χ 200 ml Äther extrahiert. Die vereinigten Atherlösungen werden über Natriumsulfat getrocknet und zur Trockene eingedampft. Das Produkt kristallisiert man aus Benzol-"Skellysolve B" um. Ausbeute 12 g. Schmelzpunkt 105 bis 107°C.

12 g (0,07 Mol) 2-Brom-5-methyl-1,3,4-thiadiazol und 5 g (0,07 Mol) Thioharnstoff werden in 40 ml 100 #igem Äthanol gelöst und 1 1/2 Std. auf einem Dampfbad unter Rückfluß gehalten. Diese Lösung gibt man zu 4,5 g (0,08 Mol) KOH in 65 ml Wasser und erhitzt die Mischung 5 Min. zum Sieden. Das

- 37 -■ 509810/1154

Äthanol wird unter Vakuum entfernt und der pH der wäßrigen Lösung wird durch Zusatz von 3n HCl auf pH 3 eingestellt. Das Produkt kristallisiert aus und wird nach 1-stündigem Kühlen auf O⁰C durch Filtrieren gesammelt, mit kaltem V/asser gewaschen und aus 100 % Äthanol umkristallisiert. Ausbeute 5 g. Schmelzpunkt 186 bis 187°C

Analyse C₃H^N₂S₂:

CHNS

ber.: 27,25 3,05 21,19 48,51 % gef.: 27,20 3,34 21,18 48,48%

7-Amino-3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl-thiomethyl)-3-cephem-4- carbons äure .

Zu einer gerührten Suspension von 2,72g (0,01 Mol) 7-ACA in 50 ml 0,1 m Phosphatpuffer von pH 6,4 gibt man 1,68 g (0,02 Mol) NaHCO₃, gefolgt von 1,45 g (0,011 Mol) 2-Mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazol und man erhitzt die Mischung 5 Std. unter Rühren auf 60⁰C. Die erhaltene Aufschlämmung wird anschließend im Verlauf von 1 Std. auf ungefähr 22°C abkühlen gelassen. Den kristallinen Niederschlag sammelt man durch Filtrieren, wäscht mit Wasser und trocknet an der Luft. Ausbeute 1,3 g; Zersetzungspunkt 206°C. Bei 10-fachem Ansatz erhält man 18,0 g.

Analyse C₁

	C	H	S
ber.:	38,37	3,52	27,96
gef.:	39,06	3,91	26,67

- 38 -

509810/1154

7-Amino-3-(1-methyltetrazol-5-yl-thiomethyl) carbonsäure (4c)

Die obige Arbeitsweise wird wiederholt, wobei man 1-Methyl-1,2,3,4-tetrazol-5-thiol anstelle des Thiadiazols verwendet. Erhalten werden 25 g (76 %) 7-Amino-3-(1-methyl-1,2,3,4-tetrazol-5-thiomethyl)-A -cephem-4-carbonsäüre. Die Herstelliing dieser Verbindung ist auch in der US-PS 3 516 997 in Spalte 6 unter der Überschrift "Preparation 7" beschrieben.

7-Amino-3-(3-hydroxypyridazin[3.2-c]-s-triazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4e)

6-Mercapto-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b3pyridazin-3--on

Eine Mischung von 1,70 g (0,01 Mol) 6-Chlor-2,3-dihydro-striazol[4,3-b]pyridazin-3->on (P. Francavilla und F.Lauria, J. Het. Chem., 8, 415 (1971)) und 1,44 g (0,02 Mol) Kaliumhydrosulfid in 30 ml Äthanol wird 8 Std. in einem verschlossenen Rohr auf 140⁰C erhitzt. Nach dem Kühlen gibt man 50 ml

- 39 5098107 115 4 ■

¥asser zur Reaktionsmischung zu und entfernt eine kleine Menge unlösliches Material durch Filtrieren. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck konzentriert, das Konzentrat wird mit verdünnter HCl auf pH 2 angesäuert, wobei ein gelber Niederschlag von 6-Mercapto-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]-pyridazin-3-on erhalten wird, der durch Filtrieren gesammelt, mit 10 ml ¥asser gewaschen und im Vakuum über Pp⁰K g^e-trock~ net wird. Ausbeute 1,43 g (84 %). Schmelzpunkt >300°C.

2500, 1710, 1495, 1350 cm"¹.

UV-Spektrum: X^ ^NaHC03 261 nm (8 9000),

320 nm (S 2700).

NMR-Spektrum: cf ^VS _{6>96 (1H> d> 10 HZf} ^ _{oder Q} 7,12 (1H, d, 10 Hz, 7-H oder 8-H).

Analyse C₅H. IiL OS:

	C	71	2	H	33	N	1	S	07
ber.:	35,	17	2	,40	33	,31	1	9,	76
gef.:	35,		,28	,38	9,

7-Amino-3-[2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure (4e)

Man gibt 1,36 g (5 mMol) 7-ACA bei 5O⁰C zu einer Lösung von 0,84 g (5 mMol) 6-Mercapto-2,3-dihydro-2-triazol[4,3-b]-pyridazin-3-on und 0,84 g (10 mMol) Natriumbicarbonat in 20 ml 0,1 m Phosphatpufferlösung (pH 6,4) und erhitzt die Mischung 2 Std. auf 70⁰C. Eine kleine Menge unlösliches Material wird durch Filtrieren entfernt und Ansäuern des Filtrats mit verdünnter HCl auf pH 5 liefert das Produkt 4e, das durch Filtrieren gesammelt, mit 30 ml Wasser gewaschen und im Vakuum über P₂O- getrocknet wird. Die Ausbeute an 7-Amino-3-[2,3-dihydro-3-triazol[4,3-b]pyridazin-3-

- 40 509810/1154

on-6-yl-thiomethyl]~3-cephem-4-carbonsäure beträgt 1,25 g (66 %). Schmelzpunkt > 300°C.

IR-Spektrum:N ^J ¹805, 1720, 1620, 1550 cm"¹ UV-Spektrum; \l% ^NaHC03 257 mn (£ 17 700).

NMR-Spektrum: J^⁰"¹^⁰⁰? 3,40 (1H, d, 20 Hz, 2-H), 3,78

ppm
(1H, d, 20 Hz, 2-H), 4,00 (1H, d, 13 Hz, 3-CH₂), 4,35 (1H, d, 13 Hz, 3-CH₂), 5,02 (1H, d, 4 Hz, 6-H), 5,4O (1H, d, 4 Hz, 7-H), 6,70 (1H, d, 9 Hz, Pyridazin-H), 7,40 (1H, d, 9 Hz, Pyridazin-H).

Analyse C₁₁₂g^₂₂

C H N S

ber.: 39,19 3,54 21,09 16,09

: 39,40 3,39 20,36 15,89

7-Amino-3-(pyrido[2,1-c]-s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4f)

Zu einer heißen (60°C) Lösung von 1,51 g (10 mMol) 3-Mercapto-s-triazol[4,3-a]pyridin (D.S. Tarhell et al., J.Am.. Chem. Soc. 70, 1381 (1948)) und 1,68 g (20 mMol) NaHCO, in 50 ml 0,1 m Phosphatpuffer von pH 7,4 gibt man portionsweise 2,72 g (10 mMol) 7-ACA und erhitzt die Mischung 30 Min. auf 80 bis 85°C. Die Reaktionsmischung wird mit Aktivkohle behandelt, und das Filtrat v/ird mit verdünnter HCl auf pH· .5 angesäuert, wobei man 7-Amino-3-(s-triazol[4,3-a]pyridin-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure erhält, die durch

- 41 509810/1154

Filtrieren gesammelt, mit 10 ml Wasser gewaschen und im Vakuum über P₂°5 getr⁰⁰¹⁰¹*³* wird. Ausbeute 1,40 g (39 %). Schmelzpunkt 215 bis 220⁰C (Zersetzung).

IR-Spektrum:^?^ 1805, 1620, 1530, 1410, 1545 cm"¹ UV-Spektrum: \IJ° ^NaHC03 280 nm (£13 200).

NMR-Spektrum:ci^D2^0+K2^C03 3,25 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 3,63

Ppm
(1H, d, 13 Hz, 3-H), 3,68 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 4,18 (1H, d,

13 Hz, 3-H), 4,7-5,3 (2H, m, 6-H und 7-H). Analyse Cj ^ILj ,N,-0,S₂:

CHNS

ber.: 46,27 3,61 19,27 17,65 %

gef.: 45,81 3,58 18,21 17,08 % 45,74 3,69 18,13

7-Amino-3-pyridazin[2-1-c]s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4g)

3-Mercapto-s-triazol[4,3-b]pyridazin

Eine Mischung von 1,20 g (8 mMol) 3-Chlor-s-triazol[4,3-b]-pyridazin (P. Francavilla und F. Lauvia, J. Het.Chem., 8, 415 (1971)) und 1,20 g (16 mMol) KSH in 20 ml Äthanol wird 8 Std. im verschlossenen Rohr auf 130°C erhitzt. Nach dem Kühlen wird die Mischung zur Trockene eingedampft und der Rückstand wird in 100 ml Wasser gelöst, mit Aktivkohle be-

- 42 -509810/1154

handelt, mit verdünnter HCl auf pH 1 angesäuert, um 3-Mercapto-s-triazol[4,3-b]pyridazin auszufällen, das gesammelt, mit 10 ml Wasser gewaschen und im Vakuum über P₂O₅ getrocknet wird, wobei man 0,75 g (62 %) Produkt vom Schmelzpunkt 260 bis 27O⁰C (Zersetzung) erhält.

IR-Spektrum:^ ^ 3080, 2940, 2760, 1620, 1500, 1280, 1055 cm"¹

NMR-Spektrum:d" ^°"^d6 6,99 (1H, d-d, 4 und 10 Hz, 7-Ή), ■ 7,67 (1H, d-d, 2 und 10 Hz, 8-H), 8,15 (1H, d-d₉ 2 und 4 Hz, 6-H), 12,3 (1H, br-s, verschwindet-bei Zusatz von D₂O).

Analyse C₅H₄N₄S-

	C	3	Η"	N
ber.:	37,26	2	,13	34,76
gef.:	37,35 .	,32	34,81

7-Amino-3-(s-triazol[4.3-b]pyridazin-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4g)

Man gibt 1,36 g (5 mMol) 7-ACA portionsweise bei 40 bis 5O⁰C zu einer Lösung von 0,68 g (4,5 mMol) 3-Mercapto-striazol[4,3-bJpyridazin und 0,84 g (10 mMol) NaHCO, in 20 ml 0,1 m Phosphatpuffer von pH 7,4. Die Mischung wird 40 Min. auf 80 bis 85⁰C erhitzt, mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt und mit verdünnter HCl auf pH 4 angesäuert, wobei 7-Amino-3-(s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure ausfällt, die gesammelt, mit 20 ml Yfasser gewaschen und im Vakuum über P₂O₅ getrocknet wird, wobei man 0,81 g (49 %) Produkt vom Schmelzpunkt >300⁰C erhält.

IR-Spektrum: >} ^ 1705, 1620, 1540, 1415, 1350 cm"*¹.

UV-Spektrum: X ¹^ ^NaHC03 275 nm (6 13 100).

- 43 509810/1 154

NT4R-Spektrum:d"^D2^0+K2^C03 3,35 (1H, d, 18 Hz, 2-H), 3,

. ppm
(1H, d, 18 Hz, 2-H), 4,80 (1H, d-d, 4 und 2 Hz, 6-H), 5,24 (1H, d, 4 Hz, 7-H), 7,1-8,6 (3H, m, Pyridazin-H).

Analyse C₁3i2632 ^

CHNS

her.: 40,83 3,69 21,96 16,78% gef.: 41,15 3,24 20,37 17,90%

7-Amino-3-(1,2,3-triazol-5-yl-thiomethyl)^-cephem^-carbonsäure (5h)

Il Il

COOH H

Synthese von Kalium-1,2,3-triazol-5-thiolat

M " *-* ^0H"

0C-N=C=S + CH₉N₀-*/ \\ ^

^ * ^S^^NHCOßf

I63.I9 42.04 205.24 SH SK

ΙΓ\

H H

101.13 139.23

- 44 -

509810/1154

Die Synthese des Thiols wird nach einem Verfahren durchgeführt, das im wesentlichen mit dem in der Literatur beschriebenen Verfahren von J. Goerdler und G. Gnad, Chem.Ber. 99, 1618 (1966) identisch ist.

5-Benzamido-1,2,3-thiadiazol

Zu einer gerührten Lösung von 50,6 g (3"1O mMol) Benzoylisothiocyanat in 400 ml handelsüblichem wasserfreiem Äther, die unter einer Stickstoffatmosphäre bei O⁰C gehalten ist, gibt man tropfenweise unter heftigem Rühren 453 ml (310 mMol) 0,685 η ätherisches Diazomethan. Nach beendeter Zugabe wird die Mischung 1 Std. bei O⁰C gerührt, der Feststoff wird durch Filtrieren gesammelt und im Vakuum getrocknet. Der Schmelzpunkt des so erhaltenen rohen Materials (2.3,3 g) wird etwa im Bereich von 232 bis 257°C beobachtet. Goerdler beobachtete einen Schmelzpunkt von 267°C für das reine Material. Eine kleine zweite Kristallfraktion (2,1 g) wird durch Eindampfen der Mutterlauge im Vakuum erhalten. Die Gesamtausbeute beträgt somit 40 %.

1_>2,3-Triazol-5-thiol

Eine Lösung von 8,2 g (40 mMol) der obigen Benzamidoverbindung in 80 ml (160 mMol) 2n Natriumhydroxyd wird in einer Stickstoffatomosphare 24 Std. unter Rückflußtemperatur erhitzt. Die Lösung wird in Eis auf O⁰C gekühlt und 26 ml konzentrierte Chlorwasserstoffsäure werden zugesetzt, während ein kontinuierlicher Stickstoffstrom durch die Lösung durchgeleitet wird. Die ausgefallene Benzoesäure wird durch Filtrieren gesammelt, das Filtrat wird mit Natriumchlorid gesättigt und die abgeschiedene zusätzliche Benzoesäure wird durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wird sofort mit Äthylacetat extrahiert, der Extrakt wird mit gesättigter Salzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum

- 45 -509810/1154

eingedampft. Das zurückgebliebene viskose Öl wird sofort im Vakuum verdampfend destilliert (7O~75°/O,OO1 mm), wobei man 2,84 g (70 %) eines Öls erhält, das sich sofort verfestigt (Schmelzpunkt 52 bis 59⁰C; Goerdler berichtete einen-Schmelzpunkt von 60°C).

Kalium-1,2,3-triazol-5-thiolat

Zu einer Lösung von 2,84 g (28,1 mMol) des obigen Thiols in 28 ml absolutem Äthanol gibt man 14,5 ml 1,93 η alkoholische Kaliumhydroxydlösung. Die Lösung wird dann mit v/asserfreiem Äther verdünnt, bis Kristallisation des Salzes beendet ist. Der Feststoff wird durch Filtrieren gesammelt, mit Äther gewaschen und im Vakuum getrocknet. Das auf diese Weise erhaltene Salz (3,65 g, 93 %) besitzt einen Schmelzpunkt von 225°C unter Zersetzung.

7-Amino-3-[S-(1.2,3-triazol-5-yl)-thiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure (4h)

10 g (0,075 Mol 5-Mercapto-1,2,3-triazol-kaliumsalz wird zu einer gerührten Aufschlämmung von 19g (0,07 Mol) gereinigte 7-Aminocephalosporansäure und 5,9 g (0,07 Mol) NaHCO-, in 350 ml 0,1 m Phosphatpuffer (pH 6,4) gegeben und die Mischung wird unter einer Stickstoffatmosphäre 3 1/2 Std. unter Rühren auf 55⁰C erhitzt. Die erhaltene Lösung wird auf 22⁰C gekühlt und der pH wird mit 40 % ^H3^P04 ^au^ 5,5 eingestellt. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert, mit 50 ml kaltem Wasser gewaschen und an der Luft getrocknet. Die Ausbeute an 7-Amino-3-[S-(1,2,3-triazol-5-yl)-thiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure beträgt 8 g; Zersetzungspunkt 230⁰C. Die IR-Analyse zeigt etwas Zersetzung des ß-Lactamrings, jedoch wird das Produkt, so wie es ist, für

- 46 509810/1154

die nächste Stufe verwendet. Analyse CS

	C	39	3	H
ber. ι	38,	36	3	,54
gef.:	38,		,78

Reinigung von 7-Amino-3-(1_?2,3-triazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4h)

Man bringt 16,1 g rohe 7-Amino-3-(1,2,3-triazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure, die angenähert 20 Mol-% 7-Aminocephalosporansäure als Verunreinigung enthält, mit 600 ml Methanol und 40 ml konzentrierterHCl in Lösung. Nach Kohlenstoffbehandlung wird die Lösung mit 1,5 Ltr. Eiswasser verdünnt und einmal mit Äthylacetat extrahiert. Die wäßrige Phase wird unter vermindertem Druck konzentriert, um Methanol zu entfernen. Das kalte wäßrige Konzentrat wird dann langsam mit 20 % Natriumhydroxyä auf pH 4,0 eingestellt, wodurch das Produkt zur Kristallisation gebracht wird. Das. Produkt sammelt man durch Filtrieren, wäscht mit Wasser und Methanol und trocknet im Vakuum über Phosphorpentoxyd. Ausbeute 11,4 g. Das NMR-Spektrum zeigt an, daß dieses Produkt ungefähr 7 Mol-90 7-Aminocephalosporansäure als Verunreinigung enthält.

Das obige Reinigungsverfahren wird bei 11,4 g des Produkts wiederholt, wobei man 425 ml Methanol, 28 ml konz. HCl und 1 Ltr. Eiswasser verwendet, wobei man 8,0 g Produkt erhält. Das NMR-Spektrum steht völlig in Obereinstimmuhg mit dem gewünschten Produkt und zeigt kei'ne Spur von 7-Aminocephalosporansäure als Verunreinigung an.

Analyse C_1nH₁₁-N₁-O^S,,:

^D ° ^D C HN H₂O

ber.: 38,42 3,55 22,40

gef.: 39,06 3,56 22^5 1,78

38,53 3,51 21,60

509810/ΤΓ5 4

7-AmIiIO-J-[2-(1 _?3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl ]-3-cephem-4 carbonsäure (4ij

N-

-S-k .CH

COOH

2-Mercapto-1,3,4-thiadiazol

Das Verfahren von J. Goerdeler, J. Ohm und 0* Tegtmeyer, Berichte 89, 1534 (1956) wird angewendet. Zu einer Lösung von 160 ml 48 %iger Bromwasserstoffsäure und 100 mg pulverförmigem Kupfer bei -7⁰C gibt man alternierend langsam 13,6 g (0,1 Mol) 2-Amino-1,3,4-thiadiazol (Eastman) und 32 g Natriumnitrit in kleinen Portionen im Verlauf von 1/2 Std. Die Mischung wird 11/2 Std. bei O⁰C und 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wird die Mischung mit 50 % Kaliumhydroxyd auf pH 9,5 neutralisiert. Die Mischung wird filtriert und das Filtrat wird mit Äther 6 Std. kontinuierlich extrahiert. Den Äther verdampft man bei I5 mm (25°), wobei man einen Feststoff erhält, der in 40 ml Äthylalkohol gelöst wird und mit 5 g Thioharnstoff behandelt wird. Die Lösung wird 11/2 Std. zum Rückfluß erhitzt. Eine Lösung von 4,5 g Kaliumhydroxyd in 65 ml Wasser wird zugegeben und die Mischung wird weitere 11/2 Std. unter Rückfluß erhitzt. Den Alkohol verdampft man bei 15 mm (32°) und der wäßrige Rückstand wird mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure auf pH 3,5 neutralisiert. Nach 2-stündigem Kühlen in einem Eisbad sammelt man 3,5 g 2-Mercapto-1,3,4-thiadiazol in Form gelber Kristalle mit Schmelzpunkt 125 bis 127⁰C.

Die IR- und NMR-Spektren stehen im Einklang mit der Struktur.

- 48 -

5 09 810/1154

7-Amino-3-[2-(1 - 3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure (4i;

Zu einer Suspension von 8,1 g (0,03 Mol) 7-Aminocephalosporansäure und 3,5 g (0,03 Mol) 2-Mercapto-1,3,4-thiadiazol in 200 ml 0,1 m Phosphatpuffer (pH 6,5) gibt man unter Rühren 5,4 g (0,064 Mol) Natriumbicarbonat. Die Mischung wird unter Stickstoff bei 55⁰C gerührt und der gesamte Feststoff wird gelöst. Man rührt weitere 3 Std. und kühlt die Lösung auf 5°C und stellt mit Eisessig auf pH 5 ein. Die Mischung wird 2 Std. stehen gelassen und das Produkt, 7-Amino-3-[2-(1,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure, wird gesammelt und es wiegt 9 g» Schmelzpunkt >140°C (langsame Zersetzung). Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur.

7-Amino-3-[2-(5-hydroxymethyl-i ₉ 3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure (4j)

N N

COOH

1-Hydroxyacetylthiosemicarbazid

Eine Mischung von 18,2 g (0,2 Mol) Thiosemicarhazid und 30,4 g (0,4 Mol) Glykolsäure wird zusammen 2 Std. unter gutem Rühren auf 80 bis 90°C erhitzt. Die Mischung wird auf Raumtempera tur gekühlt und mit kaltem absolutem Alkohol gewaschen. Der Feststoff wird gesammelt und an der Luft getrocknet (Gewicht 40 g). Das Produkt wird aus 100 ml kochendem 50 tigern Alkohol umkristallisiert, wobei man 23 g kristallines 1-Hydroxyacetylthiosemicarbazid vom Schmelzpunkt 189 bis 190⁰C erhält.

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Analyse C,EJ!T,OS:

CHNS ber.: 24,18 4,74 28,21 21,51 % gef.: 24,08 4,50 27,67 21,35 %

Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur.

2-Acetoxymethyl-5-amino-1,3,4-thiadiazol

Eine Mischung 22,4 g (0,15 Mol) 1-Hydroxyacetylthiosemicarbazid und 60 ml Acetylchlorid wird 2 Std. bei Raumtemperatur gerührt und anschließend auf 40⁰C erwärmt, bis der gesamte Feststoff sich gelöst hat (ungefähr.2 Std.). Das Acetylchlorid wird unter vermindertem Druck (4O°/15 min) entfernt und der Rückstand wird mit 100 ml Eiswasser gerührt. Die Mischung wird mit 10 % KOH auf pH 9,2 eingestellt und das Produkt wird gesammelt. Man kristallisiert den rohen Feststoff aus absolutem Alkohol um, wobei man nach Lufttrocknung 6 g kristallines 2-Acetoxymethyl-5-amino-1,3,4-thiadiazol vom Schmelzpunkt I9I bis 192⁰C erhält.

Analyse y^₂

CHN ber.: 34,63 4,07 24,26 % gef.: 35,16 4,35 24,38 %

2-Hydroxymethyl-5-mercapto-1,3»4-thiadiazol

Man gebraucht das Verfahren von Goerdler et al., wobei man 34,6 g (0,2 Mol) 2-Acetoxymethyl-5-amino-1,3,4-thiadiazol und 64 g (0,9 Mol) Natriumnitrit in 320 ml 48 %iger Brom wasserstoff säure und 0,1 g Kupferpulver verwendet. Die Brom verbindung wird mit 7_t6 g (0,1 Mol) Thioharnstoff und 11,2 g

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Kaliumhydroxyd in 25 ml Wasser behandelt. Nach dem Ansäuern mit 6n Chlorwasserstoffsäure wird das Mercaptan in Äthylacetat extrahiert und mit 17 g Kalium-2-äthylhexanoat behandelt. Das Kaliumsalz wird gesammelt, mit Äthylacetat gewaschen und getrocknet (Gewicht 12,2 g). Das Salz wird aus AcetonA^asser umkristallisiert, wobei man 7,6 g kristallines Kalium-2-hydroxymethyl-5-mercapto-1,3,4-thiadiazol vom Schmelzpunkt 130 bis 131⁰C erhält.

Analyse C₃H

	17	C	2	H	13	N	%
ber.:	17	,64	2	,46	13	,70	%
gef.:	,81	,43	,66

Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur.

7-Amino-3-[2-(5-hydroxymethyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure (4j)

Das verwendete.Verfahren ist dasselbe wie das Verfahren für das unsubstituierte Thiadiazol, wobei man 2,25 g (0,012 Mol) Mercaptan, 3,3 g (0,012 Mol) 7-Aminocephalosporansäure und 1 g (0,012 Mol) Natriumbicarbonat in 100 ml 1 m Phosphatpuffer verwendet, wobei man 3,15 g gelb-braune, feste 7-Amino-3-[2-(5-hydroxymethyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure mit Schmelzpunkt I70 bis 175°C (Zersetzung) erhält. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur.

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Beschreibung der bevorzugten Ausführungsformen

Beispiel 1

^L_n J_ch₂__sv/

0* ^

CO₂H

6a

7-[«-(2-t-Butoxycarbonylaminomethyl-i-cyclohexenyl)-acetamido J-3-(6-hydroxypyridazin-3-yl-thiomethyl)^-cephem^- carbonsäure (5a)

Eine Mischung von 1,08 g (4 mMol) Verbindung 2, 0,74 g (4 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 0,82 g (4 mMol) DCC in 20 ml THF wird 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt und filtriert, um den ausgefallenen Dicyclohexylhamstoff zu entfernen, der mit 10 ml THF gewaschen wird. Das vereinigte FiItrat und die Waschflüssigkeiten werden auf 5⁰C gekühlt und auf einmal in eine kalte Lösung von 1,02 g (3 mMol) 7-Amino-3-(6-hydroxypyridazin-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure und 0,81 g (8 mMol) Triäthylamin in 20 ml 50 %igem wäßrigem THF gegossen. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und mit 2 χ 50 ml Äther gewaschen. Die wäßrige Schicht wird mit verdünnter HCl auf pH 2 angesäuert, um rohe Verbindung 5a auszufällen, die in 100 ml THF gelöst und filtriert wird, um unlösliches Material zu entfernen. Das FiItrat wird mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Eindampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck liefert Verbindung 5a als öligen Rückstand.,

- 52 509810/1154

der durch Verreiben in 100 ml Äther verfestigt wird. Ausbeute 0,84 g (47 %). Schmelzpunkt 185 bis 195°C (Zersetzung)

IR-Spektrum:\)

"¹

3250, 1780, 1660, 1580, 1530, 1370, 1250,

1160 cm

NMR-Spektrum: cf p^°"^d6 1,40 (9H, s, t-Bu-H), 5,13 (1H, d, 4 Hz, 6-H), 5,70 (1H, d-d, 4 und 8 Hz, 7-H), 6,88 (1H, d, 10 Hz, Pyridazin-H), 7,45 (1H, d, 10 Hz, Pyridazin-H)_r 9,0 (1H, d, 8 Hz, CONH), 13,2 (1H, br-s, -OH).

Analyse C₂₆H₃₅N₅O₇S₂*1/2

ber.

C H- N S

5.1,98 5,70 11,65 10,67 %

51,53 5,63 11,28 11,48 %

51,56 · 5,80 11,34 11,31 %

7-[a-(2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl)-acetamido]-3-(6-hydroxypyridazin-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbönsäure (6a)

Zu 1,5 ml Trifluoressigsäure gibt man 0,80g (1,4 mMol) Verbindung 5a und rührt die Mischung 30 Min. bei Raumtemperatur und verdünnt mit 50 ml Äther, um das Trifluoracetat von Verbindung 6a auszufällen, das durch Filtrieren gesammelt und in 2 ml Wasser aufgeschlämmt wird. Die Mischung wird mit Ammoniumhydroxyd auf pH 6 eingestellt und mit 200 ml Acetonitril verdünnt, um Verbindung 6ä auszufällen. Ausbeute 0,64 g (93 %). Schmelzpunkt 200 bis 208⁰C (Zersetzung)*

IR-Spektrum:
UV-Spektrum: λ I

Analyse C₂₁

1780, 1680 - 1640, 1580 cm 255 nm (6 14 100)..

3 1/2 H₂O:

C H ber.: 45,48 5,82

"¹

- N
12,63

S
11,56

gef.: 45,73 4*50 12,45 11,83 %

45,83 4,47 12,59· 12,06 %

- 53 - ■ ■ , 509810/1154

Beispiel

*^f, 2A42302_M/i₅ 457

Ν—Ν

N=N

CH^-S

-U/

6b

7-[α-^-t-Butoxycarbonylaminomethyl-i-cyclohexenyl)-acetamido J-3-(pyridazin-[2,3-d]tetrazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5b)

Eine Mischung von 1,08 g (4 mMol) Verbindung 2, 0,74 g (4 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 0,82 g (4 mMol) DCC in 20 ml THF wird 1 Std. bei Raumtemperatur.gerührt und filtriert, um den Dicyclonexylharnstoff zu entfernen, der mit 10.ml THF gewaschen wird. Das vereinigte Filtrat und die Waschflüssigkeiten werden bei 5⁰C gekühlt und in eine Lösung von 1,08 g (3 mMol)7-Amino-3-(pyridazin-[2,3-d]-tetrazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4b) und 0,81 g (8 mMol) Triäthylamin in 20 ml 50 tigern wäßrigem THF bei 5°C geschüttet. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und mit 2 χ 50 ml Äther gewaschen. Die wäßrige Schicht wird mit verdünnter HCl auf pH 2 angesäuert und mit 3 x 50 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit 50 ml Wasser gewaschen, mit Aktivkohle behandelt und über wasserfreiem Na₂SO^ getrocknet. Entfernen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck ergibt Verbindung 5b als öl, das durch Verreiben mit 50 ml Äther verfestigt wird. Das Produkt wird durch Filtrieren gesammelt, mit Äther gewaschen und getrocknet. Ausbeute 0,94 g %). Schmelzpunkt 125 bis 134⁰C (Zersetzung).

- 54 -

509810/1154

^ 1780, 1680, 1520, 1370, 1250,/1160 cm"¹

ΙΠ3.Χ

NMR-Spektrum:cf^°-^d6 1,40 (9H, s, t-Bu-H), 4,23 (1H, d, 14 Hz, 3-CH₂S), 4,70 (1H, d, 15 Hz, 3-CH₂S), 5,15 OH, d, 4 Hz, 6-H), 5,78 (1H, d-d, 4 und 8 Hz, 7-H), 7,88 (1.H, d, 10 Hz, Pyridazin-H), 8,75 (1H, d, 10 Hz, Pyridazin-H), 9,0' (1H, d, 8 Hz, 7-CONH).

Analyse C₂gH,₂Ng⁰5^S2^:

C H S ber.: 50,64 5,23 10,40 %

gef.: 50,36 5,11 . 9,60 % 50,42 5,21

7-Γα-(2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl)-acetamido]-3-(pyridazin-— [2,3-d ]te trazol-6-yl-thiomethyl) ^-cephem^-carbonsäure (6b) ■ __

Zu 1,5 ml Trifluoressigsäure gibt man 0,^0 g -(1,5.mMol) Verbindung 5b bei O⁰C und rührt die Mischung 30 Min. bei Raumtemperatur. Die Mischung wird mit 50 ml Äther verdünnt, um das Trifluoracetat auszufällen, das durch Filtrieren gesammelt und in 2 ml Wasser suspendiert wird. Die Suspension v/ird mit Ammoniumhydroxyd auf pH 6 eingestellt und mit 200 ml Acetonitril verdünnt, um Verbindung 6b auszufällen, die durch Filtrieren gesammelt und getrocknet wird. Ausbeute 0,65 g (83 %). Schmelzpunkt 184 bis 188⁰C (Zersetzung).

IR-Spektrum: V^nuJ 1780, 1620, 1570 cm"¹.

UV-Spektrum:/V^ h.⁰^ 245 mn (£ 18500),

255 nm (eh) ■(£ 16300),

275 nm (sh) (.£.1-0700),

315 nm (sh) (£ 4700).

Analyse C^H^NgO^S^I/^HgO;

C H N S

ber.; 47,99 4,79 21,32 12,20 %

gef.; 48,21 4₉61 20,68 11,47 % 47₉90 4,67 20₉63

Beispiel 3

7-(2-[ (N-t-Butoxycarbonylamino)-methyl-1 -cyclohexen-1 -yl ]-acetamidoj -3- (1 -methylte traol-5-yl-thiomethyl) r-3-cephem-4-carbonsäure (5c)

Eine Mischung von 1,30 g (4,8 mMol) Verbindung 2, 0,88 g (4,8 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 0,99 g (4,8 mMol) DCC in 20 ml THF wird 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt, um den Dicyclohexylharnstoff auszufällen, der durch Filtrieren entfernt wird, und das Bett wird mit 5 ml THF gewaschen. Das vereinigte Filtrat und Waschflüssigkeiten werden in eine kalte Lösung von 1,31 g (4 mMol) 7-Amino-3-(1-methyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4c) und 1,01 g (10 mMol) Triäthylamin in 50 %igem wäßrigem THF unter Rühren bei 5⁰C gegossen. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt, unter vermindertem Druck unterhalb 40°C eingedampft und mit 3 x 30 ml Äther gut gewaschen. Die wäßrige Schicht wird mit verdünnter HCl auf pH 2 angesäuert und mit Äthylacetat (4 χ 500 ml) extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt und getrocknet. Entfernen des Lösungsmittels unterhalb 40°C unter vermindertem Druck liefert einen öligen Rückstand, der durch Zerreiben mit 100 ml Äther verfestigt wird, wobei man 1,33 g des Produkts 5c vom Schmelzpunkt 146 bis 159°C (Zersetzung) erhält.

1780, 1700 (sh), 1680, 1520, 1240, 1155 cm"¹ - 56 -

S 0 9 8 1 0 / 1 1 5 A ■

2A42302 _M/15 457

1,42 (9H, s_s t-Butyl-H), 1,5-1,7

(4H, m, aliphatisches Methylen-H), 1,8-3,3 (4H, m, Allylmethylen-H), 4,12 (3H, s, N-CH₃), 5,15 (IH, d, 5 Hz, 6-H), 5,80 (IH, d-d 5 und 8 Hz, 7-H), 6,85 (IH, br-s, NHBOC), 9,00 (IH, d, 8 Hz, CONH). .

Analyse C₂₂₁H₃₃N₇OgS₂:

	49	C	5	H	16	N	11	S	%
ber.:	49	,73	5	,74	16	,91	11	,06	%
gef.:	49	,46	5	,53	15	,00		,01
	,46	,62	,97

7-[ (2-Aminomethyl-i-cyclohexen-1-yl)-acetamido]-3-(1-methyltetrazol-5-yl-thiomethyl)--3-cephem-4-carbon5äure- (6c)

Eine Mischung von 2 ml Trifluoressigsaure Und 1,30g (2,4 mMol) Verbindung 5c wird 30 Min. bei Raumtemperatur magnetisch gerührt. Die Mischung wird mit 50 ml Äther verdünnt, um das Trifluoracetat von Verbindung 6c auszufällen. Das Trifluoracetat wird in einer kleinen Menge ¥asser (2 ml) suspendiert und die Suspension wird mit Ammoniumhydroxyd auf pH 6 eingestellt und mit 200 ml Acetonitril verdünnt, wobei man Verbindung 6c erhält, die mit 50 ml Acetonitril gewaschen und getrocknet wird. Schmelzpunkt 194 bis 207⁰C (Zersetzung). Ausbeute 0,80 g (69 %).

IR-Spektrum: >J £^uj 1770, I63O, 1590, 1370 cm"¹

UV-Spektrum: ^ 2ax ^⁰⁰^ 270 nm (E 10 000) Analyse C._nH_ot-N„0,.S_o'H_0:

C HNS.

ber.: 45,86 5,47 19,70 12,89 %

gef.: 45,89 5,26 19,74 12,49 %

46,18 5,28 19,82

- 57 -

509810/115A

Beispiel 4

CO₂H

7-[α-(2-t-Butoxycarbonylaminomethyl-i-cyclohexenyl)-acetamido J-3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5d)

Eine Mischung von 1,08 g (4 mMol) Verbindung 2, 0,74 g (4 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 0,82 g (4 mMol) DCC in 20 ml THF wird 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt und filtriert, um den Dicyclohexylharnstoff zu entfernen, der mit 10 ml THF gewaschen wird. Das vereinigte Filtrat und Waschflüssigkeiten werden auf 5⁰C gekühlt und in einer Portion in eine kalte (5°C) Lösung von 0,94 g (3 mMol) 7-Amino-3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4d) und 0,81 g (8 mMol) Triäthylamin in 20 ml 50 tigern wäßrigem THF gegossen. Die Reaktionsmischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und mit 2 χ 50 ml Äther gewaschen. Die wäßrige Schicht säuert man mit verdünnter HCl auf pH 2 an und extrahiert mit 3 x 50 ml Äthylacetat. Die vereinigten Extrakte werden mit 50 ml V/asser gewaschen, mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt, mit Na₂SO^ getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei man einen öligen Rückstand erhält, der durch Verreiben mit 100 ml Äther/n-Hexan (1:1) verfestigt wird. Daß Produkt 5d wird durch Filtrieren gesammelt, mit 50 ml η-Hexan gewaschen und getrocknet. Ausbeute 1,29 g (72 %). Schmelzpunkt 95 bis 102⁰G (Zersetzung).

IR-Spektrum:^ J"j£ 1780, 1680, 1520, 1245, 1160 cm"¹

- 58 509810/1154

NMR-Spektrum: cfp^°"^d6 1,30 (9H, s, t-Bu-H), 2,58 (3H, s, CH ), 11,03 (IH, d, l4 Hz, 3-CH₂S), 4,38 (IH, d, 14 Hz, 3-4,88 (IH, d, 4Hz, 6-H), 5,46 (IH, d-d, 4 und 8 Hz, 7-H), 8,54 (IH, d, & Hz, CONH).

Analyse C₂₅H₅₃N₅OgS₅:

	50	C	VJl	H	11	N	%
ber. :	VJlVJl O O	,40	5 5	,58	11 11	,76	% %
gef.:	.76 ,98	,67 ,67	,27 ,28

7-[a-(2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl)-acetamido]-3-(5-methyl- 1 ,3,k- thiadiazol~2-yl-thiomethyl;-3-cephem-4-carbonsäure (6'd)

Eine Mischung von 2 ml Trifluoressigsäxore und 1,20 g (2 mMol) Verbindung 5d wird 30 Min. bei Raumtemperatur gerührt und mit 50 ml Äther verdünnt, um das Trifluoracetat-von Verbindung 6d auszufällen. Das Trifluoracetat wird in 2 ml Wasser aufgeschlämmt, mit Ammoniumhydroxyd auf pH 6 eingestellt und mit 200 ml Acetonitril verdünnt, um Verbindung 6d auszufällen. Ausbeute 0,75 g (76 %). Schmelzpunkt 215 bis 220⁰C (Zersetzung). · .

IR-Spektrum: ^)^ 176Ο, 1640, I58O cm"¹-UV-Spektrum: Λ;_n^ ^2^3 276 nm (fc 13 400). ■ .

Analyse (* ]

C -:-H. . -N, S

ber.: 47,60 5,19, 13,87 19,06 %

gef.: 47,14 4,96 13,6i 18,66 %

47,23 5,07 13^70

- 59 5098 10/1 1:54 :, -_t

xfa. 2A42302 M/15 457

B e i s ρ i e 1 5

6e

7-[a-(2-· t-Butoxycarbonylaminomethyl-i-cyclohexenyl)-acetamido J-3- (3-hydroxypyridazin-[3,2-c]-s-triazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5e)

Eine Mischung von 1,08 g (4 mMol) Verbindung 2, 0,74 g (4 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 0,82 g (4 mMol) DCC in 20 ml THF wird 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt und filtriert, um den ausgefällten Dicyclohexylhamstoff zu entfernen, der mit 10 ml THF gewaschen wird. Das vereinigte Filtrat und Waschflüssigkeiten werden auf 5⁰C gekühlt und in einer Portion in eine kalte (5°C) Lösung von 1,14 g (3 mMol) 7-Amino-3-(3-hydroxypyridazin[3,2-cJ-s-triazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure und 0,81 g (ö mMol) Triethylamin in 20 ml 50 tigern wäßrigem THF gegossen. Die Mischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und mit 2 χ 50 ml Äther gewaschen. Die wäßrige Schicht wird mit verdünnter HCl auf pH 2 angesäuert. Den Niederschlag löst man bei 50°C in 100 ml THF, behandelt mit einer kleinen Menge Aktivkohle und trocknet über wasserfreiem NapSO^. Verdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck liefert einen öligen Rückstand, der durch Verreiben mit 50 ml Äther verfestigt wird, wobei man Verbindung 5e erhält. Ausbeute 0,85 g (45 %). Schmelzpunkt 190 bis 198⁰C (Zersetzung).

IR-Spektrum: ^ Jj^ 1780, 1700,1520, 1350, 1250, 1160 cm"¹

- 60 -509810/1154

NMR-Spektrum:cTpp^⁰"^d6 ^i₁₀ (9H₉ s, t-Bu-H), 5,20 (IH, d, 4 Hz, 6-H), 5,80 (IH, m, 7-H), 7,10 (IH, d, 10 Hz, Pyridazin-H), 7,80 (IH, d, 10 Hz, Pyridazin-H).

Analyse C₃₇H₃₃N₇O₇S₂·:

C HS

ber.: 50,6l 5,35 10,01 %

gef.: 50,59 5,40 9,57 %

50,68 5,59 9,55 %

7-[ra-(2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl)-acetamido]-3-(3-hydroxypyridazin-[3.2-c]3-triazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (6e;

Eine Mischung von 2 ml Trifluoressigsäure und 0,81 g (1,3 mMol) Verbindung 5e wird 30 Min. bei Raumtemperatur gerührt und mit 50 ml Äther verdünnt, um das Trifluoracetat von Verbindung 6e auszufällen. Das Trifluoracetat wird in 2 ml Wasser aufgeschlämmt. Die Mischung wird mit Ammoniumhydroxyd auf pH 6 eingestellt und mit 200 ml Acetonitril verdünnt, wobei man Verbindung 6e erhält. Ausbeute 0,57 g (82 %). Schmelzpunkt 225 bis 234°C (Zersetzung).

IR-Spektrum: V ^j 1770, 17IO, I630, 1545 cm"¹. UV-Spektrum: A_max ^⁰^ 260 nm (£ 18 100),

305 nm (sh) (£ 6300).

Analyse C₂₃H

C HN S

ber.: 45,12 5,3¹I 16,7¹I 10,9¹IJt

gef.: 45,28 4,35 16,56 11,75 %

45,44 4,45 16,66

- 61 -509810/115A

Beispiel 6

CH₀NH,

7-[ ^-N-t-Butoxvcarbonylaminomethyl-i-cyclohexenyl)-acetamido ]-3-(pyrid-[2,1-c]-s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5f)

Man gibt 740 mg (3,6 mMol) DCC zu einer Lösung von 950 mg (3,3 mMol) α-[2-(t-Butoxycarbonylaminomethyl)-!-cyclohexenyl]-essigsäure (2) und 660 mg (3,6 mMol). 2,4-Dinitrophenol in 30 ml THF und rührt die Mischung 1 Std. bei Raumtemperatur und filtriert den Harnstoff ab. Zum FiItrat gibt man eine Lösung von 1,1 g (3 mMol) 7-Amino-3-(pyrid-[2,1-c]s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4f) und 1,25 ml (9 mMol) Triethylamin in 30 ml Wasser und rührt die Mischung 18 Std. bei Raumtemperatur. Das THF wird unter vermindertem Druck unterhalb 40⁰C entfernt und der Rückstand wird mit 2 χ 10 ml Äther gewaschen, mit 6n HCl angesäuert und mit 5 x 10 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte wäscht man mit 2 χ 10 ml Wasser und 10 ml einer gesättigten NaCl-Lösung und dampft unterhalb 40⁰C zur Trockene ein. Verreiben des Rückstands mit Äther ergibt ungefähr 1,2 g feste Verbindung 5f.

- 62 -

509810/1154

24A2302

7-[ (2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl)-acetamido]-3-(pyrid [2_>1-c]s~triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure

Man gibt unter Rühren im Verlauf von 1,5 StdV unter Kühlung 2,5 ml Trifluoressigsäure zu1_t1 g (1,8 mMol) mit BOC-blockiertem Cephalosporin 5f und verdünnt die Mischung mit 100 ml Äther, um das Trifluoracetat von Verbindung 6f abzutrennen, das in 5 ml Wasser gelöst, mit konz. NH^OH auf pH 6 eingestellt und mit 100 ml Acetonitril verdünnt wird. Der erhaltene gelbe Niederschlag wird durch Filtrieren gesammelt und mit Acetonitril gewaschen, wobei man ungefähr 700 mg (76 %) feste-Verbindung 6f erhält.

Be.i spiel

7-[ (2-N-t-Butoxycarbonylaminomethyl-i-cyclohexenyl)-acetamido ]-3-pyridazin[2,1-c]s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5g) ' " - -'■

Zu einer Lösung von 1,07 g (4 mMol) a-[2-(t^Butoxycarbonylaminomethyl)-1-cyclohexenyl]-essigsäure (2) und 0,74 g (4 mMol) 2₉4-Dinitrophenol in 10 ml trockenem THF gibt man 0,82 g (4 mMol) DCC und rührt die Mischung 1 Std. bei Raumtemperatur, um den Harnstoff auszufällen, der durch Filtrieren entfernt wird. Zum FiItrat gibt man in einer Portion eine kalte Lösung von 1,09 g (3 mMol) 7-Amino-3-pyridazin-[2,1-c]s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4g) und 0,81 g (8 mMol) Triethylamin in 20 ml 50 %igem wäßrigem

- 63 -

50 9810/1 1 5 4- -> , _Λ

THP und rührt die Mischung 20 Std. bei Raumtemperatur. Die Reaktionsmischung wird mit 2 χ 50 ml Äther gewaschen, mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 angesäuert und mit 6 χ 50 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit 2 χ 30 ml Wasser gewaschen, mit Aktivkohle behandelt und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Eindampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck liefert einen öligen Rückstand, der durch Verreiben mit 50 ml Äther verfestigt wird, wobei man ungefähr 0,6 g feste Verbindung 5 g erhält.

-(2-Aminomethyl-1-cyclohexenylacetamido)-3-(pyridazin-2,1~c3s-triazol--3-yl~thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (6g)

Eine Mischung von 0,53 g (0,86 mMol) Verbindung 5g in 1 ml Trifluoressigsäure wird 1 Std. bei 0 bis 5⁰C gerührt und mit 30 ml Äther verdünnt, um das Trifluoracetat von Verbindung 6g auszufällen, das durch Filtrieren gesammelt und in 4 ml Wasser gelöst wird. Die Lösung wird mit Ammoniumhydroxyd auf pH 6 eingestellt und mit 100 ml Acetonitril verdünnt, um Verbindung 6g auszufällen, die durch Filtrieren gesammelt, mit 30 ml Acetonitril gewaschen und im Vakuum über ?2°5 g^e<trocknet wird, wobei man ungefähr 0,3 g feste Verbindung 6g erhält.

- 64 -

509810/1 154

Beispiele

N —Ν

Ii II -C ^CH

7-[ (2-tert.-Butoxycarbonylaminomethyl-i-cyclohexenyl)—acetamido ]-3-(1,3,4-thiadiazol-2-mercaptomethyl)-3-cephem-4^ carbonsäure (5i)

Zu einer gerührten Lösung von 1,10 g (O,0041 Mol) Verbindung 2 und 0,80 g (0,0044 Mol) 2,4-Dinitrophenol in 40 ml Äthylacetat gibt man in einer Portion 0,90 g (0,0044 Mol) NfN'-Dicyclohexylcarbodiimid und rührt die Mischung 3 Std. bei 25⁰C. Der Dicyclohexylharnstoff wird gesammelt und das FiItrat wird bei 45° (15 mm) eingedampft, wobei der aktivierte Ester in Form eines Öls anfällt. Das Öl löst man in 30 ml THF. Eine Lösung von 1,22 g (0,0037 Mol) 7-Amino-3-(1,3,4-thiadiazol-2-mercaptomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure und 1,03 ml (0,0074 Mol) Triäthylamin in 20 ml 50 % THF-Wasser wird zu der Lösung des aktivierten Esters gegeben und 18 Std. bei 25°C gerührt. Das THF wird bei 40° (15 mm) entfernt und das Konzentrat (10 ml) wird mit 5 χ 100 ml Äther gewaschen und mit 40 %iger Phosphorsäure auf pH 2 angesäuert. Die Mischung wird mit 6 χ 100 ml Äthylacetat ex- ■ trahiert und die vereinigten Extrakte werden mit Wasser und schließlich mit einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen. Die Äthylacetatlösung wird bei 40° (15 mm) auf ein Volumen von 20 ml eingedampft und mit 30 ml Skellysolve B verdünnt, um das feste Produkt 5i auszufällen, das gesammelt und 16 Std. im Vakuum über P₅O₅ bei 25⁰C getrocknet wird, wodurch man ungefähr 1,4g Produkt erhält.

- 65 -509810/1154

7-[ (2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl)-acetamido]-3-(1»3,4-thiadiazol-2-mercaptomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (6i)

Eine Lösung von 1,30 g (0,00226 Mol) Verbindung 5i und 3,0 ml Trifluoressigsäure wird 1 Std. bei O⁰C gerührt. Die Lösung wird mit 200 ml Äther verdünnt und der Niederschlag wird durch Filtrieren gesammelt. Das Trifluoracetatsalz wird in 40 ml Wasser suspendiert und mit verdünntem Ammoniumhydroxyd auf pH 6,0 eingestellt. Der gummiartige Rückstand wird anschließend mit 25 ml Acetonitril verrieben, wobei man ungefähr 350 mg Verbindung 6i in Form eines weißen Pulvers erhält. Das Produkt wird 16 Std. im Vakuum über 3?2°5 bei 25⁰C getrocknet.

Beispiel

OH₂COM₁-^³ ^ »—*

.-C-CH_nOH S₅/ 2

COOH

7-[ (2-Aminomethyl-i-cyclohexenyl)-acetamido]-3-(5-hydroxymethyl-1,3,4-thiadiazol-2-mercaptomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (6j)

Das Verfahren ist dasselbe wie das von Beispiel 8, mit der Ausnahme, daß das Produkt 6j aus dem Wasser gewonnen wird, wobei man ungefähr 340 mg Produkt in Form eines gelb-braunen Pulvers erhält. Eine zweite Fraktion wird aus dem Filtrat erhalten, und zwar ungefähr 200 mg Verbindung 6j in Form eines gelben kristallinen Feststoffs.

- 66 -509810/1154

B e i s ρ i e 1

10

M/15 457

6h

—CH -Σ

7- [«-(^-t-Butoxycarbonylaminomethyl-i -cyclohexenyl) -acetamido J-3-(1H-1,2,3-triazol-4-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5h)

Eine Mischung von 1,08 g (4 mMol) Verbindung 2, 0,74 g (4 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 0,82 g (4 mMol) DCC in 20 ml THP wird 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt und filtriert, um den Dicyclohexylharnstoff zu entfernen, der mit 10 ml THF gewaschen wird. Das vereinigte FiItrat und Waschungen werden in einer Portion bei 5°C in eine Lösung von 1,24 g (4 mMol) 7-Amino-3-(1H-1,2₉3-triazol-4-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4h) und 0,81 g (8 mMol) Triäthylamin in 20 ml 50 %igem wäßrigem THF gegossen. Die Reaktionsmischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und mit 2 χ 50 ml Äther gewaschen. Die wäßrige Schicht wird mit verdünnter HCl auf pH 2 angesäuert und mit 3 χ 50 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit 50 ml Wasser gewaschen, mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt und über wasserfreiem Na₂SO^ getrocknet. Entfernen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck liefert einen öligen Rückstands, der beim Verreiben mit 100.ml Äther/n-Hexan (1:1) sich verfestigt^ wobei man 0,60 g (26 ^Verbindung 5h mit Schmelzpunkt 120 bis 128⁰C (Zersetzung) erhält.

178O_S 1720, 1680, 1520, 1250, 1160 cm

- 67 5038 10/11.5 4 , . ,.

C	25	Ul	H	14	N	11	S
50,	51 69	5 5	,80	14	,65	10 10	,18
50, 50,		',65	,57 ,25	,05 ,16

NMR-Spektrum:cT^⁰""^d6 1,38 (9H, s, t-Bu-H), 5,08 (IH, d, 4 Hz, 6-H), 5,65 (IH, d-d, 4 und 8 Hz, 7-H), 8,00 (IH, s, Triazol-H), 8,92 (IH, d, 8 Hz CONH).

Analyse ^C2H^H32^N6°6^S2*^1/2H2^0:

ber.:

gef.:

7-[a-(2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl)-acetamido]-3-0H-1,2,3-triazol-4-yl-thiomethyl) -S-cephem-^carbonsäure (6h)

Eine Mischung von 1 ml Trifluoressigsäure und 0,55 g (0,98 mMol) Verbindung 5h wird 30 Min. bei Raumtemperatur gerührt und mit 50 ml Äther verdünnt, wobei man einen Niederschlag erhält, der durch Filtrieren gesammelt und in einer kleinen Menge Waser (2 ml) aufgeschlämmt wird. Die Mischung wird mit Ammoniumhydroxyd auf pH 6 eingestellt und mit 200 ml Acetonitril verdünnt, um Verbindung 6h auszufällen, die mit 50 ml Acetonitril gewaschen wird. Ausbeute 0,36 g (80 %). Schmelzpunkt 203 bis 215⁰C (Zersetzung) ·

IR-Spektrum:>)

UV-Spektrum: XjJ* ^K2^C03 266 mn (a 8000).

Analyse C^H^NgO^Sg· 1 1/2 H₂O:

C HNS

ber.: 46,42 5,54 17,10 13,04

gef.: 46,06 5,18 18,06 12,37

46,16 5,28 18,02

- 68 -

509810/1154

M/15 457

Beispiel 11

Salicylaldehydaddukt von 7-[ (2-Aminomethyl-i-cyclohexenyl)-acetamido]-3-(3-hydroxypyridazin[3,2-c]s-triazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7c) -

-I n

CH

Zu einer gerührten Suspension von 766 mg Verbindung 6c (Beispiel 3, 1,6 mMol) und 300 mg (3 mMol) Triäthylamin in 8 ml Methanol gibt man 370 mg (3 mMol) Salicylaldehyd und rührt die Mischung 30 Min. bei Raumtemperatur, wobei man eine dunkelgelbe Lösung erhält. Die Lösung wird mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt und man gibt 2 ml (1 m Lösung von Kalium-2-äthylhexanoat in Äthylacetat) KEH zum Filtrat zu. Die Mischung wird mit einer großen Menge Äther (100 ml) verdünnt, um das feste Produkt 7c auszufällen, das durch Filtrieren gesammelt, mit 30 ml Äther gewaschen und getrocknet wird. Ausbeute ungefähr.750 mg.

- 69 -509810/115A

Beispiel 12

Sälicylaldehydaddukt von 7-[ (2-Aminomethyl-i-cyclohexenyl)· acetamido]-3-(5-methyl-1.3,^-thiadiazol^-yl-thiome thyl)-3 cephem-4-carbonsäure (7d)

Zu einer gerührten Mischung von 778 mg (1,6 mMol) Verbindung 6d (Beispiel 4) und 300 mg (3 mMol) Triäthylamin gibt man 370 mg (3 mMol) Salicylaldehyd und rührt die Suspension 15 Min. bei Raumtemperatur wobei man eine klare, dunkelgelbe Lösung erhält, die mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt wird. Man gibt 2 ml KEH (1m Lösung in Äthylacetat) zum Filtrat. Die Mischung wird mit einer großen Menge Äther (100 ml) verdünnt, um das Produkt 7d auszufällen, das durch Filtrieren gesammelt, mit 30 ml Äther gewaschen und getrocknet wird. Ausbeute ungefähr 850 mg.

- 70 -

509810/1154

M/15 457

B eispiel 13

Salicylaldehydaddukt von 7-[ (2-Aminomethyl-i-cyclöhexenyl)-ace tamido]-3-(3-hydroxyp yridazin[3,2-ο]s-triazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7e)

OH

Zu einer gerührten Suspension von 754 mg (1,42 mMol) Verbindung 6e,(Beispiel 5) und 300 rag (3 mMol) Triäthylamin in 7 ml N ,N-Dime thy !formamid gibt man 370 mg (3 mliol) Salicylaldehyd und rührt die Suspension 1,5 Std. bei Raumtemperatur, bis man eine klare, dunkelgelbe Lösung erhält, die mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt wird. Man gibt 1,5 ml KEH (1 m Lösung in Äthylacetat) zum Filtrat. Die Mischung wird mit einer großen Menge Äther (100 ml) verdünnt, um das Produkt 7e auszufällen, das mit 30 ml Äther gewaschen und getrocknet wird. Ausbeute ungefähr 900 mg.

Beispiel 14

Das Kaliumsalz der Verbindung gemäß Beispiel 3 wird hergestellt, indem man eine Lösung von Kalium-2-äthylhexanoat (KEH) in Äthylacetat zu einer Lösung des Cephalosporins (Zwitterion) (6c) in DMSO zugibt, um das gewünschte Kaliumsalz auszufällen.

- 71 -509810/1154 ........

Beispiel

15

Das Natriumsalz der Verbindung gemäß Beispiel 3 wird hergestellt, indem man zuerst sein Diäthylammoniumsalζ in Methanol herstellt und anschließend eine Lösung von Natrium-2-äthylhexanoat (SEH) in Äthylacetat zugibt und anschließend mit Isopropanol verdünnt, um das gewünschte Natriumsalz auszufällen, das in Wasser eine Löslichkeit von mehr als 250 mg/ml aufweist.

B e i s ρ i e 1 16

CH₂-OCOCH,

7-[α-(2-t-Butoxycarbonylaminomethyl-1-cyclohexenyl)-ace tamidoj-cephalosporansäure (5w)

Eine Mischung von 1,08 g (4 mMol) Verbindung 2, 0,74 g (4 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 0,82 g (4 mMol) DCC in 20 ml THF wird 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt und filtriert, um den Dicyclohexylharnstoff zu entfernen, der mit 10 ml THF gewaschen wird. Das vereinte FiItrat und V/aschflüssigkeiten werden in einer Portion bei 5⁰C in eine Lösung von 0,82 g (3 mMol) 7-ACA (4w) und 0,81 g (8 mMol) Triäthylamin in 20 ml 50 %igem wäßrigem THF gegossen. Die Reaktionsmischung wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und mit 2 χ 50 ml Äther gewaschen. Die wäßrige Schicht wird mit verdünnter HCl auf pH 2 angesäuert und mit 3 x 50 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit 50 ml Wasser gewaschen und über wasserfreiem Na₂SO^ getrocknet.

- 72 509810/1154

Eindampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck liefert Verbindung 5w in Form eines Öligen Rückstands, der durch Verreiben mit 100 ml Ä'ther/n-Hexan (1:1) verfestigt und mit 50 ml η-Hexan gewaschen wird. Ausbeute 1,24 g (79 %). Schmelzpunkt 100 bis 110⁰C.

IR-Spektrum:V JJJ^ 178Ο, 1730 - 1640, 1520, 1355, 1225 cm"¹

NMR-Spektrum:cf^°"^d6 i₎₂3 (9H, s, t-Bu-H), 1,96 (3H, s, 3-0Ac), 4,Ü8 (IH, d, 13 Hz, 3-CH₂), 4,83 (IH, d, 13 Hz, 3-C 4,89 (IH, d, H Hz, 6-H), 5,48 (IH, d-d, 4 und 8 Hz, 7-H), 8,5 (IH, d, 8 Hz, CONH).

Analyse C₂₄H₃N₃O₉S'

C HNS

ber.: 54,12 6,43 7,88 6,02

gef.: 54,16 6,19 8,36 5,61

54,07 6,22 8,34 5,79

7-[α-(2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl)-acetamido]-cephalosporansäure (6w)

Eine Mischung von 2 ml Trifluoressigsäure und 1,20 g (2,3 mMol) Verbindung 5w wird 30 Min. bei Raumtemperatur gerührt und mit 50 ml Äther verdünnt, um das Trifluoracetat auszufällen, das in 2 ml Wasser aufgeschlämmt wird. Die Mischung wird mit Ammoniumhydroxyd auf pH 6 eingestellt und' mit 200 ml Acetonitril verdünnt, um Verbindung 6w auszufällen.. Ausbeute 0,68 g (69 %). Schmelzpunkt 250 bis 260°C (Zersetzung) .

IR-Spektrum: \> ^^uj I800, 1735, 1625, 1570, 1230 cm"¹.

I03L3C

UV-Spektrum: A ¹ Jt ¹^⁰S 255 nm (£ 7100). max

- 73 -509810/115A

2 4 Λ 2 3 O 2_{Μ/15 457}

Analyse C H₃₅N 0^'

■ CHNS

ber.: 52,76 6,05 9,71 7,^1 %

gef.: 52,36 6,09 9,7¹I 7,71 % 52,15 6,06 9,71 7,81 %

Die Löslichkeit beträgt 5,4 (BA) und 5,3 (UV). Beispiel 17

6x

7-[a-(2-t-Butoxycarbonylaminomethyl-1-cyclohexenyl)-acetamido J-desacetoxycephalosporansäure (5x)

Eine Mischung von 1,08 g (4 mMol) Verbindung 2, 0,74 g (4 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 0,82 g (4 mMol) DCC in 20 ml THF wird 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt und filtriert, um den ausgefällten Dicyclohexylharnstoff zu entfernen, der mit 10 ml THF gewaschen wird. Vereinigtes Filtrat und Waschflüssigkeiten werden in einer Portion bei 5°C in eine Lösung von 0,64 g (3 mMol) 7-ADCA (4x) und 0,81 g (8 mMol) Triäthylamin in 20 ml 50 tigern wäßrigem THF gegossen. Die Reaktionsmischung wird bei Raumtemperatur 18 Std. gerührt und mit 2 χ 50 ml Äther gewaschen. Die wäßrige Schicht wird mit verdünnter HCl auf pH 2 angesäuert und mit 2 χ 50 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte v/erden mit 50 ml Wasser gewaschen, mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt und über wasserfreiem Na₂SO, getrocknet. Eindampfen

- 74 -509810/1154

des Lösungsmittels unter vermindertem Druck liefert einen öligen Rückstand, der durch Verreiben in 1,00'ml Äther/ n-Hexan (1:1) verfestigt wird, wobei man Verbindung 5x erhält. Ausbeute 0,88 g (63 50. Schmelzpunkt 120 bis 127°C (Zersetzung). ·

IR-Spektrum:^ JJ^ 178O, 1680, 1520, 1250, Ü60 cm

NMR-Spektrum: cT_p^°"^d6 1,35 (9H, s, t-Bu-H), 1,98 (3H, s, 3-CH₃), 4,86 (IH, d, 4 Hz, 6-H), 5,¹JO (IH, d-d, 4 und 8 Hz, 7-H), 8,50 (IH, d, 8 Hz, CONH).

Analyse ^C22^H31^N3°6^S:

	C	76	6	H	9	N	6	S
ber.:	56,	21	6	,71	8	,03	6	,89
gef. :	56,	21	6	,65'	9	,98	7	,71
	56,		,77	,04	,00

7-[κ-(2-Aminomethyl-1-cyclohexenyl)-acetamido]-desacetoxycephalosporansäure (6x)

Zu 2 ml gekühlter (O⁰C) Trifluoressigsäure gibt man 0,84 g (1,8 mMol) Verbindung 5x und rührt die Mischung 1/2 Std. bei Raumtemperatur. Die Mischung wird mit 50 ml Äther verdünnt, um das Trifluoracetat auszufällen, das in 2 ml Wasser aufgeschlämmt wird. Man stellt die Mischung mit Ammoniumhydroxyd auf pH 6 ein und verdünnt mit 200 ml Acetonitril, wobei man Verbindung 6x erhält, die mit 20 ml Acetonitril gewaschen wird. Ausbeute 0,48 g (73 %)· Schmelzpunkt 240 bis 245⁰C (Zersetzung).

IR-Spektrum:^ jJä 3580, 3300, 1750, 1640, 1525 cm"¹. UV-Spektrum: \ \* h.^C03 260 nm (£6500).

- 75 0 9 810/1154

Analyse C

₃O:

CHN

ber.: 53,2*» 6,57 10,95

gef.: 53,83 6,06 11,08 53,87 6,23 10,99

Die Löslichkeit beträgt 4,1 (BA) und 3,3 (UV).

Beispiel 18

S 8,36 %

8,75 % 9,01 %

CH₂CO-Nt f

—Ν

ZS.

7-C α-(2-t-Butoxycarbonylaminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl-thioraethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (6a)

Zu einer gerührten Lösung von 1,1 g (4,1 mMol) a-[2-(t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienylj-essigsäure (3) und 800 mg (4,4 mMol) 2,4-Dinitrophenol in 40 ml Äthylacetat gibt man in einer Portion 0,9 g (4,4 mMol) N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC). Die Reaktionsmischung wird 3 Std. bei Raumtemperatur gerührt. Der abgeschiedene Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert. Das Filtrat wird zur Trockene eingedampft, wobei man den öligen, aktivierten Ester erhält, der in 30 ml THF gelöst wird. Zu der Lösung gibt man eine Lösung von 1,26 g (3,7 mMol) 7-Amino-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5a) und 1,03 ml (7,4 mMol) Triethylamin in 20 ml 50 %±gem THF. Die Mischung wird bei Raumtemperatur 18 Std. gerührt und im Vakuum

- 76 -509810/1154

M/15 457

auf ein Volumen von 10 ml konzentriert. Das Konzentrat wird mit fünf 100 ml-Portionen Äther gewaschen, mit 6n Chlorwasserstoffsäure angesäuert und mit sechs 100 ml-Portionen Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit Wasser und einer gesättigten NaCl-Lösung gewaschen. Die getrocknete Lösung wird zur Trockene konzentriert, wobei man 720 mg (33 %) des N-BOC-geschützten Cephalosporins 6a erhält, das bei 1,70°C (Zersetzung) schmilzt.

IR-Spektrum:^x) 5j£ 1780, 1710, I69O, I67O, I58O, 1520, 1370, 1255, 1170 cm-1.

MR-Spektrum: J ^°"^d6 1,3* (9H, s, CH-cJ), 2,57 XiH, s,

H₂CO, 3,03 (2H, s, CH₂CO), 3,4 - 3,7 (IH, m, 2^H und CH₂-N), 3,9 - 1,2 (2H, m, 3-CH₂), H_t9& (IH, d, 4,5 Hz, 6-H), .U,9 - 5,2 (3H, m, JJ^ und C-NH), 6,29 (IH, d, 9,5 Hz, Pyridazin-H), 7,23 (IH, d, 9,5 Hz, Pyridazin-H), 8,77 (IH, d, 7,5 Hz, CONH).

Analyse ^C26^H31^N5°7^S2*^H2^O:

	51	C	5	H	H	56	S	59
ber. ί	51	.56	5	.16	11.	66	10,	79
gef.:	.13	.13	11,	10,

- 77 -

509810/1154

M/15 457

7-[a-(2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl-thiome thyl) ^-cephem^-carbonsäure (7a)

(A) Eine Lösung von 67O mg (1,13 mMol) des BOC-geschützten Cephalosporins 6a in 1,5. ml Trifluoressigsäure wird 1 Std. bei O⁰C gerührt. Zu der Lösung gibt man 100 ml trockenen Äther. Den erhaltenen Niederschlag sammelt man durch Filtrieren, suspendiert in 20 ml Wasser und stellt mit verdünntem Ammoniumhydroxyd auf pH 6 ein, wobei man ein viskoses Öl erhält, das mit Acetonitril verrieben wird, wobei man 380 mg (75,5 %) des gewünschten Produkts 7a erhält, das bei 200 bis 205⁰C (Zersetzung) schmilzt.

IR-Spektrum:^ 5Ϊ I765, 1640, 1580, 1390, 1350 cm"¹. Analyse C₂₁H₂₃N₅O₅S₃.1/2 H₃O:

	C	59	H	N
ber.:	50,	95	4,85	14,05
gef.:	50,	4,79	13,10

(B) Zu einer gerührten Suspension von 1,1 g (3,6 mMol) Natrium-{ 2-[N-(1-carbäthoxypropen-2-yl)-aminomethylJ-1,4-cyclohexadienyl]-acetat (4) in 20 ml trockenem •Tetrahydrofuran (THF), das einen Tropfen N,N-Dimethylbenzylamin enthält, gibt man 0,38 ml (3,95 mMol) Äthylchloroformiat bei -10 bis -5°C. Zur gemischen Anhydridlösung gibt man in einer Portion eine Lösung von 1,02 g (3 mMol) 7-[α-(2-Aminomethyl-i,4-cyclohexadienyl)-acetamido ]-3-(3-hydroxypyridazin-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5a) in 10 ml 50 %igem wäßrigem THF, das 0,42 ml (3 mMol) Triäthylamin enthält. Die Mischung wird 30 Min. bei Raumtemperatur gerührt, mit Aktivkohle behandelt und filtriert. Zum FiItrat gibt man 3 ml Ameisen-

-.78 - . 509810/1154

säure und rührt die Mischung 30 Min. bei Raumtemperatur. Den erhaltenen Niederschlag filtriert man, wäscht mit Wasser und Acetonitril, wobei man 570 mg Verbindung 7a erhält.

Beispiel 19

7-i [2-(N-~ t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienyl]-acetamido]-3-(tetrazol[1,5-b]pyridazin-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (6b)

Zu einer gerührten Lösung von 3,2 g (0,012 Mol) re-[2-(t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienyl]-essigsäure (3) und 0,3 g (0,0125 Mol) 2,4-Dinitrophenol in 50 ml THF gibt man 2,6 g (0,0125 Mol) DCC und rührt die Mischung 1,5 Std. bei Raumtemperatur. Den ausgefällten Harnstoff entfernt man durch Filtrieren. Eine Lösung von 3,65 g (0,01 Mol) 7-Amino-3-(tetrazol[1,5-b]pyridazin-6-yl-thiomethy])-3-cephem-4-carbonsäure (5b) und 2,8 ml (0,02 Mol) Triäthylamin in 100 ml Wasser gibt man zur Lösung des aktiven Esters. Die Mischung wird 18 Std. bei Raumtemperatur gerührt. Die Hauptmenge des THF wird unter vermindertem Druck unterhalb 40°C entfernt und die zurückgebliebene Lösung wird mit 3 x 50 ml Äther gewaschen und mit 6n HCl angesäuert und mit 8 χ 100 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit 3 x 100 ml Wasser und 2 χ 100 ml gesättigter NaCl-Lösung gewaschen und zur Trockene eingedampft. Den öligen Rückstand verreibt man mit Äther, wobei man 2,"2 g

- 79 509810/1 154"

(52 %) Verbindung 6b, die bei 165°C (Zersetzung) schmilzt, erhält.

IR-Spektrum:^ Jjjg _177O, 1710, 1670, 1510, 1240, 1150 cm"¹. Analyse

C HNS

ber.: 50,18 4,92 18,23 10,43 % gef.: 51,05 4,97 17,24 9,09 %

7-[2-Aminomethyl-1,^-cyclohexadienyl-acetamido]-3-(tetrazol[1,5-bipyridazin-ö-yl-thiomethylJ^-cephem-^-carbonsäure (7b)

Eine Mischung von 3,1 g (5,05 mMol) Verbindung 6b und 6 ml Trifluoressigsaure wird 1 Std. unter Kühlung gerührt und mit 200 ml Äther verdünnt, um das Trifluoracetat von Verbindung 7b abzutrennen, das in 5 ml Wasser gelöst, mit konz. NH4OH auf pH 6 eingestellt und mit 900 ml Acetonitril verdünnt wird. Man sammelt das gelbe FiItrat durch Filtrieren und wäscht mit Acetonitril, wobei man 2,3 g (88,5 %) Verbindung ?b erhält, die bei 21O⁰C (Zersetzung) schmilzt. Umkristallisation von 2 g Verbindung 7b aus 350 ml 50 tigern THF ergibt 1,19 g blaßgelbe Nadeln, die bei 220 bis 230°C (Zersetzung) schmelzen.

IR-Spektrum: ^ 2ax ^1?85» ^l6i<0» ^l6l°» ¹⁵⁷° Analyse ^c ₂i^H22^N8°4^S2 *^1/2Clj^H8^O:

C H N-S

ber.: 50,17 4,76 20,35 11,64 % gef.: 50,17 4,56 19,59 11,30 %

- 80 -

5098107TTBA

-ft-

M/15 457

Bei 3 ρ i e 1 20

-N

7c

7- [ (2-N-t-Butoxycarbonylaminome thyl-1,4-cyclohexad±enyl)-acetamido ]-3-( 1 -methyl tetrazol-5-yl-thiomethyl)--3-cepheEs-4-ⁱcarbonsäure (7c) . "

Zu einer gerührten Lösung von 3,2 g (0,012 MbI) a-[2-(t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienyi J-esslgsäure (3) und 2,3 g (0,012 MbI) 2,4-Dinitrophenol in 50 ml TBF gibt man in einer Portion 2,6 g (0,012 Mol) DCC und rührt die Mischung 1,5 Std. bei Raumtemperatur. Den ausgefällten Harnstoff entfernt man durch Filtrieren. Zum Filtrat gibt man eine Lösung von 3,28 g (O,Q1 Mol) 7-Ämino-3-(1-methylte1arazol-5-yl-"öiiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5c) und 2,8 ml (0,02 MbI) Triethylamin in 100 ml Wasser und rührt die Mischung 18 Std. bei Raumtemperatur. Die Hauptmenge des THP wird unter vermindertem Druck unterhalb 40°C entfernt und die zurückgebliebene wäßrige Lösung wird mit 2 χ 50 ml Äther gewaschen, mit 6n HCl angesäuert und mit 4 χ 50 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit 2 χ 50 ml Wasser und 2 χ 50 ml einer gesättigten NaCl-Lösung gewaschen, über Na₂SO. getrocknet und zur Trockene eingedampft. Den öligen Rückstand verreibt man mit 100 ml Äther, wobei man 2,3 g (48 %) Verbindung 6c,-die bei 145°C (Zersetzung) schmilzt, erhält.

509810/1154

1780, 1700, 1510, 1240, 1150 cm" . • max.

Analyse C₉I₁H,.. N₇Oz-S₉:

CHNS ber.: 49,90 5,41 16,97 11,10% gef.: 50,23 5,23 15,80 12,43 %

7-[ (2-Aminomethyl-i,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(1-•fchEyltetra2ol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7c)

Eine Mischung von 2,2 g (3,8 mMol) Verbindung 6c und 5 ml Triiluoressigsäure wird 1 Std. unter Kühlen gerührt und mit 200 al Äther verdünnt, um das Trifluoraeetat von Verbindung 7c zu trennen, das in 5 ml Wasser gelöst wird. Die Lösung wird mit konz. NH. OH auf pH 6 eingestellt und mit 200 al Acetonitril verdünnt, wobei man einen gelben niederschlag erhalt, der durch Filtrieren gesammelt und mit Acetonitril gewaschen wird, wobei man 1,5 g (82,5 %} Verbindung 7c erhalt, die bei 200⁰C (Zersetzung) schmilzt; sie wird aus 50 % THF umkristallisiert, wobei man blaß-gelbe Nadeln vom Schmelzpunkt 21O⁰C (Zersetzung) erhält.

17&5, 1640, 1615, 1570 ca"¹.

Analyse

	49	C	5	H	N	S
ber.:	49	.11	5	.30	19,09	12,48
gef.:	,85	,20	18,53	12,26

- 82 -

509810/1154

Beispiel 21

CH₂CO-N

Hq Nf

7- [ (2-N-t-Butoxycarbonylaminomethyl-i ,4-cyclohexadienyl)-' acetamido]-3-(5-methyl-1,3.4-thiadiazol-2-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (od) ". - " '

Zu einer gerührten Lösung von 900 mg (3,3 mMol) a-[2-(t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienyl!-essigsäure (3) und 660 ng (3,6 mMol) 2,4-Dinitrophenol in 40 ml THF gibt man in einer Portion 740 mg (3,6 mMol) DCC und rührt die Mischung 2 Std. bei Raumtemperatur. Den ausgefällten Harnstoff entfernt man durch Filtrieren. Zum FiItrat gibt man eine Lösung von 1,03 g (3 mMol) 7-Amino-3-(5-methyl-1 ,3,4-thiadiazol-2-yi-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5d) und 1,3 ml (9 mMol) Triäthylamin in 30 ml Wasser in einer Portion und rührt die Mischung 18 Std.· bei Raumtemperatur. Das THF entfernt man unter vermindertem Druck unterhalb 40°C und das Konzentrat wäscht man mit 3 χ 10 ml Äther und säuert mit 6n HCl an und extrahiert mit 5 χ 10 ml Äthylacetat. Die vereinigten Extrakte werden nacheinander mit 2 χ 10 ml Wasser und 10 ml einer gesättigten NaCl-Losung gewaschen. Eindampfen, gefolgt von Verreiben mit Äther er_Cibt 900 mg (55 %) Verbindung 6d.

IR-Spektrum:^ JJ^j, 1770, 1710, 1660, 1610, 1510, 1240, 1150 cm"¹.

- 83 - .

5098 10/1 1 5Av .·

M/15 457

Analyse

C25H31N5°6S3:	50	C	5	H	11	N
	50	,57	5	,26	11	,80
ber.:		,51		,20		,46
gef.:

7-[ (2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7d)

(A) Eine Mischung von 940 mg (1,58 mMol) Verbindung 6d und 2 ml Trifluoressigsäure wird 1 Std. unter Kühlen gerührt und mit 100 ml Äther verdünnt, um das Trifluoracetat von Verbindung 7d abzutrennen, das in 5 ml Wasser und 5 ml Acetonitril gelöst wird. Die Lösung wird mit konz. NH^OH auf pH 6 eingestellt und mit 100 ml Acetonitril verdünnt. Den erhaltenen blaßgelben Niederschlag sammelt man durch Filtrieren und wäscht mit 5 ml Acetonitril, wobei man 600 mg (77 %) Verbindung 7d erhält, die bei 230 bis 240⁰C (Zersetzung) schmilzt.

IR-Spektrum: >) _maJ 1790, 1650 158O cm"¹, Analyse π H-JU)₁₁S,:

	48	C	4	H	N	S	49
ber.:	49	,66	4	,70	14,19	19,	16
gef.:	,24	,59	13,88	20,

(B) Zu einer gerührten Suspension von 1,1 g (3,6 mMol) Natrium-£2-[N-(1-carbäthoxypropen-2-yl)-aminomethyl]-1,4-cyclohexadienyl\-acetat (4) in 20 ml trockenem THF, das einen Tropfen Ν,Ν-Dimethylbenzylamin enthält, gibt man 0,38 ml (3,95 mMol) Äthylchlorformiat im Verlauf von 10 Min. bei -10 bis -15°C zu. Zur gemischten Anhydridlösung gibt man in einer Portion eine Lösung von 1,03 g

509810

nfsi

(3 mMol) Verbindung 5d in 10 ml 50 %igem wäßrigem THF, das 0,42 ml (3 mMol) Triäthylamin enthält und die Mischung wird 30 Min. bei Raumtemperatur gerührt. Einige Tropfen Ameisensäure werden zugesetzt und die Mischung wird filtriert. Zum Filtrat gibt man 200 ml Äther und 3 ml Ameisensäure. Den Niederschlag sammelt man durch Filtrieren, wäscht mit Wasser und Acetonitril, wobei man 1,1 g (62 %) Verbindung 7d erhält.

Beispiel. 22

7e

7-[ (2-N-t-Butoxycarbonylaminomethyl-i,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(3-hydroxypyridazin[3,2-c]s-triazol-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (6e) -

Zu einer gerührten Mischung von 900 mg (3,3 mMol) nc-[2-(t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienyl]-essigsäure (3) und 660 mg (3,6 mMol) 2,4-Dinitrophenol in 30 ml THF gibt man in einer Portion 740 mg (3,6 mMol) DCC und rührt die Mischung 2 Std. bei Raumtemperatur. Den abgetrennten Harnstoff filtriert man ab. Zur Lösung des aktivierten Esters gibt man in einer Portion eine Lösung von 1,13g (3 mMol) 7-Amino-3-(3-hydroxypyridazin[3,2-c]striazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5e) und

- 85 -509810/1154-

~ ΙΟΙ,25 ml (9 mMol) Triäthylamin in 30 ml Wasser und rührt die Mischung 18 Std. bei Raumtemperatur. Das THF destilliert-man unter vermindertem Druck unterhalb 4O⁰C ab und den Rückstand wäscht man mit 2x10 ml Äther und säuert mit 6n HCl an und. extrahiert mit 5 x 10 ml Äthylacetat. Die vereinigten Extrakte werden mit 2 χ 10 ml Wasser und 10 ml einer gesättigten NaCl-Lösung gewaschen und zur Trockene eingedampft. Den Rückstand verreibt man mit Äther, wobei man 505 mg (27 %)Verbindung 6e erhält, die bei 175 bis 180⁰C (Zersetzung) schmilzt.

IR-Spektrum:^ jJJJj 1770, I700, 15IO, 1200, II50 cm"¹, Analyse C₀₇H-^N₇O₇S₀:

	51	C	4	H	N	10	S
ber.:	51	,50	4	,96	15,57	10	,18
gef.:	,61	,80	14,47	,25

7-[ (2-Aminomethyl-i,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(3-hydroxypyridazin[3»2-c]s-triazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7e)

Man gibt 1 ml Trifluoressigsäure zu 470 mg (0,747 mMol) Verbindung 6e und rührt die Mischung 1 Std. unter Kühlen und verdünnt mit 100 ml Äther, um das Trifluoracetat von Verbindung 7e auszufällen, das in 5 ml Wasser gelöst und mit konz. NKLOH auf pH 6 eingestellt wird. Hinzu gibt man noch 100 ml Acetonitril, wobei man einen gelben Niederschlag erhält, der durch Filtrieren gesammelt und mit Acetonitril gewaschen wird, wobei man 360 mg (91 %) Verbindung 7e mit Schmelzpunkt bei 210 bis 220⁰C (Zersetzung) erhält.

IR-Spektrum:^ JJ^ 1760, 1710, 1640, 158Ο cm"¹. Analyse C₉₉H_0xN₇Oj-S.-H₅O:

dd £3 ( Ϊ d d _{c H N s}

ber.: 48,25 4,60 17,91 U,71 %

gef.: 48,75 4,60 16,56 12,17 % 86

- 86 509810/1154

Beispiel 23

CH₂NH₂

11

7-{ (2-M-t-Butoxycarbonylaminomethyl-i,4-cyclohexadienyl)-ace tamido ]-3- (pyrid [2,1 -c ]s-triazol-3-.yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (6f)

Man gibt 740 mg (3,6 mMol) DCC zu einer Lösung von 950 mg (3,3 mMol) α-[2-(t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienylj-essigsäure (3) und 660 mg (3,6 mMol) 2,4-Dinitrophenol in .30 ml THF und rührt die Mischung 1 Std. bei Raumtemperatur und filtriert den Harnstoff ab. Zum Filtrat gibt man eine Lösung von 1,1 g (3 mMol) 7-Amino-3-(pyrid-[2,1-c]s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (5f) und 1,25 ml (9 mMol) Triäthylamin in 30 ml Wasser und rührt die Mischung 18 Std. bei Raumtemperatur. Das. THF entfernt man unter vermindertem Druck unterhalb 40⁰C und den Rückstand wäscht man mit 2 χ 10 ml Äther, säuert mit 6n HCl an und extrahiert init 5 x 10 ml Äthylacetat. Die vereinigten Extrakte werden mit 2 χ 10 ml Wasser und 10 ml einer gesättigten NaCl-Lösung gewaschen und unterhalb 40⁰C zur Trockene eingedampft. Verreiben des Rückstandes mit Äther ergibt 1,15 g (63 %) Verbindung 6f, die bei 145 bis 15O°C (Zersetzung) schmilzt.

IR-Spektrum:\) ™£j 1770, 1680, 1510, 1240, 1150 cm"¹.

- 87 -509810/1154

Analyse ^C28^H32^N6°6^S2^:

CHNS

ber.: 5^,89 5,26 13,72 1O.H7 t gef.: 53,8H 5,13 13,12 9,26 %

7-[ (2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido J-3-(pyrid[2,1-c]s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbon- säure (7f)

Unter Rühren gibt man im Verlauf von 1,5 Std. unter Kühlung 2,5 ml Trifluoressigsäure zu 1,1 g (1,8 mMol) DOC-blockiertem Cephalosporin 6f und verdünnt die Mischung mit 100 ml Äther, um das Trifluoracetat der Verbindung 7f abzutrennen, das in 5 ml Wasser gelöst, mit konz. ΝΗλΟΗ auf pH 6 eingestellt und mit 100 ml Acetonitril verdünnt wird. Der erhaltene gelbe Niederschlag wird durch Filtrieren gesammelt und mit Acetonitril gewaschen, wobei man 700 mg (76 %) Verbindung 7f erhält, die bei 200 bis 210⁰C (Zersetzung) schmilzt.

IR-Spektrum:^ jjjjj 1790, 1660, 1630, 158Ο cm"¹. Analyse C₀₀H_OJ|N,0,S₀

C HNS

ber.: 52,96 H,83 16,11 12,29 % gef.: 53,08 1,65 15,16 12,29 %

Beispiel 24

.CH₂NH₂

7-[ (2-N-t-Butoxycarbonylaminomethyl-i,4-cyclohexadienvl)-acetamido]-3-pyridazin[2,1-c]s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7g) ,

Zu einer Lösung von 1,07 g (4 mMol) a-[2-(t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienylJ-essigsäure (3) und 0,74 g (4 mMol) 2,4-Dinitrophenol in 10 ml trockenem THF gibt man 0,82 g (4 mMol) DCC und rührt die Mischung 1 Std. bei Raumtemperatur, um den Harnstoff auszufällen, der durch Filtrieren entfernt wird. Zum Filtrat gibt man in einer Portion eine kalte Lösung von 1,09 g (3 mMol) 7-Amino-3-pyridazin[2,1-c]s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4- carbonsäure (5g) und 0,81 g (8 mMol) Triethylamin in 20 ml 50 %igem wäßrigem THF und rührt die Mischung 20 Std. bei Raumtemperatur. Die Reaktionsmischung wird mit 2 χ 50 ml Äther gewaschen, mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 angesäuert und mit 6 χ 50 ml>Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte wäscht man mit 2 χ 30 ml Wasser, behandelt mit Aktivkohle und trocknet über wasserfreiem Natriumsulfat. Eindampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck liefert einen öligen Rückstand, der durch Verreiben mit 50 ml Äther verfestigt wird, wobei man 0,63 g

- 89 509810/1154

(34 %) Verbindung 6 g mit Schmelzpunkt 202 bis 213⁰C (Zersetzung) erhält.

IR-Spektrum: \1 J^ 1785, 1780, 1520, 1250, II60 cm"¹.

NMR-Spektrum:cT^⁰"^d6 1,39 (9H, s, CH₃-C-), 3,89 (4H, s, H₂CC), 5,03 (IH, d,4 Hz, 6-H), 5,67 (3H, br-s,

7-H und ^C=), 7,20 - 8,90 (3H, m, Pyridazin-H), 9,05 (IH, d, 8 Hz, NHCO).

Analyse ^C27^H^1^N7^O6^S2^H2^O:

C HNS

ber.: 48,08 4,95 17,83 11,67 % gef.: 48,32 3,94 17,19 11,90 %

7-(2-Aminömethyl-1,4-cyclohexadienylacetamido)-3-(pyridazin-[2,1-c]s-triazol-3-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7g)

Eine Mischung von 0,53 g (0,86 mMol) Verbindung 6g in 1 ml Trifluoressigsäure wird 1 Std. bei 0 bis 5⁰C gerührt und mit 30 ml Äther verdünnt, um das Trifluoracetat der Verbindung 7g auszufällen, das durch Filtrieren gesammelt und in 4 ml Wasser gelöst wird. Die Lösung wird mit Ammoniumhydroxyd auf pH 6 eingestellt und man gibt 100 ml Acetonitril zu, um Verbindung 7g auszufällen, die durch Filtrieren gesammelt mit 30 ml Acetonitril gewaschen und im Vakuum über P2°5 getrocknet wird. Ausbeute 0,38 g (86 %). Schmelzpunkt 208 bis 216⁰C (Zersetzung).

IR-Spektrum: V "αϊ 1780, 1620, 1570, 1340 cm"¹, UV-Spektrum: λ1* ¹^⁰S 276 nm (t 56ΟΟ).

IHcLn.

- 90 -

509810/1154

2U2302

Analyse ^ 22^2^7® ¹^* 2'

- 91 -

509810/1154

C H NS

ber.: 51,33 5,27 15,52 10,15 % gef.: 51,00 5,10 15,00 10,12%

M/15 *157

Reaktionsschama für Beispiele 25, 26 und 27

.CH₂NH₂ CH₂COOH

O CH,

Il I⁵

CH₂-NH-C-O-C-CH₅ CH, O

ι ⁵ Il CH₅-C-O-C-N₅

CH₅

HN.

NO,

4- ho// 7—^N02 4- {sV^N=c=^N

CH₂-NH-C-O-C(CH ) NO2

COOH

DCC

₂-NH-C-0-C(CH₅)₅

CH₂-S-R

COOH

509810/1154 - 92 -

M /15 ή

C ö

COOH

N N

N N

Il ^ IT

- 93 -509810/1154

Beispiel

CH₂NH₂

CH₂CONH-I—ρ

COOH

M/15 457

7-[ (2-tert.-Butoxycarbonylaminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(1^,^-thiadiazol^-mercaptomethylj^-cephem-^ carbonsäure (oi)

Zu einer gerührten Lösung von 1,10 g (0,0041 Mol) Verbindung 3 und 0,80 g (0,0044 Mol) 2,4-Dinitrophenol in 40 ml Äthylacetat gibt man in einer Portion 0,90 g (0,0044 Mol) N^'-Dicyclohexylcarbodiimid und rührt die Mischung 3 Std. bei 25°C. Man sammelt den Dicyclohexylharnstoff und dampft das Filtrat bei 45° (15 mm) ein, wobei man den aktivierten Ester in Form eines Öls erhält. Das Öl löst man in 30 ml THF. Eine Lösung von 1,22 g (0,0037 Mol) 7-Amino-3-(1,3,4-thiadiazol-2-mercaptomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure und 1,03 ml (0,0074 Mol) Triäthylamln in 20 ml 50 % THF A'asser wird zu der Lösung des aktivierten Esters gegeben und 18 Std. bei 25°C gerührt. Das THF entfernt man bei 40° (15 mm) und das Konzentrat (10 ml) wird mit 5 x 100 ml Äther gewaschen und mit 40 %iger Phosphorsäure auf pH 2 angesäuert. Die Mischung wird mit 6 χ 100 ml Äthylacetat extrahiert und die vereinigten Extrakte werden mit Wasser und schließlich mit einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen. Die Äthylacetatlösung wird bei 40° (15 mm) auf ein Volumen von 20 ml eingedampft und mit 30 ml Skellysolve B verdünnt. Das Pro-

- 94 -509810/1154

•ss.

dukt 6i wird gesammelt und 16 Std. im Vakuum über P₂°5 bei 25⁰C getrocknet, wobei man 1,4 g (65,4.90 weißes Pulver erhält. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur. Schmelzpunkt 135⁰C (langsame Zersetzung).

7-[ (2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-0,3,4-thiadiazol-2-mercaptomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7i;

Eine Lösung von 1,30 g (0,00226 Mol) Verbindung 6i und 3,0 ml Trifluoressigsäure wird 1 Std. bei O⁰C gerührt. Die Lösung verdünnt man mit 200 ml Äther und den Niederschlag sammelt man durch Filtrieren. Das Trifluoracetatsalz wird in 40 ml Wasser suspendiert und mit verdünntem Ammoniumhydroxyd auf pH 6,0 eingestellt. Den gummiartigen Rückstand verreibt man dann mit 25 ml Acetonitril, wobei man 370 mg (34,5 %) weißes Pulver erhält. Das Produkt wird 16 Std. im Vakuum über P₂O₅ bei 25⁰C getrocknet. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur. Schmelzpunkt 135⁰C (langsame Zersetzung). '

Analyse C₁₉H₂₁N₅O^S,

C HN

ber.: 45,85 4,65 14,07 % gef.: 45,71 4,52 14,12 %

Die Löslichkeit dieser Verbindung im Gleichgewicht, ausgedrückt in γ/ml,beträgt 4,28 in destilliertem Wasser und 5,85 in Phosphatpuffer bei pH 7,0.

- 95 -

509810/1154

Beispiel 26

.CH₂NH₂

CH₂CONH

CH₂-S-C^ ^C-CH₂OH OOH

7-[ (2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(5-hydroxymethyl-1,3.4-thiadiazol-2-mercaptomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7j5

Die Arbeitsweise ist dieselbe wie in Beispiel 8 beschrieben, mit der Ausnahme, daß das Produkt aus dem Wasser gesammelt wird, wobei man 340 mg (29,8 %) eines gelb-braunen Pulvers erhält. Eine zweite Fraktion wird aus dem Filtrat erhalten; sie beträgt 230 mg (20,0 %) Verbindung 7j in Form eines gelben, kristallinen Halbhydrats. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur. Schmelzpunkt 150⁰C (langsame Zersetzung).

Analyse C₂₀H₂₃N₅O₅S₃* 1 1/2 H₂O:

CHN

ber.: 44,75 4,88 13,05 % gef.: 44,84 4,63 12,75 %

Es wird festgestellt, daß die zweite Fraktion die gleiche Reinheit aufweist. Die IR- und NMR-Spektren stehen im Einklang mit der Struktur.

- 96 -509810/1 154

M/15 457

Beispiel 27

CH—' N

Il H

CH₀-S-C^ ^N

^d N
OH ι

H ·

7h

7-[ (2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-

(1,2,3-triazol-5-mercaptomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7h)

Die Arbeitsweise ist dieselbe wie die in Beispiel 8 beschriebene, mit der Ausnahme, daß das Produkt aus 15 ml Acetonitril gesammelt wird, wobei man 100 mg (19,1 %)
Verbindung 7h in Form eines hellgelb-braunen Pulvers erhält. Die IR- und NMR-Spektren stehen im Einklang mit der Struktur. Schmelzpunkt 16O°C (langsame Zersetzung).

Analyse

C I 19	\S2 '	2H2O:	C	H	H	16	N .	%
			16,17	5	,88	16	,38	%
		ber.:	15,76		,25		,85
		gef.:
i22l

- 97 -

509810/1154

M/15 457

Beispiel 28

Herstellung von 7-C (2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(1-methyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7c), 2.Ansatz

TO-BOC COOH

NH-BOC

coo-O

HO,

NH-BOC

ΠΓ

7c

Man gibt 9,0 g (0,044 Mol) Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) zu einer Mischung von 11,2 g (0,042 Mol) (2-N-t-Butoxycarbonylamino-1,4-cyclohexadienyl)-essigsäure (2) und 8,03 g

- 98 -

509810/1154

M/15 457

(0,044 Mol) 2,4-Dinitrophenol in 250 ml THF. Die Mischung wird bei Raumtemperatur 1,5 Std₀ gerührt und der ausgefällte Harnstoff wird abfiltriert. Zum Filtrat giTrt man eine Lösung von 11,5 g (0,035 Mol) 7-Amino-3-(1-methyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure und 14,7 ml (cai Op105 Mol) Triäthylamin in 250 ml Wasser. Die Mischung rührt man bei Raumtemperatur 20 Std. und das THF entfernt man unter vermindertem Druck unterhalb 40⁰C. Die · wäßrige Lösung wird mit 200 ml Äther gewaschen, mit 6n HCl angesäuert und mit 3 x 200 ml Äthylacetat extrahiert. Die Extrakte wäscht man mit Wasser und einer gesättigten wäßrigen NaCl-Lösung, trocknet über NapSO^ und dampft zur Trockene ein. Den öligen Rückstand verreibt man mit 500 ml Äther, wobei man 8,05 g (40 %) des N-blockierten Produkts 7c (d.h. 6c) erhält.

IR-Spektrum: \^ ™j^o1 1770, 1710, 1650, 1510 cm"¹

IUcLjC

Eine Mischung von 8,0 g (0,0138 Mol) Verbindung 6c,und 16 ml Trifluoressigsäure (TFA) rührt man 1 Std. bei 0 bis 5°C und verdünnt dann mit 300 ml Äther, um das Trifluoracetat von Verbindung 7c abzutrennen, das in 30 ml 50 %igem Acetonitril gelöst wird, mit ko'nz. NH^OH auf pH eingestellt wird und mit 500 ml Acetonitril verdünnt wird. Den abgetrennten gelben Niederschlag wäscht man gut mit 200 ml Acetonitril, wobei man 5,2 g (79 %) amorphe Verbindung 7c (Ansatz 2) erhalte Schmelzpunkt 195 bis 205⁰C (Zersetzung) „

IR-Spektrum: ^ ^^ol _{178Oj l65}o, 1620, 156O cm"¹.

) PH 7 UV-Spektrums \_m&x 274 nm (£ 9IOO).

Analyse ^Ci9^H ₂3^N7^OH^S2°^H2^O:

C H N S

ber„: 46,05 5,08 19,78 12,9¹I % gef.: 46,64 4,60 18,63 12,59 %

-99-5098 10/1 1 5A

457

Löslichkeit in 0,1 m Phosphatpuffer (pH 7): 9,4 mg/ml.

Beispiel 29

Herstellung von 7-[ (2-Am~inomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-a.cetamido ]-3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7d; - 2.Ansatz

OOH t

NH-BOC

NO,

NH-BOC

⁰⁰Q^Q-CH₂ COo^H

N N

NH₂

Zu einer gerührten Lösung von 8,02 g (0,03 Mol) 2-(N-t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienylessigsäure (2) und 5,6 g (0,0304 Mol) 2,4-Dinitrophenol in 80 ml trockenem THF gibt man 6,2 g (0,0304 Mol) DCC bei 5 bis 10⁰C in einer Por-

- 100 -

509810/1154

tion zu und rührt die Mischung 2 Std. bei Raumtemperatur. Nach Entfernung des ausgefällten Harnstoffs wird die Reaktionsmischung bei O bis 5⁰C mit einer Lösung von 9,4 g (0,027 Mol) 7-Amino-3-(5-methyl-1,3,4-"thiadiazol-2-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure und 7,7 ml (0,055 Mol) Triäthylamin in 30 ml V/asser und 50 ml THF gemischt. Die Mischung rührt man 20 Std. bei Raumtemperatur und konzentriert unter vermindertem Druck, um die Hauptmenge des THF zu entfernen. Die wäßrige Lösung v/ird mit 2 g Aktivkohle behandelt. Das Filtrat bedeckt man mit 100 ml Äthylacetat und säuert mit 20 % HCl an. Die wäßrige Schicht v/ird mit zwei 50 ml Portionen Äthylacetat extrahiert. Die Äthylacetatschicht wird mit den Äthylacetatextrakten vereinigt, mit zwei 100 ml^:Portionen Wasser gewaschen, über wasserfreiem Na₂SO^ getrocknet und unterhalb 4O⁰C zur Trockene konzentriert, wobei man Verbindung 6d in Form eines viskosen Öls erhält, das beim Verreiben mit Äther sich verfestigt, wobei man Verbindung 6d erhält. Ausbeute 12,5 g (70%).

IR-Spektrum: \) 5j£ 1780, 1700, 1680, 1510 cm"¹

12,5 g (0,021 Mol) des BOC-geschützten Cephalosporins 6d wird mit 25 ml TFA bei 0 bis 5⁰C unter Rühren behandelt. Man rührt noch 1 Std. bei derselben Temperatur. Die Mischung wird mit 300 ml Äther verdünnt, wobei man einen weißen Niederschlag erhält, den man in 30 ml 50 tigern wäßrigem Acetonitril löst und mit 1 g Aktivkohle behandelt. Das Filtrat wird mit konz. NH^OH auf pH 6 eingestellt und mit 250 ml Acetonitril verdünnt, wobei man 8 g (77 %) Verbindung 7d (Ansatz 2) in Form eines blaßgelben Pulvers erhält. Schmelzpunkt 230 bis 235⁰C (Zersetzung). -

IR-Spektrum: Sj 5j£ ¹?90, 1650, 1620, 1570" cm"¹.

- 101 509810/1154

UV-Spektrum: X^ ^NaHC03 - pH-Puffer 7 225 nm (sh) (i 11000)

277 nm (8 12400).

Analyse C₂₀H₂₃N₅O₁₁S₃:

CHNS ber.: 48,66 1,70 14,19 19,49 % gef.: 48,55 4,34' 13,74 19,00 %

Löslichkeit in 0,1 m Phosphatpuffer (pH 7): 3,4 mg/ml.

- 102 -

509810/1154

M/15 457

B e i s ρ 1 e 1 30

Herstellung von 7-[ (2-Aminomethyl-i,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(3-hydroxypyridazine ,2-c^-s-triazol-6-ylthiomethyl)-■3-·cephem-4-carbonsäure (7e) - 2. Ansatz

M-BOC —^ COOH

.COOH

NH-BOC

COOH

COOH

7e

Zu einer gerührten Lösung von 10,1 g (0,038 Mol) a-[2-(t-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienyl!^essigsäure (2) und 8,1 g (0,044 Mol) 2,4-Dinitrophenol in 300 ml THF gibt man 9,1 g (0,044 Mol) DCC in einer Portion und rührt die Mischung 2 std. bei Raumtemperatur. Den abgeschiedenen

- 103 509810/1154

Harnstoff filtriert man ab. Zum Filtrat gibt man eine Lösung von 14,4 g (0,038 Mol) 7-Amino-3-(3-hydroxypyridazin[3,2-c]-s-triazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure und 12,2 g (0,12 Mol) Triethylamin in 250 ml Wasser und rührt die Mischung 16 Std. bei Raumtemperatur. Die Reaktionsmischung wird unter vermindertem Druck unterhalb 40⁰C eingedampft und das wäßrige Konzentrat wird mit 5 x 200 ml Äther gewaschen und mit Aktivkohle behandelt. Das Filtrat v/ird mit verdünnter HCl-Lösung auf pH 2 angesäuert,..wobei ein Niederschlag entsteht, den man mit 200 ml Wasser wäscht und mit 5 x 500 ml heißem THF extrahiert. Die THF-Extrakte werden unter vermindertem Druck unterhalb 40⁰C eingedampft und der Rückstand wird mit 500 ml Äther verrieben, wobei man die N-blockierte Verbindung 7e (d.h. 6e) erhält.

IR-Spektrum:^) *?£ 1765, 1700, 1340, 1240, 1150 cm"¹.

Zu 7,8 g (0,0124 Mol) BOC-blockiertem Cephalosporin 6e gibt man tropfenweise bei 5⁰C 16 ml TFA und rühriJ die Mischung 1,2 Std. bei Raumtemperatur. Die Mischung verdünnt man mit 1000 ml Äther und den erhaltenen Niederschlag löst man in 50 ml 50 % Acetonitril. Die Lösung wird mit konz. NH^OH auf pH 4 bis 5 eingestellt und mit 200 ml Acetonitril verdünnt, wobei man 5,55 g (84 %) Verbindung 7e (2.Ansatz)· vom Schmelzpunkt 220 bis 230⁰C (Zersetzung) erhält.

IR-Spektrum:V ™ 1760, 17IO, 1640, 1540, l46O cm"¹, UV-Spektrum: λ^°3 - pH-Puffer 7. ,„ _{nm (£ 20 000)} Analyse C₂₂H₂₃N₇O₅S₂^H₂O:

CHN ber.: 47,06 5,03 17,46 %

gef.: 46,28 3,73 17,20 %

46,37 3,71 16J93 %

Löslichkeit in 0,1 m Phosphatpuffer (pH 7): 1,1 mg/ml.

- 104 50 9 810/1154

fog.

M/15 457

V7 ie der aus fällung; 0,5 ml Trifluoressigsaure werden zu 100 mg (2. Ansatz) Verbindung 7e bei 5⁰C zugegeben und die Mischung wird 5 Std. bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wird mit 50 ml Äther verdünnt. Das erhaltene Trifluoracetat wird in 10 ml 50 ^iger wäßriger Acetonitrillösung gelöst. Die Lösung stellt man mit 10 % NH^OH auf pH 6,0 ein, wobei man einen hell-braunen Niederschlag (91 mg) mit Schmelzpunkt 224 bis 234°C (Zersetzung) erhält.

IR-Spektrum:>| ^nuJo1 1760 1710 I63O 15HO 1460 cm"¹

max

1760, 1710, I63O, 15HO, 1460 cm

UV-Spektrum:

Analyse

⁺ pH 7 Puffer 253 nm ( 8 19 000)

max

2H2O:	C	06 .	VJl	H	N	46
ber.:	47,	30 25	M	,03	17,	89 82
gef. :	47, 47,		,23 ,21	17, 17,

Löslichkeit in 0,1 m Phosphatpuffer (pH 7): 1,1 mg/ml.

Beispiel

Salicylaldehydaddukt von 7-[ (2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(1-methyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7c)

- 105 509810/1154

•f©6.

Zu einer gerührten Suspension von 766 mg (1,6 mMol) Verbindung 7c (Beispiel 11, 2.Anaatz)und 300 mg (3 mMol) Triethylamin in 8 ml Methanol gibt man 370 mg (3 mMol) Salicylaldehyd und die Mischung wird 30 Min. bei Raum- temperatur gerührt, wobei man eine klare, dunkelgelbe Lösung erhält. Die Lösung wird mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt und man gibt 2 ml (1 m Lösung von Kalium-2-äthylhexanoat in Äthylacetat) KEH zum Filtrat zu. Die Mischung wird mit einer großen Menge Äther (100 ml) verdünnt, um das Produkt 8c auszufällen, das durch Filtrieren gesammelt, mit 30 ml Äther gewaschen und getrocknet wird. Ausbeute 788 mg (78 %). Schmelzpunkt 165 bis 173°C (Zersetzung).

IR-Spektrum:^ ⁿ^J 1760, 1660, 1625, .1605, 1280 cm

UV-Spektrum: λ ^a_x ^{7 puffer} 256 nm (£ 19 500),

275 nm (fc 14 000, sh), 325 nm (t 2 600).

NMR-Spektrum:cT^D^°"^d6 3,95 (3H, s, N-CH₃), 4,96 (IH, d, 4 Hz, 6-H), 5,50 (IH, m, 7-H), 5,69 (2H, s, C=C-H), 6,7 - 7,6 (4H, m, Phenyl-H), 8,68 (IH, s, -CH=N-), 9,00 (IH, d, 8 Hz, 7-CONH).

Analyse C₂₆H₂^OcN-S₂K.H₃O:

CHNS ber.: 48,96 4,43 15,37 10,06

gef.: 48,96 4,01 14,33 9,31 48,85 4,10 14,26 9,70

- 106 509810/1154

M/15 457

Beispiel 32

Salicylaldehyd von 7-C (2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)· acetamido]-3-(5-methyl-1,3.4-thiadiazol-2-yl-thiomethyl)-3-cepheIIl·-4-carbonsäure (7d)

8d

Zu einer gerührten Mischung von 778 mg (1,6 mMol) Verbindung 7d (Beispiel 12, 2.Ansatz) und 300 mg~(3 inMol) Triäthylamin in 8 ml Methanol gibt man 370 mg (3 mMol) Salicylaldehyd und rührt die Suspension 1*5 Min. bei Raumtemperatur, wobei man eine klare, dunkelgelbe Lösung erhält, die mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt wird. Man gibt 2 ml (1 m Lösung in Äthylacetat) KEH zum FiItrat. Die Mischung wird mit einer großen Menge Äther (100 ml) verdünnt, um das Produkt 8d auszufällen, das durch Filtrieren gesammelt, mit 30 ml Äther gewaschen und getrocknet wird. Ausbeute 855 mg (84 %). Schmelzpunkt: 163 bis 170⁰C (Zersetzung). . .

IR-Spektrum:^ ^ 1765, 1630, 1610, 1280 cm"¹.

UV-Spektrum: A^_x ^{7 Puffer} 257 mn (i 19 800),

■ 275 ma U 14 200)(eh), 325 nm (£ 2 700).

- 107 509810/1154

6-H), 5,50 (IH, m, 7-H), 5,68 (2H, s, C=C-H), 6,70 - 7,60 (4H, m, Phenyl-H), 8,65 (IH, s, CH=N), 8,92 (IH, d, 8 Hz, -CONH-).

Analyse C₂₇H₃₆O₅N₅S Κ·3/2 H₃O:

CHNS ber.: 48,92 4,41 10,57 14,51 % gef.: 48,91 3,7¹J 10,15 12,75 % 49,21* 4,04 10,34 13,57 % Beispiel 33

Salicylaldehydaddukt von 7-[ (2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(3-hydroxypyridazin[3,2-c 1-s-triazol-6-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7e)

ISl

8e

Zu einer gerührten Suspension von 754 mg (1,42 mMol) Verbindung 7e (Beispiel 13, 2.Ansatz) und 300 mg (3 mMol) Triäthylamin in 7 ml Ν,Ν-Dimethylformamid gibt man 370 mg (3 mMol) Salicylaldehyd und rührt die Suspension 1,5 Std. bei Raumtemperatur, bis eine klare, dunkelgelbe Lösung erhalten wird, die mit einer kleinen Menge Aktivkohle behandelt wird. Man gibt 1,5 ml KEH (1m Lösung in Äthylacetat) zum Filtrat. Die Mischung wird mit einer großen Menge Äther (100 ml) verdünnt, um das Produkt 8e auszufällen, das mit 30 ml Äther gewaschen und getrocknet wird. Ausbeute 906 mg (95 %). Schmelzpunkt 215 bis 222⁰C (Zersetzung) .

- 108 -

509810/1154

M/15 457

1760, 1720, I660, 1615, I6OO, 1345, 1275 cm"¹

UV-Spektrum: X^_x ^{7 Puffer} 255 nm (£ 28 800),

310 nm (£ 8 500, sh).

NMR-Spektrum:cTpp^⁰"^d6 " 5,00 (IH, d, 4 Hz, 6-H), 5,50 (IH, m, 7-H), 5,72 (2H, s, C=C-H), 6,7 - 7,6 (6H, m, PhenylrH), 8,70 (IH, s, CH=N), 9,00 (IH, d, 8 Hz, -CONH).

Analyse C₂₉H₂₆O₆N₇S₃K-H₂O:

C H N S

ber.: 50,49 4,09 14,21 9,30 *

gef.: 50,34 4,15 14,02 9,36 %

50,30 4,00 14,03 9,31 t

Beispiel 34

Das Kaliumsalz der Verbindung gemäß Beispiel 1 wird hergestellt, indem man eine Lösung von Kalium-2-äthylhexanoat (KEH) in Äthylacetat zu einer Lösung des Cephalosporins (Zwitterion) (7a) in DMSO gibt, um das gewünschte Kaliumsalz auszufällen.

Beispiel 35

Das Natriumsalz der Verbindung gemäß Beispiel 3 wird hergestellt, indem man zuerst in Methanol sein Diäthylammoniumsalz herstellt und anschließend eine Lösung von Natrium-2-. äthylhexanoat in Äthylacetat zugibt und mit Isopropanol verdünnt, um das gewünschte Natriumsalz auszufällen, das eine Löslichkeit in Wasser größer als 250 mg/ml aufweist.

Die eine 3-Acetoxymethylgruppe und eine 3-Methyigruppe enthaltenden entsprechenden Verbindungen werden herstellt und mit den Verbindungen der Beispiele 3 und 18 in -vHro verglichen, wobei man die nachfolgenden Ergebnisse erhält:'

Ch
ο
co
οο

CH₉- C-NH

COOH

Organismus

Minimale Hemmkonzentrationen (M.I.C.) (γ/ml)

R= -OCOCH₃ 6w

S. aureus Smith** A9537 0,8

S. aureus Smith** A9537 3,1 + 50 % Serum

S. aureus Rüssel 0,8-1,6

S. aureus BX1633 A9606 3,1

Str. pyogenes* A9604 0,8-0,16 + 5 % Serum

D. pneumoniae* A9585 + 5 % Serum

Mycobacterium 607 >100

E. coli NIHJ 25-50 Ξ. coli ATCC 0739 25 E. coli Juhl** Al 5119 25 K. pneumoniae** A9977 12,5-25

-H
6x

1, 25
3, 25

12,5,· 12,5
12,5, 25
1,25-2,5

N-

N-

-N

CH

6c (Beisp.3) (Beisp.18)

0,2-0,4 0,8-1,6

0,4-0,8

1,6
0,04-0,08

0,16-0,31 ]>2,5, 1.0· 0,04-0,08

>1OO
>1OO
>1OO
>1OO
>1OO

> 100

1,6-3,1
3,1-6,3
3,1-6,3
0,8-3,1

0,8 1,6

0,8 1,6 0,16

0,08

>100 3,1 3,1 6,3 3,1

VJl VJl

FORTSETZUNG:

cn σ co oo

N-

.N

Organismus

R= - OCOCH, 6w

*3 . ^νια3
6c (Beisp.3) (Beisp.18)

K.	pneumoniae**	AI5130	12,5-50	>1OO	3,1-6,3	3,1
Pr.	mirabilis**	A9900	50	>1OO	100	25
Pr.	niorganii**	AI5I53	>1OO	>1OO	>1OO	7-100
SaI	. enteritidis**	A9531	12,5	>1OO	1,6-3,1	1,6
Ser	. marcescens**	A20019	>1OO	>1OO	>1OO	>1OO
Ps.	aeruginosa**	A9843	>1OO	>1OO	^100	>1OO

* 50 % NährbrUhe - 45 % antibiotische Testbrühe ** bei 10""^ Verdünnung

Nach Lösung in NährbrUhe wird gefunden, daß die obigen Proben die angegebenen minimalen Hemmkonzentrationen (M.I.C.) in γ/ml gegen die aufgezeigten Mikroorganismen aufweisen, wie dies durch Über-Nacht-Inkubation bei 37⁰C durch RöhrenverdUnnung festgestellt wird.

Die ausgezeichnete in vivo Aktivität der bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen, beispielsweise Verbindung 7c (Beispiel 20, BB-S311) und Verbindung 6c (Beispiel 3, BB-S336) wird gezeigt, indem man sie mit der Verbindung MR-S94 bei Bestimmungen (durch subkutane Verabreichung des Pharmakums an infizierte Mäuse) der minimalen heilenden Dosis bei 50 % der Mäuse (GD₅₀) in mg/kg gegen lethale Dosen der angegebenen Mikroorganismen vergleicht, wobei man die nachfolgenden Ergebnisse erhält:

	aureus BX-1633	CD50	in mg/kg	MR-S94
	. pyogenes A96O4	BB-S311 (Ansatz 1)	BB-S336	■χ Η J >
Insultorganismus	coli Juhl	1,8		0,8
• co	coli Juhl	1,0	-
St,	. Mirabilis A99OO	6,25		i»,2
E.	pneumoniae D-Il	5,6	-	8
E.	aureus Smith	9,1	-
Pr,	8,5	-	3,1
K.	1,8	-
S.

- 112 -

509810/1154

Bei Rattenurin-Wiedergewinnungsuntersuchungen werden die Cephalosporine subkutan in einer Dosis von 200 mg/kg verabreicht, wobei die Zwitterionen in Form einer wäßrigen Suspension (40 mg/ml; DMSO - 0,5 % NaHCO₃-H₂O =1:1:8) und die Salicylaldehydderivate, die auf molekularer Basis gleiche Wirksamkeit aufweisen, in wäßriger Lösung verabreicht werden. ' . '

Bei Ratten-Kristellur ieuntersuchungen ergibt die Verbindung BB-S311 befriedigend hohe Serum- und Urinkonzentrationen ohne irgendein Zeichen von Kristallurie. Untersuchungen bei Hunden zeigen, daß BB-S311 hohe, kristallfreie Urinkonzentrationen ergibt. Parenteral© (im) Absorptionsstudien bei Mäusen zeigen an, daß der höchste Spiegel von BB-S311 höher ist als der von Cephalothin,und daß dieses Antibiotikum im Blut langer verbleiben kann als Cephalothin. Die Menge .an im-verabreichter Dosis von Verbindung BB-S311, die aus dem Rattenurin wiedergewonnen wird, beträgt.31 %, ein Wert, der dem bei MR-S94 (35,5 %) erhaltenon Wert sehr· ähnlich ist. Die Wiedergewinnung an Cephaloridin beträgt 43,1 ⁰A, während die von Cephalothin 18,1 ^ beträgt. BB-S311 trat im Urin als einzige bioaktive Einheit mit einem Rf-Wert auf, der identisch ist mit dem in einer wäßrigen Lösung der Verbindung als solcher gefundenen Wert.

Die antibakterielle Aktivität von BB-S311 wurde auch mit der von MR-S94 in einem Agar-Verdünnungs-Testsystem verglichen. In Müller-Hinton-Experimenten unter Einschluß 18 gram-positiver und 58 gram-negativer Organismen wurde gefunden, daß BB-S311 eine Aktivität hat, die in derselben Größenordnung wie dtevan MR-S94 liegt. Bei weiteren Serien von Experimenten wurde die relative Aktivität von MR-S94 und BB-S311 gegenüber 32 Stämmen von jeweils Serratia marcescens, Enterobacter sp., Providencia stuartii und Proteus sp. bestimmt. Diese Verbindungen hatten eine hervorragende Aktivität gegen die meisten Vertreter von Enterobacter sp., P. stuartii und alle Proteus sp.-Typen mit Ausnahme von

- 113 -509810 /115A ■

M/15 457

P. morganii.

.Es wurde gefunden, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen nach dem Auflösen, beispielsweise in DMSO oder Wasser (2 mg/ml), gefolgt von Verdünnung mit Nährbrühe, die nachfolgenden minimalen Hemmkonzentrationen (M.I.C.) in γ/πιΐ gegen die angegebenen Mikroorganismen aufweisen; dies wurde durch Über-Nacht-Inkubation bei 37⁰C durch Röhrenverdünnung festgestellt. Es sind auch Ergebnisse mit verschiedenen alten Cephalosporinen angeführt. Bei dicr;em und v/eiteren Tests erweisen sich die Salicylaldehydderivate als genauso wirksam wie das entsprechende Zwitterion,und auch sie sind sehr löslich in Wasser.

- 114 509810/1154

Nährbrühe
Organismus

Minimale Hemmkonzentration (/U

D. pneumoniae* (1O"³)** A9585

Str. pyogenes* (10"⁵)** A9604

S. aureus Smith (1O"⁴) .A9537

S. aureus , A9537

+ 50 % Serum (10"⁴)

S. aureus BX1633 (1O"⁵) A96O6 S.aureus BX1633 (1Ο~²) Α9606

ι S. aureus Meth.-Res. 5

Ä15097 MR-S94

BB-S311 . MR-S 96'

(7c) (Beisp.20)

0,016 0,016

0,03

0,016 0,016

0,03

0,13 0_s13

0,25

0,25 0,25

0,5

0,3 0,25

0,3 ·

0,3 , 0,25

0,6

2

BB-S312

(7d) (Beisp.21)

0,008 0,016

0,008 0,016

0,06 0,13

0,13 0,25

0,16 0,3

0,16

0,3 ^

1 5*

2 Ni

SaI. enteritidis

E. coli Juhl

E. ,coli (10"^

K. pneumoniae (10 )

K. pneumoniae (10 )

A9531

AI5I19

A9575

A9977

AI5I30

0,08 0,16

0,6 0,6

0,3
0,3

2
2

0,16

0,6

0,6

0,08 0,16

0,6 13

2
2

0,16 0,3

2
2

OO O N)

Organismus.

cn ο co

MR-S94 0,3 4

Pr. mirabilis (10"⁴) A9900 Pr. morganii (10 ) A15153 Ps. aeruginosa (10~*) A9843A >125

-4

Ser. Marcescens (10 ) A20019 Ent. cloacae (10"^) A9656 Ent, Cloacae Ent. cloacae

A9657 Α9659

BB-S311

0,3 0,6

4 4

>125 >125

8 16

32 16

0,6 1,3

2 4

MR-S96

BB-S312

0,6	0,3 0,6
4	4 8
>125	>125 >125
16	16 16
63	32 125
0,3 '	0,3 0,6
2	4 8

* 45 % antibiotische Testbrühe + 5 % Serum + 50 % Nährbrühe ■ ** Verdünnung der Übernachtbrühkultur

OI
O
CD
00

Nährbrühe

Organismus

D. pneumoniae* (1O^-5)** Str. pyogenes* (1θ~^)** S. aureus Smith (10 )

S. aureus . + 50 % Serum (10 )

S. aureus BX1633 (10"^) S.aureus BX1633 (10~²) S. aureus meth.-resist. (ΙΟ"³)

Sal.enteritidis (10 )

E, coli Juhl (10"⁴) E, coli (10"⁴)

K. pneumoniae (10 ) K. pneumoniae (10";) Pr. mirabilis

Pr, morganii (10 )
Ps· aeruginosa (10 )*
Ser.marcescens (10 )
Ent. cloacae (10 )
Ent* cloacae (10 )
Ent. cloacae (10 )

Minimale Hemmkonzentration (γ/ml)

Cepha- Cepha- Cepha- Cefa- Cepha- Cephalothin ioridin pirin zolin cetril non

Cefa- BB-S311 mandol

A9585 A9604 A9537 A9537

A9606 A9606 A15097

A9531

AI5II9

A9675

A9977

AI5130

A99OO

AI5I53

A9843A

A20019

A9656

A9657

A9659

0,004 0,008 0,008 0,02 0,016

0,004 0,008 0,008 0,04 0,008

o,oi6 0,13 0,16 0,25 0,25

0,03 0,16 2 0,3

0,3

0,6

>125 >125 >125 >125

2 >125

0,3

0,3 16

125 1

8 1

0,6

0,6 O₉ 5 4

0,5 2

0,5

125

>125

>125 >125 2

>125 0,5 125

0,6 0,6 4

2,5

16

16 4

>125 >125 >125 >125

0,5

0,5 1

0,5

2 '

32

>125 >125 >125

63

0,008 0,016

0,008 0,016

0,25 0,13

0,5 0,13

0,5 0,3

2 0,3

4

0,06 1

16 0,5

2 >125

125 >125

32

0,08

0,3

0,16

0,3 4

>125 32 32

* 45 % antibiotis.che Testbrühe - 5 % Serum - 50 % Nährbrühe ** Verdünnung der Übernachtbrühkultur

cn ο «ο

Nährfrrühe
Organismus

D. pneumoniae*

Str. pyogenes* (10"³)** S.aureus Smith (10 )

S, aureus r
+ 50 % Serum (10 )

S. aureus BX1633 (10"³) S. aureus BX1633 (10~²) S. aureus meth·-resist. (ΙΟ"³)

Sal. enteritidis (10 )

E. coli Juhl (1D~⁴) E. coli (10~⁴)

K. pneumoniae (10 ) K. pneumoniae (10 ) Pr. mirabilis (10~⁴) Pr. morganii (10 ) Ps. aeruginosa (10 ) Ser. marcescehs (10 ) Ent, cloacae (10~⁴) Ent. cloacae (1O~⁴) Ent. cloacae (1O""⁴)

A9585 A9604 A9537 A9537

A9606 A9606 A15097

A9531

AI5II9

A9675

A9977

AI5130

A9900

AI5I53

A9843A

A20019

A9656

A9657

A9659 Minimale Hemmkonzentration (γ/ml)
Ansatz Nr.721A Ansatz Nr.727A Ansatz Nr.731A

Beisp.25 ^m-^S9k Belsp.26 ^m'^S^ Beisp.Sy ¹^"³⁹⁴

0,008 0,008 0,06 0,06

0,16 0,16 1

0,16

0,6

0,3

0,3

125

32

63

0,3

0,004
0,004
0,03
0,03

0,16
0,16
2

0,08
0,3
2

0,16
.

0,016
0,016
0,13
0,13

0,3
0,3

0,16
0,6
1

0,3
2

0,3
4

>125
32
32

0,16
0,16
0,13
0,13

0,3
0,3
1

0,08

0,3

0,16

0,3
2

>125
8
32

1,3
1

0,03 0,03 0,25 0,5

0,3 0,6 4

0,3 2,5 8

1,3 8

1,3 32

>125

2,5 32

0,008 0,008 0,13 0,13

0,16 0,16 1

0,04

0,16

0,08

0,5

0,16

8 63

1,3 1

K) CO O K)

45 % antibiotische Testbriihe - 5 ;ό Serum Verdünnung der libernachtbrühlcuZtur Nährbrühe

2U2302

M/15457

Die ausgezeichnete in vivo Aktivität einer bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindung (Verbindung 6c_f Beispiel 3, BB-S336) wird gezeigt, indem man sie mit Ergebnissen vergleicht, die zuvor durch im wesentlichen dieselbe Arbeitsweise für MR-S94 bei Bestimmungen (subkutane Verabreichung desPharmakums an infizierte Mäuse) der minimalen heilenden Dosis für 50 % der Mäuse (CDc₀) in mg/kg gegen lethale Dosen der angegebenen Mikroorganismen vergleicht, wobei die fol-. genden Ergebnisse erhalten wurden:

	CD50	in mg/kg
Insultorganismus	BB-S336	MR-S94
S. aureus BX-1.633 E. coli Juhl	2,4 5,4	3,4 4,4

Bestimmung der Löslichkeiten

Die Löslichkeiten von Cephalosporinderivaten in 0,1 m Phosphatpuffer von pH 7,0 werden durch Biountersuchung und durch spektroskopische Methoden (wenn die Probe UV-Absorption zeigt) jeweils mit ihrem eigenen Standard, der vollständig solubilisiert ist, bestimmt. Die Testlösung und die Standardlösung werden,wie nachfolgend beschrieben, hergestellt. .

Herstellung der Testlösung -

Ungefähr 10 mg (1) einer Probe wird in ein Glasrohr gegeben und mit 1 ml 0,1 m Phosphatpuffer (pH 7,0) vermischt. Das Glasrohr wird verstöpselt, mit einer Metallkappe verschlos sen, auf eine Rotationsschüttelvorrichtung gegeben und 4 Std. bei 25⁰C bei 160 Upm bewegt. Die Lösung wird durch ein MiHiporen-Filter (HAWP 01300, mittlere Porengröße O_f45/um)

- 119 509810/1154 . ■

m/15 457

filtriert. Das FiItrat verdünnt man zur Verwendung für die Biountersuchung und die UV-Untersuchung wie folgt:

	Filtrat (ca.	1 ml)	f	für UV-Unter-	■	dem Puffer	0	00 ml ^	4- 5 ml ^	verdünnt auf 20 ml (4)
	0,5 ml	(4)	)0 ml					(2)	Λ	ml
							20
	\					ml (4)
	K	verdünnt auf 1			verdünnt auf 20 ml (4)
verwendet suchung	mit			ml
	4» 1
\
2

verwendet .für Biountersuchung

- 120 -

5 09810/1154

M/15 457

Herstellung der Standardlösung

Ungefähr 2 mg der gleichen Probe wird präzise gewogen und in 4 ml 1 % K₂CO, Lösung (^) (normalerweise innerhalb einer. Minute) gelöst. Die Lösung wird in einem Kolben mit 0,1 m Phosphatpuffer von pH 7 exakt auf 50 ml verdünnt und zur Herstellung der Standardlösungen für die Biountersuohung und die UV-Untersuchung wie folgt verwendet:

50 ml

für UV-Untersuchung

(40 γ/ml).

10 ml

(4)

verdünnt auf

20 ml (20 γ/ml)

verwendet als Standardlösung für UV-Untersuchung

für Biountersuchung T ml «

verdünnt auf 20 ml

20 ml

(2 γ/ml)

5 ml

verdünnt auf 20 ml

(4)

20 ml (0,5 γ/ml)

verwendet als Standardlösung für Biountersuchung

- 121 -

509810/1154

M/15 457

ANMERKUNGEN:

(1) Eine Probe von 20 mg oder mehr wird verwendet, wenn erwartet wird, daß die Probe löslicher ist.

(2) Man verwendet beim vorliegenden Test 0,1 m Phosphatpuffer von pH 7,0 als Verdünnungsmittel und auch als Vergleichslösung bei der UV-Untersuchung.

(3) Zuvor wurde bestätigt, daß beinahe dasselbe Ergebnis erhalten wird, wenn die Probe in DMSO (Dimethylsulfoxyd) solubilisiert und in gleicher Weise mit dem Puffer verdünnt wird.

(4) Das Volumen der Lösung wird präzise mit einer geeigneten Pipette oder Kolben gemessen.

- 122 -

501110/1154

Löslichkeiten (mg/ml) in 0,1 m Phosphatpuffer (pH 7,0)

7-Seitenkette	■	Ν—Ν	OH	Ν—Ν	MR-S94	■-	BB-S336	(6c)	BB-S311 (7c)
R-NH-; R =	CH,		A=^1I		BA UV	509810/	BA	UV ·	BA UV
kette ^"\^		J V-N	-^ V-N	2,0 1,9		25,6	24,6	9,7 9,7
-CH2-S-R'; R'=		Λ /	V_/		—	23,0	26,0	9,4
N N 11 Il	N N		\ /					9,6 7,8
I	-L Ji-CH						7,8 7,8
S 3		MR-S96		BB-S341	(6d)	BB-S312 (7d)
Ν—Ν // ·\		1,2 0,9		4,3	4,6	8,8 7,6
4 YoH					3,4
X=J		BB-S150	BB-S340	(6a)	BB-S180 (7a)
N=N		4,4 4,4	16,8	16,0	3,1
				4,1
	BB-S226	BB-S338	(6b)	BB-S269 (7b)
	2,5	3,0	3,0.	1-2,5 9,0
	2,1			1,7
3,8 3,5
2,2
BB-S207	BB-S33S	) (6e)	BB-S313 (7e)
4,2 3,9	8,0	8,1	5,9 7,7
3,6			1,3
			1,5 3,1
			3,7 4,4
			BB-S314 (7f)
		8,7 . 8,9
1 154		BB7S324 (7g)
		8,0
123 -

ANMERKUNGEN;

BA: Biountersuchung UV: UV-Untersuchung

Die für dieselbe Verbindung in Verschiedenen Zeilen angegebenen Ergebnisse wurden erhalten, indem man Proben von verschiedenen Ansätzen verwendete.

Die eine 3-Acetoxymethylgruppe und eine 3-Methylgruppe enthaltenden entsprechenden Verbindungen wurden hergestellt und in vitro mit der Verbindung gemäß Beispiel 1 mit den folgenden Ergebnissen verglichen:

- 124 509810/1154

.CH₂NH₂

M/15 457

^CH₂R 0OH

Minimale Hemmkonzentration (γ/ml)

Organismus	aureus Smith	pneumoniae 5 % Serum	coli NIHJ	. aeruginosa	A9537	R= -OCOCH,	6	—H	,3	N N
	aureus Smith 50 % Serum	Mycobacterium 607	coli ATCC 8739		A9537		3		,5
	aureus Rüssel	E.	coli Juhl				1		,5	I CH,
S.	aureus BX1633	E.	pneumoniae		A96O6	1,	1	>3	• 5	0,8
S.	Str. Pyogenes + 5 % Serum	E.	pneumoniae	A9604	6,	31	• >6	,5	1,6
S.	D.	K.	. mirabilis	A9585	3,	31	>12		0,8
S.	K.	. morganii		3,		>12		1,6
	Pr	SaI. enteritidis		0,		> 2		0,16
	Pr	Ser. marcescens		0,		> 2		0,08
Ps	A15119	7 100		>1OO		>1OO
A9977	100		>1OO		3,1
AI5I30	25		>1OO		3,1
A99OO	50		> 100		6,3
A15153	25		>1OO		3,1
A9531	25		>1OO		3,1
A20019	100		>1OO		25
A9843	>1OO		>1OO	100
25	?1OO	1,6
>1OO	>1OO	>ioo'
>1OO	>1OO	> 100·

- 125 509810/1154

Claims (15)

M/15 457 PATENTANSPRÜCHE

1. Verbindung der Formel

CH₂CONH —τ S

CH₂-S-R

o' ^²^

COOH

worin R die Bedeutungen Ν—N

N=-N
N-N^ I N — N N N

CH₃

OH

N-N l| >>Ν—\ . ^λΝ—f , P H . ^

N N

- 126 -

509810/1154

besitzt, oder ein leicht spaltbarer Ester, ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder eine Schiffsche Base

davon.

2.. Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R die Bedeutungen ■ ·

HO . N — N

 Η

besitzt.

3. Verbindung gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,

daß R für

N N

CH.

steht.

4. Die Schiffsche Base mit Salicylaldehyd einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3.

5α Das Natrium- oder Kaliumsalz einer Verbindung- gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3.

6. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 j, dadurch gekennzeichnet, daß man entweder

- 127 509810/1154

(A) eine Verbindung der Formel

CH₂-S-R

worin A die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzt, oder einen leicht spaltbaren Ester oder ein Salz davon mit einem Acylierungsderivat einer Säure der Formel

CH₂NHB

(III)

•worin B für eine aminoschützende Gruppe steht, umsetzt, und die aminoschützende Gruppe entfernt, wobei die gewünschte Verbindung der Formel I oder ein leicht spaltbarer Ester oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon entsteht und, gegebenenfalls, entweder vor oder nach Entfernen von B

(a) durch an sich bekannte Methoden das Produkt in Form der freien Säure oder eines Salzes davon in die entsprechende Schiffsche Base, einen leicht spaltbaren Ester oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon umwandelt, oder ,

(b) durch an sich bekannte Methoden das Produkt in Form eines leicht spaltbaren Esters oder eines Salzes davon in die entsprechende freie Säureverbindung oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon umwandelt, oder

- 128 509810/1154

(B) eine Verbindung der Formel

CH₂NH₂

O H CH₂C - NH

CH₃OCOqH

(IV)

oder einen leicht spaltbaren Ester oder ein Salz davon mit einem Thiolder Formel

HS-R

(V)

worin R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzt, oder einem Salz davon umsetzt, wobei sich eine Verbindung der Formel I oder ein leicht spaltbarer Ester oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon bildet, und gegebenenfalls

(a) durch an sich bekannte Methoden das Produkt in Form der freien Säure oder eines Salzes davon in die entsprechende Schiffsche Base, einen leicht spaltbaren Ester oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon umwandelt, oder

(b) durch an sich bekannte Methoden das Produkt in Form eines leicht spaltbaren Esters oder eines Salzes davon in die entsprechende freie Säureverbindung oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon umwandelt..

7. Verfahren gemäß Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man das Acylierungsmittel der Formel III in Form eines gemischten Anhydrids verwendet.

509810/1 Γ5Ϊ²⁹ "

2U2302-

Μ/15 457

8. Verfahren gemäß Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man als Acylierungsmittel der Formel III die Ver bindung der Formel

CH₂NH₂'HCl.

CH₂COCl

verwendet.

9. Verfahren gemäß Anspruch 6 oder 7» dadurch gekennzeichnet, daß man als aminoschützende Gruppe t-Butoxycarbonyl- oder 1-Carbomethoxy-1-propenyl-2 verwendet.

10. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 6 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß man die Verbindung der Formel II in Form ihres Silylesters verwendet.

11. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 6 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß man das Acylierungsmittel der Formel III mit einem Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethyl-, Methoxymethyl-, Acetonyl- oder Phenacylester einer Verbindung der Formel II umsetzt.

12. Verfahren gemäß Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethyl-, Methoxymethyl- , Acetonyl- oder Phenacylester der Verbindung der Formel IV oder ein Salz davon mit dem Thiol der Formel V oder einem Salz davon umsetzt.

13. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 6 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß man das Produkt der Formel

509810/iibA~

Μ/15 457

CH₂NH 2 O H CH₂C - NH

CH₂-S-R

COOH

worin R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzt, oder ein Salz davon in den entsprechenden . Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethyl-, Methoxymethyl-, Acetonyl- oder Phenacylester oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon umwandelt.

14,, Verfahren gemäß einem der Ansprüche 6 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß man das Produkt der Formel

CH₂NH₂

CH₂C - NH

CH₂-S-R

COOH

worin R die in Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen besitzt, oder ein Salz davon in die entsprechende Schiffsche Base mit Salicylaldehyd umwandelt.

15. Pharmazeutisches Mittel, enthaltend eine Verbindung oder ein Salz, einen Ester oder eine Schiffsche Base davon gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel .

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