DE2415402C2

DE2415402C2 - Cephalosporansäurederivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und sie enthaltende pharmazeutische Mittel

Info

Publication number: DE2415402C2
Application number: DE2415402A
Authority: DE
Inventors: Keiji Kyoto Henmi; Takashi Suita Kamiya; Kunihiko Tanaka; Tsutomu Toyonaka Teraji
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1973-03-30
Filing date: 1974-03-29
Publication date: 1985-12-19
Also published as: CH610902A5; FR2223002B1; CH610903A5; BE812951A; NZ173837A; AR207752A1; DE2415402A1; NO741137L; NL7404330A; SE428297B; CH595388A5; AU6735374A; NL180422C; NO801402L; NL180422B; GB1461948A; FR2223002A1; SE7404306L

Description

worin R; und M jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben und Ri eine 5-[Acetamidomethyl]-l,3,4-thiadiazol-2-yl- oder 5-[Methylureidomethyl]-l,3,4-thiadiazol-2-yi-Gruppe darstellt.

3. Pharmazeutisches Mittel, dadurch gekennzeichnet, daß es mindestens eine Verbindung nach Anspruch I in Kombination mit einem pharmazeutisch verträtiichen, im wesentlichen nicht-toxischen Träger oder H ilfsstolT enthält.

Die Erfindung betrifft Cephalosporansaurederivate der weiter unten angegebenen allgemeinen Formel (I), die eine antibakterielle Wirksamkeit aufweisen, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie sie enthaltende pharmazeutische Mittel.

Aus den DE-OS 19 53 861, 22 22 434 und 20 18 600 sind bereits Cephalosporine des hier angesprochenen Typs mit R-S-CH_rGruppen in 3-Stellung bekannt, in denen R für heterocyclische Gruppen, die hydroxyalkyl- oder aminoalkylsubstituiert sind, steht. Auch Verfahren zu ihrer Herstellung sind darin genannt und es wird auf ihre antibakterielle Wirksamkeit verwiesen. Dies gilt insbesondere für die Handelsprodukte Cefazolin und Cefamandol, die gegenüber gramnegativen Keimen wirksam sind (vgl. »Selecta«, 1981, Seiten 2144 und 2147/48). Diese im Handel erhältlichen Produkte haben die in dem weiter unten folgenden Beispiel 18 angegebenen Formeln. Ihre antibakteriellen Wirkungen sind jedoch verbesserungsbedürftig.

Aufgabe der Er^ndung war es daher, Cephalosporansaurederivate zu finden, die eine noch bessere antibakterielle Wirkung haben als die bereits bekannten Cephalosporansaurederivate.

Es wurde nun gefunden, daß diese Aufgabe erfindungsgemäß gelöst wird mit Cephalosporansäurederivaten der allgemeinen Formel

35 S
R₁-HN-

I I I

COOM

worin bedeuten:

R, eine Methylthioacetyl-, o-Mandeloyl-, Thienylacetyl-oder Tetrazolylacetylgruppe; R, 5-[Aminomethyl]-l,3,4-thiadiazol-2-yl-, 5-[Acetamidomethyl]-l,3,4-thiadiazol-2-yl-, 5-[Methylureidomcthyl]-1,3,4-thiadiazol-2-yl-, 5-[Hydroxymethy!]-l,S^-thiadiazol-Z-yl- oder l-[Aminoethyl]-1 H-tetrazol-

5-yl-Gruppc;
M ein Wasserstoffatom oder ein nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Kation.

Die crfindungsgemäßen Cephalosporansaurederivate der vorstehend angegebenen allgemeinen Formel (I) sind den anerkannt guten Vergleichsprodukten gleicher Wirkunfsrichtung Cefazolin und Cefamandol in bezug auf ihre antibakterielle Aktivität eindeutig überlegen, wobei die Höhe der Überlegenheit (um den Faktor 2 bis 50) auch für den Fachmann auf diesem Gebiet überraschend ist (vgl. das weiter unten folgende Beispiel 18).

Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung eines Cephalosporansäurederivats dar oben angegebenen allgemeinen Formel (I), das dadurch gekennzeichnet ist, daß man in an sich bekannter Weise

a) eine 7-substituierte Cephalosporansäure der allgemeinen Formel

R₁-HN-1 p'

O I

BH COOM

Ks worin R, und M jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben und R₃ niederes Alkanoyl bedeutet,

mit einer Thiolverbindung der allgemeinen Formel

Rj—SH (ΠΙ)

worin R₂ die oben angegebenen Bedeutungen hat, oder ihrem Alkali metallsalz umsetzt unter Bildung einer Verbindung der oben angegebenen Formel (I); oder
b) eine Verbindung der allgemeinen Formel

H₂N

CH₂-S-R₂ (IV)

worin R₂ und M jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben,
mit einer organischen Carbonsäure der allgemeinen Formel

Ri-OH (V)

worin R| die oben angegebenen Bedeutungen hat, oder ihrem reaktionsfähigen Derivat umsetzt unter Bildung einer Verbindung der Formel (I)· oder
c) eine Verbindung der allgemeinen Formel

CH₂-S-R₂' d")

O J

COOM

worin R und M jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben und R₂" eine 5-[Aminomethyl]-I,3,4-thiadiazol-2-yl-Gruppe bedeutet,

mit einer organischen Carbonsäure der allgemeinen Formel

r;" —OH (V")

worin R₂" eine Acetyl- oder Methylcarbamoylgruppe bedeutet,

ocMr ihrem reaktionsfähigen Derivat umsetzt unter Bildung einer Verbindung der allgemeinen Formel

R.—NH—j 1/ N

y—N J—CH₂-S-R₂ (I')

O J

COOM

worin R₁ und M jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben und R₂'eine 5-[ Acetamidomethyl]-1,3,4-thiadiazol-2-yi oder 5-[Methylureidomethyl]-l,3,4-thiadiazol-2-yl-Gruppe darstellt.
50

Gegenstand der Erfindung sind ferner pharmazeutische Mittel die dadurch gekennzeichnet sind, daß sie mindestens eine Verbindung der vorstehend angegebenen allgemeinen Formel (I) in Kombinatiion mit einem pharmazeutisch verträglichen, im wesentlichen nicht-tcxisuien Träger oder Hilfsstoff enthalten.

Der hier vci-wendete Ausdruck »nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Kation« steht Tür ein Alkalimetall, wie Natrium oder Kalium.

Der hier für R₃ in der Formel (II) verwendete Ausdruck »niederes Alkanoyl« steht für Acetyl, Propionyl, Butyryl, Pentanoyl und Hexanoyl.

Bei dem Alkalimetallsalz der Thiolverbindung der Formel (III) kann e° sich um das Natrium- oder Kaliumsalz handeln.

Die Umsetzung der 7-substituierten Cephalosporansäuren der Formel (II) mit den Thiolverbindungen der Formel (III) oder den Alkalimetallsalzen davon kann in einem Lösungsmittel, wie Wasser, Aasten, Chloroform, Nitrobenzol, Dimethylformamid, Methanol, Ethanol, Dimethylsulfoxid, oder irgendeinem anderen gegenüber der Umsetzung inerten organischen Lösungsmittel, vorzugsweise in einem stark polaren Lösungsmittel, durchgeführt werden. Unter den Lösungsmitteln können hydrcfihile Lösungsmittel in Mischung mit Wasser verwendet werden. Die Umsetzung wird vorzugsweise in einem etwa neutralen Medium durchgeführt. Wenn dif Verbindung der Formel (II) oder die Thiolverbindung der Formel (III) in freier Form verwendet wird, wird die Umsetzung vorzugsweise in Gegenwart einer Base, wie z.B. eines Alkalimetallhydroxids, Alkalimetallcarbonate, Alkalimetallbicarbonats oder eines Trialkylamins, durchgeführt.

Die Reaklionstemperatur ist in keiner Weise beschränkt und die Umsetzung wird in der Regel bei Raumtemperatur oder unter Erwärmen durchgeführt. Das Reaktionsprodukt kann nach üblichen Methoden aus der Reaktionsmischung isoliert werden.

Wenn die Umsetzung unter Verwendung der Thiolverbindung der Formel (III) mit einer 5-Aminomethyl-1 ^,«MhiadiazoW-yl- oder 1-Aminoethyl-l H-tetrazol-5-yl-Gruppe für R₂ durchgeführt wird, können diese freien Aminogruppen durch übliche Schutzgruppen geschützt werden. In diesem Falle kann die Aminoschutzgruppe erforderlichenfalls aus dem Reaktionsprodukt wieder entfernt werden.

Die Entfernung der Aminoschutzgruppe kann auf übliche Weise durchgeführt werden, beispielsweise durch Zersetzen durch eine Säure oder durch katalytische Reduktion, wobei die jeweils angewendete Methode ausgewählt wird in Abhängigkeit von der Art der Schutzgruppe an der Aminogruppe. Die Zersetzung durch eine Saure ist eine der zweckmäßigsten Methoden und sie kann für die Entfernung von Substituenten, wie Bcnzyloxycarbonyl, substituiertem Benzyloxycarbonyl, Alkoxycarbonyl, substituiertem Alkoxycarbonyl, Aralkoxycarbonyl, Adamantyloxycarbonyl, Trityl, substituiertem Phenylthio, substituiertem Aralkyliden, substituiertem Alkyliden und substituiertem Cycloalkyliden, angewendet werden. Die in der obigen Umsetzung verwendete Säure wird ausgewählt je nach Art der Aminoschutzgruppe und Beispiele für geeignete S;iuren sind Ameisensäure und Trifluoressigsäure, die unter vermindertem Druck leicht verdampfen. Wenn die Zersetzung durch eine Säure in einem Lösungsmittel durchgeführt wird, wird als Lösungsmittel gelegentlich ein hydrophiles organisches Lösungsmittel. Wasser oder eine Mischung davon verwendet. Die katalytische Reduktion kann zur Entfernung der Aminoschutzgruppe, wie Benzyloxycarbonyl, substituiertem Benzyloxycarbonyl und 2-Pyridylmethoxycarbonyl, angewendet werden. Ein geeigneter Katalysator ist Palladium, es können aber auch andere Katalysatoren, wie sie üblicherweise für die katalytische Reduktion verwendet werden, eingesetzt werden.

Die Trifluoracetylgruppe kann durch Behandeln des Reaktionsprodukts mit Wasser entfernt werden und die halogensubstituierte Alkoxycarbonylgruppe und 8-Chinolyloxycarbonylgruppe können durch Behandeln des Reaktionsprodukts mit einem Schwermetall, wie Kupfer oder Zink, entfernt werden. Die Reaktion zur Entlernung der Aminoschutzgruppe kann ohne Isolierung und Reinigung des Reaktionsproduktes von dem Reaktionsmedium durchgeführt werden.

Das reaktionsfähige Derivat an der Carboxygruppe der organiscnen Säure der Formel V kann ein Säurehalogenid, ein Säureanhydrid, ein aktiviertes Amid oder ein aktivierter Ester sein. Beispiele dafür sind ein Säurechlorid, ein Säureazid, ein gemischtes Säureanhydrid mit einer Säure, wie Dialkylphosphorsäure, Phenylphosphorsäure, Diphenylphosphorsäure, Dibenzylphosphorsäure, halogenierter Phosphorsäure, dialkylphosphoriger Säure, schwefliger Säure, Thioschwefelsäure, Schwefelsäure, Alkylkohlensäure, einer aliphatischen Carbonsäure (z.B. Pivalinsäure, Pentansäure, Isopentansäure, 2-Ethylbuttersäure oder Trichloressigsiiure) oder einer aromatischen Carbonsäure (z.B. Benzoesäure), oder ein symmetrisches Säureanhydrid, ein Säureamid mit Imidazol, 4-substituiertem Imidazo!, Dimethylpyrazol, Triazol oder Tetrazol, oder ein Ester, (/. B. Cyanomethyl-, Methoxymethyl-, Vinyl-, Propargyl-. p-Nitrophenyl-, 2,4-Dinitrophenyl-, Trichlorphenyl-, Pentachlorphenyl-, Methansullbnylphenyl-, Phenyiazophenyi-, Phenylthio-, p-Nitrophenykhio-, p-Kresyiihio-, Carboxymethylthio-, Pyranyl-, Pyridyl-, Piperidyl-, 8-Chinolylthioester oder ein Ester mit N,N-Dimethylhydroxylamin, l-Hydroxy-2-(lH)pyridon, N-Hydroxysuccinimid oder N-Hydroxyphthalimid). Das geeignete Derivat kann gegebenenfalls je nach Art der praktisch verwendeten organischen Säure der Formel V unter ihnen ausgewählt werden.

Die Umsetzung wird in der Regel in einem Lösungsmittel, wie Aceton, Dioxan, Acetonitril, Chloroform, Methylenchlorid. Ethylenchlorid, Tetrahydrofuran, Ethylacetat, Dimethylformamid, Pyridin oder irgendeinem anderen organischen Lösungsmittel, das gegenüber der Reaktion inert ist, durchgeführt. Unter diesen Lösungsmitteln können die hydrophilen Lösungsmittel in Mischung mit Wasser verwendet werden.

Wenn die organische Säure der Formel V in Form der freien Säure oder in Form ihres Salzes bei dieser Umsetzung verwendet wird, wiird die Umsetzung vorzugsweise in Gegenwart eines Kondensationsmittels, wie N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid, N-Cyclohexyl-N'-morpholänoethylcarbcdiimid, N-Cye!ohexyI-N'-(4-diethylaminocyciohexy^carbodiimid, Ν,Ν'-Diethylcarbodiimid, Ν,Ν'-Diisopropylcarbodiimid, N-Ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)-carbodjimid, N,N'-Carbonyldi(2-methylimidazol), Pentamethylenketen-N-cyclohexy' so imin, Diphenylketen-N-cyclohexylimin, Alkoxyacetylen, 1 -Alkoxy- 1-chlorethylen, Trialkylphosphit, Ethylpoly phosphat, Isopropylpolyphosphat, Phosphoroxychlorid, Phosphortriehlorid, Thionylchlorid, Oxalylchlorid, Triphenylphosphin, des 2-Ethyl-7-hydroxybenzisoxazoliumsalzes, des intermolekularen 2-Ethyl-5-(m-sulfophenyl)isoxazolimhydroxydsalzes oder (ChJormethylenHimethylammoniumchlorid, durchgeführt.

Die Umsetzung kann in Gegenwart einer Base, wie z.B. eines Alkalimetallbicarbonats, Trialkylamins, Ν,Ν-Dialkyibenzylamins und Pyridin, durchgeführt werden. Wenn die Base oder das Kondensationsmittel flüssig ist, kann sie (es) auch als Lösungsmittel verwendet werden. Die Reakiionstemperatur ist in keiner Weise beschränkt und die Umsetzung wird in der Regel unter Kühlen oder bei Raumtemperatur durchgeführt.

Einige Arten der Aminosehutzgruppen an R₃ = 5-Aminomethyl-13,4-thiadiazol-2-yl Gder 1-Aminoethyl-11 J-tetrazol-5-yl in der Verbindung der Formel IV können im Verlaufe der Umsetzung oder der Nachbehandlung entfernt werden und liefern so direkt die erfmdungsgemäBe Verbindung der Formel I mit einer freien Aminogruppe.

Wenn das Reaktionsprodukt die Aminoschutzgruppe aufweist, kann die Aminoschutzgruppe durch Anwendung einer geeigneten Entfernungsreaktion, wie sie oben erwähnt ist, aus dem Reaktionsprodukt entfernt werden.

Außerdem können einige der erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel:

R₁-HN

J N J— CH₂-S-R^

O J

COOM

J— CH₂-S-R^ (I')

voriri R, und M die oben angegebene Bedeutung haben und R₂ S-Acetamidomethyl-l^^-thiadiazol^-yl oder 5-Methylureidomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yl bedeuten, hergestellt werden durch Acylieren einer Verbindung der allgemeinen Formel:

R₁-HN-

i I I

(IO

worin R, und M die oben angegebenen Bedeutungen haben und RJ'5-Aminomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yl be- T;

deutet. ^

Bei dem bei der Umsetzung verwendeten Acylierungsmittel kann es sich um die oben erwähnten organi- jy

sehen Säuren der Formel R₂"-OH (V), worin R₂" Acetyl oder Methylcarbamoyl bedeutet, oder um reaktions- *|

fähige Derivate davon, wobei die reaktionsfähigen Derivate db gleichen sind wie oben erwähnt, handeln. '

Die Acylierungsreaktion der Verbindungen der Formel I" kann in einem Lösungsmittel, wie Benzol, Äther, J

Aceton, Dioxan, Acetonitril, Chloroform, Methylenchlorid, Tetrahydrofuran, Ethylacetat, Dimethylformamid, Jj

Pyridin, oder irgendeinem anderen, gegenüber der Acylierungsreaktion inerten organischen Lösungsmittel ,·:

durchgeführt werden. Unter den Lösungsmitteln können die hydrophilen Lösungsmittel in Mischung mit j

Wasser verwendet werden. Die Reaktionstemperatur ist in keiner Weise beschränkt und die Umsetzung wird ;']

in der Regel bei Raumtemperatur oder unter Erwärmen durchgeführt. Die Umsetzung kann in Gegenwart ; j

des oben erwähnten Kondensationsmittels oder der oben erwähnten Base durchgeführt werden. Jj

Alle in den verschiedenen erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten Reaktanten sind im Handel erhältlich oder können nach an sich bekannten üblichen Verfahren oder nach verschiedenen analogen Verfahren, die auf die Herstellung dieser Reaktanten anwendbar sind, hergestellt werden.

Erfindungsgemäß wird der während der Umsetzung gebildete Niederschlag nach an sich bekannten Methoden aus der Reaktionsmischung abgetrennt und das dabei erhaltene Reaktionsprodukt kann einem der üblichen Reinigungsverfahren, beispielsweise durch Umkristallisation aus einem geeigneten Lösungsmittel oder einer Mischung solcher Lösungsmittel, unterzogen werden.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können nach üblichen Verfahren zur Herstellung von Salzen aus Säuren in ihre pharmazeutisch verträglichen, im wesentlichen nichttoxischen Salze überführt werden, beispielsweise durch Umsetzung mit einem Alkalimetallhydroxid, einem Alkalimetallbicarbonat, einem A'.kaümetallcarbonat oder einer organischen Base, wobei das Natriumsalz bevorzugt ist. Das bevorzugte Verfahren zur Herstellung der Salze besteht darin, die Säure in einem Lösungsmittel zu lösen, in dem das Sulz unlöslich ist, und dann eine Lösung der salzbildenden Verbindung oder der Base zuzugeben. Dadurch fällt das Salz aus der Reaktionsmischung aus.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen (I) weisen eine hohe antibakterielle Wirksamkeit (Aktivität) auf und verhindern das Wachstum einer Reihe von Mikroorganismen, z.B. gram-positiver und gram-negativer Bakterien. Für die therapeutische Verabreichung werden die erfindungsgemäßen Cephalosporinverbindungen in Form eines pharmazeutischen Präparats verwendet, das die Verbindungen in Mischung mit einem pharmazeutisch verträglichen organischen oder anorganischen, festen oder flüssigen Träger enthält und für die orale oder parenterale Verabreichung geeignet ist. Die pharmazeutischen Präparate können in fester Form, z. B. in Form von Kapseln, Tabletten oder Dragees, oder in flüssiger Form, z. B. in Form von Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen, vorliegen. Gewünschienfalls können die Präparate noch HHfssübsiänzen, Stabilisatoren, Netz- oder Emulgiermittel, Puffer und andere üblicherweise verwendete Zusätze enthalten.

Obgleich die Dosierung der erfindungsgemäßen Verbindungen (I) variiert und auch von dem Alter und dem Zustand des Patienten abhängt, hat sich eine durchschnittliche Einzeldosis von etwa 100 mg, 250 mg und 500 mg der erfindungsgemäßen Verbindungen (I) als wirksam zur Behandlung von durch bakterielle Infektion hervorgerufenen Erkrankungen erwiesen. Im allgemeinen können Mengen zwischen etwa 10 und etwa 1000 mg oder noch mehr verabreicht werden.

Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern.

Beispiel 1

2,03 g T-^-ThienyOacetamidocephalosporansäure, 0,93 g S-Aminomethyl-l.S/l-thiadiazol^-thiolhydro- &5 chlorid und 1,26 g Natriumbicarbonat wurden in 100 ml eines Phosphatpuffers (pH 5,2) gelöst und die Lösung wurde 7 Stunden lang bei 60 bis 65°C gerührt. Nach der Reaktion wurden die ausgefallenen Kristalle durch Filtrieren gesammelt und man erhielt 1,3 g
2-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure, F. 198 bis 202⁰C (Zers.).

NMR-Spcktrum:

Ö (D₂O + NaHCO₃) ppm: 3,28 (IH, d, J = 18 Hz), 3,72 (IH, d, J = 18 Hz), 3,87 (2H, s), 4,0-4,45 (2H, breit s), 4,56 (2H, s), 5,01 (IH, d, J = 5 Hz), 5,58 (IH, d, J = 5 Hz), 6,88-740 (3H, m).

Beispiel 2

3,82 g 7-(lH-'letrazol-l-yl)acetamidocephalosporansäure, 1,89 g 5-Acetamidomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-thiol und 1,68 g Natriumbicarbonat wurden in 100 ml eines PhosphatpufTers (pH 6,4) gelöst und die Lösung wurde 5 Stunden lang bei 60 bis 65°C gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Äthylacetat gewaschen und die wäßrige Schicht wurde abgetrennt. Die wäßrige Lösung wurde mit 5%iger ChlorwasserstofTsäure auf pH 3 eingestellt und dann mit 150 ml Äthylacetat gewaschen. Zu der wäßrigen Lösung wurde Äthylacetat zugegeben und die erhaltene Mischung wurde gerührt. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt und man erhielt 1,8g 7-(lH-Tetrazol-l-yl)acetamido-3-(5-acetamidomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yl)thiomethyl-3-ccphem-4-carbonsäure, F. 141 bis 144°C (Zers.). Die obigen Äthylacetatwaschwasser und die Mutterlauge wurden vereinigt und dann unter vermindertem Druck bis auf ein Volumen von etwa 30 ml eingeengt. Die ausgefallenen Kristalle wurden gesammelt und man erhielt 0,4 g der oben angegebenen Verbindung, Gesamtausbeute 2,2 g.

IR-Spektrum:

ν?,;:¹.¹¹' cm"¹: 3500, 3275, 1765, 1725, 1670.

NMR-Spektrum:

δ (DMSO-dJ ppm: 1,92 (3H, s), 3,73 (2H, breit, s), 4,15-4,73 (2H, m), 4,59 (2H, d, J = 6 Hz), 5,15 (IH, d, J =4,5 Hz), 5,42 (2H, s), 5,69 (d, J = 4,5 Hz), 5,83 (d, J = 5 Hz) IH, 6,10-6,40 (IH, m), 8,50-8,65 (IH, m), 9,18 (IH, s), 9,35 (IH, d, J = 7 Hz).

ι Beispiel 3

3,2 g 7-(2-Thienyl)acetamidocephalosporansäure, 1,42 g 5-Acetamidomethyl-l,3,4-thiadiazo!-2-thiol und 1,26 g Natriumbicarbonat wurden in 75 ml eines Phosphatpuffers (pH 6,4) gelöst und die Lösung wurde 4,5 Stunden lang bei 60 bis 65°C gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Äthylacetat gewaschen und die wäßrige Schicht wurde abgetrennt. Die wäßrige Lösung wurde mit 5%iger Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 eingestellt und dann mit Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wurde mit einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet, dann wurde das Lösungsmittel abgedampft. Der Rückstand wurde mit Äther gewaschen und man erhielt 2,15 g 7-(2-Thienyl)acetarnidn-3-(5-acetarnidomcthyl-l^^-thiadiazol^-yOthiomethylO-cephem^-carbonsäure, F. 146 bis 151°C (Zers.).

IR-Spcktrum:

£■"■" cm"¹: 3250, 1760, 1700, 1650.

NMR-Spektrum:

δ (DMSO-d,,) ppm: 2,89 (3H, s), 3,70 (2H, breit, s), 3,78 (2H, s), 4,21 (1H, d, J = 14 Hz), 4,58 (1H, d, J = 14 Hz), 4,59 (2H, d, J = 6 Hz), 5,09 (IH, d, J = 5 Hz), 5,63 (d, J = 5 Hz), 5,77 (d, J = 5 Hz) IH, 6,88-7,42 (3H, m), 8,60-9,00 (2H, m).

Beispiel 4

1,9 g 7-(l H-Tetrazol-l-yl)acetamidocephalosporansäure, 1,24 g S-tert.-Butoxycarbonylaminomethyl-l^^- thiadiazoI-2-thiol und 840 mg Natriumbicarbonat wurden zu 50 ml eines Phosphatpuffers (pH 6,4) zugegeben und die Mischung wurde 4 Stunden lang bei 60 bis 65°C gerührt. Die Reaktiosmischung wurde mit 50 ml Äther viermal gewaschen und die wäßrige Schicht wurde abgetrennt. Die wäßrige Lösung wurde mit 5%iger Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 eingestellt und dann mit 70 ml Äthylacetat dreimal extrahiert. Der Extrakt wurde mit einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und dann wurde das Lösungsmittel unter vermindenem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde mit Äther gewaschen und man erhielt 1,48 g 7-(lH-Tetrazol-l-yl)acetamido-3-(5-tert.-butoxycarbonylaminomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure, F. 192 bis 196°C (Zers.).

NMR-Spektrum:

δ (DMSO-d,,) ppm: 1,38 (9H, s), 3,75 (2H, breit, s), 4,28 (IH, d, J = 18 Hz), 4,64 (IH, d, J = 18 Hz), 4,49 (2 H. d, J = 6 Hz), 5,17 (1H, d, J = 5 Hz), 5,42 (2H, s), 5,69 (d, J = 5 Hz), 5,82 (d, J = 5 Hz), 7,55-7,90 (IH, m), 9,23 (IH, s), 9,35 (IH, d, J = 8 Hz).

300 mg der oben erhaltenen 7-(lH-Tetrazol-l-yl)acetamido-3-(5-tert.-butoxycarbonylaminomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yI)thiomethyI-3-cephem-4-carbonsäure wurden in 1,5 ml Ameisensäure gelöst und die Lösung wurde 4,5 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Ameisensäure wurde unter vermindertem Druck

aus der Reaktionsmischung i>bdestilliert und zu dem Rückstand wurde Äthylacetat zugeben, wobei 245 mg eines braunen Pulvers erhalten wurden. Das Pulver wurde in einer Mischung aus 1 mi Wasser und 1 ml Dimethylformamid gelöst und zu der Lösung wurden 6 ml Äthanol zugegeben, wobei 140 mg 7-(l H-Tetrazoll-yOacetamidoO-iS-aminomethyl-l.S^-thiadiazol-I-yOthiomethylO-cephem^-carbonsäure in Form eines blaßgelben Pulvers erhalten wurden. Das Produkt wurde zusammen mit dem in Beispiel 5 erhaltenen Produkt durch Dünnschichtchromatographie identifiziert.

Beispiel S

3,82 g 7-(lH-TetrazoI-l-yl)acetamidocephalosporansäure, 1,85 g S-Aminomethyl-l.S^-thiadiazol^-thiolhydrochlorid und 2,52 g Natriumbicarbonat wurden zu 150 ml eines Phosphatpuffers (ph 5,2) zugegeben und die Lösung wurde in 10%iger ChlorwasserstofTsäure auf pH 5,0 bis 5,2 eingestellt. Nachdem die Lösung 8 Stunden lang bei 6Ot gerührt worden war, wurden 70 ml Methylisobutylketon zu der Lösung zugegeben und die Mischung wurde 30 Minuten lang bei 6O⁰C gerührt. Die Methylisobutylketonschicht wurde entfernt und die wäßrige Schicht wurde in einer Kühlkammer stehengelassen. Die ausgefallenen Kristalle wurden du·cn Filtrieren gesammelt und man erhielt 1,91 g 7-(lH-Tetrazol-l-yr)acetamido-3-(5-aminomethyl-l,3,4-thiadiazol- ^-yOthiomethyW-cephem^-carbonsäure, F. 193 bis 198°C (Zersetzung). Zu der Mutterlauge wurden 50 ml Äthanol zugegeben und die Lösung wurde in einer Kühlkammer stehengelassen. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt und man erhielt weitere 1,30 g der oben angegebenen Verbindung. Die Gesamtausbeute betrug 3,21 g.

IR-Spektrum:

v^'cirT¹: 3280, 1755, 1675.

NMR-Spektrum:

S(D₂O + NaHCO,) ppm: 3,41 (lH,d,J = 18 Hz), 3,85 (IH, d, J = 18 Hz), 4,03 (lH,d,J = 14 Hz), 4,50 (IH, d, J = 14 Hz), 4,59 (2H, s), 5,13 (IH, d, J = 5 Hz), 5,58 (2H, s), 5,69 (IH. d, J = 5 Hz), 9,35 (IH, s).

Beispiel 6

1,36g 7-Aminocephalosporansäure, l,04g5-Acetamidomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-thiol und 885 mgNatriumbicarbonat wurden in 70 ml Wasser gelöst und die Lösung wurde 5 Stunden lang bei 60⁰C gerührt. Nach der Reaktion wurde die Reaktionsmischung auf pH 5 eingestellt und dann über Nacht in einem Kühlschrank stehengelassen. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt und man erhielt 1,03 g 7-Amir.o-3-<5-acctarr.idomethy!-l,3,44hiadiazo!"2=y!)thiornethy!-3-cephern-4-carbQnsäure, F 195 bis 197°C (Zers.).

IR-Spektrum:

νϋϋ',-Όη-': 1795, 1640.

NMR-Spektrum:

ö(D₂O+ DCl) ppm: 2,12 (3H, s), 3,83 (2H, s), 4,30 (IH, d, J = 14 Hz), 4,64 (IH, d, J = 14 Hz), 4,79 (2H, s), 5,22 (IH, d, J = 4,5 Hz), 5,37 (IH, d, J = 4,5 Hz).

Beispiel 7

so 1,44 g 7-Methylthioacetamidocephalosporansäure, 740 mg S-Aminomethyl-l^-thiadiazol^-thiolhydrochlorid und 1,02 g Natriumbicarbonat wurden in 40 ml eines Phosphatpuffers (pH 5,2) gelöst. Die Lösung wurde in 10%iger Chlorwasserstoffsäure auf pH 4,5 eingestellt und 7 Stunden lang bei 60 bis 65⁰C gerührt. Der Niederschlag der Reaktionsmischung wurde durch Filtrieren abgetrennt, mit Wasser und dann mit Aceton gewaschen und man erhielt 1,13 g T-Methylthioacetamidc-S-iS-amidomethyl-l^-thiadiazol^-yOthiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure, F. 201 bis 205⁰C (Zers.).

IR-Spektrum:

v^f cm"¹: 1790, 1625.

NMR-Spektrum:

δ (D₂O + NaHCO₃) ppm: 2,18 (3H, s), 3,34 (2H, s), 3,44 (IH, d, J = 18 Hz), 3,87 (IH, d, J = 18 Hz), 4,05 (IH, d, J = 14 Hz), 4,55 (IH, d, J = 14 Hz), 4,62 (2H, s), 5,17 (IH, d, J = 4,5 Hz), 5,67 (IH, d, J = 4,5 Hz).

Beispie! 8

1,24 g S-tert.-Butoxycarbonylaminomethyl-l^^thiadiazol^-thiol wurden in 10 ml Aceton gelöst. Die Lösung wurde zu 40 ml einer wäßrigen Lösung zugegeben, die 0,84 g Natriumbicarbonat enthielt. Die gemischte

Lösung wurde auf einem Wasserbad auf 70 bis 75°C erwärmt. Zu der Lösung wurden auf einmal 1,35 g 7-Amino- ;3

ccphalosporansäure bei 55°C zugegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden lang bei 65 bis 70⁰C gerührt und Si

dann mit Eis auf 0 bis 5°C abgekühlt Die Reaktionsmischung wurde mit 10%iger Chlorwasserstoffsäure J|

auf pH 5,0 bis 5,2 eingestellt Die ausgefallene blaßgelbe Substanz wurde durch Filtrieren abgetrennt, mit W

Wasser und Aceton ger vaschen und dann getrocknet und man erhielt 1,28 g 7-Amino-3-(5-tert.-butoxycarbonyl- 5 ; ■'

aminomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yl)tWomethyl-3-csphem-4-carbonsäure, F. 220°C. Si

IR-Spektrum: 2i

v2:* cm^H: 1805, 1700, 1625. |

NMR-Spektrum: S

δ (D,0 + NaHCO₃) ppm: 1,41 (9H, s), 3,39 (IH, d, J = 17 Hz), 3,79 (IH, d, J = 17 Hz), I

4,08 (IH, d, J = 14 Hz), 4,55 (IH, d, J = 14 Hz), 4,60 (2H, s), 5,08 (IH, d, J = 4,5 Hz), Ü

5,50 (IH, d, J -44 Hz). 1

Beispiel 9

2,02 g Natrium^-dH-tetrazol-l-yOacetamidocephalosporanat, 0,90 g l-(2-Aminoäthyl)-lH-tetrazol-5-thiol γ\

und 0,84 g Natriumbicarbonat wurden in 50 ml Wasser gelöst Die Lösung wurde auf pH 3,4 bis 3,6 einge- 20 §|

stellt und 5,5 Stunden lang bei 60 bis 65°C gerührt. Die Reaktionsmischung wurde lyophilisiert und der Rück- ^

stand wurde in 10 ml Wasser gelöst und dann an =00 ml Amberlite* XAD-2 adsorbiert Die Säule wurde mit Wasser gewaschen und dann mit Äthanol, das 20% Wasser enthielt, eluiert Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck aus dem Eluat abgedampft und man erhielt 0,60 g 7-(lH-Tetrazol-l-yl)acetamido-3-[l-(2-aminoäthyI)-lH-tetrazoI-5-yl]thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure, F. 173 bis 176°C (Zers.). 25

IR-Spektrum:

.^r cm"¹: 1767, 1690, 1590 (breit).

NMR-Spektrum: ₃₀

δ (D₂O + NaHCO₃) ppm: 3,45-3,75 (4H, m), 4,22, 4,43 (2H, AB-q, J = 14 Hz), 4,5-4,7 (2H, m), 5,16 (1H, d, J - 5 Hz), 5,61 (2H, s), 5,70 (IH, d, J = 5 Hz), 7,70 (IH, s).

Beispiel 10 35

3,94 g 7-(2-Thienyl)acetamidocephalosporansäure, 2,45 g l^-tert.-Butoxycarbonylaminoäthyl-lH-tetrazol-5-thiol und 1,68 g Natriumbicarbonat wurden in 100 ml Wasser gelöst und die Lösung wurde 7 Stunden lang bei 60 bis 63°C gerührt. Die Reaktionsmischung wurde zweimal mit 50 ml Äther gewaschen, mit 10%iger Chlorwasserstoffsäure auf pH 1 bis 2 eingestellt und dann mit 150 ml Athylacetat unter Eiskühlung extrahiert. 40 Die zurückbleibende wäßrige Schicht wurde mit 100 ml Athylacetat zweimal gewaschen. Der Äthylacetatextrakt und das Waschwasser wurden vereinigt, mit einer Salzlösung gewaschen und dann über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Athylacetat wurde unter vermindertem Druck eingedampft und man erhielt 5,28 g eines gelben Pulvers. Das Pulver wurde durch Silikagelsäulenchromatographie gereinigt und man erhielt 3,18 g 7-(2-Thieny l)acetamido- 3 - [ 1 - (2 - tert - butoxycarbonylaminoäthyl) -1H - tetrazol - 5 - yl]thiomethyl - 3 - cephem - 4 - 45 carbonsäure, F. 88 bis 93°C (Zers.).

IR-Spektrum:

fern'¹: 3300, 1700 (breit).

NMR-Spektrum:

δ (DMSO-d,, + D₂O) ppm: 1,35 (9H, s), 3,35 (2H, breit s), 3,6-3,85 (4H, m), 4,15-4,50 (4H, m), 5,03 (I H, d, J = 5 Hz), 5,64 (IH, d, J = 5 Hz), 6,80-7,40 (3H, m).

2,70 g der oben erhaltenen 7-(2-Thienyl)acetamido-3-[l-(2-tert.-butoxycarbonylaminoäthyl)-lH-tetrazol- 55 5-yl]-thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure wurden in 15 ml Ameisensäure gelöst. Die Lösung wurde 3 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Ameisensäure wurde unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand wurde mit Acetonitril behandelt, wobei ein Pulver erhalten wurde. Das Pulver wurde mit Acetonitril bzw. Äther gewaschen und dann getrocknet und man erhielt 1,86 g 7-(2-Thienyl)acetamido-3-[l-(2-aminoälhy!)-lH-tetfazol-5-yl]thiomethyl-3-cephein-4-carbonsäure, F. 158 bis 162°C (Zers.). M

IR-Spcktrum:

C."^! cm ': 3250, 1760, 1655, 1625, 1570.

NMR-Spektrum: ₆₅

δ (D,0 + NaHCO,) ppm: 3.35-3,65 (4H, m), 3,83 (2H, s), 4,10-4,60 (4H, m), 5,05 (IH, d, J <= 4,5 Hz), 5,58 (IH, d, J = 4,5 Hz), 6,90-7,40 (3H, m).

Beispiel 11

Eine Mischung von 0,85 g Dimethylformamid und 1,95 g Thionylchlorid wurde 30 Minuten lang auf 40 bis 5O⁹C erhitzt und das überschüssige Thionylchlorid wurde unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rück-

stand wurde in 20 ml Methylenchlorid suspendiert. Zu der Suspension wurden 0,84 g D-Mandelsäure bei -5 bis -10⁰C auf einmal zugegeben. Nach 15minütigem Rühren der Mischung bei der gleichen Temperatur wurden 3 ml einer Methylenchloridlösung, die 1,11 g Triäthylamin enthielt, innerhalb von 10 Minuten bei -50 bis -60⁰C zu der Mischung zugetropft. Die Mischung wurde 30 Minuten, lang bei der gleichen Temperatur gerührt. Zu der Lösung wurde eine Lösung von 2,30 g 7-Amino-3-{5-tert.-butoxycarbonylaminomethyl-

l^^thiadiazoI^-yDthiomethylO-cephem^-carbonsäure, 2,0 g M,O-Bis-(trimetb.ylsilyl)acetamid und 20 ml Methylenchlorid auf einmal bei -50 bis -60⁰C zugegeben. Die Mischung wurde 4 Stunden lang bei der gleichen Temperatur und dann eine Stunde lang bei Raumtemperatur gerührt Unter vermindertem Druck wurde das Methylenchlorid aus der Reaktionsmischung abdestilliert. Der Rückstand wurde in einer Mischung von 150 ml Äthylacetat, 50 ml Aceton und 50 ml 5%iger Chlorwasserstoffsäure gelöst. Die wäßrige Schicht

wurde abgetrennt und mit 100 ml Äthylacetat zweimal extrahiert. Die Extrakte und die oben erhaltene Äthylacetatschicht wurden vereinigt und mit Wasser gewaschen und anschließend über Magnet--.msuHat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck abgedampft unter Bildung eines Pulvers. Das Pulver und 3 g Natriumbicarbonat wurden in einer Mischung von 50 ml Wasser und 20 ml Aceton gelöst und die Lösung wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, dann wurde das Aceton abgedampft. Die

so erhaltene wäßrige Schicht wurde mit Äther gewaschen, auf pH 1 eingestellt und mit Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wurde mit Wasser gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet und das Äthylacetat wurde unter vermindertem Druck abgedampft. Der Rückstand wurde durch Siäicagel-Säulenchromatographie gereinigt und man erhielt 1,32 g 7-(D-MandeIamido)-3-(54ert.-butoxycarbonylammomethyI-l,3,4-thJadiazol-2-yI)thiomethyl-3-cephem-4-carbGnsäure, F. 115 bis 121°C (Zers.).

IR-Spektrum:

V^₁-¹ cm'¹: 3350,1780, 1710 (Schulter), 1690.

NMR-Spektrum:

δ (DMSO-d₆ + D₂O) ppm: 1,39 (9H. s), 3,62 (2H, breit s), 4,23, 4,51 (2H, AB-q, J = 14 Hz),

4,49 (2H, s), 5,04 (IH, d, J = 5 Hz), 5,13 (IH, s), 5,65 (IH₁ d, J = 5 Hz), 7,20-7,50 (5H, m).

800 mg der oben erhaltenen 7-(D-Mandelamido)-3-(5-tert.-butoxycarbonylaminomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure wurden in 4 ml Ameisensäure gelöst und die erhaltene Lösung wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Ameisensäure wurde unter venriinuerteni Druck aus der Reaktionsmischung abdestilliert und der Rückstand wurde durch Behandeln mit Acetonitril gepulvert. Der gebildete Niederschlag wurde durch Filtrieren abgetrennt und mit Acetonitril und dann mit Äther gewaschen, wobei man 620 mg 7-(D-Mandelamido)-3-(5-aminomethyl-l^,4-thiadiazol-2-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure, F. 168 bis 173°C (Zers.) erhielt.

IR-Spektrum :

v^f cm"¹: 3300 (breit), 1765, 1670,1600 (breit).

NMR-Spektrum:

δ (D₂O + NaHCO₃) ppm: 3,18 (IH, d, J = 18 Hz), 3,65 (IH, d, J = 18 Hz), 4,00 (IH, d,) = 14 Hz),

4,49 ^rlH, d, J - 14 Hz), 4,58 (2H, s), 5,01 (IH, d, J = 5 Hz), 5,33 (IH, s), 5,64 (IH, d, J = 5 Hz),
7,20-7,60 (5H,m).

so Beispiel 12

4,06 g 7-(2-Thienyl)acetamidocephalosporansäure, 1,48 g 5-Hydroxymethyl-l,3,4-thiadiazol-2-thio! und 1,76g Natriumbicarbonat wurden in 100 ml eines Phosphatpuffers (pH 6,4) gelöst und die Lösung wurde 7 Stunden lang bei 60°C gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Äthylacetat gewaschen und die wäßrige Schicht wurde abgetrennt, mit 5%iger Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 eingestellt und mit Äthylacelat extrahiert. Der Extrakt wurde mit einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck eingedampft, wobei 2,6 g 7-(2-Thienyl)acetamido-3-(5-hydroxymethyl-l,3,4-thiadiaTOl-2-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure erhalten wurden, F. 84 bis 87⁰C (Zers.).

IR-Spektrum:

v^-'cnT¹: 1770, 1710, 1665.

NMR-Spektrum:

(.5 <5 (DMSOA) ppm: 3,70 (2H, breit s). 3,78 (211, s). 4,22 (IH, d, J = 13 HzX 4,60 (!H, d, J = 13 11z),

4,83 (2H, s), 5,09 (1H, d, J = 5 Hz), 5,69 (IH, d, d, J = 5 Hz, 8 Hz), 6,85-7,42 (3H, m),
9,10 (1H, d, J =8 Hz).

Beispiel 13

2,88 g 7-(lH-Tetrazol-l-yr)acetamidocephalosporansäure, 1,11g 5-Hydroxymethyl-l,3,4-thiadiazol-2-thiol und 1, 13 g Natriumbicarbonat wurden in 75 ml eines Phosphatpufiers bei pH 6,4 gelöst und die Lösung wurde 7 Stunden lang bei 60⁰C gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Äthylacetat gewaschen, mit verdünnter Chlorwasserstofisäure auf pH 5 eingestellt und dann an 100 ml Amberlite*-XAD-4-Harz adsorbiert. Das Harz wurde mit 700 ml Wasser gewaschen und mit 600 ml Äthanol eluiert. Das Eluat wurde unter vermindertem Druck eingeengt und man erhielt 1,08 g 7-{lH-Tetrazol-l-yl)acetamido-3-(5-hydroxymethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yI)thiomethyl-3-cephem-4-cärbönsäure, F. 179 bis 187°C (Zers.).

IR-Spektrum:

C⁰¹Cm"¹: 1750, 1690.

NMR-Spektrum:

δ (DMSOA + D₂O) ppm: 3,52 (2H, breit s), 4,22 (IH, ü, J = 13 Hz), 4,60 (IH, d, J = 13 Hz), 4,77 (2H, s), 4,98 (IH, d, J = 5 Hz), 5,34 (2H, s), 5,57 (IH, d, J = 5 Hz), 9,30 (IH, s).

Beispiel 14

0,84 g Natriumbicarbonat und 0,74 g 5-Hydroxymethyl-l,3,4-thiadiazoI-2-thioI wurden in 40 mi Wasser gelöst und die Lösung wurde auf einem Wasserbad erwärmt. Zu der Lösung wurden auf einmal bei 45°C 1,36 g 7-Amino-cephalosporansäure zugegeben. Die Mischung wurde 1 Stunde lang bei 70 bis 73°C gerührt. Nach der Reaktion wurde die Reaktionsmischung auf 0 bis 5°C abgekühlt und mit 10%iger Chlorwasserstoffsäure auf pH 5,0 eingestellt. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt und man erhielt 1,20 g 7-Amino-3-(5-hydroxymetbyH,3,4-thiadiazol-2-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure, F. 194 bis 199°C (Zers.).

IR-Spektrum:

v*¹;"' cm"': 3200, 1805, 1625.

NMR-Spektrum:

δ (D₂O + DCl) ppm: 3,85 (2H, s), 4,38 (IH, d, J = 14 Hz), 4,70 (IH, d, J = 14 Hz), 5,12 (2H, s), 5,20 (1H, d, J = 5 Hz), 5,38 (IH, % J = 5 Hz).

Beispiel 15

1,8 g 7-Arnino-3-(5-hydroxymethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure wurden in einer Mischung von 40 ml Wasser und 40 ml Aceton und 1,26 g Natriumbicarbonat gelöst.

Daneben wurden 1,06 g 2-{Methylthio)essigsäure in einer Lösung von 5 ml Thionylchlorid gelöst. Die Lösung wurde 30 Minuten lang bei Raumtemperatur und lann 5 Minuten bei 40 bis 50⁰C gerührt. Das überschüssige Thionylchlorid wurde unter vermindertem Druck abdestilliert. Das so erhaltene 2-(Methylthio)-acetylchlorid wurde in 5 ml getrocknetem Aceton gelöst. Die Acetonlösung wurde zu der oben erhaltenen Lösung innerhalb von 15 Minuten bei 0 bis 5⁰C zugetropft. Die Mischung wurde bei der gleichen Temperatur t Stunde lang und dann 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Aus der Reaktionsmischung wurde das Aceton unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde mit Äthylacetat gewaschen und dann wurden 200 ml Äthylacetat zu dem Rückstand zugegeben. Die Lösung wurde mit 10%iger Chlorwasserstoffsiiure auf pH 1,5 eingestellt und die Äthylacetatschicht wurde abgetrennt. Die zurückbleibende wäßrige Schicht wurde mit 100 ml Äthylacetat viermal extrahiert. Die Äthylacetatextrakte wurden vereinigt, mit so einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet, dann wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgedampft und man erhielt 1,91 g 7-Methylthio-acetamidoO-iS-hydroxymethyl-l.S^-thiadiazol^-yOthiomethyl-S-cephem^-carbonsäure, F. 134- 139⁰C (Zers.).

IR-Spektrum:

C:' cm"¹: 3500, 3300, 1780, 1710, 1660.

NMR-Spektrum:

δ (D₂O + NaHCO₃) ppm: 2,20 (3H, s), 3,37 (2H, s), 3,42 (IH, d, J = 18 Hz), 3,84 (IH, d, J = 18 Hz), 4,08 (IH,«J, J- 13 Hz), 4,58 (1H,d, J = 13 Hz), 5,01 (2H,s), 5,14 (lH,d, J =4,5 Hz), 5,67 (IH, d, J = 4,5Hz).

Beispiel 16

2,0g7-Methylthioacetamido-3-(5-aminomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yI)thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure wurden in einer Mischung von 0,9 g Triäthylamin, 20 ml Wasser und 30 ml Tetrahydrofuran gelöst. Zu dieser Lösung wurde eine Lösung von 0,53 g Acetylchlorid in 10 ml Tetrahydrofuran bei 0 bis 5°C zugetropft. Die Mischung wurde bei der gleichen Temperatur 1 Stunde lang gerührt und dann wurde das Tetrahydrofuran

unter vermindertem Druck abdestilliert. Die zurückbleibende Lösung wurde mit 100 ml Äthylacetat gewaschen, mit 10%iger ChiorwasserstofTsäure auf pH 1 eingestellt und dann mit 200 ml Athylacetat extrahiert. Der Extrakt wurde mit einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen und das Athylacetat wurde unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wurde mit Aceton und dann mit Äther gewaschen und man erhielt 1,4 g T-Methylthioacetamido-a-iS-acetamidomethyl-l.S.^thiadiazol^-ylJthiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure, F. 145-150⁰C (Zers.).

IR-Spektrum:

_vNujoi _cm-i. 3250, 1765, 1705, 1650.

NMR-Spektrum:

ö (D₂O + NaHCO₃) ppm: 2,10 (3H, s), 2,20 (3H, s), 3,35 (2H, s), 3,40 (IH, d, J - 18 Hz),
3,80 (IH, d, J - 18 Hz), 4,10 (IH, d, J = 13 Hz), 4,55 (IH, d, J = 13 Hz), 4,75 (2H, s),
5,5 (IH, d, J = 5 Hz), 5,70 (IH, d, J = 5 Hz).

Beispiel 17

1,8 g 7-Methyltmc)acetanudc>-3-(5-aniinomethyl-l,3,4-thiadiazol-2-yl)thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure und o,8 g Triäthyiamin wurden in einer Mischung von 40 ml Wasser und 40 ml Tetrahydra<;>*an geiöst. Zu der Lösung wurde bei 0 bis 5°C eine Lösucg von 0,46 g Methylisocyanat in 10 ml Tetrahydrofuran-zugetropft und die Mischung wurde 2 Stunden lang bei der gleichen Temperatur gerührt. Das Tetrahydrofuran wurde unter vermindertem Druck aus der Reaktionsmischung abdestilliert. Der Rückstand wurde mit Athylacetat gewaschen und dann mit 10%iger Chlorwasserstoffsäure auf pH 1,0 eingestellt. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt und dann mit Wasser gewas-hen, wobei man 1,96 g 7-Methylthioacetamido-3-[5-(3-methylureidomethyl)-l,3,4-thiadiazol-2-yl]thiomethyl-3-cephem^-carbonsäure erhielt. Das Produkt wurde in 50 ml Wasser suspendiert und zu der Suspension wurden unter Eiskühlen 0,66 g Natriumbicarbonat zugegeben zur Herstellung einer Lösung. Die unlösliche Substanz wurde aus der Lösung abfiltriert und die Lösung wurde mit 10%iger Chlorwasserstoffsäure auf pH 1,0 eingestellt. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen, wobei die reine gewünschte Verbindung erhalten wurde, F. 177-179°C (Zers.).

IR-Spektrum:

vä? cm"¹: 3380, 3330, 3250, 1770, 1720, 1670.

NMR-Spektrum:

δ (D₂O + NaHCO₃) ppm: 220 (3H, s), 2,75 (3H, s), 3,38 (2H, s), 3,47 3,77 (2H, AB-q, J = 18 Hz),
4,12, 4,50 (2H, AB-q, J = 135 Hz), 4,70 (2H, s), 5,15 (IH, d, J = 4,5 Hz), 5,68 (IH, d, J = 45 Hz).

Beispiel 18 (Vergleichsbeispiel)

Zum Nachweis der therapeutischen Überlegenheit der erfindungsgemäßen Cephalosporansäurederivate in bezug auf ihre antibakterielle Aktivität gegenüber zwei anerkannt guten Vergleichsprodukten gleicher Wi rkungsrichtung wurden die nachstehend beschriebenen weiteren Vergleichsversuche durchgeführt, deren Ergebnisse nachstehend tabellarisch zusammengefaßt sind.

1. Testverfahren

Et wurde die anabakterielle in vitro-Aktivität unter Anwendung des nachstehend beschriebenen Agar-Platten-2-fach-Verdünnungsyerfahrens bestimmt.

Eine Ösenfüllung einer Übernachtkultur des Bakxerien-Teststammes in Tryptikase-Sojabrühe (10* lebensfähige Zellen pro ml) wurde auf einem Herzinfusionsagar (HI-Agar), der abgestufte Konzentration der untersuchten Antibiotika enthielt, ausgestrichen und nach 20stündiger Inkuoation bei 37°C wurde die minimale Hemmkonzentration (MIC) in μg/ml bestimmt.

Als Bakterien-Teststamm wurde verwendet:
Klebsiella pneumoniae 418.

2. Untersuchte Verbindungen

1) Vergleichsverbindungen a) Cefazolin

N = N

N —CHjCONH—τ (

N N

-CH₃

COOH

b) Cefamandol

/~~V-CH-

COOH

N N

Ii

^N I CH₃

2) Erfindungsgemäße Verbindungen

CH₂-S-R₂

COOH

Test- Ausfiihrungs-

verbindung beispiel

Nr. Nr.

Ή2)

S' N=N

N = N

CH₂CO-

N-CH₂CO-

CH₃SCH₂CO-

N=N

N-CH₂CO-

N N

S'

N N

S N N

N N

-U-

N N

-CH₂NH₂

CH₂NHCOCH₃

CH₂NH₂

N CH₂CH₂NH₂

13

Fortsetzung

Test- Ausführungs-

verbindung beispiel

5 Nr. Nr

L-CH₂CO-

N N

Il N

17

13

f V- CH- CO-

CH₃SCH₂CO-

N —CHjCO —

CH₂CH₂NH₂

N N

S'

N N

CH₂NH₂

-CH₂NHCONHCh₃

CH₂OH

N='

3. Testergebnisse a) Vergleichsverbindungen

untersuchte minimale Hemmkonzentration

Verbindungen (MIC) in fig/m!

Cefazolin	12,5
Cefamandol	50
b) erfindungsgemäße	Verbindung Nr
1	6,25
2	6,25
3	6,25
4	6,25
5	6,25
6	1,55
7	3,13
δ	6,25
9	3,13

Aus den vorstehend wiedergegebenen Versuchsergebnissen ist zu ersehen, daß die erfindungsgemäßen Cephalosporansäurederivate den anerkannten Vergleichsprodukten gleicher Wirkungsrichtung (Cefazolin und Cefamandol) in bezug auf ihre antibakterielle Aktivität eindeutig überlegen sind, wobei die Höhe der Überlegenheit (Faktor 2 bis Fakior 50) auch für den Fachmann auf diesem Gebiet überraschend ist.

14

Claims

Patentansprüche:

R₁ eine Methylthioacetyl-, o-Mandeloyl-, Thienylacetyl- oder Tetrazolylacetylgruppe;

R₂ 5-[Aminomethyl]-l,3,4-thiadiazol-2-yl-, 5-[Acetamidomethyl]-l,3,4^thiadiazol-2-yl-, 5-[Methylureidomethyl]-l,3,4-thiadiazol-2-yl-, 5-[Hydroxymethyl]-l,3,4-thiadiazol-2-yl- oder l-[Aminoethyl]-l H-letra-

zol-5-yl-Gruppe;
M. ein Wasserstoffatom oder ein nicht-toxisches, pharmazeutisch verträgliches Kation.
2. Verfahren zur Herstellung eines Cephaiosporanaaurederivats gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise

a) eine 7-substituierte Cephalosporansäure der allgemeinen Formel S.

CH₂-O-R₃

(H)

COOM

worin R, und M jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben und R₃ niedere&Alkanoyl bedeutet, mit einer Thiolverbindung der allgemeinen Formel

R₂-SH

(IH)

worin R₂ die oben angegebenen Bedeutungen hat, oder ihrem Alkalimetallsalz umsetzt unter Bildung einer Verbindung der oben angegebenen Formel (I); oder
b) eine Verbindung der allgemeinen Formel

H₂N

CH₂-S-R₂

(IV)

COOM

worin R₂ und M jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben, mit einer organischen Carbonsäure der allgemeinen Formel

R₁-OH

(V)

worin R, die oben angegebenen Bedeutungen hat, oder ihrem reaktionsfähigen Derivat umsetzt unter Bildung einer Verbindung der Formel (I); oder
c) eine Verbindung der allgemeinen Formel

Jr-H J-CH₂-S-Ri'

COOM

worin R₁ und M jeweils die oben angegebenen Bedeutungen haben und R₂' eine 5-(Aminomethyl]-

1,3,4-thiadiazol-2-yl-Gruppe bedeutet,

mit einer organischen Carbonsäure der allgemeinen Formel

R'" — OH

(V)

rl

worin Ri" eine Acetyl- oder Methylcarbamoylgmppe bedeutet, oder ihrem reaktionsfähigen Derivat umsetzt unter Bildung einer Verbindung der allgemeinen Formel

S
R₁-NH-, ( \

J— N J— CH₂-S-Rj

O T

COOM