DE2343034A1 - Verfahren zur herstellung von tetrapeptiden mit phagocytosestimulierender wirkung - Google Patents
Verfahren zur herstellung von tetrapeptiden mit phagocytosestimulierender wirkungInfo
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Description
FARBWERKE HOECHST AG vormals Meister Lucius & Brüning
Aktenzeichen: HOE 73/F 252
Datum: 23. August 1973 Dr. HG/stl
Datum: 23. August 1973 Dr. HG/stl
Verfahren zur Herstellung von Tetrapeptiden mit phagocytosestimulierender
Wirkung
Therapeutisch verwendbare Tetrapeptide mit der Aminosäure-einheit Lys-Pro-Arg sind aus der Deutschen Offenlegungsschrift 2 124 OO3
bekannt.
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von
Peptiden der allgemeinen Formel I
X-L-Lysyl-L-prolyl-L-arginin (I)
worin X die Aminosäurereste L-Seryl, D-Seryl, L-Pyroglutamyl,
D-Pyroglutamyl oder L-Threonyl bedeutet 3 das dadurch gekennzeichnet
ist, daß man das Tripeptid der Formel II
H-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH (II)
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mit Aktivester oder Aminosäuren der allgemeinen Formel X-OH, deren freie Aminogruppen durch Benzyloxy-carbonyl-CZ) oder tert.
Butyloxycarbonyl-(Boc)-gruppen blockiert sind, umsetzt, anschliessend eine vorhandene Z-Gruppe durch katalytische Hydrierung abspaltet
und das Boc-geschützte Tetrapeptid mittels Verteilungschromatographie reinigt und anschließend die Boc-Gruppen sauer
abspaltet.
Die Synthese der bisher bekannten Verbindungen der Formel I liefert kein kristallines Produkt. Auch die Zwischenprodukte sind
durchweg ölig oder amorph. Da keine der sieben Stufen durch Kristal lisation gereinigt werden kann, ist die Verbindung der Formel I
durch zahlreiche Nebenprodukte verunreinigt und läßt sich durch Säulenchromatographie nicht vollständig reinigen.
Nach dem erfindungsgemäßen Verfahren kommt man dagegen zu reinen
Tetrapeptiden der allgemeinen Formel I, wenn man die Bocgeschützten
Tetrapeptide nach einer Vorreinigung an einem schwach
(R)
basischen Ionenaustauscher, an Sephadex LH 20 , einem quervernetzten·,
alkylierten Dextran, mittels einer einfachen VerteilungsChromatographie in dem System Eisessig/Butanol/Wasser
gut reinigt und erst anschließend die vorhandenen Boc-Gruppen in HCl/Eisessig abspaltet.
Das erfindungsgemäße Verfahren ist insofern äußerst überraschend, da nicht, wie sonst üblich, nach Abspaltung der Schutzgruppen das
Peptid gereinigt wird, sondern daß die intensive Reinigung auf der Stufe des geschützten Feptids vorgenommen wird und die Abspaltung
der Schutzgruppen ohne Nebenreaktionen verläuft.
Zur Bereitung der Trennsäule mischt man 100 bis 200 ml, vorzugsweise
200 ml Eisessig mit 2 Liter Wasser und schüttelt mit 300 bis 500 ml, vorzugsweise mit JJOO ml n-Butanol durch. Nimmt man mehr
Eisessig, so muß auch mehr n-Butanol verwendet werden. Bei einer Mischung aus 300 ml Eisessig und 2 Liter Wasser muß mit mindestens
500 rcl n-Butanol geschüttelt werden. Dabei entstehen 2 Schichten.
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Ca. 150 ml der oberen Phase werden mit 120 g Sephadex LH 2
einem quervernetzten, alkylierten Dextran, verrührt. Anschließend
(R) suspendiert man das so vorbehandelte Sephadex LH 2Cr ; in der
unteren Phase, läßt einige Stunden quellen und füllt die Säule. Gelöst in Unterphase wird die Rohsubstanz der Boc-geschützten
Tetrapeptide auf die Säule gegeben und mit der unteren Phase eluiert. Das Eluat wird am besten mit einem Fraktionssammler aufgefangen.
Die Fraktionen, die die gewünschte Substanz enthalten, werden eingeengt und in HCl/Eisessig von den Aminoschutζgruppen
befreit.
Die so hergestellten Tetrapeptide der allgemeinen Formel I sind chromatographisch einheitlich, liegen als Hydrochloride vor und.
sind biologisch hoch wirksam.
Die als Ausgangsstoff verwendete Verbindung der Formel II kann aus bekannten Ausgangsprodukten entsprechend den allgemeinen
Methoden der Peptidchemie hergestellt werden. Ein günstiger Weg ist folgender:
Z-Lys(Boc)-OH und H-Pro-OMe . HCl werden unter Zusatz von
1-Hydroxybenzotriazol und N-A'thylmorpholin mit Dicyclohexylcarbodiimid
zu Z-Lys(Boc)-Pro-OMe umgesetzt. Durch Verseifung erhält man
daraus Z-Lys(Boc)-?ro-OH, das wiederum mit H-Arg-OMe . 2 HCl unter
Zusatz von 1-Hydroxybentriazol, N-Äthylmorpholin und Dicyclohexylcarbodiimid
zu Z-Lys(Boc)-Pro-Arg-OMe umgesetzt wird. Letztere Verbindung wird verseift und durch katalytische Hydrierung entcarbobenzoxyliert.
Man erhält H-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH-diacetat (Formel H)T1CiUr1Ch Verteilungs Chromatographie an Sephadex
(R)
LH 20v , einem quervernetzten, alkylierten Dextran, in de
Eisessig/Butanol/Wasser gereinigt werden kann.
Doch auch andere Verfahren sind möglich. So läßt sieh auch der
t»^-Nitro-argininmethylester als Ausgangssubstanz verwenden.
Stufenweise kann diese Verbindung mit Boc-Pro-OH und dann mit Z-Lys(Boc)-0H mit Dicyclohexylcarbodiimid, gegebenenfalls unter
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Zusatz von 1-Hydroxybenzotriazol umgesetzt werden. Auch als Aktivester,
wie z.B. p-Nitrophenyl- oder 2.3.5-Trichlorphenylester
können Boc-Pro-OH und Z-LyS(BoC)-OII, gegebenenfalls unter Zusatz
einer katalysierenden N-Hydroxyverbindung, aufgesetzt werden.
Die Boc-Gruppe bei Boc-Pro-Arg(N0„)-0Me kann mit Trifluoressigsäure
oder mit HCl in Eisessig abgespalten werden. Das Tripeptid Z-Lys (Boc)-Pro-Arg(N02)-0Me wird verseift und katalytisch hydriert;
wobei das Tripeptid der Formel II entsteht.
Aus dem Tripeptid der Formel II läßt sich durch Umsetzung mit Boe-Thr-OBt (Boe-Thr-1-hydroxybenzotriazolester) Boc-Thr-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH,
herstellen, das mittels VerteilungsChromatographie
gereinigt wird. Die beiden Boc-Gruppen werden anschließend in HCl/Eisessig abgespalten. Man erhält das Peptid der allgemeinen
Formel I, in dem X für Threonyl steht.
In Biochem. Biophys. Res. Comm. j»7, 1^2 (!972) wird die Synthese
des Tetrapeptids Thr-Lys-Pro-Arg-OH nach der Festkörpermethode beschrieben. Ausbeute und physikalische Daten der Substanz werden
nicht genannt. Auch in der Deutschen Offenlegungsschrift 212^1003
wird die Synthese dieses Tetrapeptids in mehreren Beispielen beschrieben, jedoch auch hier werden keine physikalischen Daten
angegeben.
Nach dem erfindungsgemäßen Verfahren wird eine Gesamtausbeute an
analysenreinen Produkten bezogen auf eingesetzte Aminosäurederivate von 25 % erhalten.
Wegen der einfachen Durchführung und Reproduzierbarkeit dieser Synthese und seiner vergleichsweise guten Ausbeute ist das erfindungsgemäße
Verfahren den bisher bekannten überlegen.
Bei der Herstellung von H-Ser-Lys-Pro-Arg-OH entsteht bei Verwendung
von Z-Serinderivaten als Zwischenprodukt Z-Ser-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH.
Diese Verbindung wird katalytisch hydriert. Aus den resultierenden H-Ser-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH wird nach der Reinigung
durch Verteilungs Chromatographie die Boc-Gruppe mit HCl in Eisessig
abgespalten. Das erhaltene Tetrapeptid liegt als Trihydro-
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chlorid vor und ist Chromatographiech rein. Bei Verwendung von
Boc-Serinderivaten entsteht als Zwischenprodukt Bce-Ser-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH,
das durch VerteilungsChromatographie gereinigt wird.
Die beiden Boc-Gruppen werden anschließend in HCl/Eisessig abgespalten.
Bei der Herstellung von Glu-Lys-Pro-Arg-OH wird als Zwischenprodukt
^-Glu-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH mittels genannter Verteilungs Chromatographie
gereinigt. Die Boc-Gruppe wird anschließend wieder in HCl/Eisessig abgespalten.
Als geeignete Lösungsmittel für die Verknüpfung von H-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH
mit den entsprechenden Threonin-, Serin- und Pyroglutaminsäurederivaten kommen vor allem Dimethylformamid, Dimethylacetamid
DimethyIsulfoxid und Mischungen dieser Lösungsmittel
infrage. Als Katalysatoren für die Aktivester der Pyroglutaminsäure sind besonders 1-Hydroxybenzotriazol, l-Hydroxy-pyridon-2
und 3~Hydroxy4-oxo~3.4-dihydrochinazolin zu empfehlen.
Die Peptide der allgemeinen Formel I haben phagocytosestimulierende
Wirkung.
In einem in vitro-Versuch wurde überraschenderweise gefunden, daß humane Granulocyten Gaffkya tetragene-Keime unter Zusatz von
Pyroglutamyi- oder Seryl-Lys-Pro-Arg-Verbindungen stärker
phagocytieren als mit den bekannten Thr-Lys-Pro-Arg (=Tuftsin).
Dieser Befund ist um so überraschender, da in der DOS 2 124 003 erwähnt ist, daß die Sery!-Verbindung schwächer wirkt als die
Threony1-Verbindung.
Folgende Tabelle gibt den Prozentanteil an Granulozyten dar, der
20 Minuten nach Inkubation die Gaffkya tetragena-Keime phagocytiert
hat.
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■" D ""
Präparat
H-Thr-Lys-Pro-Arg-OH ("Tuftsin") 59.0 +_ 2.4
L Glu-Lys-Pro-Arg-OH 78.7 +. li · 8
H-D-Ser-Lys-Pro-Arg-OH 78.9 +. 5-0
Tris-Puffer 24.0 +_ 3-3
Albumin (human) 24 - 30
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind therapeutische Arzneimittel,
die auch mit einem oder mehreren anderen therapeutisch aktiven
Substanzen j wie z.B. mit Antibiotika oder Sulfonaniden appliziert
werden können. Neben der Phagocytose lebender Keime spielt auch
die Beseitigung von Toxinen, insbesondere der Endotoxine der gramnegativen Bakterien, eine große Rolle. Dadurch kann eine
Toxämie vermieden werden.
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A. Herstelung der Ausgangsverbindung H-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH-diacetat
(II)
41.4 g (0.25 MoI) HCl . H-Pro-OMe, 95-1 g (0.25 Mol) Z-Lys(Boc)-OH,
33,75 g (0.25 Mol) HOBt und 35 ml Triäthyiamin werden in 800 ml
Tetrahydrofuran gegeben. Zu dieser Mischung gibt man bei 0 C unter Rühren eine kalte Lösung von 55 g Dicyclohexyicarbodiimid in Tetrahydrofuran
zu. Man läßt 1 Stunde bei 00C und 1 Stunde bei Raumtemperatur
rühren, saugt den Niederschlag ab und engt das Filtrat ein. Der Rückstand wird in 800 ml Essigester gelöst und nacheinander
zweimal nit NaHCO,-Lösung, einmal mit KHSOu-Lösung und
einmal mit NaIICO,-Lösung ausgeschüttelt, mit Natriumsulfat getrocknet
und eingeengt. Das resultierende öl wird in Essigester gelöst und über 300 g basisches Al2O (WoeIm9 Aktivstufe I)
chromatographiert. Das Eluat wird eingeengt. Es bleiben 112.3 g
eines gelben Öls zurück (Z-Lys(Boc)-Pro-OMe).
Das oben gewonnene öl (112.3 g) wird in 300 ml Dioxan gelöst. Dazu gibt man 60 ml Wasser und titriert gegen Thymolphthalein
mit insgesamt 21IO ml In NaOH. Anschließend wird neutralisiert,
eingeengt, und der Rückstand zwischen Äther und 1 η HpSO1,
unter Eiskühlung verteilt. Der Äther wird getrocknet und eingeengt. Es bleiben 103.9 g eines steifen Öls zurück (Z-Lys(Boc)-Pro-OH).
Das oben gewonnene öl (103.9 g) wird in 475 nil Dimethylformamid
gelöst. Dazu gibt man 49.4 g (I89 mMol) 2 HCl . H-Arg-OMe,
51.1 g HOBt und 24.65 ml N-Äthyimorpholin. Bei 0°C gibt man 41.6 g
Dicyclohexyicarbodiimid zu, rührt 1 Stunde bei O0C, 2 Stunden bei
Raumtemperatur und läßt über Nacht bei Raumtemperatur stehen. Der Niederschlag wird abgesaugt, das Filtrat eingeengt und der Rückstand
zwischen Essigester und 2 η Sodalösung verteilt. Die Essigesterphase wird mit Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der
Rückstand wird dreimal mit Äther verrieben und am Hochvakuum getrocknet. Es entstehen II3 g eines amorphen klebrigen Schaums
(Z-Lys (Boc) -Pro-Arg-OMe).
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Die oben gewonnene Substanz (113 g) wird in 500 ml Dioxan gelöst.
Man gibt 100 ml Wasser zu und titriert mit 2 η NaOH gegen Thyniolphthaiein.
Es v/erden ca. 61.6 ml 2n NaOH verbraucht. Anschließend wird im Vakuum eingeengt und der Rückstand in 450 ml Wasser gelöst.
Unter Rühren und Eiskühlung versetzt man mit 61.6 ml 2n H„S0ν , mit
der gleichen Menge, wie 2n NaOH verbraucht worden war. Es fällt ein steifes öl aus. Das Wasser wird abdekantiert und das öl noch
zweimal mit Wasser verrieben. Der Rückstand wird in Äthanol gelöst und eingeengt. Der Rückstand wird mehrmals mit Äther verrieben.
Der Äther wird jeweils abdekantiert und der Rückstand zum Schluß am Hochvakuum getrocknet. Es entstehen öl g einer amorphen Masse
(Z-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH).
Die so gewonnene amorphe Masse (81 g) wird in 400 ml 95%iger
Essigsäure gelöst und mit Wasserstoff in Gegenwart eines Pd--Katalysators
hydriert. Nach beendigter Hydrierung wird der Katalysator abgesaugt und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand wird
zweimal mit Äther und einmal mit Essigester verrieben und abgesaugt.
Es bleiben 70.8 g (~- 46 % bezogen auf HCl . H-Pro-0Me) eines
amorphen Produkts zurück (H-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH, 2 AcOH), das in
20 g Portionen an einer 100 χ 8 cm Verteilungschromatographiersäule
(siehe unter B) gereinigt wird.
Ausbeute 75 % bezogen auf Rohsubstanz.
Ausbeute 75 % bezogen auf Rohsubstanz.
/pCjß2 = -21,0° (c = 1. Methanol)
C26H49K7°1O (6l9'7)
ber.: C 50,40 H 7,97 N 15,82 gef.: C 50,6 H 7,9 N 15,8
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B, Chromatographisches Trennungsverfahren
a. Aufbau der Trennsäule
In einem Scheidetrichter werden ^0O ml Eisessig, k Liter Wasser und
800 ml n-Butanol geschüttelt. Nachdem sich die beiden Phasen getrennt haben, trennt man diese und verrührt 300 ml der oberen
Phase mit 2*J0 g Sephadex LH 20 , einem quervernetzten>
alkyiierten Dextran. Dabei wird das gesamte Lösungsmittelgemisch aufgesaugt.
Diese so vorbehandelte Säulenfüllung wird nun in einer entsprechenden Menge der unter Phase suspendiert } man läßt ca. 3 Stunden
quellen und füllt damit die Säule (100 χ 2I cm).
b. Trennung an der Säule
Die zu chroinatographierende Substanz wird in möglichst wenig der
unteren Phase gelöst und auf die Säule aufgetragen. Mit der unteren Phase wird eluiert. Zur Elution kann man auch ein Lösungsmittelgemisch
von h.3 Liter Wasser, 350 ml Essigsäure und ^30 ial n-Butanol
verwenden. Die Fraktionen, die die gewünschte Substanz enthalten, werden gereinigt und im Vakuum eingeengt.
H-Thr-Lys-Pro-Arg-OH . 3 HCl . H„0
70,8 g rohes H-Lys(Boc)~Pro-Arg-OH . 2 AcOH werden in 300 ml Dirne
thyIforiaamid gelöst. Dazu gibt man bei Raumtemperatur *i3 g
(128 mMol) Boc-Thr-OBt und läßt einen Tag bei Raumtemperatur stehen,
Nun wird im Vakuum eingeengt, der Rückstand mit Äther verrieben und am Hochvakuum getrocknet. In 120 ml einer Mischung aus
Methanol/Wasser (1:1) wigd der Rückstand gelöst und über 950 ml
breite Amberiite IR 45 ^ (OH"-Form), einen schwach basischen
Austauscher, filtriert. Mit einer Methanol/Wasser-Mischüng (1:1)
wird eluiert. Das Eluat wird eingeengt. Ausbeute 69-5 g
(Boc-Thr-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH). In 6 Portionen werden die oben gewonnenen 69.5 g Öl über eine 100 χ 8 cm-Sephadex LH 20v '-Säule
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- ίο -
(siehe B) chromatographiert.
Die Fraktionen,-die das Boc-Thr-Lys(Boc)-Pro-Arg-OH enthalten,
werden vereinigt und im Vakuum eingeengt.
Der1 Rückstand (ca. h2 g) wird in 195 ml Essigsäure gelöst und
mit 500 ml Jn-HCl/Eisessig versetzt. Man läßt 30 Minuten stehen,
wobei sich der Großteil des Peptids als öl abscheidet.
Man engt ein, löst den Rückstand in Wasser und ^efriertrocknet.
Ausbeute 32,5 g Thr—Lys-Pro-Arg . 3 HCl . 2 H0O (- 20 % bezogen
auf Z-Lys(Boc)-OH oder 25 % bezogen auf eingesetzte Aminosäurederivate).
Die Substanz ist amorph.
Analyse berechnet für C21H110NgO6 . 3 HCl . 2 H3O: (646,0)
ber.: C 39,05 H 7,3'J N 17,3^ Cl 16,^5
gef.: C 39,0 H 7,3 N 17,1 Cll6,3
/vlj^0 = -68.2° (e = 1, Wasser)
Herstellung von Boc-Thr-GBt
Herstellung von Boc-Thr-GBt
28,6 g Boc-Thr-OH und 12,$7 g 1-Hydroxybenzotriazol werden in
Tetrahydrofuran gelöst. Bei 0'C gibt man 20.1 g Dicyclohexylcarbodiimid,
in 50 ml Tetrahydrofuran gelöst, hinzu. Man läßt
1 Stunde bei 0 C und über Nacht bei Raumtemperatur rühren, saugt den Niederschlag ab und engt das Piltrat ein. Aus Äther/Petroläther
läßt sich die Substanz kristallisieren.
Ausbeute 30 g Schmelzpunkt 96 bis 980C
Analyse berechnet für c 1KH20i^0fi (336 · 35)
ber.: C 53,57 H 5.99 N I6.66
gef.: C53.6 H 6,0 N 16.5
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- 11 Beispiel 2
H-Ser-Lys-Prc-Arg-OH . 3 HCl . H0O
Zu einer Suspension-von 21KS g (*!G mMcl) H-Lys (Boc)-Pro-Arg-OK-diacetat
in 150 ml Dimethylforrnamid gibt man bei 0°C 15.5I g
(HO mHol) Z-Ser-OOBt. Man rührt 1 Stunde bei O0C und dann bei
Raumtemperatur bis alles gelöst ist. Man engt ein und verreibt den Rückstand mit Äther. Der Äther wird &bdekantiert und der Rückstand
im Hochvakuum getrocknet. Die resultierende Substanz wird in einer Methanol/Wasser-Mischung (1:1) gerade gelöst und über
300 ml Amberlite IR *J5 (0H-Porm) filtriert. Mit Methanol/Wasser
(1:1) wird eluiert. Das Eluat wird eingeengt. Es bleiben 39 g eines öls zurück, das in 200 ml 90 ^iger Essigsäure gelöst wird.
Man setzt Pd-Katalysator au und leitet unter Rühren Wasserstoff durch die Lösung bis kein C0? mehr entweicht. Von Katalysator
wird'abgesaugt und das Filtrat eingeengt. Der Rückstand wird mehrmals
mit Äther verrieben und am Hochvakuum getrocknet. In zwei Portionen wird der Rückstand über eine 100 χ 8 em-Sephadex LH 20 ■
Säule (siehe 3)chromatographiert. Die vereinigten Fraktionen
werden eingeengt und der Rückstand (29 .»9 g) in ΐβΟ ml Eisessig
gelöst. Dazu gibt man 300 ml 2n HCl/Eisessig und läßt 15 Minuten bei Raumtemperatur stehen. Anschließend .wird am Hochvakuum eingeengt
und der Rückstand in Wasser gelöst und gefriergetrocknet.
Ausbeute 18,28 g
2J = -60,0° (c = 1, H2O)
Beispiel 3
H-D-Ser-Lys-Pro-Arg-OH . 3 HCl
Beispiel 3
H-D-Ser-Lys-Pro-Arg-OH . 3 HCl
Zu einer Lösung von 1,1 g (5 mMol) Boc-D-Ser-NH-NHp in 10 ml
Dimethylformamid gibt man bei ~3ö C 13^5 ml 6.9 η HCi/Dioxan
(10 mMol) und 0,6 ml tert.ButyInitrit. Man läßt auf ca. -15°C
kommen und rührt 15 Minuten bei dieser Temperatur. Danach gibt
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man 3,1 g (5 mMol) H-Lys(Boe)-Pro-Arg-OH-diacetat und bei -*10oC
2,6 ml N-Äthylmorpholin zu. Man läßt bei -20 bis -10°C rühren und
gibt im Laufe einiger Stunden etwas N-Äthylmorpholin zu, um einen pH von 7 bis 8 zu erhalten. Nach etwa 5 Stunden ist alles gelöst.
Man stellt über Nacht in den Eisschrank und engt anderntags im Vakuum ein. Der Rückstand wird mit Äther verrieben. Die Substanz
(*J,4 g) wird an einer 100x4cm Sephadex LH 20^-Säule (siehe B)
chromatographiert. Das Peptid enthaltende Eluat wird eingeengt.
Der Rückstand wird in 20 ml Eisessig gelöst und mit 20 ml 2n HCl/Eisessig versetzt. Man läßt 15 Minuten bei Raumtemperatur
stehen, engt ein, löst in Wasser und gefriertrocknet.
Ausbeute 1,5 g
Λ/7'd3 = -73,7° (c = 1, H2O)
i-Glu-Lys-Pro-Arg-OH . 2 HCl . H5O
3,1 g (5 mMol) H-LysCBocJ-Pro-Arg-OH-diacetat werden zusammen mit
675 mg (5 mMol) HOBt in 20 ml Dimethylformamid gelöst. Dazu gibt man bei Raumtemperatur 1,51I g (5 mMol) *—GIu-OTcp und läßt über
Nacht stehen. Anderntags wird eingeengt und der Rückstand mehrmals mit Äther verrieben und abgesaugt. Die amorphe Substanz (3,9 g)
wird an einer 100 χ 4 cm Sephadex LH 20^R'-Säule (siehe B)
chromatographiert. Man erhält 2.7 g einer reinen Fraktion, die in 20 ml Eisessig gelöst wird. Zu dieser Lösung gibt man 20 ml
2n HCl/Eisessig, läßt 15 Minuten bei Raumtemperatur stehen und engt ein. Der Rückstand wird in Wasser gelöst und gefriergetrocknet.
Ausbeute 1,63 g
s _73io° (c = 1, H2O)
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Claims (3)
1. Verfahren zur Herstellung von Peptiden der allgemeinen Formel I
X-L-Lysyl-L-prolyl-L-arginin I
worin X die Aminosäurereste L-Seryl, D-Seryl, L-Pyroglutamyl,
D-Pyroglutamyl oder L-Threonyl bedeutet, dadurch gekennzeichnet,
daß man das Tripeptid der Formel II
H-Lys(Boc)-Pro-ArgOH II
mit Aktivestern oder Aminosäuren der allgemeinen Formel X-OH, deren freie Aminogruppen durch BenzyIoxy-carbonyl-(Z) oder
tert. Butyloxycarbony1-(Boc)-Gruppen blockiert sind, umsetzt,
anschließend eine vorhandene Z-Gruppe durch katalytische Hydrierung
abspaltet, das Boc-geschützte Tetrapeptid mittels Verteilungsschroraatographie
reinigt und anschließend die Boc-Gruppen sauer abspaltet.
2. ^GIu-Lys-Pro-Arg-OH
3. Tetrapeptid der Formel I, worin X die angegebene Bedeutung hat, hergestellt nach dem Verfahren nach Anspruch 1.
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Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19732343034 DE2343034C2 (de) | 1973-08-25 | 1973-08-25 | Tetrapeptide mit phagocytose-stimulierender Wirkung, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19732343034 DE2343034C2 (de) | 1973-08-25 | 1973-08-25 | Tetrapeptide mit phagocytose-stimulierender Wirkung, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2343034A1 true DE2343034A1 (de) | 1975-03-06 |
| DE2343034C2 DE2343034C2 (de) | 1984-08-23 |
Family
ID=5890741
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19732343034 Expired DE2343034C2 (de) | 1973-08-25 | 1973-08-25 | Tetrapeptide mit phagocytose-stimulierender Wirkung, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE2343034C2 (de) |
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-
1973
- 1973-08-25 DE DE19732343034 patent/DE2343034C2/de not_active Expired
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Biochim.Biophys. Acta, 310, 1973, S. 230-237 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0128118A2 (de) * | 1983-06-03 | 1984-12-12 | Pentapharm A.G. | Peptidderivate und deren Verwendung als Substrate zur quantitativen Bestimmung von Enzymen |
| EP0128118A3 (en) * | 1983-06-03 | 1987-07-22 | Pentapharm A.G. | Peptide derivatives and their use as substrates in the quantitative determination of enzymes |
| FR2610934A1 (fr) * | 1987-02-13 | 1988-08-19 | Adir | Nouveaux derives peptidiques a structure polycyclique azotee, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| EP0282374A1 (de) * | 1987-02-13 | 1988-09-14 | Adir Et Compagnie | Peptidderivate mit Polyzyklischer Stickstoffstruktur, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen |
| EP0296059A1 (de) * | 1987-06-16 | 1988-12-21 | Adir Et Compagnie | Tripeptide mit polyzyklischer Stickstoffstruktur, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzung |
| FR2616663A1 (fr) * | 1987-06-16 | 1988-12-23 | Adir | Nouveaux tripeptides a structure polycyclique azotee, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE2343034C2 (de) | 1984-08-23 |
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