DE2327576B2

DE2327576B2 - Vorrichtung zur bestimmung von hormonen unter verwendung radioaktiv markierter verbindungen

Info

Publication number: DE2327576B2
Application number: DE19732327576
Authority: DE
Inventors: Stratos Dr. 6000 Frankfurt; Kern Rudolf Dr. 6500 Mainz; Mück Karl-Friedrich Dr. 6200 Wiesbaden Paschalis
Original assignee: Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1970-12-30
Filing date: 1973-05-30
Publication date: 1976-09-16
Also published as: AU6944774A; NL164670B; DE2327576A1; GB1478335A; US3743482A; NL164670C; FR2231969B1; BE815750A; FR2231969A1; NL7407004A; US3938953A

Description

Menge radioaktiv markiertes Hormon enthält, während im anderen Teil eine bestimmte Menge eines gekörnten Adsorbens, z. B in Form einer schwach gepreßten Tablette, befestigt ist. Als Adsorbentien können hier hämoglobinüberzogene Kohle, Ionenaustauscherharze oder Polyurethan-Schwämmchen verwendet werden. Zur Befestigung dienen entweder mechanische Vorrichtungen wie Netzwerk odei leicht wasserlösliche Bindemittel wie Lactose, Gelatine oder Polyvinylalkohol. Diese Hilfsmittel sind umständlich und bergen Fehlerquellen.

Nach US-PS 36 46 346 wird zum gleichen Zweck ein einteiliger Behälter aus thermoplastischem Material verwendet, dessen innere Oberfläche zum Teil mit dem für das jeweils zu bestimmende Hormon spezifischen Antikörper überzogen ist. Die Herstellung solcher Überzüge mit gleichbleibenden Oberflächeneigenschaften ist schwierig. Die Überzüge führen deshalb häufig zu schlecht wiederholbaren Ergebnissen.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung einer Vorrichtung, in der ein Absorbens zur Bestimmung von beliebigen Hormonen verwendbar ist, wobei das Adsorbens bequem eingebracht wird, gleichbleibende Oberflächeneigenschaften aufweist und zu gut wiederholbaren Ergebnissen führt.

Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur Bestimmung von Hormonen in Flüssigkeiten unter Verwendung radioaktiv markierter Verbindungen, bestehend aus zwei miteinander lösbar verbundenen Röhrchen, von denen das eine, das als Meßröhrchen zur Aufnahme der r>i untersuchenden Flüssigkeit dient, unten geschlossen ist und eine Lösung des radioaktiv markierten Hormons und einen Antikörper bzw. ein hormon-bindendes Protein enthält, während das andere, das als Adsorptionsröhrchen dient, am äußeren Ende verschließbar ist und Adsorptionsmittel enthält, und ist dadurch gekennzeichnet, daß die ganze innere Oberfläche des Adsorptionsröhrchens hinsichtlich des zu bestimmenden Hormons adsorptive Eigenschaften aufweist.

Vorteilhafte Weiterbildungen sind Gegenstände der Unteransprüche.

In der Figur ist die Vorrichtung gemäß der Erfindung in beispielsweiser Ausführung dargestellt: Meßröhrchen (1), zu untersuchende Flüssigkeit, Lösung des radioaktiv markierten Hormons sowie des Antikörpers oder des hormonbindenden Proteins (2), Adsorptionsröhrchen (3), Verschluß (4), adsorbierende Schicht (5).

Weitere Beispiele der Ausgestaltung, Herstellung und Handhabung einer erfindungsgemäßen Vorrichtung werden zur näheren Erläuterung der Erfindung im folgenden beschrieben.

Das Meßröhrchen kann aus Glas oder Kunststoff bestehen. Bevorzugt wird es aus Polyäthylen hergestellt. Länge und Breite können variieren und hängen von den verfügbaren Volumen der zu untersuchenden Flüssigkeit bzw. der Bohrlochgröße des Detektors ab.

Das Adsorptionsröhrchen kann aus einem Thermoplasten bestehen, der 10 bis 60 Gew.-% eines Ionenaustauschers enthält. Eine bevorzugte Form besteht aus Hochdruckpolyäthylen, welches 20 bis 40 Gew.-% eines Anionenaustauschers mit ionisierbaren quaternären Aminogruppen enthält. Die Länge der Adsorptionsröhrchen ist abhängig von der Austauscheraktivität und beträgt zweckmäßig 1 bis 6 cm.

Die Herstellung des Adsorptionsröhrchens erfolgt zweckmäßig durch thermoplastische Verarbeitung von homogenisierten Mischungen aus Thermoplasten und geeigneten Ionenaustauschern. Als Thermoplasten eignen sich solche Polymere, deren Verarbeitungstemperaturen zwischen 100 und 200⁰C, vorzugsweise zwischen 130 und 170°C liegen. Zum Beispiel können verwendet werden:

Polyäthylen:

Hochdruckpolyäthylen mit Schmelzindices (i 5) von ίο 0,3 bis 70, vorzugsweise 0,3 bis 10, gemessen nach DIN Norm 53735 bei 190⁰C.
Niederdruckpolyäthylen mit Schmelzindices (i5) von 0,3 bis 30, vorzugsweise 10 bis 30, gemessen nach DIN Norm 53735 bei 190⁰C.

Polypropylene

mit Schmelzindices (i2) von 0,4 bis 40, vorzugsweise 5 bis 30, gemessen nach DIN Norm 53735 E bei 230° C.

Polyoxymethylene

erhalten durch Homo- oder Copolymerisation von Trioxan und Formaldehyd und cyclischen Acetalen mit Schmelzindices (i 2) zwischen 1 und 50, vorzugsweise zwischen 15 und 50, gemessen nach DIN Norm 53735 bei 190°C.

Polystyrole

mit Schmelzindices (i5) von 2 bis 30, vorzugsweise von 5 bis 25, gemessen nach DIN Norm 53735 bei 200⁰C.

Polymethacrylate

mit Schmelzindices von 0,4 bis 10, vorzugsweise von 5 bis 10, gemessen nach ASTMD 1238-62 T.

,. Polyvinylchlorid

mit K-Werten von 40 bis 80, vorzugsweise von 50 bis 70, gemessen nach DIN Norm 53726 in Cyclohexanon bei 25⁰C.

Polyester

aus zweibasischen Carbonsäuren und Diolen, wobei Polyester aus linearen aliphatischen Dicarbonsäuren mit 4 bis 12 Kohlenstoffatomen und α,ω-Diolen mit 2 bis 8 Kohlenstoffatomen, z. B. Sebacinsäure/Äthylenglykol-Polyester, besonders geeignet sind.

Polyamide

aus zweibasischen Dicarbonsäuren und Diaminen, wobei der Schmelzpunkt der Polymeren durch Einbau von z. B. Äther-, Methylol- oder Estergruppen oder durch Cokondensation herabgesetzt wird.

Als Ionenaustauscher können sowohl Anionen- als auch Kationenaustauscher mit mittleren Korngrößen von 0,04 bis 1,0 mm Durchmesser, vorzugsweise 0,08 bis 0,2 mm Durchmesser, eingemischt werden. Die Austauscherkapazität beträgt 0,3 bis 3 Val/1, vorzugsweise 0,5 bis 1,5 Val/1. Die Austauscherharze sind in der Regel vernetzt; der Vernetzeranteil liegt zwischen 1 und 12%, vorzugsweise zwischen 4 und 10%. Als handelsübliche lonenaustauscherpulver sind Amberlite® CG 400, Amberlite® IRA 402, Amberlite® 200 und Dowex® geeignet.

Die Mischungen aus Thermoplasten und Ionenaustauscher, die zweckmäßig zwischen 10 und 60 Gewichtsprozent, vorzugsweise zwischen 20 und 40 Gewichtsprozent Austauscherharz enthalten, werden auf Walzen, Kalandern, Knetern oder Extrudern, vor-

zugsweise Doppelschneckenextrudern, bei Tempera- wechsler, gemessen. Das Adsorptionsröhrchen braucht türen zwischen 100 und 200⁰C, vorzugsweise zwischen nicht entfernt zu werden, was sehr vorteilhaft ist, weil 130 und 170⁰C homogenisiert. dadurch Kontaminationen vermieden werden. Ein

Die Herstellung der Adsorptionsröhrchen kann Pipettieren ist ebenfalls nicht notwendig,
dann sowohl auf Extrusions- als auch auf Spritzguß- 5 Vorteilhaft kann mit der Vorrichtung gemäß der Ermaschinen erfolgen. findung die Konzentration eines Hormons im Blut

Bei der Extrusionsverarbeitung wird die homogeni- bestimmt werden. Zur Bestimmung der TBG-Kapazität sierte Mischung vorzugsweise bei Temperaturen zum Beispiel bringt man in ein Meßröhrchen eine zwischen 130 und 170⁰C durch eine Ringdüse be- genügende Menge radioaktiv markiertes L-Trijodfördert und über einen Kalibrierungstank bei einem io thyronin (T₃*) in einem geeigneten Puffer gelöst und Unterdruck von 1 bis 15 m Wassersäule, vorzugsweise gibt das zu untersuchende Serum hinzu. Die spezifische 2 bis 10 m Wassersäule, synchron abgezogen. Das so Aktivität des verwendeten T₃* kann zwischen 10 und erhaltene endlose Rohr wird auf die den Adsorptions- 200 mCi/mg T₃ liegen; im Prinzip sind jedoch sowohl röhrchen entsprechende Länge zugeschnitten und die höhere als auch niedrigere Werte möglich. Als Pufferäußere Oberfläche an beiden Enden abgedreht, um 15 lösung kann jedes System, das eine genügende Puffereinen dichten Verschluß zwischen Adsorptionsröhr- kapazität im pH-Bereich von 5 bis 9 hat, benutzt chen und Meßröhrchen sowie Verschlußkappe zu ge- werden. Geeignet sind z. B. die Systeme Tris(hydroxywährleisten. methyl)-amino-methan/HCL oder Barbital-Na/HCL

Be: der Spritzgußverarbeitung wird die Mischung oder Phosphat nach Sörcnsen. Der pH-Wert der im gleichen Temperaturbereich verarbeitet. Das erhal- 20 Pufferlösung sollte zweckmäßig 7 sein, kann aber auch tene Röhrchen hat die für die Dichtigkeit der erfin- größer oder kleiner sein. Das T₃* reagiert mit dem dungsgemäßen Vorrichtung erforderlichen Dirnen- TBG, wobei es zum größten Teil von ihm gebunden sionen. Nachträglich kann in diesem Fall die innere wird. Man setzt nun das Adsorptionsröhrchen auf, Oberfläche des Formkörpers zur Verbesserung der verschließt die Vorrichtung und mißt die Anfangs-Adsorptionseigenschaften aufgebohrt werden. 25 radioaktivität z. B. in einem Bohrlochdetektor oder

Durch die Vorrichtung gemäß der Erfindung wird automatischen Gamma-Probenwechsler. Die Länge die Bestimmung von Hormonen einfacher und sicherer des aufgesetzten Adsorptionsröhrchens kann zweckdurchführbar. Das gilt insbesondere für das Abtrennen mäßig zwischen 1 und 6 cm variieren, abhängig von des freien Anteils des Hormons aus der Lösung. Um- der Anzahl der adsorbierenden Stellen pro Flächensländliche Schritte wie Pipettieren, Zentiifugieren und 3° einheit. Man befestigt z. B. die erfindungsgemäße Vor-Waschen entfallen. Es werden gut reproduzierbare richtung auf einem Rotator und läßt sie eine bestimmte Werte erhalten. Zeitlang rotieren, wobei die Flüssigkeit mehrfach mit

Überraschenderweise wurde festgestellt, daß das der inneren Oberfläche des Adsorptionsröhrchens in Adsorptionsröhrchen aus thermoplastischem Material Berührung kommt. Dabei wird das T₃ —· aktiv und und Austauscher keinerlei Quellvorgänge aufweist, 35 inaktiv — im Adsorptionsröhrchen adsorbiert und die bei fester Verbindung das Meßröhrchen sprengen so aus der Lösung entfernt. Nach beendeter Adsorpkönnten. tion wird die Vorrichtung aufgerichtet und nach einigen

Die Vorrichtung gemäß der Erfindung wird zweck- Minuten die in der Lösung verbliebene Aktivität wie mäßig verwendet, indem man das Adsorptionsröhr- bereits beschrieben gemessen.

chen auf das Meßröhrchen aufsteckt oder aufschraubt 40 Die Vorrichtung gemäß der Erfindung kann in und die Flüssigkeit dadurch mehrfach mit der inneren entsprechender Weise zur absoluten Bestimmune der Oberfläche des Adsorptionsröhrchens in Berührung Schilddrüsenhormone Thyroxin und Trijodthyronin bringt, daß man die Vorrichtung aus Meß- und benutzt werden. Man benötigt hierzu eine THG-Lö-Adsorptionsröhrchen um eine Achse senkrecht zur sung konstanter Kapazität, mit deren Hili'c eine Zylinderachse dreht. Man kann die Vorrichtung auch 45 Standardkurve erstellt wird. Die TBG-Lösung kann schütteln. nach bekannten säulenchromatographischen Verfahren

Zur Bestimmung eines Hormons bringt man die zu hergestellt werden. Zu dieser TBG-Lösung wird radiountersuchende Flüssigkeit, die das Hormon enthält, aktiv markiertes Thyroxin (T₄*) gegeben, das; nach in das Meßröhrchen der Vorrichtung ein, setzt das der Gleichung T₄* + TBG $: TBG · T₄*' gebunden Adsorptionsröhrchen auf, verschließt die Vorrichtung 50 wird. Wird nun diese Lösung mit inaktivem Thyroxin und mißt die Radioaktivität der Flüssigkeit im Meß- (T₄) versetzt, so wird ein Teil des an das TBG gebunderöhrchen. Die Vorrichtung (Meß- und Adsorptions- nen aktiven Thyroxins verdrängt und liegt in ungeröhrchen) wird dann auf einem Rotator befestigt und bundener Form vor. Da diese Menge des verdrängten eine bestimmte Zeitlang um eine senkrecht zur aktiven Thyroxins direkt proportional dem zuge-Zylinderachse stehende Achse gedreht. Während dieses 55 setzten inaktiven Thyroxin ist, läßt sich eine Beziehung Vorganges kommt die Lösung mehrfach in Berührung zwischen dem freien T₄* und dem zugesetzten T₄ aufmit der inneren Oberfläche des Adsorptionsröhrchens, stellen, die in Form einer Standardkurve graphisch wobei der freie Anteil des Hormons adsorbiert und wiedergegeben werden kann.

somit aus der Lösung entfernt wird. Nach Beendigung Zur Bestimmung des T₄-Gehalts im Serum werden

der Adsorption wird die Vorrichtung aufgerichtet, 60 die Schilddrüsenhormone durch Denaturierung der damit die Flüssigkeit aus dem Adsorptionsröhrchen Trägerproteine mit Alkohol freigesetzt. Der alkohonach unten in das Meßröhrchen zurückfließt und den lische Extrakt von L-Trijodthyronin (T₃) and Thyan der Oberfläche adsorbierten Hormonanteil zurück- roxin (T₄) kann zwecks Konzentrierung eingedampft läßt. Die Trennung der beiden Anteile ist auf diese und erneut aufgelöst werden. Ein aliquoter Teil der Weise durchgeführt. Die noch in der Lösung ver- 65 Lösung wird zur TBG-T₄ *-Lösung in das Meßbliebene Aktivität wird nun, ohne das Adsorptions- röhrchen pipettiert, das Adsorptionsröhrchen gemäß röhrchen abzunehmen, z. B. in einem Bohrloch- der Erfindung aufgesetzt und ähnlich der T₃-Bestimdetektor oder einem automatischen Gamma-Proben- mung z. B. 1 Stunde lang gedreht. Dabei wird das

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freie T₄* im Adsorptionsröhrchen adsorbiert und so aus der Lösung entfernt. Aus dem Quotienten Restaktivität/Anfangsnktivität läßt sich mill Hilfe der Standardkurve die Τ,,-Mcnge des zu untersuchenden Serums ermitteln. Der abgelesene Wert wird als T₄ angegeben, da die T_a-Menge im Vergleich dazu sehr gering ist.

In entsprechender Weise kann die erfindungsgemäße Vorrichtung benutzt werden, um Hormone radio-immunologisch zu bestimmen.

Hcrstellungs-Beispiele für Adsorptionsröhrchen
1. Beispiel

Niederdruckpolyälhylen mit 30% Ambcrlite CG 400 I in der Chloridform wird über Nacht im Vakuum getrocknet und nach dem Vermischen auf einem Zweischnecken-Extruder granuliert. Das Granulat wird zur Herstellung eines endlosen Rohres mit einem aktivität der Flüssigkeit in einem Bohrlochdetektor oder in einem automatisch arbeitenden Gamma-Proben-Wechsler gemessen. Die Vorrichtung wird anschließend in einen Rotator eingespannt und eine Stunde lang mit 13 Umdrehungen pro Minute gedreht. Danach richtet man die Vorrichtung auf, läßt die im Adsorptionsröhrchen befindliche Flüssigkeit nach unten abfließen und mißt die in der flüssigen Phase verbliebene Aktivität. Man berechnet den Quotienten C = Reslaktivität: Anfangsaktivität für das Patienten- und das Standardserum und vergleicht sie miteinander. Man berechnet die prozentuale Thyroxin-Bindungs-Kapazität des Patientenserums nach der Gleichung

TBK[%] =

G (Patientenserum)
G (Standardserum)

100.

Im allgemeinen steigt der TBK-Wert im Vergleich zum normalen Serum beim Vorliegen einer HypoExtruder getrocknet. Aus dem nach diesem Verfahren 20 thyreose und fällt bei einer Hyperthyreose ab. hergestellten Rohr werden Tuben der Länge 6 cm ge-

5. Beispiel

schnitten und zur Adsorption verwendet.

2. Beispiel

Hochdruckpolyäthylen mit 35% Ambcrlite CG 400 I in der Chloridform wird 24 Stunden im Vakuum getrocknet, gut vermischt und auf einem Zwei-Schnecken-Extruder granuliert. Das getrocknete Granulat wird dann zur Herstellung eines endlosen Rohres verwendet, aus dem Tuben der Länge 5 cm geschnitten und zur Adsorption eingesetzt werden.

3. Beispiel

Granulat aus Hochdruckpolyäthylen mit 35% Amberlite CG 400 1, Cl-Form wurde zur Herstellung spritzgegossener Tuben der Länge 5 cm verwendet.

Anwendunpsbeispicle für Adsorptionsröhrchen

4. Beispiel
Bestimmung der TBG-Kapazität

a) Herstellung der L-Trijodthyronin-¹²⁶J-Lösung

Zu einer 1 %igen Tris(hydroxy-methyl)-aminome-Ihan-Lösung, deren pH-Wert mit konz. HCl auf 7.4 eingestellt ist, gibt man eine entsprechende Menge 1-Trijodthyronin-¹²⁵J(T₃*) der spezifischen Aktivität 100 mCi/mg, so daß die Aktivitätskonzentr.ation ca. 0,7 μθ'ml beträgt.

b) Standard-Serum

Serum mit normaler TBG-Bindungskapazität, gewonnen aus Blut von Personen mit normalfunktionierender Schilddrüse.

c) Bestimmung der TBG-Kapazität

Dem Patienten, dessen Schilddrüsenfunktion untersucht werden soll, werden ca. 5 ml Blut entnommen. Aus dem daraus nach Gerinnung und Zentrifugation der Blutkörperchen gewonnenen Serum pipettiiert man 0,2 ml in ein Meßröhrchen aus Polypropylen, das 3,3 ml der T₃*-Lösung enthält, setzt das nach den Beispielen 1 bis 3 hergestellte Adsorptionsröhrchen auf, verschließt die Vorrichtung und läßt ca. 10 Minuten stehen. Entsprechend verfährt man mit dem Standardserum. Während dieser Zeit wird die Gesamt-Bestimmung der Thyroxinkonzentration im Serum

Je 0,5 ml des zu untersuchenden Serums und des Kontrollserums mit einer bekannten Menge nicht markiertem T₄ werden in je einem zentrifugierbaren Röhrchen zu je 1,0 ml Alkohol gegeben und 30 see lang auf einem Whirlmixer durchmischt. Man läßt dann 10 min stehen und zentrifugiert die denaturierten Proteine bei 2500 Upm ab. Die Extraktionsausbeute beträgt 72 % des ursprünglich vorhandenen T₄. Zur Bestimmung des Thyroxingehaltes werden jedoch 0,3 ml des alkoholischen Extraktes in Meßröhrchen pipettiert, die 3,3 ml einer nach bekannten säulenchromatographischen Verfahren hergestellte TBG-Lösung und 0,02 μΟ/ιτιΙ mit ¹²⁵J markiertes Thyroxin enthalten. Zur Erstellung der Standardkurve werden je 0,3 ml einer Standardlösung von 5 bzw. 20 μg Thyroxin/100 ml ebenso behandelt. Man setzt nun die Adsorptionsröhrchen auf die Meßröhrchen, verschließt: die Vorrichtungen und mißt nach gründlicher Durchmischung die Gesamtaktivitäten der Lösungen. Zur Adsorption der freien T₁-¹²⁵J-Aktivität werden die Vorrichtungen anschließend 60 min lang bei Zimmertemperatur auf einem Rotator mit 13 Umdrehungen pro Minute über Kopf gedreht. Danach werden die Vorrichtungen aufgerichtet, so daß die Lösung vollständig aus den Adsorptionsso röhrchen in die Meßröhrchen läuft. Dort wird die in der Lösung verbliebene Restradioaktivität gemessen. Man berechnet nun den Quotienten

Restradioaktivität
Gesamtradioaktivität

100

für jede Probe. Die erhaltenen Werte für die Standardproben werden gegen die in den Standardiösungen enthaltenen Mengen Thyroxin in ein Diagramm eingetragen und die beiden Punkte mit einer Geraden verbunden. Man erhält so die Standardkurve. Die unbekannten Gehalte der zu untersuchenden Seren können nun mit Hilfe des Quotienten G der Standardkurve ermittelt werden. Der Thyroxingehalt des Serums ergibt sich aus dem abgelesenen Wert und der Extraktionsausbeute.

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

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Claims

aber radioaktiv markierten Hormons mit einem Patentansprüche: spezifischen Antikörper unter Bildung eines Kom plexes zur Reaktion gebracht. Zur Markierung wird

1. Vorrichtung zur Bestimmung von Hormonen ein geeignetes Nuklid, wie z. B. ¹²⁵J, ^I3»J, ¹⁴C₁ ³H ver-... Flüssigkeiten unter Verwendung radioaktiv 5 wendet. Zwischen dem Antikörper und dem Hormon markierter Verbindungen, bestehend aus zwei mit- stellt sich ein Reaktions-Gleichgewicht ein, wobei einander lösbar verbundenen Röhrchen, von denen geringe Mengen des Hormons in nicht gebundener das eine, das als Meßröhrchen zur Aufnahme der Form vorliegen. Dieser freie Anteil ist bei konstanter zu untersuchenden Flüssigkeit dient, unten ge- Antikörperkonzentration direkt proportional der Geschlossen ist und eine Lösung des radioaktiv mar- ίο samtmenge des zugesetzten Hormons Mit einem kierten Hormons und einen Antikörper bzw. ein geeigneten Adsorptionsmittel wird er entfernt und behormonbindcndes Protein enthält, während das stimmt. Man zeichnet danach eine Standardkurve, die andere, das als Adsorptionsröhrchen dient, am die Bestimmung einer unbekannten Menge des Horäußeren Ende verschließbar ist und Adsorptions- mons erlaubt.

mittei enthält, dadurch gekennzeich-is Bei der gleichfalls bekannten kompetitiven Proteinnet, daß die ganze innere Oberfläche des Ad- bindungsanalyse wird die Tatsache genutzt, daß sorptionsröhrchens hinsichtlich des zu bestimmen- Hormone, insbesondere solche mit sehr kleinem den Hormons adsorptive Eigenschaften aufweist. Molekulargewicht, im Blut von spezifischen Pro-

2. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch ge- teinen gebunden und transportiert werden. Diese kennzeichnet, daß das Adsorptionsröhrchen aus 20 Funktion übernimmt beispielsweise für die beiden einem Thermoplasten besteht, der 10 bis 60 Ge- Schilddrüsenhormone Thyroxin und Tnjodthyronin Wichtsprozent eines Ionenaustauschers enthält. ein Λ-Globulin, das »Thyroxine-Binding-Globulin«

3. Vorrichtung nach Ansprüchen 1 oder 2, da- (TBG). Solche Proteine lassen sich ähnlich wie die durch gekennzeichnet, daß das Adsorptionsröhr- Antikörper in den radio-immunochemischen Methoden chen aus Hochdruckpolyäthylen besteht, welches as als primäre Komplexbildner für das betreffende Hor-20 bis 40 Gewichtsprozent eines Ionenaustauschers mon verwenden. Der freie Hormonanteil wird wiederenthält, um von der Lösung getrennt und bestimmt.

4. Vorrichtung nach einem der Ansprüche Ibis 3, Eine Variante dieses Verfahrens stellt die Bestimdadurch gekennzeichnet, daß der verwendete Ionen- mung der Kapazität der Trägerproteine im Serum dar. austauscher eine mittlere Korngröße von 0,04 bis 30 Das Serum, in dem die Kapazität des Proteins für das 1,00 mm Durchmesser, eine Austauscherkapazität bestimmte Hormon ermittelt werden soll, wird mit von O,3bis3Val/l und einen Vernetzungsanteil einer geringen Menge des ladioaktiv markierten zwischen 1 und 12% besitzt. Hormons versetzt. Zwischen dem Trägerprotein und

5. Vorrichtung nach einem der Ansprüche Ibis 4, dem markierten Hormon findet eine Reaktion statt, dadurch gekennzeichnet, daß der verwendete 35 bei der das markierte Hormon zum Teil das gebundene Ionenaustauscher eine mittlere Konigröße von inaktive ersetzt und zum Teil selbst direkt gebunden 0,08 bis 0,2 mm Durchmesser, eine Austauscher- wird. Der nicht gebundene Anteil wird aus der Lösung kapazität von 0,5 bis 1,5 Val/1 und einen Ver- adsorptiv entfernt und bestimmt. Dieser freie Anteil netzungsanteil von 4 bis 10% besitzt. ist umgekehrt proportional der freien Kapazität des

6. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, 40 Seixmproteins.

dadurch gekennzeichnet, daß Anionenaustauscher Alle diese Methoden haben als gemeinsamen

mit ionisierbaren quaternären Aminogruppen ver- Schritt die Entfernung des freien Anteils des Hormons wendet werden. aus der Lösung und dessen Bestimmung. Bisher wur

den zu diesem Zweck Ionenaustauscher, wie Amber-

45 lite*' in Form von Körnern oder eingebettet in Polyurethanschwamm oder als Folie verwendet.

Bsi allen diesen Methoden sind nach der Inkubation

Die in bestimmten Drüsen des Körpers syntheti- der Lösung mit dem Adsorbens zusätzliche zeitsierten und in die Blutbahn abgegebenen Hormone raubende und Fehlerquellen beinhaltende Schritte kommen im Blut in sehr geringen Konzentrationen 5° notwendig. So muß bei der Verwendung von Ionenvor. Ihre genaue quantitative Bestimmung ist erst austauscherkörnern nach der Inkubation abzentrifudurch die Verwendung radioaktiv markierter Indi- giert werden, um eine einwandfreie Pipettierung des katoren möglich geworden. Überstandes zu ermöglichen. In manchen Fällen

Nach der chemischen Natur des zu untersuchenden werden zusätzlich die Körner noch vor der Messung Hormons unterscheidet man zwischen zwei Analysen- 55 mehrmals gewaschen. Der Einsatz von Folien und verfahren. Besitzt das Hormon immunogene Eigen- Schwämmen ist zwar ein Fortschritt den Körnern schäften, d. h. lassen sich mit ihm geeignete Antikörper gegenüber, ist jedoch umständlich und zeitraubend: erzeugen, verwendet man zur Bestimmung den söge- Die Folie muß nämlich vor ihrem Einsatz feucht genannten Radioimmunoassay. Besitzt das Hormon hallen werden; bei ihrer Entfernung aus der Lösung keine immunogenen Eigenschaften, so verwendet 60 können Fehler (Tropfen an dei Folie) entstehen. Bei man die sogenannte kompetitive Protein-Bindungs- der Verwendung des Austauscherschwammes muß analyse. Beiden Verfahren ist gemeinsam, daß ein dafür Sorge getragen werden, daß die Luft vor dem bestimmter Teil des Hormons aus der Reaktions- Adsorptionsvorgang aus dem Schwamm entfernt ist lösung mit Hilfe eines Austauschers oder einer anderen unci nach der Inkubation der Schwamm genügend hierfür geeigneten Substanz entfernt werden muß. 65 gewaschen wird.

Bei bekannten radio-immunochemischen Bestim- Nach US-PS 36 15 222 wird zur Bestimmung von

mungsmethoden wird z. B. eine Mischung aus be- Hormonen in Körpe-flüssigkeilen ein zweiteiliger kannten Mengen eines Hormons und des gleichen, Behälter benutzt, von di:nen der eine Teil eine bestimmte