DE2166463A1

DE2166463A1 - DERIVATIVES OF 7-BETA- (D-5-AMINO-5CARBOXYVALERAMIDO) -7-METHOXY-3-CEPHEM-4CARBONIC ACID

Info

Publication number: DE2166463A1
Application number: DE19712166463
Authority: DE
Inventors: Justo M Mata; Edward O Stapley
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1970-03-13
Filing date: 1971-03-02
Publication date: 1974-05-02
Also published as: AR212149A1; BE764160A; FI51484C; CA960169A; CH587911A5; DE2109854C3; AR200370A1; DE2166462A1; JPS581919B1; DK131639B; CH579576A5; SE385713B; DD99166A5; DE2109854A1; IL36281A0; CH589655A5; NO134219C; DK131639C; IT1045524B; FI51484B

Description

Derivate der 7R-(D-5-mno-5-carboxyvaleramido)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Die Erfindung betrifft 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-7-methoxy-3-cephem--carbonsäuren, die in der 3-Stellung des "Cephem"-Kerns durch eine substituierte Methylgruppe substituiert sind, und deren Salze, Ester und Amid-Derivate.Derivatives of 7R- (D-5-mno-5-carboxyvaleramido) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid The invention relates to 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -7-methoxy-3-cephem - carboxylic acids, substituted by a substituted methyl group in the 3-position of the "Cephem" nucleus are, and their salts, esters and amide derivatives.

Bestimmte dieser Produkte werden durch Fermentation erhalten und andere werden auf synthetlschem Weg erhalten. Die Produkte sind wirksam gegen gram-negative und gram-positive Bakterien.Certain of these products are obtained through fermentation and others are obtained by synthetic means. The products are effective against gram-negative and gram positive bacteria.

Die Erfindung betrifft eine neue Klasse antibiotischer Substanzen und ein Verfahren zu deren Herstellung. Insbesondere sind diese neuen Antibiotika Produkte vom Cephaiosporintyp, die einen Methoxy-Substituenten in der 7-Stellung des ''Cephemlt-Xerns enthalten. Sie sind strukturell mit der Cephalosporin-Reihe von Verbindungen verwandt, jedoch anders als Cephalosporin C, das lediglich eine D-5-Amino-5-carboxyvaleramido-Einheit in der 7-Stellung enthält, enthalten die vorliegenden Produkte auch einen 7-Methoxy-Substituenten; und während Cephalosporin C durch Acetoxymethyl in der 3-Stellung des Rings substituiert ist, können die Produkte der Erfindung ausser Acetoxymethyl eine grosse Vielzahl anderer Substituenten aufweisen. Beispiele dieser Substituenten sind Methyl-, Halogenmethyl-, Hydroxymethyl-Substituenten, ein Acyloxymethyl-Anteil der aliphatischen, acyclischen und aromatischen Arten, Carbamoyloxymethyl-, N-substittiierte und N,N-disubstituierte Carbamoyloxymethyl-, Alkylthiomethyl-Substituenten, heterocyclisch-substituierte Thiomethyl-, Trialkylammoniummethyl-, Pyridiniummethyl-Substituenten, kernsubstituierte Pyridiniummethyl-, Thiouroniummethyl-, Amidinothiomethyl-Substituenten, in denen die beiden Stickstoffatome mit 1 bis 7 Alkylresten substitui.ert sein können, Aminothiocarbonylthiomethyl-Substituenten, N-substituierte Aminothiocarbonylthiomethyl-, Aroylthiomethyl-, Oxythiocarbonylthio-methyl-, Alkarylsulfonylmethyl-, Azidomethyl-, Aminomethyl-, Amidomethyl-, Polyhydroxybenzyl-, N-niedrig-Alkyl-indol-3-ylmethyl- und Thiocyanatomethyl-Substituenten. Diese Produkte können wie folgt wiedergegeben werden: worin R ein Wasserstoffatom, einen Halogenrest, beispielsweise Chlor, Brom, Fluor oder Jod und dgl., einen Hydroxyrest, Acyloxyrest, z. B. einen niederen Alkanoyloxyrest, wie beispielsweise Acetoxy-, n-Propionyloxyrest und dgl., einen mononuklearen und binuklearen aromatischen Carbonyloxyrest, beispielsweise Benzoyloxy-, Naphthoyloxyrest und dgl., heterocyclischen Carbonyloxyrest, worin der Heterocyclus ein 6-gliedriger stickstoffhaltiger Heterocyclus ist, wie beispielsweise 4-Pyridylrest und dgl., Aralkanoyl oxyrest, wie beispielsweise Phenacetyloxy-, 3-Phenylpropionyloay-, 2-Naphthylacetoxyrest oder Hydrocinamoyloxyrest und dgl., Cycloalkancarbonyloxyrest mit 5 bis 6 Ringkohlenstoffætomen, beispielsweise Cyclopentancarbonyloxyrest oder Cyclohexancarbonyloxyrest und dgl., α-Methoxyp-sulfooxycinnamoyloxy- oder α-Methoxy-p-hydroxycinnamoyloxyrest und dgl., einen Carbamoyloxyrest der Formel: -OOCNR1R2, worin R1 und R2 Wasserstoffatome, niedere Alkylreste, beispielsweise Methyl-, ethyl, n-Propyl-, tert.-Butylreste und dgl., Halogen-niedrig-alkylreste, wie beispielsweise Chlormethyl-, 2-Chloräthyl- oder Chlor-tert.-butylreste und dgl., nicdere Alkoxycarbonylreste, wie beispielsweise Äthoxycarbonylreste und dgl., Arylreste, beispielsweise mononukleare und binukleare Arylreste, wie beispielsweise Phenyl-, Naphthylreste und dgl., Alkarylsulfonylreste, beispielsweise mononukleare Alkarylsulfonylreste, wie beispielsweise-p-Tolylsulfonylreste und dgl., und Benzhydrylreste bedeuten oder R1 und R2 zusammen mit den Stickstoffatom, an däs sie gebunden sind, unter Bildung eines mononuklearen Heterocyclus, wie beispielsweise Pyrrolidinyl-, Piperidino- oder Morpholinoring, verbunden sein können; einen Thiorest der Formel: -SR3, worin R3 einen niederen Alkylrest, beispielsweise einen Ethyl, Äthyl-, n-?ropylrest und dgl., einen stickstoffhaltigen Heterocyclus, wie beispielsweise Pyridylrest, z. B. 2-, 3- oder 4-Pyridylrest, einen niederen alkylsubstituierten Thiazolylrest, wie beispielsweise 4-Methylthiazol-2-yl- oder 4-Äthylthiazol-2-ylrest und dgl., 1,3,4-Thiadiazol-2-ylrest, einen niedrig-alkylsubstituierten 1,3,4-Thiadiazol-2-ylrest, wie beispielsweise 5-Methyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylrest und dgl., 2-Benzothiazolylrest, einen 4-niedrig-Alkylpyrimidinylrest, wie beispielsweise 4-Methylpyrimidin 2-ylrest bedeutet; einen Ammoniumrest, beispielsweise einen Tri-niedrig-alkylammoniumrest, wie beispielsweise Trimethylammoniumrest oder Triäthylammoniumrest und dgl., oder einen Pyridiniumrest der Formel: worin X1 ein Wasserstoffatom, einen Halogen-, Trifluormethyl-, Cyano-, Carboxy-, Carbamoyl-, N-niedrig-Alkyl-und N,N-Di-niedrig-alkylsubstituierten Carbamoylrest, wie beispielsweise N-Methylcarbamoyl-, thylcarbamoyl-, N,N-Dimethylcarbamoyl-, N,N-Diäthylcarbamoyl- oder N,N-Diisopropylcarbamoylrest, Carboxymethylrest, niedrig-Alkanoyl rest, wie beispielsweise Acetyl oder Propionylrest und dgl., niederen Alkylrest, beispielsweise Methyl-, ethyl oder n-Propylrest und dgl., Hydroxymethylrest oder Sulforest, d. h. SO2(OH) bedeutet; einen Thiouroniumrest der Formel: einen Amidinothiorest de / 2 ! SCM N112 fr Formel: -S-C R5R6 worin R4, R5 und R6, die gleich oder verschieden sein können, Wasserstoffatome oder niedere Alkylreste, wie beispielsweise Methyl-, Äthyl-, n-Propylreste und dgl, bedeuten; einen Aminothiocarbon71thiorest der Formel: worin R7 und R8, die gleich oder verschieden sein können, Wasserstoffatome, niedere Alkylreste, z. B. Ethyl, ethyl, n-Propylreste und dgl., Hydroxy-niedrig-alkylreste, beispielsweise 2-Hydroxyäthylrest und dgl., Di-niedrig-alkylamino-niedrig-alkylreste, wie beispielsweise 2-(Dimethylamino)-äthyl-, , 2-('iäthylamino)-äthyl-, 2-(Di-n-propylamino)-äthyl- oder 3-(Diäthylamino)-propylrest und dgl., morpholinosubstituierte niedrige Alkylreste, z. B. 2-Morpholinoäthylrest und dgl., N-Aryl-N-niedrig-alkylaminoalkylrest, beispielsweise 2-(N-Phenyl-N-methylamino)-äthyl rest bedeuten oder die Reste R und R8 zusammengenommen mit dem Stickstoffatom, an das sie gefunden sind, unter Bildung eines Morpholino-, Piperidino-, Pyrrolidinyl- oder Piperazinorestes der Formel: worin R9 einen Alkylrest, beispielsweise einen Ethyl, Äthyl-, n-Propyl-, Isopropyl-, n-Butyl-, Amyl-, n-Octyl-, Decylrest und dgl., oder einen Phenylrest bedeutet, verbunden sein können; einen Aroylthiorest, beispielsweise einen mononuklearen Aroylthiorest, z. B. einen Benzoylthiorest; einen Oxythiocarbonylthiorest der Formel worin 210 einen niederen Alkylrest, beispielsweise einen Äthyl-, n-Propyl-, Isopropyl-, n-Butyl-, n-Hexylrest und dgl., oder einen niederen Cycloalkylrest, d. h. einen Cycloalkylrest mit 5 bis 6 Ringkohlenstoffatomen, wie beispielsweise Cyclopentyl- und Cyclohexylrest; Alkarvlsulfo nylrest, beispielsweise einen mononuklearen Alkarylsulfonylrest, z. B. p-Tolylsulfonylrest und dgl. : einen Azidorest; einen Aminorest, einen Amidorest der Formel: -NHR11 worin R11 einen Acylrest, beispielsweise einen niederen Alkanoylrest, wie beispielsweise Acetyl- oder Propionylrest oder Aralkanoylrest, s. B. einen mononuklearen Aralkanoylrest, wie beispielsweise 2-Phenylacetylret und dgl.; einen Polyhydroxyphenylrest, z. B. Dihydroxyphenylrest, wie beispielsweise 2 ,4-iihydroyyhenylrest oder einen N-niedrig-Alkylindol-3-ylrest, z. B. N-Methylindol-3-ylrest und dgl., oder einen Thiocyanatorest bedeutet. Ferner sind die pharmakologisch verträglichen Salze Ester und Amide der vorliegenden Produkte umfasst. Dazug gehören organische und anorganische Salze, z. B. Säureadditionssalze, Metallsalze, quaternäre Salze und Aminsalze, die sich von tertiären organischen stickstoffhaltigen Basen ableiten. Zu geeigneten Ester- und Amid-Derivaten gehören die Mono- und Di-ester, z. B. solche, die sich von Alkanolen, Cycloalkanolen, aromatischen Alkoholen und Aralkanolen ableiten und Mono- und ii-amide, die sich beispielsweise von Ammoniak, niederen Alkylaminen, Di-niedrig-alkylaminen, Aralkylaminen und heterocyclischen Aminen ableiten. Beispiele dieser Derivate und Verfahren zu ihrer Herstellung sind in dem mit synthetischen Methoden bezeichneten Unterabschnitt aufgeführt.The invention relates to a new class of antibiotic substances and a method for their preparation. In particular, these new antibiotics are products of the cephaiosporin type that contain a methoxy substituent in the 7-position of the '' Cephemlt-Xern. They are structurally related to the cephalosporin series of compounds, but unlike cephalosporin C, which contains only one D-5-amino-5-carboxyvaleramido unit in the 7-position, the present products also contain a 7-methoxy substituent ; and while acetoxymethyl is substituted for cephalosporin C at the 3-position of the ring, the products of the invention can have a wide variety of other substituents in addition to acetoxymethyl. Examples of these substituents are methyl, halomethyl, hydroxymethyl substituents, an acyloxymethyl moiety of the aliphatic, acyclic and aromatic types, carbamoyloxymethyl, N-substituted and N, N-disubstituted carbamoyloxymethyl, alkylthiomethyl-substituted heterocyclic-thiomethyl-substituted , Trialkylammoniummethyl, pyridiniummethyl substituents, nucleus-substituted pyridiniummethyl, thiouroniummethyl, amidinothiomethyl substituents, in which the two nitrogen atoms can be substituted with 1 to 7 alkyl radicals, aminothiocarbonylthiomethylcarbon-substituents, oxothiocarbonylthiomethylcarbon-, N-substituted aminothiocarbonylthiomethyl carbonethyl, N-substituted aminothiocylthiomethyl, N-substituted aminothiocarbonylthiomethyl carbonethyl methyl, alkarylsulfonylmethyl, azidomethyl, aminomethyl, amidomethyl, polyhydroxybenzyl, N-lower-alkyl-indol-3-ylmethyl and thiocyanatomethyl substituents. These products can be represented as follows: wherein R represents a hydrogen atom, a halogen radical, for example chlorine, bromine, fluorine or iodine and the like., a hydroxy radical, acyloxy radical, e.g. B. a lower alkanoyloxy group such as acetoxy, n-propionyloxy group and the like, a mononuclear and binuclear aromatic carbonyloxy group such as benzoyloxy, naphthoyloxy group and the like 4-pyridyl radical and the like, aralkanoyl oxy radical, such as, for example, phenacetyloxy, 3-phenylpropionyloxy, 2-naphthylacetoxy or hydrocinamoyloxy and the like, cycloalkanecarbonyloxy with 5 to 6 ring carbon, sulfoxy-dyno-oxy-dyloxy and methyloxy-dyno-oxy-sulfoxy and methyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-oxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-oxy-oxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy-oxyloxy-dyloxy-dyloxy-dyloxy- or or α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxy radical and the like, a carbamoyloxy radical of the formula: -OOCNR1R2, in which R1 and R2 are hydrogen atoms, lower alkyl radicals, for example methyl, ethyl, n-propyl, tert-butyl radicals and the like, halogen lower-alkyl radicals, such as, for example, chloromethyl, 2-chloroethyl or chloro-tert.-butylre ste and the like, other alkoxycarbonyl radicals, such as ethoxycarbonyl radicals and the like, aryl radicals, for example mononuclear and binuclear aryl radicals, such as phenyl, naphthyl radicals and the like, alkarylsulphonyl radicals, for example mononuclear, alkarylsulphonyl and d-sulfonyl radicals, such as-p-alkarylsulphonyl radicals Denote benzhydryl radicals or R1 and R2 can be linked together with the nitrogen atom to which they are attached to form a mononuclear heterocycle, such as, for example, pyrrolidinyl, piperidino or morpholino ring; a thio radical of the formula: -SR3, in which R3 is a lower alkyl radical, for example an ethyl, ethyl, n-propyl radical and the like, a nitrogen-containing heterocycle, such as, for example, pyridyl radical, e.g. B. 2-, 3- or 4-pyridyl radical, a lower alkyl-substituted thiazolyl radical, such as 4-methylthiazol-2-yl or 4-ethylthiazol-2-yl radical and the like, 1,3,4-thiadiazol-2-yl radical , a lower-alkyl-substituted 1,3,4-thiadiazol-2-yl radical, such as, for example, 5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl radical and the like., 2-benzothiazolyl radical, a 4-lower-alkylpyrimidinyl radical, such as is for example 4-methylpyrimidin 2-yl radical; an ammonium radical, for example a tri-lower alkylammonium radical, such as trimethylammonium radical or triethylammonium radical and the like, or a pyridinium radical of the formula: wherein X1 is a hydrogen atom, a halogen, trifluoromethyl, cyano, carboxy, carbamoyl, N-lower alkyl and N, N-di-lower alkyl-substituted carbamoyl radical, such as, for example, N-methylcarbamoyl, thylcarbamoyl, N , N-dimethylcarbamoyl, N, N-diethylcarbamoyl or N, N-diisopropylcarbamoyl radical, carboxymethyl radical, lower alkanoyl radical, such as acetyl or propionyl radical and the like, lower alkyl radical, for example methyl, ethyl or n-propyl radical and the like. , Hydroxymethyl radical or Sulforest, ie SO2 (OH) means; a thiouronium radical of the formula: an amidinothio radical de / 2! SCM N112 for formula: -SC R5R6 in which R4, R5 and R6, which can be identical or different, denote hydrogen atoms or lower alkyl radicals, such as, for example, methyl, ethyl, n-propyl radicals and the like; an aminothiocarbon71thio radical of the formula: wherein R7 and R8, which may be the same or different, hydrogen atoms, lower alkyl radicals, e.g. B. ethyl, ethyl, n-propyl radicals and the like., Hydroxy-lower-alkyl radicals, for example 2-hydroxyethyl radical and the like., Di-lower-alkylamino-lower-alkyl radicals, such as 2- (dimethylamino) -ethyl-,, 2 - ('iäthylamino) -äthyl-, 2- (di-n-propylamino) -ethyl- or 3- (diethylamino) -propyl radical and the like., Morpholino-substituted lower alkyl radicals, e.g. B. 2-Morpholinoäthylrest and the like., N-Aryl-N-lower-alkylaminoalkylrest, for example 2- (N-phenyl-N-methylamino) -ethyl mean or the radicals R and R8 taken together with the nitrogen atom to which they are found are, with formation of a morpholino, piperidino, pyrrolidinyl or piperazino radical of the formula: in which R9 is an alkyl radical, for example an ethyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, amyl, n-octyl, decyl radical and the like, or a phenyl radical, can be linked; an aroylthio, for example a mononuclear aroylthio, e.g. B. a benzoylthio radical; an oxythiocarbonylthio radical of the formula wherein 210 is a lower alkyl radical, for example an ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, n-hexyl radical and the like Cyclohexyl radical; Alkarvlsulfo nylrest, for example a mononuclear Alkarylsulfonylrest, z. B. p-tolylsulfonyl group and the like: an azido group; an amino radical, an amido radical of the formula: -NHR11 in which R11 is an acyl radical, for example a lower alkanoyl radical, such as, for example, acetyl or propionyl radical, or aralkanoyl radical, see e.g. a mononuclear aralkanoyl radical, such as, for example, 2-phenylacetylret and the like; a polyhydroxyphenyl radical, e.g. B. Dihydroxyphenylrest, such as 2, 4-iihydroyyhenylrest or an N-lower-Alkylindol-3-ylrest, z. B. N-methylindol-3-yl radical and the like. Or a thiocyanate radical. The pharmacologically acceptable salts esters and amides of the present products are also included. These include organic and inorganic salts, e.g. B. acid addition salts, metal salts, quaternary salts and amine salts derived from tertiary organic nitrogenous bases. Suitable ester and amide derivatives include the mono- and di-esters, e.g. B. those which are derived from alkanols, cycloalkanols, aromatic alcohols and aralkanols and mono- and ii-amides which are derived, for example, from ammonia, lower alkylamines, di-lower alkylamines, aralkylamines and heterocyclic amines. Examples of these derivatives and methods of making them are given in the subsection labeled Synthetic Methods.

Antibiotikum 810A; Im wesentlichen umfassen die Produkte der vorstehenden Formel I zwei Gruppen von Fermentationsprodukten. Eine dieser Gruppen besteht aus einem Gemisch von Verbindungen, woraus zwei deutliche Produkte isoliert und identifiziert worden sind. Diese beiden Produkte sind durch das Vorhandensein einer α-Methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxy - oder einer α-Methoxy-p-hydroxycinnamoyloxy-Einheit in der 3-Stellung des Cephem-Kerns gekennzeichnet und entsprechen der folgenden Strukturformel: worin R12 einen Hydroxy- oder Sulfooxyrest, d. h. -OSO3H bedeutet. Diese Produkte werden durch Kultivierung eines neuen Stainins von Actinomycete, bezeichnet als MA-2837 in der Kulturenssmmlung von Merck & Co., Inc., Rahway, New Jersey, unter geregelten Bedingungen gleichzeitig erzeugt.Antibiotic 810A; The products of the above formula I essentially comprise two groups of fermentation products. One of these groups consists of a mixture of compounds from which two distinct products have been isolated and identified. These two products are characterized by the presence of an α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxy or an α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxy unit in the 3-position of the cephem core and correspond to the following structural formula: wherein R12 is a hydroxy or sulfooxy radical, ie -OSO3H. These products are concurrently produced by culturing a new Actinomycete stainin designated MA-2837 in the culture medium of Merck & Co., Inc., Rahway, New Jersey, under controlled conditions.

Eine Probe dieser Kultur wurde auch auch zur dauernden Niederlegung in die Kulturensammlung der Northern Utilization Research and levelopment Branch of the U. S.A sample of this culture also became a permanent deposit into the culture collection of the Northern Utilization Research and levelopment Branch of the U. S.

Department of Agriculture in Peoria, Illinois, gebracht, und erhielt die Kultur-Nummer NRRL 3851. 25 andere Rulturen wurden gleichfalls als Erzeuger dieses Antibiotikumgamischs (Ia) identifiziert, und diese zusammen mit der Kultur MA-2837 werden im folgenden in dem mit die Microorganismen bezeichneten Abschnitt beschrieben. Im folgenden wird das Antibiotikumgemisch (Ia), das diese beiden Proedukte aufweist, als Antibiotikum 810A oder einfach mit 810A bezeichnet.Department of Agriculture in Peoria, Illinois, and received the culture number NRRL 3851. 25 other cultures were also used as producers this antibiotic mixture (Ia) identified, and this together with the culture MA-2837 are referred to below in the section referred to as the microorganisms described. The following is the antibiotic mixture (Ia), which these two Proedukte has, referred to as antibiotic 810A or simply 810A.

Antibiotikun 842A: Die zweite Gruppe der Fermentationsprodukte umfasst 78-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3 (carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cophem-4-carbonsäure (folgende Formel (Ib)) und deren Salze. Diese Verbindung weist folgende Strukturformel auf: Dieses Produkt (Ib) wird auch durch einen neuen Stamm von Actinomycete erzeugt, und eine Probe dieses Mikroorganismus, bezeichnet mit MA-2908, wurde in der Kulturensammlung von Merck & Co., Inc., Rahway, New Jersey, aufgenommen. Eine Probe dieser Kultur wurde auch zur dauernden Hinterlegung bei der Kalturensammlung der Northern Utilization Research and Development Branch of the U.S. Department of Agricu.lture in Peoria, Illinois, gebracht. Diese Kultur erhielt die Kultur-Nummer NRRL 3802. Zusatzlich zu seiner antibiotischen Wirksamkeit ist dieses Produkt (Ib) auch ein Zwischenprodukt bei der Herstellung der entsprechenden 3-Hydroxy-, 3-Acyloxy- und Carbamoyloxy-Derivate. Das Verfahren zur Herstellung dieser Derivate ist in dem mit synthetische Methoden bezeichneten Unterabschnitt beschrieben. In der folgenden Beschreibung wird das Produkt Ib, d. h. 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure als Antibiotikum 842A oder einfach mit 842A bezeichnet.Antibiotics 842A: The second group of fermentation products includes 78- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3 (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cophem-4-carboxylic acid (following formula (Ib)) and its salts. This compound has the following structural formula: This product (Ib) is also produced by a new strain of Actinomycete, and a sample of this microorganism, designated MA-2908, was added to the culture library of Merck & Co., Inc., Rahway, New Jersey. A sample of this culture has also been placed on permanent deposit with the Kaltur Collection of the Northern Utilization Research and Development Branch of the US Department of Agriculture in Peoria, Illinois. This culture was given the culture number NRRL 3802. In addition to its antibiotic activity, this product (Ib) is also an intermediate product in the production of the corresponding 3-hydroxy, 3-acyloxy and carbamoyloxy derivatives. The process for making these derivatives is described in the subsection labeled Synthetic Methods. In the following description, the product Ib, ie 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid is referred to as antibiotic 842A or simply 842A.

Wirksamkeit Eine Hauptschwierigkeit bei der antimikrobiellen Therapie ist die Empfindlichkeit; der meisten Antibiotika gegenüber enzymatischem Abbau. Beispielsweise ist Penicillin G wirksam gegen eine grosse Vielzahl gram positiver und gramm negativer Mikroorganismen, jedoch wird es in Gegenwart von Penicillinase zu einer Form abgebaut, die gegenüber den meisten Pathogenen unwirksam ist.Effectiveness A major difficulty in antimicrobial therapy is the sensitivity; of most antibiotics against enzymatic degradation. For example, penicillin G is effective against a large number gram positive and gram negative microorganisms, however, it will be in the presence broken down by penicillinase to a form ineffective against most pathogens is.

Ein Versuch zur Bewältigung dieses Problems bestand in der Entwicklung neuer Antibiotika, welche die "Cephem"-Kern eigenschaft von Cephalosporin C aufweisen. Cephalosporin C besitzt eine ihm eigene Beständigkeit gegenüber Penicillinase und ist wirksam sowohl gegen gramsuegative als auch grammpositive Bakterien; jedoch ist es nur mässig wirksam, und es gibt andere Enzyme als Penicillinase, welche seine Wirksamkeit zerstören. Diese Enzyme werden mit Cephalosporinasen bezeichnet. Die erfindungsgemässen Produkte (I) liefern nicht nur Beständigkeit gegenüber Penicillinase, sonderngleichfalls gegenüber den Cephalosporinasen. Sie liefern Wirksamkeit sowohl gegen gram/negative als auch gram/positive Bakterien, jedoch ist das Ausmass der Aktivität und der Bereich von Organismen, gegen die sie wirksam sind, nicht identisch.One attempt to address this problem has been development new antibiotics that have the "cephem" core property of cephalosporin C. Cephalosporin C has its own resistance to penicillinase and is effective against both gram-negative and gram-positive bacteria; However it is only moderately effective, and there are enzymes other than penicillinase that can be used Destroy effectiveness. These enzymes are called cephalosporinases. the products (I) according to the invention not only provide resistance to penicillinase, but also against the cephalosporinases. They deliver effectiveness both against gram / negative as well as gram / positive bacteria, however the extent of the Activity and the range of organisms against which they are effective are not identical.

Antibiotikum 842A ist durch eine gesteigerte Wirksamkeit gegenüber gram/negativen Mikroorganismen gekennzeichnet Anders als Cephalosporin C, das eine relativ geringe antibakterielle Wirksamkeit besitzt, übt dieses Produkt einen erheblichen gram,negativen Effekt in vivo mit einer WirL-samkeit aus, die im allgemeinen grösser als Cephalothin ist. Zu dieser Wirksamkeit gehören die Wirksamkeit in vivo gegenüber Proteus morganii und eine Wirksamkeit gegenüber den folgenden gram/negativen Bakterien: Escherichia coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Proteus morganii, Salmonella schottnuelleri, Klebsiella pneumoniae AD, xlebsiella pneumoniae B und Paracolobactrum arizoniae.Antibiotic 842A is opposed to by increased effectiveness gram / negative microorganisms labeled Other than Cephalosporin C, the one Has relatively little antibacterial activity, this product exerts a significant effect gram, negative effect in vivo with a effectiveness that is generally greater than is cephalothin. This effectiveness includes the effectiveness against in vivo Proteus morganii and an activity against the following gram / negative bacteria: Escherichia coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Proteus morganii, Salmonella schottnuelleri, Klebsiella pneumoniae AD, xlebsiella pneumoniae B and Paracolobactrum arizoniae.

Antibiotikum 842A stellt eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung dar. Wasser einer allgemein gesteigerten gramm negativen Wirksamkeit und einer erhöhten Wirksamkeit im Vergleich zu Cephalothin und einer grösseren Beständigkeit gegenüber Gephalosporinasen zeichnet sich 842A durch ein geringeres Ausmass an Toxizität aus und erzeugt rasche Werte im Blut. Innerhalb von 6 Stunden nach Verabreichung sind etwa 100 % im Urin beseitigt. Ferner ist es beständiger gegenüber enzymatischem Abbau als Cephalosporin C und Resistenz gegenüber diesem Antibiotikum entwickelt sich langsam, und es wirkt bakterizid. Bei oraler Verabreichung schützt es gegen Infektionen auf Grund von Paracolobactrum arizoniae 3270, Proteus vulgaris 1810 und Salmonella schottmuelleri 3010; und bei subkutaner Verabreichung ist es 2- bis 10mal wirksamer als Cephalothin gegenüber den gleichen Infektionen.Antibiotic 842A represents a preferred embodiment of the invention water of generally increased gram negative potency and increased Effectiveness compared to cephalothin and greater resistance to it Gephalosporinases 842A is characterized by a lower level of toxicity and produces rapid values in the blood. Within 6 hours of administration about 100% eliminated in the urine. It is also more resistant to enzymatic Degradation as cephalosporin C and resistance to this antibiotic developed slowly and it is bactericidal. When administered orally, it protects against Infections due to Paracolobactrum arizoniae 3270, Proteus vulgaris 1810 and Salmonella schottmuelleri 3010; and when administered subcutaneously, it is 2 to 10 times more effective than cephalothin against the same infections.

Antibiotikum 810A ist ein Mittel mit breitem Wirkungsspektrum, das eine etwa ausgeglichene gramonegative und grampositive Wirksamkeit entfaltet. Dazu gehören die Wirksamkeit in vivo gegenüber den folgenden gram/negativen Organismen: Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Salmonella pullorum, Escherichia coli und Klebsialla pneumoniae und in vivo Wirksamkeit gegen die folgenden gram/positiven Organismen: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes und Diplococcus pneumoniae.Antibiotic 810A is a broad spectrum agent that an approximately balanced gram-negative and gram-positive effectiveness unfolds. In addition include effectiveness in vivo against the following gram / negative organisms: Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Salmonella pullorum, Escherichia coli and Klebsialla pneumoniae and in vivo effectiveness against the following gram / positive organisms: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, and Diplococcus pneumoniae.

Von den verschiedenen Produkten, die das Antibiotikum 810A ausmachen, stellt die ?ß- CD- 5-Amino-5- carb oxyval eramido)-3- (a-methoxy-p sulfo oxy-cinnamoyloxymethyl )-?-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure-Art entsprechend der obigen Formel Ia, worin R einen Sulfooxyrest bedeutet und deren Salze, wie beispielsweise das Natriumsalz, eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung dar. Dieses Produkt besitzt folgende StrUkturformel: Diese Verbindung besitzt eine grössere Beständigkeit gegenüber Cephalosporinasen als Cephalothin und ist durch ein geringeres Ausmass an Toxizität bei Mausen gekennzeichnet.Of the various products that make up the antibiotic 810A, the? Ss-CD-5-amino-5-carb oxyval eramido) -3- (a-methoxy-p sulfo oxy-cinnamoyloxymethyl) -? - methoxy-3-cephem -4-carboxylic acid type corresponding to the above formula Ia, in which R is a sulfooxy radical and its salts, such as the sodium salt, represent a preferred embodiment of the invention. This product has the following structural formula: This compound has greater resistance to cephalosporinases than cephalothin and is characterized by a lower level of toxicity in mice.

Ferner ist es beständiger gegenüber enzymatischem Abbau als Cephalosporin C und es wirkt bakterizid. Bei oraler Verabreichung schützt es gegen Infektionen auf Grund von Proteas vulgaris und bei subkutaner Verabreichung ist es wirksam gegenüber einer Vielzahl von gram/negativen und gram/positiven Infektionen.It is also more resistant to enzymatic degradation than cephalosporin C and it has a bactericidal effect. When administered orally, it protects against infections it is effective against it by virtue of Proteas vulgaris and when administered subcutaneously a variety of gram / negative and gram / positive infections.

Die Mikroorganismon 810A Kulturen: Der Mikroorganismus, welcher das Antibiotikum 810A erzeugt, wurde ursprünglich als Einzelkolonie aus Boden isoliert, Diese Kolonie wurde auf eine Stu.chplatte der folgenden Zusammensetzung gegeben: Medium A: Hefeextrakt 10,0 g Dextrose 10,0 g Agar 20,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Nach mehrtägigem Wachstum erzeugte der Mikroorganismus das Antibiotikum 810A. Dieses Antibiotikum wurde dann in Schüttelkolben reproduziert und von bekannten Antibiotika auf Grund verschiedener biologischer und chemischer Untersuchungen differenziert. Ein Vergleich dieser Daten mit denjenigen, die über andere bekannte Antibiotika erhalten wurden, lieferte die Beststellung, das 810A eine neue Einheit ist.The Mikroorganismon 810A cultures: The microorganism that the Antibiotic 810A produced, was originally isolated from soil as a single colony, This colony was placed on a Stu.ch plate with the following composition: Medium A: Yeast Extract 10.0 g Dextrose 10.0 g Agar 20.0 g Distilled Water 1000.0 ml After several days of growth, the microorganism produced antibiotic 810A. This antibiotic was then reproduced in shake flasks and known from known Antibiotics due to various biological and chemical Investigations differentiated. A comparison of this data with those who came across other known antibiotics were obtained, made the best, the 810A is a new unit.

810A Taxonomie und Morphologie: Der Mikroorganismus (Kultur MA-2837), welcher das Antibiotikum 810A produziert, wurde als Streptomyces griseus identifiziert. Die zu dieser Bestimmung verwendete Taxonomie ist in "Bergey's Manual of Determinative Bacteriology", 7. Ausgabe und in "The Actinomycetes", Band 2, von S. A. Waksman (1961 ) beschrieben.810A Taxonomy and Morphology: The Microorganism (Culture MA-2837), which produces antibiotic 810A was identified as Streptomyces griseus. The taxonomy used to make this determination is in Bergey's Manual of Determinative Bacteriology "7th Edition and in" The Actinomycetes "Volume 2, by S. A. Waksman (1961).

Unter Verwendung diese Verfahrens wurde festgestellt, dass die Kultur aus einem Stamm von Streptomyces griseus besteht, der hinsichtlich der Beschreibung, der Melanin-Erzeugung und des Kohlenstoff - Verbrauchs, dem Streptomyces griseinus sehr stark gleicht, wie in International Journal fo Systemic Bacteriology" 7. Ausgabe (1957) beschrieben, da die Gruppe von Streptomyces griseusKulturen 1959, zwei Jahre nach Veröffentlichung der Ausgabe, geteilt wurde.Using this procedure it was found that the culture consists of a strain of Streptomyces griseus which, with regard to the description, melanin production and carbon consumption, Streptomyces griseinus very closely resembles, as in International Journal fo Systemic Bacteriology "7th Edition (1957) since the group of Streptomyces griseus cultures 1959, two years after the edition was published.

Jedoch sowohl in Waksman als auch in "International Journal of Systemic Bacteriology" wird Streptomyces griseinus als "grisein-grzeugender Stamm von Streptomyces griseus" oder als "grisein-erzeugende oder grisein-ähnliche Substanz" definiert. Streptomyces griseus (MA-2837) ist ein Stamm, der sich von der klassischen Beschreibung in Bergey und in Waksman insofern unterscheidet, als er ein Luftmycel besitzt, das vorwiegend braungelb und auf einigen Medien grüngelb mit einem etwas abweichenden Kohlenstoffverbrauchsmuster ist. Waksman beschreibt auf Seite 111 und 133 von "The Actinomycetes" diese Streptomyces griseus-Reihe als eine Reihe, welche viele verwandte Species und Stämme umfasst, was sich durch farbloses bis oliv-sandfarbenes Substratwachstum, Luftmycel, das gelblich mit einer gründlichen Färbung oder grunlich-grau oder gelb-verbrannt oder grasgrün bis grau ist, Melanin negativ ist, gerade oder biegsame und in Büscheln erzeugte Sphorophore und ovale Sporen kennzeichnet. Die folgenden Tabellen vergleichen die Bigenschaften der das Antibiotikum 810L erzeugenden Kultur mit den Streptomyces griseus und Streptomyces griseinus-Kulturen.However, in both Waksman and the International Journal of Systemic Bacteriology "will refer to Streptomyces griseinus as the" grisein-producing strain of Streptomyces griseus "or defined as" grisein-producing or grisein-like substance ". Streptomyces griseus (MA-2837) is a strain that differs from the classical description in Bergey and in Waksman in that he has an aerial mycelium which predominantly brownish yellow and on some media greenish yellow with a slightly different one Carbon consumption pattern is. Waksman describes on pages 111 and 133 of "The Actinomycetes "this Streptomyces griseus series as a series which many related Species and strains includes what is shown by colorless to olive-sand-colored substrate growth, Aerial mycelium that is yellowish with a thorough tint or greenish-gray or yellow-burnt or grass green until is gray, melanin is negative, straight or pliable and denotes sphorophores and oval spores produced in clusters. The following Tables compare the properties of the culture producing antibiotic 810L with the Streptomyces griseus and Streptomyces griseinus cultures.

Die Charakterisierung des Ausgangsisolats MA-2837 im Vergleich mit in Bergey1 und Waksman2 beschriebenem Streptomycels griseus und auch die Charakterisierung von MA-2837 im Vergleich mit dem in Waksman2 beschriebenem Streptomyces griseinus sind in den Tabelle I und Ia aufgeführt. Tabelle I Vergleich der Kultureigenschaften von MA-2837 Kultur MA-2837 Streptomyces Streptomyces Streptomyces griseus (Bergey1) griseus (Waksman²) griseinus (Waksman²) Sporophoren sind mono Luftmycel: Reichlich, Gerade in Büscheln er- Gerade Sporophore podial verzweigt unter pulverförmig, wasser- zeugte Sphorphore. erzeugt in Klumpen Bildung von Büscheln, grün. Sporophore er- Sporen kugelförmig oder Büscheln ohne mit geraden bis etwas zeugt in Büscheln. bis oval, 0,8 x 0,8 Spiralen.The characterization of the parent isolate MA-2837 in comparison with Streptomycels griseus described in Bergey1 and Waksman2 and also the characterization of MA-2837 in comparison with the Streptomyces griseinus described in Waksman2 are listed in Tables I and Ia. Table I Comparison of the Cultural Characteristics of MA-2837 Culture of MA-2837 Streptomyces Streptomyces Streptomyces griseus (Bergey1) griseus (Waksman²) griseinus (Waksman²) Sporophores are mono Aerial mycelium: Abundant, straight in clusters, straight sporophores branched podially underneath powdery, water-generated spherphores. creates clumps in clumps, green. Sporophore- Spores spherical or tufts without with straight to slightly begets in clusters. to oval, 0.8 x 0.8 spirals.

gebogenen Sporenketten. Sporen kugelförmig bis bis 1,7 µ, Oberfläche Sporen stabförmig, Sporen: kugelförmig bis ellipsoid, 0,8 x 0,8 glatt 1,0 bis 1,8 x 0,8 oval, Durchmesser 0,9 µ bis 1,7 µ, Vegetatives bis 1,0 µ bis 0,9 x 1,2 µ in Ket- Wachstum: Kolonien ten von etwa 10 - 15 glatt oder gefältelt, Sporen. Vegetative farblos, später nach Hyphen von 0,9 µ Breite Oliv bis sandfarben über-(Glycerin-Asparaginagar- gehend 970X) 1 Bergey's "Manual of Determinative Bacteriology", 7. Ausgabe (1957) 2 Waksman, S.A., "The Actinomycetes", Band 2 (1961) Tabelle Ia Vergleich der Kultureigenschaften von MA-2837 Kultur Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Tomatenpaste - Vegetatives Wachstum: Hafermehl-Agar Rückseite braun, eben, sich verbreitend, Luftmycel: Mitte gelbbraun bis graugelb Kante bräunlich-gelb Lösliches Pigment: gelbbraun Glycerin-Aspara- Vegetatives Wachstum: ginagar Rückseite gelbbraun, eben, sich verbreitend, Luftmycel: pulverförmig, gelbbraun bis gelb Lösliches Pigment: hell, gelbbraun-gelblich Qzapek-Doxagar Vegetatives Wachstum: Wachstum spär- Substratwachstum (Sacharosenitrat- Rückseite gelblich- lich, sich ver- faltig, Rückseite agar) orange, eben, sich ver- breitend, farb- creme-farben bis" breitend, les, wird oliv- bräunlich, Luft-Luftmycel: pulverförmig bis sandfarben, mycel: weiss bis gelbbraun bis gelb (ver- Luftmycel dick, cremep-farben mit schiedene Schattierungen, pulverförmig, hellgrün-lichem jedoch vorwiegend Rand Wasser grün, Stich, Kein lösgelbbraun-gelblich) leich- Pigment unlöslich liches Pigment tes Wachstum im Mittelpunkt und stärkeres an den Rändern, Lösliches Pigment: hell, gelbbraun-gelblich Tabelle Ia (Fortsetzung) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Eialbuminagar Vegetatives Wachstum: Rückseite gräulich gelbbraun, eben, sich ausbreitend Luftmycel: Gelbbraun bis gelblich mit grünlicher Schattierung, Rand gelbbraun gelblich, geringes Wachstum im Mittelpunkt, stärkeres Wachstum längs der Ränder Lösliches Pigment: hell gelbbraun gelblich Nähragar Vegetatives Wachstum: Wachstum reichlich, Rückseite bräunlichgelb fast transparent, Luftmycel: Samtig, gelb- creme-farben.curved spore chains. Spores spherical up to 1.7 µ, surface Spores rod-shaped, spores: spherical to ellipsoidal, 0.8 x 0.8 smooth 1.0 to 1.8 x 0.8 oval, diameter 0.9 µ to 1.7 µ, vegetative up to 1.0 µ to 0.9 x 1.2 µ in Ket growth: colonies of about 10-15 smooth or puckered, spores. Vegetative colorless, later after hyphae 0.9 µ wide olive to sand-colored over- (glycerine-asparagine agar- going 970X) 1 Bergey's "Manual of Determinative Bacteriology", 7th edition (1957) 2 Waksman, S.A., "The Actinomycetes", Volume 2 (1961) Table Ia Comparison of the cultural properties of MA-2837 culture medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Tomato Paste - Vegetative Growth: Oatmeal agar reverse side brown, even, spreading, aerial mycelium: middle yellow-brown to gray-yellow edge brownish-yellow Soluble pigment: yellow-brown glycerine asparagus Vegetative growth: ginagar reverse yellow-brown, even, spreading, aerial mycelium: powdery, yellow-brown to yellow Soluble pigment: light, yellow-brown-yellowish Qzapek doxagar Vegetative growth: growth sparse substrate growth (sucrose nitrate back yellowish, wrinkled, backside agar) orange, even, spreading, color-cream-colored to "spreading, les, becomes olive-brownish, aerial-aerial mycelium: powdery to sand-colored, mycelium: white to yellow-brown to yellow (thick aerial mycelium, cream-colored with different shades, powdery, light greenish but predominantly edge Water green, tinge, no soluble yellow-brown-yellowish) easily- pigment insoluble Pigment growth in the center and stronger on the edges, Soluble pigment: light, yellow-brown-yellowish Table Ia (continued) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Egg album agar Vegetatives Growth: reverse grayish yellow-brown, even, spreading aerial mycelium: yellow-brown to yellowish with greenish shading, margin yellowish brown, yellowish, little growth in the center, stronger growth along the edges. Soluble pigment: light yellow-brown yellowish nutrient agar Vegetative growth: abundant growth, brownish-yellow reverse almost transparent, aerial mycelium: velvety, yellow-cream-colored.

braungelb, Rand gelbbraun Luftmycel pulvergelb förmig, weiss bis Lösliches Pigment: hell hellgrau, kein lösbraun liches Pigment Agar reichliches, cremefarbenes fast transparentes Wachstum, Luftmycel pulverförmig, weiss bis hellgrau, kein lösliches Pigment Tabelle Ia (Fortsetzung) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Synthetischer Spärliches sich Agar ausbreitendes farbloses Wachstum, das oliv bis sandfarben wird Luftmycel: dick, pulverförmig, wassergrün Gelatine-Ansatz Flockiges creme-farbe- Grünlich gelbes Wachstum cremenes Wachstum setzt sich oder ereme-farbe- farben mit bräunam Boden des Rohrs ab. nes Oberflächen- lichem Stich Bollkommene Verflüssi- wachstum mit bräun- Luftmycel: fehlt gung lichem Stich. Ra- oder spärlich, Nährgelatine- Vegetatives Wachstum: sche Verflüssigung weiss. brownish yellow, edge yellowish brown aerial mycelium powdery yellow shaped, white to Soluble pigment: light light gray, no soluble brown pigment agar abundant, cream-colored, almost transparent growth, aerial mycelium powdery, white to light gray, no soluble pigment Table Ia (continued) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Synthetic Sparse Agar-spreading colorless growth that turns olive to sand-colored aerial mycelium: thick, powdery, water-green gelatine base Flaky cream-colored greenish-yellow Growth creamy growth is made up of or ereme-colored with a brownish bottom of the pipe. nes surface stitch Bollcome liquefaction with brown air mycelium: lacking a lichen tinge. Ra- or sparse, nutrient gelatin vegetatives Growth: liquefaction white.

agar ereme-farben Rasche Verflüssi-Luftmycel: blass, gelb- gung graun gelb Lösliches Pigment: keines Verflüssigung der Gelatirîe: gut Lackmusmilch Teilweiser Ring, Creme-farbener Wachstum creme-Vegetatives Wachstum: Ring, Koagulie- farben.agar ereme-colored Rapid liquefying aerial mycelium: pale, yellowish-gray yellow Soluble pigment: none Liquefaction of the gelatin: good Litmus milk Partly Ring, cream-colored growth. Cream-vegetative growth: ring, coagulum-colored.

bräunlich rung mit rascher Coagulierung und Luftmycel: gering, weiss- Peptonisierung, Peptonisierung lich wird alkalisch Peptonisierung wird al-) kalisch Tabelle Ia (Fortsetzung) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Entrahmte Milch Teilweiser Ring Vegetatives Wachstum: Bräunlich Luftmycel: keines Lösliches Pigment: hellbraun Peptonisierung wird alkalisch Magermilchagar Vegetatives Wachstum: creme-farben, eben, sich ausbreitend Luftmycel: spärlich, gelblichweiss bis cremefarben Lösliches Pigment: sehr hellbraun Hydrolyse von Casein Glucose-agar Im Mittelpunkt verstärktes Wachstum strahlenförmig, creme-farben bis orange, Rand gezackt Glucoseflüssig- Reichliche, gelbkeit liche Haut mit grünlichem Stich, stark gefältelt Tabelle Ia (Fortsetzung) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Stärke-Agar Dünnes, sich aus- Dünnes Wachstum, Farbloses bis breitendes trans- sich ausbreitend, creme-farbenes parentes Wachstum, transparent, Wachstum, Stärke ist hydro- starke Hydrolyse Luftmycel: graulysiert olive Nährstärkeagar Vegetatives Wachstum: creme-farben Luftmycel: blass gelbbraun gelb Lösliches Pigment: keines Kydrolyse gut Kartoffelschnitt Vegetatives Wachstum: Gelbliches, gefal- Runzliges falti- Faltiges gelbhellbraun tetes Wachstum, ges Wachstum, lich weisse Luftmycel: mässig, bedeckt mit weis- gelblich bis Wachstum braungelb sem, pulferförmi- bräunlich, be- Luftmycel gräuleichtes Bräunlichwer- gem Luftmycel deckt mit weis- lich-weiss mit de/n der kartoffel sem, pulverföl- olive-farbenem migem Luftmycel Stich Tabelle Ia (Fortsetzung) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Calciummalat- Vegeatives Wachstum: Grünes oder gel- Keine lösliagar eben, sich ausbreitend bes lösliches chen Pigmente durchscheinend und Pigment, das auf auf Calciumfarblos an den Rändern dem calciummalat malat oder opak und creme-farben und Succinat- Succinatmeim Mittelpunkt. medium erzeugt dium Luftmycel: Mässig, creme- wird farben bis gelb, Ränder gelbbraun gelb Lösliches Pigment: keins Tyrosin-Nähr- Vegetatives Wachstum: Häufig erzeugtes Kein erzeugtes agar eben, sich ausbreitend, dunkles Pigment Pigment creme-farben Luftmycel: gelblich braungelb mit grünlicher Schattierung, Ränder gelb-Pepton-Eisen-Hefe- Vegetatives Wachstum: Extraktagar creme-efarben Luftmycel: keins Lösliches Pigment: keines Melanin negativ Tabelle Ia (Fortsetzung) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Erzeugung von H2S Negativ Negativ Negativ Loeffler's Blut- Vegetatives Wachstum: serum-Schrägkul- gelbbraun turen Luftmycel: hellgelblich Lösliches Pigment: bräunlich Vollkommene Verflüssigung Temperaturbereich 28°C gutes Wachstum Optimaltemperatur (Hefeextrakt- 37°C gutes Wachstum 37°C Dextrose-Salz- 50°C kein Wachsagarschrägkultu- tum ren) Mikroärophiles Die Oberfläche bedek- Aerob Wachstum (Hefe- kendes und längs der extrakt-Dextrose- gesamten Ansatzlinie Salze-Ansatz verlaufendes gutes 40 mm Tiefe) Wachstum Reduktion von Negativ Positiv Positiv Positiv Nitraten zu Nitriten Diese Beobachtungen erfolgten nach dreiwöchiger Inkubierung bei 280 a, falls nicht anders vermerkt ist. Der pH-Wert des bei diesen Untersuchungen verfendeten Mediums war etwa neutral, d. h. 6,8 bis 7,2. Die physiologischen Versuche wurden nach Ablauf von 7 und 22 Tagen durchgeführt. Die zur Beschreibung verwendeten Farben entsprechen den Definitionen von Color Harmony Manual", 4. Ausgabe, 1958, Container Corporation of America. brownish with rapid coagulation and aerial mycelium: low, white- Peptonization, peptonization Lich becomes alkaline Peptonization becomes alkaline Tabel Ia (continued) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Skimmed milk Partial ring Vegetative growth: Brownish aerial mycelium: none Soluble pigment: light brown peptonization becomes alkaline skimmed milk agar Vegetative growth: cream-colored, flat, spreading aerial mycelium: sparse, yellowish white to cream colored Soluble pigment: very light brown hydrolysis of casein Glucose agar Increased growth in the center, radiating, cream-colored to orange, jagged edge glucose liquid - copious, yellowish skin with greenish Stitch, heavily puckered Table Ia (continued) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Starch Agar Thin, thin growth, colorless to broad trans- spreading, cream-colored parent growth, transparent, growth, starch is hydro- strong hydrolysis aerial mycelium: greyed olive nutrient starch agar Vegetative growth: cream-colored aerial mycelium: pale yellow-brown yellow Soluble pigment: none cydrolysis good potato cut Vegetatives Growth: yellowish, wrinkled, wrinkled, wrinkled, yellowish-light brown growth, total growth, slightly white aerial mycelium: moderate, covered with white-yellowish to growth brownish yellow sem, powdery brownish, airy mycelium grayish brownish gem aerial mycelium covers with white-white with de / n the potato semen, powdered oil olive-colored medium aerial mycelium stitch Table Ia (continued) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Calcium malate Vegeative growth: green or gel- no soluble agar, spreading esp soluble pigments translucent and pigment that is colorless on calcium the edges of the calcium malate malate or opaque and cream-colored and succinate-Succinatmeim Focus. medium creates medium aerial mycelium: moderate, cream-colored to yellow, Margins yellow-brown yellow Soluble pigment: no tyrosine nutrient Vegetative growth: Often produced No agar produced evenly spreading, dark pigment pigment cream-colored aerial mycelium: yellowish brownish yellow with greenish shading, edges yellow-peptone-iron-yeast- Vegetative growth: extract agar cream-colored aerial mycelium: no soluble pigment: none melanin negative Table Ia (continued) Medium MA-2837 S. griseus S. griseus S. griseinus (Bergey) (Waksman) (Waksman) Production of H2S Negative Negative Negative Loeffler's blood vegetative growth: serum oblique yellow-brown turen aerial mycelium: light yellowish soluble pigment: brownish perfect Liquefaction temperature range 28 ° C good growth optimal temperature (yeast extract 37 ° C good growth 37 ° C dextrose salt 50 ° C no wax agar slant cultures) Microärophiles The surface covers aerobic growth (yeast and along the extract-dextrose- whole line of line salts-line running good 40 mm depth) Growth Reduction from negative positive positive positive nitrates to nitrites These Observations were made after three weeks of incubation at 280 a, unless otherwise is noted. The pH of the medium used in these studies was roughly neutral, d. H. 6.8 to 7.2. The physiological experiments were after expiration carried out between 7 and 22 days. The colors used for the description correspond the Definitions of Color Harmony Manual "4th Edition, 1958, Container Corporation of America.

810A Kohlehydrat-Verwendung: Die Streptomyces griseus-Kultur (MA-2837) wurde auch hinsichtlich ihrer Fähigkeit zur Verwendung oder Assimilierung verschiedener Kohlehydrate durch das Wachstum des Mikroorganismus in synthetischem Ausgangsmedium (T. G. Pridham enthielt and D. Gottlieb, 1948), das 1 % des Kohlehydrats bei 28°C während 3 Wochen getestet. Die folgende Tabelle II gibt den Verbrauch oder die Assimilation dieser Lohlehydratquellen durch die Streptomyces griseus Kultur (MA-2837) wieder. Die Erklärung der Zeichen in Tabelle II sind wie folgt: + bedeutet gutes Wachstum, + bedeutet schlechtes Wachstum und - bedeutet kein Wachstum auf dem speziellen Kohl ehydrat.810A Carbohydrate Use: The Streptomyces griseus Culture (MA-2837) also became various in terms of their ability to use or assimilate Carbohydrates through the growth of the microorganism in a synthetic starting medium (T. G. Pridham and D. Gottlieb, 1948) contained 1% of the carbohydrate at 28 ° C tested for 3 weeks. The following Table II gives the consumption or assimilation of these carbohydrate sources by the Streptomyces griseus culture (MA-2837). The explanation of the signs in Table II are as follows: + means good growth, + means poor growth and - means no growth on the special cabbage ehydrate.

Tabelle II Kohlehydrat M-2837 Kohlehydrat MA-2837 Kultur Kultur Glucose + Lactose + Arabinose + Inosit # Xylose + Saccharose # Maltose + Rhammose t Mannose + Raffinose + Fructose - Cellulose Mannit + Die in den Tabellen I, Ia und II beschriebenen Eigenschaften wurden zur Herabsetzung der Streptomyces griseus Kultur (MA-2837) auf eine Klassifikation einer Species über den in "Bergeys's Manual of Determinative Bacteriology", 7. Ausgabe, Seiten 694 - 829 (1957)-'und in 11The Actinomycetes", Band 2, Seiten 61 - 292 (1961) beschriebenen Schlüssel verwendet. Table II Carbohydrate M-2837 Carbohydrate MA-2837 Culture Culture Glucose + Lactose + arabinose + inositol # xylose + sucrose # maltose + rhammose t mannose + Raffinose + fructose - cellulose mannitol + The ones in the tables Properties I, Ia and II described were used to reduce Streptomyces griseus culture (MA-2837) refers to a classification of a species above that in "Bergeys's Manual of Determinative Bacteriology ", 7th Edition, pages 694-829 (1957) - 'and in 11 The Actinomycetes ", Volume 2, pp. 61-292 (1961) used.

Ein Vergleich der Kultur (MA-2837) mit bekannten Species zeigt, dass sie dem Streptomyces griseus ähnlich ist. Es bestehen morphologische Unterschiede, wie beispielsweise hinsicht der Farbe des Luftmycels, das bei Streptomyces griseus vorwiegend gelbbraum-gelb und grünlich-gelb ist, jedoch im Hinblick auS die erhebliche Anzahl von Ähnlichkeiten und lediglich geringen Unterschieden ergibt sich keine Berechtigung für eine neue Species-Bezeichnung. Der Mikroorganismus (MA-2837), der das Antibiotikum 810A produziert, wurde somit als ein Stamm von Streptomyces griseus identifiziert.Comparison of the culture (MA-2837) with known species shows that it is similar to Streptomyces griseus. There are morphological differences such as the color of the aerial mycelium found in Streptomyces griseus it is predominantly yellow-brown-yellow and greenish-yellow, but with regard to the considerable There is no number of similarities and only minor differences Authorization for a new species name. The microorganism (MA-2837) that thus producing antibiotic 810A was identified as a strain of Streptomyces griseus identified.

Zusätzlich zu der vorstehenden Kultur (MA-2837) wurden 25 weitere Kulturen als Erzeuger des Antibiotikums 810A identifiziert. Dazu gehören: drei Kulturen von Streptomyces griseus, elf Kulturen von Streptomyces viridochromogenes, fünf Kulturen von Streptomyces fimbriatus, drei Kulturen von Streptomyces halstedii, eine Kultur von Streptomyces rochei, eine Kultur von Streptomyces cinnamonensis und eine Kultur von Streptomyces chartreusis. Diese Streptomyces-Stämme werden als die folgenden Kulturen in der Kulturensammlung von Merck & Co., Inc., Rahway, New Jersey, identifiziert: MA-4160, MA-4174, MA-4171, MA-4177, MA-4178, MA-4180, MA-4164, MA-4165, MA-4166, MA-4167, MA-2892, MA-3265, MA-4162, MA-4163, MA-4159, MA-4169, MA-4170, MA-4179, MA-4161, MA-4168, MA-4175, MA-4181, MA-2938, MA-4176 UND MA-4173.In addition to the above culture (MA-2837), there were 25 more Cultures identified as producers of antibiotic 810A. These include: three cultures from Streptomyces griseus, eleven cultures of Streptomyces viridochromogenes, five Cultures of Streptomyces fimbriatus, three cultures of Streptomyces halstedii, a culture of Streptomyces rochei, a culture of Streptomyces cinnamonensis and a culture of Streptomyces chartreusis. These Streptomyces strains are called the following cultures in the culture collection of Merck & Co., Inc., Rahway, New Jersey, identified: MA-4160, MA-4174, MA-4171, MA-4177, MA-4178, MA-4180, MA-4164, MA-4165, MA-4166, MA-4167, MA-2892, MA-3265, MA-4162, MA-4163, MA-4159, MA-4169, MA-4170, MA-4179, MA-4161, MA-4168, MA-4175, MA-4181, MA-2938, MA-4176 AND MA-4173.

Diese Kulturen wurden zur dauernden Hinterlegung bei der Kulturensammlung der Northern Utilization Research and Develogment Branch of the U.S. Department of Agriculture in Peoria, Illinois, hinterlegt.These cultures became permanent deposit with the culture collection the Northern Utilization Research and Development Branch of the U.S. Department of Agriculture in Peoria, Illinois.

Die zugeteilten NRRL-Kultur-Bezeichnungen sind wie folgt: Streptomyces griseus: MA-4160 NRRL 3951 MA-4174 NRRL 3953 MA-4171 NRRL 3952 Stroptomyces viridochromogenes: MA-4177 NRRL 3970 MA-4178 NRRL 3971 MA-4180 NRRL 3972 MA-4164 NRRL 3966 NA-4165 NRRL 3967 MA-4166 NRRL 3968 MA-4167 NRRL 3969 MA-2892 NRRL 3962 MA-3265 NRRL 3963 MA-4162 NRRL 3964 MA-4163 NRRL 3965 Streptomyces fimbriatus: MA-4159 NRRL 3954 MA-4169 NRRL 3956 MA-4170 NRRL 3957 MA-4179 NRRL 3958 MA-4161 NRRL 3955 Streptomyces halstedii: MA-4168 NRRL 3959 MA-4175 NRRL 3960 MA-4181 NRRL 3961 Streptomyces rochei: MA-2938 NRRL 3973 Streptomyces cinnamonesis: MA-4176 NRRL 3974 Streptomyces chartreusis: MA-4173 NRRL 3975 Die Charakterisierung der vorstehend erwähnten Isolate im Vergleich mit Streptomyces griseus, Streptomyces viridochromogenes, Streptomyces fimbriatus, Streptomyces halstedii, Streptomyces rochei, Streptomyces cinnamonensis und Streptomyces chartreusis sind in den folgenden Tabellen IIa bis Ile wiedergegeben.The assigned NRRL culture names are as follows: Streptomyces griseus: MA-4160 NRRL 3951 MA-4174 NRRL 3953 MA-4171 NRRL 3952 Stroptomyces viridochromogenes: MA-4177 NRRL 3970 MA-4178 NRRL 3971 MA-4180 NRRL 3972 MA-4164 NRRL 3966 NA-4165 NRRL 3967 MA-4166 NRRL 3968 MA-4167 NRRL 3969 MA-2892 NRRL 3962 MA-3265 NRRL 3963 MA-4162 NRRL 3964 MA-4163 NRRL 3965 Streptomyces fimbriatus: MA-4159 NRRL 3954 MA-4169 NRRL 3956 MA-4170 NRRL 3957 MA-4179 NRRL 3958 MA-4161 NRRL 3955 Streptomyces halstedii: MA-4168 NRRL 3959 MA-4175 NRRL 3960 MA-4181 NRRL 3961 Streptomyces rochei: MA-2938 NRRL 3973 Streptomyces cinnamonesis: MA-4176 NRRL 3974 Streptomyces chartreusis: MA-4173 NRRL 3975 The characterization of the isolates mentioned above in comparison with Streptomyces griseus, Streptomyces viridochromogenes, Streptomyces fimbriatus, Streptomyces halstedii, Streptomyces rochei, Streptomyces cinnamonensis and Streptomyces chartreusis are shown in Tables IIa to Ile below.

Tabelle IIA Kultureigenschaften/der das Antibiotikum 810A erzeugenden Stämme von Streptomyces griseus Medium MA-4160 MA-4174 MA-4171 Mprphologie Sporophore bilden Büsche mit geraden bis leicht gewundenen Sporenketten. Table IIA Culture characteristics / of those producing antibiotic 810A Strains of Streptomyces griseus Medium MA-4160 MA-4174 MA-4171 Mprphology Sporophores form bushes with straight to slightly twisted chains of spores.

Sporen sind kugelförmig bis oval - 0,9 µ Durchmesser bis 0,9 µ x 1,2 µ, in Ketten von etwa 10 bis 15 Sporen Tomatenpaste- Vegetatives Wachztum: gut, eben, sich ausbreitend Hafermehlagar gelbbraun Luftmycel, Luftmycel: pulver- Luftmycel: pulverförmig, gelbbraun förmig, gelbbraun pulverförmig, gelbbraun mit mit grünlicher Schat- mit stark grüner stark grüner Übertönung tierung Übertönung Lösliches Pigment: hellbraun Glycerin Vegetatives Wachstum: gut, eben, gelbbraun asparagin Luftmycel: pulverförmig, gelbbraun mit grünlicher Schattierung und graugrünen agar Vektoren Lösliches Pigment: hellbraun Czapek-Dox Vegetatives Wachstum: eben, sich ausbreitend, transparent Agar Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: mässig, gelbbraun mässig, gelbbraun mässig, gräulich Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: Lösliches Pigment Tabelle IIa (Fortsetzung) Medium Ma-4160 Ma-4174 MA-4171 Hefeextrakt - Vegetatives Wachstum: eben, sich ausbreitend, gelbbraun Dextrose + Luftmycel: gut, pulverförmig, beige Salzagar Lösliches Pigment: hellbraun Lösliches Pigment auf kein k kein kein Pepton-Eisen-Hefe-Extraktagar T a b e l e IIb Kultureigenschaften von das Antibiotikum 810A erzeugenden Stämmen von Streptomyces viridochromogenes Medium MA-2892 MA-3265 Ma-4162 MA-4163 Morphologie Sporophore sind kurze, kompakte Spiralen, die als Seitenzweige auf Lufthyphen auftreten. Spores are spherical to oval - 0.9 µ in diameter to 0.9 µ x 1.2 µ, in chains of about 10 to 15 spores tomato paste - vegetative growth: good, flat, spreading oatmeal agar yellow-brown aerial mycelium, aerial mycelium: powder aerial mycelium: powdery, yellow-brown shaped, yellow-brown powdery, yellow-brown with greenish Shading with strong green strong green tinting Tinting Soluble pigment: light brown glycerine vegetative growth: good, even, yellow brown asparagine aerial mycelium: powdery, yellow-brown with greenish shading and gray-green agar vectors Soluble pigment: light brown Czapek-Dox Vegetative growth: even, spreading, transparent agar aerial mycelium: aerial mycelium: moderate, yellow-brown moderate, yellow-brown moderate, greyish Soluble pigment: Soluble pigment: Soluble pigment Tabel IIa (continued) Medium Ma-4160 Ma-4174 MA-4171 Yeast Extract - Vegetative Growth: even, spreading, yellow-brown dextrose + aerial mycelium: good, powdery, beige Salt agar soluble pigment: light brown soluble pigment on no k no no peptone iron yeast extract agar T a b e l e IIb Cultural properties of strains producing the antibiotic 810A from Streptomyces viridochromogenes medium MA-2892 MA-3265 Ma-4162 MA-4163 morphology Sporophores are short, compact spirals that appear as side branches on aerial hyphae.

Sporen sind kugelförmig bis oval - 0,9 bis 1,2 µ Durchmesser und 0,9 bis 1,2 x 1,2 bis 1,7 µ, Ketten von etwa 10 bis 15 Sporen. Spores are spherical to oval - 0.9 to 1.2 µ in diameter and 0.9 to 1.2 x 1.2 to 1.7 µ, chains of about 10 to 15 spores.

Tomatenpaste- Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachstum: Hafermehlagar Rückseite braun tum: Rückseite tum: Rückseite Rückseite braun gelbbraun dunkelbraun Luftmycel: Luftmycel: samtig, Luftmycel: Luftmycel: samtig, dunkelgrau hellgrau und weiss samtig, bläulich- samtig, mittelgrau und weiss grau und weiss und weiss Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: hellbraun keines hellbraun hellbraun Glycerin- Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachstum: asparagin- Rückseite dunkelbraun tum: Rückseit tum: Rückseite Rückseite braun agar dunkelbraun dunkelbraun Luftmycel: Luftmycel: hell- Luftmycel: Luftmycel: dunkelgrau und creme- grau creme-farben und creme-farben und g@au farben hellgrau Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: hellbraun keines hellbraun hellbraun Tabelle IIb (Fortsetzung) Medium MA-2892 MA-3265 MA-4162 MA-4163 Czapek-Dox Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs- Vegetatives Vegetatives Wachstum: Agar tum: dunkelbraun tum: dunkelbraun wachstum: gelbbraun dunkelbraun Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: sehr spärlich hellgrau und weiss sehr spärlich sehr spärlich Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: Lösliches Lösliches Pigment: dunkelbraun hellbraun Pigment: hellbraun hellbraun Hefeextrakt - Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs- Vegetatives Vegetatives Wachstum: Dextroseagar tum: dunkelbraun tum: Rückseise Wachstum: dunkelbraun braun dunkelbraun Luftmycel: Luftmycel: hellgrau Luftmycel: Luftmycel: sehr spärlich sehr sparsam sehr spärlich Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: Lösliches Pig- Lösliches Pigment: hellbraun keines ment: Hellbraun hellbraun Lösliches dunkelbraun Pigment auf Pepton-Eisen-Hefeextraktsgar Tabelle IIb (Fortsetzung) Medium MA-2892 MA-3265 MA-4162 MA-4163 Morphologie Sporophore sind kurze, kompakte Spiralen, die als Seitenzweige auf Lufthyphen auftreten. Sporen sind kugelförmig bis oval - 0,9 bis 1,2 µ Durchmesser und 0,9 - 1,2 x 1,2 - 1,7 µ , Ketten von etwa 10 bis 15 Sporen Tomatenpaste - Vegetatives Wach stum: Rückseite dunkelbraun Hafermehlagar Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: samtig, bläulich- samtig, mittel- samtig, mittelgrau samtig, dunkelgrau grau und creme- grau und creme- und creme-farben und creme-farben farben farben Lösliches Pigment: hellbraun Glycerin- Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs-Asparagin- tum: Rückseite tum: Rückseite tum: dunkelgrau tum: Rückseite gelbagar dunkelbraun dunkelbraun braun Luftmycel: dunkel- Luftmycel: Luftmycel: spär- Luftmycel: hellgrau grau und creme- mittelgrau und lich gräulich und creme-farben farben creme-farben Lösliches Pigment: hellbraun Czapek-Dox Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs-Agar tun: braun tum: Rückseite tum: braun tum: gelbbraun braun Luftmycel: sehr Luftmycel: hell- Luftmycel: sehr Luftmycel: sehr spärlich grau und creme- spärlich spärlich Lösliches Pigment: farben Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: braun Lösliches Pigment: braun hellbraun hellbraun Tabelle IIb (Fortsetzung) Medium MA-4164 MA-4165 MA-4166 MA-4167 Hefeextrakt- Vegetatives Wachstum: dunkelbraun Dextrose- Luftmycel: sehr sparsam agar Lösliches Pigment: hellbraun Lösliches Pigment auf dunkelbraun Pept/on- Eisen-Hefeextraktagar Tabelle IIb (Fortsetzung) Medium MA-4177 MA-4178 MA-4180 Morphologie Sporophore sind kurze, kompakte Spiralen, die als Seitenzweige auf Lufthyphen auftreten. Die sporen sind kugelförmig bis oval - 0,9 bis 1,2 µ Durchmesser und 0,9 bis 1,2 x 1,2 bis 1,7 µ in Ketten von etwa 10 bis 15 Sporen Tomatenpaste- Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Vegettives Wachstum: Hafermehlagar Rückseite gelbbraun Rückseite braun Rückseite braun Luftmycel: samtig, Luftmycel: samtig, Luftmycel; samtig, dunkelgrau und dunkelgrau dunkelgrau und cremeweiss farben Lösliches Pigment: hellbraun Glycerin- Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wchstum: Vegetatives Wachstum: A#paragin- Rückseite braun Rückseite dunkelbraun Rückseite dunkelbraun agar Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: dunkelgrau dunkelgrau Gemisch aus hell und dunkelgrau Lösliches Pigment: hellbraun Czapek-Dox Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Agar gelbbraun dunkelbraun gelbbraun Luftmycel: sehr spärlich Lösliches Pigment: hellbraun Tabelle IIb (Fortsetzung) Medium MA-4177 MA-4178 MA-4180 Hefeextrakt - Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum : Dextroseagar dunkelbraun braun braun Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: spärlich-gräulich sehr spärlich sehr spärlich Lösliches Pigment: hellbraun Lösliches Pigment auf Pepton-Eisen- dunkelbraun Hefeextraktagar T a b e l l e IIc Kultureigenschaften von das Antibiotikum 810A erzeugenden Stämmen von Streptomyces fimbriatus Medium MA-4159 MA-4169 MA-4170 MA-4179 MA-4161 Morphologie Sporophore sind kurze, kompakte Spiralen und einige Schleifen, die Sporophore sind als Seitenzweige auf Lufthyphen auftreten. Die Sporen sind kugel- kurze Haken und förmig bis oval - 0,9 µ durchmesser und 0,9 x 1,2 µ mit Ketten von Schleifen, die als etwa 10 bis 15 Sporen Seitenzweige auf Luftmycel auftreten. Sporen in Ketten von weniger als 10 Sporen sind kugelförmig bis oval, 0,9 µ Durchmesser und 0,9 x 1,2 µ Tomaten- Vegetatives Vegetatives Wachs- Vegetatives Vegettives Vegetatives Wachspaste - Wachstum: Rück- tum: Rückseite Wachstum: Wachstum: tum: gelbbraun Hafemehl- seite gelbbraun gelbbraun Rückseite gelb- Rückseite gelb- Luftmycel: agar Luftmycel: Luftmycel: mässig, braun braun spärlich, gräulich Mässig, hellgrau hellgrau Luftmycel: Luftmycel: mässig, hell- spärlichgrau und creme- gräulich farben Lösliches Pigment: hellbraun Glycerin- Vegetatives Vegetatives Wachs- Vegetatives Vegetatives Vegetatives Wachs-Asparagin- Wachstum: dun- tum: dunkelbräun- Wachstum: Wachstum: tum: Rückseite agar kelbräunlich bis lich bis grau dunkelbräun- dunkelbräun- gelbbraun mit grau lich bis grau lich bis grau rötlich gelbbraunen Vektoren Tabelle IIc (Fortsetzung) Medium MA-4159 MA-4169 MA-4170 MA-4179 MA-4161 Vegetatives Czapek-Dox Vegetatives Vegetatives Wachs- Vegetatives Wachs- Wachstum: dun- Vegetatives Agar Wachstum: tum: dunkelbräun- tum: dunkelbräun- kelbräunlich Wachstum: dunkelbräun- lich bis grau lich bis grau bis grau gelbbraun lich bis grau Luftmycel: Luftmycel: mässig, Luft@ycel: mässig, Luftmycel: Luftmycel: sehr sehr spär- grau grau sehr spärlich spärlich lich Lösliches Lösliches Pigment: I@sliches Pigment: Lösliches Lösliches Pig-Pigment: braun @raun Pigment: ment: braun braun hellbraun Hefeextrakt Vegetatives Vegetatives Wachs Vegetatives Wachs- Vegetatives Vegetatives Dextrose + Wachstum: tum: dunkelbrä@u- tum: dunkelbräun- Wachstum: dun- Wachstum: Salz-Agar dunkelbräun- lich bis grau lich bis grau kelbräunlich braun lich bis grau bis grau Luftmycel: sehr spärlich Lösliches Pigment: braun Lösliches Pigment auf dunkelbraun Pepton-Eisen-Hefeextrakt-Agar T a b l l e IId Kultureigenschaften von das Antibiotikum 810A erzeugenden Stämmen von Streptomyces halstedii Kedium MA-4168 MA-4175 MA-4181 Morphologie Sporophore sind lange, lose Spiralen, die als Seitenzweige auf Lufthyphen auftreten. Die Sporen sind kugelförmig bis oval - 0,9 µ Durchmesser und 0,9 x 1,2 µ - in Ketten von mehr als 10 Sporen Tomatenpaste - Vegetatives Wachstum: Vegtatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: He@nmehlegar Rückseite braun Rückseite gelbbraun Rückseite braun Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: pulverförmig, dunkel- dunkelgrau und weiss, dunkelgrau und weiss grau pulverförmig Lösliches Pigment: keines Glycerin-Aspa- Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: ragin-Agar Rückseite braun bis Rückseite gräulich Rückseite gräulich dunkelbraun Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: pulverförmig, dunkel- Pulverförmig, vorwie- dunkelgrau, pulverförmig grau und weiss gend dunkelgrau gemischt mit hellgrau und weiss Lösliches Pigment: keines Tabelle IId (Fortsetzung) Medium MA-4168 MA-4175 MA-4181 Czapek-Dox Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Agar creme-farben Rückseite rötlich- creme-farben braun Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: gräulich creme- gräulich creme-farben sehr spärlich farben Lösliches Pigment: keines Hefeextrakt Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Dextrose + gelbbraun gelbbraun braun Salz-Agar Luftmycel: Luftmycel: Luftmycel: gräulich, spärlich spärlich, gräulich spärlich, gräulich Lösliches Pigment: keines Lösliches Pigment auf Pepton-Eisen- keines Hefeextrakt-Agar T a b e l l e IIe Kultureigenschaften von das Antibiotikum 810A erzeugenden Streptomyces Species Medium MA-2938 MA-4176 MA-4173 Morphologie Streptomyces rochei Streptomyces cinnamonesis Streptomyces chartreusis Sporophore bilden Sporophore sind Haken, Sporophoren sind kompakte kompakte Spiralen, die Schleifen und einige lose Spiralen, die als Seitenals Seitenketten von Spiralen, die als Seiten- zweige auf Lufthyphen aufetwa 10 - 15 Sporen - zweige auf Lufthyphen auf- teten. Die Sporen sind kugelförmig bis oval, treten. Die Sporen sind in Ketten von mehr als 0,9 µ Durchmesser und in Ketten von mehr als 10 Sporen, kugelförmig bis 0,9 x 1,2 µ auftreten 10 Sporen, kugelförmig oval, 0,9 bis 1,2 µ Durchbis oval, 0,9 µ Durchmes- messer und 0,9 bis 1,2 x ser und 0,9 x 1,2 µ 1,2 bis 1,7 µ Tomatenpaste - Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Hafermehl-Agar Rückseite rötlich bis gelbbraun hellbraun mit orange bis braun braunen Vektoren Luftmycel: mittel- Luftmycel: beige mit Luftmycel: pulverförmig, grau rosa Färbung, samtig dunkelgrau mit blau-grü-Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: ner Färbung keines braun Lösliches Pigment: braun Glycerin-Aspas- Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: ragin-Agar Rückseite rötlich bis Rückseite dunkelrötlich braun braun bis braun Luftmycel: Luftmycel: beige mit Luftmycel: sehr spärlich mittelgrau rosa Färbung Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: keines braun hellbraun Tabelle IIe (Fortsetzung) Medium MA-2938 MA-4176 MA-4173 Czapek-Dox Agar Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: rötlichbraun Rückseite dunkelbraun orange- bis braun Luftmycel: Luftmycel: mässig, beige Luftmycel: sehr sparsam mit rosa Färbung sehr spärlich Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: keines braun hellbraun Hefeextrakt Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Vegetatives Wachstum: Dextrose + Salz- gelbbraun braun braun Agar Luftmycel: Luftmycel: spärlich, Luftmycel: gräulich @reme-farben bis weiss sehr spärlich Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: Lösliches Pigment: hellbraun hellbraun braun Lösliches Pigment keines dunkelbraun dunkelbraun auf Pepton-Eisen-Hefeextrakt-Agar Die vorstehende Beschreibung der das Antibiotikum 810A erzeugenden Mikroorganismen dient einfach zur Erläuterung der verwendbaren Arten von Stämmen und nicht zur Begrenzung der Erfindung auf einen Organismus, der die Merkmale dieser spezieller Beschreibung erfüllt. Die Erfindung umfasst die Verwendung and-erer Mikroorganismen einschliesslich Stämme e von Actinomyceten, die aus der Natur isoliert oder durch Mutation erhalten werden, beispielsweise solche, die durch natürliche Auswahl erhalten werden oder solche, die durch Mutationsmittel, beispielsweise Bestrahlung mit Röntgenstrahlen, Ultraviolett-Bestrahlung, Stickstoffsenfgase und dgl. die unter geeigneten Bedingungen ein identisches Antibiotikum ergeben, erhalten werden, 842A Kultur: Der das Antibiotikum 842A erzeugende Mikroorganismus ist ein bisher unbekannter Stamm von Actinomycete.Tomato Paste- Vegetative Growth: Vegetative Wax- Vegetative Wax Vegetative growth: oatmeal agar backside brown tum: backside tum: backside Backside brown yellow-brown dark brown aerial mycelium: aerial mycelium: velvety, aerial mycelium: aerial mycelium: velvety, dark gray, light gray and white velvety, bluish-velvety, medium gray and white gray and white and white Soluble pigment: Soluble pigment: Soluble pigment: Soluble pigment: light brown none light brown light brown glycerine vegetative growth: Vegetative wax Vegetative wax Vegetative growth: asparagine back dark brown tum: back tum: back back brown agar dark brown dark brown Aerial mycelium: aerial mycelium: light aerial mycelium: aerial mycelium: dark gray and cream-gray cream-colored and cream-colored and g @ au-colored light gray Soluble pigment: Soluble pigment: Soluble pigment: Soluble pigment: light brown none light brown light brown Tabel IIb (continued) Medium MA-2892 MA-3265 MA-4162 MA-4163 Czapek-Dox Vegetatives Wax Vegetative Wax Vegetative Vegetative Growth: Agar tum: dark brown tum: dark brown growth: yellow brown dark brown aerial mycelium: aerial mycelium: aerial mycelium: Aerial mycelium: very sparse, light gray and white, very sparse, very sparingly soluble Pigment: soluble pigment: soluble soluble pigment: dark brown light brown pigment: light brown light brown yeast extract - vegetative wax- vegetative wax- vegetative Vegetative growth: dextrose agar tum: dark brown tum: reverse growth: dark brown brown dark brown aerial mycelium: aerial mycelium: light gray aerial mycelium: aerial mycelium: very sparse very economical very sparse Soluble pigment: Soluble pigment: Soluble pigment Soluble pigment: light brown none ment: light brown light brown Soluble dark brown Pigment on peptone-iron-yeast extract cooking Table IIb (continued) Medium MA-2892 MA-3265 MA-4162 MA-4163 Morphology Sporophores are short, compact Spirals that appear as side branches on aerial hyphae. Spores are spherical to oval - 0.9 to 1.2 µ diameter and 0.9 - 1.2 x 1.2 - 1.7 µ, chains of approx 10 to 15 spores of tomato paste - vegetative growth: reverse side is dark brown oatmeal agar Aerial mycelium: aerial mycelium: aerial mycelium: velvety, bluish-velvety, medium-velvety, medium gray velvety, dark gray gray and cream gray and cream and cream colors and cream-colored colored soluble pigment: light brown glycerine vegetative wax Vegetative wax Vegetative wax Vegetative wax asparagine: back tum: back tum: dark gray tum: back yellow agar dark brown dark brown brown Aerial mycelium: dark aerial mycelium: aerial mycelium: spär- aerial mycelium: light gray gray and cream medium gray and light grayish and cream-colored colors cream-colored soluble pigment: light brown Czapek-Dox Vegetative wax- Vegetative wax- Vegetative wax- Vegetative Wax agar do: brown tum: reverse tum: brown tum: yellow-brown brown aerial mycelium: very aerial mycelium: light aerial mycelium: very aerial mycelium: very sparse gray and creamy sparse Sparingly soluble pigment: color soluble pigment: soluble pigment: brown soluble Pigment: brown light brown light brown Table IIb (continued) Medium MA-4164 MA-4165 MA-4166 MA-4167 Yeast extract- Vegetative growth: dark brown dextrose- Aerial mycelium: very sparingly agar. Soluble pigment: light brown. Soluble pigment dark brown pept / on iron yeast extract agar Table IIb (continued) Medium MA-4177 MA-4178 MA-4180 Morphology Sporophores are short, compact spirals, which appear as side branches on aerial hyphae. The spores are spherical to oval - 0.9 to 1.2 µ diameter and 0.9 to 1.2 x 1.2 to 1.7 µ in chains of about 10 up to 15 spores of tomato paste- Vegetative growth: Vegetative growth: Vegettives Growth: oatmeal agar back side yellow-brown back side brown back side brown aerial mycelium: velvety, aerial mycelium: velvety, aerial mycelium; velvety, dark gray and dark gray dark gray and creamy white color Soluble pigment: light brown glycerine vegetative growth: Vegetative growth: Vegetative growth: A # paragin- reverse brown reverse dark brown reverse side dark brown agar aerial mycelium: aerial mycelium: aerial mycelium: dark gray dark gray mixture of light and dark gray Soluble pigment: light brown Czapek-Dox Vegetative growth: Vegetative growth: Vegetative growth: agar yellow-brown dark brown yellow brown aerial mycelium: very sparingly soluble pigment: light brown Tabel IIb (continued) Medium MA-4177 MA-4178 MA-4180 Yeast Extract - Vegetative Growth: Vegetative growth: Vegetative growth: dextrose agar dark brown brown brown Aerial mycelium: aerial mycelium: aerial mycelium: sparse-greyish very sparse very sparingly soluble Pigment: light brown soluble pigment on peptone iron dark brown yeast extract agar T a b e l l e IIc Cultural Properties of Strains Producing Antibiotic 810A of Streptomyces fimbriatus Medium MA-4159 MA-4169 MA-4170 MA-4179 MA-4161 morphology Sporophores are short, compact spirals and some loops that are sporophores occur as side branches on aerial hyphae. The spurs are ball-short hooks and shaped to oval - 0.9 µ in diameter and 0.9 x 1.2 µ with chains of loops that as about 10 to 15 spore side branches appear on aerial mycelium. Spurs in chains of less than 10 spores are spherical to oval, 0.9 µ in diameter and 0.9 x 1.2 µ Tomato Vegetative Vegetative Wax Vegetative Vegetative Vegetative Wax paste - growth: back: back growth: growth: tum: yellow-brown Hafemehl- side yellow-brown yellow-brown reverse side yellow- reverse side yellow- aerial mycelium: agar aerial mycelium: Aerial mycelium: moderate, brown brown sparse, grayish moderate, light gray light gray aerial mycelium: Aerial mycelium: moderate, light-sparse gray and cream-grayish colors Soluble pigment: light brown glycerin- vegetative vegetative wax- vegetative vegetative vegetative Wax asparagine growth: dark: dark brown growth: growth: tum: back agar light brown to light brown to gray dark brown dark brown yellow brown with gray light to grayish to gray reddish yellow-brown vectors Tabel IIc (continued) Medium MA-4159 MA-4169 MA-4170 MA-4179 MA-4161 Vegetative Czapek-Dox Vegetative Vegetative Wax Vegetative Wax Growth: Dun Vegetative Agar Growth: tum: dark brown: dark brownish growth: dark brown light to gray light to gray to gray yellow-brown light to gray aerial mycelium: aerial mycelium: moderate, air @ ycel: moderate, aerial mycelium: aerial mycelium: very very sparse gray gray very Sparse Sparse Lich Soluble Soluble pigment: I @ soluble pigment: Soluble Soluble pig pigment: brown @raun pigment: ment: brown brown light brown yeast extract Vegetative Vegetative Wax Vegetative Wax- Vegetative Vegetative Dextrose + Growth: tum: dark brown- growth: dark brown- growth: salt agar dark brownish to grayish to gray light brownish brownish to gray to gray Aerial mycelium: very sparse soluble pigment: brown soluble pigment on dark brown Peptone Iron Yeast Extract Agar T a b l l e IId cultural characteristics from strains of Streptomyces halstedii Kedium producing antibiotic 810A MA-4168 MA-4175 MA-4181 Morphology Sporophores are long, loose spirals that are known as Side branches occur on aerial hyphae. The spores are spherical to oval - 0.9 µ diameter and 0.9 x 1.2 µ - in chains of more than 10 spores of tomato paste - Vegetative growth: Vegetative growth: Vegetative growth: He @ nmehlegar back brown reverse side yellow-brown reverse side brown aerial mycelium: aerial mycelium: aerial mycelium: powdery, dark- dark gray and white, dark gray and white gray powdery soluble pigment: none Glycerin-Aspa- Vegetative growth: Vegetative growth: Vegetative growth: ragin agar reverse side brown to reverse side greyish reverse side grayish dark brown Aerial mycelium: aerial mycelium: aerial mycelium: powdery, dark powdery, predominantly dark gray, powdery gray and white and dark gray mixed with light gray and white solubles Pigment: none Table IId (continued) Medium MA-4168 MA-4175 MA-4181 Czapek-Dox Vegetative growth: Vegetative growth: Vegetative growth: Agar cream-colored backside reddish-cream-colored brown aerial mycelium: aerial mycelium: aerial mycelium: greyish cream- greyish cream-colored very sparse colors Soluble pigment: none Yeast extract Vegetative growth: Vegetative growth: Vegetative growth: Dextrose + yellow-brown yellow-brown brown salt agar aerial mycelium: aerial mycelium: aerial mycelium: grayish, scanty scanty, greyish scanty, greyish Soluble pigment: none soluble Pigment on Peptone Iron None Yeast Extract Agar Tabel IIe Cultural Characteristics of Streptomyces Species Producing Antibiotic 810A Medium MA-2938 MA-4176 MA-4173 Morphology Streptomyces rochei Streptomyces cinnamonesis Streptomyces chartreusis sporophores form Sporophores are hooks that are sporophores compact compact spirals that are loops and some loose spirals that act as pages as Side chains of spirals that appear as side branches on aerial hyphae on about 10-15 Spores - twigs appeared on aerial hyphae. The spores are spherical to oval, step. The spores are in chains of more than 0.9 µ in diameter and in chains of more than 10 spores, spherical up to 0.9 x 1.2 µ, there are 10 spores, spherical oval, 0.9 to 1.2 µ diameter to oval, 0.9 µ diameter and 0.9 to 1.2 x ser and 0.9 x 1.2 µ 1.2 to 1.7 µ tomato paste - Vegetative growth: Vegetative growth: Vegetative growth: oatmeal agar reverse reddish to yellow-brown light brown with orange to brown brown vectors aerial mycelium: medium aerial mycelium: beige with aerial mycelium: powdery, gray-pink coloring, velvety dark gray with blue-green-soluble pigment: Soluble pigment: no coloration brown Soluble pigment: brown glycerine asphalt Vegetative growth: Vegetative growth: Vegetative growth: ragin-agar back reddish to reverse dark reddish brown brown to brown aerial mycelium: aerial mycelium: beige with aerial mycelium: very sparse, medium gray pink coloration. Soluble pigment: soluble Pigment: Soluble pigment: none brown light brown Table IIe (Continued) Medium MA-2938 MA-4176 MA-4173 Czapek-Dox Agar Vegetative growth: Vegetative growth: Vegetative growth: reddish brown reverse side dark brown orange to brown aerial mycelium: aerial mycelium: moderate, beige aerial mycelium: very economical with pink coloring very sparingly soluble pigment: soluble pigment: soluble pigment: none brown light brown yeast extract Vegetative growth: Vegetative growth: Vegetative growth: Dextrose + salty yellow brown brown brown agar aerial mycelium: aerial mycelium: sparse, aerial mycelium: greyish @ reme-colored to white very sparse Soluble pigment: Soluble pigment: Soluble pigment: light brown light brown brown Soluble pigment none dark brown dark brown on peptone iron yeast extract agar The description above of the microorganisms producing antibiotic 810A is simply illustrative of the types of strains that can be used and not to limit the invention to one Organism that meets the characteristics of this particular description. The invention includes the use of other microorganisms including strains of actinomycetes, which are isolated from nature or obtained by mutation, for example those which are obtained by natural selection or those obtained by mutation means, for example X-ray irradiation, ultraviolet irradiation, nitrogen mustard gases and the like that give an identical antibiotic under suitable conditions, 842A culture: the microorganism producing antibiotic 842A is a previously unknown strain of Actinomycete.

Das ursprüngliche Isolat wurde als eine Einzelkolonie aus Boden auf einer Agar-Schrägkultur erhalten und in einem Medium der folgenden Zusammensetzung gezüchtet: Medium B: Eefeextrakt 10,0 g Glucose 10,0 g Phosphat-Puffer 2,0 ml MgSO4.7H2O 0,05 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml pH 6,5 * Phosphat-Puffer: KH2PO4 91,0 g Na2HPO4 95,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Es wurde festgestellt, dass nach mehrtägigem Wachstum keine Sporenbildung festgestellt werden konnte. Der Mikroorganismus erzeugte ein Antibiotikum, das sich von bekannten Antibiotika auf Grund seines Profils in verschiedenen biologischen trnd chemischen Untersuchungen unterschied. Vergleiche dieser Daten mit solchen, die über bekannte Antibiotika erhalten wurden1 ergaben, dass 842A ein neuer Körper war.The original isolate was based on a single colony of soil obtained on an agar slant and in a medium of the following composition cultured: Medium B: tea extract 10.0 g glucose 10.0 g phosphate buffer 2.0 ml MgSO4.7H2O 0.05 g distilled water 1000.0 ml pH 6.5 * phosphate buffer: KH2PO4 91.0 g Na2HPO4 95.0 g of distilled water 1000.0 ml It was found that after several days Growth no spore formation could be determined. The microorganism produced an antibiotic that differs from known antibiotics due to its profile in different biological trnd chemical investigations differed. Compare these data with those obtained from known antibiotics1 revealed that the 842A was a new body.

842A Taxonomie: Der 842A erzeugende Mikroorganismus (Kultur M-2908) wurde als ein neues Actinomycete identifiziert.842A Taxonomy: The 842A Producing Microorganism (Culture M-2908) was identified as a new actinomycete.

Die bei dieser Bestimmung verwendete Taxonomie ist in "Bergey's Manual of Determinative Bacteriology", 7. Ausgabe und in l'2he Actinomycetes", Band 2, "Classification, Identification and Deseription of Genera and Species", S. A.The taxonomy used in this determination is in Bergey's Manual of Determinative Bacteriology ", 7th edition and in l'2he Actinomycetes", Volume 2, "Classification, Identification and Description of Genera and Species", S.A.

Waksman (1961) beschrieben. Unter Verwendung dieses Verfahrens, wurde festgestellt, dass die Kultur zum Genus Streptomyces gehört und viele der Attribute der bekannten Species Streptomyces fradiae besitzt. Biochemisch stimmt sie hauptsächlich vollständig mit letzterer überein. Morphologisch bestehen jedoch wesentliche Unterschiede. Beispielsweise ist die Farbe des Luftmycels von 5. fradiae ein seemuschelfarbenes Rosa, während die Kultur MA-2908 gewöhnlich cremefarben gefärbt ist. Auch zeigt das vegetative Wachstum in der MA-2908-Kultur Pigmentunterschiede auf verschiedenen verwendeten Medien, und, wie vorstehend angegeben, wurde auf Standard-Taxonomi e-Medium keine Sp orenbi l dung wahrgenommen.Waksman (1961). Using this procedure, was found that the culture belongs to the genus Streptomyces and many of the attributes of the known species Streptomyces fradiae. Biochemically it is mainly correct completely coincide with the latter. However, there are significant morphological differences. For example, the color of the Luftmycel of 5. fradiae is a sea shell-colored Pink, while culture MA-2908 is usually cream in color. Also shows vegetative growth in the MA-2908 culture pigment differences on different media used, and as indicated above, was based on standard Taxonomi e medium no formation of sp ors perceived.

Auf der Basis dieser Unterschiede wurde die Kultur als eine neue Spe.cies: Streptomyces lactamdurans bezeichnet. Die folgende Tabelle III beschreibt die biochemischen LEigenschaften der Streptomyces lactamdurans-Species und solche der bekannten Streptomyces fradiae. Sämtliche Werte in Tabelle III wurden nach 3 wöchiger Inkubierung bei 280 C ermittelt, ausgenommen dort, wo es anders vermerkt ist. Der pH-Wert des verwendeten Mediums bei diesen Untersuchungen war etwa neutral, nämlich 6.8 bis 7,2. Die physiologischen Versuche wurden nach Ablauf von 7 und 21 Tagen durchgeführt. T a b e 1 1 e III 842A biochemischer Vergleich Versuch Streptomyces Streptomyces fradiae lactamdurans Luftmycel gerade, einige gerade, Verzweigungs-Verzweigungen fäden.Based on these differences, the culture was identified as a new Spe.cies: Called Streptomyces lactamdurans. The following Table III describes the biochemical L Properties of the Streptomyces lactamdurans species and those of the known Streptomyces fradiae. All values in Table III were obtained after 3 weeks of incubation at 280 C, except where otherwise noted. The pH of the used The medium in these investigations was roughly neutral, namely 6.8 to 7.2. The physiological Experiments were carried out after 7 and 21 days. T a b e 1 1 e III 842A biochemical comparison experiment Streptomyces Streptomyces fradiae lactamdurans aerial mycelium straight, some straight, branching twigs.

Conidien nicht ermittelt stabförmig Lösliches Pigment keines keines optimale Tempe- 280 C 250 o ratur Invertase negativ negativ Reduktion von negativ negativ Nitrat Gelatine-Ver- positiv positiv flüssigung Cellulose- negativ negativ verbrauch Lackmusmilch alkalische alkalische Peptonisierung Peptonisierung 842A Morphologie: Sporophore wurden nicht ermittelt, wenn die Kultur auf den bei der Beschreibung der Kultureigenschaften aufgeführten Medium gezüchtet wurde1 selbst obgleich wiederholte Beobachtungen bis zu 8 Wochen durchgeführt wurden. Jedoch zeigten gefarbte Impressionsobjektträger lange Fäden, von denen viele in Untereinheiten verschiedener Grössen im allgemeinen breitgeformt und von etwa 0,9 x 1,7/u Grösse unterteilt waren.Conidia not determined rod-shaped Soluble pigment none none optimal temperature invertase negative negative reduction of negative negative nitrate gelatine positive positive liquid cellulose negative negative consumption litmus milk alkaline alkaline peptonization peptonization 842A Morphology: Sporophores were not identified when the culture was on the when Description of the cultural characteristics listed medium was grown1 itself although repeated observations were made for up to 8 weeks. However, showed colored impression slides long threads, many of which are in subunits of various sizes, generally broad in shape and about 0.9 x 1.7 / u in size were divided.

Das Luftmycel ist kurz, gerade, wenig verzweigt. ES scheint etwa die gleiche Grösse wie das vegetative Mycel aufzuweisen -O,9ji 3reite. Es ist hell, pulverförmig und leicht abkratzbar.The aerial mycelium is short, straight, not very branched. IT seems about that to be the same size as the vegetative mycelium -O, 9ji 3reite. It's bright, powdery and easy to scratch off.

Das vegetative Mycel ist grammpositiv, nicht säurefest. Es haftet fest an dem Agar und ist in einigen Fällen Sn den Agar eingebettet. Es besteht eine gewisse Aufspaltung zu Stäben bei der Schüttelkolbenzüchtung, die jedoch nicht erheblich ist. Das Vegetative Mycel auf den Schüttelkolben und den stationären Kolben (Impfmedium 4 bis 6 Tage, @@o C) zeigte einige "Keime" und kurze, verdickte, fast knoten- oder keulenartige Segmente auf dem mycel, jedoch waren diese nicht zahlreich und ihre Bedeutung, falls überhaupt, ist nicht oekannt.The vegetative mycelium is gram-positive, not acid-fast. It sticks firmly attached to the agar, and in some cases Sn is embedded in the agar. There is one some splitting into rods in shake flask cultivation, but this is not significant is. The vegetative mycelium on the shake flasks and the stationary flasks (inoculation medium 4 to 6 days, @@ o C) showed some "germs" and short, thickened, almost knot- or club-like segments on the mycelium, but these were not numerous and theirs Meaning, if at all, is not known.

Tomatenpaste-Hafermehl-Agar Vegetatives Wachstum - Rückseite orange, eben, trockenes Aussehen, faltig Luftmycel - spärlich, creme-farben gein lösliches Pigment Czapek-Dox Agar Vegetativ - eben, tiefcreme- arbe Luftmycel - pulverförmig, creme-farbe@ weiss Kein lösliches Pigment Glycerin-Asparagin-Agar Vegetatives Wachstum - eben, Rückseite goldgelb bis orange Luftmycel - pulverförmig, creme-farben mit Blasspfirischfarbenen Tönungen Lösliches Pigment - blass-bernsteill-farb en Eialbumin-Agar Vegetatives Wachstum - eben, creme-farben bis gelb luftmycel - pulverförmig, creme-farben Kein lösliches Pigment Calcium-Malat-Agar Vegetatives Wachstum - eben, Rückseite - gelb mit orangefarbenem Rand Luftmycel - pulverförmig, weiss bis creme-farben mit pfirsich-farbenem Rand Kein lösliches Pigment Tyrosin-Nähragar Vegetatives Wachstum - eben, gelbbraun bis orange Luftmycel - spärlich, creme-farben mit weiss Kein lösliches Pigment Tyrosin-Kristalle werden zersetzt Melasse - Hefe-Hydrolysat-Agar Vegetatives Wachstum - eben, Rückseite - orange Luftmycel - pulverförmig, creme-farben weiss gein lösliches Pigment Nähragar Vegetativ - eben goldgelb Luftmycel - pulverförmig, creme-farben Kein lösliches Pigment Lackmusmilch Spärliches Ringwachstum - gelbbraunes, vegetatives Wachstum -kein Luftmycel Peptonisierung: alkalische Reaktion pH 7,3 bis 7,4 (Vergleich pH - 6,7) Entrahmte Milch Npärliches Ringwachstum - gelbbraun bis orange Vegetatives Wachstum - kein Luftmycel hell-gelbbraunes lösliches Pigment Peptonisierung - alkalische Reaktion PE 7,2 (Vergleich pH - 6,6) Magermilch-Agar Vegetatives Wachstum - eben, orange Luftmycel - mässig, creme-farben bis blass-korallen-farben hell-gelbbraunes lösliches Pigment Hydrolyse von Casein Gelatine-Ansatz spärliches, creme-farbenes bis orange-farbenes, vegetatives Kolbenwachstum innerhalb des Rohrs suspendiert Kein lösliches Pigment Vollständige Verflüssi gung Gelatine-Nähragar Vegetatives Wachstum - eben, orange Luftmycel: spärlich, pulverförmig creme-farben gein lösliches Pigment Verflüssigung von Gelatine Stärke-Nähragar Vegetatives Wachstum - eben, orange-farben Luftmycel - spärlich, pulverförmig, rosa-farben bis cremefarben Kein lösliches Pigment nässige Hydrolyse der Stärke Synthetischer Stärkeagar Vegetatives Wachstum - eben, Rückseite creme-farben mit orange-farbenem Rand Luftmycel - pulverförmig, weise mit pfirsich-farbenem Rand kein lösliches Pigment Mässige Hydrolyse der Stärke Löffler's Blutserum-Agar Vegetatives Wachstum - creme-farben bis orange Luftmycel - keines Kein lösliches Pigment Keine Verflüssigung Pepton-Eisen-Hefeextrakt-ARar Vegetatives Wachstum - creme-farben Luftmycel - spärlich, weiss Kein lösliches Pigment Mikroaerophiles Wachstum (Hefeextrakt - Dextrose-Stichkultur - 40 mm Tiefe des Stichs) Gutes Oberflächenwachstum längs des oberen 1/4 der Stichlinie Temperatur - Hefeextrakt-Dextrose-Schrägkulturen Gutes Wachstum bei 280 C Spärliches Wachstum bei 37° C Kein Wachstum bei 500 C.Tomato paste oatmeal agar Vegetative growth - backside orange, even, dry appearance, wrinkled aerial mycelium - sparse, cream-colored, completely soluble Pigment Czapek-Dox Agar Vegetative - even, deep cream - colored aerial mycelium - powdery, creme-color @ white No soluble pigment Glycerine asparagine agar Vegetative growth - even, reverse golden yellow to orange aerial mycelium - powdery, cream-colored with Pale peach tints. Soluble pigment - pale amber in egg albumin agar Vegetative growth - flat, cream-colored to yellow aerial mycelium - powdery, cream-colored No soluble pigment Calcium-Malate-Agar Vegetative growth - flat, back side - yellow with orange Edge of aerial mycelium - powdery, white to cream-colored with a peach-colored rim. No soluble pigment. Tyrosine nutrient agar Vegetative growth - even, yellow-brown to orange aerial mycelium - sparse, cream-colored with white no soluble pigment tyrosine crystals are decomposed molasses - yeast hydrolyzate agar Vegetative growth - flat, reverse side - orange aerial mycelium - powdery, cream-colored white gein soluble pigment nutrient agar vegetative - even golden yellow aerial mycelium - powdery, cream-colored no soluble pigment litmus milk sparse ring growth - yellow-brown, vegetative growth - no aerial mycelium peptonization: alkaline reaction pH 7.3 up to 7.4 (comparison pH - 6.7) Skimmed milk N sparse ring growth - yellow-brown to orange vegetative growth - no aerial mycelium light yellow-brown soluble pigment Peptonization - alkaline reaction PE 7.2 (comparison pH - 6.6) Skimmed milk agar Vegetative growth - even, orange Aerial mycelium - moderate, cream-colored to pale coral-colored light yellow-brown soluble pigment hydrolysis of casein Gelatine base sparse, cream-colored to orange-colored, vegetative bulb growth Suspended inside the tube. No soluble pigment. Complete liquefaction Gelatine nutrient agar Vegetative growth - flat, orange aerial mycelium: sparse, powdery cream-colored gein soluble pigment liquefaction of gelatine starch nutrient agar vegetatives Growth - flat, orange-colored aerial mycelium - sparse, powdery, pink-colored to off-white No soluble pigment. Wet hydrolysis of starch. Synthetic starch agar Vegetative growth - flat, reverse side cream-colored with an orange-colored border aerial mycelium - powdery, white with a peach-colored rim, no soluble pigment. Moderate Hydrolysis of starch Löffler's blood serum agar Vegetative growth - cream-colored to orange aerial mycelium - none No soluble pigment No liquefaction Peptone Iron Yeast Extract ARar Vegetative growth - cream-colored aerial mycelium - sparse, white No soluble pigment Microaerophilic growth (yeast extract - dextrose stitch culture - 40 mm depth of the stitch) Good surface growth along the top 1/4 of the temperature stitch line - yeast extract dextrose slants Good growth at 280 C Sparse growth at 37 ° C No growth at 500 C.

Hefeextrakt - Dextroseagar Vegetatives Wachstum - eben, goldgelb Luftmycel - pulverförmig, creme-farben bis blas fleisch-farben rosa Kein lösliches Pigment Kartoffelschnitt Vegetatives Wachstum - trocken, eben, creme-farben bis orange Luftmycel - spärlich, creme-farben Kein lösliches Pigment Reduktion von Nitraten - negativ.Yeast extract - dextrose agar Vegetative growth - flat, golden yellow aerial mycelium - powdery, cream-colored to pale flesh-colored pink No soluble pigment Potato cut Vegetative growth - dry, even, cream-colored to orange aerial mycelium - sparse, cream-colored. No soluble pigment. Reduction of nitrates - negative.

Sämtliche Werte wurden nach 3 wöchiger Inkubierung bei 280 C genommen, ausgenommen, wo es anders vermerkt wird. Physiologische Versuche erfolgten nach 7 nnd 21 Tagen.All values were taken after 3 weeks of incubation at 280 C, except where otherwise noted. Physiological tests followed 7 and 21 days.

Die morphologischen Unterschiede zwischen Streptomyces lactamdurans und Streptomyces fradiae sind in der folgenden Tabelle IV aufgeführt. Die Beobachtungen erfolgten auf den in Tabelle IV angegebenen Medien in Wachsintervallen von 1 Woche, 3 Wochen und 8 Wochen. Das Luftmycel von s. lactamdurans ist kurz und gerade mit wenig Verzweigung. Es scheint etwa die gleiche Grösse wie das vegetative flycel aufzuweisen, d. h. O,9/u Breite. Es ist hell, pulverförmig und leicht abkratzbar. Das vegetative Mycel ist gram positiv, es'ist nicht säurefest. Es haftet fest an einigen Medien und ist in Agar eingebettet. Es besteht eine gewisse Aufspaltung in Stäbe bei Schüttelkolben-Wachstum, jedoch ist dies nicht erheblich. Das vegetative Mycel aus Schüttelkolben und stationären Kolben (Impfmedium während 6 Tagen, 280 C) zeigt einige "Keime" und kurze, verdickte, fast keulenförmige Segmente auf dem Mycel, jedoch waren diese nicht zahlreich.The morphological differences between Streptomyces lactamdurans and Streptomyces fradiae are listed in Table IV below. The observations were made on the media given in Table IV at waxing intervals of 1 Week, 3 weeks and 8 weeks. The aerial mycelium of s. Lactamdurans is short and straight with little branching. It seems about the same size as the vegetative flycel to have, d. H. O, 9 / u width. It's light, powdery, and easy to scratch off. The vegetative mycelium is gram positive, it's not acid-fast. It sticks firmly some media and is embedded in agar. There is some division in rods with shake flask growth, however this is not significant. The vegetative Mycelium from shake flasks and stationary flasks (inoculation medium for 6 days, 280 C) shows some "germs" and short, thickened, almost club-shaped segments on the Mycelium, however, these were not numerous.

Sämtliche Werte in Tabelle IV wurden nach 3wöchiger Inkubierung bei 280 C genommen, ausgenommen dort, wo es anders vermerkt ist. Der pH-Wert des zu diesen Untersuchungen verwendeten Mediums war etwa neutral, d. h. 6,8 bis 7,2. Die physiologischen Versuche erfolgten nach Ablauf von? 7 und 21 Tagen. Die zur Beschreibung verwendeten Farben stehen in Übereinstimmung mit den Definitionen nach "Color Harmony Manual" 4, Ausgabe, 1958; Container Corporation of America. T a b e l l e IV 842A Morphologischer Vergleich von Streptomyces lactamdurans und Streptomyces fradias Medium Streptomyces lactamdurans Streptomyces fradiae Czapek-Dox Vegetatives Wachstum: eben, tief-creme- Vegetatives Machstum: farblos Agar farben Luftmycel: Muschelschalenrosa Luftmycel: pulverförmig, creme-farbenweiss Kein Lösliches Pigment Nähragar Vegetatives Wachstum: eben, creme-far- Vegetatives Wachstum: orange bis gelb fen bis goldgelb Luftmycel: pulverförmig, creme-farben Kein lösliches Pigment Glycerin- Vegetatives Wachstum: eben Rückseite - Vegetatives Wachstum: sand-farben Asparagin- goldgelb bis agar orange Luftmycel: pulverförmig, creme-farben mig blass-pfirsich-farbener Tönung Lösliches Pigment: blass-bernstein-farben Hefeextrakt- Vegetatives Wachstum: eben, goldgelb Vegetatives Wachstum: sand-farben Dextrose- Luftmycel: pulverförmig, creme-farben agar bis blass-fleischrosa Kein lösliches Pigment Synthetischer Vegetatives Wachstum: eben, Rückseite Vegetatives Wachstum: farblos Stärkeagar creme-farben mit Luftmycel: Seemuachelrosa orange-farbenen Rändern Luftmycel: pulverförmig, weiss mit pfirsich-farbenen Rändern Lösliches Pigment: Mässige Hydrolyse der Stärke Tabelle IV (Fortsetzung) Medium Streptomyces lactumdurans Streptomyces fradiae Kartoffel- Vegetatives Wachstum: trocken, eben, Vegetatives Wachstum: orange schnitt creme-farben bis orange Luftmycel: spärlich, creme-farben Kein Lösliches Pigment Gelatine- Vegetatives Wachstum: spärliche, creme- Vegetatives Wachstum: creme-farben bis stich farbene bis braun orange-farbene Flocken suspendiert in dem Rohr Luftmycel: Kein lösliches Pigment Vollständige Verflüssigung Lackmus- Vegetatives Wachstum: gelbbraun, spär- Vegetatives Wachstum: creme-farben milch licher Wuchsring Luftmycel: keines Peptonisierung: alkalische Reaktion, pH 7,3 bis 7,4 (Vergleich pH - 6,7) 842A Kohlehydrat-Verwertung: Die Streptomyces lactamdurans Kultur (MA-2908) wurde auch hinsichtlich ihrer Fähigkeit, verschiedene Kohlehydrate zu verwerten, oder zu assimilieren, untersucht, indem der Mikroorganismus in einem synthetischen Grund medium (g. G. Pridham und D. Gottlieb, 1948), das 1 % des Kohlehydrats enthielt, bei 280 C während 3 Wochen gezüchtet wurde. Tabelle V gibt die Verwertung oder, Assimilation dieser Kohlehydratquellen durch die Streptomyces lactamdurans Kultur (M19-2908) wieder. Die Erklärung der Zeichen in Tabelle V sind wie folgt: + bezeichnet gutes Wachstum, + bezeichnet geringes Wachstum und - bezeichnet kein Wachstum auf dem speziellen Kohlehydrat.All values in Table IV were after 3 weeks of incubation at 280 C, except where otherwise noted. The pH of the too The medium used in these studies was approximately neutral; H. 6.8 to 7.2. the physiological tests were carried out after? 7 and 21 days. The description The colors used are in accordance with the definitions according to "Color Harmony Manual "4, edition, 1958; Container Corporation of America. T a b e l l e IV 842A Morphological comparison of Streptomyces lactamdurans and Streptomyces fradias Medium Streptomyces lactamdurans Streptomyces fradiae Czapek-Dox Vegetatives Growth: flat, deep-cream vegetative power: colorless agar-colored aerial mycelium: Clamshell pink aerial mycelium: powdery, cream-colored white No soluble pigment Nutrient agar Vegetative growth: even, cream-colored Vegetative growth: orange to yellow to golden yellow aerial mycelium: powdery, cream-colored no soluble pigment Glycerin- Vegetative growth: flat back side - Vegetative growth: sand-colored Asparagine-golden yellow to agar orange aerial mycelium: powdery, cream-colored and pale-peach-colored Tint Soluble pigment: pale amber yeast extract - vegetative growth: even, golden yellow vegetative growth: sand-colored dextrose aerial mycelium: powdery, cream-colored agar to pale flesh-pink No soluble pigment Synthetic vegetative material Growth: flat, reverse side Vegetative growth: colorless, cream-colored starch agar with aerial mycelium: sea mucus pink, orange-colored edges aerial mycelium: powdery, white with peach-colored edges. Soluble pigment: Moderate hydrolysis of starch Tabel IV (continued) Medium Streptomyces lactumdurans Streptomyces fradiae potato Vegetative growth: dry, even, Vegetative growth: orange cut, cream-colored to orange aerial mycelium: sparse, cream-colored, no soluble pigment gelatine vegetative Growth: sparse, creamy vegetative growth: cream-colored to pale-colored to brown-orange-colored flakes suspended in the tube aerial mycelium: not soluble Pigment complete liquefaction litmus vegetative growth: yellow-brown, sparse Vegetative growth: cream-colored, milky growth ring aerial mycelium: none Peptonization: alkaline reaction, pH 7.3 to 7.4 (comparison pH - 6.7) 842A Carbohydrate Utilization: The Streptomyces lactamdurans culture (MA-2908) was also assessed for its ability to to utilize, or assimilate, various carbohydrates, studied by the microorganism in a synthetic basic medium (G. Pridham and D. Gottlieb, 1948), which contained 1% of the carbohydrate, was grown at 280 ° C for 3 weeks. Table V sets forth the recovery, or assimilation, of these carbohydrate sources the Streptomyces lactamdurans culture (M19-2908) again. The explanation of the signs in Table V are as follows: + indicates good growth, + indicates poor growth Growth and - denotes no growth on the special carbohydrate.

T a b e l l e V Kohlehydrat MA-2908 Kohlehydrat MA-2908 Kultur Kultur Glucose + Rhamnose Arabinose + Cellulose Maltose + Fructose + Raffinose + Inosit Saccharose - Acetat + Xylose + Citrat + Mannit + Paraffin Lactose - Glycerin Mannose -Die in den Tabellen III, IV und V beschriebenen Eigenschaften wurden zur Zurückführung der Streptomyces lactamdurans Xultur (MA-2908), auf eine Species-Klassifikation über die in "Bergey1s Manual of Determinative Bacteriology", 7. Ausgabe, Seiten 694 bis 829 (1957) und in "The Actinomycetes", Band 2, Seiten 61 bis 292 (1961) beschriebenen Schlüssel verwendet. T a b e l l e V Carbohydrate MA-2908 Carbohydrate MA-2908 Culture Culture Glucose + rhamnose arabinose + cellulose maltose + fructose + raffinose + inositol Sucrose - Acetate + Xylose + Citrate + Mannitol + Paraffin Lactose - Glycerin Mannose -The properties described in Tables III, IV and V have been used for tracing back of Streptomyces lactamdurans Xultur (MA-2908), on a species classification about the in "Bergey's Manual of Determinative Bacteriology", 7th edition, pages 694 to 829 (1957) and in "The Actinomycetes", Volume 2, pages 61 to 292 (1961) described key is used.

Ein Vergleich der detailierten Eigenschaften der Streptomyces lactamdurans Kultur mit bekannten Species zeigt, dass die kultur biochemisch Streptomyces fradiae ähnlich ist.A comparison of the detailed properties of Streptomyces lactamdurans Culture with known species shows that culture biochemical Streptomyces fradiae is similar.

Jedoch bestehen, wie oben angegeben, bedeutende morphologische Unterschiede, beispielsweise hinsichtlich der Farbe des Luftmycels von S. fradiae, die seemuschelrosa-farben ist im Vergleich zur Creme-Farbe der Kultur. Auch wurde, während das vegetative Wachstum bei S. fradiae keine Pigmentunterschiede auf verschiedenen Medien ergibt, keine Sporenbildung bei der Kultur festgestellt. Auf der Basis dieser Unterschiede und der in den vorangehenden Tabellen beschriebenen Eigenschaften, wurde der das Antibiotikum 842A (MA-2908) erzeugende 1-likroorganismus als neue Species Streptomyces lactamdurans bezeichnet.However, as indicated above, there are significant morphological differences, for example with regard to the color of the air mycelium of S. fradiae, the sea shell pink colors is compared to the cream color of the culture. Also was while the vegetative Growth in S. fradiae shows no pigment differences on different media, no sporulation found in the culture. On the basis of these differences and the properties described in the preceding tables, the Antibiotic 842A (MA-2908) producing 1-likroorganism as a new species Streptomyces lactamdurans.

Dic vorangehende Beschreibung des Mikroorganismus, welcher daz Antibiotikum 842A erzeugt, dient lediglich zur Erläuterung des Art von Stämmen der Iilkroorganismen, die verwendet werden können, und nicht zur Begrenzung auf Mikroorganissen, welche diese spezielle Beschreibung erfüllen. Die Erfindung schliesst die Verwendung anderer PEkroorgan.isrmen ein, einschliesslich Stämme von Actinomyceten sowohl isoliert aus der Natur als auch durch Mutation erhalten, beispielsweise liefern solche, - durch natürliche Auswahl solcher durch Mutationsmittel, wie beispielsweise Rön-tgenstrahl-Bestrahlung, Ultraviolett-Bestrahlung, Stickstoffsenfgase und dgl., erhaltene Stämme unter geeigneten Bedingungen das Produkt 842A In vitro und in vivo Untersuchungen Antibiotikum 810l, in vitro: Die biologische in vitro Charakterisierung des Antibiotikums 810A erfolgte durch die Petri-Schalen-Agar-Diffusionsmethode. Diese Versuche wurden so durchgeführt, dass mit der Antibiotikumlösung angefeuchtete 7 mm-Scheiben auf die Oberflache von Petri-Schalen gebracht wurden, die mit 5 ml Difco-Nähragar und 0,2%ige@ Hefeextrakt begossen wurden, der mit 5 oder 10 ml Impfstoff je 150 ml Medium beimpft war, und bei 25V C oder 37V C 16 Stunden inkubiert wurde. Die Methode und Abhandlung über diese Versuche sind in der Veröffentlichung: "Cross Resistance Studies and Antibiotika Identification", applied Nicrobiology, Band 6, Seiten 392 bis 398 (1958) beschrieben.The preceding description of the microorganism, which antibiotic 842A generated, serves only to explain the type of strains of the Iilkroorganisms, which can be used, and not limited to microorganisms which meet this particular description. The invention includes the use of others PEkroorgan.isrmen, including strains of actinomycetes both isolated obtained from nature as well as by mutation, for example those deliver through natural selection of those through mutation agents, such as X-ray irradiation, Ultraviolet irradiation, nitrogen mustard gases and the like, obtained strains under appropriate ones Conditions of the product 842A in vitro and in vivo studies antibiotic 810l, in vitro: The biological in vitro characterization of the antibiotic 810A took place by the Petri dish agar diffusion method. These experiments were carried out in such a way that 7 mm discs moistened with the antibiotic solution on the surface of Petri dishes were placed containing 5 ml of Difco nutrient agar and 0.2% @ yeast extract who were doused with 5 or 10 ml of vaccine 150 ml of medium each was inoculated and incubated at 25V C or 37V C for 16 hours. The method and Treatises on these attempts are in the publication: "Cross Resistance Studies and Antibiotika Identification ", applied Nicrobiology, Volume 6, pages 392 to 398 (1958).

Die folgenden Tabellen VI, VII und VII geben die Ergebnisse dieser Versuche hinsichtlich der antibakteriellen und Kreuzungsresistenz wieder und führen die verwendeten Versuchsorganismen und die angewendeten Bedingungen auf.The following Tables VI, VII and VII give the results of these Try again and again for antibacterial and crossbreeding resistance the test organisms used and the conditions applied.

T a b e l l e VI 810A antibakterielles Spektrum, in vitro Wirksamkeit Testorganismus Testbedingungen Inhibierungszone, Durchmesser mm* Impfstoff** Inkubierung 810A ml/150 ml Temp. °C 5 mg/ml Escherichia coli 5 25 15 Bacillus species 5 25 22 Proteus vulgaris 5 37 29 Pseudomonas aeruginosa 5 25 7 Serratia marcescens 5 25 7 Staphylococcus aureus 5 25 26 Bacillus subtilis 5 25 33 Sarcina lutea 5 25 26 Staphylococcus aureus 5 37 19 (Streptomycin-Streptothricinresistent) Streptococcus faecalis 15 37 7 Alcaligenes faecalis 5 37 25 Brucella bronchiseptica 10 37 21 Salmonella gallinarum 10 25 15 Vibrio percolans 10 27 36 Xanthomonas vesicatoria 5 25 15 * 7 mm = Scheibengrösse (keine Inhibierungszone beobachtet) ** Übernacht-Kultur, verdünnt auf einen Wert von 60 mµ auf dem Lumetron-Colorimeter T a b e l l e VII 810A Kreuzungsbeständigkeit, in vitro Untersuchung Escherichia coli - Stamm** Untersuchungsbedingungen Inhibierungszone Durchmesser mm* Impfstoff*** Inkubierung 810A ml/150 ml Temp. °C 5 mg/ml Sensitiver Ausgangsstamm 5 25 15 Streptomycin-resistent 5 25 13 Streptothricin-resistent 10 25 17 OXAMYCIN-resistent 10 25 10 Pleoxidin-resistent 10 37 26 Chloramphenicol-resistent 10 25 7 Chlortetracyclin-resistent 10 25 7 Oxytetracyclin-resistent 10 25 7 Neomycin-resistent 10 37 20 Tetracyclin-resistent 10 25 7 Viomycin-resistent 10 37 17 Polymyxin-resistent 10 25 13 Grisein-resistent 5 25 15 * 7 mm = Scheibengrösse (keine Inhibierungszone beobachtet) ** Versuche gegenüber einer Peihe von Stämmen von E. coli, isoliert aus der gleichen Ausgangskultur, durchgeführt und anschliessend gegenüber den einzelnen Antibiotika ausgesetzt *** Übernacht-Kultur, verdünnt auf einen Wert von 60 mµ auf dem Lumetron-Colorimeter T a b e l l e VIII 810A spezielles Wirkungsspektrum, in vitro Untersuchung Escherichia coli W-MB-60 Testbedingungen Inhibierungszone (mit speziellen Zusätzen wie Durchmesser angegeben) mm* Impfstoff** Inkubierung 810A ml/150 ml Temp. ° C 5 mg/ml Vergleich (keine Zusätze) 5 25 13 0,1 mol. Phosphat-Puffer - pH 5 5 25 13 0,1 mol. pHosphat-Puffer - pH 7 5 25 16 0,1 mol. pHosphat-Puffer - pH 9 5 25 18 Menschliches Blutplasma 20 % 5 25 15 Kationen-Austauschharz 5 25 12 (Dow ET 91-1%, Agar-Konzentration auf 1 % nur für die Harzplatte herabgesetzt) * 7 mm Scheibengrösse (keine Inhibierungszone beobachtet) ** Übernacht-Kultur, verdünnt auf einen Wert von 60 mµ auf dem Lumetron-Colorimeter Antibiotikum 810A, in vivo: Die biologische in vivo Charakterisierung ergibt, dass 810A ein Antibiotikum mit breitem Wirkungsspektrum ist, das gegen Infektionen mit drei Species von Proteus, zwei von Salmonella, einem Stamm von Escherichia coli, zwei von Klebsialla und drei gram-positive Organismen: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyrogenes und Diplococcus pneumoniae schützt. Table VI 810A antibacterial spectrum, in vitro effectiveness Test organism Test conditions Zone of inhibition, diameter mm * Vaccine ** Incubation 810A ml / 150 ml Temp. ° C 5 mg / ml Escherichia coli 5 25 15 Bacillus species 5 25 22 Proteus vulgaris 5 37 29 Pseudomonas aeruginosa 5 25 7 Serratia marcescens 5 25 7 Staphylococcus aureus 5 25 26 Bacillus subtilis 5 25 33 Sarcina lutea 5 25 26 Staphylococcus aureus 5 37 19 (streptomycin-streptothricin resistant) Streptococcus faecalis 15 37 7 Alcaligenes faecalis 5 37 25 Brucella bronchiseptica 10 37 21 Salmonella gallinarum 10 25 15 Vibrio percolans 10 27 36 Xanthomonas vesicatoria 5 25 15 * 7 mm = disc size (no inhibition zone observed) ** overnight culture, diluted to a value of 60 mµ on the Lumetron colorimeter T a b e l l e VII 810A cross-breeding resistance, in vitro investigation Escherichia coli - strain ** Test conditions inhibition zone diameter mm * vaccine *** incubation 810A ml / 150 ml Temp. ° C 5 mg / ml Sensitive starting strain 5 25 15 Streptomycin-resistant 5 25 13 Streptothricin-resistant 10 25 17 OXAMYCIN-resistant 10 25 10 Pleoxidin-resistant 10 37 26 Chloramphenicol resistant 10 25 7 Chlortetracycline resistant 10 25 7 Oxytetracycline resistant 10 25 7 Neomycin resistant 10 37 20 Tetracycline resistant 10 25 7 Viomycin resistant 10 37 17 Polymyxin-resistant 10 25 13 Grisein-resistant 5 25 15 * 7 mm = slice size (no inhibition zone observed) ** Trials against a series of strains of E. coli, isolated from the same starting culture, carried out and then exposed to the individual antibiotics *** overnight culture, diluted on a value of 60 mµ on the Lumetron colorimeter Tabel VIII 810A special spectrum of activity, in vitro investigation Escherichia coli W-MB-60 Test conditions inhibition zone (with special additives as indicated in diameter) mm * Vaccine ** Incubation 810A ml / 150 ml Temp. ° C 5 mg / ml Comparison (no additives) 5 25 13 0.1 mol. Phosphate buffer - pH 5 5 25 13 0.1 mol. pH phosphate buffer - pH 7 5 25 16 0.1 mol. pHosphate buffer - pH 9 5 25 18 Human blood plasma 20% 5 25 15 cation exchange resin 5 25 12 (Dow ET 91-1%, agar concentration to 1% only reduced for the resin plate) * 7 mm disc size (no inhibition zone observed) ** Overnight culture, diluted to a value of 60 mµ on the Lumetron colorimeter antibiotic 810A, in vivo: The in vivo biological characterization shows that 810A is an antibiotic has a broad spectrum of activity and is effective against infections with three species of Proteus, two from Salmonella, a strain of Escherichia coli, two from Klebsialla, and three gram-positive organisms: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyrogenes and Diplococcus pneumoniae protects.

Methode: Die zu dieser Charakterisierung verwendete Methode ist wie folgt: Weisse, weibliche Schweizer Mäuse mit einem Durchschnittsgewicht von 20 bis 33 g wurden intraperitoneal" mit dem 3- bis 20fachen der Anzahl an Organismen infiziert, die als lethal für 50 % der infizierten Kontrolltiere berechnet wurde (LD50-:E)osis 3 bis 20). Zum Zeitpunkt der Infektion und wiederum 6 Stunden später, wurde über den bezeichneten Weg Therapie angewendet. Kontrollen der Virulenz der Kultur und der Toxizität des Antibiotikums für nichtinfizierte Mäuse wurden in die Versuche eingeschlossen.Method: The method used for this characterization is like follows: White, female Swiss mice with an average weight of 20 to 33 g were infected intraperitoneally "with 3 to 20 times the number of organisms, which was calculated to be lethal for 50% of the infected control animals (LD50-: E) osis 3 to 20). At the time of infection, and again 6 hours later, it was over applied the designated path therapy. Controls the virulence of the culture and the toxicity of the antibiotic for uninfected mice was included in the experiments locked in.

7 Tage nach der Infektion wurde der Versuch als beendet erachtet, und die Menge des Antibiotikums (1), die zum Schutz von 50 % der infizierten und behandelten Tiere notwendig ist, wurde nach der Methode von Knudsen und Curtis, J. Amer.7 days after infection, the experiment was deemed to have ended, and the amount of antibiotic (1) required to protect 50% of the infected and treated animals is necessary, was according to the method of Knudsen and Curtis, J. Amer.

Stat. Assoc., Band 42, Seite 282 (1947) berechnet.Stat. Assoc., Vol. 42, p. 282 (1947).

Ergebnisse: Die Ergebnisse dieser Versuche sind in Tabelle IV aufgefiihrt. Diese Daten zeigen, dass das aus der Kultur MA-2837 erhaltene Antibiotikum 810A ein Mittel mit breitem Wirkungsspektrum ist, das sowohl gegen gram-positive als auch gram:--negative Organismen schützt.Results: The results of these experiments are listed in Table IV. These data show that antibiotic 810A obtained from culture MA-2837 is a broad spectrum agent that is effective against both gram-positive and also gram: - protects negative organisms.

Obgleich Wirksamkeit bei oraler Verabreichung (p.o.) erzielt wurde, erhielt man die besten Ergebnisse über den subkutanen (s.c.) oder intraperitonealen (i.p.) Weg. Das antibiotische Gemisch tötete keine nichtinfizierten Mäuse, wenn zwei Dosierungen, die jeweils 1 mg des Produktes enthielten, intraperitoneal verabreicht wurden, oder wenn zwei Dosierungen von jeweils 18 mg subkutan oder oral verabreicht wurden.Although efficacy was achieved when administered orally (p.o.), the best results were obtained via the subcutaneous (s.c.) or intraperitoneal (i.p.) way. The antibiotic mixture did not kill uninfected mice, however two doses, each containing 1 mg of the product, intraperitoneally or when two doses of 18 mg each subcutaneously or orally were administered.

T a b e 1 1 e IX 810A in vivo Wirksamkeit Testorganismus Therapie- ED50 in Mikrogramm weg x zwei Dosierungen Proteus vulgaris i.p. 33 s.c. 500 p.o. 12100 Proteus mirabilis i.p. 200 p.o. 5000 Salmonella schottmuelleri i.p. 419 s.c. 9000 Escherichia coli i.p. 3750 Escherichi coli i.p. .1330 Klebsiella pneumoniae i.p. 2500 Salmonella gallinarum i.p. 1670 Salmonella pullorum i.p. 625 Diplococcus pneumoniae i.p. 258 Staphylococcus aureus i.p. 927 Streptococcus pyogenes i.p. 625 Antibiotikum 842A, in vitro: Die biologische in vitro Charakterisierung erfolgte nach der Scheibenplatten-Agar Diffusionsmethode. Dieser Versuch wurde so durchgeführt, dass 7 mm Scheiben, die mit der Antibiotikumlösung angefeuchtet waren, auf die Oberfläche von Petri-Schalen gebracht wurden, die mit 5 ml Difco Nähragar und 0,2 % Hefeextrakt, die mit 5 oder 10 ml Standard-Zellsuspension (OD = 0,22 bei 660 mµ) je 150 ml Medium beimpft waren, übergossen wurden und bei 250 C oder 370 C 16 Stunden wie angegeben inkubiert wurde. Die Methode und Abwandlung dieser Versuche sind in der Veröffentlichung: "Cross Resistance Studies and Antibiotic Identification", Applied Microbiology, Band 6, Seiten 392 bis 398 (1958) beschrieben. Die folgenden Tabellen geben die Ergebnisse dieser Versuche bezüglich des antibakteriellen Spektrums und der Kreuzungsresistenz wieder und führen die angewendeten Testorganismen und die verwendeten Bedingungen an. T a b e 1 1 e IX 810A in vivo effectiveness test organism therapy ED50 in micrograms away x two doses of Proteus vulgaris i.p. 33 s.c. 500 p.o. 12100 Proteus mirabilis i.p. 200 p.o. 5000 Salmonella schottmuelleri i.p. 419 s.c. 9000 Escherichia coli i.p. 3750 Escherichi coli i.p. .1330 Klebsiella pneumoniae i.p. 2500 Salmonella gallinarum i.p. 1670 Salmonella pullorum i.p. 625 Diplococcus pneumoniae i.p. 258 Staphylococcus aureus i.p. 927 Streptococcus pyogenes i.p. 625 Antibiotic 842A, in vitro: The biological in vitro characterization was carried out according to the disk plate agar diffusion method. This experiment was carried out in such a way that 7 mm discs, which were moistened with the antibiotic solution, on the surface were brought from Petri dishes, which were filled with 5 ml Difco nutrient agar and 0.2% yeast extract, those with 5 or 10 ml standard cell suspension (OD = 0.22 at 660 mµ) per 150 ml medium were inoculated, doused and at 250 C or 370 C for 16 hours as indicated was incubated. The method and modification of these experiments are in the publication: "Cross Resistance Studies and Antibiotic Identification, "Applied Microbiology, Volume 6, pages 392 to 398 (1958). The following tables give the results of these tests with regard to the antibacterial spectrum and the cross-breeding resistance again and lead the applied test organisms and the conditions used.

T a b e l l e X 842A antibakterielles Spektrum, in vitro Wirksamkeit Testorganismus Testbedingungen Inhibierungszone, Durchmesser, mm* Impfstoff Inkubierung Rohes 842A (1b) Freie Säure Natriumsaz ml/150 ml Temp. °C 8 mg/ml 166 µg/ml 192 µg/ml Escherichia coli 5 25 16 20 18 Bacillus sp. 5 25 7 8 7 Proteus vulgaris 5 37 21 22 24 Pseudomonas aeruginosa 5 25 7 7 7 Serratia marcescens 5 25 7 7 7 Staphylococcus aureus 5 25 7 7 7 Bacillus subtilis 5 25 16 13 18 Sarcina lutea 5 25 9 10 9 Staphylococcus aureus 5 37 7 11 10 (Streptomycin-Streptothricin-resistent) Streptococcus faecalis 15 37 7 7 7 Alcaligenes faecalis 5 37 22 27 7 Brucella bronchiseptica 10 37 28 24 26 Salmonella gallinarum 10 25 20 21 25 Vibrio percolans 10 27 37 30 38 Xanthomonas vesicatoria 5 25 12 19 17 * 7 mm = Scheibengrösse (keine Inhibierungszone beobachtet) T a b e l l e XI 842A Kreuzungsbeständigkeit, in vitro Untersuchung Escherichia coli-Stamm** Versuchsbedingungen Inhibierungszone, Durchmesser, mm* Impfstoff Inkubierung- Rohes 842A (Ib) Freie Säure Natriumsalz ml/150 ml Temp. ° C 8 mg/ml Säure 192 µg/ml 166 µg/mol Sensitiver Ausgangsstamm 5 25 16 20 18 Streptomycin-resistent 5 25 14 19 16 Streptothricin-reistent 10 25 13 14 18 OXMYCIN-resistent 10 25 13 13 17 Pleocidin-resistent 10 37 15 18 17 Chloramphenicol-resistent 10 25 13 17 16 Chlortetracycline-resistent 10 25 21 20 23 Oxytetracyclin-resistent 10 25 20 23 24 Neomycin-resistent 10 37 18 17 17 Tetracyclin-resistent 10 25 16 20 20 Viomycin-resistent 10 37 15 16 30 Polymycin-resistent 10 25 23 21 7 Grisein-resistent 5 25 18 21 16 ** die Versuche wurden gegenüber einer Reihe von Stämmen von E. coli, die aus der gleichen Ausgangskultur isoliert wurden, und nachfolgende Aussetzung gegenüber den einzelnen Antibiotika durchgeführt * 7 mm = Scheibengrösse (keine Inhibierungszone beobachtet) T a b e l l e XIa 842A spezielles Wirkungsspektrum, in vitro Untersuchung Escherichia coli W-MB-60 Versuchsbedingungen Inhibierungszone, Durchmesser, mm* (mit speziellen Zusätzen Impfstoff Inkubierung- Rohes 842A (Ib) Freie Säure Natriumsalz wie angegeben) ml/150 ml Temp. ° C 8 mg/ml 166 µg/ml 192 µg/ml Vergleich (keine Zusätze) 5 25 16 20 18 0,1 mol. Phosphat-Puffer pH 5 5 25 19 20 15 0,1 mol. Phosphat-Puffer pH 7 5 25 22 29 25 0,1 mol. Phosphat-Puffer pH 9 5 25 21 22 24 Menschliches Blutplasma 20% 5 25 17 22 21 * Katinenaustauschharz (Dow ET 91) 1 % 5 25 20 21 18 * (Agar-Konzentration auf 1 % nur für Harzplatte herabgesetzt antibiotikum 842A, in vivo Wenn 842A subkutan en Mäuse verabreicht wird, ist es inm allgemeinen stärker wirksam als Cephalothin und etwa gleich wirsam wie Cephaloridin, Ampicillin und Chlormycetin hinsichtlich des Schutzes gegenüber Infektin durch gram-negative Organismen. Es ist bemerkenswert nicht toxisch und wird rasch im Urin ausgeschieden, wobei etwa 79 % des subkutan injizierten 842A innerhalb von 4 Stunden gewonnen werden. T a b e l l e X 842A antibacterial spectrum, in vitro effectiveness Test Organism Test Conditions Zone of Inhibition, Diameter, mm * Vaccine Incubation Crude 842A (1b) Free Acid Sodium Az ml / 150 ml Temp. ° C 8 mg / ml 166 µg / ml 192 µg / ml Escherichia coli 5 25 16 20 18 Bacillus sp. 5 25 7 8 7 Proteus vulgaris 5 37 21 22 24 Pseudomonas aeruginosa 5 25 7 7 7 Serratia marcescens 5 25 7 7 7 Staphylococcus aureus 5 25 7 7 7 Bacillus subtilis 5 25 16 13 18 Sarcina lutea 5 25 9 10 9 Staphylococcus aureus 5 37 7 11 10 (streptomycin-streptothricin-resistant) Streptococcus faecalis 15 37 7 7 7 Alcaligenes faecalis 5 37 22 27 7 Brucella bronchiseptica 10 37 28 24 26 Salmonella gallinarum 10 25 20 21 25 Vibrio percolans 10 27 37 30 38 Xanthomonas vesicatoria 5 25 12 19 17 * 7 mm = disc size (no inhibition zone observed) T a b e l l e XI 842A Cross-breeding resistance, in vitro investigation of Escherichia coli strain ** Experimental Conditions Zone of Inhibition, Diameter, mm * Vaccine Incubation- Rohes 842A (Ib) Free acid sodium salt ml / 150 ml Temp. ° C 8 mg / ml Acid 192 µg / ml 166 µg / mol sensitive initial strain 5 25 16 20 18 streptomycin-resistant 5 25 14 19 16 Streptothricin-resistant 10 25 13 14 18 OXMYCIN-resistant 10 25 13 13 17 Pleocidin-resistant 10 37 15 18 17 Chloramphenicol resistant 10 25 13 17 16 Chlortetracycline resistant 10 25 21 20 23 Oxytetracycline resistant 10 25 20 23 24 Neomycin resistant 10 37 18 17 17 Tetracycline resistant 10 25 16 20 20 Viomycin resistant 10 37 15 16 30 Polymycin-resistant 10 25 23 21 7 Grisein-resistant 5 25 18 21 16 ** the trials were compared to a number of E. coli strains obtained from the same starting culture were isolated, and subsequent exposure to each antibiotic carried out * 7 mm = disc size (no inhibition zone observed) T a b e l l e XIa 842A special spectrum of activity, in vitro investigation Escherichia coli W-MB-60 test conditions inhibition zone, diameter, mm * (with special Additives Vaccine Incubation- Raw 842A (Ib) Free Acid Sodium Salt As Specified) ml / 150 ml Temp. ° C 8 mg / ml 166 µg / ml 192 µg / ml Comparison (no additives) 5 25 16 20 18 0.1 mol. Phosphate buffer pH 5 5 25 19 20 15 0.1 mol. Phosphate buffer pH 7 5 25 22 29 25 0.1 mol. Phosphate buffer pH 9 5 25 21 22 24 Human blood plasma 20% 5 25 17 22 21 * Katine exchange resin (Dow ET 91) 1% 5 25 20 21 18 * (Agar concentration reduced to 1% for resin plate only antibiotic 842A, in vivo When 842A is administered subcutaneously to mice, it is generally more effective as cephalothin and about as effective as cephaloridin, ampicillin and chlormycetin regarding protection against infectin by gram-negative organisms. It is remarkably non-toxic and is rapidly excreted in the urine, being about 79% of the 842A injected subcutaneously can be recovered within 4 hours.

Bei in vivo Untersuchungen schützt das Antibiotikum 842A gegen Infektionen mit drei Species von Proteus, zwei von Salmonella, einen Stamm von Escherichia coli, zwei von Klebsialla und auch gegen paracolobactrum arizoniae, Aerobacter aerogenes, Pasteurella multocida und Diplococcus pneumoniae E400.In in vivo studies, the antibiotic 842A protects against infections with three species of Proteus, two of Salmonella, one strain of Escherichia coli, two of Klebsialla and also against paracolobactrum arizoniae, Aerobacter aerogenes, Pasteurella multocida and Diplococcus pneumoniae E400.

:13as bei diesen Untersuchungen angewendete Verfahren ist das gleiche wie vorstehend mit Bezug auf die in vivo Charakterisierung von 810A. beschriebene. Die Ergebnisse dieser Versuche sind in der folgenden Tabelle XIb wiedergegeben: T a b e 1 1 e XIb 842A in vivo Wirksamkeit Testorganismus ED50 auf subkutanem Wege x zwei Dosierungen Proteus vulgaris 51 µg Proteus mirabilis 276iug Proteus morganii 3202 276 µg Salmonella schottmuelleri 103 K).ebsiella pneumoniae AD 125 Klebsiella pneumoniae 3 125ng Paracolobactum arizoniae 125 Escherichia coli 200 Aerobacter aerogenes 49 Pasteurella multocida 57 µg Salmonella typhosa 34 µg Diplococcus pneumoniae E400 566 µg Die Antibiotika 810A Fermentation: Das Antibiotikum 810A wird während der aeroben Fermentation geeigneter, wässriger Nährmedien unter geregelten Bedingungen über die Beimpfung mit der Streptomyces griseus Kultur tA-2837 erzeugt. Wässrige Medien, wie sie beispielsweise zur Herstellung anderer Antibiotika verwendet werden, sind gleichfalls zur Herstellung des Antibiotikums 810A geeignet. Derartige Medien enthalten durch den Mikroorganismus assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen und anorganische Salze.: 13 The procedure used in these investigations is the same as above with respect to the in vivo characterization of 810A. described. The results of these tests are given in Table XIb below: T a b e 1 1 e XIb 842A in vivo efficacy of test organism ED50 by subcutaneous route x two doses of Proteus vulgaris 51 µg Proteus mirabilis 276iug Proteus morganii 3202 276 µg Salmonella schottmuelleri 103 K) .ebsiella pneumoniae AD 125 Klebsiella pneumoniae 3 125ng Paracolobactum arizoniae 125 Escherichia coli 200 Aerobacter aerogenic 49 Pasteurella multocida 57 µg Salmonella typhosa 34 µg Diplococcus pneumoniae E400 566 µg The antibiotics 810A fermentation: The antibiotic 810A is used during the aerobic fermentation of suitable, aqueous nutrient media under controlled conditions generated by inoculation with the Streptomyces griseus culture tA-2837. Watery Media such as those used in the manufacture of other antibiotics, are also suitable for the production of the antibiotic 810A. Such media contain sources of carbon and nitrogen that can be assimilated by the microorganism and inorganic salts.

Im allgemeinen können Kohlehydrate, wie beispielsweise Zukker, z. B. Glucose, Arabinose, Maltose, Xylose, Mannit und dgl., und Stärken, wie Getreide, z. B. Hafer, Reis, Maisstärke, Maismehl und dgl., entweder allein oder in Kombination als assimilierbare Kohlenstoffquellen in dem Nährmedium verwendet werden. Die genaue Menge der verwendeten Kohlehydratquelle oder -quellen in dem Medium hängt teilweise yon den anderen Bestandteilen des Mediums ab, jedoch im allgemeinen variiert die Menge an Sohlehydrat gewöhnlich zwischen etwa 1 und 6 Gew.% des Mediums. Diese Kohlenstoffquellen können einzeln verwendet werden, oder es können verschiedene derartiger Kohlenstoffquellen in dem Medium kombiniert werden. Im allgemeinen kann irgendein proteinhaltiges Material als eine Stickstoffquelle in dem Fermentationsprozess eingesetzt werden. Zu geeigneten Stickstoffquellen gehören beispielsweise Hefehydrolysate, Hefeautolysat, Sojabohnenutehl, Hydrolysate von Casein, Maisquellflüssigkeit, lösliche Destillationsrückstände oder Tomatenpaste und dgl. Die Stickstoffquellen werden entweder allein oder in Kombination in Mengen im Bereich von etwa 0,2 bis 6 Gew.% des wässrigen Mediums verwendet. Typische Medien, die zur Herstellung des Antibiotikums 810A geeignet sind, sind die im folgenden aufgeführten.In general, carbohydrates such as sugars, e.g. B. glucose, arabinose, maltose, xylose, mannitol and the like., And starches, such as cereals, z. B. oats, rice, cornstarch, cornmeal and the like., Either alone or in combination as assimilable carbon sources are used in the nutrient medium will. The exact amount of the carbohydrate source or sources used in the Medium depends in part on the other components of the medium, but generally the amount of sole hydrate usually varies between about 1 and 6 percent by weight of the medium. These carbon sources can be used individually or they can be several such carbon sources are combined in the medium. In general, can any proteinaceous material as a nitrogen source in the fermentation process can be used. Suitable nitrogen sources include, for example, yeast hydrolysates, Yeast autolysate, soybean flour, hydrolysates of casein, corn steep liquor, soluble Still bottoms or tomato paste and the like. The nitrogen sources are either alone or in combination in amounts ranging from about 0.2 to 6% by weight of the aqueous medium is used. Typical media used to manufacture the antibiotic 810A are those listed below.

Diese Medien und andere in den folgenden Beispielen beschriebene: Medien dienen lediglich zur Erläuterung einer grossen Vielzahl von Itledien, die eingesetzt werden können und dienen nicht zur Begrenzung.These media and others described in the following examples: Media are only used to explain a large number of Itledien that can be used and are not intended to limit.

Medium I: Difco-Hefeextrakt 10,0 g Glucose 10,0 g * Phosphatpuffer 2,0 ml NgSo4 7H O 0,05 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Difco-Agar 25,0 g *Phosphatpuffer: KH2PO4 91,0 g Na2HPO4 95,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Medium II: Rinds extrakt 3,0 g * NZ Amin 10,0 g Dextrose 10,0 g NaCl 5,0 g Destilliertes H 0 1000,0 ml pH auf 7,2 mit NaOH eingestellt *ein enzymatisch abgebautes Casein Medium III: Dextrose 10,0 g Asparagin 1,0 g K2HPO4 0,1 g MgS04 * 7H2O 0,5 g Hefeextrakt 0,5 g * Spurenelementgenisch Nr. 2 10,0 ml Destilliertes H2O 1000,0 ml pH auf 7,2 mit NaOH eingestellt * Spurenelementgemisch Nr. 2: FeSO4 . 7H2O 1,0 g NnS04 H2O 1,0 g CuCl2 . 2H2O 25,0 mg CaCl2 100,0 mg H3BO3 56,0 mg (NH4)6MO7O24 . 4H2O 19,0 mg ZnSO4 . 7H2O 200,0 mg Destilliertes H20 1000,0 ml Medium IV: V8 Saft 100,0 ml Staley's 4S Sojabohnenmehl 20,0 g Destrose 2,0 g Agar 25,0 g Destillierts H2O auf 1000,0 ml pH 7,9 - 8,0 Medium V: Hefe-Autolysat (Ardamin) 10,0 g Glucose 10,0 g * Phosphatpuffer 2,0 ml MgSO4 . 7H20 0,05 g Destilliertes H2O 1000,0 ml pH - auf 6,5 unter'Verwendung von NaOH eingestellt *Phosphatpufferlösung: KH2PO4 91,0 g Na2HPO4 95,0 g Destilliertes H2O 1000,0 ml Medium VI: Maisquellflüssigkeit (auf feuchter Basis) 40,0 g Destrose 20,0 g NaCl 2,5 g MgSO4 . 7H2O 0,5 g Polyglykol 2000 0,25 %, bezogen auf das Volumen (zu jedem K@lb@@ @@ Kolben einzeln zugegeben) Destilliertes H2O 1000,0 ml pH - auf 7,0 mit NaOH eingestellt Medium VII: Impfung Produktion L-Asparagin 5,0 g 5,0 g L-Histidin 4,0 g 4,0 g DL-Phenylalanin --- 2,0 g Mononatrium-glutamat --- 1,5 g NaCl 5,0 g 5,0 g K2HPO4 2,0 g 2,0 g CaCl2 2H20 0,4 g 0,4 g MnSO4 . H2O 0,1 g 0,1 g FeSO4 . 7H2O 0,1 g 0,1 g ZnSO4 . 7H2O 0,05 g 0,05 g MgSO4 . 7H2O 1,0 g 1,0 g Glycerin 10,0 g 20,0 g Saccharose 2,5 g 2,5 g Destilliertes H20 *1000,0 ml **1000,0 ml * PH auf 7,0 mit NaOH eingestellt ** pH auf 7,1 mit NaOH eingestellt Medium VIII: Fleischextrakt 0,3 % NaCl 0,5 % NZ Amin 1 % Dextrose 1 % pH 7,0 Die Fermentation erfolgt bei Temperaturen im Bereich von etwa 20 bis 57° C, jedoch wird es zur Erzielung optimaler Ergebnisse bevorzugte die Fermentation bei Temperaturen von etwa 22 bis 300 C durchzuführen. Der pH-Wert der für das Wachstum der Streptomyces griseus Kultur ( 2837) :und zur Erzeugung des Antibiotikums 810A geeigneten Nährmedien soll im Bereich von etwa 5,5 bis 8,0 liegen.Medium I: Difco yeast extract 10.0 g glucose 10.0 g * phosphate buffer 2.0 ml NgSo4 7H O 0.05 g distilled water 1000.0 ml Difco agar 25.0 g * phosphate buffer: KH2PO4 91.0 g Na2HPO4 95.0 g distilled water 1000.0 ml medium II: beef extract 3.0 g * NZ amine 10.0 g dextrose 10.0 g NaCl 5.0 g distilled H 0 1000.0 ml pH adjusted to 7.2 with NaOH * an enzymatically degraded casein medium III: Dextrose 10.0 g asparagine 1.0 g K2HPO4 0.1 g MgS04 * 7H2O 0.5 g yeast extract 0.5 g * trace element gene No. 2 10.0 ml distilled H2O 1000.0 ml pH to 7.2 adjusted with NaOH * trace element mixture no. 2: FeSO4. 7H2O 1.0 g NnS04 H2O 1.0 g CuCl2. 2H2O 25.0 mg CaCl2 100.0 mg H3BO3 56.0 mg (NH4) 6MO7O24. 4H2O 19.0 mg ZnSO4. 7H2O 200.0 mg Distilled H20 1000.0 ml Medium IV: V8 juice 100.0 ml Staley's 4S Soybean Meal 20.0 g Destrose 2.0 g Agar 25.0 g Distilled H2O 1000.0 ml pH 7.9-8.0 Medium V: yeast autolysate (Ardamin) 10.0 g glucose 10.0 g * Phosphate buffer 2.0 ml MgSO4. 7H20 0.05 g Distilled H2O 1000.0 ml pH - up 6.5 adjusted using NaOH * Phosphate buffer solution: KH2PO4 91.0 g Na2HPO4 95.0 g of distilled H2O 1000.0 ml Medium VI: corn steep liquor (on a moist basis) 40.0 g destrose 20.0 g NaCl 2.5 g MgSO4. 7H2O 0.5 g polyglycol 2000 0.25%, based on the volume (added individually to each K @ lb @@ @@ flask) Distilled H2O 1000.0 ml pH - adjusted to 7.0 with NaOH Medium VII: Inoculation Production L-asparagine 5.0 g 5.0 g L-histidine 4.0 g 4.0 g DL-phenylalanine --- 2.0 g monosodium glutamate --- 1.5 g NaCl 5.0 g 5.0 g K2HPO4 2.0 g 2.0 g CaCl2 2H20 0.4 g 0.4 g MnSO4. H2O 0.1 g 0.1 g FeSO4. 7H2O 0.1 g 0.1 g ZnSO4. 7H2O 0.05 g 0.05 g MgSO4. 7H2O 1.0 g 1.0 g glycerine 10.0 g 20.0 g sucrose 2.5 g 2.5 g distilled H20 * 1000.0 ml ** 1000.0 ml * pH adjusted to 7.0 with NaOH ** pH adjusted to 7.1 with NaOH set medium VIII: meat extract 0.3% NaCl 0.5% NZ amine 1% dextrose 1 % pH 7.0 The fermentation takes place at temperatures in the range of about 20 to 57 ° C, however, it is preferred for best results to carry out the fermentation at temperatures of about 22 to 300 C. The pH that for the growth of the Streptomyces griseus culture (2837): and for the production The culture media suitable for the antibiotic 810A should range from about 5.5 to 8.0 lie.

Ein kleiner fermentatinsansatz des Antibiotikums 810A erfolgt in einfacher Weise durch Beimpfung eines geeigneten Nährmediums mit der das Antibiotikum erzeugenden Eultur, wobei man die Fermentation bei einer konstanten Temperatur von von etwa 24 bis 28 C auf einem Schüttler über einen ausgedenen Zeitraum, wie beispielsweise mehrere Tage, fortschreiten lasse. Nach Beendigung des Inkubierungszeitraums wird das Nycel entfernt, und die überstehende Flüssigkeit wird untersucht.A small fermentation batch of the antibiotic 810A is done in a simple manner Way by inoculating a suitable nutrient medium with the antibiotic-producing medium Eultur, where fermentation takes place at a constant temperature of about 24 to 28 C on a shaker for an extended period of time, such as several days, let it progress. After the incubation period has ended the nycel is removed and the supernatant is examined.

In Praxis wird diese Fermentation in einem sterilisierten Kolben über eine ein-, zwei-, drei- oder vierstufige Keimentwicklung durchgeführt. Das Nährmedium für die Impfstufe kann irgendeIne geeignete Kombination von Kohlenstoff- und Stickstoffguellen sein, wie beispielsweise irgendein es der vorstehend unter I bis VIII beschriebenen Medien. Der Impfkolben wird in einer konstanten Temperaturkammer bei etwa 280 C während eines Zeitraums von 1 bis etwa 3 Tagen geschüttelt, und die erhaltene Kultur wird zur Beimpfung entweder eines Zweistufen-Impfmediums oder des Produktionsmediums verwendet Wenn Zwischenstufen-Impfkolben verwendet werden, werden diese in praktisch der gleichen Weise entwickelt, d. n., der Inhalt des Kolbens wird zur Beimpfung des Produktionsmediums eingesetzt, die beimpften Kolben werden bei einer konstanten Temperatur mehrere Tage geschüttelt, und am Ende des Inkubierungszeitraums wird der Inhalt des Kolbens zum Entfernen des Mycels zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit oder Brühe wird dann konzentriert und unter Herstellung des Antibiotikums 810A gereinigt.In practice, this fermentation is carried out in a sterilized flask a one-, two-, three- or four-stage seed development carried out. The nutrient medium Any suitable combination of carbon and nitrogen sources can be used for the inoculation step such as any of those described in I to VIII above Media. The inoculation flask is placed in a constant temperature chamber at around 280C shaken for a period of 1 to about 3 days, and the culture obtained is used to inoculate either a two-stage inoculation medium or the production medium Used When intermediate inoculation flasks are used, these come in handy developed in the same way, d. n., the contents of the flask are used for inoculation of the production medium used, the inoculated flasks are operated at a constant Shaken temperature for several days, and at the end of the incubation period is the contents of the flask are centrifuged to remove the mycelium. The protruding liquid or broth is then concentrated and under preparation of the antibiotic 810A purified.

Pür ein Arbeiten im grösseren Masstab wird es bevorzugt, die Fermentierung in geeigneten Tanks durchzuführen, die mit einem Rührwerk und einer Vorrichtung zur Belüftung des Fermentationsmediums versehen sind. Nach dieser Methode wird das Nährmedium in den Tank gebracht und durch Erhitzen auf Demperaturen von bis zu etwa 1200 C sterilisiert. Nach dem Abkühlen wird das sterilisierte Medium mit der erzeugenden Kultur gebeimpft, und man lässt die Fermentation während eines Zeitraums von mehreren Tagen, beispielsweise von 2 bis 4 Tagen, fortschreiben, während das Nährmedium gerührt und/oder belüftet wird und die Temperatur bei etwa 24 bis 280 o gehalten wird.Fermentation is preferred for working on a larger scale Carry out in suitable tanks, which are equipped with a stirrer and a device are provided for aeration of the fermentation medium. According to this method, the Nutrient medium is brought into the tank and heated to temperatures of up to about 1200 C sterilized. After cooling, the sterilized medium is treated with the generating Inoculated culture and allowed to ferment for several times Days, for example from 2 to 4 days, continue while the nutrient medium is stirred and / or ventilated and the temperature is maintained at about 24 to 280 o.

Durch Veränderungen der Impfstoffentwicklung und Veränderungen des Produktionsmediums ist es möglich, eine mehrfache Verbesserung hinsichtlich der Produktion und eine Steigerung der Wirksamkeit des Antibiotikums zu erhalten.Changes in vaccine development and changes in the Production medium it is possible to achieve a multiple improvement in terms of To maintain production and an increase in the effectiveness of the antibiotic.

810A Versuchsverfahren unter Verwendung von Proteus Vulgaris Das Antiobiotikum 810A wurde in einfacher Weise durch elli Scheiben-Platten-Verfahren unter Verwendung von Proteus vulgaris MB-838 (ATCC 21100 und NRRL B--3361) unter Beibehaltung als eine Schrägkultur auf Nähragar (Difco) plus 0,2 % Hefeextrakt (Difco) als Testorganismus untersucht. Die beimpften Schrägkulturen wurden bei 3? C während 18 bis 24 Stunden inkubiert und bei Kühlschranktemperaturen gelagert, bis sie verwendet wurden, wobei frische Schrägkulturen jede Woche hergestellt wurden.810A Experimental Method Using Proteus Vulgaris The Antibiotic 810A was easily made using elli disk and plate method from Proteus vulgaris MB-838 (ATCC 21100 and NRRL B-3361) while maintaining as a slant culture on nutrient agar (Difco) plus 0.2% yeast extract (Difco) as the test organism examined. The inoculated slants were at 3? C for 18 to 24 hours incubated and stored at refrigerator temperatures until used, being fresh slants were made every week.

Der Impfstoff für die Versuchsplatten wird täglich durch Beimpfung eines 250 ml Erlenmeyer-Kolbens, der 50 ml Nährbrühe (Difco) plus 0,2 % Refeextrakt (Difco) enthält, mit einem Abstrich der Schrägkultur hergestellt. Der Kolben wird bei 370 C auf einer Schüttelmaschine während 18 bis 24 Stunden inkubiert. Die Flüssigkeitskultur wird dann auf 4O%ige Durchlässigkeit bei einer Wellenlänge von 660 mµ unter Verwendung eines Bausch & Lomb Spectronic-20 Geräts durch Zugabe einer 0,2%igen Hefeextraktlösung zu der Kultur eingestellt Nichtbeimpfte Flüssigkeit wird als Blindversuch für diese Bestimmung verwendet. Die eingestellte Brühe (30 ml) wird zur Beimpfung von 1 1 Medium verwendet.The vaccine for the experimental panels is inoculated daily a 250 ml Erlenmeyer flask, the 50 ml nutrient broth (Difco) plus 0.2% refee extract (Difco) prepared with a smear of the slant culture. The piston will at 370 C on a shaker for 18 to 24 hours incubated. The liquid culture is then reduced to 40% permeability at a Wavelength of 660 mµ using a Bausch & Lomb Spectronic-20 device Uninoculated by adding a 0.2% yeast extract solution to the culture Liquid is used as a blank test for this determination. The set Broth (30 ml) is used to inoculate 1 liter of medium.

Nähragar (Difco) plus 0,2 % Hefeextrakt (Difco) werden als Versuchsmedium eingesetzt. Dieses Medium wird hergestellt, durch Autoklavieren sterilisiert, und man lässt es auf 500 C abkühlen. Nachdem das Medium beimpft ist, wird zu jeder der verschiedenen sterilen Petri-Schalen 10 ml zugegeben, und das Medium kann sich verfestigen.Nutrient agar (Difco) plus 0.2% yeast extract (Difco) are used as the test medium used. This medium is prepared, sterilized by autoclaving, and it is allowed to cool to 500.degree. After the medium is inoculated, each of the 10 ml are added to various sterile Petri dishes, and the medium is allowed to solidify.

Es wurden Versuche an diesen Platten nach dem Scheiben-Platter-Verfahren unter Verwendung von 13 mm Filterpapierscheiben durchgeführt. Die Versuchsplatten wurden 20 bis 24 Stunden bei 370 C inkubiert. Die Auswertungen wurden als mm Durchmesser der Inhibierungszone ausgedrückt. Sie wurden zur Bestiinniung der relativen Wirksamkeiten oder, wenn sie mit einem gereinigten Bezugsstandard verglichen wurden, der Wirksamkeit in,ug/ml verwendet Wenn ein derartiger Versuch quantitativ durchgeführt wird, können 2 bis 4/ng/ml Antibiotikum ermittelt werden.Tests were carried out on these plates using the disk-platter method performed using 13 mm filter paper disks. The experimental panels were incubated at 370.degree. C. for 20 to 24 hours. The evaluations were made as mm in diameter expressed in the zone of inhibition. They were used to determine the relative effectiveness or, when compared to a purified reference standard, efficacy in, µg / ml used If such an experiment is performed quantitatively, can 2 to 4 / ng / ml antibiotic can be determined.

810A Versuchsverfahren unter Verwendung von Vibrio percolans: Es wurden auch Versuche bezüglich 810A nach dem Scheiben Platten-Verfahren gegen Vibrio percolans (MB-1271) unter Verwendung von 13 mm Filterpapierscheiben durchgeführt. Die Versuchsplatten wurden unter Verwendung von Difco Nähragar plus 2,0 g /1 Difco Hefeextrakt mit 10 ml je Platte hergestellt. Eine Ubernachtkultur des Versuchsorganismus, Vibrio percolans (MB-1272) in Nährflüssigkeit plus 0,2 % Hefeextrakt wurde in steriler Salzlösung auf eine Suspension mit 40%iger Durchlässigkeit bei einer Wellenlänge von 660 mµ verdünnt.810A Experimental Procedure Using Vibrio percolans: There were also tests with respect to 810A using the disk plate method against Vibrio percolans (MB-1271) using 13 mm filter paper disks. The experimental panels were using Difco nutrient agar plus 2.0 g / 1 Difco yeast extract with 10 ml per plate. An overnight culture of the test organism, Vibrio percolans (MB-1272) in nutrient fluid plus 0.2% yeast extract was in sterile Saline to a suspension with 40% transmittance at one wavelength diluted by 660 mµ.

Diese Suspension wurde mit 20 ml/l Medium vor dem Begiessen der Platten zugegeben.This suspension was mixed with 20 ml / l medium before the plates were poured admitted.

Die Versuchsplatten wurden bei 40 C gehalten, bis sie-verwendet wurden (maximal 5 Tage). Nach der Aufbringung der mit Antibiotikum gesattigten Versuchsscheiben wurden die Platten bei 280 C während eines Zeitraums vou 8 bis 24 Stunden inkubiert. Inhibierungszonen wurden als mm Durchmesser abgelesen.The test plates were kept at 40 ° C. until they were used (maximum 5 days). After the application of the test discs saturated with antibiotic the plates were incubated at 280 ° C. for a period of 8 to 24 hours. Zones of inhibition were read as mm in diameter.

Bakterialle Inaktivierung mit 810A: Ein in vitro Versuch diente zur Bestimmung der Resistenz des Antibiotikums 810A gegenüber bakterieller Inhibierung im Vergleich mit Cephalosporn G, Cephaloridiii und Cephalothin. Diese Untersuchung zeigte, dass das Antibiotikum 810A beständiger als letzteres gegenüber bestimmten Mikroorganismen ist.Bacterial inactivation with 810A: An in vitro experiment was used for Determination of the resistance of the antibiotic 810A to bacterial inhibition in comparison with Cephalosporn G, Cephaloridiii and Cephalothin. This investigation showed that antibiotic 810A was more resistant than the latter Microorganisms is.

Das in diesem Versuch verwendete abbauende Bakterium war ein Organismus, von dem belrannt ist, dass er Cephalosporin C vollständig inaktiviert, nämlich Alcaligenes faecalis (MB9).The degrading bacterium used in this experiment was an organism of which it is annoyed that it completely inactivates cephalosporin C, namely Alcaligenes faecalis (MB9).

(a) Herstellung von Bakterienzellen: Alcaligenes faecalis (MB-9)-Zellen wurden wie folgt hergestellt: Der Inhalt eines Rohrs wurde mit einigen ml Nährflüssigkeit, die 0,2 °ó Hefeextrakt enthielt, vermischt. Eine schleifevoll Aufschlämmung wurde über die Oberfläche einer Nähragar-Schrägkultur verteilt und 18 Stunden bei 370 C inkubiert Sämtliche Schrägkulturen wurden bei 5° C aufbewahrt und innerhalb 1 Woche nach der Inkubierung verwendet. Eine schleifevoll des Oberflächenwachstums aus jeder Schrägkultur wurde as/eptisch in 50 ml Nährbrühe, die 0,2 % Hefeextrakt enthielt, überführt und 18 Stunden bei 280 C unter Schütteln inkubiert. Die Kultur wurde dann bei 4000 Upm 10 Minuten zentrifugiert. Das überstehende Material wurde abdekantiert, und der restliche Zellklumpen wurde zweimal mit sterilem 0,1 m-Phosphatpuffer, pH 7,5 (6,8 g Kaliumphosphat und 7,1 g Natriumhydrogenphosphat je Liter destilliertes Wasser) gewaschen. Die gewaschenen Zellen wurden dann in einem Zehntel des Originalvolumens einer 4 mg/ml Antibiotikumlösung in 0,1 m-Pnhosphatpuffer wieder suspendiert. Das Versuchsgemisch wurde dann ohne Schütteln in einem auf 370 C eingestellten Wasserbad bis zu 4 Stunden inkubiert. Die Versuchsgemische wurden dann bei 2000 Upm 10 Minuten zentrifugiert, wobei sich ein klares überstehendes Material bildete, das la sterila Reagensgläser dekantiert wurde und unmittelbar in Trokkeneis gefroren wurde, bis es zur biologischen Bestimmung bereit war, gewöhnlich innerhalb von 3 Stunden. Vergleichsproben wurden in genau der gleichen Weise jedoch ohne Zellen inkubiert.(a) Production of bacterial cells: Alcaligenes faecalis (MB-9) cells were prepared as follows: The contents of a tube were mixed with a few ml of nutrient liquid, containing 0.2 ° ó yeast extract, mixed. A loopy slurry was made Spread over the surface of a nutrient agar slant and at 370 for 18 hours All slant cultures were stored at 5 ° C and incubated within 1 Used week after incubation. A loop full of surface growth from each slant culture was as / eptisch in 50 ml nutrient broth, the 0.2% yeast extract contained, transferred and incubated for 18 hours at 280 C with shaking. The culture was then centrifuged at 4000 rpm for 10 minutes. The excess material became decanted off, and the remaining cell clump was washed twice with sterile 0.1 M phosphate buffer, pH 7.5 (6.8 g potassium phosphate and 7.1 g sodium hydrogen phosphate per liter of distilled Water). The washed cells were then in one-tenth the original volume a 4 mg / ml antibiotic solution was resuspended in 0.1 M phosphate buffer. That The test mixture was then placed in a water bath set at 370 ° C. without shaking incubated for up to 4 hours. The test mixes were then run at 2000 rpm for 10 minutes centrifuged, with a clear supernatant formed, the la sterila Test tubes were decanted and immediately frozen in dry ice until it was ready for biological determination, usually within 3 hours. Comparative samples were incubated in exactly the same way but without cells.

(b) Ausmass der Inaktivierung des Antibiotikums 810A: Die überstehenden Flüssigkeiten wurden hinsichtlich ihrer antibakteriellen Wirksamkeit in folgender Weise getestet: Papierscheiben von 6,4 mm wurden mit den überstehenden Flüssigkeiten angefeuchtet und auf die Oberfläche von Nähragar-(0,2 %) Hefeextrakt-Platten gebracht, die vorher mit dem entsprechenden Testorganismus bimpft worden waren.(b) Degree of inactivation of antibiotic 810A: The protruding Liquids have been recognized for their antibacterial effectiveness in the following Ways to be tested: paper disks of 6.4 mm were with the supernatants moistened and placed on the surface of nutrient agar (0.2%) yeast extract plates, who had previously been vaccinated with the corresponding test organism.

B. subtilis s (liB-904-)-Versuchsplatten wurden in folgender Weise beimpft: 5 ml einer Suspension von gewaschenen Sporen in 0,9 % Salzlösung wurden zu jeweils 150 ml Nahragar-(0,2 %) Befeextrakt zugegeben, wovon 5 ml dann in Petri-Schalen von 15 x 100 m verteilt wurden. Sämtliche Versuchsplatten wurden bei 50 C gelagert und innerhalb von 3 Tagen verwendet. Die Versuchsplatten wurden übernac ht bei 250 C inkubiert, bevor Inhibierungszonen rund um die Testscheiben gemessen wurden. B. subtilis s (liB-904-) test plates were made in the following manner Inoculated: 5 ml of a suspension of washed spores in 0.9% saline was added 150 ml of nutrient agar (0.2%) beef extract were added to each, of which 5 ml were then placed in Petri dishes of 15 x 100 m. All test plates were stored at 50.degree and used within 3 days. The test plates were left overnight at 250 C before measuring zones of inhibition around the test disks.

Zellfreie Kontrollproben jedes Antibiotikums wurden in Verdünnungen von 1 : 1, 1 : 2, 1 : 4, 1 : 8, 1 : 16 und 1 : 32 untersucht, um eine Standard-Bezugskurve zu erhalten. Losungen der Testantibiotika wurden bei voller Stärke nach Inkubierung in Gegenwart der gewaschenen Bakterienzellen untersucht. Sämtliche Pro.ben wurden drei fach gefahren. Cell-free control samples of each antibiotic were in Dilutions from 1: 1, 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1:16 and 1:32 to a standard reference curve to obtain. Solutions of the test antibiotics were made at full strength after incubation examined in the presence of the washed bacterial cells. All samples were driven three times.

(c) Brgebnesse: Die prozentuale Inaktivierung wurde berechnet, indem der Mittelwert der aus jedem Versuch erhaltenen drei Inhibierungszonen genommen wurde und die Menge an verbleibendem Antibiotikum in der Testlösung bestimmt, wie sich aus der Standardkurve ergibt. Dieser Wert wurde dann von der ausgangsdonzentration (4 mg/ml) subtnbiert und der Rest durch die Ausgangskonzentration geteilt und mit 100 multipliziert, wobei die vorhandene Inaktivierung erhalten wurde. Die folgenden Tabellen XII und XIII geben die erhaltene Inaktivierung für Cephalosporin G, Cephalothin und das Antibiotika 810A unter den oben beschriegenen Bedingungen wieder.(c) Brgebnesse: The percentage inactivation was calculated by the mean of the three zones of inhibition obtained from each experiment is taken and the amount of antibiotic remaining in the test solution was determined as results from the standard curve. This value was then taken from the starting concentration (4 mg / ml) subtnbeiert and the remainder divided by the starting concentration and with Multiply 100, preserving the inactivation present. The following Tables XII and XIII give the inactivation obtained for cephalosporin G, cephalothin and antibiotic 810A under the conditions described above.

T a b e 1 1 e III Prozentuale Inaktivierung nach Inkubierung mit gewaschenen Bakterienzellen (bestimmt auf 3. subtilis (MB-964) Platten) Antibiotikum 3 Stunden Inkubierung mit Alcaligenes faecalis 810A 0 Cephalosporin C 99+ Cephalothin 62,5 T a b e l l e XIII Prozentuale Inaktivierung nach Inkubierung mit gewaschenen Bakteri enzellen (bestimmt auf V. percolans (MB-1272) Platten) Antibiotikum 3 Stunden Inkubierung mit Alcaligenes faecalis 810,A 0 Cephalosporin C 99+ Cephalothin 50 Die Fähigkeit des Antibiotikums 810A und von Cephalosporin C, dem Abbaueffekt der Aerobacter cloacae (MB-2646)-Kultur zu widerstehen, wurde ebenfalls bestimmt. Diese Kultur ist gram-negativ und gegenüber Cephalosporin C resistent. Bei Durchführung des Versuchs wurden Proben der einzelnen Gemische der Organismen und eine Probe des Antibiotikum-Gemischs nach 2stündiger Inkubierung entnommen und auf die verbliebene antibiotische Wirksamkeit untersucht. Das Verfahren ist die gleiche Untersuchungsmethode,. wie oben für Algaligenes faecalis beschrieben. Die Quelle der Inaktivierungssubstanz ist eine 1 : 160-Verdünnung des Filtrats einer bei 37° C während 18 Stunden durchgeführten Schüttelkultur von Aerobacter cloacae MB-2646 in Nährbrühe, die O,2'o Hefeextrakt enthielt. Die folgende Tabelle MV gibt die prozentuale Inaktivierung von Antibiotikum 810A, Cephalothin, Cephaloridin und Cephalosporin C auf Vibrio percolans (MB-1272) gemäss dieser Methode wieder: T a b e 1 1 e XIV Prozentuale Inaktivierung nach Inkubierung mit zellfreiem Extrakt (bestimmt auf V. percolans (MB-1272) Platten) Antibiotikum 2stündige Inkubierung mit Aerobacter cloacae 810A 16 Cephalothin 66 Cephaloridin 96 Cephalosporin C 96 Unter Verwendung des gleichen Versuchsablaufs wie oben beschrieben, gibt die folgende Tabelle XV die relative Beständigkeit des Antibiotikums 810A gegenüber enzymatischer Inaktivierung durch Aerobacter cloacae wieder. Die Ausgangskonzentration beträgt 250 µg/ml. Die Ergebnisse sind in µg/ml ausgedrückt. T a b e 1 1 e III Percentage inactivation after incubation with washed bacterial cells (determined on 3rd subtilis (MB-964) plates) antibiotic Incubation for 3 hours with Alcaligenes faecalis 810A 0 Cephalosporin C 99+ Cephalothin 62.5 Table XIII Percentage inactivation after incubation with washed bacterial cells (determined on V. percolans (MB-1272) plates) antibiotic 3 hours incubation with Alcaligenes faecalis 810, A 0 Cephalosporin C 99+ Cephalothin 50 The ability of antibiotic 810A and cephalosporin C, the degradation effect to withstand the Aerobacter cloacae (MB-2646) culture was also determined. This culture is gram negative and resistant to cephalosporin C. When performing of the experiment were samples of the individual mixtures of the organisms and one sample of the antibiotic mixture removed after incubation for 2 hours and applied to the remaining investigated antibiotic effectiveness. The procedure is the same examination method. as described above for Algaligenes faecalis. The source of the inactivation substance is a 1: 160 dilution of the filtrate from one carried out at 37 ° C for 18 hours Shaking culture of Aerobacter cloacae MB-2646 in nutrient broth, the O, 2'o yeast extract contained. The following table MV gives the percentage inactivation of antibiotic 810A, Cephalothin, Cephaloridin and Cephalosporin C on Vibrio percolans (MB-1272) according to this method again: T a b e 1 1 e XIV Percentage inactivation after incubation with cell-free extract (determined on V. percolans (MB-1272) plates) Antibiotic incubation for 2 hours with Aerobacter cloacae 810A 16 Cephalothin 66 Cephaloridin 96 Cephalosporin C 96 Using the same experimental procedure As described above, the following Table XV gives the relative resistance of the Antibiotic 810A against enzymatic inactivation by Aerobacter cloacae again. The initial concentration is 250 µg / ml. The results are in µg / ml expressed.

T a b e l l e XV Verbleibende, antibiotische Wirksamkeit (yg/ml) (Ausgangskonzentration = 250 µg/ml) Antibiotikum Versuchsorganismus 2stündige Inkubierung mit Aerobacter cloacae + 810A B. subtilis 964 190 Cephalothin " 140 Cephaloridin " <10 810A V. percolans 12:72 210 Cephalothin " 85 Cephaloridin " <10 Zellfreier Extrakt Im Hinblick auf die vorstehenden Daten ist das Antibiotikum 810A offensichtlich beständiger als Cephalosporin C, Cephalothin und Cephaloridin gegen Inaktivierung durch Aerobacter cloacae. T a b e l l e XV Remaining antibiotic activity (yg / ml) (Initial concentration = 250 µg / ml) antibiotic test organism incubation for 2 hours with Aerobacter cloacae + 810A B. subtilis 964 190 cephalothin "140 cephaloridin "<10 810A V. percolans 12:72 210 cephalothin" 85 cephaloridin "<10 cell-free extract In view of the above data, the antibiotic is 810A apparently more stable than cephalosporin C, cephalothin and cephaloridin against inactivation by Aerobacter cloacae.

842A Fermentation: Das Antibiotikum 842A wird während der aeroben Fermentation geeigneter wässriger Nährmedien unter geregelten Bedingungen durch Beimpfen mit dem Organismus Streptomyces lactamdurans erzeugt. Im allgemeinen können viele Medien, die eine Kohlenstoff- und Stickstoffquelle darstellen, zur Herstellung von 842A eingesetzt werden. Beispiele hierfür sind die oben in Verbindung mit der Fermentation von 810A beschriebenen, wässrigen Medien und Kohlehydrat- und Stickstoffquellen. Die genaue Menge der Kohlehydrat- und Stickstoffquellen hängt von den anderen im Fermentationsmedium enthaltenen Bestandteile ab, jedoch liegt im allgemeinen die Kohlehydratmenge gewöhnlich bei 1 bis 6 Gew.% des Mediums und die Menge an. verfügbarem Stickstoff, entweder allein oder in Kombination liegt gewöhnlich im Bereich von etwa 0,2 06 bis etwa 6 Gew.% des Medium. Die verschiedenen, im folgenden beschriebenen Medien dienen zur Erläuterung von Medien, die zur Herstellung des Antibiotikums 842A geeignet sind. Diese Medien sind led.igli.ch Beispiele verwendbarer Medien und dienen. nicht zur Begrenzung.842A fermentation: The 842A antibiotic is used during aerobic Fermentation of suitable aqueous nutrient media under controlled conditions Inoculation with the organism Streptomyces lactamdurans produced. In general, can many media, which are a source of carbon and nitrogen, for manufacture can be used by the 842A. Examples are the above in connection with the Fermentation of 810A-described aqueous media and sources of carbohydrates and nitrogen. The exact amount of carbohydrate and nitrogen sources depends on the other im Fermentation medium contained components from, but is generally the The amount of carbohydrate is usually 1 to 6% by weight of the medium and the amount of. available Nitrogen, either alone or in combination, is usually in the range of about 0.2-06 to about 6 weight percent of the medium. The different ones described below Media are used to explain media used to manufacture the antibiotic 842A are suitable. These media are led.igli.ch examples of usable media and serve. not to the limit.

Medium IX: Amber-Hefe Nr. 300 10,0 g lösliche Brauerei-Rückstände 20,0 g Dextrose 10,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml pH 7,0 Medium 1: Staley's 4S-Sojabohnenmehl 30,0 g Lösliche Brauerei-Rückstände 7,5 g Cerelose 20,0 g NaCl 2,5 g CaCO3 (nachher pH-Wert auf 7,0) 10,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Medium XI: Amber-Hefe Nr. 300 10,0 g Lösliche Brauerei-Rückstände 20,0 g Destillisiertes Wasser 1000,0 m.Medium IX: Amber Yeast No. 300 10.0 g of soluble brewery residues 20.0 g dextrose 10.0 g distilled water 1000.0 ml pH 7.0 medium 1: Staley's 4S soybean meal 30.0 g Soluble brewery residues 7.5 g Cerelose 20.0 g NaCl 2.5 g CaCO3 (afterwards pH value to 7.0) 10.0 g distilled water 1000.0 ml Medium XI: Amber yeast No. 300 10.0 g Soluble brewery residues 20.0 g Distilled Water 1000.0 m.

pH 7,0 Die Fermentation wird bei Temperaturen im Bereich von etwa 20 bis 370 C durchgeführt, jedoch wird es zur Erzielung optimaler Ergebnisse bevorzugt, die Fermentation bei Temperaturen von etwa 24 bis 320 C durchzuführen. Der pH-Wert der für das Wachstum der Streptomyces lactamdurans kultur (MB-2908) und zur Erzeugung des Antibiotikums 842A geeignetenNärmedien soll im Bereich von etwa G,C bis etwa 8,0 liegen. pH 7.0 The fermentation is carried out at temperatures in the range of about 20 to 370 C, but for best results it is preferred to carry out the fermentation at temperatures of about 24 to 320 C. The pH that for the growth of the Streptomyces lactamdurans culture (MB-2908) and for the production of antibiotic 842A should be in the range of about G, C to about 8.0 lie.

Eine Fermentatlon des Antibiotikums 842A In kleinem Masstab wird in einfacher Weise durch Beimpfen eines geeigneten NShrmediums mit der das Antibiotikum erzeugenden Kultur durchgeführt, wobei man die Fermer-tation Bei einer konstanten Temperatur von etwa 280 C während mehrerer Tage a auf einer Schüttelvorrichtung fortschreiten lässt. Nach Beendigung des Inkubierungszeitraums wird das Mycel entfernt, und die überstehende Flüssigkeit wird untersucht.A small-scale fermentation of the antibiotic 842A is used in simply by inoculating the antibiotic in a suitable hormone medium producing culture carried out, whereby the fermentation is carried out at a constant Temperature of about 280 C for several days on a shaker lets progress. At the end of the incubation period, the mycelium is removed, and the supernatant is examined.

In der Praxis erfolgt die Fermentation in einem sterilisierten Kolben über eine ein-, zweite, drei- oder vierstufige Keimentwicklung. Das Nährmedium für die Keimstufe kann gend eine geeignete Kombinatin von Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sein, beispielsweise irgendeines der vorstehend unter IX bis XI beschriebenen Medien. Der. Keimkolben wird in einer bei konstanter Temperatur von etwa 280 C gehaltenen Kammer während eines Zeitraums von 1 bis etwa 3 Tagen geschüttelt, und der erhaltene Wuchs wird entweder zur Beimpfung einer zweiten Keilstufe oder des Produktionsmediums verwendet. Falls Zwischenstufen-Keimkolben verwendet werden, werden diese in praktisch der gleichen Weise entwickelt, d.In practice, fermentation takes place in a sterilized flask via a one, second, three or four-stage seed development. The nutrient medium for the seeding stage can be an appropriate combination of carbon and nitrogen sources be, for example any of the media described under IX to XI above. Of the. Will germinate in a constant temperature of about 280 C chamber shaken for a period of 1 to about 3 days, and the growth obtained becomes either for inoculation of a second wedge stage or of the production medium is used. If intermediate germinating flasks are used, these are developed in practically the same way, i.

der Inhalt des Kolbens wird zur Beimpfung des Produktionsmediums verwendet, die beimpften Kolben werden bei einer konstanten Temperatur mehrere Tage geschüttelt, und nach Beendigung des Inkubierungszeitraums wird der Inhalt der Kolben zur Entfernung des Mycels zentrifugiert Die überstehende Flüssigkeit oder Brühe wird dann konzentriert und unter Erhalt des Antibiotikums 842A gereinigt.the contents of the flask are used to inoculate the production medium, the inoculated flasks are shaken at a constant temperature for several days, and at the end of the incubation period, the contents of the flasks are available for removal of the mycelium centrifuged. The supernatant liquid or broth is then concentrated and purified to obtain antibiotic 842A.

Beim Arbeiten in grösserem Masstab wird es bevorzugt, die Fermentation in geeigneten Tanks durchzuführen, die mit einem Rührwerk und einer Einrichtung zut Belüftung des Fermentationsmediums versehen sind. Nach dieser Methode wird das Nährmedium in den Tank gebracht und durch Erhitzen auf Temperaturen bis zu etwa 1200 C sterilisiert. Nach dem Kühlen zur das sterilisierte Medium mit der Produktionskultur Deimpft, und mm lässt die Fermentation während eines Zeitraums von einigen Tagen, beispielsweise 2 bis 4 Tage, fortschreiten, während das Nährmedium bewegt und/oder belüftet wird und die Temperatur bei etwa 280 C gehalten wird. Durch Veränderung der Entwicklung des Inoculums und Veränderungen des Produktionsmediums ist es auch möglich, @ - eine mehrfache Verbesserung der Produktion und eine Steigerung der Wirksamkeit dieses Antibiotikums zu erreichen.When working on a larger scale, fermentation is preferred To be carried out in suitable tanks, which are equipped with an agitator and a device are provided for aeration of the fermentation medium. According to this method, the Nutrient medium is brought into the tank and heated to temperatures up to about 1200 C sterilized. After cooling, add the sterilized medium to the production culture Deimpft, and mm lets fermentation for a period of a few days, for example 2 to 4 days, progressing while the nutrient medium is agitated and / or is ventilated and the temperature is maintained at about 280 C. Through change It is also the development of the inoculum and changes in the production medium possible @ - a multiple improvement in production and an increase in To achieve effectiveness of this antibiotic.

842A Versuchsverfahren unter Verwendung von Vibrio percolans: Es wurden Versuche nach dem Scheiben-Platten-Verfahren unter Verwendung von 13 mm Filterpapierscheiben durchgeführt. Diese Versuchsplatten wurden unter Verwendung von Difco Nähragar plus 2,0 g/l Difco Hefeextrakt bei 10 mi je Platte hergestellt. Ein Übernachtwuchs des Versuchs organismus Vibri o percolans (MB-1272) in Nährbrühe und 0,2 0% Hefeextrakt wurde in steriler Salzlösung auf eine Suspension mit 40%iger Durchlässigkeit bei einer Wellenlänge von 660 mµ verdünnt.842A Experimental Procedure Using Vibrio percolans: There were Experiments according to the disc-plate method using 13 mm filter paper discs carried out. These experimental plates were prepared using Difco nutrient agar plus 2.0 g / l Difco yeast extract prepared at 10 ml per plate. A Overnight growth of the test organism Vibri o percolans (MB-1272) in nutrient broth and 0.2 0% yeast extract was added to a suspension containing 40% in sterile saline Thinned transmittance at a wavelength of 660 mµ.

Diese Suspension. wurde in 20 ml/l Medium vor dem Begiessen der Platten zugegeben.This suspension. was in 20 ml / l medium before watering the plates admitted.

Die Versuchsplatten wurden bei 4° C gehalten, bis sie verwendet wurden (maxirial 5 Tage). Nach dem Aufbringen der mit Antibiotikum gesättigten Versuchsscheiben wurden die Platten bei 280 C während eines Zeitraums von 8 bis 24 Stunden inkubiert.. Die Inhibierungszonen wurden als mm Durchmesser abgelesen. Sie wurden zur Bestimmung der relativen Wirksamkeiten oder, wenn sie mit einem reinen Bezugsstanderd verglichen wurden, der Wirksamkeit in µg/ml verwendet. Wenn ein derartiger Versuch in quantitativer Weise durchgeführt wird, können 1 bis 2 µg/ml Antibiotikum festgestellt werden.The experimental plates were kept at 4 ° C until used (maxirial 5 days). After applying the test discs saturated with antibiotic the plates were incubated at 280 C for a period of 8 to 24 hours .. The zones of inhibition were read as mm in diameter. They became determination relative efficiencies or when compared to a pure reference standard were used, the effectiveness in µg / ml. If such an attempt in quantitative Carried out this way, 1 to 2 µg / ml of antibiotic can be detected.

Bakterielle Inaktivierung mit 842A: Eine Untersuchung in vitro diente zur Bestimmung der Beständigkeit des Antibiotikums 842A gegenüber bakterieller Inaktivierung im Vergleich mit Cephalosporin C, Gephalorilin und Cephalothin.Bacterial inactivation with 842A: An in vitro study served to determine the resistance of the antibiotic 842A to bacterial inactivation compared to Cephalosporin C, Gephalorilin and Cephalothin.

Diese Untersuchung zeigte, dass das Antibiotikum 842A beständiger als letztere gegen bestimmte Mikroorganismen ist.This study showed that antibiotic 842A was more resistant than the latter is against certain microorganisms.

Die bei dem Versuch verwendeten, abbauenden Bakterien waren zwei Organismen, von denen bekannt ist, dass sie Cehalosporin C vollstandig inaktivieren, nämlich Alcaligenes faecalis (MN-9) und Alcaligenes viscosus (MB-12).The degrading bacteria used in the experiment were two organisms which are known to completely inactivate cehalosporin C, viz Alcaligenes faecalis (MN-9) and Alcaligenes viscosus (MB-12).

(a) Herstellung von Bakterienzellen: Alcaligenes viscosus (MN-12) und A. faecalis (MB9) Zellen wurden wie folgt hergestellt: Der Inhalt eines Rohrs wurde mit einigen ml Nährbrühe, die 0,2 % Hefeextrakt enthielt, vermischt.(a) Production of bacterial cells: Alcaligenes viscosus (MN-12) and A. faecalis (MB9) cells were prepared as follows: The contents of a tube was mixed with a few ml of nutrient broth containing 0.2% yeast extract.

Eine schleifevoll Aufschlämmung wurde über die Oberfläche einer Näbragar-Schrägkultur vrteilt und 18 Stunden bei 47° C inkubiert. Sämtliche Schrägkulturen wurden bei 5° C aufbewahrt und innerhalb 1 Woche nach Inkubierung verwendet. Eine schleifevoll des Oberflächenwachstum aus jeder Schrägkultur wurde aseptisch in 50 ml Nährbrühe, die 0,2 % Hefeextrakt enthielt, überführt und 18 stunden bei 28°C unter Schütteln inkubiert. Die Kultur wurde dann 10 Minuten bei 4000 Upm zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit wurde dekantiert und der restliche Zellklumpen wurde zweimal mit sterilem 0,1 m-Phosphatpuffer, pH 7,5 (6,8 g Kaliumphosphat, d. h. KH2PO4 und 7,1 g Natriumhydrogenphosphat je Liter destilliertes Wasser) gewaschen. A slurry was dragged over the surface one Small agar slant culture distributed and incubated at 47 ° C for 18 hours. All sloping cultures were stored at 5 ° C and used within 1 week of incubation. One Loop full of surface growth from each slant culture was aseptically in 50 ml of nutrient broth containing 0.2% yeast extract, transferred and 18 hours at 28 ° C incubated with shaking. The culture was then centrifuged at 4000 rpm for 10 minutes. The supernatant liquid was decanted and the remaining cell clump became twice with sterile 0.1 M phosphate buffer, pH 7.5 (6.8 g potassium phosphate, i.e. KH2PO4 and 7.1 g sodium hydrogen phosphate per liter of distilled water).

Die gewaschenen Zellen wurden dann in einem Zehntel des Driginalvolumens einer 4 mg/ml-Lösung des Antibiotikums in 0,1 m-Phosphatpuffer resuspendiert. Das Versuchsgemisch wurde dann ohne Schütteln in einem auf 37° C eingestellten Wasserbad während 4 Stundn inkubiert. Die Versuchsgemische wurden dann bei 2000 Upm 10 Minuten zentrifugiert, und dabei wurde eine klare @@@@@tehende Lösung erzeugt, die in sterile Reagensgläser dekantiert wurde und unmittelbar in Trockeneis gefroren wurde, bis sie @@@ bi@logischen Bestimmung bereit war, gewöhnlich innerhalb @@@ 3 Stunden. Versuchsproben wurden in genau der gleichen Weise mit Ausnahme der Abwesenheit von Zellen inkubiert. The washed cells were then in one-tenth the original volume resuspended a 4 mg / ml solution of the antibiotic in 0.1 M phosphate buffer. That The test mixture was then placed in a water bath set at 37 ° C. without shaking incubated for 4 hours. The test mixes were then run at 2000 rpm for 10 minutes centrifuged, and a clear @@@@@ solution was produced, which in sterile Test tubes were decanted and immediately frozen in dry ice until she was ready, usually within 3 hours. Experimental samples were made in exactly the same way except for the absence of Cells incubated.

(b) Ausmass der Inaktivierung des Antibiotikums 842A: Die überstehenden Flüssigkeiten wurden auf ihre antibakterielle Wirksamkeit in der folgenden Weise getestet: 6,5 mm Papierscheiben wurden mit den überstehenden Flüssigkeiten angefeuchtet und auf die Oberfläche von Nähragar-0,2 % Hefeex@rakt-Platten gebracht, die vorher mit dem entsprechenden Testorganismus beimpft worden waren.(b) Degree of inactivation of antibiotic 842A: The protruding Liquids were tested for their antibacterial effectiveness in the following way tested: 6.5 mm paper disks were moistened with the supernatant liquids and placed on the surface of nutrient agar 0.2% Hefeex @ rakt plates, which were previously had been inoculated with the corresponding test organism.

@. subtilis (MB-964) Versuchsplatten wurden in der folgen-@en Weise beimpft: 5 ml einer Suspension von gewaschenen Sporen in 0,9 % Salzlösung wurde zu jewils 150 ml eines 0,2 s Nähragar-Hefeextraktes ( 450 C) zugegeben, wovon 5 ml dann in Petri-Schalen von 15 x 100 mm verteilt wurden. @. subtilis (MB-964) experimental plates were made in the following manner inoculated: 5 ml of a suspension of washed spores in 0.9% saline was added 150 ml each 0.2 s nutrient agar yeast extract (450 C) added, 5 ml of which were then distributed in Petri dishes of 15 x 100 mm.

Sämtliche Versuchsplatten wurden bei 5° C gelagert und innerhalb von 3 Tagen verwendet. Die Versuchsplatten wurden übernacht bei 250 C vor der Messung der Inhibierungszonen rund um die Testscheiben inkubiert. All test plates were stored at 5 ° C and inside used for 3 days. The test plates were kept overnight at 250 ° C. before the measurement of the zones of inhibition around the test discs.

Zellfreie Kontrollproben jedes Antibiotikums wurden in - Verdünnungen von 1 : 1, 1 : 2, 1 : 4, 1 : 8,1 : 16 und 1 32 untersucht, um eine Standard-Bezugskurve zu erhalten. lösungen der Testantibiotika wurden bei voller Stärke nach Inkubierung in Gegenwart der gewaschenen Bakterienzellen untersucht. Sämtliche Proben wurden drei-fach gefahren. Cell-free control samples of each antibiotic were made in - dilutions of 1: 1, 1: 2, 1: 4, 1: 8.1: 16 and 1 32 examined to a standard reference curve to obtain. Solutions of the test antibiotics were at full strength after incubation examined in the presence of the washed bacterial cells. All samples were driven three times.

(c) Ergebnisse: Der Prozentgehalt der Inaktivierung wurde berechnet, indem der mittelwert der drei aus jedem Versuch erhaltenen Inhibierungszonen genommen wurden und die Menge an in d'er Testlösung verbleibendem Antibiotikum, wie sich durch die Standardkurve ergibt, ermittelt wurde Dieser Wert wurde dann von der Ausgangskonzentration (4mg/ml) subtrahiert und der Rest durch die Ausgangskonzentration dividiert und mit 100 multipliziert, um die prozentuale Inaktivierung zu erhalten. Die folgende Tabelle XVI gibt die erhaltene Inaktivierung für Cephalosporin C und das Antibiotikum 842A unter den oben beschriebenen Bedingungen wieder.(c) Results: The percentage of inactivation was calculated by taking the mean of the three zones of inhibition obtained from each experiment and the amount of antibiotic remaining in the test solution, such as yourself is determined by the standard curve. This value was then derived from the initial concentration (4mg / ml) subtracted and the remainder divided by the initial concentration and Multiply by 100 to get the percent inactivation. The following Table XVI gives the inactivation obtained for cephalosporin C and the antibiotic 842A under the conditions described above.

CC a b e 1 1 e XVI Prozentuale Inaktivierung nach Inkubierung mit gewaschenen Bakteri enz ellen (bestimmt auf B. subtilis (MB-964) Platten) Abbauender 4stündige Inkubierung Organismus Ceph C Antibiotikum 842A Alcaligenes faecalis 99+ 0 A. viscosus S12 99+ 54,4 Die Fähigkeit des Antibiotikums 842A und von Cephalosporin C, der abbauenden Wirkung von vier anderen Eulturen zu widerstehen, wurde gleichfalls bestimat. Diese Kulturen sind: Escherichia coli 236, Proteus morganii 251, Proteus morganii 356 und Proteus mirabilis 241. Jede ist gram/negativ und gegen Cephalosporin C resistent. Bei Durchführung der Untersuchung wurden Proben der Einzelgeinische der Organismen und eine Probe des Antibiotikums nach 4stündiger Inkubierung entnommen und hinsichtlich der verbliebenen antibiotischen Wirksamkeit untersucht. Das Verfahren ist die gleiche Untersuchungsmethode wie oben gegen Alcaligenes faecalis MB-9 und A. viscosus MB-12 beschrieben. Die folgende Tabelle gibt die proaentuale Inaktivierung von Cephalosporin C und 842A auf B. subtilis (MB-964) nach dieser Methode wieder: T a b e l l e XVII Kultur Geph C Antibiotikum 842A Escherichia coli 236 >99 38 Proteus morganii 251 >99 80 Proteus morganii 356 299 69 Proteus mirabilis 241 72 5 Die vorangehenden Daten zeigen, dass das Antibiotikum 842A offensichtlich gegenüber Inaktivierung durch A. faecalis, A. viscosus, Escherichia coli 236, Proteus morganii 251, Proteus morganii 236 und Proteus mirabilis 241 beständiger ist als Cephalosporin C.CC a b e 1 1 e XVI Percentage inactivation after incubation with washed bacterial cells (determined on B. subtilis (MB-964) plates) Incubation for 4 hours organism Ceph C antibiotic 842A Alcaligenes faecalis 99+ 0 A. viscosus S12 99+ 54.4 The ability of antibiotic 842A and cephalosporin C, to withstand the degradative effects of four other cultures, was also chosen determined These cultures are: Escherichia coli 236, Proteus morganii 251, Proteus morganii 356 and Proteus mirabilis 241. Each is gram / negative and against cephalosporin C resistant. When the investigation was carried out, samples of the individual aggregates were taken of the organisms and a sample of the antibiotic taken after incubation for 4 hours and examined with regard to the remaining antibiotic effectiveness. The procedure is the same test method as above against Alcaligenes faecalis MB-9 and A. viscosus MB-12. The following table gives the proaentual inactivation from cephalosporin C and 842A to B. subtilis (MB-964) using this method again: T a b e l l e XVII culture Geph C antibiotic 842A Escherichia coli 236> 99 38 Proteus morganii 251> 99 80 Proteus morganii 356 299 69 Proteus mirabilis 241 72 5 The foregoing data shows that antibiotic 842A apparently against inactivation by A. faecalis, A. viscosus, Escherichia coli 236, Proteus morganii 251, Proteus morganii 236 and Proteus mirabilis 241 are more resistant is known as cephalosporin C.

Das nach dem vorliegenden Fermentationsverfahren erhaltene Antibiotikum 842A ist eine amphotere Verbindung mit einem scheinbaren isoelektrischen Punkt von etwa pH 3,5; sie ist bei einem-pE-Wert oberhalb von 9,0 instabil, jedoch bei pH 1,5 relativ stabil.The antibiotic obtained by the present fermentation process 842A is an amphoteric compound with an apparent isoelectric point of about pH 3.5; it is unstable at pE above 9.0, but at pH 1.5 relatively stable.

Da die Antibiotika 810A und 842A und deren Salze das Wachstum verschiedener Species von Salmonella in wirksamer Weise inhibieren, können sie als Desinfektionsmittel zu verschiedenen Haushaltszwecken und industriellen Zwecken verwendet werden.Since the antibiotics 810A and 842A and their salts the growth of different To effectively inhibit species of Salmonella, they can act as disinfectants used for various household and industrial purposes.

BeispielsWeise ist 810A wirksam gegen Salmonella schottmuelleri und S.; gallinarum, und 842A ist wirksam gegen Salmonella schottmuelleri 3010, S. gallinarum und S. typhosa, und diese Eigenschaft zeigt deren Brauchbarkeit als sanitäre Mittel für Haushaltszwecke und industrielle Zwecke an.For example, 810A is effective against Salmonella schottmuelleri and S .; gallinarum, and 842A is effective against Salmonella schottmuelleri 3010, S. gallinarum and S. typhosa, and this property shows their usefulness as sanitary agents for household and industrial purposes.

Isolierung und Reinigung Antibiotil.-um 810A: Das Antibiotikum 810A kann durch Adsorption an ein Ionenaustauschharz, beispielsweise an synthetische Anionaustauschharze, die sich von Dextrose oder Acryl Copolymeren ableiten oder nicht-ionische, vernetzte Polymere gereinigt werden. Das adsorbierte Antibiotikum wird aus dem Harz oder Polymeradsorbat mit Wasser oder mit einer wässrigen, alkoholischen Lösung eines geeigneten Salzes, wie beispielsweise Ammoniumchlorid, Natriumchlorid und dgl., eluiert. Beispiele füi verwendbare Ionenaustauschharze und~Polymere,sind die DEAE-Sephadex A-25, Amberlite IRA-68 und Amberlite XAD-2-Medien, die im folgenden beschrieben sind. Gegebenenfalls kann das nach den vorstehenden Verfahren erhaltene Eluat durch eine zweite und dritte Adsorptions- und Eluierungsstufe gereinigt werden. Es werden dann Konzentrate sämtlicher Eluate erhalten, um das gereinigte Produkt zu ergeben.Isolation and Purification Antibiotil.-um 810A: The Antibiotic 810A can by adsorption on an ion exchange resin, for example synthetic Anion exchange resins derived from dextrose or acrylic copolymers or non-ionic, crosslinked polymers are cleaned. The adsorbed antibiotic is made from the resin or polymer adsorbate with water or with an aqueous, alcoholic Solution of a suitable salt such as ammonium chloride, sodium chloride and the like, eluted. Examples of ion exchange resins and polymers that can be used are the DEAE-Sephadex A-25, Amberlite IRA-68, and Amberlite XAD-2 media, which are given below are described. Possibly can do that according to the above Process obtained eluate through a second and third adsorption and elution stage getting cleaned. Concentrates of all the eluates are then obtained in order to remove the to yield purified product.

810A-Komponenten: Das Antibiotikum 810A kann in seine Komponenten, 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxyp-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4- carbonsäure und 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxyp-hydroxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure durch Chromatographie getrennt werden. Dazu gehören: (1) Chromatographie auf einem stark-hydrophilen Anionenaustauschharz, wie beispielsweise *DEAE Sephadex A-25, entwickelt mit einem Ammoniumbromid-Ameisensäure-System.810A components: The antibiotic 810A can be broken down into its components, 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxyp-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4- carboxylic acid and 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxyp-hydroxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid separated by chromatography. These include: (1) Chromatography on a highly hydrophilic anion exchange resin, such as * DEAE Sephadex A-25, developed with an ammonium bromide-formic acid system.

Es können verschiedene Konzentratinen dieses Systems verwendet werden, jedoch wird in der Praxis eine Lösung ans 0,5 m-Ammoniumbromid und 0,1 m-Ameisensäure bevorzugt. Different concentrates of this system can be used, however, in practice a solution of 0.5 m-ammonium bromide and 0.1 m-formic acid is used preferred.

(s) Vhromatographie auf einem schwach-basischen Anionenaustauschharz, wie beispielsweise @@ Amberlite IRA-68. Dies ist eine Gruppenabtrennung, wobei Material in roher Form bei einem pH-Wert vcn etwa 3 bis 3,5 aufgegeben wird und zunächst mit einer Säure bei einem pH-Wert von etwa 2 und dann mit NaCl/HCl 1 bei einem pH-Wert von etwa 1 elu-2eft wird.(s) Vhromatography on a weakly basic anion exchange resin, such as @@ Amberlite IRA-68. This is a group separation, with material is abandoned in raw form at a pH of about 3 to 3.5 and initially with an acid at a pH of about 2 and then with NaCl / HCl 1 at a pH of about 1 elu-2eft.

(3) Chromatographie nach einem nicht-ionischen, vernetzten Polystyrol-Polymerisat, wie beispielsweise ***Amberlite XAD-2. Die Eluierung erfolgt mit einem geeigneten, wässrigen System, jedoch ist es im allgemeinen am günstigsten, ein Gemisch aus Wasser und einem niederen Alkylketon zu verwenden. Typische verwendbare Eluiermittel sind beispielsweise 10 % Methanol in Wasser und anschliessend 50 % Methanol in Wasser. Anstelle der 50%igen Methänolin-Wasser-Lösung kann 20 % Aceton-in-Wasser verwendet werden.(3) chromatography according to a non-ionic, crosslinked polystyrene polymer, such as *** Amberlite XAD-2. Elution is carried out with a suitable aqueous system, however, it is generally best to use a mixture of water and a lower alkyl ketone. Typical eluents that can be used are for example 10% methanol in water and then 50% methanol in water. Instead of the 50% methenoline-water solution, 20% acetone-in-water can be used be used.

* DEAE Sephadex A-25 ist ein synthetisches Anonenaustauschharz, das sich von dem Polysaccharid, Dextran in seiner Chloridform ableitet, d. h. mit Chlorid-Gegenionen; pharmacia Fine Chemicals, Inc., 800 Centeni al- Avenue, Piscataway, New Market, New Jersey 08854. * DEAE Sephadex A-25 is a synthetic anon exchange resin that is derived from the polysaccharide, dextran in its chloride form, d. H. with chloride counterions; pharmacia Fine Chemicals, Inc., 800 Centeni al- Avenue, Piscataway, New Market, New Jersey 08854.

** Einsynthetisches Anionenaustauschharz; ein vernetes Acrylcopolymerisat, das eine schwachbasische tertiäre Aninogruppe enthält; Rohm & Haas Co., Philadelphia, Pennsylvania 19105. ** One synthetic anion exchange resin; a cross-linked acrylic copolymer, containing a weakly basic tertiary amino group; Rohm & Haas Co., Philadelphia, Pennsylvania 19105.

*** Ein nicht-ionischer, vernetzter Polystyrol-Polymersorbent; Rohm & Haas Co., Philadelphia, Pennsylvania 19105. *** A non-ionic, crosslinked polystyrene polymer sorbent; Raw & Haas Co., Philadelphia, Pennsylvania 19105.

Die nach den obigen Methoden erhaltenen einzelnen Produkte können durch Rechromatographie gereinigt werden. So kann beispielsweise 7ß-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic) gereinigt werden, indem dieses Produkt der in der obigen Methode 1 beschriebenen Reinigungsmethode unterzogen wird, mit nachfolgender Entsalzung auf Amberlite XAD-2-Absorbent, und 7ß-D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure kann durch Rechromatographie auf einem Sephadex-A-25 Anionenaustauschharz, das mit 0,5 m-Ammoniumbromid und 0,05 m-Essigsäure entwickelt wird, erneut gereineigt werden.The individual products obtained by the above methods can can be purified by rechromatography. For example, 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) can be purified by this product as described in Method 1 above Is subjected to cleaning method, with subsequent desalination on Amberlite XAD-2 absorbent, and 7β-D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid can be obtained by rechromatography on a Sephadex-A-25 anion exchange resin containing 0.5 m-ammonium bromide and 0.05 m-acetic acid is evolved, must be purified again.

Antibiotikum 842A: Das Antibiotikum 842A kann durch Adsorption an einemIonenaustauschharz, wie beispielsweise auf Harzen, die aus quaternären Ammonium- oder Sulfonsäure-Austauschmedien aufgebaut sind, gereinigt werden. Das adsorbierte Antibiotikum wird aus dem Harzadsorbat mit wässrigen Lösungen oder mit einer wässrigen, alkoholischen Lösung eines geeigneten Salzes, z. 3. Ammoniumchlorid, Natriumchlorid und dgl., eluiert. Zu geeigneten, verwendbaren Ionenaustauschharzen gehören beispielsweise die Polystyrolharze mit im Kern befindlichen Sulfonsäuregruppen (45 % oder 53 % Wasser) oder Polystyroltrimethylbenzylammoniumharze (43 % Wasser, die als Dowex 50 bzw. Dowex 1 bekannt sind. Gegebenenfalls kann das nach dem vorstehenden Verfahren erhaltene Eluat durch eine zweite und dritte Adsorptions- und Eluierungsstufe weiter gereinigt werden. Konzentrate sämtliche Eluate, werden dann erhalten, um das gereinigte 842A-Produkt zu ergeben.Antibiotic 842A: The antibiotic 842A can be adsorbed to an ion exchange resin, such as resins made from quaternary ammonium or sulfonic acid exchange media are built up. The adsorbed Antibiotic is made from the resin adsorbate with aqueous solutions or with an aqueous, alcoholic solution a suitable salt, e.g. 3. ammonium chloride, Sodium chloride and the like, eluted. About suitable ion exchange resins that can be used include, for example, the polystyrene resins with sulfonic acid groups in the core (45% or 53% water) or polystyrene trimethylbenzylammonium resins (43% water, known as Dowex 50 and Dowex 1, respectively. If necessary, this can be done according to the above Process obtained eluate through a second and third adsorption and elution stage further cleaned. Concentrates, all eluates, are then obtained in order to to give the purified 842A product.

Zuberei tun;en Das Antibiotikum 810A und seine einzelnen Bestandteile und das Antibiotikum 842A können allein oder in Kombination als aktiver Bestandteil in irgendeinem einer Vielzahl pharmazeutischer Präparate verwendet werden. Diese Antibiotika und ihre entsprechenden Salze können in Kapselform oder als Tabletten, Pulver oder flüssige Lösungen oder als Suspensionen oder Elixiere verwendet werden. S.ie können oral, intravenös oder intramuskulär verabreicht weraen. Zu geeigneten in der Zusammensetzung verwendeten Trägern gehören bei spielsweise Mannit, Saccharose, Glucose oder sterile Flüssigkeiten, wie z. B. Wasser, Salzlösung, Glykole und Öle aus Erdölherkunft, tierischer, pflanzlicher oder synthetischer Herkunft, wie beispielsweise Erdnussöl, Mineralöl oder Sesamöl. Ausser dem Träger können die erfindungsgemässen Zubereitungen auch andere Bestandteile enthalten, wie beispielsweise Stabilisatoren, Bindemittel, Antioxidantien, Konservierungsmittel, Gleitmittel, Suspendierungsmittel, Viskositätsmittel, Geschmacksstoffe und dgl. Ferner können in den Zubereitungen auch andere aktive Bestandteile enthaiten sein, um ein breiteres Spektrum antibiotischer wirksamkeit zu liefern.Preparing the antibiotic 810A and its individual components and the antibiotic 842A can be used alone or in combination as an active ingredient can be used in any of a variety of pharmaceutical preparations. These Antibiotics and their corresponding salts can be in capsule form or as tablets, Powder or liquid solutions or as suspensions or elixirs can be used. They can be administered orally, intravenously or intramuscularly. To suitable Carriers used in the composition include, for example, mannitol, sucrose, Glucose or sterile liquids, such as. B. water, saline, glycols and oils of petroleum origin, animal, vegetable or synthetic origin, such as Peanut oil, mineral oil, or sesame oil. In addition to the carrier, the inventive Preparations also contain other ingredients, such as stabilizers, Binders, antioxidants, preservatives, lubricants, suspending agents, Viscosity agents, flavorings and the like. Furthermore, in the preparations also contain other active ingredients to make a wider range of antibiotic to deliver effectiveness.

Die zu verabreichende Dosis hängt weitgehend vom Zustand des -zu behandelnden Lebewesens und dem Gewicht des Wirts ab. Der parenterale Weg wird für allgemeine Infektionen und der orale Weg für Intestinalinfaktinen bevorzugt. Im allgemeinen besteht eine tägliche Dosis aus etwa 15 bis etwa 175 mg aktivem Bestandteil je kg Körpergewicht des Lebewesens in einer oder mehreren Anwendungen je Tag. Eine bevorzugte tägliche Dosis für das Antibiotikum 810A oder dessen Einzelkomponenten liegt im Bereich von etwa 20 bis 40 mg an aktivem Bestandteil äe kg Körpergewicht. Die bevorzugte tägliche Dosis für das Antibiotikum 842A liegt im Bereich von etwa 40 bis 80 mg an aktives Bestandteil je kg Köxpergewicht.The dose to be administered depends largely on the condition of the patient to be treated Living being and the weight of the host. The parenteral route is used for general Infections and the oral route are preferred for intestinal infactins. In general a daily dose consists of about 15 to about 175 mg of active ingredient per kg Body weight of the living being in one or more applications per day. A preferred one daily dose for the antibiotic 810A or its individual components is in Range from about 20 to 40 mg of active ingredient per kg of body weight. The preferred one daily dose for the antibiotic 842A ranges from about 40 to 80 mg of active ingredient per kg body weight.

Die vorliegenden Zubereitungen können in verschiedenen Ein heitsdosierungsfo;rmen, beispielsweise in fester oder flüssiger, oral einnehmbarer Dosierungsform, verabreicht werden.The present preparations can be used in various unit dosage forms, for example in solid or liquid, orally ingestible dosage form will.

Die Zubereitungen enthalten je Einheitsdosierung, gleich. ob flüssig oder fest, im allgemeinen etwa 15 mg bis etwa 700 mg aktivem Bestandteil, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zubereitungen; jedoch wird es im allgemeinen bevorzugt, eine Dosierungsinenge im Bereich von etwa 80 mg bis 320 mg zu verwenden. Bei parenteraler Verabreichung ist die Einheitsdosierung gewöhnlich die reine Verbindung in einer sterilen Wasserlösung oder in Form eines löslichen Pulvers, das zur Auflösung bestimmt ist.The preparations contain the same per unit dose. whether liquid or solid, generally from about 15 mg to about 700 mg of active ingredient on the total weight of the preparations; however, it is generally preferred to use a dosage amount ranging from about 80 mg to 320 mg. With parenteral Administration, the unit dose is usually the neat compound in one sterile water solution or in the form of a soluble powder intended for dissolution is.

Eine typische Einheitsdosierungsform besteht im Vermischen von 120 mg Antibiotikum 810E oder 12G mg einer seiner Bestandteile oder eines Salzes mit 20 mg Lactose und 5 mg Magnesiumstearat und Einbringung des 145 mg Gemischs in eine Gelatine-Kapsel Nr. 3. In ähnlicher Weise können unter Verwendung von mehr aktivem Bestandteil und weniger Lactose andere Dosierungsformen in Gelatine-Kapseln Nr. 3 eingebracht werden, und sollte es notwendig sein, mehr als 145 mg Bestandteile zusammen zu vermischen, können grössere Kapseln verwendet werden. In ähnlicher Weise können andere Einheitsdosierungen, wie beispielsweise gepresste Tabletten und Pillen gleichfalls hergestellt werden. Die folgenden Beispiele dienen zur Erläuterung: Trockengefüllte Kapsel, die 120 mg 7ß-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-(αmethoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-(cephem-4-carbonsäure(Ic) enthält je Kapsel 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(αmethoxy-p-sulfooxycinnamoyl)-oxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (ic 120 mg Lactose 20 mg Magnesiumstearat Kapselgrösse Nr X 145 mg Die 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleremido)-3-(α-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (a:c) wird auf ein Pulver einer Korngrösse entprechend einem Siebdurchgang durch ein Sieb mit 0,25 mm (Nr. 60) zerkleinert und dann werden Lactose and Magnesiumstearat durch ein Siebtuch mit 0,25 mm lichter Maschensweite (Nr. 60) auf das Pulver gegeben, und die vereinigten Bestandteile werden 10 Minuten vermischt und dann in Gelatine-Kapseln Nr. 3 eingefüllt.A typical unit dosage form consists of mixing 120 together 810E mg antibiotic or 12G mg of any of its ingredients or a salt with 20 mg lactose and 5 mg magnesium stearate and placing the 145 mg mixture in a Gelatin capsule # 3. Similarly, using more active Ingredient and less lactose other dosage forms in gelatin capsules No. 3, and should it be necessary, more than 145 mg of ingredients together To mix, larger capsules can be used. Similarly, you can other unit doses such as compressed tablets and pills as well getting produced. The following examples serve to illustrate: Dry-filled Capsule containing 120 mg of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (αmethoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3- (cephem-4-carboxylic acid (Ic) Each capsule contains 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyl) -oxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (ic 120 mg lactose 20 mg magnesium stearate capsule size Nr X 145 mg Die 7ß- (D-5-Amino-5-carboxyvaleremido) -3- (α-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (a: c) is passed through a sieve for a powder with a grain size crushed a sieve with 0.25 mm (No. 60) and then lactose and magnesium stearate Put on the powder through a sieve with a mesh size of 0.25 mm (No. 60), and the combined ingredients are mixed for 10 minutes and then placed in gelatin capsules No. 3 filled.

Indem 40 mg Antibiotikun 842A und 100 mg Lactose anstelle der 120 mg an aktivem Bestandteil und 20 mg Lactose in der vorangehenden Zubereitung eingesetzt werden, erhält man eine 145 mg Kapsel, die gleichfalls zur oralen Verabreichung geeignet ist.By using 40 mg of antibiotics 842A and 100 mg of lactose instead of the 120 mg of active ingredient and 20 mg of lactose used in the preceding preparation you get a 145 mg capsule, which is also for oral administration suitable is.

250 mg (D-5-Amino-5- carboxyval erami do )- 3- ( «-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsaure (Ic) enthaltende Tablette je Tablette 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic) 250 mg Dicalciumphosphat, U.S.P. 192 mg Magnesiumstearat 5 mg Lactose, U.S.P. 65 mg Der aktive Bestandteil wird mit dem Dicalciumphosphat und der Lactose vermischt. Das Gemisch wird mit 15%iger Maisstärkepaste (6 mg) granuliert und. grobgesiebt. Es wird bei 450 C getrocknet und wieder durch ein Sieb mit 1,2 mm lichter Maschenweite (Nr. 16) gesiebt. Das Magneslumstearat wird zugegeben und das Gemisch zu Tabletten von etwa 13 mm Durchmesser gepresst.250 mg (D-5-Amino-5-carboxyval erami do) - 3- («-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) containing tablet per tablet 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) 250 mg of dicalcium phosphate, U.S.P. 192 mg magnesium stearate 5 mg lactose, U.S.P. 65 mg The active ingredient is mixed with the dicalcium phosphate and the lactose. The mixture is granulated with 15% corn starch paste (6 mg) and. coarsely sieved. It is dried at 450 ° C. and again passed through a sieve with a mesh size of 1.2 mm (No. 16) sifted. The magnesium stearate is added and the mixture into tablets about 13 mm in diameter.

7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ib) enthaltende Tablette je Tablette 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ib) 125 mg Maisstärke, U.S.P. 6 mg Dicalci umphosphat 192 mg lactose, U.S.P. 190 mg Der aktive Bestandteil wird mit dem Dicalciumphosphat und der Lactose und etwa der Hälfte der Maisstärke vermischt.7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ib) containing tablet per tablet 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ib) 125 mg corn starch, U.S.P. 6 mg dicalcium phosphate 192 mg lactose, U.S.P. 190 mg The active ingredient is made with the dicalcium phosphate and the lactose and about half of the cornstarch mixed together.

Das Gemisch wird dann mit einer 15%igen Maisstärkepaste (6 mg) granuliert und grobgesiebt. Es wird bei 45° C getrocknet und durch Siebe mit 1,2 mm lichte Maschenweite (Nr. 16) gesiebt. Der Rest der Mais stärke und das Magnesiurustearat werden zugegeben, und das Gemisch wird zu Tabletten mit einem Durchmesser von etwa 13 mm, die je 800 mg wiegen, verpresst.The mixture is then granulated with a 15% corn starch paste (6 mg) and coarsely sieved. It is dried at 45 ° C. and passed through 1.2 mm sieves Mesh size (No. 16) sifted. The rest of the cornstarch and that Magnesia turustearate are added and the mixture becomes tablets with a Diameter of about 13 mm, each weighing 800 mg, pressed.

500 mg 7ß- (D- 5-Amino-5- carboxyval erami do ) --3- (α-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic) enthaltende parenterale Lösung Ampulle: 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic) 500 mg Ampulle: Verdünnungsmittel: Steriles Wasser für 3 die Injektion 2 cm Die 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbon-Säure (Ic) kann allein odcr in Kombination mit anderen biologisch aktiven Bestandteilen verabreicht werden, beispielsweise mit anderen antibakteriellen Mitteln, wie beispielsweise Lincomycin, einem Penicillin, Streptomycin, Novobiocin, Gentamicin, Neomycin, Golistin und Kanamycin.500 mg of 7β- (D- 5-amino-5-carboxyval erami do) -3- (α-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Parenteral solution containing (Ic) ampoule: 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) 500 mg ampoule: Diluent: Sterile water for 3 injections 2 cm The 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) can be used alone or in combination with other biologically active ingredients administered, for example with other antibacterial agents such as Lincomycin, a penicillin, streptomycin, novobiocin, gentamicin, neomycin, golistin and kanamycin.

durch Einsatz einer äquivalenten Menge 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3 cephem-4-carbonsäure (Ib) anstelle der 500 mg Amino-5-carboxyvaleramino)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic) in der vorangehenden Zubereitung kann auch eine zur parenteralen Verabreichung geieignete Zubereitung erhalten werden.by using an equivalent amount of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3 cephem-4-carboxylic acid (Ib) instead of the 500 mg amino-5-carboxyvaleramino) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) in the foregoing preparation can also be one for parenteral administration suitable preparation can be obtained.

Synthetische Methoden Ausser den vorstehend beschriebenen Fermentationsprodukten umfasst die Erfindung Derivate, in denen der 3-Carbamoyloxy- Anteil von 842A durch eine grosse Vielzahl von Substituenten ersetzt ist. Im allgemeinen erfolgt dieser Ersatz oder diese Substitution durch einfache Behandlung von 842A mit einem Reagens, das zur Überführung des 3Carbaiiioyloxy-Anteils in den gewünschten Substituenten R (siehe Formel I) befähigt ist. Jedoch ist es in der Praxis häufig notwendig, vor dem Ersatz des 3-Carbamoyloxy-Restes die freien Amino- und Carboxy-Gruppen durch Behandlung von 842A mit einem Stickstoff-Blockierungsmittel, wie beispielsweise einem N-niedrig-Alkoxycarbonylphthalimid und einem Veresterungsmittel unter Bildung des entsprechenden 7ß-(D-5-Phthaloxylamino-5-carboxyvaleramino)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure-diesters (folgende Verbindung II) zu schützen.Synthetic Methods Except for the fermentation products described above the invention includes derivatives in which the 3-carbamoyloxy- proportion of of 842A is replaced with a wide variety of substituents. In general is that replacement or substitution done by simply treating 842A with a reagent that is used to convert the 3Carbaiiioyloxy fraction into the desired Substituents R (see formula I) is capable. However, it is common in practice necessary, before replacing the 3-carbamoyloxy radical, the free amino and carboxy groups by treating 842A with a nitrogen blocking agent such as an N-lower alkoxycarbonylphthalimide and an esterifying agent to form of the corresponding 7β- (D-5-phthaloxylamino-5-carboxyvaleramino) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid diester (following compound II) to protect.

Zu geeigneten Veresterungniitteln gehören Phenyldiazomethan oder Diphenyldiazomethan und dgl. Auch gehören zu anderen anstelle des N-niedrig-Alkoxycarbonylphthalimids verwendbaren Stickstoff-Blockierungsmitteln tertiäres Butyloxyazid oder Trihalogenäthoxycarbonylhalogenide, wie beispielsweise Trichloräthoxycarbonylchlorid und dgl. Die folgende Gleichung, in der das Stickstoff-Blockierungsmittel ein N-niedrig-Alkoxy carbonylphthalimid ist, erläutert diese Reaktion, jedoch sei darauf hingewiesen, dass andere Stickstoff-Blockierungsmittel, beispielsweise die oben erwallntens anstelle dessen in einer sonst gleichen Reaktion eingesetzt werden können, um das entsprechende N-substituierte Derivat zu erhalten: worin R¹³R14C=N2 Diazomethan oder ein arylsubstituiertes Diazomethan ist, wie beispielsweise Phenyldiazomethan oder Diphenyldiazomethan und dgl., und 23 und p14 Wasserstoff oder Phenylreste sind Die auf diese Weise erhaltene Verbindung (II) ist das Ausgangsmaterial in den folgenden synthetischen Verfahren.Suitable esterifying agents include phenyldiazomethane or diphenyldiazomethane and the like. Also, other nitrogen blocking agents usable in place of the N-lower alkoxycarbonylphthalimide include tertiary butyloxyazide or trihaloethoxycarbonyl halides such as trichloroethoxycarbonyl chloride and the like -Alkoxy carbonylphthalimide explains this reaction, but it should be noted that other nitrogen blocking agents, for example those mentioned above, can be used instead in an otherwise identical reaction to obtain the corresponding N-substituted derivative: wherein R¹³R14C = N2 is diazomethane or an aryl-substituted diazomethane such as phenyldiazomethane or diphenyldiazomethane and the like, and 23 and p14 are hydrogen or phenyl radicals The compound (II) thus obtained is the starting material in the following synthetic processes.

Das 3-Hydroxymethylanaloge von 842A wird durch Behandlung der Verbindung II mit einem Nitrosylhalogenid, beispielsweise Nitrosylchlorid, in einem geeigneten Lösungsmittel, wie beispielsweise Methylenchlorid, erhalten. Die folgende Gleichung erläutert dieses Herstellungsverfahren: worin R13 und R14 die vorstehend angegebene Bedeutung besitzen Der so erhaltene Diester, vorzugsweise der Di-benzylester (lIla) karn dann in die entsprechende freie Aminosäure (1V) durch katalytische Hydrierung und Behandlung mit Hydrazinhydrat in einer basischen Lösung hergestellt werden. Die Deblockierung erfolgt nach dieser Methode am zweckmässigsten, wenn das Diester-Reaktionsmittel der Dibenzylester (IIIa) ist. Die folgende Gleichung erläutert dieses Herstellungsverfahren: wobei N das von einem Alkali- oder Erdalkalimetall abgeleitete Kation ist.The 3-hydroxymethyl analog of 842A is obtained by treating Compound II with a nitrosyl halide, e.g. nitrosyl chloride, in a suitable solvent such as methylene chloride. The following equation explains this manufacturing process: in which R13 and R14 have the meaning given above. The diester thus obtained, preferably the di-benzyl ester (IIIa), can then be converted into the corresponding free amino acid (IV) by catalytic hydrogenation and treatment with hydrazine hydrate in a basic solution. According to this method, deblocking is most expedient when the diester reactant is the dibenzyl ester (IIIa). The following equation explains this manufacturing process: where N is the cation derived from an alkali or alkaline earth metal.

Die N-mono-substituierten und N,N,-disbustituierten 3-Carbamoyloxyanalogen von 842A werden in einfacher Weise durch Behandlung des Diesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyval erami do ) - 3- (hydroxym ethyl )- 7-m ethoxy- 3- c ephem-4- carb onsäure, vorzugsweise in Form ihres Dibenzhydrylesters (IIIb), mit einem Carbonylhalogenid, wie beispielsweise Carbonylchlorid (d. h, Phosgen) oder Carbonylbromid, und anschliessende Reaktion d.es auf diese Weise erhaltenen Dibenzhydrylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(halogenformyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (V) mit dem entwprechenden Mono-niedrig-alkylamin, Diniedrig-alkylamin oder heterocyclischen Amin erhalten: worin COX2 ein Carbonylhalogenid, beispielsweise Carbonylchlorid (d. h. Phosgen) oder Carbonylbromid und 1 einen Halogenrest, beispielsweise Chlor, Brom und dgl., HNR15R16 ein primäres oder sekundäres Amin aus Mono-niedrig-alkylaminen, Di-niedrig-alkylaminen und/oder heterocyclischen aminen und R15 und R16 niedere Alkylreste, wie beispielsweise Methyl-, Äthyl-, n-Propyl-, n-Butylreste udn dgl. bedeuten und R13 und R14 zusammengenommen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, unter Bildung eines mononuklearen, heterocyclischen Amins aus Pyrrolidin, Piperidin und/oder Morpholin kombiniert sein können. Das so erhaltene Produkt (vi) kann dann in die entsprechende freie Aminosäure durch Behandlung mit Trifluoressigsäure in xylol und dann mit Hydrazinhydrat in einer basischen. Lösung überführt werden: worin M und R15 und R16 die vorstehend angegebene Bedeutung besitzen.The N-mono-substituted and N, N, -disubstituted 3-carbamoyloxy analogs of 842A are easily obtained by treating the diester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyval erami do) - 3- (hydroxymethyl) - 7-m ethoxy-3-c ephem-4-carbonic acid, preferably in the form of its dibenzhydryl ester (IIIb), with a carbonyl halide such as carbonyl chloride (i.e., phosgene) or carbonyl bromide, and then reacting it in this way obtained dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (haloformyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (V) with the corresponding mono-lower alkylamine, di-lower alkylamine or heterocyclic amine obtained: where COX2 is a carbonyl halide, for example carbonyl chloride (ie phosgene) or carbonyl bromide and 1 is a halogen radical, for example chlorine, bromine and the like R15 and R16 are lower alkyl radicals, such as, for example, methyl, ethyl, n-propyl, n-butyl radicals and the like, and R13 and R14, taken together with the nitrogen atom to which they are bonded, form a mononuclear, heterocyclic amine from pyrrolidine , Piperidine and / or morpholine can be combined. The product (vi) thus obtained can then be converted into the corresponding free amino acid by treatment with trifluoroacetic acid in xylene and then with hydrazine hydrate in a basic. Solution to be transferred: wherein M and R15 and R16 are as defined above.

Ein anderes Verfahren zur Herstellung der N-monosustituierten Derivate von 842A besteht in der Behandlung der Verbindung III oder eines Disalzes davon mit einem geeigneten Isocyanat.Another method for making the N-monosubstituted derivatives of 842A is the treatment of compound III or a disalt thereof with a suitable isocyanate.

Diese Umsetzung wird besonders vorteilhaft in Gegenwart einer starken organischen Base, beispielsweise Triäthylamin und in Gegenwart eines inerten Lösungsmittels, z. B. Dimethylformamid, Methylenchlorid, Tetrahydrofuran oder Acetonitril, durchgeführt: worin R17 einen niederen Alkylrest, halogensubstituierten niederen Alkylrest, z. B. Chlormethyl, 2-Chloräthyl- ode Chlor-tert.-butylrest und dgl., niederen Alkoxycarbonylrest, beispielsweise einen Äthoxycarbonylrest und dgl., mononuklearen und binuklearen Arylrest, z. B. Phenyl-, Naphthylrest und dgl., mononuklearen Alkarylsulfonylrest, z. B. p-Tolylsulfonylrest und dgl., oder einen Benzhydrylrest bedeutet. Typische verwendbare Isocyanat-Reaktionsmittel (d. h. OC-NR17) sind beispielsweise Methylisocyanat, Äthylisocyanat, tert.-Butylisocyanat, Chlormethylisocyanat, ß-Chloräthylisocyanat, Carbäthoxyisocyanat, Phenylisocyanat und Benzhydrylisocyanat. Die nach diesem Verfahren erhaltenen Produkte können dann in die entsprechende freie Säure nach der vorherbeschriebenen Methode, de h. durch Behandlung mit Trifluoressigsäure in Xylol und anschliessende Umsetzung des erhaltenen Zwischenproduktes mit Hydrazinhydrat in basischer Lösung überführt werden.This reaction is particularly advantageous in the presence of a strong organic base, for example triethylamine and in the presence of an inert solvent, e.g. B. dimethylformamide, methylene chloride, tetrahydrofuran or acetonitrile, carried out: wherein R17 is a lower alkyl radical, halogen-substituted lower alkyl radical, e.g. B. chloromethyl, 2-chloroethyl or chloro-tert-butyl radical and the like., Lower alkoxycarbonyl radical, for example an ethoxycarbonyl radical and the like., Mononuclear and binuclear aryl radical, e.g. B. phenyl, naphthyl and the like., Mononuclear alkarylsulfonyl, z. B. p-Tolylsulfonylrest and the like., Or a Benzhydrylrest means. Typical isocyanate reactants (ie OC-NR17) that can be used are, for example, methyl isocyanate, ethyl isocyanate, tert-butyl isocyanate, chloromethyl isocyanate, β-chloroethyl isocyanate, carbethoxy isocyanate, phenyl isocyanate and benzhydryl isocyanate. The products obtained by this process can then be converted into the corresponding free acid by the method described above, de h. be converted into basic solution by treatment with trifluoroacetic acid in xylene and subsequent reaction of the intermediate product obtained with hydrazine hydrate.

Die 3-acylierten Derivate der Erfindung entsprechen der Formel I, worin R einen niederen Alkanoyloxyrest, aromatischen Carbonyloxyrest, Aralknoyloxyrest oder Cycloalkancarbonyloxyrest bedeutet, werden in einfacher Weise durch Behaudlung des Dibenzhydrylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(hydroxymethyl)-7-nethoxy-3-cephem-4-carbonsäure (IlIb) mit einem geeigneten Acylhalogenid erhalten. Die folgende Gleichung erläutert dieses Herstellungsverfahren: worin R18 einen niederen Alkylrest, beispielsweise einen Methyl-, ethylrest und dgl., mononeklearen und bimlkl.earen Arylrest, beispielsweise einen Phenylrest, einen monouklearen, stickstoffhaltigen heterocyclus, wie beispielsweise 4-Pyridylrest und dgl., Naphthylrest und dgl., mononuklearen und bi-nuklearen niederen Alicylrest, wie beispielsweise Benzyl-l Menaphthylrest und dgl., oder einen Cycloalkylrest mit 5 bis 6 Kernkohlenstoffatomen, z. B. Cyclopentyl oder Cyclohexylrest und dgl., bedeutet und 1 die vorstehend angegebene Bedeutung besitzt. Das so erhaltene Produkt kann wiederum in die entsprechende freie Säure durch Behandlung mit Trifluoressigsäure in xylol und anschliessende Umsetzung des erhaltenen Zwischenproduktes mit Hydrazinhydrat in einer basischen Lösung erhalten werden.The 3-acylated derivatives of the invention correspond to the formula I, in which R is a lower alkanoyloxy radical, aromatic carbonyloxy radical, aralknoyloxy radical or cycloalkanecarbonyloxy radical, are easily obtained by treating the dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvalve) - (Hydroxymethyl) -7-nethoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (IIIb) obtained with a suitable acyl halide. The following equation explains this manufacturing process: wherein R18 is a lower alkyl radical, for example a methyl, ethyl radical and the like, mononclear and bimlkl.earen aryl radical, for example a phenyl radical, a monocyclic, nitrogen-containing heterocycle, such as, for example, 4-pyridyl radical and the like, naphthyl radical and the like, mononuclear and bi -nuclear lower alicyl radical, such as benzyl-l menaphthyl radical and the like., Or a cycloalkyl radical with 5 to 6 core carbon atoms, e.g. B. Cyclopentyl or cyclohexyl radical and the like., And 1 has the meaning given above. The product thus obtained can in turn be converted into the corresponding free acid by treatment with trifluoroacetic acid in xylene and subsequent reaction of the intermediate product obtained with hydrazine hydrate in a basic solution.

Die 3-Methylanalogen von 842A werden in einfacher Weise durch Reduktion von 842A oder einem Salz davon, beispielsweise durch katalytische Hydrierung des entsprechenden Alkali-oder Erdalkalisalzes, erhalten. Zu Katalysatoren, die in die sem Verfahren verwendet werden können, gehören beispielsweise beliebige Metalle der Gruppe VIII des- Periodischen Systems, beispielsweise Palladium, Platin oder Nickel. Die folgende Gleichung erläutert dieses Herstellungsverfahren: 3 HOOC-CH- (CEI ) (CHz)3L! ' BOOC-Cii- (C112) NH If -r,' CH 20 CNH2 COOH Solche Derivate von 842A, die nicht nach den vorangehenden Methoden hergestellt werden, können durch Behandlung eines 3-Acyloxymethylanalogen von 842A, beispielsweise dem 3-niedrig-Alkanoyloxymethylanalogen, z. B. 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyval erami do )" 3- (ac etoxym ethyl ) - 7-methoxy- 3- c ephem-4+ carbonsäure, mit dem geeigneten Thioharnstoff oder N-substituierten Thioharnstoff, Triol, Dithiocarbamat, Dithiocarboxylat, Amin, Pyridin, kernsubstituierten Pyridin, Alkaliaulfinat, Azid, Polyhydroxybenzol oder N-niedrig-Alkylindol erhalten werden. Die sich ergebenden Produkte können dann durch übliche Mittel, s. B. durch Umkristallisation aus geeigneten Lösungsmitteln, wie beispielsweise Methanol und Wasser oder durch Fraktionierung durch ein geeignetes Ionenaustauschharz gereinigt werden.The 3-methyl analogs of 842A are obtained in a simple manner by reducing 842A or a salt thereof, for example by catalytic hydrogenation of the corresponding alkali or alkaline earth metal salt. Catalysts that can be used in this process include, for example, any Group VIII metal of the Periodic Table, such as palladium, platinum or nickel. The following equation explains this manufacturing process: 3 HOOC-CH- (CEI) (CHz) 3L! ' BOOC-Cii- (C112) NH If -r, 'CH 20 CNH2 COOH Such derivatives of 842A that are not prepared by the foregoing methods can be prepared by treating a 3-acyloxymethyl analog of 842A, for example the 3-lower alkanoyloxymethyl analog, e.g. B. 7ß- (D-5-amino-5-carboxyval erami do) "3- (ac etoxym ethyl) - 7-methoxy- 3- c ephem-4 + carboxylic acid, with the appropriate thiourea or N-substituted thiourea, triol , Dithiocarbamate, dithiocarboxylate, amine, pyridine, ring-substituted pyridine, alkali metal sulfinate, azide, polyhydroxybenzene or N-lower alkylindole. The resulting products can then be obtained by conventional means, e.g. by recrystallization from suitable solvents such as methanol and Water or by fractionation through a suitable ion exchange resin.

Es wurde festgestellt, dass ausser dem 3-Acyloxymethylanalogen von 842A das 842A an sich als ein Ausgangsmaterial bei der Umsetzung mit Thioharnstoff und Älkaliaziden usw. verwendet werden kann. So kann beispielsweise 842A mit dem geeigneten Thioharnstoff, N-substituierten Thioharnstoff, N,N-disubstituierten Thioharnstoff, Alkaliazid, Thiazol, Thiadiazol, Halogenierungsmittel oder Alkalithiocyanat unter Bildung der entsprechenden 3-Thiouroniummethyl-, 3-Azidomethyl-, 3-Thiazolylmercaptomethyl-, 3-Thiadiazolylmercaptomethyl-, Halogenmethyl- und 3-Thiocyanatomethylanalogen von 842A behandelt werden. Im Prinzip ist es lediglich notwendi.g, d.ie Ausgangsmaterialien zu vereinigen, um die Synthese herbeizuführen, jedoch ist es in der Praxis gewöhnlich zweckmässig, di.e Reaktion durch Anwendung von Wärme, beispielsweise durch Erhitzen auf Temperaturen im Bereich von etwa 45 bis 950 C während eines Zeitraums von etwa 2,5 Tagen bis einigen Minuten zu, katalysieren. Eine bevorzugte Ärbeits temperatur liegt im Bereich von etwa 75 bis 800 C, und. gute Ergebnisse wurden auch nach Erhitzen der Reaktionsteilnehmer bei 950 C während etwa 8 Minuten erhalten. In einigen Fallen ist es auch zweckmässig, die freie Aminogruppe in der 5-Amino-5-carboxyvaleramido-Seitenkette des 842A zu schützen, indem letztere mit- tert.-Butoxycarbonylazid oder einem ähnlichen Blockierungsmittel behandelt wird. Die erhaltene 7ß-(D-5-N-tert.-Butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure kann dann mit dem entsprechenden Thioharnstoff Alkaliazid, Thiazol, Thiadiazol, Halogenierungsmittel oder Thiocyanat-Reaktionsmittel behandelt werden, um den gewünschten Sub£;tituenten in der 3-Stellung des 842A Kerns ohne die Gefahr irgendwelcher unpassenden Seitenreaktinen einzuführen. Das so erhaltene Zwischenprodukt kann dann durch Behandlung mit einem geeigneten Reagens, wie beispielsweise Trifluores.sgsaure, unter Erzielung des gewünschten Produktes deblockiert werden.It was found that in addition to the 3-acyloxymethyl analog of 842A the 842A per se as a starting material in the reaction with thiourea and alkali azides, etc. can be used. For example, the 842A can be used with the suitable thiourea, N-substituted thiourea, N, N-disubstituted thiourea, Alkalizid, thiazole, thiadiazole, halogenating agents or alkali thiocyanate among Formation of the corresponding 3-thiouroniummethyl-, 3-azidomethyl-, 3-thiazolylmercaptomethyl-, 3-thiadiazolyl mercaptomethyl, halomethyl, and 3-thiocyanatomethyl analogs of 842A. In principle it is only necessary, i.e. the starting materials to combine to bring about synthesis, however in practice it is common expedient, di.e reaction by the application of heat, for example by heating to temperatures in the range of about 45 to 950 C for a period of about 2.5 days to a few minutes to catalyze. A preferred working temperature is in the range from about 75 to 800 C, and. good results were also obtained after heating the reactant received at 950 C for about 8 minutes. In some cases it is also appropriate to use the free amino group in the 5-amino-5-carboxyvaleramido side chain Protect the 842A by using the latter with tert-butoxycarbonylazide or a similar one Blocking agent is treated. The 7β- (D-5-N-tert-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3-carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained can then with the corresponding thiourea alkali azide, thiazole, Thiadiazole, Halogenating agents or thiocyanate reactants can be treated to the desired Sub £; tituents in the 3-position of the 842A core without the risk of any incongruous To introduce side reactins. The intermediate product thus obtained can then by treatment with a suitable reagent, such as, for example, Trifluores.sgsaure, to achieve of the desired product can be unblocked.

Das nach dem vorangehenden Verfahren erhaltene 3-Azidomethyl-Derivat vou 842A wird in sein entsprechendes 3-Aminomethylanaloges durch Reduktion überführt. Zu geeigneten Mitteln gehören beispielsweise molekulare Reduktion und Hydrierung über einem geeigneten Metallkatalysator, wie beispielsweise die Metalle der Gruppe VIII des Periodischen Systems. Zu typischen verwendbaren Metallen gehören beispielsweise Platin, Palladium und Nickel und deren Kombinationen.The 3-azidomethyl derivative obtained by the foregoing process vou 842A is converted into its corresponding 3-aminomethyl analogue by reduction. Suitable agents include, for example, molecular reduction and hydrogenation over a suitable metal catalyst such as the metals of the group VIII of the Periodic Table. Typical metals that can be used include, for example Platinum, palladium and nickel and their combinations.

Die molekulare Reduktion des 3-Azidomethyl-Derivats wird am günstigsten durchgeführt, indem Zinkstaub zu einer sauren Lösung des 3-Azidomethyl-Resktionsmittels zugegeben wird.The molecular reduction of the 3-azidomethyl derivative is most favorable carried out by adding zinc dust to an acidic solution of the 3-azidomethyl reactive agent is admitted.

Die erhaltene Lösung wird dann mit Schwefelwasserstoff oder eincJi äquivalenten Material zur Entfernung des löslichen Zinks als der Lösung in Form eines Niederschlags behandelt.The resulting solution is then treated with hydrogen sulphide or a mixture equivalent material for removing the soluble zinc as the solution in the form treated with a precipitate.

Das auf diese Weise erhaltene Product ist das praktisch reine 3-Aminomethylanaloge von 842A.The product obtained in this way is the practically pure 3-aminomethyl analogue from 842A.

Die erfindungsgemässen Produkte (I) bilden eine grosse Vi clzahl phamakologisch verträglicher Salze mit anorganischen und organischen Basen; dazu gehören beispielsweise Metallsalze, wie z. B. solche, die sich von Alkali- und Erdalkalihydrobeiden, Carbonaten und Bicarbonaten ableiten und Salze, die sich von primären, sekundären und tertiären Aminen ableiten, wie beispielsweise Monoalkylamine, Dialkylamine, Trialkylamine, niedere Alkanolamine, Di-niedrig-alkanolamine, niedere Alkylendiamine, N,N-Diaralkyl-niedrig-alkylendiamine, Aralkylamine, aminosubstituierte niedere Alkanole, N,N-di-niedrigalkylaminosubstituierte niedere Alkanole, amino--, polyamino-und guanidinosubstituierte niedere Alkansäuren und stickstoffhaltige heterocyclische Amine. Zu typischen Beispielen dieser Salze gehören Salze, die sich von Natriumhydroxid, Natriumcarbonat, Natriumbicarbonat, Kaliumcarbonat, Kaliumhjydroxid, Calciumcarbonat und dgl. ableiten und d Salze, die sich von Aminen, wie beispielsweise Trimethylamin, Triäthylamin, Piperidin, Morpholin, Chinin, Lysin, Protamin, Arginin, Procain, Äthanolamin, Morphin, Benzylamin, Äthylendiamin, N,N'-Dibenzyläthylendiamin, Diäthanolamin, Piperazin, Dimethylaminoäthanol, 2-Amino-2-methyl-1-propanol, Theophyllin und N-Methylglucamin und dgl., zu ableiten.The products (I) according to the invention form a large number pharmacologically compatible salts with inorganic and organic bases; this includes, for example Metal salts, such as B. those that differ from alkali and alkaline earth metal hydrides, carbonates and derived from bicarbonates and salts that differ from primary, secondary and tertiary Derive amines, such as monoalkylamines, dialkylamines, trialkylamines, lower alkanolamines, di-lower alkanolamines, lower Alkylenediamines, N, N-diaralkyl-lower alkylenediamines, aralkylamines, amino-substituted lower alkanols, N, N-di-lower alkylamino-substituted lower alkanols, amino-, polyamino- and guanidino-substituted ones lower alkanoic acids and nitrogen-containing heterocyclic amines. To typical examples These salts include salts that are made up of sodium hydroxide, sodium carbonate, sodium bicarbonate, Derive potassium carbonate, potassium hydroxide, calcium carbonate and the like and d salts, which differ from amines, such as trimethylamine, triethylamine, piperidine, Morpholine, quinine, lysine, protamine, arginine, procaine, ethanolamine, morphine, benzylamine, Ethylenediamine, N, N'-dibenzylethylenediamine, diethanolamine, piperazine, dimethylaminoethanol, 2-amino-2-methyl-1-propanol, theophylline and N-methylglucamine and the like. To derive.

Die vorstehend erwähnten Salze können Monosalze sein, wie beispielsweise das Monoatriumsalz, das beispielsweise durch Behandlung eines Äquivalents Natriumhydroxid mit eiem Äquivalent des Produktes (I) erhalten wird, oder gemischte Disalze, die d'jrch Behandlung eines Äquivalents des Monosalzes mit einem Äquivalent einer abweichenden Base, erhalten wird.The above-mentioned salts can be monosalts such as, for example the monosodium salt, which can be obtained, for example, by treating one equivalent of sodium hydroxide with one equivalent of the product (I), or mixed disalts which d'jrch treatment of an equivalent of the monosalt with an equivalent of a different one Base.

Diese Disalze können auch erhalten werden, indem ein Äquivalent einer Base mit einem zweiwertigen Kation, wie beispielsweise Calciumhydroxid, mit einem Äquivalent des Produktes (1) behandelt wird. Ferner kommen gemischte Salze und Ester,. wie beispielsweise solche, die durch Behandlung des Produktes (I) mit einem Äquivalent Natriumhydroxid und dann mit einem äquivalent Milchsäure erhalten werden, in Betracht Die erfindungsgemässen Salze sind pharmakologisch verträg, liche, nicht-toxische Derivate die als wirksamer Bestandteil in geeigneten pharmazeutischen Einheitsdo sierungsformen verwendet werden können. Sie können auch mit anderen Arzneimitteln kombiniert werden, um Präparate mit einem breiten Wirkungsspektrum zu ergeben. Ferner sind die erfindungsgemässen Salze und ebenfalls die entsprechenden Ester und Amid-Derivate brauchbar als Zwischenprodukte zur Herstellung des durch die Formel I wiedergegebenen Carbonsäure-Produktes. Die Salze können auch zur Herstellung anderer pharmazeutischverträglicher Salze verwendet werden.These disalts can also be obtained by adding an equivalent of one Base with a divalent cation such as calcium hydroxide with a Equivalent of the product (1) is treated. There are also mixed salts and esters. such as those obtained by treating the product (I) with an equivalent Sodium hydroxide and then lactic acid equivalent can be obtained The salts according to the invention are pharmacologically acceptable, non-toxic Derivatives which are used as the active ingredient in suitable pharmaceutical unit doses Formation forms can be used. You can also use other medicines can be combined to produce preparations with a broad spectrum of activity. Further are the according to the invention Salts and also the corresponding ones Esters and amide derivatives useful as intermediates for the preparation of the by the formula I reproduced carboxylic acid product. The salts can also be used for manufacture other pharmaceutically acceptable salts can be used.

Ausser in Salze können die erfindungsgemässen Produkte (I) auch in ihre entsprechenden Mono- und Diester und Mono-und Diamide überführt werden, wie beispielsweise die Pivaloyloxymethyl- oder Dibenzhydrylester oder Alkyl-, Cycloalkyl-, Aryl- oder Aralkylester, wie beispielsweise die Methyl-, ethyl, , Cyclohexyl-, Phenyl- und Benzylester oder Amide, Diamide, N-niedrig-Alkylamide, N,N-Di-niedrigalkylamide, N-Aralkylamide, N,N-Diaralkylamide oder heterocyclis che Amide, wie beispielsweise N-Methyl- und N-Äthylanid, N,N-Dinethylamid, N,N-Diäthylamid, N-Benzylamid, N,N-Dibenzylamid, Piperidid, Pyrrolidid oder Morpholid und dgl.In addition to salts, the products (I) according to the invention can also be used in their corresponding mono- and diesters and mono- and diamides are converted as for example the pivaloyloxymethyl or dibenzhydryl esters or alkyl, cycloalkyl, Aryl or aralkyl esters, such as, for example, the methyl, ethyl, cyclohexyl, phenyl and benzyl esters or amides, diamides, N-lower alkylamides, N, N-di-lower alkylamides, N-aralkylamides, N, N-diaralkylamides or heterocyclic amides, such as N-methyl- and N-ethylanide, N, N-dinethylamide, N, N-diethylamide, N-benzylamide, N, N-dibenzylamide, Piperidide, pyrrolidide or morpholide and the like.

Zu Methoden zur Herstellung der vorstehend erwähnten Ester und Amid-Derivate gehören die Reaktion des Carbonsäureb Produktes (I) oder eines entsprechenden Säurehalogenids mit Methanol, Äthanol, Cyclohexanol, Phenol, Benzylalkohol oder Dibenzhydrol. In ähnlicher Weise können die Amid-Derivate erhalten werden, indem das entsprechende Säurehalogenid mit.On methods of making the above-mentioned esters and amide derivatives include the reaction of the carboxylic acid product (I) or a corresponding acid halide with methanol, ethanol, cyclohexanol, phenol, benzyl alcohol or dibenzhydrol. In Similarly, the amide derivatives can be obtained by adding the appropriate Acid halide with.

Amnioniak oder mit dem entsprechenden Alkylamin, Dialkylamin, Aralkylamin oder heterocyclischen Amin behandelt wird. Diese und andere übliche Methoden zur Herstellung di.eser Ester und Amide sind dem Fachmann geläufig.Amnionia or with the corresponding alkylamine, dialkylamine, aralkylamine or heterocyclic amine is treated. These and other common methods for The person skilled in the art is familiar with the production of these esters and amides.

Die folgenden Beispiele erläutern die Verfahren, über die die erfindungsgemässen Produkte erhalten werden können. Die Beispiele dienen jedoch lediglich zur Erläuterung, und es ist dem Fachmann klar, dass von der Erfindung andere funktionell-äquivalente Produkte und Verfahren zu ihrer Herstellung eingeschlossen sind. Daher ist jede Modifikation dieser Synthesen, die zur Bildung eines identischen Produktes führt, als analoge Methode anzusehen. Das beanspruchte Verfahren unterliegt weitgehender Variation und Modifikation, und daher wird jede geringe Abweichung oder Ausdehnung als im Rahmen der Erfindung liegend betracht.The following examples explain the processes by which the inventive Products can be obtained. However, the examples are only intended to illustrate and it is clear to the person skilled in the art that other functionally equivalent of the invention Products and processes for their manufacture are included. Hence each is Modification of this Syntheses leading to the formation of an identical Product leads to be regarded as an analogous method. The claimed method is unsuccessful extensive variation and modification, and therefore any slight deviation or extension is considered to be within the scope of the invention.

B e i s p i e l 1 Antibiotikum 810A Ein lyophilisiertes Reagensglas mit Streptomyces griseus Kultur (MA-2837) wurde aseptisch geöffnet. Der Inhalt wurde zur Beimpfung von vier Schrägkulturen eines Nährmediums der folgenden Zusammensetzung verwendet: Medium I: Difco-hefeextrakt 10,0 g Glucose 1P,o g * Phosphatpuffer 2,0 ml MgSO4 . 7H2O 0,05 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Difco-Agar 25,0 g * Phosphatpuffer KH2PO4 91,0 g Na2HPO4 95,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Die Schrägkulturen wurden durch Verteilung von 14 ml/ 22 x 75 mm Kulturreagensglas hergestellt. Das Reagensglas wurde mit Watte verstopft, 15 Minuten auf 1200 C zur Sterilisierung erhitzt, und man liess das Medium in schräger Anordnung verfestigen. Die beimpften Schrägkulturen wurden bei 280 C 1 Moche inkubiert und dann bei 40 C bis zur Verwendung gelagert. Die Kultur auf einer dieser Schrägkulturen wurde dann zur Beimpfung von mit Unterteilungen versehenen 250 ml Erlenmeyer-Kolben verwendet, die 50 ml Medium TI enthielten, indem 5 ml steriles Medium zugegeben wurden, die Schrägkultur-Oberfläche gekratzt wurde, um das Wachstum zu unterbrechen und 1 ml in jeden der drei Keimkolben aseptisch pipettiert wurde. Das Medium II besass die folgende Zusammensetzung: Medium II: Rindsextrakt 3,0 g * NZ Amin 10,0 g Dextrose 10,0 g NaCl 5,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml pH mit NaOH auf 7,2 eingestellt * Ein enzymatisch abgebautes Casein Der Keimkolben wurde auf einem Rotationsschüttler bei 220 Upm nit einem Hub von 5 cm 3 Tage geschüttelt. Die Keimkolbenkultur wurde dann zur Beimpfung von 11 mit Untrteilungen versehenen 2-Liter-Erlenmeyer-Kolben verwendet, die 350 ml Medium III enthielten, wobei 2 bis 3 % Inoculum verwendet wurde. Medium III besass die folgende Zusammensetzung: Medium II: Dextrose 10,0 g Asparagin 190 g K2HPO4 0,1 g MgSO4 . 7H2O 0,5 g Hefe extrakt o,5 g * Spurenelementgemisch Nr. 2 10,0 ml Destilliertes Wasser 1000,0 ml pEf mit NaOH auf 7,2 eingestellt * Spurenelementgemisch Nr. 2: FeSO4 . 7H2O 1,0 g MnSo4 . H2O 1,0 g CuCl2 . 2H2O 25.0 mg CaCl2 100,0 mg lt BO 56,0 mg (NH4)6MO7O24 4H20 19,0 mg ZnSO4 . 7H2O 200,0 mg Destilliertes Wasser 1000,0 ml Die Kolben wurden dann auf einem Schüttler bei 135'bis 150 Upm mit einem Hub von 5 cm 4 Tage bei 280 C geschüttelt.EXAMPLE 1 Antibiotic 810A A lyophilized test tube with Streptomyces griseus culture (MA-2837) was opened aseptically. The content was for inoculating four slant cultures of a nutrient medium with the following composition used: Medium I: Difco yeast extract 10.0 g glucose 1P, o g * phosphate buffer 2.0 ml MgSO4. 7H2O 0.05 g distilled water 1000.0 ml Difco agar 25.0 g * phosphate buffer KH2PO4 91.0 g Na2HPO4 95.0 g Distilled water 1000.0 ml The slants were prepared by distributing 14 ml / 22 x 75 mm culture test tube. The test tube was clogged with cotton wool, heated to 1200 C for 15 minutes for sterilization, and the medium was allowed to solidify in an oblique arrangement. The inoculated slants were incubated at 280 ° C for 1 month and then stored at 40 ° C until used. The culture on one of these slants was then used for inoculating with subdivisions provided 250 ml Erlenmeyer flask used the 50 ml medium TI contained the culture slant by adding 5 ml of sterile medium was scraped to stop growth and put 1 ml in each of the three germinating flasks pipetted aseptically. Medium II had the following composition: Medium II: Beef extract 3.0 g * NZ amine 10.0 g dextrose 10.0 g NaCl 5.0 g distilled Water 1000.0 ml pH adjusted to 7.2 with NaOH * An enzymatically degraded casein The germinal flask was on a rotary shaker at 220 rpm with a stroke of Shaken 5 cm for 3 days. The sprout culture was then used to inoculate 11 with Divided 2 liter Erlenmeyer flasks used containing 350 ml of medium III, using 2 to 3% inoculum. Medium III owned the following composition: Medium II: dextrose 10.0 g asparagine 190 g K2HPO4 0.1 g MgSO4. 7H2O 0.5 g yeast extract 0.5 g * trace element mixture No. 2 10.0 ml distilled Water 1000.0 ml pEf adjusted to 7.2 with NaOH * Mixture of trace elements No. 2: FeSO4. 7H2O 1.0 g MnSo4. H2O 1.0 g CuCl2. 2H2O 25.0 mg CaCl2 100.0 mg according to BO 56.0 mg (NH4) 6MO7O24 4H20 19.0 mg ZnSO4. 7H2O 200.0 mg distilled water 1000.0 ml The flasks were then on a shaker at 135 'to 150 rpm with a Stroke of 5 cm shaken at 280 ° C. for 4 days.

Nach Beendigung des Inkubationszeitraums wurde der Inhalt der 11 Kolben vereinigt und untersucht. Die Untersuchung der kombinierten, zentrifugierten Brühe zeigte eine Inhibierungszone von 22 mm (13 mm-Scheiben) gegen Proteus vulgaris auf iner Standard-Versuchsplatte. Dieses Antibiotikun wurde als 810A identifiziert, d. h. ein Antibiotikumgenisch, das 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-6-methyoxy-3-cephem-4-carbonsäure und 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ia) enthält.At the end of the incubation period, the contents of the 11 flasks united and examined. Examination of the combined, centrifuged broth showed a zone of inhibition of 22 mm (13 mm disks) against Proteus vulgaris in a standard test plate. This antibiotic was identified as 810A, d. H. a genic of antibiotics, the 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -6-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid and 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ia) contains.

B e i s p i e l 2 Antibiotikum 810A Ein lycphilisiertes Reagens glas mit Streptomyces griseus $(MA-2837) wurde aseptisch geöffnet, und der Inhalt wurde zur Beimpfung der als Medium I in Beispiel 1 beschriebenen Nährmedium-Schrägkulturen verwendet. Diese Schrägkulturen wurden bei 280 C 1 Woche inkubi-ert, wonach sie bei 40 C gelagert wurden. Ein Teil der Kultur auf einer dieser Schrägkulturen wurde dann zur Beimpfung eines mit Unterteilungen versehenen 250 ml-Impf-Erlenmeyer-Kolbens, der 50 ml des als Medium II in Beispiel 1 beschriebenen Mediums enthielt, verwendet. Dieses beimpft Medium wurde bei 280 C 2 Tage auf einem Rotationsschüttler mit einem Hub von 5 cm bei 220 Upm inkubiert. Das Inoculum wurde dann aseptisch unter Herunterzentrifungieren des Mycels gewaschen, die überstehende Flüssigkeit abgegossen, in einem gleichen Volumen Salzlösung resuspendiert, rezentrifungiert und wieder in einer O,9%igen Natriumchloridlösung resuspendiert. Das gewaschene Mycel wurde dann zur Beimpfung (2 O/o Inoculum) von zwei mit Unterteilungen versehenen 250 ml-Erlenmeyer-Kolben, die jeweils 50 ml eines chemisch bestimmten Produktionsmediums enthielten, das bei 1200 C 15 Minuten sterilisiert worden war, verwendet. Das chemisch definierte Produktionsmedium hatte die folgende Zusammensetzung: Produktionsmedium: L-Prolin 15,0 g Glycerin 20,0 g Saccharose 2,5 g Monoatriumglutamat 1,5 g NaCl 5,0 g K2HPO4 2,0 g CaCl2 0,4 g MnCl2 . 4H2O 0,1 g FeCl3 . 6H2O 0,1 g ZnC12 0,05 g MgSO4 . 7H2O 1,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml pH (nicht eingestellt) 7,1 Die Produktionskolben wurden dann bei 220 Upm auf einem Schüttler mit einem Hub von 5 cm 4 Tage bei 280 C geschüttelt.EXAMPLE 2 Antibiotic 810A A lycphilized reagent tube Streptomyces griseus $ (MA-2837) was aseptically opened and the contents were for inoculating the nutrient medium slant cultures described as medium I in example 1 used. These slant cultures were incubated at 280 ° C. for 1 week, after which they were stored at 40 C. Part of the culture was based on one of these slant cultures then to inoculate one with subdivisions equipped 250 ml vaccine Erlenmeyer flask, containing 50 ml of the medium described as medium II in Example 1 was used. This inoculated medium was at 280 C for 2 days on a rotary shaker with a Incubated stroke of 5 cm at 220 rpm. The inoculum was then aseptically centrifuged down of the mycelium washed, the supernatant poured off, in an equal Volume of saline solution resuspended, recentrifuged and again in a 0.9% igen Sodium chloride solution resuspended. The washed mycelium was then used for inoculation (2 O / o inoculum) from two graduated 250 ml Erlenmeyer flasks, each containing 50 ml of a chemically determined production medium that is used in 1200 C had been sterilized for 15 minutes. The chemically defined production medium had the following composition: Production medium: L-proline 15.0 g glycerol 20.0 g sucrose 2.5 g monosodium glutamate 1.5 g NaCl 5.0 g K2HPO4 2.0 g CaCl2 0.4 g MnCl2. 4H2O 0.1 g FeCl3. 6H2O 0.1 g ZnC12 0.05 g MgSO4. 7H2O 1.0 g distilled Water 1000.0 ml pH (not adjusted) 7.1 The production flasks were then at Shaken 220 rpm on a shaker with a stroke of 5 cm at 280 ° C. for 4 days.

Es wurden Versuche bei 3 und 4 Tagen durchgeführt. Proben wurden zentrifugiert und die überstehenden Flüssigkeiten nach dem Scheiben-Petri-Schalen-Verfahren untersucht. Unter Verwendung von 13 mm-Scheiben ergaben diese Brühen Inhibierungszonen gegen Proteus vulgaris (MB-838) von 21 mm nach 3 Tagen und 26 mm nach 4 Tagen. Das Produkt wurde als Antibiotikum 810A identifiziert.Experiments were carried out at 3 and 4 days. rehearse became centrifuged and the supernatants by the disk petri dish method examined. Using 13 mm disks, these broths gave zones of inhibition against Proteus vulgaris (MB-838) of 21 mm after 3 days and 26 mm after 4 days. That Product identified as antibiotic 810A.

B e i s p i e l 3 Antibiotikum 810A lin lyophilisiertes Reagensglas mit Streptomyces griseus (MA-4125a) wurde aseptisch geöffnet und der Inhalt in Schrägkulturen der folgenden Zusammensetzung überführt: Medium IV: V8-Saft 100 ml Staley's 4S-Sojabohnenmehl 20,0 g Dextrose 2,0 g Agar 25,0 g Destilliertes Wasser bis 1000,0 ml pH 7,9 bis 8,0 Die so erhaltenen Schrägkulturen wurden dann zur Beimpfung verschiedener 250 ml-Erlenmeyer-Kolben, die jeweils 50 ml des folgenden Mediums V enthielten, verwendet.EXAMPLE 3 Antibiotic 810A in lyophilized test tube with Streptomyces griseus (MA-4125a) was opened aseptically and the contents in slants of the following composition: Medium IV: V8 juice 100 ml Staley's 4S soybean meal 20.0 g dextrose 2.0 g agar 25.0 g distilled water up to 1000.0 ml pH 7.9 up to 8.0 The slant cultures thus obtained were then used for inoculating various 250 ml Erlenmeyer flasks each containing 50 ml of the following medium V were used.

Medium V: Hefe-Autolysat (Ardamin) 10,0 g Glucose 10,0 g Phosphatpuffer 2,0 ml MgS04 71120 0,05 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml pH-Wert unter Verwendung von NaOH auf 6,5 eingestellt.Medium V: yeast autolysate (Ardamin) 10.0 g glucose 10.0 g phosphate buffer 2.0 ml MgS04 71120 0.05 g Distilled Water 1000.0 ml pH using adjusted to 6.5 by NaOH.

Phosphatpufferlö sung: KH2PO4 91,0 g Na2HPO4 95,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Die Keimkolben wurden 1 Tag bei 280 C und 220 Upm geschüttelt.Phosphate buffer solution: KH2PO4 91.0 g Na2HPO4 95.0 g distilled Water 1000.0 ml The germinating flasks were shaken at 280 ° C. and 220 rpm for 1 day.

Der Inhalt der Kolben wurde dan zum Beimpfen von 39 250-ml-Erlanmeyer-Kolben ohne Unterteilungen, die 40 ml des Me-Mediums VI enthielten, mit 3,5 ml Inoculum je Kolben verwendet.The contents of the flasks were then inoculated into 39 250 ml Erlanmeyer flasks without subdivisions containing 40 ml of Me Medium VI with 3.5 ml inoculum used per piston.

Medium Vl: Maisquellflüssigkeit (feuchte Basis) 40,0 g Dextrose 20,0 g NaCl , 2,5 g MgSO4 . 7H2O 0,5 g Polyglykol 2000 0,25 Vol% (zu jedem Kolben einzeln zugegeben) Destilliertes Wasser 1000,0 ml pH-Wert mit NaOH auf 7,0 eingestellt.Medium VI: Corn steep liquor (wet base) 40.0 g dextrose 20.0 g NaCl, 2.5 g MgSO4. 7H2O 0.5 g polyglycol 2000 0.25 vol% (for each flask individually added) Distilled water 1000.0 ml pH adjusted to 7.0 with NaOH.

Die Produktionskolben wurden auf einem Rotationsschüttler mit einem Hub von 5 cm bei 220 Upm und bei 240 C während LCO Stunden geschüttelt, wonach die Kolben zusammengegeben wurden, eine aliquote Menge zur Untersuchung entnommen wurde und der Rest zu Extraktionsstudien verwendet wurde. Die Probe zur Untersuchung wurde unter Verwendung von Chlorwasserstoffsäure auf pH 4,0 angesäuert, filtriert, auf 1 : 4 in Phosphatpuffer mit pH 5,0 verdünnt und auf Proteus vulgaris MB-838-Platten unter Verwendung von 13 mm Scheiben gebracht. Die Inhibierungszone betrug 26,5 mm. Das Produkt wurde als Antibiotikum 810A identifiziert, bestand jedoch vorwie- ' gend aus 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure mit lediglich Spurenmengen an 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy 3-cephem-4-carbonsäure.The production flasks were on a rotary shaker with a Stroke of 5 cm at 220 rpm and shaken at 240 C for LCO hours, after which the Flasks were pooled, an aliquot was withdrawn for examination and the remainder was used for extraction studies. The sample was examined acidified to pH 4.0 using hydrochloric acid, filtered, on Diluted 1: 4 in phosphate buffer with pH 5.0 and put on Proteus vulgaris MB-838 plates brought using 13 mm discs. The zone of inhibition was 26.5 mm. The product was identified as antibiotic 810A but predominantly from 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid with only trace amounts of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy 3-cephem-4-carboxylic acid.

B e i s p i e l 4 Antibiotikum 810A Eine V8 Medium-Schrägkultur der Streptomyces griseus Kultur (MA-4125A) wurde zur Beimpfung von 50 ml Medium V in einem mit Unterteilungen versehen 250 ml-Erlenmeyer-Kolben verwendet.EXAMPLE 4 Antibiotic 810A A V8 medium slant of the Streptomyces griseus culture (MA-4125A) was used to inoculate 50 ml of medium V in a graduated 250 ml Erlenmeyer flask was used.

Medium V: Hefe-Autolysat (Ardamin) 10,0 g Glucose 10,0 g * Phosphatpuffer 2,0 ml MgSO4 7H20 0,05 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml pH-Wert mit NaOH auf 6,5 eingestellt Phosphatpuffer: KH2PO4 91,0 g Na2HPO4 95,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Der Kolben wurde dann auf einem Rotationsschüttler bei 220 Upm 1 Tag bei 280 C geschüttelt. 3 ml dieses vegetativen Inocolums wurden zur Beimpfung eines Keimkolbens, der 50 ml des folgenden synthetischen Mediums (Medium VII) in einem mit Unterteilungen versehenen 250 ml-Erlenmeyr-Kolben enthielt, verwendet.Medium V: yeast autolysate (Ardamin) 10.0 g glucose 10.0 g * phosphate buffer 2.0 ml MgSO4 7H20 0.05 g distilled water 1000.0 ml pH with NaOH to 6.5 set phosphate buffer: KH2PO4 91.0 g Na2HPO4 95.0 g distilled water 1000.0 ml. The flask was then placed on a rotary shaker at 220 rpm for 1 day at 280 C shaken. 3 ml of this vegetative inocolum were used to inoculate a sprout, the 50 ml of the following synthetic medium (Medium VII) in one with partitions equipped 250 ml Erlenmeyr flask was used.

Medium VII: Keimung Produktion L-Asparagin 5,0 g 5, O g L-Hi stidin 4, O g 4,0 g DL-Phenylalanin -- 2,0 g Mononatrium-glutamat -- 1,5 g NaCl 5,0 g 5,0 g K2HPO4 2,0 g 2,0 g CaCl2. 2E2° 0,4 g 0,4 g MnSO4 . H2O 0,1 g 0,1 g FeSO4 . 7H2O 0,1 g 0,1 g ZnSO4 . 7H2O 0,05 g 0,05 g MgSO4 . 7H2O 1,0 g 1,0 g Glycerin 20,0 g 20,0 g Saccharose 2,5 g 2,5 g Destilliertes Wasser *1000,0 ml **1000,0 ml * pH mit NaOH auf 7,0 eingestellt ** pH mit NaOH auf 7,1 eingestellt Der Keimkolben wurde wieder 1 Tag bei 280 C und 220 Upm geschüttelt. Dieses synthetische Keimmedium wurde dann zur Be-Beimpfung verschiedener 250 ml-Erlenmeyer-Kolben ohne Unterteilung, die 38 ml des produktionsmediums VII'bei 1,5 ml Inoculum je Kolben enthielten, verwendet. Die Produktionskolben wurden bei 220 Upm und 240 C geschüttelt, und ihre Inhalte wurden dann zusammengegeben und bei 4- und Stägiger Alterung untersucht. Bei der Untersuchung wurde die gesamte Brühe- auf pH 4,0 unter Verwendung von Chlorwasserstoffsäure angesäuert, und die Brühe wurde dann filtriert undaufi: 4 in Phosphatpuffer von pH 5,0 verdünnt. Die Untersuchung erfolgte auf Proteus vulgaris MB-838 unter Verwendung von 13 mm-Scheiben. Es wurde eine Inhibierungszone von 25,5 mm bei dieser Fermentationsbrühe nach 4tägiger Inkubierung erhalten, und das auf diese Weise erhaltene Produkt wurde als 810A identifiziert.Medium VII: germination production L-asparagine 5.0 g 5, O g L-hi stidine 4.0 g DL-phenylalanine - 2.0 g monosodium glutamate - 1.5 g NaCl 5.0 g 5.0 g K2HPO4 2.0 g 2.0 g CaCl2. 2E2 ° 0.4 g 0.4 g MnSO4. H2O 0.1 g 0.1 g FeSO4. 7H2O 0.1 g 0.1 g ZnSO4. 7H2O 0.05 g 0.05 g MgSO4. 7H2O 1.0 g 1.0 g glycerin 20.0 g 20.0 g sucrose 2.5 g 2.5 g distilled water * 1000.0 ml ** 1000.0 ml * pH with NaOH adjusted to 7.0. ** pH adjusted to 7.1 with NaOH shaken again for 1 day at 280 ° C. and 220 rpm. This synthetic germination medium was made then for inoculating different 250 ml Erlenmeyer flasks without subdivision, which contained 38 ml of the production medium VII 'with 1.5 ml inoculum per flask was used. The production flasks were shaken at 220 rpm and 240 C and their contents were then pooled and examined at 4 and 4 days of aging. In the The whole broth was tested to pH 4.0 using hydrochloric acid acidified, and the broth was then filtered and diluted to i: 4 in phosphate buffer from pH 5.0 diluted. Testing was done on Proteus vulgaris using MB-838 of 13 mm discs. There became a zone of inhibition of 25.5 mm for this fermentation broth obtained after 4 days of incubation, and the product thus obtained became identified as 810A.

B e i s p i e l 5 Herstellung des Antibiotikums 810A und Trennung in seine Bestandteile Stufe A: Fermentation Stufe 1; Der Inhalt eines lyophilisierten Röhrchens mit Streptomyces griseus (MA-2837) wurde in 2 ml Medium I (in Beispiel 1 beschrieben) suspendiert, und das erhaltene Inoculum wurde zur Beimpfung von Schrägkulturen des gleichen Mediums verwendet. Diese Schrägkulturen wurden bei 280 C 5 Tage oder bis sie gut mit Sporen versehen waren, inkubiert, und dann wurden 10 ml Medium VIII zu den Schrägkulturen zugegeben.EXAMPLE 5 Preparation of Antibiotic 810A and Separation into its components stage A: fermentation stage 1; The contents of a lyophilized Tube with Streptomyces griseus (MA-2837) was placed in 2 ml medium I (in example 1), and the resulting inoculum was used for inoculating slants of the same medium is used. These slants were at 280 C for 5 days or until well sporulated, and then 10 ml of Medium VIII added to the slants.

Medium VIII: Fleischextrakt 0,3 O/o NaCl 0,5 % NZ Amin 1 % Dextrose 1 % - pH 7,0 Der Wuchs auf jeder Schrägkultur wurde in Suspension geder kratzt, und die Suspension wurde als Inoculum in folgenden Stufe 2 verwendet.Medium VIII: meat extract 0.3 O / o NaCl 0.5% NZ amine 1% dextrose 1% - pH 7.0 The growth on each slant culture was scratched in suspension, and the suspension was used as an inoculum in Step 2 below.

Stufe 2: Die in Stufe 1 erhaltene Suspension wurde zur Be-Beimpfung eines mit Unterteilungen versehenen 250 ml-Erlenmeyer-Kolbens, der 50 ml sterilisiertes Medium VIII (beschrieben in Stufe 1) enthielt, verwendet. Der beimpfte Kolben wurde dan auf einen Rotationsschüttler bei 220 Upm gebracht und 48 Stunden bei 280 C inkubiert.Stage 2: The suspension obtained in Stage 1 was used for inoculation a graduated 250 ml Erlenmeyer flask that sterilized 50 ml Medium VIII (described in step 1) was used. The inoculated flask was then placed on a rotary shaker at 220 rpm and incubated at 280 ° C. for 48 hours.

Stufe 3: Der Inhalt eines Impfkolbens aus Stufe 2 wurde zur Beimpfung eines mit Unterteilungen versehenen 2-Liter-Erlenmeyer-Kolbens verwendet, der 500 ml des als Medium VIII in Stufe 1 identifizierten Mediums enthielt. Der beimpfte Kolben wurde dann auf einen Rotationsschüttler bei 220 Upm gebracht und 48 Stunden bei 280 C inkubiert.Stage 3: The contents of an inoculation flask from Stage 2 were used for inoculation a graduated 2 liter Erlenmeyer flask used, the 500 ml of the medium identified as Medium VIII in Stage 1. The inoculated Flask was then placed on a rotary shaker at 220 rpm and 48 hours incubated at 280 ° C.

Stufe 4: Ein Inoculum aus 500 ml des aus Stufe 3 erhaltenen Wuchses wurde zur Beimpfung eines 750 Liter-Fermentationsbehälters aus rostfreiem Stahl, der 467 Liter eines sterilen Mediums VIII (in Stufe 1 beschrieben) enthielt, verwendet.Stage 4: An inoculum made from 500 ml of the growth obtained from Stage 3 was used to inoculate a 750 liter fermentation vessel made of stainless steel, containing 467 liters of sterile medium VIII (described in step 1) was used.

Man liess die Fermentation bei einer Temperatur von 28° C unter Bewegung (130 Upm) fortschreiten, während ein Luftstrom von 280 31 (10 cfm) während 65 Stunden beibehalten wurde.The fermentation was left at a temperature of 28 ° C with agitation (130 rpm) while an air flow of 280 31 (10 cfm) was carried out for 65 hours was retained.

W-ahrend der Fermentation wurde ein Antischaummittel, Polgglykol 2000, in kleinen Mengen zugegeben, um übermässiges Schäumen zu verhindern.During the fermentation an anti-foaming agent, Polglykol 2000, added in small amounts to prevent excessive foaming.

Stufe 5: Ein Inoculum aus 380 Liter (10Q gallons) des erhaltenen Wuchses aus Stufe 4 wurde zur Beimpfung eines 5700 Liter (1500 gallon) Fermentationsbehälters aus rostfreiem Stahl, der 4500 Liter (1200 gallons) des folgenden Mediums IX enthielt, verwendet.Stage 5: An inoculum of 380 liters (10Q gallons) of the growth obtained Step 4 became the inoculation of a 5700 liter (1500 gallon) fermentation vessel stainless steel containing 4500 liters (1200 gallons) of the following Medium IX, used.

Medium IX: Maisquellflüssigkeit 4 % Dextrose 2 0c/ pH-Wert mit NaOH auf 7,2 eingestellt Man liess die Fermentatin bei einer Temperatur von 280 C unter Bewegung (120 Upm) fortschreiten, während ein Luftstrom von 1580 ì w55.3 cfm) während 30 bis 36 Stunden beibehalten wurde. Während der Fermentation wurde Polyglykol 2000 in kleinen Mengen zugegeben, um übermässiges Schäumen zu verhindern. Der Ansatz wurde gewonnen und die Wirksamkeit durch den Scheiben-Plattenversuch bestimmt. Unter Verwendung von 13 mm (0,5 inch) Scheiben ergab diese Brühe eine Inhibierungszone von 32,5 mm gegen Proteus vulgaris MB-838. bei Gewinnung nach 31stündiger Alterung.Medium IX: Corn steep liquor 4% dextrose 2 0c / pH-value with NaOH adjusted to 7.2 The fermentatin was left at a temperature of 280.degree Movement (120 rpm) proceed while an airflow of 1580 ì w55.3 cfm) during Was maintained for 30 to 36 hours. During fermentation, polyglycol became 2000 added in small amounts to prevent excessive foaming. The approach was won and the effectiveness by the disc-plate test certainly. Using 13 mm (0.5 inch) disks, this broth made one Zone of inhibition of 32.5 mm against Proteus vulgaris MB-838. if obtained after 31 hours Aging.

Stufe B: Isolierung des Antibiotikumgemischs 810A Filtrierte Brühe 4050 1 (1075 gallons) aus Stufe A, Stufe 5, wurde nach 36 Stunden gewonnen und der pH-Wert in dem Fermentationsbehälter durch Zugabe von Phosphorsäure von 7 bis 8 auf 3,0 eingestellt. Das Mycel wurde durch Durchleiten durch eine Filterpresse vom Platten-Siebtyp entfernt und verworfen. Die filtrierte Brühe wurde dann durch ein 380 1 (100 gallon) Bett aus Amberlite XAD-2 Adsorptionsharz mit einer Fliessgeschwindigkeit von 38 1 (10 gallons) je Minute gegeben. Die verbrauchte Brühe wurde untersucht und verworfest das Harzbett mit 2 Volumen Wasser gewaschen. Das Antibiotikum wurde aus dem Harzbett mit einer 60%'igen"Lösung von Methanol und Wass.er bei einer Fliessgeschwindigkeit von 19 1 (5 gallons) je Minute eluiert. 40 Fraktionen mit jeweils 19 1 (5 gallons) wurden gesammelt und untersucht.Step B: Isolation of Antibiotic Mixture 810A Filtered Broth 4050 liters (1075 gallons) from Level A, Level 5 was recovered after 36 hours and the pH value in the fermentation vessel from 7 to 8 by adding phosphoric acid set to 3.0. The mycelium was passed through a filter press from Plate screen type removed and discarded. The filtered broth was then passed through a 380 l (100 gallon) bed of Amberlite XAD-2 adsorbent resin at one flow rate of 38 liters (10 gallons) per minute. The used broth was examined and washed the resin bed discarded with 2 volumes of water. The antibiotic was taken from the resin bed with a 60% solution of methanol and water at a flow rate eluted at 19 liters (5 gallons) per minute. 40 fractions of 19 1 (5 gallons) each were collected and examined.

Die Fraktionen 2 bis 40 wurden vereinigt und das Methanol durch Eindampfen im Vakuum entfernt. Das Endkonzentrat (158 1, 4s,5 gallons) wurde durch Zugabe von Ammoniumhydroxid auf pE 3,5 eingestellt und gefrorengehalten.Fractions 2 to 40 were combined and the methanol by evaporation removed in vacuo. The final concentrate (158 1, 4s, 5 gallons) was made by adding Ammonium hydroxide adjusted to pE 3.5 and kept frozen.

Proben wurden nach der Scheiben-Plattenmethode gegen Proteus vulgaris biologisch untersucht.Samples were tested against Proteus vulgaris using the disk and plate method biologically examined.

Filtrierte Brühe: An 4000 1 (1060 gallons) filtrierter Brühe durchgeführte Versuche ergaben die folgenden Zonendurchmesser: Filtrierte Brühe Verdünnung Zonengrösse 1:2 26,8 mm 1 : 4 23,8 mm 1 : 8 21,1 mm Verbrauchte Brühe und Waschlösung: 10 Fraktionen von jeweils 380 1 (100 gallons) ergaben nach Untersuchung Null ohne Verdünnung. Das untersuchte Waschwasser ergab Null.Filtered Broth: Performed on 4000 liters (1060 gallons) of filtered broth Tests showed the following zone diameters: Filtered broth Dilution Zone size 1: 2 26.8 mm 1: 4 23.8 mm 1: 8 21.1 mm Used broth and Wash Solution: 10 fractions of 380 l (100 gallons) each gave upon examination Zero without dilution. The washing water tested gave zero.

Eluatfraktinen: Sämtliche Fraktionen wurden untersucht.Eluate Fractins: All fractions were examined.

Die Zonendurchmesser sind im folgenden tabellenmässig aufgeführ: E Eluatfraktionen Fraktion Zonengrösse Fraktion Zonengrösse 1 0 21 33 mm 2 28 mm 22 33 3 35 23 34 4 3LL. 24 34 5 36 25 33 6 36 26 34 7 36 27 32 8 38 28 33 9 38 29 32 10 36 30 32 11 36 31 32 12 38 32 30 13 40 33 30 14 37 34 30 15 36 35 28 16 37 36 27 17 38 37 28 18 36 38 26 19 36 39 26 20 35 40 26 Eluatzusammensetzung und Eluatkonzentrat: Es wurden ebenfalls Versuche an 740 1 (195 gallons) Eluatzusammensetzung und 158 1 (41,5 gallons) Antibiotikum 810A in Form von Eluatkonzentrat durchgeführt.The zone diameters are listed in the following table: E. Eluate fractions Fraction Zone size Fraction Zone size 1 0 21 33 mm 2 28 mm 22 33 3 35 23 34 4 3LL. 24 34 5 36 25 33 6 36 26 34 7 36 27 32 8 38 28 33 9 38 29 32 10 36 30 32 11 36 31 32 12 38 32 30 13 40 33 30 14 37 34 30 15 36 35 28 16 37 36 27 17 38 37 28 18 36 38 26 19 36 39 26 20 35 40 26 Eluate composition and Eluate Concentrate: Tests were also carried out on 740 liters (195 gallons) of eluate composition and 158 liters (41.5 gallons) of Antibiotic 810A in the form of concentrate eluate.

Eluatzusammensetzun Eluatkonzentrat 810A Verdünnung Zonengrösse Verdünung Zonengrösse 1 : 5 28,8 mm 1 : 16 27,25 mm 1 : 10 27,0 mm 1 : 32 24,5 mm 1 : 20 23,8 mm 1 : 40 21,0 mm Untersuchung der Gesamtfeststoffe: Filtrierte Brühe 119 kg 740 S (195 gallons) EluaZzusammensetzung 7,23 kg 158 1 (41,5 gallons) Elustkonzentrat 7,20 kg Stufe C: Adsorptin an einem Anionenaustauschharz Das Konzentrat auf Stufe B (78,5 1, 20,7 gallons) wurde mit Wasser auf 118 1 (31 gallons) verdünnt und an ein 22,5 l"Bett eines schwach-basischen Anionenaustauschharzes (Ainb erlite IRA-68-Harz, Chloridzyklus) bei pH 4,0 und einer strömung von 7,6 1 (2 gallons) je Minute adsorbiert. Danach folgte eine Wäsche mit 45 1 Wasser, wonach das Harzbett mit einer lösung aus 1 m-STatriumnitrat und 0,1 m-Natriumacetat bei pH 7,5 und einer Strömungsgeschwindigkeit von 1,5 1/min. Eluate composition: Eluate concentrate 810A dilution zone size dilution Zone size 1: 5 28.8 mm 1: 16 27.25 mm 1: 10 27.0 mm 1: 32 24.5 mm 1: 20 23.8 mm 1: 40 21.0 mm total solids test: filtered broth 119 kg 740 S (195 gallons) eluant composition 7.23 kg 158 1 (41.5 gallons) elust concentrate 7.20 kg Stage C: Adsorptin on an anion exchange resin The concentrate on stage B (78.5 liters, 20.7 gallons) was diluted to 118 liters (31 gallons) with water and turned on a 22.5 L "bed of weakly basic anion exchange resin (Ainb suffered IRA-68 resin, Chloride cycle) adsorbed at pH 4.0 and a flow of 7.6 liters (2 gallons) per minute. This was followed by washing with 45 l of water, after which the resin bed with a solution from 1 m-S sodium nitrate and 0.1 m-sodium acetate at pH 7.5 and a flow rate of 1.5 1 / min.

eluiert wurde. Zehn 19 1 (5 gallons) Eluatfraktionen wurden dann gesammelt und der pH-Wert mit der aufgefangenen Chlorwasserstoffsäure auf pH 4 eingestellt. was eluted. Ten 19 l (5 gallons) eluate fractions were then added collected and the pH adjusted to pH 4 with the hydrochloric acid collected.

Sämtliche Fraktionen wurden nach der Scheiben-Plattenmethode gegen Proteus vulgaris biologisch wie folgt untersucht: Beschickunslösun Eluatfraktionen, Verdünnung 1 : 10 Verdünnung Zonengrösse Fraktion Zonen- Fraktion Zonengrösse grosse 1 : 10 28,5 mm 1 27 mm 6 25 mm 1 : 20 26,5 mm 2 30 mm 7 23 mm 1 : 40 24 mm 3 28,5 mm 8 .22 mm 4 26 mm 9 21 mm 5 26 mm 10 17,5 mm Der verbrauchte Strom ergab nach Untersuchung 25 mm ohne Verdünnung und das Waschwasser ergab nach Untersuchung 23 mm ohne Verdünnung. All fractions were countered by the disk-plate method Proteus vulgaris examined biologically as follows: Loading solution Eluate fractions, dilution 1:10 dilution zone size fraction zone fraction Zone size large 1: 10 28.5 mm 1 27 mm 6 25 mm 1: 20 26.5 mm 2 30 mm 7 23 mm 1: 40 24 mm 3 28.5 mm 8 .22 mm 4 26 mm 9 21 mm 5 26 mm 10 17.5 mm The used After examination, electricity gave 25 mm without dilution and the wash water gave up Examination 23 mm without dilution.

Stufe D: Adsorotion an Anionenaustauschharz Die Fraktionen 1 bis 10 aus Stufe C wurden kombiniert und einem 45 Liter-Bett aus Amberlite XAD-2 Adsorbens bei pH 3,0 und einer Strömuingsgeschwindigkeit von 5 1/min. zugeführt. Das Harzbett wurde mit 90 1 Wasser bei der gleichen Geschwindigkeit gewaschen. Das Antibiotikum wurde dann aus dem Harz durch eine 25%ige Lösung aus Aceton und Wasser bei einer Strömungsgeschwindigkeit von 5 1/min. eluiert.Stage D: Adsorotion on Anion Exchange Resin Fractions 1 to 10 from Stage C were combined and a 45 liter bed of Amberlite XAD-2 adsorbent at pH 3.0 and a flow rate of 5 1 / min. fed. The resin bed was washed with 90 liters of water at the same speed. The antibiotic was then made from the resin by a 25% solution of acetone and water at a Flow rate of 5 1 / min. eluted.

Sechzehn 19 1 (5 gallons) Fraktionen wurden gesammelt.Sixteen 19 l (5 gallons) fractions were collected.

Sämtliche Fraktionen wurden nach der Scheiben-Plattenmethode gegen Proteus vulgaris wie folgt untersucht: Die Beschikkung (190 Liter) ergab die folgenden Zonendurchmesser: Beschickungslö sung Verdünnung Zonengrösse 1 : 5 30 mm 1 : 10 27,5 na 1 : 20 24,2 mm Die Zonendurchmesser der Eluatfraktionen wurden in der folgenden Tabelle zusammengefasst: Eluatfraktion Eluatfraktion Fraktion Verdünnung Zonengrösse Fraktion Verdünnung Zonengrösse a 0 : 10 20a5 mm 9 1 : 10 25 mm 2 1 : : 10 29 mm 10 1 : 10 26,5 mm 3 0 : 10 29 mm 11 1 : 5 26 mm 4 1 : 10 29 mm 12 1 : 5 28 mm 5 0 : 10 28 mm 13 1 : 5 27,5 mm 6 1 : 10 27 mm 14 1 : 5 25 mm 7 1 : 10 26 mm 15 1 : 5 25 mm 8 1 : 10 26 mm 16 1 : 5 24,5 mm Die obigen Eluatfraktinen 2 bis 16 wurden kombiniert und das Aceton durch Eindampfen im Vakuum auf ein Endvolumen von 17,4 liter entfernt. Das 17,4 Liter-Konzentrat wurde durch Ammoniumhydroxid auf einen pH-Wert von ,4,0 eingestellt und gefriergetrocknet, wobei- 620 g Antibiotikum 810A, d. h.All fractions were countered by the disk-plate method Proteus vulgaris was examined as follows: The charge (190 liters) gave the following Zone diameter: feed solution dilution zone size 1: 5 30 mm 1: 10 27.5 to 1:20 24.2 mm The zone diameters of the eluate fractions were summarized in the following table: eluate fraction eluate fraction fraction Dilution zone size Fraction Dilution zone size a 0: 10 20a5 mm 9 1: 10 25mm 2 1:: 10 29mm 10 1: 10 26.5mm 3 0: 10 29mm 11 1: 5 26mm 4 1: 10 29 mm 12 1: 5 28 mm 5 0: 10 28 mm 13 1: 5 27.5 mm 6 1: 10 27 mm 14 1: 5 25 mm 7 1: 10 26 mm 15 1: 5 25 mm 8 1: 10 26 mm 16 1: 5 24.5 mm The above eluate fractins 2 to 16 were combined and the acetone by evaporation in vacuo to final volume removed from 17.4 liters. The 17.4 liter concentrate was replaced by ammonium hydroxide adjusted to a pH of 4.0 and freeze-dried, with- 620 g antibiotic 810A, i.e. H.

ein Gemisch, bestehend im wesentlichen aus 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten wurde.a mixture consisting essentially of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3 (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid and 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid was obtained.

Dieses trockene Produkt hatte eine Wirksamkeit auf Grund der biologischen Untersuchung von 320 mcgXml für eine 25 mm-Zone.This dry product had biological effectiveness Examination of 320 mcgXml for a 25 mm zone.

Stufe E: 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxyp-hydroxycinnamoyl oxymethyl ) -7-methoxy- 3- c ephem-4-carbonsäure Eine Chromatographie-Kolonne von 2,5 cm Durchmesser wurde auf eine Betthöhe von 100 cm mit DEAE Sephadex A-25 Anionenaustauschharz in einem 0,5 m- Ammoniumbromid und 0,05 rn-Essigsäure enthaltenen System gepackt. Das in Stufe D erhaltene Gemisch des Antibiotikums 810A (10,0 g) wurde in 18 ml einer Lösung aus 0,5 m-Ammoniumbromid und 0,05 m-Essigsäure gelöst und in' die Kolonne eingebracht.Step E: 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxyp-hydroxycinnamoyl oxymethyl) -7-methoxy- 3- c ephem-4-carboxylic acid A chromatography column of 2.5 cm in diameter was measured at a bed height of 100 cm with DEAE Sephadex A-25 anion exchange resin packed in a system containing 0.5 m ammonium bromide and 0.05 m acetic acid. This in Stage D obtained mixture of antibiotic 810A (10.0 g) was dissolved in 18 ml of a solution of 0.5 M ammonium bromide and 0.05 M acetic acid and introduced into the column.

Die Eluierlösung wurde durch das Bett mit einer Geschwindigkeit von 81 ml/h gepumpt, und es wurden 10 ml Fraktionen des eluates maschinell gesammelt. Der Eluatstrom wurde durch ein Differential-Refraktometer übenracht. Die Refraktometer-Aufzeichnung zeigte Massenpeaks bei den Röhren 19, 36, 79, 109 und 206. Scheiben-Plattenversuche gegen. Proteus vulgaris (MB-838) wurden bei jeder dritten Fraktion unter Verwendung von bei pH 7,0 gepufferten 13 mm-Scheiben durchgeführt. Die Zonendurchmesser sind in der folgenden Tabelle aufgeführt: (Die Fraktionen 1 bis 66 ergaben auf Grund der Untersuchung Null). The eluting solution was passed through the bed at a rate of 81 ml / h was pumped, and 10 ml fractions of the eluate were collected by machine. The flow of eluate was monitored by a differential refractometer. The refractometer record showed mass peaks at tubes 19, 36, 79, 109 and 206. Disc-plate experiments against. Proteus vulgaris (MB-838) were used on every third fraction performed on 13 mm disks buffered at pH 7.0. The zone diameters are listed in the following table: (Fractions 1 to 66 resulted in the investigation zero).

Fraktion Zonen- Fraktion Zonen- Fraktion Zonendurch- durch- durchmesser messer messer 69 18 mm 122 29 204 40 + 72 24 n25 28 207 40 + 75 N 128 27 210 40 + 78 y 131 26 213 40 + 81 -- 124 24 216 40 + 83 35 137 21 219 40 86 37 140 20 222 38 89 38 150 18 225 35 92 38 160 20 228 32 95 40 + 170 29 231 31 98 40 + , 180 35 234 27 101 40 + 183 38 237 24 - 104 40 + 186 40 240 23 n07 40 + 189 40 + 243 19 110 40 + 192 40 + 246 17 113 m 195 40 + 249 0 116 38 198 40 + 252 0 119 33 201 40 + Die Fraktionen 80 bis 133 wurden kombiniert und die Fraktionen 170 bis 230 wurden kombiniert.Fraction Zone Fraction Zone Fraction Zone diameter knife knife 69 18 mm 122 29 204 40 + 72 24 n25 28 207 40 + 75 N 128 27 210 40 + 78 y 131 26 213 40 + 81 - 124 24 216 40 + 83 35 137 21 219 40 86 37 140 20 222 38 89 38 150 18 225 35 92 38 160 20 228 32 95 40 + 170 29 231 31 98 40 +, 180 35 234 27 101 40 + 183 38 237 24 - 104 40 + 186 40 240 23 n07 40 + 189 40 + 243 19 110 40 + 192 40 + 246 17 113 m 195 40 + 249 0 116 38 198 40 + 252 0 119 33 201 40 + Fractions 80 to 133 were combined and fractions 170 to 230 became combined.

Eine Wiederholung des obigen Versuchs erfolgte, und die Fraktionen 82 bis 130 wurden kombiniert und die Fraktionen 180 bis 234 wurden kombiniert.The above experiment was repeated and the fractions 82 to 130 were combined and fractions 180 to 234 were combined.

Die die erste aktive Komponente enthaltenden Fraktionen aus den obigen Versuchen wurden kombiniert und an ein 100 ml-Bett aus Amberlite XAD-2 Harz adsorbiert. Das Bett wurde mit 1 Volumen Wasser gewaschen und dann mit 3 Volumen einer 90%igen Lösung aus Methanol und Wasser eluiert. Das Methanol wurde durch Verdampfen im Vakuum entfernt, und das wässrige Konzentrat wurde gefriergetrocknet, wobei 810 ng eines Produktes erhalten wurden, das als 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure identifiziert wurde. Die biologische Wirksamkeit, dieses Produktes, bestimmt nach der Scheiben-Flattenuntersuchungsmethode gegen Proteus vulgaris betrug 18µg/ml und ergab eine 25 mn-Zone. Analyse auf Grund von Ultraviolett-Adsorption ergab die folgenden charalt:;eri«-stischen Daten: UV-Adsorptin in 0,1 n-HCl # max 305 E1cm% 524 UV-Adsorption in 0,1 n-NaOH # max 328 E1cm% 564 Stufe F: 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxyps s ul foxycinnamoylomethyl ) - 7-m ethoxy- 3- c ephem-4-carbonsäure Die Fraktionen aus den beiden Versuchen auf Sephadex A-25, welche die zweite aktive Komponente enthielten, wurden vereinig und an ein 100 Bett von Amberlite XD-2 Harz adsorbiert. Das Bett wurde mit 1 Volumen Wasser gewaschen und dann mit 3 Volumen einer 90%igen Lösung aus Methanol und Wasser eluiert. Die angereicherten Eluate wurden kombiniert, und das Methanol wurd durch Verdampfen im Vakuum entfernt.The fractions containing the first active component from the above Experiments were combined and adsorbed onto a 100 ml bed of Amberlite XAD-2 resin. The bed was washed with 1 volume of water and then with 3 volumes of 90% Solution eluted from methanol and water. The methanol was removed by evaporation in vacuo removed, and the aqueous concentrate was freeze-dried, leaving 810 ng of one Product obtained as 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid was identified. The biological effectiveness of this product is determined by the disk flattening method against Proteus vulgaris was 18 μg / ml and resulted in a 25 mn zone. Analysis based on ultraviolet adsorption indicated the following Characteristic data: UV adsorptin in 0.1 n-HCl # max 305 E1cm% 524 UV adsorption in 0.1 N NaOH # max 328 E1cm% 564 Level F: 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxyps s ul foxycinnamoylomethyl) - 7-m ethoxy- 3- c ephem-4-carboxylic acid The fractions from the two trials on Sephadex A-25, which is the second active component were combined and adsorbed onto a 100 bed of Amberlite XD-2 resin. The bed was washed with 1 volume of water and then with 3 volumes of 90% Solution eluted from methanol and water. The enriched eluates were combined, and the methanol was removed by evaporation in vacuo.

Das wässrige Konzentrat wurde gefriergetrocknet und ergab 720 mg 7ß-(D-5-Amino-5-carboxiyvaleramido)-3-(a:-methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl )-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic). Analyse auf Grund von Ultraviolett-Absorption ergab die folgenden Kenndaten: UV-Adsorption in 0,1 n-HCl #max 287 mm E1cm% 432 UV-Adsorption in 0,1 n-NaOH #max 280 mm E1cm% 432 B e i s p i e l 6 Ab trennung der 7ß- (D- 5-Lmino- 5-carb oxyval eraini do ) - 3" (amethoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure aus dem Antibiotikumgemisch 810A Das 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic) und 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-phydroxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure enthaltende Antibiotikumgemisch 810A (20,0 g) aus Beispiel 5, Stufe D, wurde in 250 nil Wasser gelost und der pHw4ert der Lösung auf 3,5 eingestellt. Diese Lösung wurde durch ein 200 ml-Bett von Amberlite IRA-68 Anionenaustauschharz (Ohloridzyklus) gegeben und anschliessend durch Zugabe von 300 ml Wasser gewaschen. Das Bett wurde dann mit 1 Liter 1%iger (V/V) Ameisensäure in Wasser eluiert. Anschliessend wurden zwei Portionen verdünnte Chlorwasserstoffsäure (pH 0595) zugegeben. Die Beschickungslösung, verbrauchte Lösung und Waschlösung und Eluate 1, 2 und 3 wurden durch Papier-Elektrophorese bei pH 4,0, durchgeführt während 1 Stunde bei 1000 Volt. Gleichstrom, analysiert. Das Papierchromatogramm wurde getrocknet, gegen Ammoniakdampf ausgesetzt um die Säure zu neutralisieren und auf einer Nähragar-Platte, die mit Proteus vulgaris (MB-838) beimpft war, inkubiert.The aqueous concentrate was freeze-dried to give 720 mg of 7β- (D-5-amino-5-carboxiyvaleramido) -3- (α: -methoxy-psulfooxycinnamoyloxymethyl ) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic). Analysis based on ultraviolet absorption gave the following characteristics: UV adsorption in 0.1 n-HCl #max 287 mm E1cm% 432 UV adsorption in 0.1 n-NaOH #max 280 mm E1cm% 432 Example 6 Separation of the 7ß- (D- 5-Lmino-5-carb oxyval eraini do) - 3 "(amethoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid from the antibiotic mixture 810A 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) and 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-phydroxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid containing antibiotic mixture 810A (20.0 g) from Example 5, stage D, was in 250 ml of water were dissolved and the pH value of the solution was adjusted to 3.5. This solution was through a 200 ml bed of Amberlite IRA-68 anion exchange resin (chloride cycle) given and then washed by adding 300 ml of water. The bed was then eluted with 1 liter of 1% (v / v) formic acid in water. Then were added two portions of dilute hydrochloric acid (pH 0595). The loading solution, Spent solution and washing solution and eluates 1, 2 and 3 were determined by paper electrophoresis at pH 4.0, carried out for 1 hour at 1000 volts. Direct current, analyzed. The paper chromatogram was dried, exposed to ammonia vapor around the Neutralize acid and place on a nutrient agar plate filled with Proteus vulgaris (MB-838) was incubated.

Die Überprüfung nach 17stündiger Inkubierung bei 37° C zeigte zwei Inhibierungszonen in dem Bes hickungsmaterial (in der Richtung der Anode), lediglich eine Einzelkomponente (die langsamere der beiden) in der verbrauchten Lösung und den Ameisensäure-Eluaten und eine Einzelkomponente in dem zweiten Chlorwasserstoffsäureeluat, das der schnelleren Komponente in der Beschickung entsprach. Die folgende Tabelle zeigt den Gesamtfeststoff und die biologischen Versuchsdaten: Masse Volumen Gesamte biologische Produkte Einheiten Beschickung 20 g 200 ml 60 000 Einheiten Ia und Ib Verbrauchte Lösung und Waschlösung 11,15 g 500 ml 7 500 n Ib Ameisensäureeluat 4,52 g 1000 ml 20 ooo U Ib Erstes Chlorwasserstoffsäureeluat --- 500 ml 1 000 Zweites Chlorwasserstoffsäureeluat 2,10 g 500 ml 10 000 " Ia Diese Fraktionen wurden durch Adsorption an Amberlite XAD-2 Harz gewonnen, um 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramino)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäule (Ic) abzatre:mlen, und diese wurde durch eine 50%ige Lösung von Methanol und Wasser eluiert, wobei im wesentlichen reines Produkt (Ic) erhalten wurde.Examination after 17 hours of incubation at 37 ° C showed two Zones of inhibition in the loading material (in the direction of the anode), only a single component (the slower of the two) in the consumed Solution and the formic acid eluate and a single component in the second hydrochloric acid eluate, that corresponded to the faster component in the feed. The following table shows the total solids and the biological test data: mass volume total biological products loading units 20 g 200 ml 60,000 units Ia and Ib Used solution and washing solution 11.15 g 500 ml 7 500 n Ib formic acid eluate 4.52 g 1000 ml 20,000 U Ib first hydrochloric acid eluate --- 500 ml 1,000 second Hydrochloric acid eluate 2.10 g 500 ml 10,000 "Ia These fractions were by Adsorption on Amberlite XAD-2 resin recovered to 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramino) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic column (Ic) abzatre: mlen, and this was replaced by a 50% solution of methanol and water eluted to give substantially pure product (Ic).

Beisiel 7 Abtrennung von 7ß (D- 5-Amino- - c arb oxyval erami do ) - 3- (α-m ethoxyp-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure aus dem Antibiotikum 810A Das antibiotische 810A-Gemisch aus 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic) und ?ß- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl)- -7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (5,0 g), das nach Beispiel 5s Stufe D, erhalten wurde, wurde in 20 ml einer 20%igen Lösung aus Aceton und Wasser gelöst und der pH-Wert auf 4,0 eingestellt. Diese Lösung wurde auf ein Bett aus Amerlite XAD-2 Adsorbens von 5 cm Durchmesser x 100 cm Höhe in 20%iger koeton- und Wasserlösung gegeben. Eine Lösung aus 20 % Aceton und Wasser wurde durch das Bett mit einer Geschwindigkeit von 880 ml/h gepumpt, und 20 ml-Praktionen wurden automatisch gesammelt.Example 7 Separation of 7β (D- 5-amino- - carb oxyval erami do) - 3- (α-m ethoxyp-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid from the antibiotic 810A The antibiotic 810A mixture of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) and? Ss- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl) - -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (5.0 g), which was obtained according to Example 5s Stage D, was in 20 ml of a 20% strength Solution of acetone and water dissolved and the pH adjusted to 4.0. This solution was placed on a bed of Amerlite XAD-2 adsorbent measuring 5 cm in diameter by 100 cm in height given in 20% ketone and water solution. A solution of 20% acetone and water was pumped through the bed at a rate of 880 ml / h, and 20 ml practicals were collected automatically.

Scheiben-Platte'nunt ersuchungen gegen Proteus vulgaris (MB-838) wurden bei jeder dritten Fraktion unter Verwendung von 6mm-Scheiben durchgeführt. Die Zonendurchmesser sind in der folgenden Tabelle aufgeführt: Fraktion Zonen- Fraktion Zonen- Fraktion Zonendurchmesser durchmesser durchmesser 1-41 0 131 0 221 18 44 12 mm 134 0 224 18 47 22 137 0 227 18 5° 25 140 8 - 230 17 53 39 143 11 233 17 56 31 146 13 236 15 59 35 149 13 239 15 62 3° 152 15 242 15 65 28 155 15 245 15 68 27 158 16 248 14 71 25 161 17 251 14 74 24 164 18 254 14 77 21 167 17 257 13 80 20 170 18 260 13 83 19 173 20 263 12 86 16 176 21 266 12 89 14 179 21 269 12 92 13 182 21 272 11 95 13 485 21 275 11 98 13 188 22 278 10 101 13 191 23 281 10 104 14 194 23 284 9 107 13 197 23 287 8 110 15 200 22 290 0 113 11 203 24 293 0 116 10 206 24 296 0 119 9 209 24 299 0 122 8 212 24 302 0 125 8 215 24 128 8 218 19 330 0 Die Fraktionen 44 bis 90 wurden vereinigt, Aceton wurde durch Abdampfen im Vakuum entfernt, und das wässrige Konzentrat wurde gefriergetrockn.et., wobei 3,3 g rohe 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3- (a-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic) erhalten wurden.Disk-Platte'nunt inquiries against Proteus vulgaris (MB-838) were carried out on every third fraction using 6mm disks. The zone diameter are listed in the following table: Fraction Zone Fraction Zone fraction zone diameter diameter diameter 1-41 0 131 0 221 18 44 12 mm 134 0 224 18 47 22 137 0 227 18 5 ° 25 140 8 - 230 17 53 39 143 11 233 17 56 31 146 13 236 15 59 35 149 13 239 15 62 3 ° 152 15 242 15 65 28 155 15 245 15 68 27 158 16 248 14 71 25 161 17 251 14 74 24 164 18 254 14 77 21 167 17 257 13 80 20 170 18 260 13 83 19 173 20 263 12 86 16 176 21 266 12 89 14 179 21 269 12 92 13 182 21 272 11 95 13 485 21 275 11 98 13 188 22 278 10 101 13 191 23 281 10 104 14 194 23 284 9 107 13 197 23 287 8 110 15 200 22 290 0 113 11 203 24 293 0 116 10 206 24 296 0 119 9 209 24 299 0 122 8 212 24 302 0 125 8 215 24 128 8 218 19 330 0 The fractions 44 to 90 were combined, acetone was evaporated in the The vacuum was removed and the aqueous concentrate was freezegetrockn.et., 3.3 g of crude 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (a-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) were obtained.

Die Fraktionen 150 bis 225 wurden vereinigt und ergaben bei ähnlicher Behandlung 700 mg 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure.Fractions 150-225 were combined to give similar Treatment 700 mg of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-hydroxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid.

Eine Wiederholung des obigen Versuchs ergab 3,1 g rohe 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic) und 400 mg 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxyp-hydroxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure.A repetition of the above experiment gave 3.1 g of crude 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) and 400 mg of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxyp-hydroxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid.

Die beiden Mengen an 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic), die nach der vorangehenden Methode erhalten wurden, wurden vereinigt, und die 6,4 g Material wurden in ein Bett aus Amberlite XAD-2 2 Adsorbens von 5 cm Durchmesser x 100 cm Höhe in einer 5%igen Lösung aus Methanol und Wasser eingebracht. Eine 5%ige Methanol- und Wasserlösung wurde durch das, Bett mit einer Fliessgeschwindigkeit von 880 ml/h Depumpt und 20 ml Fraktionen wurden automatisch gesam lt. 287 Fraktionen wurden gesammelt, und jede vierte Fraktion wurde nach der Scheiben-Plattenmethode gegen Proteus vulgaris (MB-838) unter Verwendung von 6 mm Scheiben untersucht. Die Untersuchungsergebnisse sind in der folgenden Tabelle aufgeführt. Die Fraktionen 1 bis 50 wurden nicht unter sucht.The two amounts of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) obtained by the foregoing method were combined, and the 6.4 g of material was placed in a bed of Amberlite XAD-2 2 adsorbent 5 cm in diameter x 100 cm high in a 5% solution of methanol and water. A 5% Methanol and water solutions were passed through the bed at one flow rate of 880 ml / h Depumpt and 20 ml fractions were automatically totaled 287 fractions were collected and every fourth fraction was disc-plate method tested against Proteus vulgaris (MB-838) using 6 mm disks. the Test results are shown in the following table. The factions 1 to 50 were not examined.

Fraktion Zonengrösse Fraktion Zonengrösse 51 23 mm 115 20 55 26 119 20 59 23 123 19 63 18 127 18 67 12 131 19 71 0 155 16 75 0 139 17 79 0 143 15 83 7 n47 16 87 9 151 15 91 13 155 13 95 19 159 11 99 21 163 9 103 22 167 0 107 22 171 9 111 21 287 0. Fraction zone size Fraction zone size 51 23 mm 115 20 55 26 119 20 59 23 123 19 63 18 127 18 67 12 131 19 71 0 155 16 75 0 139 17 79 0 143 15 83 7 n47 16 87 9 151 15 91 13 155 13 95 19 159 11 99 21 163 9 103 22 167 0 107 22 171 9 111 21 287 0.

Die Fraktionen 95 bis 159 wurden vereinigt, Methanol wurde im Vakuum abgedampft, und das wässrige Konzentrat wurde gefri ergetrocknet, wobei 700 mg 7ß- (D- 5-Amino- 5- carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxwy-3-cephem-4-carb-onsäure (Ic) erhalten wurden. Das Ultraviolett-Spektrum von 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy 3-cephem-4- carbonsäure (Ic) ergab die folgenden Adsorptionsdaten: UV-Adsorption in 0,1 n-HCl #max 285 E%1cm 160 UV-Adsorption in 0,1 n-NAOH #max 277 E%1cm 166 Bei Untersuchung mit 13 mm-Scheiben nach der Scheiben-Plattenmethode gegen Proteus vulgaris ergab die 7ß-(D-5-Amino-5- carboxyvaleramido ) - 3- (α-methoxy-p- sulfo oxycinnainoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ic)-Probe eine 25 mm-Zone bei 88 mcg/ml und 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramdio)-3-(α-methoxy-o-hydroxycinnamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure ergab eine 25 mm-Zone bei 167 incg/ml.Fractions 95-159 were combined, methanol was in vacuo evaporated, and the aqueous concentrate was freeze-dried, with 700 mg of 7ß- (D- 5-Amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxwy-3-cephem-4-carbonic acid (Ic) were obtained. The ultraviolet spectrum of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfooxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy 3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) gave the following adsorption data: UV adsorption in 0.1 n-HCl #max 285 U% 1cm 160 UV adsorption in 0.1 n-NAOH #max 277 U% 1cm 166 at Investigation with 13 mm disks using the disk and plate method against Proteus vulgaris yielded the 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (α-methoxy-p-sulfo oxycinnainoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ic) sample a 25 mm zone at 88 mcg / ml and 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramdio) -3- (α-methoxy-o-hydroxycinnamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem- 4-carboxylic acid gave a 25 mm zone at 167 incg / ml.

B e i s p i e l 8 Antibiotikum 842A Stufe A: Scbüttelkolben-Produktion iEin lyophilisiertes Röhrchen mit Streptomyces lactamdurans Kultur (MA-2908) wurde aseptisch geöffnet. Das Röhrchen wurde dann zum Beimpfen eines mit Unterteilungen versehenen 250 ml-Erlenmeyer-Kolbens verwendet, der 50 ml Nährmedium V enthielt, -indem das Röhrchen in steriler Gaze zerbrochen wurde und der Klumpen aseptisch in den Kolben überführt wurde.EXAMPLE 8 Antibiotic 842A Level A: Shake flask production iA lyophilized tube of Streptomyces lactamdurans culture (MA-2908) was added aseptically opened. The tube was then used for inoculating one with partitions equipped 250 ml Erlenmeyer flask containing 50 ml nutrient medium V, -by breaking the tube in sterile gauze and removing the lump aseptically was transferred to the flask.

Das Medium V besass die folgende Zusammensetzung: Medium V: Hefe-Autolysat (Ardamin) 10,0 g Glucose 10,0 g *Phosphatpuffer 2,0 ml MgSO4 .7H2O 0,05 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml pH 6,5 *Phosphatpuffer: KH2PO4 91,0 g Na2HPO4 95,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Dieser Keimkolben wurde bei 28° C auf einem Rotationsschütt-1er bei 220 Upm mit einem Hub von 5 cm 3 Tage geschüttelt.The medium V had the following composition: medium V: yeast autolysate (Ardamin) 10.0 g glucose 10.0 g * phosphate buffer 2.0 ml MgSO4 .7H2O 0.05 g distilled water 1000.0 ml pH 6.5 * phosphate buffer: KH2PO4 91.0 g Na2HPO4 95.0 g of distilled water 1000.0 ml This germinating flask was at 28 ° C on a Rotation Schütt-1er shaken at 220 rpm with a stroke of 5 cm for 3 days.

Aliquote Mengen von 5 ml (10 % Inoculum) dieses Wuchses wurden dann unter Verwendung steriler Pipetten in vier Keimkolben der zweiten StuÎe-von der gleichen Grösse überbracht, welche das gleiche Medium wie vorstehend beschrieben enthielten, und diese Kolben wurden dann in der oben angegebenen Weise geschüttelt. Die Keinkolben der zweiten Stufe wurden dann in einen Kolben aseptisch zusammengegeben und zur Beimpfung von 11 mit Unterteilungen versehenen 2 Liter-Erlenmeyer-Kolben, die jeweils 350 ml Medium IX mit 2 bis 3 % Inoculum enthielten, unter Verwendung steriler Pipetten beimpft. Das Medium IX hatte die folgende Zusammensetzung: Medium IX: Amber-Hefe Nr. 300 lÖ,0 g Lösliche Brauereirückstände 20,0 g Dextrose 10,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml pH 7,0 Die Prodtfktionskolben wurden dann bei 28° C auf einem Schüttler bei 145 Upm mit einem Hub von 5 cm 4 Tage geschüttelt. Nach Beendigung des Inkubierungszeitaums wurde der Inhalt von 10 derartigen Kolben vereinigt, und eine Probe wurde zur Entfernung des Mycels zentrifugiert. 5 ml (10% inoculum) aliquots of this growth were then added using sterile pipettes in four germinating flasks of the second stage-of the same size, which is the same medium as described above and these flasks were then shaken as indicated above. The second stage no flasks were then aseptically combined into a flask and for inoculating 11 graduated 2 liter Erlenmeyer flasks, each containing 350 ml of Medium IX with 2 to 3% inoculum, using inoculated with sterile pipettes. Medium IX had the following composition: Medium IX: Amber yeast No. 300 lo, 0 g soluble brewery residues 20.0 g dextrose 10.0 g Distilled water 1000.0 ml pH 7.0 The production flasks were then at 28 ° C shaken on a shaker at 145 rpm with a stroke of 5 cm for 4 days. To At the end of the incubation period, the contents of 10 such flasks were combined, and a sample was centrifuged to remove the mycelium.

Das Vorhandensein des Antibiotikums 842A d. h. des Produktes 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)- epheni-4-carbonsäure (Ib) in der Brühe wurde durch Ägar-Diffusionsversuche bestimmt, die mit 13 mm-Filterpapierscheiben durchgeführt wurden, welche in der Brühe getränkt wurden und auf die Oberfläche der Versuchsplatten gebracht wurden, die 10 ml Medium aus Nähragar (Difco) plus 0,2 % Hefeextrakt (Difoo) enthielten, und mit dem Bakterieninoculum geimpft war. Die Inhibierungszonen wurden nach Übernacht-Inkubierung bei 28° C in mm gemessen.The presence of the antibiotic 842A d. H. of the product 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) - epheni-4-carboxylic acid (Ib) in the broth was determined by Agar diffusion tests, which were carried out with 13 mm filter paper discs soaked in the broth and placed on the surface of the test plates containing 10 ml of medium from nutrient agar (Difco) plus 0.2% yeast extract (Difoo), and with the bacterial inoculum was vaccinated. The zones of inhibition were after overnight incubation at 28 ° C in mm measured.

Die Untersuchungen der nach 4tägiger Fermentation gesammelten Brühe zeigte eine Inhibierungszone von 31,5 mm Durchmesser auf mit Vibrio percolans (MB-1272) beimpften Platten.The investigations of the broth collected after 4 days of fermentation showed a zone of inhibition of 31.5 mm diameter with Vibrio percolans (MB-1272) inoculated plates.

Stufe B: Adsorption an ein Anionenaustaustauchharz Die filtrierte Brühe wurde mit verdünnter Chlonsasserstoffsäure auf pH 7,0 eingestellt, und 2900 ml wurden auf' 100 ml eines stax-basischen Anionenaustauschharzes mit einer styro Divinylbenzol-Matrix (Dowex 1 x 2 Harz, Chloridzyklus) bei 10 ml/inin. adsorbiert. Die verbrauchte Lösung wurde in 500 ml-Fraktionen gesammelt. Die Harzkolonne wurde mit Wasser gewaschen undmit 3%igem NH4Cl in 90%igem Methanol eluiert. Das Eluat wurde in I ml-Fraktionen gesammelt.Stage B: Adsorption on an anion exchange resin. The filtered Broth was adjusted to pH 7.0 and 2900 with dilute hydrochloric acid ml were to '100 ml of a stax-basic anion exchange resin with a styro Divinylbenzene matrix (Dowex 1 x 2 resin, chloride cycle) at 10 ml / in. adsorbed. The used solution was collected in 500 ml fractions. The resin column was washed with water and eluted with 3% NH4Cl in 90% methanol. The eluate was collected in 1 ml fractions.

Scheiben-Plattenversuche gegen Vibrio percolans (MB-1272) wurden bei sämtlichen Fraktionen durchgeführt; die Zonendurchmesser sind in der folgenden Tabelle aufgeführt: Filtrierte Brühe Verbrauchte Fraktion Eluatfraktion Verdünnung Zonen- Fraktion Sonen- Fraktion Zonengrösse grösse grösse keine 26,5 mm 1. 0 1. 25 1 : 2 24 2. 16 2. 29 1 : 4 20 3. 23 3. 29 4. 25 4. 26,5 5. 27 5. 22 6. 27 6. 18 7. 15 8-10. 0 Diese Versuche zeigen, dass etwa 60 % der Wirksamkeit in der verbrauchten Fraktion und etwa 18 % in den Eluaten vorliegen.Disc-plate tests against Vibrio percolans (MB-1272) were carried out at carried out by all political groups; the zone diameters are in the following table listed: Filtered broth. Consumed fraction. Eluate fraction Dilution Zone fraction Sun fraction Zone size size size none 26.5 mm 1. 0 1. 25 1: 2 24 2. 16 2. 29 1: 4 20 3. 23 3. 29 4. 25 4. 26.5 5. 27 5. 22 6. 27 6. 18 7. 15 8-10. 0 These tests show that about 60% of the effectiveness in the consumed fraction and about 18% in the eluates.

Ferner zeigen sie an, dass die Harzkapazität lediglich zwei Fraktionen oder 10 Säulenvolumen Brühe beträgt. Die Eluatfraktionen 1 bis 4 wurden kombiniert und unter Entfernen des Methanols konzentriert. Die verbrauchten Fraktionen 3 bis 6 wurden unter Erzielung von 1960 ml Lösung kombiniert. Ein 1860 ml-Anteil der Lösung wurde mit verdünntem Natri.uzhydroxid von pH 7,2 auf 8,0 eingestellt und an ein stark-basisches Anionenaustauschharz mit einer Styrol-- Divinylbenzol-Matrix (Dowex 1 x 2 Harz, Chloridzyklus) bei 14 ml/min. ad-.They also indicate that the resin capacity is only two fractions or 10 column volumes of broth. Eluate fractions 1 to 4 were combined and concentrated to remove the methanol. The fractions used up 3 to 6 were combined to give 1960 ml of solution. An 1860 ml portion of the solution was adjusted with dilute sodium hydroxide from pH 7.2 to 8.0 and on strongly basic anion exchange resin with a styrene-divinylbenzene matrix (Dowex 1 x 2 resin, chloride cycle) at 14 ml / min. ad-.

sorbiert. Die verbrauchte Lösung wurde in vier gleichen fraktionen gesammelt, und Versuche ergaben, das 5 % der Wirksamkeit vorlag. Die Kolonne wurde mit Wasser gewaschen und mit 5%igem, wässrigem Natriumchlorid eluiert. Das Eluat wurde in 50 ml-Fraktionen goss;mmelt und untersucht. Die Untersuchungen zeigten, dass 90 % der Wirksamkeit in den Schnitten 3 bis 16 vorlag, so diese kombiniert wurden.sorbed. The solution used was in four equal fractions and tests showed that it was 5% effectiveness. The column became washed with water and eluted with 5% aqueous sodium chloride. The eluate was poured into 50 ml fractions; mmelt and examined. The investigations showed that 90% of the effectiveness was in the cuts 3 to 16, so these combined became.

Stufe C: Ads2ffu-onan ein Kationenaustauschharz Ein 50 ml-Anteil eines gemäss Stufe B hergestellten Konzentrats, wurde auf 500 ml verdünnt, der pH-Wert von 8,8 auf pH 2,0 mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure eingestellt und an 25 ml eines stark-sauren Kationenaustauschharzes vom Sulfonat-Typ mit einer Styrol-Divinylbenzol-Matrix (Dowex 50 x 2 Harz, Wasserstoffzyklus) bei 2,5 ml/min. adsorbiert. Die Kolonne wurde mit 25 ml Wasser gewaschen, dann mit 2%igem Pyridin eluiert, bis der pH-Wert des Kolonnenauslaufs auf pH 7 anstieg (54 ml). Untersuchungen der verbrauchten Fraktion und des eluates zeigten 9 % der Wirksamkeit in der verbrauchten Fraktion und 90 % im Eluat an. Das Eluat wurde als das Pyridiniumsalz des Antibiotikums 842A identifiziert, Das 842A-Produkt ist amphoter mit einem scheinbaren isoelektrischen Punkt bei etwa pH 3,5. Das Produkt ist oberhalb pH 7 instabil, jedoch bei pH 1,5 stabil. Das so erhaltene Eluat wurde auf pH 8,0 mit verdünntem Natriumhydroxid eingestellt und unter Vakuum zur Entfernung des Pyridins konzentriert. Das so erhaltene Produkt wurde als das Mononatriumsalz des Antibiotikums 842A identifiziert. Das Molekulargewicht beträgt 468, bezogen auf die 'empirische Formel.Stage C: Ads2ffu-onan a cation exchange resin. A 50 ml portion of a Concentrate prepared according to stage B, was diluted to 500 ml, the pH value adjusted from 8.8 to pH 2.0 with dilute hydrochloric acid and added to 25 ml a strong acidic cation exchange resin of the sulfonate type with a styrene-divinylbenzene matrix (Dowex 50 x 2 resin, hydrogen cycle) at 2.5 ml / min. adsorbed. The column was washed with 25 ml of water, then eluted with 2% pyridine until the pH of the column effluent rose to pH 7 (54 ml). Investigations of the consumed Fraction and the eluate showed 9% effectiveness in the fraction used and 90% in the eluate. The eluate was identified as the pyridinium salt of antibiotic 842A identified, The 842A product is amphoteric with an apparent isoelectric Point at about pH 3.5. The product is unstable above pH 7, but at pH 1.5 stable. The eluate thus obtained was adjusted to pH 8.0 with dilute sodium hydroxide and concentrated under vacuum to remove the pyridine. The product thus obtained was identified as the monosodium salt of antibiotic 842A. The molecular weight is 468 based on the 'empirical formula.

Analyse für C16H21N4SO9Na: ber.: C 41,0%; H 4,5%; N 12,0%; S 6,8; O 30,8%; Na 4,9% gef.: C 39,31%; H 4,76%; N 11,16%; S 6,46%; O 34,12%; Na 4,19%.Analysis for C16H21N4SO9Na: calc .: C 41.0%; H 4.5%; N 12.0%; S 6.8; O 30.8%; Na 4.9% found: C 39.31%; H 4.76%; N 11.16%; S 6.46%; O 34.12%; Na 4.19%.

Bei in vitro Untersuchungen inhibierte dieses Produkt, d. h.In in vitro studies this product inhibited, i. H.

das Antibiotikum 842A das Wachstum der folgenden, graninegativen Bakterien: Escherichie coli, Proteus vlugaris, Alcaligenes faecalis, Brucella bronchiseptica, Salmonella gallinarum, Vibrio percolans und Xanthomonas vesicatoria.the antibiotic 842A stimulates the growth of the following graninegative bacteria: Escherichia coli, Proteus vlugaris, Alcaligenes faecalis, Brucella bronchiseptica, Salmonella gallinarum, Vibrio percolans and Xanthomonas vesicatoria.

Das Produkt inhibiert auch das Wachstum der folgenden grampositiven Bakterien: Staphylococcus aureus, Sarcina lutea und Bacillus subtilis.The product also inhibits the growth of the following gram positive Bacteria: Staphylococcus aureus, Sarcina lutea and Bacillus subtilis.

Auch, bei in vivo Untersuchungen in Mäusen ergab das Antibiotikum 842A die folgenden Wirksamkeiten. Die Verabreichung erfolgte durch subkutane Injektion. Nach Beendigung des Testzeitraums, gewöhnlich 7 Tage nach Verabreichung, wurde die Menge des Produktes, die erforderlich war, um 50 % der Mäuse vor der sonst tödlichen Injektion zu schützen (ED50), berechnet: ED50 auf subkutanem Wege x zwei Dosierungen Proteus vulgaris 51 µg Proteus mirabilis 276 µg * Proteus morganii 3202 276 µg Salmonclla schottmuelleri 103 µg Klebsiella pneumoniae AD 125 Klebsiella pneumoniae B 125 µg Paracolobactrum arizoniae 125 Escherichia coli 200 Aerobacter aerogenes 49 Pasteurella multocida ,57»g Salmonella typhosa 34g Diplococcus pneumoniae E400 566 µg * Cephaloridin und Cephalothin versagten hinsichtlich des Schutzes bei 4000 mg x 2 Dosierungen Ausser den vorstehend erwähnten in vivo Untersuchungen des Produktes wurde ein klinisches Isolat von Proteus morganii 356, das gegenüber Cephalosporine resistent ist und Cephalosporin C abbauen kann, in einem Mäuse-Schutztest verwendet, der in der gleichen Weise wie oben angegeben, durchgeführt wurde.Also, in in vivo studies in mice revealed the antibiotic 842A has the following effects. Administration was by subcutaneous injection. After the trial period ends, usually 7 days after administration, was the amount of product that was required by 50% of the mice before the otherwise protect fatal injection (ED50), calculated: ED50 by subcutaneous route x two Dosages Proteus vulgaris 51 µg Proteus mirabilis 276 µg * Proteus morganii 3202 276 µg Salmonclla schottmuelleri 103 µg Klebsiella pneumoniae AD 125 Klebsiella pneumoniae B 125 µg Paracolobactrum arizoniae 125 Escherichia coli 200 Aerobacter aerogenes 49 Pasteurella multocida, 57 g Salmonella typhosa, 34 g Diplococcus pneumoniae E400 566 µg * cephaloridin and cephalothin failed in terms of protection 4000 mg x 2 dosages In addition to the above-mentioned in vivo studies of the The product was a clinical isolate of Proteus morganii 356, which was opposed to cephalosporins is resistant and can degrade cephalosporin C, used in a mouse protection test, which was carried out in the same manner as stated above.

Die ED50-Werte für diese Versuche sind wie folgt: Infektion Antibiotikum ED50 auf subkutanem Wege x 2 Dosierungen (Mittelwert von zwei Versuchen) Proteus morganii 356 842A 273 µg Proteus morganii 356 Cephalothin 20 000 Proteus morganii 356 Cephaloridin 9 270 B e i s p i e l 9 Antibi otikum 842t Schüttelkolbcn-Produktion: Das Inoculum wurde wie in Beispiel 8 beschrieben hergestellt.The ED50 values for these experiments are as follows: infection Antibiotic ED50 by subcutaneous route x 2 doses (mean of two trials) Proteus morganii 356 842A 273 µg Proteus morganii 356 Cephalothin 20,000 Proteus morganii 356 Cephaloridin 9 270 Example 9 Antibiotics 842t Shake flask production: The inoculum was prepared as described in Example 8.

Zwei Keimkolben der Zweiten Stufe wurden zusammengegeben und die Brühe verwendet, um 62 250 ml-Erlenmeyer-Kolben (bei a ml/Kolben), die jeweils 50 ml Medium X enthielten-, zu beimpfen. Das Medium X besass die folgende Zusanjmensetzung: Medium X: Staley's 4S-Sojebohnenmehl 30,0 g Lösliche Brauereirückstände 7,5 g Cerelose 20,0 g NaCl 2,5 g CaCO3 (nachher pH-Wert auf 7,0) 10,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Die Kolben wurden bei 28° C auf einem Schüttler bei 220 Upm mit einem Hub von 5 cm 5 Tage geschüttelt. Nach Beendigung des Inkubationszeitraums wurde der Inhalt von 60 dieser Kolben vereinigt, und eine Probe zur Entfernung des Mycels zentrifagi ert.Two second stage germinators were put together and the broth used to make 62 250 ml Erlenmeyer flasks (at a ml / flask) each containing 50 ml of medium X contained- to inoculate. The medium X had the following composition: Medium X: Staley's 4S soybean meal 30.0 g Soluble brewery residues 7.5 g Cerelose 20.0 g NaCl 2.5 g CaCO3 (afterwards pH value to 7.0) 10.0 g distilled water 1000.0 ml The flasks were at 28 ° C on a shaker at 220 rpm with a stroke of 5 cm shaken for 5 days. At the end of the incubation period, the contents became of 60 of these flasks combined, and a sample for removal of the mycelium centrifagi ert.

Das Vorhandensein des Antibiotikums 842A wurde gemäss dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren über Agar-Diffusior.suntersuchungen, die an 13 mm Filterpapier-Versuchsscheiben durchgeführt wurden, bestimmt. Nach 4tägi ger Inkubi erung ergab die Untersuchung der Brühe eine Inhibierungszone von 33 mm gegen Vibrio percolans (MB-1272).The presence of the antibiotic 842A was determined according to the in Method described in Example 1 via agar diffuser investigations, which were carried out on 13 mm filter paper test disks were carried out. After 4 days of incubation As a result, examination of the broth revealed a zone of inhibition of 33 mm against Vibrio percolans (MB-1272).

B e i s p i e l 10 Antibiotikum 842A Fermentation: Stufe 1: Ein lyphilisiertes Röhrchen von Streptomyces lactamdurans Kultur (MA-2908) wurde zur Beimpfung von 50 ml sterilem Medium V in einem unterteilten 200 ml-Erlei)meyer-Kolben verwendet.Example 10 Antibiotic 842A Fermentation: Stage 1: A lyophilized Streptomyces lactamdurans culture tubes (MA-2908) were used for inoculation of 50 ml of sterile medium V is used in a 200 ml Erlei) meyer segmented flask.

Medium V: Hefe-Autolysat (Ardamin) 10,0 g Glucose 10,0 g *Phosphatpuffer 2,0 ml MgSO4 . 7H2O 0,05 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml pH unter Verwendung von NaOh auf 6,5 eingestellt *Phosphatpuffer: KH2PO4 91,0 g Na2HP4 9,50 g Destilliertes Wasser 1000,0 ml Der beimpft Kolben wurde auf einem Rotaionsschüttler bei 220 Upm mit einem Hub von 5 cm gebracht und 72 Stunden bei 28o C inkubiert.Medium V: yeast autolysate (Ardamin) 10.0 g glucose 10.0 g * phosphate buffer 2.0 ml MgSO4. 7H2O 0.05 g Distilled Water 1000.0 ml pH using NaOh adjusted to 6.5 * Phosphate buffer: KH2PO4 91.0 g Na2HP4 9.50 g distilled Water 1000.0 ml The inoculated flask was placed on a rotary shaker at 220 rpm brought with a stroke of 5 cm and incubated at 28o C for 72 hours.

Stufe 2: Ein Inoculum von 10,0 ml des erhaltenen, vegetativen Wuchses wurde dann zur Beimpfung eines unterteilten 2 Liter-Brlenmeyer-Kolbens, der 50 ml des oben beschriebenen sterilisierten Mediums V enthielt, verwendet. Der beimpfte Kolben wurde dann auf einen Rotationsschüttler bei 220 Upm gebracht und 48 Stunden bei 28° C inkubiert.Step 2: an inoculum of 10.0 ml of the obtained vegetative Growth was then used to inoculate a 2 liter Brlenmeyer compartmentalized flask containing 50 ml of the sterilized medium V described above was used. The inoculated Flask was then placed on a rotary shaker at 220 rpm and 48 hours incubated at 28 ° C.

Stufe 3: Der Inhalt des Inoculum-Kobens wurde dann zur Beiepfung eines 190 1 (50 gallons) rostfreien Fermentationsbehälters, der 160 Liter des gleichen vorstehend beschriebenen Mediums V enthielt, verwendet. Das beimpfte Medium wurde bei 28° C 48 Stunden unter Bewegung inkubiert, während eine Luftströmung von 85 1/min. (3 cfm) durch die Fermentationsbrühe beibehalten wurde. Während des Fermentationszeitraums wurden kleine Mengen Polygrfol 2000 zur Regelung der Schäumung zugegeben.Stage 3: The contents of the inoculum cob was then used to inoculate a 190 1 (50 gallons) stainless fermentation vessel that is 160 liters of the same Medium V described above was used. The inoculated medium was incubated at 28 ° C for 48 hours with agitation while an air flow of 85 1 / min. (3 cfm) was retained by the fermentation broth. During the fermentation period Small amounts of Polygrfol 2000 were added to regulate the foaming.

Stufe 4: Ein Inoculum von 43 Liter des erhaltenen Wuchses wurde dann zur Beimpfung eines 750 1 (200 gallons) Fermentationsbehälters aus rostfreiem Stahl verwendet, der 467 Liter eines sterilen Mediums III der folgenden Zusammensetzung enthielt: Medium XI: Amber-Hefe Nr. 300 10,O g Lösliche Brauereirückstände 20,0 g Destilliertes Wasser 1000,0 m pH 7,0 Man liess die Fermentation bei einer Temperatur von 28° C unter Bewegung fortschreiten, während eine Luftströnung von 280 1/min. (10 cfta) während 72 Stunden beibehalten wurde.Step 4: An inoculum of 43 liters of the obtained growth was then for inoculating a 750 l (200 gallon) stainless steel fermentation vessel used, the 467 liters of a sterile medium III of the following composition contained: Medium XI: Amber yeast No. 300 10.0 g Soluble brewery residues 20.0 g of distilled water 1000.0 m pH 7.0 The fermentation was left at one temperature of 28 ° C with agitation while an air flow of 280 1 / min. (10 cfta) was maintained for 72 hours.

Während der Fermentation wurde ein Antischaummittel, Polyglykol 2000, in kleinen Mengen zugegeben, um übermässiges Schäumen zu verhindern. Der Ansatz wurde gewonnen und die Wirksamkeit durch Scheiben-Plattenversuche ermittelt. Die Fermentationsbrühe wurde dann durch Diatomeenerde bei einem pH-Wert von ?,8 filtriert, und das so erhaltene Produkt wurde als 842A nach dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren identifiziert. Scheiben-Plattenversuche einer 1 : 10-Verdunnung ergaben eine Inhibierungszone von 21,5 mm gegen Vibrio percolans (MB-1272).During the fermentation, an anti-foam agent, Polyglycol 2000, was added in small amounts to prevent excessive foaming. The approach was obtained and the effectiveness determined by disk-plate tests. the Fermentation broth was then through diatomaceous earth at a PH value of?, 8 filtered, and the product thus obtained was identified as 842A according to that in Example 1 identified the procedure described. Slice-plate tests at a 1:10 dilution gave a zone of inhibition of 21.5 mm against Vibrio percolans (MB-1272).

B e i 5 p i' e 1 11 Relin ung, Mononatriumsalz der 7B-(5-Amino-5-carboxyvaleramino)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Adsorption an Kohle: Vier Fermentationsansätze, die gemäss Beispiel 8 gewonnen wurden, wurden jeweils an 100 ml eines stark-basischen Änionenaustauschharzes mit einer Styrol-Divinylbenzol-Matrix (Dowex 1 x 2 Harz, Chloridzyklus) adsortiert und mit 1%igem, wässrigem Natriumchlorid eluiert.B e i 5 p i 'e 1 11 Relinung, monosodium salt of 7B- (5-amino-5-carboxyvaleramino) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Adsorption on coal: four fermentation batches, which were obtained according to Example 8, were each to 100 ml of a strongly basic ion exchange resin with a Styrene-divinylbenzene matrix (Dowex 1 x 2 resin, chloride cycle) adsorbed and with 1% aqueous sodium chloride eluted.

-Das Eluat wurde in 50 ml-Fraktionen gesammelt und untersucht.-The eluate was collected in 50 ml fractions and examined.

Eluatfraktionen von sämtlichen vier Ansätzen wurden auf pH 5 mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure eingestellt und unter Erzielung von 4300 ml Lösung vereinigt. 4200 ml dieser Lösung wurden mit 42 g Kohle (Darco G-60) 1/2 Stunde gerührt. Die Kohle wurde abfiltriert und mit Wasser gewaschen. Das Filtrat und- die Waschlösung zeigten keine Aktivität. Der Kohlekuchen wurde zweimal mit einer 1 Liter-Menge 60%igem, wässrigem Aceton eluiert, indem das Gemisch 1/2 Stunde gerührt und jeweils filtriert wurde. Die Eluate wurden :unter Vakuum auf 108 ml bzw. 100 ml konzentriert. Versuche zeigten, dass das erste Eluat 76 % der Aktivität enthielt, 18mal so wirksam wie das Ausgangsmaterial war und dass das zweite Eluat 17 % der Wirksamkeit enthielt und 14mal so wirksam wie das Ausgangsmaterial war. Die beiden Konzentrate wurden vereinigt und weiter auf 61 ml konzentriert und von pH 4 auf pH 5 mit verdünntem Natriumhydroxid eingestellt. Dieses Konzentrat enthielt 40 ing/ml trockene Feststoffe und ergab eine 25 mmw Zone gegen MB-1272 bei einer Verdünnung von 1 : 100 (400 mcg/ml). Das .Produkt-wurde als das Mononatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ia) identifiziert.Eluate fractions from all four batches were diluted to pH 5 with Adjusted hydrochloric acid and combined to give 4,300 ml of solution. 4200 ml of this solution was stirred with 42 g charcoal (Darco G-60) for 1/2 hour. the Charcoal was filtered off and washed with water. The filtrate and the washing solution showed no activity. The charcoal cake was twice with a 1 liter amount of 60%, aqueous acetone eluted by stirring the mixture for 1/2 hour and filtering each time became. The eluates were: concentrated under vacuum to 108 ml and 100 ml, respectively. try showed that the first eluate contained 76% of the activity, 18 times as potent as was the starting material and that the second eluate was 17% potency and 14 times as effective as the starting material. The two concentrates were combined and further concentrated to 61 ml and from pH 4 to pH 5 with diluted Sodium hydroxide set. This concentrate contained 40 ng / ml dry solids and gave a 25 mmw zone against MB-1272 at a dilution of 1: 100 (400 mcg / ml). The product was known as the monosodium salt of the 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ia) identified.

B e i s p i e 1 12 Reinigung; Mononatriumsalz der 7ß(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Adsorption an Gel: Ein 22 ml-Anteil des oben gemäss Beispiel 8, Stufe B, erhaltenen Eluats wurde mit verdünntem Natriumhydroxid auf pH 7,0 eingestellt und auf einer 388 ml Biogel P-2 enthaltenden Kolonne chromato;raplriert Die Kolonne wurde mit Wasser entwickelt, das ausströmende Gut mit einem Differential-Refraktometer aufgezeichnet und 5 ml Fraktionen automatisch gesammelt und biologisch untersucht. Die ,iologische Wirksamkeit trat in den Fraktionen 47 bis 63 auf, während 1triumchlod in den Fraktionen 62 bis 72 auftrat.EXAMPLE 1 12 cleaning; Monosodium salt of 7 [beta] (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Adsorption on gel: A 22 ml portion of that obtained in accordance with Example 8, Stage B above Eluate was adjusted to pH 7.0 with dilute sodium hydroxide and on a 388 ml column containing Biogel P-2 chromatographed The column was with Water develops, and the material flowing out is recorded with a differential refractometer and 5 ml fractions automatically collected and biologically examined. The, iological Efficacy occurred in fractions 47 to 63, while 1triumchloride in fractions 62 to 72 occurred.

Die Fraktionen 50 bis 60 wurden zusammengegeben, wieder untersucht und zur Trockene eingeengt, wobei 1Q58 mg Rückstand erhalten wurden, der als das Monoatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Ia) identifiziert wurde. Nach Untersuchung mit Vibrio percolans ergab dieses Produkt eine 25 mm-Zone bei 8 mcg/ml.Fractions 50 to 60 were pooled and re-examined and concentrated to dryness to give 1058 mg of residue which was identified as the Monosodium salt of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Ia) was identified. After testing with Vibrio percolans, this product was found a 25 mm zone at 8 mcg / ml.

B e i 5 p i e 1 1) 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Modifiziertes Fermentationsverfahren: Stufe A: Schrägkulturen Ein lyophilisiertes Röhrchen von Streptomyces lactamdurans Kultur (MA-2908) wurde aseptisch geöffnet und der Organismus in ein Medium der folgenden Zusammensetzung überführt: Mediums 1 % restmelasse 1 % Nationale Brauereihefe 2,5 % Difco-Agar pH 7,0 Wasser zur Auffüllung des Volumens Die Schrägkulturen wurden 7 Tage bei 28° C inkubiert. Wenn sie in der Kälte gelagert wurden, waren die Schrägkulturen mehr als 13 Wochen stabil.B e i 5 p i e 1 1) 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Modified Fermentation Procedure: Stage A: Slants A lyophilized Streptomyces lactamdurans culture tubes (MA-2908) were opened aseptically and the organism in a medium of the following composition transferred: Medium 1% residual molasses 1% National brewer's yeast 2.5% Difco-Agar pH 7.0 water to make up the volume The slants were 7 days at 28 ° C incubated. When stored in the cold, the slants were more stable for more than 13 weeks.

Stube B: Keimstufen: Zweistufiges System Erste Reimung: Die erste Keimkultur wird direkt aus der S kultur der Stufe A zu 40 ml 1%iger primärer, getrockneter Hefe N.F., pH 7,0 (von der Yeast Produkt Corporation erhalten) in einen unterteilten 250 ml-Erlenmeyer-Kolben eingeimpft. Die Kolben wurden dann auf einem Rotationsschüttler bei 200 Upm mit einem Hub von 5 cm bei 28° C während eines Zeitrams von 2 bis 3 Tagen geschüttelt.Room B: Sprouting stages: Two-stage system First rhyme: The first Germ culture is directly from the S culture of stage A to 40 ml of 1% primary, dried Yeast N.F., pH 7.0 (obtained from Yeast Product Corporation) into a compartmentalized 250 ml Erlenmeyer flasks inoculated. The flasks were then placed on a rotary shaker at 200 rpm with a stroke of 5 cm at 28 ° C for a time frame of 2 to 3 Days shaken.

Zweite Keimung: Ein 2,5%iges Inoculum aus der ersten Keimstufe wurde in einen Kolben gegeben, der ein 2%iges Fleischmann S-150 Hefeautolysat, pH 7,0 enthielt. Der Wuchs in dieser Stufe ist in charakteristischer Weise hell, und die Inkubierung, die wie in der ersten Stufe erfolgte, wurde nicht über 48 Stunden ausgedehnt.Second germination: A 2.5% inoculum from the first stage of germination was made placed in a flask containing a 2% Fleischmann S-150 yeast autolysate, pH 7.0 contained. The growth at this stage is characteristically light, and the Incubation, which was done as in the first stage, was not extended beyond 48 hours.

Stufe C: Produktionsmedium Das Produktionsmedium enthielt je Liter destilliertes Wasser: 30 g lösliche Brauereirückstände, 7,5 g primäre, getrocknete Hefe N.B. und 0,25 56 V/V Mobilpar-S Entschäumungsmittel. Das Medium wird mit einer geringen Menge konzentrierter NaOH- Lösung auf pH 7,0 eingestellt, ,in Erlenmeyr-Kolben verteilt und 15 oder 20 inuten bei 121° C autoklaviert. Nach Abkühlen erhielt das Medium ein 2,5%iges Inoculum der in Stufe B erhaltenen Keinkultur. Die Inkubationszeit kann zwischen etwa 50 Stunden und 100 Stunden variieren, jedoch wird ein Inkubationszeitraum von etwa 72 Stunden bevorzugt. Das Volumen des Mediums in jedem Kolben kann zwischen 30 und 50 ml varib ieren, jedoch wurden routinemässig 40 ml verwendet. Das Ausmass an Inoculum kann zwischen 1 bis 5 % variieren, jedoch wird in der Praxis im allgemeinen ein Betrag von 2,5 % verwendet~ Stufe D: Untersuchung Nach beendeter Fermentation wurden die Zellen abzentrifugiert und die Brühe mit Phosphatpuffer, pH 7,0 verdünnt. Die Konzentration and 7ß(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in der Fermentationsbrüche wurde nach der biologischen Standard-Scheib rsucl-ungsmethode bestimmt. Der verwendete Unter suchungsorganismus war Vibrio percolans (ATCC 8461). Eilte" Papierscheiben werden in die verdünnten Brühen eingetaucht und auf die Cberfläche von Agarenthaltenden Petri-Schalen gebracht, die mit dem Versuchsorganismus Vibrio percolans (ATGrJ 8461) inokuliert worden waren. Auch wurden auf diese Petri-Schalen Scheiben gebracht, die vorher in Standardlösungen getaucht worden waren, welche bekannte Konzentrationen an 842A anthielten. Die Scheiben wurden überwacht bei 28° C inkubiert und die Durchmesser der Inhibierungszonen - aufgezeichnet. Die Konzentration an 842A und die fermentierte Brühe werden durch Interpolieren aus der Standardkurve erhalten, die Zonendurchmesser mit den bekannten Konzentrationen der 842A Standardlösungen in Beziehung setzen. Nach diesem Verfahren wurde berechnet, dass Streptomyces lactamdurans MB-2908 78,6 µg/ml 842A in dem modifizierten Fermentationsverfahren erzeugte.Stage C: Production medium The production medium contained per liter Distilled water: 30 g soluble brewery residues, 7.5 g primary, dried Yeast N.B. and 0.25 56 V / V Mobilpar-S defoamer. The medium comes with a small amount of concentrated NaOH Solution adjusted to pH 7.0, , distributed in Erlenmeyr flasks and autoclaved for 15 or 20 minutes at 121 ° C. To After cooling, the medium received a 2.5% strength inoculum of the non-culture obtained in stage B. The incubation time can vary between about 50 hours and 100 hours, however an incubation period of about 72 hours is preferred. The volume of the medium in each flask can vary between 30 and 50 ml, but have been routinely used 40 ml used. The amount of inoculum can vary between 1 to 5%, however an amount of 2.5% is generally used in practice ~ Level D: Investigation After the fermentation had ended, the cells were centrifuged off and the broth with Phosphate buffer, pH 7.0 diluted. The concentration of 7β (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid in the fermentation fractures was rsucl-ungs method according to the biological standard disc certainly. The test organism used was Vibrio percolans (ATCC 8461). Rushed "paper disks are dipped into the diluted broths and applied to the surface brought from agar-containing Petri dishes with the test organism Vibrio percolans (ATGrJ 8461) had been inoculated. There were also petri dishes on these Brought disks that had previously been immersed in standard solutions, which known concentrations of 842A. The slices were monitored at 28 ° Incubated C and the diameter of the zones of inhibition - recorded. The concentration an 842A and the fermented broth are obtained by interpolating from the standard curve Obtain the zone diameter with the known concentrations of the 842A standard solutions to relate. According to this procedure, it was calculated that Streptomyces lactamdurans MB-2908 produced 78.6 µg / ml 842A in the modified fermentation process.

B e i 5 p i e 1 14 -Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(N,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Stufe A: 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyval eramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure 2,005 g (4,27 mMol) 7ß(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure werden in einer Lösung aus 10%igem, wässrigem Dikaliumhydrogenphosphat; (26 ml) gelöst. Das Gemisch wird dann filtriert und der erhaltene Feststoff mit 10%igem, wässrigem Dikaliumhydrogenphosphat (2 ml) gewaschen.B e i 5 p i e 1 14 disodium salt of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Step A: 7β- (D-5-amino-5-carboxyval eramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid 2.005 g (4.27 mmol) of 7 [beta] (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid are in a solution of 10% aqueous dipotassium hydrogen phosphate; (26 ml) solved. The mixture is then filtered and the solid obtained with 10%, aqueous dipotassium hydrogen phosphate (2 ml).

Zu dem Filtrat werden 10 ml Aceton zugegeben Die Lösung wird leicht wolkig und besitzt einen pH-Wert von 8,45. Zu dieser Lösung wurde 50%iges, wässriges Trikaliumphosphat, eingestellt auf pH 9,18 zugegeben. 1,492 g (6,69 mMol) N-Äthoxycarbonylphthallnid in 5,0 ml Aceton werden dann über einen Zeitraum von 5 Minuten zugegeben. Der pH-Wert wird durch Zugabe von Anteilen 50%igem, wässrigem Trikaliumphosphat über die nächsten 1,5- Stunden auf 9,1 eingestellt. Das Gemisch wird dann zur Entfernung. des Acetons eingedampft und der pH-Wert mit 2,5 n-Chlorwasserstoffsäure auf 2 bis 2,5 eingestellt.To the filtrate is added 10 ml of acetone. The solution becomes light cloudy and has a pH of 8.45. 50% aqueous solution was added to this solution Tripotassium phosphate, adjusted to pH 9.18, was added. 1.492 g (6.69 mmol) of N-ethoxycarbonylphthalnide in 5.0 ml of acetone are then added over a period of 5 minutes. The pH is made by adding proportions of 50% aqueous tripotassium phosphate over the next 1.5 hours set to 9.1. The mixture is then used for removal. of acetone evaporated and the pH adjusted to 2 to 2.5 with 2.5 N hydrochloric acid.

Das Gemisch wird mit vier Waschungen mit Athylacetat (25 ml) extrahiert, und die vereinigten blassgelben Extrakte werden mit 25 ml Wasser gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat übernacht getrocknet und eingedampft, wobei 2,356 g eines.The mixture is extracted with four washes with ethyl acetate (25 ml), and the combined pale yellow extracts are washed with 25 ml of water, with anhydrous sodium sulfate, dried overnight and evaporated, leaving 2.356 g of a.

gelben Schaums erhalten wurden. Kernmagnetische Resonanz und Elektrophorese bestätigen, dass das auf diese Weise erhaltene Produkt 7ß- (D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)- 3- (carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure ist.yellow foam were obtained. Nuclear Magnetic Resonance and Electrophoresis confirm that the product obtained in this way 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) - Is 3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid.

Stufe B: Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3- (carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Eine Lösung aus 0,653 mg 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxy valeramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in Methanol wird mit einem geringen Überschuss an frischhergestelltem Diphenyldiazomethan behandelt. Nach stehen übernacht bei Raumtemperatur wird die Lösung eingedampf und man erhält 1,053 g Rückstand, der als der Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure identifiziert wird.Stage B: Dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid A solution of 0.653 mg of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxy valeramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid in methanol is treated with a small excess of freshly made diphenyldiazomethane. After standing overnight at room temperature, the solution is evaporated and obtained 1.053 g residue, which as the dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid is identified.

Stufe C: Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyval eramido) - 5 (hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure 0s5 g des in Stufe B erhaltenen Dibenzhydrylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure werden in 5 ml gereinigtem Dioxan, das 1,5 Äquivalente Pyridin enthält, gelöst. Eine Lösung aus 1,3 Äquivalenten Nitrosylchlorid in Methylenchlorid wird zugegeben und die Lösung in einen Eisbad während 1 Stunde gerührt. Das auf diese Weise erhaltene Produkt ist eine Lösung des Dibenzhydrylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(hydroxymethyl) 7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, die direkt in der folgenden Stufe verwendet wird.Stage C: Dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyval eramido) - 5 (hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid 0s5 g of the in stage B obtained dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid are dissolved in 5 ml of purified dioxane containing 1.5 equivalents of pyridine. A solution of 1.3 equivalents of nitrosyl chloride in methylene chloride is added and stir the solution in an ice bath for 1 hour. The one obtained in this way The product is a solution of the dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (hydroxymethyl) 7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, which is used directly in the following step.

Stufe D: Dib enzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(chlorcarbonyloxymethyl) 7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Ein Überschuss an Phosgen wird in eine gerührte Lösung der in Stufe C erhaltenen 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure eingeblasen, und man lässt das Gemisch übernacht bei Raumtemperatur stehen. Das überschüssige Phosgen wird entfernt, indem trockener Stickstoff durch die Lösung während mehrerer Stunden durchgeblasen wird. Das so erhaltene Produkt wird als der Dibenzhydrylester der 713-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(chlorcarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure identifiziert.Stage D: Dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (chlorocarbonyloxymethyl) 7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid An excess of phosgene is stirred into a Solution of the 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained in step C blown in, and the mixture is allowed to stand overnight at room temperature. The excess Phosgene is removed by allowing dry nitrogen through the solution for several Hours is blown through. The product so obtained is called the dibenzhydryl ester of 713- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (chlorocarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid identified.

Stufe E: Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(N,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Der nach Stufe D erhaltene D:i.benzhyylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(chlorcarbonyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wird in einem Eisbad gekühlt, und 2,5 Äquivalente Dimethylamin werden zugegeben.Stage E: Dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid The D: i.benzhyyl ester of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (chlorocarbonyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained after stage D) is cooled in an ice bath and 2.5 equivalents of dimethylamine are added.

Das Gemisch wird d bei Raumtemperatur 1 Stunde gerührt und das überschüssige Amin-hydrochlorid abfiltriert. Das so erhaltene Produkt wird als der Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(N,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure identifiziert.The mixture is stirred at room temperature for 1 hour and the excess Amine hydrochloride filtered off. The product so obtained is called the dibenzhydryl ester of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid identified.

stufe f: dinatriumsalz der 7ß-(d-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(n,n-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Der in Stufe E erhaltene Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5 Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(N,N-dimethylcarbamo;yloxyme thyl ) -7-m ethoxy-3-c epheiii-4-c carbonsäure wird in 3,5 ml Anisol gelöst und mit 10 ml Trifluoressigsäure bei Raumtemperatur 10 Minuten behandelt. Die Trifluoressigsäure und das Anisol werden dann unter vermindertem Druck entfernt, während die Temperatur unterhalb von 40 C gehalten wird, und der Rückstand wird in 25 ml Chloroform aufgenommen und mit 20 ml Wasser, das 0,120 g Natriumbicarbonat enthält, behandelt. Das Gemisch wird 0,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und die organische Phase abgetrennt und mit Wasser gewaschen. Die kombinierte, wässrige Phase wird dann zweimal mit Methylenchlorid gewaschen und lyophilisiert, wobei das Dinatriumsalz de 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(N,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-ce 4-carbonsäure erhalten wird.stage f: disodium salt of 7ß- (d-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (n, n-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid The dibenzhydryl ester of 7β- (D-5 phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N, N-dimethylcarbamo; yloxyme) obtained in step E thyl) -7-m ethoxy-3-c epheiii-4-c carboxylic acid is dissolved in 3.5 ml of anisole and treated with 10 ml of trifluoroacetic acid at room temperature for 10 minutes. The trifluoroacetic acid and the anisole are then removed under reduced pressure while the temperature is kept below 40 C, and the residue is taken up in 25 ml of chloroform and treated with 20 ml of water containing 0.120 g of sodium bicarbonate. The mixture is stirred for 0.5 hours at room temperature and the organic Phase separated and washed with water. The combined aqueous phase becomes then washed twice with methylene chloride and lyophilized, with the disodium salt de 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-ce 4-carboxylic acid is obtained.

Stufe G: Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(N,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Das in Stufe F erhaltene Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(N,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wird in Wasser gelöst.Step G: Disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid The disodium salt of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained in step F is dissolved in water.

1 Aquivalent Hydrazinhydrat wird dann zugegeben, und man lässt las Gemisch bei Raumtemperatur übernacht stehen. Die wässrige Lösung wird mit Äthylacetat vor dem Lyophilisieren extrahiert, und man erhielt das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyval eramido )-3- (N ,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure.1 equivalent of hydrazine hydrate is then added and the mixture is left to read Stand mixture overnight at room temperature. The aqueous solution is made with ethyl acetate extracted before lyophilization, and the disodium salt of 7β- (D-5-amino-5-carboxyval eramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid.

B e i s p i e l 15 Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-pip eri dino carbonyloxym ethyl ) -7-m ethoxy-- 5- c ephem-4- carbonsäure Stufe A: Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(N,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Unter Ersatz einer äquivalenten Menge Piperidin anstelle des Dimethylamins gemäss Beispiel 14, Stufe E, und unter Nacharbeitung des dort beschriebenen Verfahrens wird somit der Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(piperidinocarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten.B e i s i e l 15 disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3-pip eri dino carbonyloxym ethyl) -7-m ethoxy-- 5- c ephem-4-carboxylic acid Level A: disodium salt of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid With replacement of an equivalent amount of piperidine instead of the dimethylamine according to Example 14, stage E, and following the procedure described there thus becomes the dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (piperidinocarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtain.

Stufe B: Dinatriumsalz der 7ß-(d-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(piperidinocarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Unter Einsatz des nach Stufe A erhaltenen Dibenzhydrylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(piperidinocarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure anstelle des in Beispiel 14, Stufe F, angegebenen Dibenzhyrylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(N,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und unter,Nacharbeitung der dort beschriebenen Entveresterungsmethode wird somit das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino- 5- c arb oxyval erami do ) - 3- (pip eridino carbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhlaten, das, nach Behandlung mit Hydrazinhydrat gemäss der in Beispiel 14, Stufe G, beschriebenen Methode das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(pipeidinocarbonylxoymethyl)-7-metho-3-cephem-4-carbonsäure ergibt.Step B: Disodium salt of 7β- (d-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (piperidinocarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Using the dibenzhydryl ester of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (piperidinocarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained in step A instead of the dibenzhyryl ester of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid given in Example 14, Step F and under, reworking the deesterification method described there is thus the disodium salt of 7ß- (D-5-phthaloylamino- 5- carb oxyval erami do) - 3- (pip eridino carbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained, after Treatment with hydrazine hydrate according to that described in Example 14, stage G Method the disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (pipeidinocarbonylxoymethyl) -7-metho-3-cephem-4-carboxylic acid results.

B e i s p i e 1 16 Dinatriumsalz der 7ß- (D-5-Amino-5-carboxWvaleramido)-3-(pyrrolidinylcarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Stufe A: Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carbox yval ramido)-3- (pyrrolidinylcarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Unter Einsatz einer äquivalenten Menge Pyrrolidin anstelle des Dimethylamins gemäss Beispiel 14, Stufe E, und unter Nacharbeitung des dort beschriebenen Verfahrens wird somit der Dibenzhydrylester der 7ß- (D-5-Phthaloylamino-5-carbox;yvaleramido)-3-(pyrrolidinylcarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-c ephem->carbonsäure erhalten.For example, the 1 16 disodium salt of 7β- (D-5-amino-5-carboxy-valeramido) -3- (pyrrolidinylcarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Stage A: Dibenzhydryl ester of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyval ramido) -3- (pyrrolidinylcarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Using an equivalent amount of pyrrolidine instead of the dimethylamine according to Example 14, stage E, and following the procedure described there thus the dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxy; yvaleramido) -3- (pyrrolidinylcarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-c ephemeral-> carboxylic acid obtained.

Stufe: Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carbox;yvaleramido)-3-(pyrrolidinylcarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3cephem-4carbonsäure Unter Einsatz des nach Stufe A erhaltenen Dibenzhydrylesters der 7ß- (D-5-Phthaloylamino-5-carboxyval eramido )-3-pyrrolidinylcarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure anstelle des in Beispiel 14, Stufe F, angegebenen Dibenzhydrylesters der 7ß- (D-5-Phthaloylamino-5-carboxyval eramido)-3-(N,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und unter Nacharbeitung der dort beschriebenen Entveresterungsmethode wird somit das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(pyrrolidinylcarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten, das, nach Behandlung mit H-drazinhydrat nach der in Beispiel 14, Stufe G, beschriebenen Methode das Dinatriumsalz der 713-(D-5 Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(pyrrolidinylcarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure ergibt.Step: Disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxy; yvaleramido) -3- (pyrrolidinylcarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3cephem-4-carboxylic acid Using the dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyval eramido) -3-pyrrolidinylcarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid instead of the 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyval eramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid and by reworking the deesterification method described there, the Disodium salt of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (pyrrolidinylcarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained, after treatment with H-drazinhydrat according to the in Example 14, stage G, method described the disodium salt of 713- (D-5 amino-5-carboxyvaleramido) -3- (pyrrolidinylcarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid results.

B e i s p i e l 17 Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(morpholinocarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Stufe A: Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(morpholinocarbonyloxymethyl) 7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Unter Ersatz einer äquivalenten Menge Morpholin anstelle des Dimethylamins genäss Beispiel 14, Stufe E, und unter Nacharbeitung des dort beschriebenen Verfahrens, wird somit der Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(morpholinocarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten.For example, 17 disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (morpholinocarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Level A: Dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (morpholinocarbonyloxymethyl) 7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid With replacement of an equivalent amount of morpholine instead of the dimethylamine genäss example 14, stage E, and with reworking of the process described there, the dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (morpholinocarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid is thus obtained obtain.

Stufe B: Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(morpholinocarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Unter Ersatz des nach Stufe A erhaltenen Dibenzhydrylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-morpholinocarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure anstelle des in Beispiel 14, Stufe F, angegebenen Dibenzhydrylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(N,N-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und unter Nacharbeitung der dort beschriebenen Entveresterungsmethode wird somit das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(morpholinocarbonyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten, das, nach Behandlung mit Hydrazinhydrat nach dem in Beispiel 14, Stufe G, beschriebenen Verfahren das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(morpholinocarboyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure ergibt.Step B: Disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (morpholinocarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Replacing the dibenzhydryl ester of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3-morpholinocarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained in step A instead of the dibenzhydryl ester of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N, N-dimethylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid given in Example 14, Step F and by reworking the deesterification method described there is thus the disodium salt of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (morpholinocarbonyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained, after treatment with hydrazine hydrate according to that in Example 14, step G, method described the disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (morpholinocarboyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid results.

B e i s p i e l 18 Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Stufe A: Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3cephou-'%- carbonsäure Ein Überschuss an Acetylchlorid wird unter Rühren zu den in Beispiel 14, Stufe C, erhaltenen Dibenzhydrylester der 7ß- £D-5-Phthaloylauiino-5-carboxyval eramido )-3- (hydroxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure zugegeben. Man lösst das Gemisch mehrere Stunden bei Raumtemperatur stehen.For example, 18 disodium salt of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Stage A: Dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3cephou - '% - carboxylic acid Excess acetyl chloride is converted to those in Example with stirring 14, stage C, obtained dibenzhydryl ester of 7β- £ D-5-phthaloylauiino-5-carboxyval eramido) -3- (hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid was added. One solves the mixture stand for several hours at room temperature.

Das Gemisch wird dann im Vakuum konzentriert, um überschüssiges Acetylchlorid und Lösungsmittel zu entfernen. Der so erhaltene Rückstand ist der Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5 Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7-metho=g- 3-c ephem-4-carbonsäure.The mixture is then concentrated in vacuo to remove excess acetyl chloride and remove solvent. The residue obtained in this way is the dibenzhydryl ester the 7ß- (D-5 Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-metho = g- 3-c ephemeral 4-carboxylic acid.

Der Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure kann auch durch Einsatz von Keten anstelle von Acetylchlorid und im übrigen unter Nacharbeitung des in Stufe A beschriebenen Verfahrens erhalten werden.The dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid can also be achieved by using ketene instead of acetyl chloride and otherwise under Reprocessing of the process described in stage A can be obtained.

Stufe B: Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxy valeramido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4carbonsäure Der in Stufe A erhaltene Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylauino-5-carboxyvaleramido )- gi- (ac etoxymethyl)-7-methoxy-3 cephem-4-carbonsure wird in Dioxan gelöst, und das G'emisch wird der in Beispiel 14, Stufe F, beschriebenen Enstesterungsmethode unteworfen. Auf diese Weise wird ein Rückstand erhalten, der das Dinatriumsalz der 7ß- (D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure aufweist.Step B: Disodium salt of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxy valeramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4carboxylic acid The dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-Phthaloylauino-5-carboxyvaleramido ) - gi- (ac etoxymethyl) -7-methoxy-3 cephem-4-carboxylic acid is dissolved in dioxane, and the mixture is the de-esterification method described in Example 14, stage F subjugated. In this way a residue is obtained which is the disodium salt of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid having.

Styufe C: Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Das in Stufe 3 erhaltene Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(aceotxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wird in Methylenchlorid gelöst und die Lösung mit 5%iger Natriumbicarbonatlösung extrahiert. Das erhaltene Gemisch wird dann mit Schwefelsäure auf pH 2 angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Nach Trocknen wird der Extrakt im Vakuum konzentriert und der Rückstand in Wasser gelöst. 1 Äquivalent Hydrazinhydrat wird dann zugegeben, und man lässt das Gemisch übernacht bei Raumtemperatur stehen. Die wässrige Lösung wird mit Äthylacetat vor dem Lyophilisieren extrahiert, und man erhält das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7 m ethoxy- 3- c ephem-#carbonsäure.Stage C: Disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid The disodium salt of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (aceotxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained in step 3 is dissolved in methylene chloride and the solution with 5% sodium bicarbonate solution extracted. The resulting mixture is then acidified to pH 2 with sulfuric acid and extracted with ethyl acetate. After drying, the extract is concentrated in vacuo and the residue dissolved in water. 1 equivalent of hydrazine hydrate is then added, and the mixture is allowed to stand overnight at room temperature. The aqueous solution is with ethyl acetate before Lyophilize extracted, and you receives the disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7 m ethoxy- 3- c ephem- #carboxylic acid.

In gleicher Weise wie der in Beispiel 18 beschriebenen können sämtliche 3-Acyloxy-substituierten Derivate der Erfindung erhalten werden. So können beispielsweise durch Einsatz des -entsprechenden Acylhalogenids anstelle des Acetylchlorids gemäss Beispiel 18, Stufe A, und unter Nacharbeitung des in den Stufen A, B und G dieses Beispiels beschriebenen Verfahrens sämtliche entsprechenden 3-Alkanoyloxy-, 3-Aromatischcarbonyloxy, 3-Aralkanoyloxy- und 3-Cycloalkancarbonyloxysubstituierten Derivate der Erfindung erhalten werden. Die folgende Gleichung und Tabelle XVIII erläutern dieses Verfahren. und die dabei erhaltenen Produkte. In the same manner as that described in Example 18, all 3-acyloxy-substituted derivatives of the invention can be obtained. For example, by using the corresponding acyl halide instead of the acetyl chloride according to Example 18, stage A, and following the procedure described in stages A, B and G of this example, all of the corresponding 3-alkanoyloxy, 3-aromatic carbonyloxy, 3-aralkanoyloxy and 3-cycloalkanecarbonyloxy substituted derivatives of the invention can be obtained. The following equation and Table XVIII illustrate this procedure. and the resulting products.

Tabelle XVIII Beispiel X R19 19 Cl -C2ii5 20 Br Däft 21 Cl 22 -cII2-- 23 Cl -Cfi2 < 24 cy 25 Cl 26 Cl .CtI2wCE 27 Br B e i s P i e 1 28 Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(N-methylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Stufe A: Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3- (N-methylcarbamoyloxyinethyl) 7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure 250 mg des Dibenzhydrylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure werden in 5 ml Dimethylformamid suspendiert.Table XVIII Example X R19 19 Cl -C2ii5 20 Br Daft 21 cl 22 -cII2-- 23 Cl -Cfi2 < 24 cy 25 cl 26 Cl .CtI2wCE 27 Br B ice P ie 1 28 disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (N-methylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Step A: Dibenzhydryl ester of 7ß- (D -5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N-methylcarbamoyloxyinethyl) 7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid 250 mg of the dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- ( hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid are suspended in 5 ml of dimethylformamide.

Das Reaktionsgemisch wird unter Stickstoff gebracht und durch Ultraschallwellen bewegt. 0,20 ml Triäthylamin und 0,625 ml Methylisocyanat werden dann zugegeben, und nach Auflösung des Gemischs lässt man es 0,5 Stunden stehen.The reaction mixture is placed under nitrogen and ultrasonic waves emotional. 0.20 ml of triethylamine and 0.625 ml of methyl isocyanate are then added, and after the mixture has dissolved, it is left to stand for 0.5 hours.

Äthyläther wird zu dem Gemisch zugegeben, und nach ZentrifuS gieren wird der Äther dekantiert. Eine zusätzliche Menge Äthyläther wird zu dem öligen Rückstand zugegeben, und die Verfestigung des Produktes wird durch Kratzen gefördert. Der erhaltene Feststoff wird aus einem heissen Gemisch aus.Ethyl ether is added to the mixture and crave centrifugation the ether is decanted. An extra amount of ethyl ether becomes the oily one Residue is added and the solidification of the product is promoted by scratching. The solid obtained is made up of a hot mixture.

Methanol und Isopropanol (180 mg) in zwei Ausbeuten umkristallisiert, und die Kombination dieser beiden Ausbeuten werden wiederum umkristallisiert, um ein Produkt zu erhalten, das als der Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(N-methylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4carbonsäure identifiziert wurde.Methanol and isopropanol (180 mg) recrystallized in two yields, and the combination of these two crops are in turn recrystallized to to obtain a product which as the dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N-methylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4carboxylic acid was identified.

Stufe B: Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(N-methylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy- 3-cephem-4-c arb onsäure Der in Stufe A erhaltene Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-hthaloylam1no-carboxyvaleramido ) -3- (N-methylcarbmaoyloxymethyl )-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wird in 3,5 ml ' Anisol gelöst und mit 10 ml Trifluoressigsäure bei Raumtemperatur 10 Minuten behandelt. Die Trifluoressigsäure und das Anisol werden dann unter vermindertem Druck entfernt, während die Temperatur unterhalb von 40° 9 gehalten wird, und der Rückstand wird in 25 ml Chloroform auf genommen und.Stage B: disodium salt of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (N-methylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy- 3-cephem-4-carbonic acid The dibenzhydryl ester of 7β- (D-5-thaloylamino-carboxyvaleramido ) -3- (N-methylcarbmaoyloxymethyl ) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid is dissolved in 3.5 ml of anisole and treated with 10 ml of trifluoroacetic acid at room temperature Treated 10 minutes. The trifluoroacetic acid and anisole are then reduced under reduced pressure Pressure is removed while the temperature is kept below 40 ° 9, and the The residue is taken up in 25 ml of chloroform and.

mit 20 ml Wasser, das 0,120 g Natriumbicarbonat enthielt, behandelt. Das Gemisch wird 0,5 Stunden bei Raumtemperatur geriihrt, und-die organische Phase abgetrennt und mit Wasser gewaschen. Die kozbinierte, wässrige Phase wird dann zweimal mit Nethylenchlorid gewaschen und lyophilisiert, wobei das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleraini do ) - 3- (N-methylc'arb amoyloxymethyl ) - 7-m ethoxy- 3- cephem-4-carbonsäure erhalten wurde.treated with 20 ml of water containing 0.120 g of sodium bicarbonate. The mixture is stirred for 0.5 hour at room temperature, and the organic phase separated and washed with water. The combined, aqueous phase is then twice washed with ethylene chloride and lyophilized, the disodium salt of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleraini do) - 3- (N-methylcarb amoyloxymethyl) - 7-m ethoxy-3-cephem-4-carboxylic acid was obtained.

Stufe c: Dinatriumsalz der 7ß- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(N-methylcarbonyloxymethyl)-7-methoxy 3-cephem-4-carbonsäure Das in Stufe B erhaltene Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carbonylvaleramido)-3-(N-methylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wird in Wasser gelöst. Ein Äguivalent Hydrazinhydrat wird dann zugegeben, und man lässt das Gemisch bei Raumtemperatur übernacht stehen. Die wäSsrige Lösung wird mit Äthylacetat vor dem Lyophilisieren extrahiert, und man erhält das Dinatriumsalz der 7ß-(V-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(N-methylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure.Step c: Disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (N-methylcarbonyloxymethyl) -7-methoxy 3-cephem-4-carboxylic acid The disodium salt of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carbonylvaleramido) -3- (N-methylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained in step B is dissolved in water. One equivalent of hydrazine hydrate is then added and one let the mixture stand at room temperature overnight. The aqueous solution is extracted with ethyl acetate before lyophilization, and the disodium salt is obtained of 7β- (V-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (N-methylcarbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid.

Unter Nacharbeitung des in Beispiel 28 beschriebenen Verfahrens können sämtliche 3-(N-mono-substituierten Carbamoyloxymethyl)-Derivate der Erfindung erhalten werden. So können durch Einsatz des entsprechenden Isocyanats anstelle des Methylisocyanats gemäss Beispiel 28, Stufe A, und unter Nacharbeitung des in den Stufen A, B and C dieses Beispiels beschriebenen Verfahren sämtliche der entsprechenden 3-carbamoylo;yethyl-s'ubstitui erten Derivate der Erfindung synthetisiert werden. Die folgende Gleichung erläutert die Umsetzung gemäss Beispiel 28, Stufen A, B und C und erläutert zusammen mit Tabelle IX die Ausgangsmaterialien dieses Verfahrens und die danach erhaltenen Produkte: Tabelle XIX -o=C=NR3 | R17 Base | p1 -s 8 4 =NCH2ai2Cl -CH2CH2C1 NaHCq3 -Na 3ß 0=C=NCH2C1 -aI2Cl KHCO 3 -K 31 O=C=NC (CH3) 3 -C (CH3) 3 NaHCO3 -Na 32 0=C=NC2EI5 -C2H5 KHOO3 - 33 - O=C=}1C (CH3) 2CH2C1 -C(CH3>2CH2C1 NaHCO3 -Na 34 0=C=NCOOC2H5 -COOC2 Hs NaHCO3 -Na 35 O=C=NS02-CH3 -so N aHCO 3 -Na 36 O=C=Ne t3 NaEICO 3 -K 37 O=C=DICHXl c}'-ffi\½iD)2 NaHCO3 3 , -Na 3 e i s D i e 1 38 7ß- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido )-3-- (pyridiniummethyl ) -7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Eine Lösung aus 1,0 g 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wird auf pH 2,5 gebracht. 8 ml Pyridin werden zugegeben, und die Lösung wird 2 Stunden auf 60° C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird dann lyophilisiert und der Rückstand in Wasser gelöst und durch ein Polystyrol-Trimethylbenzylammonium--Anionenaustauschharz (43 % H2O) geleitet. Das erhaltenc Gemisch der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(pyridi niummethyl )-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wird mit Wasser verdünnt, und ausgewählte Fraktionen werden lyophilisiert, wobei praktisch reine 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3- (pyrid . niuamethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten wird.Following the procedure described in Example 28, all 3- (N-mono-substituted carbamoyloxymethyl) derivatives of the invention can be obtained. By using the corresponding isocyanate instead of the methyl isocyanate according to Example 28, stage A, and following the process described in stages A, B and C of this example, all of the corresponding 3-carbamoylo; yethyl-substituted derivatives of the invention can be synthesized will. The following equation explains the reaction according to Example 28, stages A, B and C and, together with Table IX, explains the starting materials of this process and the products obtained thereafter: Table XIX -o = C = NR3 | R17 Base | p1 -s 8 4 = NCH2ai2Cl -CH2CH2C1 NaHCq3 -Na 3β 0 = C = NCH2C1 -aI2Cl KHCO 3 -K 31 O = C = NC (CH3) 3 -C (CH3) 3 NaHCO3 -Na 32 0 = C = NC2EI5 -C2H5 KHOO3 - 33 - O = C =} 1C (CH3) 2CH2C1 -C (CH3> 2CH2C1 NaHCO3 -Na 34 0 = C = NCOOC2H5 -COOC2 Hs NaHCO3 -Na 35 O = C = NS02-CH3 -so N aHCO 3 -Na 36 O = C = Ne t3 NaEICO 3 -K 37 O = C = DICHXl c} '- ffi \ ½iD) 2 NaHCO3 3, -Na 3 ice T he 1 38 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3-- (pyridiniummethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid A solution of 1.0 g of 7ß- (D- 5-Amino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid is brought to pH 2.5. 8 ml of pyridine are added and the solution is heated to 60 ° C. for 2 hours. The reaction mixture is then lyophilized and the residue is dissolved in water and passed through a polystyrene-trimethylbenzylammonium anion exchange resin (43% H2O). The resulting mixture of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (pyridi niummethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid is diluted with water and selected fractions are lyophilized, whereby practically pure 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (pyrid. Niuamethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid.

Unter Einsatz einer äquivalenten Menge Trimethylamin und Triäthylamin anstelle von Pyridin in dem vorangehenden Verfahren und im übrigen unter Nacharbeitung des dort beschriebenen Verfahrens wird somit 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(trimethylammoniummethyl)-7-methyl-3-cephem-4-carbonsäure und 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(triäthylammoniummethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten.Using an equivalent amount of trimethylamine and triethylamine instead of pyridine in the preceding process and otherwise with reworking of the process described there is thus 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (trimethylammoniummethyl) -7-methyl-3-cephem-4-carboxylic acid and 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (triethylammoniummethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtain.

Sämtliche 5-Pyridiniummethyl-Derivate der Erfindung können erhalten werden, indem das geeignete mononuklear-substituierte Pyridin anstelle des in dem vorhergehenden Beispiel genannten Pyridinrekationsmittels eingesetzt wird. Die folgende Gleichung und die zugehörige Tabelle erläutern dieses Herstellungsverfahren und die danach erhaltenen Produkte: Tabelle XX Beisp. X¹ Beisp. X¹ 39 3-F 52 3-CON(C2H5)2 40 3-Cl 53 3-CH2COOH 41 3-Br 54 3-COCH3 42 3-I 55 4-COCH3 43 4-CF3 56 2-CH3 44 3-COOH 57 2-C2H5 45 4-COOH 58 3-CH3 46 3-CONH2 59 4-C2H5 47 4-CONH2 60 3-CH2OH 48 3-CONHCH3 61 4-CH2OH 49 4-CONHC2H5 62 4-CH2CH2CH3 50 4-CONHCH(CH3)2 63 3-SO3H 51 4-CON(CH3)2 64 3-CN B e i s p i e 1 65 S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-isothioharnstoff Eine Lösung aus 1,0 g 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvalera-mido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cepehm-4-carbonsäure und 1,0 g Thioharnstoff in 25 ml Wasser wird 5 Tage bei 37° C gehalten. 200 ml Aceton werden zugegeben, und das Gemisch wird in einem Eisbad gekühlt. Das erhaltene Produkt wird dann filtri ert und durch Polystyrol-Trimethylb enzylatnmonionAnionen austauschharz (43 % H2O) fraktioniert. Ausgewählte Fraktionen werden lyophilisiert, und das rohe Produkt wird dannaus einem Gemisch aus Methanol .und Wasser umkristallisiert, wobei praktisch reiner S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-isothioharnstoff erhalten wird.All of the 5-pyridiniummethyl derivatives of the invention can be obtained by using the appropriate mononuclear substituted pyridine in place of the pyridine reactant mentioned in the previous example. The following equation and the associated table explain this manufacturing process and the products obtained from it: Table XX Ex. X¹ Ex. X¹ 39 3-F 52 3-CON (C2H5) 2 40 3-Cl 53 3-CH2COOH 41 3-Br 54 3-COCH3 42 3-I 55 4-COCH3 43 4-CF3 56 2-CH3 44 3-COOH 57 2-C2H5 45 4-COOH 58 3-CH3 46 3-CONH2 59 4-C2H5 47 4-CONH2 60 3-CH2OH 48 3-CONHCH3 61 4-CH2OH 49 4-CONHC2H5 62 4-CH2CH2CH3 50 4-CONHCH (CH3) 2 63 3-SO3H 51 4-CON (CH3) 2 64 3-CN Example 1 65 S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] -isothiourea A solution of 1.0 g 7β- (D -5-Amino-5-carboxyvalera-mido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cepehm-4-carboxylic acid and 1.0 g of thiourea in 25 ml of water are kept at 37 ° C. for 5 days. 200 ml of acetone are added and the mixture is cooled in an ice bath. The product obtained is then filtered and fractionated by polystyrene-trimethylbenzylate monion anion exchange resin (43% H2O). Selected fractions are lyophilized and the crude product is then recrystallized from a mixture of methanol and water to give practically pure S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3- cephem-3-ylmethyl] isothiourea.

Nach Ersatz einer äquivalenten Menge N-Methylthioharnstoff, N-Äthylthioharnstoff, N-Propylthioharnstoff, N,N-Dimethylthioharnstoff, N,l-Diäthylthioharnstoff und N ,N-Dipropylthioharnstoff anstelle des in dein vorangehenden Verfahren angeführten @@ Thioharnstoffs und im übrigen unter Nacharbeitung des dort beschrieben Verfahrens wird auf diese Weise N-Methyl-S-[7ß-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7 methöxy- 3 c epliem-3-ylm ethyX7-i s othi oharnsto ff, N-Äthyl-E (D- 5-amino-5- carboxyval crami do ) -4- carb oxy- 7-m ethoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-isothioharnstoff, N-Propyl-S[7ß-(D-5-amino- 5- carboxyval erami do )-4- carb oxy- 7-methoxy- 3- c ephein- 3-ylmethylj-isothioharnstoff, N ,N-Dimethyl-S-[7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramino)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-isothioharnstoff, N,N-Diäthyl-S-[7ß-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-isothioharnstoff und N,N-Dipropyl-S-[7ß-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-isothioharnstoff erhalten.After replacing an equivalent amount of N-methylthiourea, N-ethylthiourea, N-propylthiourea, N, N-dimethylthiourea, N, l-diethylthiourea, and N , N-dipropylthiourea in place of that listed in your previous procedure @@ Thiourea and otherwise reworking the procedure described there becomes in this way N-methyl-S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7 methöxy- 3 c epliem-3-ylm ethyX7-i s othi oharnsto ff, N-ethyl-E (D- 5-amino-5- carboxyval crami do) -4- carb oxy- 7-m ethoxy-3-cephem-3-ylmethyl] isothiourea, N-propyl-S [7β- (D-5-amino-5-carboxyval erami do) -4-carboxy-7-methoxy-3-c ephein- 3-ylmethylj-isothiourea, N, N-dimethyl-S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramino) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] -isothiourea, N, N-diethyl-S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] isothiourea and N, N-dipropyl-S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] isothiourea obtain.

B e i 5 p i e 1 66 7ß- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido )-3- (äthylthiomethyl)-7-methoxy'-3- cephem-4-carbonsäure Ein Gemisch aus 0,654 g 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3- (acetoxymethyl )-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und 0,37 ml Äthanthiol in einem Gemisch aus einem Teil Aceton und einem Teil Wasser (10 ml) wird bei Raumtemperatur gerührt und 2,0 ml einer 10%igen Natriumhydroxidlösung unter Rühren zugegeben. Das Gemisch wird dann in einem verschlossenen Rohr 100 Stunden erhitzt und das erhaltene Gemisch im Vakuum konzentriert, Der Rückstand wird in Wasser gelöst und durch ein Polystyrol-Trinethylb enzylammonium-Anionenaustauschharz (43 % H20) fraktioniert. Ausgewählte Fraktionen werden kombiniert und lyophilisiert, wobei 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(äthylthiomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten wird.B e i 5 p i e 1 66 7ß- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido) -3- (ethylthiomethyl) -7-methoxy'-3- cephem-4-carboxylic acid A mixture of 0.654 g of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid and 0.37 ml of ethanethiol in one Mixture of one part acetone and one part water (10 ml) is at room temperature stirred and 2.0 ml of a 10% sodium hydroxide solution were added with stirring. That The mixture is then heated in a sealed tube for 100 hours and the resulting The mixture is concentrated in vacuo. The residue is dissolved in water and filtered through Polystyrene-trinethylbenzylammonium anion exchange resin (43% H20) fractionated. Selected fractions are combined and lyophilized, whereby 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (ethylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid is obtained.

Unter Einsatz einer äquivalenten Menge Methanthiol, Propanthiol, Pyridin-2-thiol, Pyridin-3-thiol, Pyridin-4-thiol, Benzothiazol-2-thiol, 4-Methylpyrimidin-2-thiol und 2-Methyl-574-thiadiazol-5-thiol anstelle des in dem vorangehenden Verfahren angegebenen Äthanthiols und im übrigen unter Nacharbeitung des dort beschriebenen Verfahrens, werden auf diese Weise 7ß-(D-5-Aamino-5-carboxyvaleramido)-3-(methylthiomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 7B- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido )-3- (propylthiomethyl )-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 7ß- (D-5-Amino 5-carboxyvaleramido )-3- (2-pyridylthiomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(3-pyridylthiomethyl)-7-methoxy-3cephem-4-carbonsäure, 7E- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(4-pyridylthiomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(2-benzothiazolylthiomethyl)-7-methoxy-3-c ephem-4-carbonsäure, 7ß- (D-5-Aminocarboxyvaleramido )-3-(4-methylpyrimidin-2-ylthiomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(2-methyl-3,4-thiadiazol-5-ylthiomethyl)-7-methoxy- 3- c ephem-G c arb onsäure erhalten.Using an equivalent amount of methanethiol, propanethiol, pyridine-2-thiol, Pyridine-3-thiol, pyridine-4-thiol, benzothiazole-2-thiol, 4-methylpyrimidine-2-thiol and 2-methyl-574-thiadiazole-5-thiol in place of that in the foregoing procedure specified ethane thiol and otherwise reworking the one described there Process, in this way 7ß- (D-5-Aamino-5-carboxyvaleramido) -3- (methylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, 7B- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (propylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, 7ß- (D-5-amino 5-carboxyvaleramido) -3- (2-pyridylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (3-pyridylthiomethyl) -7-methoxy-3cephem-4-carboxylic acid, 7E- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (4-pyridylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (2-benzothiazolylthiomethyl) -7-methoxy-3-c ephemeral-4-carboxylic acid, 7β- (D-5-aminocarboxyvaleramido ) -3- (4-methylpyrimidin-2-ylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid and 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (2-methyl-3,4-thiadiazol-5-ylthiomethyl) -7-methoxy- 3- c ephemous carbonic acid obtained.

a3 e i s p 1 e 1 67 S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-N,N-dimethyldithiocarbamat Eine lösung aus 6,82 g 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und. 2,86 g Natrium-N,N-dimethyldithiocarbamat in 60 ml Wasser wird 24 Stunden auf 50° C erhitzt. Das Produkt wird lyophilisiert und dann durch ein Polystyrol-Trimethylbenzylammonium Anionenaustauschharz (43 % H2O) fraktioniert. Ausgewählte l?raktionen werden dann lyophilisiert, wobei S-[7ß-(D-5-Amino-5-C arboxyval ergab do )-4- c arboxy- 7-m ethoxy- 3- c ephem- 3-ylmethyl]-N,N-dimethyldithiocarbamat erhalten wird.a3 e i s p 1 e 1 67 S- [7 [beta ]- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] -N, N-dimethyldithiocarbamate A solution of 6.82 g of 7β- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid and. 2.86 g of sodium N, N-dimethyldithiocarbamate in 60 ml of water is applied for 24 hours Heated to 50 ° C. The product is lyophilized and then passed through a polystyrene trimethylbenzylammonium Anion exchange resin (43% H2O) fractionated. Selected actions are then lyophilized, whereby S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyval gave do) -4- carboxy-7-m ethoxy-3-c ephem-3-ylmethyl] -N, N-dimethyldithiocarbamate.

Unter Einsatz einer äquivalenten Menge der folgenden Reaktionsmittel: Natrium-N-methyldithiocarbamat, Natrium-N,N-diäthyldithiocarbamat, Natrium-N,N-di-n-propyldithiocarbamat, Nftrium4T-methyl-'N- (2-dimethylaminoäthyl carbamat, Natrium-N-äthyl-N-(2-diäthylaminoäthyl)-dithiocarbamat, Natrium-N-(2-di-n-propylaminoäthyl)-dithiocarbamat, Natrium-N-methyl-N- (2-morpholinoäthyl )-dithiocarbamat, Natrium-N-inethyl-N- (3-diäthylaminopropyl )-dithiocarbamat, Natrium-N-phenyl-N- ( 2-methylaminoäthiyl )-dithiocarbamat, Natrium-N ,N-tetramethylendithiocarbamat, Natrium-N,N-pentamethylendithiocarbamat, Natrium-N,N-bis-(2-hydroxyäthyl)-dithiocarbamat und das Natriumsalz von 4-Methyl-piperazinodithiocarboxylat anstelle des in dem vorangehenden Verfahren angegebenen Natriumdimethyldithiocarbamats, wobei das Natriumbicarbonat weggelassen wird, jedoch sonst das dort beschriebene Verfahren nachgearbeitet wird, werden auf diese Weise S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy 3-cephem-4-ylmethyl]-N-methyldithiocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleranido )-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-N,N-diäthyldithiocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyval erami do ) -Xcarboxiy-7-m ethoxy- 3-c eph cm- 3-ylm ethyl N,N-di-n-propyldithiocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-N-methyl-N-(2-dimethylaminoäthyl)-dithiocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-N-äthyl-N-(2-diäthylaminoäthyl)-dithiocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-c ephem- 3-ylmethyl]-N- (2-di-n-propylaminoäthyl )- di thi ,ocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-N-methyl-N-(2-morpholinoäthyl)-dithiocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido) 4-.Rarboxy-7-1l ethoxy- 3-c ephem- 3-ylm ethyl]-N-m ethyl-N- (3-diäthylaminopropyl)-dithocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] N-phenyl-N-(2-methylaminoäthyl)-dithiocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboyval erami do )-4- carboxy- 7-n ethoxy- 3- c ephem-3-ylmethyl]-N,N-tetramethylenditiocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyval eramido ) -4- c arb oxy- 7-m ethoxy- 3- c ephem-3-ylmethyl]-N,N-pentamethylenditiocarbamat, S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyval eramido )-4-carbox-7-nethoxy-3- cephem-3-ylmethyJl-N ,N-bis- (20hydroxyäthyl )-dithiocarbauiat und f7ß-(D-5-Amino-5-carboxyval eramido )-4-carboxy-7-niethoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-4-methyl-piperazinodithiocarboxylat erhalten.Using an equivalent amount of the following reactants: Sodium N-methyldithiocarbamate, sodium N, N-diethyldithiocarbamate, sodium N, N-di-n-propyldithiocarbamate, Nftrium4T-methyl-'N- (2-dimethylaminoethyl carbamate, sodium N-ethyl-N- (2-diethylaminoethyl) -dithiocarbamate, Sodium N- (2-di-n-propylaminoethyl) dithiocarbamate, sodium N-methyl-N- (2-morpholinoethyl ) -dithiocarbamate, sodium-N-ynethyl-N- (3-diethylaminopropyl) -dithiocarbamate, sodium-N-phenyl-N- (2-methylaminoethiyl) dithiocarbamate, sodium N, N-tetramethylene dithiocarbamate, Sodium N, N-pentamethylene dithiocarbamate, sodium N, N-bis (2-hydroxyethyl) dithiocarbamate and the sodium salt of 4-methyl-piperazinodithiocarboxylate in place of that in that previous method indicated sodium dimethyldithiocarbamate, the sodium bicarbonate is omitted, but otherwise the one described there procedure is reworked, S- [7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy 3-cephem-4-ylmethyl] -N-methyldithiocarbamate, S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleranido ) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] -N, N-diethyldithiocarbamate, S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyval erami do) -Xcarboxiy-7-m ethoxy- 3-c eph cm- 3-ylm ethyl N, N-di-n-propyldithiocarbamate, S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] -N-methyl-N- (2-dimethylaminoethyl) dithiocarbamate, S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] -N-ethyl-N- (2-diethylaminoethyl) dithiocarbamate, S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-c ephem-3-ylmethyl] -N- (2-di-n-propylaminoethyl) -di thi, ocarbamate, S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] -N -methyl-N- (2-morpholinoethyl) -dithiocarbamate, S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) 4-.Rarboxy-7-1l ethoxy-3-c ephem-3-ylmethyl] -N-m ethyl N- (3-diethylaminopropyl) dithocarbamate, S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] N-phenyl-N- (2-methylaminoethyl) dithiocarbamate, S- [7β- (D-5-amino-5-carboyval erami do) -4- carboxy- 7-n ethoxy- 3- c ephem-3-ylmethyl] -N, N-tetramethylene diocarbamate, S- [7ß- (D-5-amino-5-carboxyval eramido) -4- carboxy- 7-m ethoxy- 3- c ephem-3-ylmethyl] -N, N-pentamethylene tiocarbamate, S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carbox-7-methoxy-3-cephem-3-ylmethyl-N , N-bis- (20-hydroxyethyl) -dithiocarbauiat and f7ß- (D-5-amino-5-carboxyval eramido ) -4-carboxy-7-niethoxy-3-cephem-3-ylmethyl] -4-methyl-piperazinodithiocarboxylate obtain.

B e i s p i e l 68 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3- (benzylithiomethyl) 7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Ein Gemisch aus 0,654 g 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)- 3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 0,504 g Natriumbicarbonat und 0,414 g Thiobenzoesäure in 5,0 ml Wasser wird bei 50° C übernacht unter einer Stickstoffatmosphäre erhitzt.Das Produkt wird durch Zugabe von Aceton ausgefällt und aus einem Gemisch aus Alkohol und Wasser kristallisiert, wobei 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3- (b enzoylthiometh; )-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten wird.B e i s p i e l 68 7ß- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido) -3- (benzylithiomethyl) 7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid A mixture of 0.654 g of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) - 3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, 0.504 g of sodium bicarbonate and 0.414 g of thiobenzoic acid in 5.0 ml of water is added to 50 ° C overnight under a nitrogen atmosphere. The product is through Addition of acetone precipitated and crystallized from a mixture of alcohol and water, wherein 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (b enzoylthiometh;) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid is obtained.

Unter Einsatz einer äquivalenten Menge Kaliumäthylxanthat, Kalium-n-propylxanthat, Kaliumisopropylxanthat, Kalium-nbutylxanthat, Kalium-n-hexylxanthat, Kaliumcyclopentylxanthat und Kaliumcyclohexylxanthat anstelle der in dem vorangehenden Verfahren angegebenen Thiobenzoesäure und sonst unter Nacharbeitung des dort beschriebenen Verfahrens, werden auf diese Weise 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3- (äthoxythio carbonyltlii omethyl ) - 7-m ethoxy- 3-c ephem-4-carbonsäure, 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(n-propoxythiocarbonylthiomethyi)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(isopropoxythiocarbonylthiomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(n-butoxythicarbonylthiomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(n-hexyloxythiocarbonylthiomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(cyclopentyloxythiocarbonylthiomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(cyclohexyloxythiocarbonylthiomethyl)-7-inethoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten.Using an equivalent amount of potassium ethyl xanthate, potassium n-propyl xanthate, Potassium isopropylxanthate, potassium n-butylxanthate, potassium n-hexylxanthate, potassium cyclopentylxanthate and potassium cyclohexyl xanthate in place of those given in the foregoing process Thiobenzoic acid and otherwise reworking the process described there, in this way 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (äthoxythio carbonyltlii omethyl) - 7-m ethoxy-3-c ephem-4-carboxylic acid, 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (n-propoxythiocarbonylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid , 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (isopropoxythiocarbonylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (n-butoxythicarbonylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (n-hexyloxythiocarbonylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (cyclopentyloxythiocarbonylthiomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid and 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (cyclohexyloxythiocarbonylthiomethyl) -7-ynethoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtain.

B e i 5 p i e 1 69 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(toluol-p-sulfonylmethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Ein Gemisch aus 0,654 g 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido- 3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure .und 1,0 g Natriumtoluol-p-sulfinat in 5,0 ml Wasser wird bei 50° C 24 Stunden erhitzt. Das Gemisch wird im Vakuum konzentriert und aus einem Gemisch aus Methanol und Wasser kristallisiert, wobei 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(toluolp-sulfonylmethyl )-7-methoxy- 3-c ephem-4-carbonsäure erhalten wird.B e i 5 p i e 1,69 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (toluene-p-sulfonylmethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid A mixture of 0.654 g of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido- 3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid .and 1.0 g of sodium toluene p-sulfinate in 5.0 ml of water is heated at 50 ° C for 24 hours. The mixture is concentrated in vacuo and from a mixture of methanol and water crystallized, with 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (toluene-sulfonylmethyl ) -7-methoxy-3-c ephem-4-carboxylic acid is obtained.

B e i s p i e 1 70 7ß- (D-5-hmino-5-carboxyval eramido ) - 3- (azidomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Ein Gemisch aus 2,0 g 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und 1,0 g Natriumazid wird in 10 ml Wasser gelöst und bei 50° C übernacht erhitzt. Das Gemisch wird dann lyophilisiert, und man erhält rohe 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(azidemethyl )-7-methox;y-3-cephem-4-carbonsäure Anstelle der Behandlung von 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvalerami do )- 3- (ac etowme ethyl ) - 7-methoxy 3- c ephem-4-carb onsäure mit Natriumazid ist es auch möglich, 842A selbst dafür in einem sonst analogen Verfahren einzusetzen, um ein@identisches Produkt zu erhalten. Das folgende Beispiel erläutert dieses Herstellung sver fahren: 100 mg 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3- ( carbamoyloxiymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in einer 0,5 m-Phosphatpufferlösung (5 ml, durch Zugabe von 3,5 g Natriumdihydrogenphosphat und 3,4 g Dinatriumphosphat in 100 ml Wasser und anschliessende Zugabe einer ausreichenden Menge Chlorwasserstoffsäure, um den pH-Wert auf 5 zu bringen, hergestellt) wurden in Gegenwart von 20 mg Natriumazid bei 95° C 8 hiinuten erhitzt. Präparative Dünnschicht-Chromatographie ergab 20 mg 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(azidomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, aus durch Infrarot- und kernmagnetische Resonanz-Bostimmung ermittelt wurde Behandlung dieses Material mit 1,0 ml Trifluoressigsäure bei 0° C während 5 Minuten und anschliessendes Abschrecken in einem grossen Volumen Äther und Eindampfung des Lösungsmittel 5 ergab 15 mg 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(azidomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in Form eines weissen Pulvers. Dieses Material besass biologische Wirksamkeit gegenüber verschiedenen Bakterienstämmen. Dieses Produkt wurde durch die folgenden Daten charakterisiert: Dünnschicht-Chromatographie: durchgeführt auf Celluloseplatten in einem 75%igem, wässrigem Acetonitril-Lösungsmittel; der Rf-Wert für dieses Produkt betrug 0,7; der Rf-Wert für das Dinatriumsalz von 842A lag bei 0,3.For example 1 70 7β- (D-5-hmino-5-carboxyval eramido) - 3- (azidomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid A mixture of 2.0 g of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid and 1.0 g of sodium azide is dissolved in 10 ml of water and heated at 50 ° C. overnight. The mixture is then lyophilized and crude 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (azidemethyl ) -7-methox; y-3-cephem-4-carboxylic acid instead of the treatment of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvalerami do) - 3- (ac etowme ethyl) - 7-methoxy 3- c ephem-4-carbonic acid with sodium azide it is also possible to use the 842A yourself in an otherwise analogous process, to get an @ identical product. The following example illustrates this production Procedure: 100 mg of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxiymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid in a 0.5 M phosphate buffer solution (5 ml, by adding 3.5 g sodium dihydrogen phosphate and 3.4 g of disodium phosphate in 100 ml of water and then adding a sufficient amount Amount of hydrochloric acid to bring the pH to 5) heated in the presence of 20 mg of sodium azide at 95 ° C. for 8 minutes. Preparative thin-layer chromatography revealed 20 mg of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (azidomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, from treatment determined by infrared and nuclear magnetic resonance tuning this material with 1.0 ml of trifluoroacetic acid at 0 ° C for 5 minutes and then Quenching in a large volume of ether and evaporation of the solvent 5 resulted 15 mg of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (azidomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid in the form of a white powder. This material possessed biological activity against different bacterial strains. This product was characterized by the following data: Thin-layer chromatography: carried out on cellulose plates in a 75%, aqueous acetonitrile solvent; the Rf value for this product was 0.7; the Rf value for the disodium salt of 842A was 0.3.

Ultraviolett-Bestimmung: # Maximum betrug 263 Millimikron der molekulare Extinctionskoeffizient lag bei etwa 3400 (theoretischer Wert: 8000); Infrarot-Bestimmung in Nujol lag bei 1780 cm-1, was die Anwesenheit eines ß-Lactamrings anzeigs; das Produkt ergab auch einen positiven Ninhydrintest, @er die Anwesenheit einer α-Aminoadipoyl-Seiten kette anz eig.. .Ultraviolet determination: # Maximum was 263 millimicrons of molecular Extinction coefficient was about 3400 (theoretical value: 8000); Infrared determination in Nujol was 1780 cm-1, indicating the presence of a ß-lactam ring; the Product also gave a positive ninhydrin test for the presence of an α-aminoadipoyl site chain num prop ...

Biologischer @@such: Die Scheiben-Zonengrössen in der folgenden Ta@@@le sind in mm für 100 γ/ml Antibiotikum ausgedrückt.Biological @@ such: The disk zone sizes in the following Ta @@@ le are expressed in mm for 100 γ / ml antibiotic.

Organismus Dinatriumsalz 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvon 842A valeramido)-3-(azidomethyl)-(100 γ/ml) 7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (100 /ml) Escherichi a coli W-MB-60 18 21 Pseudomonas stutzeri MB-1231 22 20 Vibrio percolans MB-1272 18 16 (5 γ/ml) B e i s p i e 1 71 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(aminomethyl)-7 methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Die in Beispiel 70 erhaltene rohe Probe aus 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(azidomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wird über Platinoxid in einer esslgsäurentmaltenden Methanollösung hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und die Lösung konzentriert. Eine Lösung des Rückstandes wird dann durch ein Polystyrol-Trimethylbenzylammonium-Anionenaustauschharz ( 43 % H2/) fraktioniert, und ausgewählte Fraktionen werden vereinigt und lyophilisiert, wobei 7ß- (D-5-Amino-5-carbo:yval eramido )-3- (aminomethyl ) 7-methoxy-3-c ephem-4carbonsäure erhalten wird. Organism disodium salt 7ß- (D-5-Amino-5-carboxyvon 842A valeramido) -3- (azidomethyl) - (100 γ / ml) 7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (100 / ml) Escherichi a coli W-MB-60 18 21 Pseudomonas stutzeri MB-1231 22 20 Vibrio percolans MB-1272 18 16 (5 γ / ml) For example, 1 71 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (aminomethyl) -7 methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid The crude sample of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (azidomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained in Example 70 is hydrogenated over platinum oxide in an acetic acid demolishing methanol solution. Of the The catalyst is filtered off and the solution concentrated. A solution of the residue is then replaced by a polystyrene-trimethylbenzylammonium anion exchange resin (43 % H2 /) fractionated, and selected fractions are pooled and lyophilized, wherein 7β- (D-5-amino-5-carbo: yval eramido) -3- (aminomethyl) 7-methoxy-3-c ephem-4-carboxylic acid is obtained.

Die Acylierung der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(aminoinethyl)-7-mcthoxy-3-c ephem-4-carbonsäure mit Acetyl halogenid, Propionylhalogenid und 2-Phenylacetylhalogenid ergibt die entsprechenden N-acylerten Derivate: 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetamidomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(propionamidomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure und 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(2-phenylacetamidomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure. The acylation of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (aminoinethyl) -7-methoxy-3-c ephemeral 4-carboxylic acid with acetyl halide, propionyl halide and 2-phenylacetyl halide gives the corresponding N-acylated derivatives: 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetamidomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (propionamidomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid and 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (2-phenylacetamidomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid.

Anstelle des vorstehend angegebenen katalytischen Verfahrens kann 7ß- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido )-3- (azidomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure auch zu dem entsprechenden Amin durch molekulare Hydrierung reduziert werden. Das folgende Beispiel erläutert dieses Herstellungsverfahren.Instead of the catalytic process given above, 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (azidomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid can also be reduced to the corresponding amine by molecular hydrogenation. That the following example explains this manufacturing process.

7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(azidomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wurde in einer Lösung von 90 % Essigsäure und 10 % Wasser gelöst. Das Gemisch wurde auf O bis @0 n gekühlt und 30 mg Zinkstaub wurden zugesetzt. Nach 10 Minuten wurde das Gemisch filtriert und mit Schwefelwasserstoff behandelt, um lösliches Zink zu entfernen. Das erhaltene Gemisch wurde dann mit einem grossen Volumen Wasser verdünnt und lyophilisiert, wobei praktisch reine 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(aminomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten wurde. Dieses Produkt wurde durch die folgenden Daten charakterisiert: Dünnschicht-Chromatographie: durchgeführt auf Celluloseplatten in einer 75igen, wässrigen Acetonitrillösung; der Rf-Wert für dieses Produkt lag bei 0,2, der Rf-Wert für das Dinatriumsalz vor 84.2A lag bei 9,3.7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (azidomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid was dissolved in a solution of 90% acetic acid and 10% water. The mixture was cooled to 0 to @ 0 n and 30 mg of zinc dust was added. After 10 minutes it was the mixture is filtered and treated with hydrogen sulfide to add soluble zinc remove. The resulting mixture was then diluted with a large volume of water and lyophilized, whereby practically pure 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (aminomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid was obtained. This product was characterized by the following data: Thin-layer chromatography: carried out on cellulose plates in a 75 aqueous acetonitrile solution; the Rf value for this product was 0.2, the Rf value for the disodium salt before 84.2A was 9.3.

Ultraviolett-Bestimmung: # Maximum betrug 263 m; der nolekulare Extinktions-koeffizient lag bei etwa 3500 (theoretischer Wert: 8000); die Infrarot-Bestimmung in Nujol ergab 1780 cm-1, was die Anwesenheit eines ß- Lactamrings anzeigt; das Produkt ergab auch einen positiven Ninhydrintest, der die Anwesenheit einer γ-Aminoadipoyl-Seitenkette anzeigt.Ultraviolet determination: # maximum was 263 m; the molecular extinction coefficient was around 3500 (theoretical value: 8000); found the infrared determination in Nujol 1780 cm-1, indicating the presence of a β-lactam ring; the product also yielded a positive ninhydrin test, which shows the presence of a γ-aminoadipoyl side chain indicates.

Biologischer Versuch: Die Scheiben-Zonengrössen sind in der folgenden Tabelle in mm für gleiche Konzentrationen des Antibiotikums ausgedrückt Organismus Dinatriumsalz 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvalervon 842A amido)-3-(aminomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Vibrio percolans MB-1272 18 20 (5 γ/ml) Salmonella gallinarum MB-1287 27 21 (100 γ/ml) Pseudomonas stutzeri MB-1231 21 21 (100 γ/ml) B e i s p i e l 72 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(2,4-dihydroxybenzyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Ein Gemisch aus 0,654 g 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido) 3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, 1,1 g Resorcin und 10 ml Wasser wurde 2 Tage bei 50° G erhitzt.Biological Trial: The slice zone sizes are in the following Table expressed in mm for equal concentrations of the antibiotic organism Disodium salt 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaler of 842A amido) -3- (aminomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Vibrio percolans MB-1272 18 20 (5 γ / ml) Salmonella gallinarum MB-1287 27 21 (100 γ / ml) Pseudomonas stutzeri MB-1231 21 21 (100 γ / ml) B e i s p i e l 72 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (2,4-dihydroxybenzyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid A mixture of 0.654 g of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) 3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, 1.1 g resorcinol and 10 ml water were heated at 50 ° G for 2 days.

Das Reaktionsgemisch wird dann lyophilisiert, und man erhält rohe 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(2,4-di-hydroxybenzyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure.The reaction mixture is then lyophilized and crude is obtained 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (2,4-di-hydroxybenzyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid.

B e i s p i e l 73 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(N-methylindol-3-ylmethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Eine lösung aus 0,655 g N-Methylindol in 5 ml Aceton wird zu einer Lösung aus 0,654 g 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(acetoxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in 5 ml Wasser bei 50° G gegeben. Das Gemisch wird 48 Stunden erhitzt, und das Lösungsmittel wird dann im Vakuum entfernt und der Rückstand mit Äther angerieben, wobei rohe 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(N-methylindol-3-yl methyl)-7-methoxy-3-c ephcm-4-carbonsäure erhalten wird.For example, 73 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (N-methylindol-3-ylmethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid A solution of 0.655 g of N-methylindole in 5 ml of acetone becomes a solution of 0.654 g of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (acetoxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid given in 5 ml of water at 50 ° G. The mixture is heated for 48 hours, and so is the solvent is then removed in vacuo and the residue rubbed with ether, with crude 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (N-methylindol-3-ylmethyl) -7-methoxy-3-c ephcm-4-carboxylic acid is obtained.

B e i s p i e 1 74 Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Stufe A: Dibenzylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carbxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3 c ephem-4- carb onsä ur e Eine Lösung aus 0,653 mg 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (Beispiel 14, Stufe A) in Methanol wird mit einer geringen Menge frisch hergestellt cm Phenyldiazomethan behandelt. Nach Stehen übernacht bei Raumtemperatur wird die Lösung eingedampft, wobei 1,053 g Rückstand erhalten wurde, der als der Dibenzylester der 7ß-(D-5-Phthaioylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure identifiziert wurde.For example, 74 disodium salt of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Stage A: Dibenzyl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carbxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3 c ephem-4-carb onic acid A solution of 0.653 mg of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (Example 14, step A) in methanol is freshly prepared with a small amount cm phenyldiazomethane treated. After standing overnight at room temperature, the Solution evaporated to give 1.053 g of residue, which is the dibenzyl ester of 7β- (D-5-phthaioylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid was identified.

Stufe B: Dibenzylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonE;äure 0,5 g des in Stufe A erhaltenen dibenzylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carbonylvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure werden in 5 ml reinem Dioxan, das 1,5 Äquivalente Pyridin enthält, gelöst. Eine Lösung aus Nitrolsylchlorid (1,3 Äguivalente) in Methylenchlorid wird zugegeben und die Lösung in einem Eisbad während 1 Stunde gerührt. Das so erhaltene Produkt ist eine lösung des Diben zylesters der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramino)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, welche direkt in der folgenden Stufe verwendet wird.Stage B: Dibenzyl ester of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carbonic acid 0.5 g of the dibenzyl ester of 7β- (D-5-phthaloylamino-5-carbonylvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtained in step A are dissolved in 5 ml of pure dioxane containing 1.5 equivalents of pyridine. One A solution of nitrolsyl chloride (1.3 equivalents) in methylene chloride is added and stir the solution in an ice bath for 1 hour. The product thus obtained is a solution of the dibenzyl ester of 7ß- (D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramino) -3- (hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, which is used directly in the following stage.

Stufe C: Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido )- 3- (hydroxm ethyl ) -,?-m ethoxy-3-cephem-4-carbonsäure Eine Lösung aus 0,5 g 10%igem Palladium-auf-Kohle wird zusammen mit 0,5 ml Eisessig zu dem in Stufe B erhaltenen Dibenzylester der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-hydroxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure zugegeben. Das Gemisch wird bei 2,8 kg/cm2 (50 lb. per square inch) unter Bewegen 2 Stunden hydriert, der Katalysator wird durch Diatomeenerde abfiltriert und das Lösungsmittel durch Konzentrierung im Vakuum entfernt. Der Bückstand wird in Methylenchlorid gelöst und die Lösung mit einer 5%9gen Natriumbicarbonatlösung extrahiert. Das erhaltene Gemisch wird dann mit Schwefelsäure auf pH 2 angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Nach Trocknen wird der Extrakt im Vakuum konzentriert, wobei ein Rückstand erhalten wird, der als das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyva'leramido )-3- (hydroxymethyl )-7-methoxy-3-cephen-4-carbonsäure identifiziert wird.Step C: Disodium salt of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido ) - 3- (hydroxm ethyl) -,? - m ethoxy-3-cephem-4-carboxylic acid A solution of 0.5 g 10% palladium-on-charcoal is added together with 0.5 ml of glacial acetic acid to that in stage B. obtained dibenzyl ester of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3-hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid admitted. The mixture is applied at 2.8 kg / cm2 (50 lb. per square inch) with agitation Hydrogenated for 2 hours, the catalyst is filtered off through diatomaceous earth and the Solvent removed by concentration in vacuo. The residue is dissolved in methylene chloride dissolved and the solution extracted with a 5% 9gen sodium bicarbonate solution. The received The mixture is then acidified to pH 2 with sulfuric acid and extracted with ethyl acetate. After drying, concentrate the extract in vacuo to give a residue is known as the disodium salt of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyva'leramido ) -3- (hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephen-4-carboxylic acid is identified.

Stufe D: Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäur e Das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Phthaloylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure, das in Stufe F erhalten wurde, wird in Wasser gelöst, 1 Äquivalent Hydrazinhydrat wird dann zugegeben, und man lässt das Gemisch übernacht bei Raumtemperatur stehen. Die wässrige Löaung wird mit Äthylacetat vor derer Lyophilisieren extrahiert, und man erhält das Dinatriumsalz der 7ß-(D-5-Ainino-5- carboxyval erami do )- 5- (hydroxymethyl ) -7-m ethoxy- 3-cephem-4-carbonsaur e.Step D: Disodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid e The disodium salt of 7ß- (D-5-phthaloylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (hydroxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid, obtained in step F is dissolved in water, 1 equivalent of hydrazine hydrate is then added and the mixture is allowed to stand overnight at room temperature. The aqueous solution is extracted with ethyl acetate before lyophilizing, and the disodium salt of 7ß- (D-5-Ainino-5-carboxyval erami do) - 5- (hydroxymethyl) is obtained ) -7-m ethoxy-3-cephem-4-carboxylic acid e.

B e i s p i e 1 75 Reinigung Monoatriumsalz der 7ß- (D-5-Amino-5-carbo;'-yvaleramino)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure 1,0 g des nach Beispiel 12 hergestellten Monoatriumsalzes der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wurden in 20 ml 1%igem, wässrigem, n-Butanol gelöst und auf eine Kolonne chromatographiert, die 2530 ml Sephadex G"10 enthielt, ein modifiziertes Dextrangel in Perlenform. Die Kolonne wurde mit 1%igem, wässrigem n-Butanol bei 10 ml/min entwickelt, und 10,5 ml-Fraktionen wurden automatisch gesammelt. Die susströmende Flüssigkeit wurde mit einem Registrier-Refraktometer aufgezeichnet, und die Fraktionen wurden biologisch untersucht. Die biologische Wirksamkeit trat in den Fraktionen 99 bis 122 auf, und diese wurden zusammengegeben und zur Trockene eingeengt, wobei 670 m Produkt erhalten wurden, das vorwiegend das Mononatriumsalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure enthielt.EXAMPLE 1 75 Purification Monosodium salt of 7β- (D-5-amino-5-carbo; '-yvaleramino) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid 1.0 g of the monosodium salt of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid prepared according to Example 12 were dissolved in 20 ml of 1% aqueous n-butanol and chromatographed on a column, which contained 2530 ml Sephadex G "10, a modified dextran gel in the form of a bead. The column was developed with 1% aqueous n-butanol at 10 ml / min, and 10.5 ml fractions were collected automatically. The flowing liquid became recorded on a recording refractometer and the fractions became biological examined. The biological activity occurred in fractions 99 to 122, and these were combined and concentrated to dryness, 670 ml of product being obtained which is predominantly the monosodium salt of 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid contained.

Die Kolonne wurde anschliessend durch Chromatographie auf einem Gemisch von Blue Dextran 2000 und Natriumchlorid unter identischen Bedingungen geeicht. Blue Dextran 2000 wurde in den Fraktionen 85 bis 93 und Natriumchlorid in den Fraktionen 14V bis 155 ermittelt was anzeigt, dass das biologisch-wirksame Produkt von Verunreinigungene dieser Art abgetrennt werden kein.The column was then chromatographed on a mixture Calibrated by Blue Dextran 2000 and sodium chloride under identical conditions. Blue Dextran 2000 was in fractions 85 to 93 and sodium chloride in fractions 14V to 155 determined what indicates that the biologically active product of impurities none of this type are severed.

B e i s p 1 e 1 S6 7ß- (D-5-Amino- 5- carboxyval erami do ) - 3-m e thyl- 7-me thoxy- 3-cephem-4-carbonsäure Ein 10%iger Palladium-auf-Kohle-Katalysator wurde in 80 ml Wasser suspendiert u4d mit Wasserstoff behandelt. Der Katalysator wurde dann filtriert und wiederum in 50 ml Wasser suspendiert, und zu 2s67 g dieses Gemischs wurden 1,0 g Natriumsalz von 842A in 10 ml Wasser gegeben. Das erhaltene Gemisch wurde 22 Stunden bei Raumtemperatur geschüttelt.B e i s p 1 e 1 S6 7β- (D-5-amino-5-carboxyval erami do) - 3-m ethyl 7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid A 10% palladium on carbon catalyst was in 80 ml Suspended water and treated with hydrogen. The catalyst was then filtered and resuspended in 50 ml of water, and to 2667 g of this mixture was added 1.0 g of the sodium salt of 842A in 10 ml of water. The resulting mixture was shaken at room temperature for 22 hours.

Der KatalYsator wurde ab-filtriert und einmal mit 50 ml Wasser gewaschen. Die vereinigten Waschwäser und Filtrate wurden dann zur Trockene eingeengt, und man erhielt eine 52,8%ige Ausbeute an 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3 methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäire (528 mg).The catalyst was filtered off and washed once with 50 ml of water. The combined washings and filtrates were then concentrated to dryness, and a 52.8% yield of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3 methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid was obtained (528 mg).

Die so erhaltene 7ß- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wurde mit Ausgangsmaterial unter Anwendung von Dünnschicht-Chromatographie verglicken.The 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid thus obtained was compared to starting material using thin layer chromatography.

Silicagel-Platten wurden verwendet, wobei die obere Phase aus vier Teilen n-Butylalkohols einem Teil Essigsäure und vier Teilen Wasser bestand. Das Hydrogenolyseprodukt ergab zwei Flecken mit einer höheren Strömungsgeschwindigkeit (Rf-Wert) als das Ausgangsmaterial. Die Flecken wurden durch inhydrin und Ultraviolett-Fluoreszens ermittelt. Die folgende Tabelle gibt die beobachteten Unterschiede zwischen dem Natriumsalz von 842A und dem 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure-Produkt wieder.Silica gel plates were used, the top phase being four Parts n-butyl alcohol, one part acetic acid and four parts water. That Hydrogenolysis product gave two spots with a higher flow rate (Rf value) as the starting material. The spots were identified by inhydrin and ultraviolet fluorescence determined. The following table shows the observed differences between the Sodium salt of 842A and the 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid product again.

Messung Natriumsalz von 842A 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Biologische Wirk- 5 µg/ml ergab eine 25mm-Zone Inaktiv bei 50 µg/ml (< 2 % Anfangssamkeit gegen Vibrio percolans aktivität) (MB-1272) Dünnschicht- Rf 0,1 Ninhydrin (positiv) Rf 0,25 inhydrin (positiv) Chromatographie Ultraviolett (positiv) Ultraviolett (positiv) ~ 15 ug/Fleck Rf 0,35 Ninhydrin (positiv) Ultraviolett (negativ) Ultraviolett # max 266 mµ, E1cm1% 142 # max 265 mµ E1cm1% 100 B e i s p i e 1 77 S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-yl-methyl]-thiouroium 100 mg Antiobiotikun 842A wurden 8 Minuten mit 26 ng Thioharnstoff bei 95° C in 5 nil einer 0,5 m-Phosphatpuîferlösung, die durch Zugabe von 3,5 g Natriumdihydrogenphosphat und 3,4 g Dinatriumphosphat in 100 ml Wasser und anschliessende Zugebe von ausreichender Chlorwasserstoffsäure, um den pH-Wert auf 5 zu bringen, erhalten wurde, erhitzt. Elektrophorese der Lösung bei pH 7 ergab die Thiouronium-Verbindung als nicht-bewegliche Einheit, während 842A eine Rf-Wert von etwa 0,2 beses. Das Gemisch wurde durch Absorption an ein Polystyrolkernsulfonsäure-Kationenaustauschharz ( Wasserstoffzyklus, Dowex 50) unter Entfernen des Phosphatpuffers gereinigt. Die Eluierung erfolgte unter Verwendung einer 0,1 n-Pyridinlösung. Der p)r'rn"i'ert wurde mit @ n-Natriumhydroxid auf 8 eingestellt und unter Vakuum eingedampft, um restlichos Pyridine zu entfernen.Measurement of the sodium salt of 842A 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Biological activity - 5 µg / ml resulted in a 25 mm zone inactive at 50 µg / ml (<2% initial seediness against Vibrio percolans activity) (MB-1272) thin-film Rf 0.1 ninhydrin (positive) Rf 0.25 inhydrin (positive) Chromatography Ultraviolet (positive) Ultraviolet (positive) ~ 15 ug / spot Rf 0.35 ninhydrin (positive) ultraviolet (negative) ultraviolet # max 266 mµ, E1cm1% 142 # max 265 mµ E1cm1% 100 Example 1 77 S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-yl-methyl] thiouroium 100 mg of antibiotics 842A were treated with 26 ng thiourea at 95 ° C for 8 minutes 5 nil of a 0.5 m phosphate buffer solution, which is obtained by adding 3.5 g of sodium dihydrogen phosphate and 3.4 g of disodium phosphate in 100 ml of water and subsequent addition of sufficient Hydrochloric acid to bring the pH to 5 was obtained. Electrophoresis of the solution at pH 7 revealed the thiouronium compound to be immobile Unit, while 842A has an Rf value of about 0.2. The mixture became by absorption to a polystyrene nucleus sulfonic acid cation exchange resin (hydrogen cycle, Dowex 50) cleaned by removing the phosphate buffer. The elution took place under Use of a 0.1 N pyridine solution. The p) r'rn "i'ert was with @ n-sodium hydroxide adjusted to 8 and evaporated in vacuo to remove residual pyridines.

Lyophilisierung ergab ein gelbbraaunes Pulver, das als S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-yl-methyl]-thiouronium identifiziert wurde. Dioses Produkt wurde durch die folgenden Daten charakterisiert: Dünnschicht-Chromatographie: durchgeführt auf Oellulose-Platten in einen 25%igen, wässrigen Acetonitril-Lösungsmit tel; der Rf-Wert für dieses Produkt lag bei 0,15; der Rf-Wert für das Dinatriumsalz von 842A lag bei 0,3.Lyophilization gave a tan powder which was classified as S- [7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -4-carboxy-7-methoxy-3-cephem-3-yl-methyl] -thiouronium was identified. Diose's product was characterized by the following data: Thin-layer chromatography: carried out on oil-cellulose plates in a 25%, aqueous acetonitrile solvents; the Rf value for this product was 0.15; the Rf value for the disodium salt of 842A was 0.3.

Ultraviolett-Bestimmung: # Maximum betrug 263 µg; der molekulars Extinktions-koeffizient betrug etwa 5700 (theoretischer Wert: 8000); die Infrarot-Bestimmung in Nujol ergab 1780 cm-1, was die Anwesenheit eines ß-Lactamrings anzeigt; das Produkt ergab auch einen positiven Ninhydrintest, as die Anwesenheit einer α-Aminoadipoyl-eitenkette anzeigt Elektrophorese: Die Einführung einer positiven Ladung in das Produkt wurde durch Elektrophorese bei 1000 Volt unter Verwendung eines 0,05 m-Shosphatpuffers bei pH 7 bestätigt; der Rf-Wert für das Produkt lag bei 0f01; der Rf-Wert für das Dinatriumsalz von 842A lag bei 0,4.Ultraviolet determination: # Maximum was 263 µg; the molecular extinction coefficient was about 5700 (theoretical value: 8000); found the infrared determination in Nujol 1780 cm-1, indicating the presence of a β-lactam ring; the product also yielded a positive ninhydrin test, as the presence of an α-aminoadipoyl side chain indicates electrophoresis: the introduction of a positive charge into the product has been made by electrophoresis at 1000 volts using a 0.05 m phosphate buffer confirmed at pH 7; the Rf value for the product was 0f01; the Rf value for that The disodium salt of 842A was 0.4.

Biologische Untersuchung: Die Scheiben-Zonengrössen sind in der folgenden tabelle in mm bei gleichen Sonzentrationen des Antibiotikums ausgedrückt.Biological Examination: The slice zone sizes are in the following Table expressed in mm with the same sonic concentrations of the antibiotic.

Organismus Dinatriumsalz S-[7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvon 842A valeramido)-3-carboxy-7 (100 γ/ml) methoxy-3-cephem-3-ylmethyl]-thiouronium (100 γ/ml) Vibrio Percolans O1272 235 27 Salmonella gallinarua MB-1287 27 23 Pseudomonas Stutzeri MB-1231 22 22 Proteus vulgaris MB-838 27 17 B e i s p i e l 78 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(4-methylthiazol-2-ylmercaptomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Stufe A: 7ß-(D-5-N-tert.-buthoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure 1,0 g des Dinatriumsalzes von 842A wurden in 31,6 ml 5%igem di-basischem Natriumphosphat gelöst, und 20,8 ml Aceton wurden unter Rühren zugegeben. Der pH-Wert der Lösung wurde dann mit Natriumhydroxid auf 9,5 bis 9,6 eingestellt und 1,0 ml tert.-Butoxycarbonylazid wurde unter Rühren zugegeben. Das Rühren wurde 4 bis 6 Stunden bei Xauntenperatur fortgesetzt, während der pH-Wert zwischen 9,0 und 9,6 unter Zugabe von Natriumhydroxid beibehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde dann übernacht gerührt, wonach der pH-Wert auf 8,5 abgesunken war. Der pH-Wert wurde mit Natriumhydroxid wieder auf 9,6 eingestellt und das Rühren weitere 3 Stunden fortgesetzt, während der pH-Wert zwischen 9,0 und 9,6 gehalten wurde.Organism disodium salt S- [7β- (D-5-amino-5-carboxy of 842A valeramido) -3-carboxy-7 (100 γ / ml) methoxy-3-cephem-3-ylmethyl] thiouronium (100 γ / ml) Vibrio Percolans O1272 235 27 Salmonella gallinarua MB-1287 27 23 Pseudomonas Stutzeri MB-1231 22 22 Proteus vulgaris MB-838 27 17 Example 78 7β- (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido) -3- (4-methylthiazol-2-ylmercaptomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4 -carboxylic acid Step A: 7β- (D-5-N-tert-buthoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid 1.0 g of the disodium salt of 842A was dissolved in 31.6 ml of 5% di-basic sodium phosphate dissolved, and 20.8 ml of acetone was added with stirring. The pH of the solution became then adjusted to 9.5 to 9.6 with sodium hydroxide and 1.0 ml of tert-butoxycarbonylazide was added with stirring. Stirring was done for 4 to 6 hours at Xauntenperatur continued while the pH was between 9.0 and 9.6 with the addition of sodium hydroxide was retained. The reaction mixture was then stirred overnight, after which the pH had dropped to 8.5. The pH was restored with sodium hydroxide Set 9.6 and stirring continued for a further 3 hours while maintaining the pH was held between 9.0 and 9.6.

Das erhaltene Gemisch wurde dann. mit einem halben Volumen Äthylacetat extrahiert und der Extrakt verworfen. Ein halbes Volumen Äthylacetat wurde zugegeben und die wässrige Schicht wurde mit konzentrierter Chlorwasserstoffsäure auf p H 2,5 in einem Eisbad eingestellt, um die Temperatur unterhalb von 5° C zu halten. Nach Ab trennung des ethyl acetats wurde die wässrige Lösung noch zweimal mit einem haltern Volumen Äthylacetat bei pH 2,5 extrahiert. Auf Grund von Ultraviolett-Bestimmungen lagen 50 S des Ausgangs-Ultraviolett-Absorbens in den Extrakten vor und 22 % in der verbrauchten, wässrigen Phase. Die Extrakte wurden vereinigt und zur Trockene eingeengt, wobei 645 mg 7ß-(D-5-N-tert.-Butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxçymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure mit einem Zehntel der biologischen Wirksamkeit des Ausgangs materials erhalten wurde.The resulting mixture was then. with half a volume of ethyl acetate extracted and the extract discarded. Half a volume of ethyl acetate was added and the aqueous layer was washed to pH with concentrated hydrochloric acid 2.5 set in an ice bath to keep the temperature below 5 ° C. After separation of the ethyl acetate, the aqueous solution was twice with a Hold volumes of ethyl acetate extracted at pH 2.5. Based on ultraviolet regulations 50% of the starting ultraviolet absorbent was present in the extracts and 22% in the used, aqueous phase. The extracts were combined and taken to dryness concentrated, whereby 645 mg of 7β- (D-5-N-tert-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid with a tenth of the biological effectiveness of the starting material was obtained.

Dünnschicht-Chromatogramme wurden unter Verwendung von Analtech-Silicagel G.F.-Platten und der oberen Phase aus einem 4 : 1 : 4 n-Butanol, Essigsäure, Wasser-System durchgeführt. Das Produkt besass einen Rf-Wert von 0,54 auf Grund der Ultraviolett-Bestimmung und war Ninhydrin-negatier. Das Ausgangsmaterial besass einen Rf-Wert von 0,1 und war ultraviolett- und ninhydrin-positiv.Thin layer chromatograms were performed using Analtech silica gel G.F. plates and the upper phase from a 4: 1: 4 n-butanol, acetic acid, water system carried out. The product had an Rf value of 0.54 based on ultraviolet determination and was ninhydrin-negated. The starting material had an Rf value of 0.1 and was ultraviolet and ninhydrin positive.

Das Entfernen der tert.-Butoxycarbonyl-Schutzgruppe aus einer 10 mg-Probe der 7ß-(D-5-N-tert.-Butoxycarbonylmino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wurde durch Auflösen des Materials in 0,2 ml Trifluoresigsäure und Stehenlassen der Lösung bei Raumtempratur während 5 Minuten durchgeführt. Die Lösung wurde dann bei Raumtemperatur zur Trockene eingeengt.Removal of the tert-butoxycarbonyl protecting group from a 10 mg sample of 7β- (D-5-N-tert-butoxycarbonylmino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid was made by dissolving the material in 0.2 ml of trifluoresetic acid and allowing it to stand the solution carried out at room temperature for 5 minutes. The solution then became concentrated to dryness at room temperature.

Dünnschicht-Chromatographie, wie vorstehend beschrieben, ergab einen Fleck für dieses Produkt mit einem Rf-Wert von 0,1, der ultraviolett- und ninhydrin-positiv war.Thin layer chromatography as described above gave one Stain for this product with an Rf value of 0.1 that is ultraviolet and ninhydrin positive was.

Stufe B: 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(4-methyl thiazol-2-ylmetcaptomethyl)-7-methoxy-3-cephem 4-carbonsäure 100 mg 7ß-(D-5-N-tert.-Butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsaure in 5 ml eines pH 7-Puffers (eine C,5 m-Lösung eines Gemisches aus 3,5 g Natriumdihydrogenphosphat und 3,4 g Dinatriumphosphat in 100 ml Wasser), der 50 mg 2-Mercapto-4-methylthiazol enthielt, wird bei 95° C 8 Minuten erhitzt.Step B: 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (4-methyl-thiazol-2-ylmetcaptomethyl) -7-methoxy-3-cephem 4-carboxylic acid 100 mg of 7β- (D-5-N-tert-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid in 5 ml of a pH 7 buffer (a C, 5 M solution of a mixture of 3.5 g of sodium dihydrogen phosphate and 3.4 g disodium phosphate in 100 ml water), the 50 mg 2-mercapto-4-methylthiazole is heated at 95 ° C for 8 minutes.

Auf diese Weise wurde 7ß-(D-5-N-tert.-Butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(4-methylthiazol-2-ylmercaptomethyl)-7-methoxy-3-cephem040carbonsäure erhalten, die nach Behandlung mit 0,2 ml Trifluoressigsäure 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(4-methylthiazol-2-ylmercaptomethyl)-7-methoxy-3-c ephem-4-carbonsäure lieferte Dieses Produkt wurde durch die folgenden Daten charakterisiert; Dünnschicht-Chromatographie: durchgeführt auf Cellulose-Platten in einem 25%igen, wässrigen acetonitril-Lösungsmittel; der Rf-Wert für dieses Produkt betrug 0,6 der Rf-Wert für das Dinatriumsalz von 842h betrug 0,3.Thus, 7β- (D-5-N-tert-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (4-methylthiazol-2-ylmercaptomethyl) -7-methoxy-3-cephem040carboxylic acid obtained after treatment with 0.2 ml of trifluoroacetic acid 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (4-methylthiazol-2-ylmercaptomethyl) -7-methoxy-3-c ephemous-4-carboxylic acid provided This product was characterized by the following data; Thin-layer chromatography: carried out on cellulose plates in a 25%, aqueous acetonitrile solvent; the Rf value for this product was 0.6 The Rf value for the disodium salt of 842h was 0.3.

Ultraviolett-Beistimmung: # Maximum betrug 269 mµsder molekulare Extinktions@koeffizient lag bei etwa 2000' (theoretischer Wert: 8000); Infrarot-Best-immung in Nujol ergab 1780 cm-1, was die Anwesenheit eines ß-Lactamrings anzeigt; das Produkt ergab auch einen positiven Ninhydrintest, der die Anwesenheit einer a-Amirdipoyl-Seitenkette anzeigt.Ultraviolet determination: # Maximum was 269 mµs the molecular extinction coefficient was around 2000 ' (theoretical value: 8000); Infrared determination in Nujol was 1780 cm-1, indicating the presence of a β-lactam ring; the product also gave a positive ninhydrin test indicating the presence of an α-amir dipoyl side chain indicates.

Biologische Untersuchung: Die Scheiben-Zonengrössen in der folgenden Tabelle sind in mm für gleiche Sonzentrationen an Antibiotikum ausgedrückt. Biological examination: The disk zone sizes in the following Tables are expressed in mm for the same sonic concentrations of antibiotic.

Organismus Dinatriumsalz 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvon 842A valeramino)-3-(4-methyl-(100 #/ml) thiazol-2-ylmercaptomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure (100 γ/ml) Pseudomonas c',tutzeri' H3-1231 22 13,5 Escherichia coli W-MB-60 18 14 Vibrio 1 percolans MB-1272 23 20 B e i s p i e l 79 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(1,3,4-thiadiazol-2-ylmercaptomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Unter Ersatz von 2-Mercapto-1,3,4-thiadiazol anstelle des 2-Mercapto-4-methylthiazols gemäss Beispiel 78, Stufe B, und im übrigen unter Nacharbeitung des dort beschriebenen Verfahrens wird auf diese- Weise 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(1,3,4-thiadiazol-2-ylmercaptomethyl)-7-inethoxy-3-cepheni-4-carbonsäure erhalten. Organism disodium salt 7ß- (D-5-amino-5-carboxyvon 842A valeramino) -3- (4-methyl- (100 # / ml) thiazol-2-ylmercaptomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid (100 γ / ml) Pseudomonas c ', tutzeri' H3-1231 22 13.5 Escherichia coli W-MB-60 18 14 Vibrio 1 percolans MB-1272 23 20 Example 79 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (1,3,4-thiadiazol-2-ylmercaptomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid With replacement of 2-mercapto-1,3,4-thiadiazole instead of 2-mercapto-4-methylthiazole according to Example 78, stage B, and otherwise reworking that described there In this way 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (1,3,4-thiadiazol-2-ylmercaptomethyl) -7-ynethoxy-3-cepheni-4-carboxylic acid is processed obtain.

7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(thiocyanatomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure 100 mg Antibiotikum 842A wurden zu 5 ml einer 0,5 m-Pufferlösung, bestehend aus 3,5 g Natriumdihydrogenphosphat und 3,4 g Dinatriumphosphat in 100 ml Wasser zugegeben und der pH-Wert des Gemischs auf pH 5 durch Zugabe von Chlorwasserstoffsäure gebracht. 20 mg Natriumthiocyanat wurden zugegeben' und das Gemisch wurde 8 minuten auf 95° G erhitzt.7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (thiocyanatomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid 100 mg of antibiotic 842A were added to 5 ml of a 0.5 M buffer solution, consisting of 3.5 g of sodium dihydrogen phosphate and 3.4 g of disodium phosphate in 100 ml of water were added and the pH of the mixture was brought to pH 5 by adding hydrochloric acid. 20 mg of sodium thiocyanate were added and the mixture was at 95 ° for 8 minutes G heated.

Es wurde auf diese Weise 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(thiocyanatomethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten.In this way 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (thiocyanatomethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid obtain.

B e i s p i e 1 81 7ß (D-5-Amino-5-carboxyvaleramido )-3- (chlormethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Stufe A: Dibenzhydrylester der 72-(D-5-N-tert.-Butoiycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure Zu einer Lösung aus 15,0 g 7ß-(D-5-N-tert.-Butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in 500 ml Äthylacetat werden 5,5 g Diphenyldiazomethan in 70 ml Äther zugegeben. Das Gemisch wird unter Rühren auf 40° C erwärmt und dann nach g Hi'-nuten mit zusätzlichen 5,5 g Diphenyldiazomethan in 0 uI Äther behandelt. Nach 3 Stunden wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und durch ein Gemisch aus 500 ml Methanol und 20 ml Wasser ersetzt. Die Methanol-Wasserlösung wira viermal mit Hexan extrahiert und dann im Vakuum eingedampft.Ex. 1 81 7 [beta] (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (chloromethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid Stage A: Dibenzhydryl ester of 72- (D-5-N-tert-butoiycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid To a solution of 15.0 g of 7β- (D-5-N-tert-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid 5.5 g of diphenyldiazomethane in 70 ml of ether are added to 500 ml of ethyl acetate. The mixture is heated to 40 ° C. with stirring and then after g Hi'-grooves with additional 5.5 g of diphenyldiazomethane treated in 0 µl of ether. After 3 hours the solvent will removed in vacuo and replaced by a mixture of 500 ml of methanol and 20 ml of water. The methanol-water solution is extracted four times with hexane and then evaporated in vacuo.

Der Rückstand wird in Äthylacetat gelöst, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft,- wobei der Di-Bei stiel 80 b enzhydrylester der 7ß- (D-5-N-t ert . -Butoxycarbonylanino- 5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure erhalten wird.The residue is dissolved in ethyl acetate and dried over sodium sulfate and evaporated in a vacuum, - with the Di-Bei stalk 80 benzhydryl ester of 7β- (D-5-N-tert. -Butoxycarbonylanino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid is obtained.

Stufe B: Dibenzhydrylcster der 7ß-(D-5-N-tert.-Butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(chlormethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure 1 mMol Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-N-tert.-Butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure wird in 5 ml Methylenchlorid gelöst und das Gemisch auf 0° C gekühlt. 1 milol Collidin wird zugegeben, und anschliessend wird tropfenweise eine Lösung aus 0,6 mMol Phosphorpentachlorid in 5 ml Methylenchlorid zugesetzt. Das Gemisch wird dann 1 Stunde in einem Eisbad bei 0° C gerührt und die erhaltene Lösung mit Natriumbicarbonat, verdünnter Chlorwasserstoffsäure und einer gesättigten Natriumchloridlösung extrahiert. Das Gemisch wird zur Trockene eingedampft und dann durch Chromatographie auf einer gekühlten Silicagel-Kolonne unter Verwendung von Chloroform als Eluiermittel isoliert. Das so erhaltene Produkt ist der Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-N-tert.-Botoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(chlormethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure.Stage B: Dibenzhydryl ester of 7β- (D-5-N-tert-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (chloromethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid 1 mmol dibenzhydryl ester of 7β- (D-5-N-tert-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (carbamoyloxymethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid is dissolved in 5 ml of methylene chloride and the mixture is cooled to 0 ° C. 1 milol collidine is added, and then a solution of 0.6 mmol of phosphorus pentachloride is added dropwise added in 5 ml of methylene chloride. The mixture is then placed in an ice bath for 1 hour stirred at 0 ° C and the solution obtained with sodium bicarbonate, dilute hydrochloric acid and a saturated sodium chloride solution. The mixture becomes dry evaporated and then chromatographed on a cooled silica gel column isolated using chloroform as the eluant. The product thus obtained is the dibenzhydryl ester of 7ß- (D-5-N-tert-botoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (chloromethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid.

Stufe C: Trifluoressigsäuresalz der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(chlormethyl)-7-methoxy-3-cephem--4carbonsäwre Eine Lösung aus 1 mMol Dibenzhydrylester der 7ß-(D-5-N-tert.-Butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-(chlormethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure in 13 ml Anisol wird auf 6,5 ml kalte (0° C) Trifluoressigsäure unter Rühren gegossen. Nach 5 Minuten wird die lösung unter Rühren in 1800 ml einer bei 0° ( gehaltenen Ätherlösung gegossen.Step C: Trifluoroacetic acid salt of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (chloromethyl) -7-methoxy-3-cephem-4carboxylic acid A solution of 1 mmol of dibenzhydryl ester of 7β- (D-5-N-tert-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido) -3- (chloromethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid 13 ml of anisole are poured onto 6.5 ml of cold (0 ° C.) trifluoroacetic acid with stirring. After 5 minutes, the solution is kept at 0 ° (while stirring in 1800 ml Poured ethereal solution.

Der sich ergebende feste Niederschlag wird dann gesammelt und getrocknet, wobei 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-3-(chlormethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure-trifluoracetat erhalten wird.The resulting solid precipitate is then collected and dried, wherein 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -3- (chloromethyl) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid trifluoroacetate is obtained.

Die neuen Verbindungen der Erfindung wurden als Verbindungen mit dem 5-Amino-5-carboxyvaleramidorest in der ß-Konfiguration mit Bezug auf den Cephemkern beschrieben. Obgleich dies auf derzeit 'verfügbaren Informationen beruht und als richtig angenommen wird, sollen die Verbindungen nicht auf diese spezielle Konfiguration festgelegt sein, falls sie' auf Grund weiterer Erkenntnisse als unkorrekt nachgewiesen wurde.The new compounds of the invention have been identified as compounds with the 5-Amino-5-carboxyvaleramido radical in the ß-configuration with respect to the cephem nucleus described. Although this is based on information currently available and as a Assuming correctly, the connections are not intended to be based on this particular configuration should be specified if it is proven to be incorrect on the basis of further findings became.

Die In der vorliegenden Beschreibung angeführten Organismen sind in der Kulturcnsammlung des American Type Culture C'ollection hinterlegt, wo sie unter den folgenden ATCC-Bezeichnungen verfügbar sind: Escherichia coli W-MB-60 ATCC 9637 Proteus vulgaris MB-838 ATCC 21100 Alcaligenes faecalis MB ATCC 212 Alcaligenes viscosus MB-12 ATCC 337 Vibrio percolans MB-1272 ATCC 8461 Bacillus subtilis MB-964 ATCC 6633 Auch werden in der Beschreibung mehrere verwendete Materialien mit Handelsbezeichnungen bez ei ohne. Diese weisen die folgende Zusammensetzung auf und sind von den folgenden Bezugsfirmen erhältlich: Amber Yeast Nr. 300: Eine Fraktion autolysierter Brauereihefe; Amber Laboratories, Juneau, Wisconsin.The organisms mentioned in the present description are in deposited in the culture collection of the American Type Culture C'ollection, where it is under the following ATCC designations are available: Escherichia coli W-MB-60 ATCC 9637 Proteus vulgaris MB-838 ATCC 21100 Alcaligenes faecalis MB ATCC 212 Alcaligenes viscosus MB-12 ATCC 337 Vibrio percolans MB-1272 ATCC 8461 Bacillus subtilis MB-964 ATCC 6633 Several materials with trade names are also used in the description bez ei without. These have the following composition and are of the following References available: Amber Yeast No. 300: A fraction of autolyzed brewer's yeast; Amber Laboratories, Juneau, Wisconsin.

Nobel par-S: Ein Entschäumungsmittel auf Ölbasis (Zusammensetzung unbekannt); Mobil Oil Company, 150 E. 42nd Street, New York, New York.Nobel par-S: an oil-based defoamer (composition unknown); Mobil Oil Company, 150 E. 42nd Street, New York, New York.

Polyglykol 2000: Ein Entschäumungsmittel; Polypropylenglykol-Polymeres mit einem mittleren Molekulargewicht von 2000; Dow Chemical Company, midland, Michigan.Polyglycol 2000: A Defoaming Agent; Polypropylene glycol polymer with an average molecular weight of 2000; Dow Chemical Company, Midland, Michigan.

Biogel P-2: Ein Gelfiltrationsmedium; ein kugelförmiges Polyacrylamid vernetzt mit Methylen-bis-acrylamid; Bio-rad Laboratories, Richmond, California.Biogel P-2: a gel filtration medium; a spherical polyacrylamide crosslinked with methylene-bis-acrylamide; Bio-rad Laboratories, Richmond, California.

Dowex 50: Ein Polystyrol mit im Kern sulfonierter Sulfonsäure-Kationenaustauschharz; Dow Chemical Company, Midland, Michigan.Dowex 50: A polystyrene with a sulfonated sulfonic acid cation exchange resin in the core; Dow Chemical Company, Midland, Michigan.

Analtech G.F. Plates; Silicagel mit Calciumsulfat-Binder und ein fluoreszierender Indikator, 250 Mikrometer Stärke; Analtech Inc., 100 South Justison Street, Wilmington, Delaware, 19801.Analtech G.F. Plates; Silica gel with calcium sulfate binder and a fluorescent one Indicator, 250 micrometers thick; Analtech Inc., 100 South Justison Street, Wilmington, Delaware, 19801.

Claims

P a t e n t a n s p r ü c h eP a t e n t a n s p r ü c h e

1. Derivate der 7ß-(D-5-Amino-5-carboxyvaleramido)-7-methoxy-3-cephem-4-carbonsäure der allgemeinen Formel worin R bedeutet Hydroxyl, einen Rest der allgemeinen Formel -O-CO-R18 worin R18 niedrig-Alkyl Aryl, eInen mononuk learen, N-haltigen Heterocyclus, Aralkyl oder Cycloalkyl darstellt einen Amidinothiorest der allgemeinen Formel: in der R4, R5 und R6 Wasserstoff oder niedere Alkylreste darstellen; einen Thiorest der allgemeinen Formel -SR³, worin R3 einen niederen Alkylrest oder einen Heterocyclus aus Pyridyl-, alkylsubstituiertem Thiazolyl-, 1,3,4-Thiadiazol-2-yl, alkylsubstituiertem 1,3,4-Thiadiazol-2-yl, 2-Benzothiazolyl- oder 4-niedrig-alkylpyrimidin-2-ylrest darstellt; einen Aniinothiocarbonylthiorest der allgemeinen Formel: worin R7 und R8 Wasserstoff, niedere Alkyl-, Hydroxyniedrig-alkyl-, Di-niedrig-alkylamino-niedrig-alkyl-, Morpholino-niedrig-alkyl'-, N-Aryl-N-niedrig-alkylaminoalkylreste oder zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen Heterocyclus aus Norpholino-, Piperidino-, Pyrrolidinyl- oder einem Piperazinorest der Formel: darstellen, worin R9 einen niederen Alkyl- oder Phenylrest bedeutet; Aroylthio; einen Oxythiocarbonylthiorest der Formel worin R10 einen niederen Alkyl- oder niederen Cycloalkylrest darstellt; Alkarylsulfonyl; Azido; Polyhydroxyphenyl; N-niedrig-Alkylindol-3-yl; Tri-niedrig-alkylammonium- oder Pyridinium der allgemeinen Formel: worin X¹ ein Wasserstoffatom, einen Halogen-, Trifluormethyl-, Cyano-, Carboxy-, Carbamoyl-, N-niedrig-Alkylcarbamoyl-, N,N-Di-niedrig-alkylcarbamoyl-, Carboxymethyl-, niederen Alkanoyl-, niederen Alkyl-, Hydroxymethylrest oder Sulforest darstellt, einen Rest der allgemeinen Formel -O-CO-NR15R16, worin R15 und R16 niedere Alkylreste oder zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen mononuklearen Heterocyclus aus Pyrrolidin, Piperidin oder Morpholin bedeuten, oder einen Rest der allgemeinen Formel -O-CO-NHR17, worin R17 einen niederen Alkyl-, Halogen-niedrig-alkyl-, niederen Alkoxycarbonyl-, Aryl-, Alkarylsulfonyl- oder Benzhydrylrest bedeutet sowie Salze', Ester und Amide dieser Verbindungen, 1. Derivatives of 7β- (D-5-amino-5-carboxyvaleramido) -7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid of the general formula in which R denotes hydroxyl, a radical of the general formula -O-CO-R18 in which R18 is lower-alkyl aryl, a mononuclear, N-containing heterocycle, aralkyl or cycloalkyl is an amidinothio radical of the general formula: in which R4, R5 and R6 represent hydrogen or lower alkyl radicals; a thio radical of the general formula -SR³, in which R3 is a lower alkyl radical or a heterocycle of pyridyl, alkyl-substituted thiazolyl-, 1,3,4-thiadiazol-2-yl, alkyl-substituted 1,3,4-thiadiazol-2-yl, 2 -Benzothiazolyl- or 4-lower-alkylpyrimidin-2-yl radical; an aniinothiocarbonylthio radical of the general formula: wherein R7 and R8 are hydrogen, lower alkyl, hydroxy-lower alkyl, di-lower-alkylamino-lower-alkyl, morpholino-lower-alkyl, N-aryl-N-lower-alkylaminoalkyl radicals or together with the nitrogen atom that they are bound, a heterocycle of norpholino, piperidino, pyrrolidinyl or a piperazino radical of the formula: represent in which R9 is a lower alkyl or phenyl radical; Aroylthio; an oxythiocarbonylthio radical of the formula wherein R10 represents a lower alkyl or lower cycloalkyl radical; Alkarylsulfonyl; Azido; Polyhydroxyphenyl; N-lower alkylindol-3-yl; Tri-lower alkylammonium or pyridinium of the general formula: wherein X¹ is hydrogen, halogen, trifluoromethyl, cyano, carboxy, carbamoyl, N-lower alkylcarbamoyl, N, N-di-lower alkylcarbamoyl, carboxymethyl, lower alkanoyl, lower alkyl, Hydroxymethyl radical or Sulforest, a radical of the general formula -O-CO-NR15R16, in which R15 and R16 are lower alkyl radicals or together with the nitrogen atom to which they are attached, a mononuclear heterocycle of pyrrolidine, piperidine or morpholine, or a radical of general formula -O-CO-NHR17, in which R17 is a lower alkyl, halo-lower alkyl, lower alkoxycarbonyl, aryl, alkarylsulfonyl or benzhydryl radical and salts', esters and amides of these compounds,

2. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einer Verbindung nach Anspruch 1.2. Medicines, characterized by a content of a compound according to claim 1.