DE2150581A1 - Verfahren und Vorrichtung zum Trennen der Lymphozyten von einer Blutprobe - Google Patents
Verfahren und Vorrichtung zum Trennen der Lymphozyten von einer BlutprobeInfo
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Description
Patentanwälte
Dr.-Ing. Wilhelm ßeiahel
DipL-Ing. Woligang Mühel
DipL-Ing. Woligang Mühel
6 Frankfurt a. M. 1
Parksiraße 13
Parksiraße 13
6792
TECHNICON INSTRUMENTS CORPORATION, Tarrytown, VStA
Verfahren und Vorrichtung zum Trennen der Lymphozyten von einer Blutprobe
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren und eine Vorrichtung zum Trennen der Lymphozyten von einer Blutprobe,
insbesondere einer Gesamtblutprobe.
Die Trennung der Lymphozyten von einer Gesamtblutprobe mit einem sehr hohen kombinierten Grad an Reinheit, Ausbeute
und Lebensfähigkeit ist bei der Diagnose und Behandlung von zahlreichen Krankheiten des Menschen von großer Bedeutung.
Da ein Lymphozyt eine Zelle mit einem Kern ist, der, sofern er richtig angeregt wird, der Mytose bzw. Zellteilung un- '
terliegt, ermöglicht die Zugabe eines geeigneten Stoffs in Form von beispielsweise PHA zu den getrennten Lymphozyten
die Durchführung einer chromosomen Analyse. Da die Lymphozytenzellwand Antigene enthält, kann man die getrennten
Lymphozyten zur Herstellung von hochwertigen antilymphozytischen Seren zur therapeutischen Verwendung, zum Prüfen
von immunosuppresiven Arzneimitteln und zur Untersuchung invitro der Histokompatibilität bei der Gewebeuntersuchung
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und wechselseitigen Gewebebestimmung für Transplantationen verwenden, wobei man sowohl vom Spender als auch Empfänger
Lymphozyten benötigt.
Weiterhin ermöglicht die Antikörperbildungsfunktion der getrennten Lymphozyten ihre Verwendung bei der labormäßigen
Untersuchung von unmittelbaren und verzögerten Überempfindlichkeitsformen,
beispielsweise von Heuschnupfen, und von Tuberkulose. Allgemein kann man sagen, daß die
getrennten Lymphozyten bei der Diagnose von zahlreichen besonderen Krankheiten verwendet werden können, wobei die
Lymphozyten mit dem Krankheitserreger gemischt werden und die besondere Reaktion der Lymphozyten beobachtet wird.
Es sind bereits zahlreiche Verfahren und Vorrichtungen zum Trennen der Lymphozyten von Blutproben bekannt. Keine dieser
bekannten Anordnungen ist jedoch in der Lage, die Lymphozytentrennung mit einem sehr hohen kombinierten Grad an
Reinheit, Ausbeute· und Lebensfähigkeit vorzunehmen, was zur erfolgreichen Verwendung der getrennten Lymphozyten
bei den meisten wichtigen diagnostischen und therapeutischen Zwecken erforderlich ist. Wenn beispielsweise die
Lebensfähigkeit der Lymphozyten gering ist, also das Verhältnis der lebenden Lymphozyten zu der Gesamtanzahl der
getrennten Lymphozyten klein ist, kann man mit diesen getrennten Lymphozyten praktisch keine wirksamen antilymphozytischen
Seren herstellen.
Weiterhin ist es bei vielen "bekannten Verfahren und Vorrichtungen
notwendig, die Gesamtblutprobe zur Erhaltung und Aufbewahrung abzukühlen, und zwar von dem Zeitpunkt
an, zu dem die Probe dem Patienten entnommen wird, bis zu demjenigen Zeitpunkt, zu dem die Lymphozyten von der Probe
getrennt werden. Durch diese Maßnahme ist die Speicherung und Verschickung der Blutproben teuer und mühsam. Ferner
ist bei den meisten bekannten Verfahren und Vorrichtungen
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eine verhältnismäßig aufwendige Vorbehandlung der Gesamtblutprobe notwendig. So wird beispielsweise die Gesamtblutprobe
zentrifugiert oder dgl., um vor der Lymphozytentrennung
einen Leukozytenfilm zu bilden. Dadurch erhöhen sich nicht nur die Kosten, sondern auch der zeitliche Gesamtaufwand
zum Trennen der Lymphozyten.
Demzufolge sind die bekannten Verfahren und Vorrichtungen zum Trennen der Lymphozyten außerordentlich kompliziert
und bezüglich der Zeit und Kosten aufwendig. Ferner benötigt man ein besonders geschultes und ausgewähltes Laborpersonal. Darüberhinaus ist die Bearbeitungsgeschwindigkeit
gering. Davon abgesehen müssen die bekannten Vorrichtungen laufend überwacht und überprüft werden. Ein weiterer Nachteil
besteht darin, daß Fehler durch das Laborpersonal hervorgerufen werden können. Alles dies führt zu einer unzureichenden
und unzulänglichen Lymphozytentrennung.
Weiterhin können nach den bekannten Verfahren und Vorrichtungen lediglich von Hand größere Mengen verarbeitet werden.
Es ist weder ein Verfahren noch eine Vorrichtung bekannt, mit denen vollkommen automatisch aus einem Strom von Gesamtblutproben
von mehreren verschiedenen Patienten die Lymphozyten kontinuierlich getrennt werden können. Es ist
daher mit den bekannten Mitteln unmöglich, von sehr vielen Gesamtblutproben verschiedener Patienten die Lymphozyten
in einer schnellen und wenig aufwendigen Weise zu trennen.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren und eine Vorrichtung zu schaffen, mit denen die Lymphozyten
von Gesamtblutproben mit einem bisher nicht erreichten kombinierten Grad an Reinheit, Ausbeute und Lebensfähigkeit
getrennt werden können. Nur auf diese Weise ist es möglich, Lymphozyten bereitzustellen, die mit großem Erfolg
für sehr viele verschiedenartige diagnostische und therapeutische Zwecke verwendet werden können.
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Weiterhin soll die Vorbehandlung der Gesaratblutproben äußerst einfach und wirkungsvoll sein.
Ferner soll die Möglichkeit bestehen, die Trennung der Lymphozyten vollautomatisch mit einem minimalen Aufwand
an Überwachung durch geschultes Personal vorzunehmen.
Dabei soll noch berücksichtigt werden, daß die Vorrichtung aus einfachen und zuverlässig arbeitenden Teilen mit einer
hohen Lebensdauer besteht.
Zudem soll die Trennung schnell durchgeführt werden können. Dabei sollen die Kosten gering sein.
Weiterhin" sollen das Verfahren und die Vorrichtung in der
Lage sein, aufeinanderfolgend auf der Grundlage des kontinuierlichen Strömungsprinzips die Lymphozyten von Gesamtblutproben
vieler verschiedener Patienten vollautomatisch zu trennen.
Um den gewünschten Zweck zu erreichen, wird nach der Erfindung die Gesamtblutprobe praktisch gleichzeitig mit der
Entnahme beim Patienten mit einem physiologischen Stabilisierungsmittel in Form eines Chelatbildners gemischt. Bei
dem Chelatbildner kann es sich um ein Natrium- oder Kaliumsalz der Äthylendiamintetraessigsäure handeln, für die im
folgenden die Kurzbezeichnung EDTA verwendet wird. Durch die Zugabe des Chelatbildners werden die Leukozyten der
Gesamtblutprobe stabilisiert, so daß eine Koagulation vermieden wird. Das dabei entstehende Blut wird im folgenden
"EDTA"-Blut genannt. Zum Trennen der Lymphozyten von der
in obiger Weise stabilisierten Gesamtblutprobe wird der Probe ein Trennungsmittel beigemengt, das sensibilisierte
magnetische Teilchen enthält. Die magnetischen Teilchen markieren oder kennzeichnen die phagozytisehen Leukozyten,
also die neutrophilen, eosinophilen und basophilen Granulozyten, Monozyten und Thrombozyten. Die Kennzeichnung
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durch die magnetischen Teilchen geschieht durch Leukoadhäsion, Phagozytose und Zellenzusammenballung. Die Lymphorzyten
bleiben von diesen Vorgängen verschont. Weiterhin ist in dem Trennungsmittel ein Sedimentierungsmittel enthalten,
das die Erythrozyten zur Zusammenballung anregt, so daß sich die Erythrozyten niederschlagen.
Nach der Zugabe des Trennungsmittels wird das Gesamtblutproben-Trennungsmittel-Gemisch
einem Inkubationsvorgang unterzogen. Im Anschluß an die Inkubation wird der Gemischstrom
durch eine Absetzeinrichtung geleitet, wobei sich der größte Teil der Erythrozyten am Boden absetzt und
dadurch sehr leicht durch Dekantierung abgeführt werden kann.
Danach wird der interessierende Gemischstrom durch eine magnetische Trennungseinrichtung geleitet, die ein ungleichförmiges
Magnetfeld aufweist, das dazu dient, die mit den magnetischen Teilchen gekennzeichneten Leukozyten in einer
solchen Weise aus dem Gemisch herauszulösen, daß die Anzahl der eingefangenen Lymphozyten äußerst gering ist. Die.
nicht gekennzeichneten Lymphozyten werden dann mit einem Teil der Resterythrozyten und Blutplasma sowie einer geringen
Menge nichtlymphozytischer Leukozyten, die eine Verunreinigung darstellen, abgezogen. Danach kann man durch Hämolyse
die restlichen Erythrozyten trennen und die Lymphozyten in üblicher Weise auswaschen.
Obwohl die im einzelnen beschriebenen Ausführungsbeispiele der Erfindung zur vollkommen automatischen Trennung der
Lymphozyten von einer großen Anzahl von Gesamtblutproben verschiedener Patienten auf der Grundlage des kontinuierlichen
Strömungsprinzips dienen, kann man die erfindungsgemäße Lehre gleichermaßen zum Trennen von Lymphozyten aus
einer großen Blutprobenmenge verwenden.
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Bevorzugte Ausfuhrungsbeispiele der Erfindung werden an
Hand von Figuren beschrieben.
Die Fig. 1 zeigt die Leukoadhäsion zwischen den phagocytischen Leukozyten einer Gesamtblutprobe und sensibilisierten
magnetischen Teilchen.
Die Fig. 2 zeigt die Phagocytose von sensibilisierten magnetischen
Teilchen durch lebende phagocytische Zellen.
Die Fig. 3 zeigt eine Form von Leukozytenzusammenballung, einschließlich von Blutplättchen.
Die Fig. 4 zeigt eine andere Art von Leukozytenzusammenballung, einschließlich von Blutplättchen.
Die Fig. 5 ist ein schematisches Strömungsdiagramm einer
nach der Erfindung aufgebauten und arbeitenden Vorrichtung mit einer ersten Ausfuhrungsform
einer Einrichtung zur magnetischen Lymphozytentrennung.
Die Fig. 6 ist ein senkrechter Querschnitt durch die in der Fig. 5 dargestellte magnetische Trennungseinrichtung
.
Die Fig. 7 ist ein schematisches Strömungsdiagramm einer
zweiten Ausführungsform einer magnetischen Lymphozytentrennungseinrichtung,
die in der in der Fig. 5 dargestellten Vorrichtung Verwendung findet.
Das Blut des Menschen enthält eine Mischung aus roten Blutkörperchen
oder Erythrozyten, weißen Blutzellen oder Leukozyten,- Blutplättchen oder Thrombozyten und Blutplasma. Die
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Leukozyten bestehen aus einem Zellengemisch, beispielsweise mit etwa 63% bis 72% neutrophileaGranulozyten, etwa 2% bis
5/0 eosinophilenGranulozyten, etwa 0% bis 1% basophilei Granulozyten,
etwa 4% bis 8% Monozyten und etwa 20% bis 30%
Lymphozyten. Diese Angaben gelten für die meisten gesunden erwachsenen Menschen.
Die Gesamtaufgabe des Verfahrens und der Vorrichtung nach der Erfindung besteht darin, auf der Grundlage eines kontinuierlichen
Strömungsprinzips aus aufeinanderfolgenden Gesamtblutproben von Menschen sehr schnell und automatisch
die Lymphozyten herauszutrennen, und zwar mit einem sehr hohen, bisher nicht erreichten kombinierten Grad an Reinheit,
Ausbeute und Lebensfähigkeit. Unter der Reinheit wird die Anzahl 'der in dem Verarbeitungsausgang vorhandenen Lymphozyten
geteilt durch die Gesamtanzahl der darin enthaltenen Leukozyten verstanden. Unter der prozentualen Ausbeute
wird die Anzahl der Lymphozyten/mm der Ausgangsprobe geteilt durch die Anzahl der Lymphozyten/mm der ursprünglichen Gesamtblutprobe
verstanden. Dabei werden etwaige Verdünnungen in Betracht gezogen. Untei· der Lebensfähigkeit wird die Anzahl
der lebenden Lymphozyten im Ausgang geteilt durch die Gesamtanzahl der Lymphozyten in diesem Ausgang verstanden.
Für jede Gesamtblutprobe wird die Lymphozytentrennung nach der Erfindung dadurch vorgenommen, daß die phagozytischen
Leukozyten oder neutrophilen Granulozyten, Monozyten, eosinophilen Granulozyten und basophilen Granulozyten einer Gesamtblutprobe
praktisch unter Ausschluß der Lymphozyten mit sensibilisierten magnetischen Teilchen gekennzeichnet werden,
daß der Hauptanteil der Erythrozyten einem Absetzvorgang unterworfen und anschließend entfernt wird und daß die
auf diese Weise gekennzeichneten phagozytischen Leukozyten zusammen mit dem Hauptanteil der Thrombozyten, die an den
phagozytischen Leukozyten anhaften, aus der Gesamtblutprobe entfernt v/erden, so daß praktisch alle Lymphozyten zusammen
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mit den Resterythrozyten und dem Blutplasma übrig bleiben, wobei anschließend durch einfache Hämolyse und durch Auswaschen
oder dgl. eine Lymphozytenextraktion vorgenommen wird.
Gemäß der Erfindung wird die Gesamtblutprobe dem Patienten mit einer Injektionskanüle entnommen und unmittelbar in
einen Vacutainer gegeben. Vacutainer sind von der Firma Becton, Dickinson & Company of Rutherford, New Jersey, für
solche Zwecke hergestellte Gefäße. Die Gesamtblutprobe kann aber auch von einer geeigneten sterilen Spritzenröhre aufgenommen
werden, in der sich eine vorgegebene gemessene Menge eines geeigneten physiologischen Stabilisators und
eines Antikoagulationsmittels befindetj und zwar in Form eines
Dinatrium- oder Trikaliumsalzes des Chelatbildners EDTA (Äthylendiamintetraessigsäure), so daß sich unmittelbar
"EDTA"-Blut bildet, um die Leukozyten der Gesamtblutprobe physiologisch zu stabilisieren und eine Zusammenballung
der Erythrozyten zu verhindern. Die leukoadhäsiven phagozytischen und zusammenballenden Funktionen der phagozytischen
Leukozyten, die deren Kennzeichnung durch die sensibilisierten magnetischen Teilchen vorsehen, benötigen die
Gegenwart von freien positiven Ionen in der Form von Calcium- und Magnesiumionen. Zusätzlich zur Verhinderung der Koagulation
des Bluts hat die unmittelbare Bildung des EDTA-Bluts
zur Folge, daß die freien positiven Ionen durch das EDTA gebunden werden, so daß die Ionen in freier Form nicht mehr
verfügbar sind, demzufolge die leukoadhäsiven, phagozytischen und zusammenballenden Funktionen mit diesem Zeitpunkt
unterbunden werden. Dies bedeutet, daß bei Nichtzugabe des Chelatbildners in Form von Äthylendiamintetraessigsäure t
EDTA zur Gesamtblutprobe oder, als Alternative, bei Nichtvornahme einer aufwendigen und unbequemen Abkühlung der
Gesamtblutprobe auf eine tiefe Temperatur von demjenigen Zeitpunkt an, bei dem die Blutprobe dem Patienten entnommen
wird, bis zu demjenigen Zeitpunkt, bei dem die Lymphozyten
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von der Gesamtblutprobe entfernt werden* sollen, die leukoadhäsiven,
phagozytischen und zusammenballenden Funktionen der phagozytischen Leukozyten unkontrolliert auftreten, mit
dem Ergebnis, daß weiße Blutzellen zerstört werden und die Zellenlebensfähigkeit erheblich vermindert wird. Dadurch
tritt eine erhebliche Verunreinigung der Lymphozyten durch tote Zellen auf, die dann die nachfolgende Leukoadhäsion
und Phagozytose sperren, die notwendigerweise vorgenommen werden müssen, um gemäß der Erfindung die Lymphozytentrennung
mit einem hohen Grad an Reinheit, Ausbeute und Lebensfähigkeit durchzuführen. Als weitere Alternative kann es
sich bei dem physiologischen Stabilisator und dem Antikoagulationsmittel beispielsweise um die Natriumsalze der CHEL-DPTA-
und CHEL-DM-Säure handeln.
Die Trennung der Lymphozyten von dem EDTA-Blut wird durch
die Zugabe eines Trennungsraittels eingeleitet, das die folgenden Substanzen enthält, um ein Gesamtblutproben-Trennungsmittel-Gemisch
zu bilden:
(a) Magnetische Teilchen, beispielsweise Carbonyleisenteilchen, Ferritteilchen oder Magnetitteilchen mit .
einer Korngröße von 1 bis 4/um. Nach ihrer Aktivierung bzw. Sensibilisierung bewirken diese Teilchen die
Kennzeichnung der phagozytischen Leukozyten und damit deren nachfolgende magnetische Spülung in bezug auf die
Erythrozyten, das Blutplasma und die Lymphozyten, wobei von den letzten so wenig wie möglich eingefangen werden,
-(b) Freie Magnesium- und Calciumionen in Form von aufgelösten Salzen an Calciumchlorid und Magnesiumchlorid, die den
rlonengehalt des EDTA-Bluts auf seinen ursprünglichen
Wert zurückbringen, indem sie die positiven freien
.■ -· Ionen, die in der oben beschriebenen Weise durch die
Äthylendiamintetraessigsäure EDTA gebunden werden, ersetzen, um somit für die Leukoadhäsion und Phagozytoae
eine optimale Ionenkonzentration vorzusehen.
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(c) Eine geringe Menge eines geeigneten Antikoagulationsmittels
in Form von Heparin, um während der für die Lymphozytentrennung erforderlichen Zeit die Blutprobenzusammenballung
bzw. -gerinnung zu verhindern.
(d) Ein Sensibilisiermittel mit positiv geladenen Molekülen,
beispielsweise Von einer basischen Polyaminosäure oder Polypeptiden in Form der D-, DL- oder L-Arten von
Polylysin, Polyarginin, Polyornithin, Polycitrullin oder dgl., um die Leukoadhäsion und Phagozytose durch
Sensibilisierung oder Erhöhen der positiven Oberflächenladung an den magnetischen Teilchen durch Adsorption
zu erhöhen.
(e) Eine Dextroselösung zum Liefern von Energie für die Phagozytose.
(f) Eine isotonische Lösung in Form von Hanks BSS mit demselben
osmotischen Druck wie das Blutplasma, um für den Trennungsprozeß ein physiologisches Lösungsmedium bereitzustellen.
(g) Ein Sedimentierungsmittel für die roten Blutkörperchen mit einem Senkungsmittel von hohem Molekulargewicht,
beispielsweise in Form von Dextran, Ficoll, PHA oder dgl. in Kombination mit, beispielsweise, einer geringen
Menge des Mononatrium- oder Dinatriumsalzes der Äthylendiamintetraessigsäure EDTA, um die Erythrozytenabsenkung
zu fördern, und zwar dadurch, daß die Erythrozyten zur Zusammenballung veranlaßt werden und dadurch
leichter zum Boden des Gemischstroms absinken.
Die Trennung der Lymphozyten von der Gesamtblutprobe wird
dann durch Inkubation des sich ergebenden Gesamtblutproben-Trennungsmittel-Gemischs
vorgenommen, um durch Leukoadhäsion, Phagozytose und Zusammenballung die Kennzeichnung der
phagozytischen Leukozyten, und zwar praktisch unter Ausschluß
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der Lymphozyten, mit den sensibillsierten magnetischen
■Teilchen vorzunehmen. Die weitere Trennung geschieht durch
Zusammenballung, Absenkung und Entfernung, beispielsweise durch Dekantierung, des Hauptteils der Erythrozyten und
durch eine nachfolgende magnetische Spülung der in der obigen Weise gekennzeichneten phagozytxschen Leukozyten
und des Hauptanteils der Thrombozyten aus der Gesamtblutprobe.
In der Fig. 1 ist die Leukoadhäsion im einzelnen dargestellt. Dabei sind die magnetischen Teilchen mit 10, die
phagozytischen Leukozyten in Form von neutrophilen Granulozyten, Monozyten, eosinophilen Granulozyten oder basophilen
Granulozyten mit 12 und die Thrombozyten oder Blutplättchen mit 1.4 bezeichnet. Bei Anwesenheit der sensibili-
sierten magnetischen Teilchen 10 und der freien positiven
Ionen, die durch Zugabe von Calciumchlorid- und Magnesiumchloridlösungen erzeugt werden, werden die äußeren Zellwände
der phagozytischen Leukozyten klebrig und adhäsiv, so daß die magnetischen Teilchen 10 an ihnen haften bleiben.
In ähnlicher Weise verkl^tizi die Thrombozyten 14 sowohl
mit den Leukozyten 12 als auch mit den magnetischen Teilchen 10.
Die- sich daran anschließende Phagozytose ist in der Fig. 2
dargestellt. Dabei werden eins oder mehrere der sensibilisierten magnetischen Teilchen 10 durch die phagozytischen
Leukozyten 12 in Form von neutrophilen Granulozyten, Monozyten, eosinophilen Granulozyten oder basophilen Granulozyten
aufgenommen.
Die Kennzeichnung der phagozytisohen Leukozyten wird durch
die Leukozytenzusammenballung beendet, wie es in der Fig. dargestellt ist. Die Kennzeichnung umfaßt noch das Verkleben
der äußeren Zellwand eines phagozytischen Leukozyts in Form eines neutrophilen Granulozyts, Monozyts, eosinophilen
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Granulozyts oder basophilen Granulozyts mit der äußeren
Zellwand eines ähnlichen phagozytischen Leukozyts, das ein magnetisches Teilchen 10 aufgenommen hat. Wie es in der
Fig. .4 dargestellt ist, kann aber auch die äußere Zellwand eines phagozytischen Leukozyts in Form eines neutrophilen
Granulozyts oder Monozyts, das ein magnetisches Teilchen
aufgenommen hat und an dem durch. Leukoadhäsion noch ein -anderes
magnetisches Teilchen 10 klebt, mit der äußeren Zellwand eines eosinophilen oder basophilen Granulozyts verklebt
sein, an dem wiederum ein neutrophiles Granulozyt ; oder ein Monozyt haftet, mit dem durch Leukoadhäsion ein
weiteres magnetisches Teilchen 10 verklebt ist.
In der Fig. 5 ist ein erstes Ausführungsbeispiel einer erfindungsgemäßen
Vorrichtung dargestellt. Diese Vorrichtung dient zur schnellen und vollkommen automatischen Trennung
der Lymphozyten von aufeinanderfolgenden Gesamtblutproben
verschiedener Patienten, wobei die Vorrichtung "nach dem kontinuierlichen Ströraungsprinzip arbeitet. Die dargestellte
Vorrichtung enthält eine Zufuhreinrichtung 20 zum Zuführen
der Gesamtblutproben. Die Zufuhreinrichtung 20 kann in der gleichen Weise aufgebaut sein, wie es aus der US-PS
3 134 263 bekannt ist.
Die Zufuhreinrichtung 20 enthält einen Drehteller 22, auf
dem eine kreisförmige Reihe von Gesamtblutprobenbehältern 24 angeordnet ist. Eine Probenentnahmeeinrichtung 26 enthält
ein Probenentnahmerohr 28 und eine mit dem Probenentnahmerohr verbundene Betätigungseinrichtung 30. Ein Waschflüssigkeitsbehälter
32' ist neben dem Drehteller 22 angeordnet. Eine Antriebseinrichtung 34» dient, wie es durch
gestrichelte Linien angedeutet ist, zum Antrieb des Drehtellers -22 und der Probenentnahmerohrbetätigungseinrichtung
30. Jeder der Gesamtblutprobenbehälter ist mit einer
Gesamtblutprobe eines anderen Patienten gefüllt. Diese Gesamtblutproben sind, wie es oben beschrieben ist? mit
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Äthylendiamintetraessigsäure EDTA behandelt, so daß die
Probenbehälter EDTA-Blut enthalten.
Beim Betrieb der Vorrichtung wird der Drehteller 22 schrittweise weitergedreht, um die Blutprobenbehälter 24 nacheinander
dem * obenentnahmerohr 28 darzubieten. Das Probenentnähme
ro... wird dabei derart betätigt, daß sein Einlaßende zur'lwiist für eine vorgegebene Zeitspanne in den dargebotenen
Gesamtblutprobenbehälter eintaucht, um ein vorgegebenes
Blutprobenvolumen anzusaugen. Im Anschluß daran wird das Einlaßende des Probenentnahmerohrs durch die Umgebungsluft
zu dem Waschflüssigkeitsbehälter 32' geschwenkt, um für eine
vorgegebene Zeitspanne ein Umgebungsluftvolumen und im Anschluß daran ein vorgegebenes Volumen der Waschflüssigkeit
anzusaugen. Die Umgebungsluft und die Waschflüssigkeit dienen als Trennungs- und Reinigungsschübe. Danach wird das
Einlaßende des Probenentnahmerohrs wiederum durch die Umgebungsluft zu dem nächsten Blutprobenbehälter 24 geschwenkt,
um während einer vorgegebenen Zeitspanne ein weiteres Umgebungsluftvolumen
anzusaugen. Diesem Umgebungsluftvolumen folgt dann die aus dem nächsten Probenbehälter angesaugte
Blutprobe.
Auf diese Weise entsteht ein Fluidstrom aus aufeinanderfolgenden Gesamtblutproben mit vorgegebenem Volumen, die jeweils
durch einen Luftschub, einen Waschflüssigkeitsschub und einen weiteren Luftschub voneinander getrennt sind.
Eine Dosierpumpe 32, die beispielsweise den gleichen Aufbau haben kann, wie es aus der US-PS 3 227 001 bekannt ist, enthält
zusammendrückbare Pumpenschläuche 34, 35, 36 und 38,
die von mehreren nicht dargestellten Pumpenwalzen bei der Darstellung nach der Fig. 5 von links nach rechts fortschreitend
gleichzeitig zusammengedrückt werden, um in dieser Richtung Fluide durch die Pumpenschläuche zu pumpen.'
Die Beziehung der Durchflüsse durch die einzelnen Pumpen-
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schläuche hängt von dem Innendurchmesser der Pumpenschläuche ab.
Das Einlaßende des zusammendrückbaren Pumpenschlauchs 34 ist an das Auslaßende des Entnahmerohrs 28 angeschlossen.
Der Gesamtblutprobenstrom· wird daher von der Pumpe durch
den Pumpenschlauch 34 gepumpt.
Der Auslaß des zusammendrückbaren Pumpenschlauchs 34 ist mit
dem Einlaß 41 eines VerzweigungsStücks 39 verbunden. Das
Einlaßende des zusammendrückbaren Pumpenschlauchs 35 ist auf der linken Seite gegenüber der Atmosphäre offen, so daß
über diesen Schlauch Umgebungsluft angesaugt wird. Das Auslaßende des zusammendrückbaren Pumpenschlauchs 35 ist an
den anderen Einlaß 37 des Verzweigungsstücks 39 angeschlossen, um in dem Verzweigungsstück den Gesamtblutprobenstrom
mit der angesaugten Umgebungsluft zusammenzuführen. Dadurch werden Luftzwischenschübe gebildet, die die einzelnen Gesamtblutproben
und in ähnlicher Weise die einzelnen Waschflüssigkeitsschübe unterteilen.
Ein Behälter 40 enthält das bereits beschriebene Trennungsmittel mit den oben erwähnten Substanzen. Der Behälter 40
enthält also ein Gemisch aus magnetischen Teilchen, die durch die positiv geladene basische Polyaminosäure oder das
Polypeptid in einer Lösung aus Dextrose sensibilisiert sind, die in der folgenden Weise hergestellt werden kann. Eine
Lösung mit etwa 5% Dextrose in destilliertem Wasser wird mit der basischen Polyaminosäure oder dem Polypeptid in einem
Verhältnis von etwa 1 Gewichtsteil des letzten Stoffs zu etwa 10000 Gewichtsteilen des ersten Stoffs gemischt, um
etwa eine 0,01 %±ge Lösung der basischen Polyaminosäure in
der Dextroselösung zu bilden. Dazu werden dann etwa 100 Gewichtsteile der magnetischen Teilchen zugegeben. Da sich ergebende Gemisch wird beispielsweise bei etwa 4 0C für etwa ■
30 Minuten inkubiert und anschließend zentrifugiert, um die
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magnetischen Teilchen zu konzentrieren. Die überschüssige Flüssigkeit wird weggegossen, land die magnetischen Teilchen
in etwa 1OOOO Gewichtsteilen der Dextroselösung erneut suspendiert,
um schließlich eine Suspension zu erhalten, die sich in dem Behälter 40 befindet. Die beschriebene Inkubation
bewirkt die Adsorption der basischen Polyaminosäure oder des Polypeptide auf der Oberfläche der magnetischen
Teilchen, um diese durch Erhöhen der positiven Oberflächenladung zu sensibilisieren, um dadurch die oben beschriebene
Leukoadhäsion und Phagozytose zu verstärken, wozu die Dextrose die Energie liefert.
Weiterhin ist in dem Trennungsmittel in dem Behälter 40 eine isotonische Salzlösung aus einer Calciumchlorid- und Magnesiumchloridlösung
enthalten, die die zur Leukoadhäsion und Phagozytose notwendigen positiven freien Ionen liefern. Weiterhin
enthält der Behälter 40 Hanks BSS, um ein physiologisches Lösungsmittel bereitzustellen. Der Behälter 40 enthält eine weitere Menge der Dextroselösung, die geringe
Menge Heparin, das während der Lymphozytentrennung die Zusaramenballung
verhindert, und Ίι r. Sedimentierungsmittel»
das eine Kombination aus dem Erythrozytensenkungsmittel und den Mononatrium- oder Dinatriumsalzen der Äthylendiamintetraessigsäure
EDTA enthält, die den Trennungsprozeß nicht behindert.
Das Einlaßende des zusammendrückbaren Pumpenschlauchs 36 ist in den Behälter 40 eingetaucht. Das Trennungsmittel wird
in Richtung des eingezeichneten Pfeils durch diesen Pumpenschlauch gefördert.
Die Einlaßenden 52' und 54 eines Verzweigungsstücks 50 sind
in der gezeigten Weise an den Auslaß 53 des Verzweigungs-.Stücks 39 bzw. den Auslaß des zusämmendrückbaren Pumpenschlauchs
36 angeschlossen. Auf diese Weise werden in dem Verzweigungsstück 50 das aus dem Behälter 40 stammende Tr en-
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nungsmittel und die luftunterteilten Gesamtblutproben des Probenstroms aus den Probenbehältern 24 zusammengeführt.
Ein Dreiwegventil 47 befindet sich im Einlaßende 54 des
Verzweigungsstücks 50. Eine Rückleitung 49 verbindet das Ventil 47 mit dem das Trennungsmittel enthaltenden Behäl-·',
ter 40. In einer ersten Stellung des Ventils 47 verläuft der Strömungsweg durch das Einlaßende des Verzweigungs- .
Stücks. In einer zweiten Stellung des Ventils 47 verläuft
der Strömungsweg von dem zusammendrückbaren Pumpenschlauch 36 über die Rückleitung 49 zurück zum Behälter 40. Durch geeignete
Wahl der Innendurchmesser der zusammendrückbaren Pumpenschläuche 34, 36 und 38 kommen etwa 4 Volumenteile des
Trennungsraittels auf 1 Volumenteil des Gesamtblutprobenstroms in dem Verzweigungsstück 50.
Der Auslaß 55 des Verzweigungsstücks 50 ist an einen Inku- ■
batormischer 52 angeschlossen. In dem Inkubatorraischer 52 wird der Blutproben-Trennungsmittel-Gemischstrom vollkommen
durchmischt und inkubiert. Vorzugsweise wird der Inkubatormischer auf einer Inkubationstemperatur von etwa 37 0C gehalten.
Der Durchfluß des endgültigen Gemischs ist derart gewählt, daß die Verweilzeit des Gemischs in dem Inkubatormischer
etwa 30 Minuten beträgt. Während dieser Inkubationszeit
geschieht der Hauptanteil der Kennzeichnung der phagozytischen Leukozyten durch Leukoadhäsion der sensibilisierten
magnetischen Teilchen an den neutrophilen Granulozyten, Monozyten, eosinophilen Granulozyten und basophilen Granulozyten,
sowie der Hauptanteil der Phagozytose der sensibilisierten magnetischen Teilchen durch die phagozytischen
Leukozyten und der Zusammenballung der phagozy tischen Leukozyten.
Eine Sedimentierungseinrichtung 56 enthält eine Reihe von '
praktisch horizontal angeordneten Windungen einer Absetzschlange 58. Das Einlaßende 60 der Sedimentierungseinrichtung
56 ist an das Auslaßende des Inkubatormischers 52 an-
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■geschlossen, so daß der gemischte und inkubierte BlutprobenTrennungsmittel-Gemischstrom
durch die Sedimentierungseinrichtung strömt. Dadurch setzen sich die infolge des
Sedimentierungsmittels zusammengeballten Erythrozyten im unteren Teil des Gemischstroms ab. Weiterhin setzen sich in
dem unteren Teil des Stroms die gekennzeichneten phagozytischen Leukozyten ab, die infolge des Anhaftens der sensibilisierten
magnetischen Teilchen etwas schwerer und darüberhinaus mit einigen Thrombozyten zusammengeballt sind.
Wie gezeigt, befindet sich in der Auslaßleitung 61 der Sedimentierungseinrichtung
56 ein quer zur Strömungsrichtung verlaufendes Dekantierstück 59. Das Einlaßende des zusammendrückbaren
Pumpenschlauchs 38 ist an den Auslaß 63 des Dekantierstücks 59 angeschlossen, um daraus Fluide abzupumpen.
Wenn daher das einem Absetzvorgang unterworfene Blutproben-Trennungsmittei-Gemisch
durch die Auslaßleitung 61 der Sedimentierungseinrichtung 56 strömt, wird der Hauptanteil
der abgesetzten Erythrozyten zusammen mit einem Anteil der größeren gekennzeichneten Leukozytenklumpen und der
Thrombozyten über das Dekantierstück 59 und den angeschlossenen zusammendrückbaren Pumpenschlauch 38 aus dem Strom entfernt.
Der über das Dekantierstück 59 entfernte Anteil des Blutproben-Trennungsmittel-Gemischstroms kann beispielsweise
etwa'25 Vol.% des Gemischstromvolumens betragen.
Eine magnetische Lymphozytentrennungseinrichtung 62 enthält eine praktisch horizontal verlaufende Leitung 64 mit einem
Einlaß 66 und einem Auslaßnippel 68, der sich in der gezeigten Weise erstreckt. Das Auslaßende 70 der Auslaßleitung 61
der Sedimentierungseinrichtung ist an den Einlaß 66 der Leitung 64 angeschlossen, so daß durch die magnetische Trennungsöinrichtung
62 ein abgesetzter Strom aus einem Gemisch strömt, das gekennzeichnete phagozytische Leukozyten und
Thrombozyten, nicht gekennzeichnete Lymphozyten, Rest-Erythrozyten
und Blutplasma enthält.
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Die magnetische Trennungseinrichtung 62 enthält weiterhin eine Magneteinrichtung 76, beispielsweise in Form eines
Stern-Gurlach-Magneten mit Magnetteilen 80 und 82, die in
der gezeigten Yfeise oberhalb und unterhalb der praktisch
horizontal verlaufenden Leitung 64 angeordnet sind. Die Magneteinrichtung 76 erzeugt ein praktisch senkrecht gerichtetes
Magnetfeld, das die Leitung"64 durchsetzt, wie es in
der Fig. 6 durch gestrichelte Linien angedeutet ist. Das Magnetfeld hat einen hohen Feldgradienten, ist also nicht
gleichförmig.
Y/enn die Gemischstromschübe durch die Leitung 64 strömen,
werden infolge des höheren Magnetfeldgradienten im unteren Leitungsteil die gekennzeichneten phagozytischen Leukozyten
nach unten gezogen, so daß eine solche Gesamtleukozytenverteilung entsteht, daß im oberen Abschnitt jedes Schubs
ein wesentlich höherer Prozentsatz an Lymphozyten als im unteren Abschnitt jedes Schubs enthalten ist. Jedes Gemischstromsegment
wird demzufolge in einen unteren Schubanteil mit gekennzeichneten phagozytischen Leukozyten und Thrombozyten
sowie vielen Resterythrozyten und in einen oberen Schubanteil 86 geteilt, der übermäßig viele nicht gekennzeichnete
lebende Lymphozyten und sehr wenig Resterythrozyten enthält.
Demzufolge, und weil der unterteilte Strom immer noch unter dem Einfluß der Magneteinrichtung 76 steht, wird praktisch
der gesamte obere Schubanteil 86 jedes Stromsegments über den Auslaßnippel 68 mittels einer Pumpe 87' abgesaugt, während
der Rest des unterteilten Stroms, wie es gezeigt ist, durch das Auslaßende der Leitung 64 strömt.·
Das ungleichförmige Magnetfeld mit dem hohen Feldgradienten verhindert eine Brückenbildung der magnetischen Teilchen
oder dgl., so daß die magnetischen Teilchen oder Blutzellen in der Leitung 64 nicht eingefangen werden, wodurch die .
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Trennungsausbeute erhöht wird.
Derjenige Anteil jedes Schubs, der über den Auslaßnippel 68 abgesaugt wird, enthält in Suspension in dem Blutplasma
einen sehr hohen Prozentsatz der lebenden Lymphozyten der betreffenden Gesamtblutprobe, und zwar infolge der erzwungenen
Wanderung der gekennzeichneten phagozytischen Leukozyten zum Boden der Leitung 64, was, wie beschrieben, auf die
Wirkung des praktisch vertikal ausgerichteten ungleichförmigen Magnetfelds mit dem hohen Feldgradienten der Magneteinrichtung
76 zurückzuführen ist. Weiterhin enthält der über den Ablaßnippel 68 abgesaugte Anteil eine äußerst geringe
Restmenge an Erythrozyten von der Gesamtblutprobe, was darauf zurückzuführen ist, daß ein Großteil der Erythrozyten
bereits über das Dekantierstück 59 abgeführt worden ist, und viele der Resterythrozyten von den gekennzeichneten phagozytischen
Leukozyten eingefangen sind. Die verbleibenden Resterythrozyten sind in dem Blutplasma suspendiert. Das
Aufsammeln der Lymphozyten-Erythrozyten-Plasmasuspension wird für jede Gesamtblutprobe eines Probenbehälters 24 des
Drehtellers 22 unabhängig vorgenommen, und zwar beispielsweise durch Anordnung und Betätigung eines zweiten Drehtel-.
lers 87 mit einer kreisförmigen Reihe von Suspensionssammelbehältern
88. Der Drehteller 87 ist wie gezeigt am Auslaßende des Auslaßnippels 68 angeordnet. Für jede Gesamtblutprobe
ist ein getrennter Sammelbehälter vorgesehen. Der Drehteller 87 wird in Abhängigkeit von der Strömung der Lymphoz/ten-Erythrozyten-Plasmasuspension
von einer Antriebseinrichtung 89 schrittweise weitergeschaltet. Dieses Weiterschalten
erfolgt bezüglich des Auslaßendes des Auslaßnippels derart, daß die einzelnen Suspensionen unabhängig und getrennt
voneinander aufgesammelt werden. Zum unabhängigen Aufsammeln der interessierenden Lymphozyten-Erythrozyten-Plasmasuspensionen
kann man auch andere verschiedenartige Sam- . meleinrichtungen vorsehen.
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Die Trennung der Lymphozyten von jeder der in obiger Weise
aufgesammelten Lymphozyten-Erythrozyten-Plasmasuspensionen,
die eine geringe Menge von Verunreinigungszellen in Form von Thrombozyten, eosinophilen Granulozyten und bzw. oder
basophilen Granulozyten enthalten können, kann in jedem Fall.
mit einem hohen Wirkungsgrad durch einfache Hämolyse und anschließender Lymphozytenauswaschung sowie durch Wiedersuspension
in an sich bekannter Weise vorgenommen werden.
Dem durch die magnetische Trennungseinrichtung 62 strömenden
luftsegmentierten Gemisch aus dem Trennungsmittel und jeder Gesamtblutprobe eines Behälters 24 folgt ein luftunterteilter
Waschflüssigkeitsschub vom Behälter 32, der irgendwelche
Rückstände der vorangegangenen Probe in dem Leitungssystem der Vorrichtung entfernt und dadurch eine Verseuchung
der nachfolgenden Blutprobe durch die vorangegangene verhindert. Wenn die Waschflüssigkeit durch die. Vorrichtung
strömt, wird das Ventil 47 in seine zweite Stellung gebracht, um das aus dem Behälter 40 angesaugte Trennungsmittel in den
Behälter zurückzuführen. Dadurch wird zum einen die Wirksamkeit
des Auswaschens erhöht, und zum anderen der Trennungsmittelverbrauch so gering wie möglich gehalten. Weiterhin
wird, wenn der luftunterteilte Waschflüssigkeitsschub durch die magnetische Trennungseinrichtung 62 strömt,- das
die Leitung 64 durchsetzende magnetische Feld der magnetisehen
Trennungseinrichtung 62 abgeschaltet. Dies kann dadurch
geschehen, daß die Erregung von den Magneten abgeschaltet oder die Leitung 64 zwischen den Magneten herausbewegt
wird, Auf diese Weise wird eine höhere Wirksamkeit des Auswaschvorganges erzielt, und zwar dadurch, daß die restlichen
magnetischen Teilchen sowie roten Blutkörperchen und weißen Blutzellen, die gekennzeichnet sein können, leichter,
von dem luftunterteilten Waschflüssigkeitsschub mitgenommen werden können.
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Eine weitere Ausführungsform der magnetischen Trennungseinrichtung,
die in Verbindung mit der Probenzufuhreinrichtung 20, der Pumpe 32, dem. Inkubatormischer ξ>2 und der
Sedimentierungseinrichtung 56, die alle in der Fig. 5 dargestellt sind, verwendet werden kann, ist in der Fig.
gezeigt. Diese magnetische Trennungseinrichtung 90 enthält eine Leitung 92, deren Einlaß in der gezeigten Weise an die
Auslaßleitung 61 der Sedimentierungseinrichtung angeschlossen ist. Am Ende der Leitung 92 ist eine Entgasungseinrichtung
94 angebracht, die aus dem unterteilten Gesamtblutprobensuspensionsstrom
die Gase bzw. Luftschübe entfernt.
Ein Trennungskammergehäuse 96 bildet eine Trennungskammer 98, die praktisch senkrecht unter dem Ende der Leitung
angeordnet ist.. Eine Lymphozytenauslaßleitung Ί02 und eine Abflußleitung 100 sind in der gezeigten V/eise am oberen
und unteren Ende der Trennungskammer 98 angeordnet.
Ein zentrisches Rohr 103 erstreckt sich vom Ende der Lei-'tung-92
mittig in die Trennungskammer 98. Das zentrische Rohr 103 endet, wie gezeigt, in einer begrenzten Öffnung
104, deren Umgebung durch ein ungleichmäßiges magnetisches Feld mit einem hohen Feldgradienten eines Magneten 106
magnetisiert ist, der in der gezeigten Weise unmittelbar unter der Öffnung 104 in dem Trennungskammergehäuse 96
angeordnet ist.
Beim Betrieb ist zunächst zur Trennung der Lymphozyten eines segmentierten Gesamtblutprobengemischs des Blutprobenstroms
die Abflußleitung 100 durch ein Ventil 108 abgesperrt. Wenn der segmentierte bzw. unterteilte Probenstrom
von der Sedimentierungseinrichtung 56 (Fig. 5) über die Leitung 61 zu der Trennungseinrichtung 90 gepumpt wird,
werden zunächst von der Entgasungseinrichtung 94 die trennenden Lufteinschübe entfernt. Der sich dabei ergebende
kontinuierliche Gemischstrom der interessierenden Gesamt-
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— 99 —
blutprobe fließt dann durch das zentrische Rohr 103 nach unten und durch die magnetische Öffnung 104 hindurch in ,
die Trennungskammer 98, um diese zu füllen. Dabei werden die gekennzeichneten phagozytischen Leukozyten, Thrombozyten
und viele der restlichen Erythrozyten im unteren Teil 84 der Trennungskammer 98 zurückbehalten, und zwar infolge
des darin herrschenden ungleichförmigen Magnetfelds,das in geeigneter Weise polarisiert ist, um die suspendierten magnetischen
Teilchen anzuziehen. Die nicht gekennzeichneten Lymphozyten sowie ein Teil der Erythrozyten und das Blutplasma
steigen in den oberen Teil 86 der Trennungskammer auf und strömen von dort zum Aufsammeln über die Lymphozytenauslaßleitung
102 ab.
Wenn der interessierende Gesamtblutprobengemischstrom durch die magnetische Trennungseinrichtung 90 beendet ist und jetzt
der'erste zwischen zwei Proben befindliche Luftschub, der
Waschflüssigkeitsschub und der zweite Luftschub auftreten, bleibt das Ventil 108 zunächst geschlossen, um den oberen
Teil der Trennungskammer 98 und die Lymphozytenauslaßleitung 102 vollständig auszuwaschen. Im Anschluß daran wird
das Ventil 108 geöffnet, so daß jetzt der Zugang zur.Abflußleitung
100 frei ist. Ferner wird das Magnetfeld abgeschaltet. Die im unteren Teil der Trennungskammer 98 eingefangenen
gekennzeichneten phagozytischen Leukozyten sowie ein großer Teil der Thrombozyten und Erythrozyten werden
nun ausgewaschen und über die Abflußleitung 100 abgeführt. Dadurch wird die Trennungskammer für die nächste Lymphozytentrennung
vorbereitet.
Das Aufsammeln der resultierenden Lymphozyten-Erythrozyten-Plasmasuspension
und die hochwirksame Trennung der Lymphozyten aus dieser Suspension kann in der gleichen V/eise vorgenommen
werden, wie es im Zusammenhang mit der in der Fig. 5 dargestellten magnetischen Trennungseinrichtung 62
beschrieben ist.
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Die tatsächliche Anwendung" des Verfahrens der Erfindung zum
Trennen der Lymphozyten aus Gesamtblutproben erweist sich als äußerst wirkungsvoll, wobei eine bisher unerreichte Kombination
von etwa 97% Reinheit, etwa 80% Ausbeute und etwa
99% Lebensfähigkeit erzielt wird.
Obwohl hier die äußerst wirksame Trennung der Lymphozyten aus einer Reihe von Gesamtblutproben geringen Volumens
von verschiedenen Patienten beschrieben ist, kann man das Verfahren und die Vorrichtung nach derErfindung gleichermaßen
zur Trennung der Lymphozyten aus einer Gruppe einer verhältnismäßig großvolumigen Kombination von Gesamtblutproben
verschiedener Patienten verwenden, was von der Art der Verwendung der getrennten gewonnenen Lymphozyten abhängt.
Weiterhin können die verschiedenen Trennungsmittelsubstanzen in mehreren getrennten Behältern untergebracht sein.
Die Substanzen können automatisch unter Verwendung von weiteren zusammendrückbaren Pumpenschläuchen und entsprechenden
Verzweigungsstücken in vorgegebenen Verhältnissen gemischt werden. Ferner kann man das interessierende Lymphozyten-Erythrozyten-Plasraa
noch einmal durch die Vorrichtung strömen lassen, um eine noch größere Reinheit zu erzielen.
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Claims (1)
- Patentansprüche1. Verfahren zum Trennen der Lymphozyten von einer Blutprobe, dadurch gekennzeichnet, daß die Blutprobe -mit einem sensibilisierte magnetische Teilchen enthaltenden Trennungsmittel gemischt wird, daß das Blutproben-Trennungsmittel-Gemisch einem Inkubationsvorgang unterzogen wird, wobei die Leukozyten der Blutprobe, mit Ausnahme der Lymphozyten, von den magnetischen Teilchen durch Leukoadhäsion, Phagozytose und Zusammenballung gekennzeichnet werden, und daß das inkubierte Blutproben-Trennungsmittel-Gemisch einem magnetischen Feld ausgesetzt wird, in dem die Lymphozyten von den gekennzeichneten Leukozyten getrennt werden.2. Verfahren nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, · daß die Blutprobe vor dem Mischen mit dem Trennungsmittel zur physiologischen Stabilisierung mit einem physiologischen Stabilisierungsmittel gemischt wird, das eine Zusammenballung verhindert und die freien positiven Ionen der Blutprobe bindet, um dadurch Leukoadhäsion und Phagozytose zu unterbinden.3. Verfahren nach Anspruch 2,
dadurch gekennzeichnet, daß das physiologische Stabilisierungsmittel ein Chelatbildner ist.4. Verfahren nach Anspruch 3,
dadurch gekennzeichnet, daß der Chelatbildner Athylendiamintetraessigsäure (EDTA) ' ist.2 0 9 b 1 6 / ", ο G C5. Verfahren nach Anspruch 3,
dadurch gekennzeichnet, daß der Chelatbildner ein Dinatrium- oder Trikaliumsalz der Äthylendiamintetraessxgsäure (EDTA) ist.6. Verfahren nach Anspruch 3,
dadurch gekennzeichnet, daß als Chelatbildner Natriumsalze der CHEL-DPTA- oder CHEL-DM-Säure verwendet werden.7. Verfahren nach Anspruch 3,
dadurch gekennzeichnet, daß der Chelatbildner praktisch gleichzeitig mit der ■ Blutprobenentnahme vom Patienten der Gesamtblutprobe beigemengt wird.8. Verfahren nach Anspruch 2,
dadurch gekennzeichnet, daß das Trennungsmittel freie Magnesium- und Calciumionen enthält, die die durch das physiologische Stabilisierungsmittel gebundenen freien positiven Ionen er- . setzen und dadurch in der Blutprobe einen solchen lonengehalt wiederherstellen, daß Leukoadhäsion und Phagozytose ermöglicht werden.9. Verfahren nach Anspruch 8,
dadurch gekennzeichnet, daß das Trennungsmittel ein Antikoagulationsmittel enthält, das während der Lymphozytentrennung die Blutzusammenballung verhindert.'10. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß eine Gesamtblutprobe vorliegt und das Trennungsmittel ein Erythrozytensedimentierungsmittel enthält, das die Zusammenballung und das Absetzen der Erythrozyten fördert,209816/1800und daß, bevor das inkubierte Gemisch dem magnetischen Feld ausgesetzt wird, das Blutproben-Trennungsmittel-Gemisch einem Sedimentierungsvorgang unterzogen wird, um die Zusammenballung und das Absetzen der Erythrozyten zu fördern, und der Hauptanteil der abgesetzten Erythrozyten dem Gemisch entzogen wird.11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß das Sedimentierungsmittel ein Gemisch aus einem Absetzmittel und einem Chelatbildner ist.12. Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei dem Chelatbildner des Sedimentierungsmittels um Äthylendiamintetraessigsäure (EDTA) handelt.13. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die magnetischen Teilchen durch Erhöhen ihrer positiven Oberflächenladung sensibilisiert werden.14. Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß die positive Ladung an der Oberfläche der magnetischen Teilchen durch Adsorption einer basischen Polyaminosäure erhöht wird.15. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei der basischen Polyaminosäure um die D-, DL- oder L-Konfiguration von Polylysin, Polyarginin, Polyornithin oder PolycitruHin handelt.209816/160016. Verfahren nach Anspruch 13,.
dadurch gekennzeichnet, daß die positive Ladung an der Oberfläche der magnetischen Teilchen durch Adsorption eines Polypeptids erhöht wird.17. r Verfahren nach Anspruch 16,"
dadurch gekennzeichnet, daß--das Polypeptid ein Polylysin ist.18. Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß eine Mischeinrichtung (50) die ihr zugeführte Blutprobe mit dem ihr zugeführten Trennungsmittel mischt, daß eine sich daran anschließende Inkubationseinrichtung (52) das Blutproben-Trennungsmittel-Gemisch inkubiert und daß eine magnetische Trennungseinrichtung (62; 90) die gekennzeichneten Leukozyten von den Lymphozyten in dem durch sie geleiteten inkubierten Blutproben-Trennungsmittel-Gemisch trennt.19. Vorrichtung nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, daß im Falle einer Gesamtblutprobe vor der magnetischen Trennungseinrichtung (62; 90) eine Erythrozytensedimentierungseinrichtung (56) und eine Erythrozytenabfuhreinrichtung (59, 63) angeordnet sind, die unter der Einwirkung eines in dem Trennungsmittel enthaltenen Erythrozytensedimentierungsmittel die Zusammenballung und das Absetzen der Erythrozyten bewirken und den größten Teil der abgesetzten Erythrozyten aus dem Gemisch abführen.209816/160020. Vorrichtung nach Anspruch 18 oder 19, dadurch gekennzeichnet, daß die magnetische Trennungseinrichtung eine praktisch horizontal angeordnete Leitung (64) und einen Magneten (80, 82) enthält, der ein praktisch senkrecht ausgerichtetes ungleichförmiges Magnetfeld erzeugt, das die Leitung durchsetzt, wobei eine Brückenbildung von magnetischen Teilchen und eine Ablagerung dieser Teilchen oder von Blutzellen in der Leitung vermieden werden.21.. Magnetische Teilchen zur Verwendung bei dem Verfahren nach Anspruch 1 zum Kennzeichnen der phagozytischen Leukozyten der Blutprobe,
dadurch gekennzeichnet, daß die Teilchen durch Erhöhen ihrer positiven Oberflächenladung sensibilisiert sind.22. Suspension magnetischer Teilchen zur Verwendung bei dem Verfahren nach Anspruch 1 zum Kennzeichnen der Leukozyten der Blutprobe,dadurch gekennzeichnet, daß die Suspension eine basische Polyaminosäure enthält, die durch Adsorption an den magnetischen Teilchen angelagert ist und dadurch die magnetischen Teilchen durch Erhöhen ihrer positiven Oberflächenladung sensibilisiert.23. Suspension magnetischer Teilchen zur Verwendung bei dem Verfahren nach Anspruch 1 zum Kennzeichnen der Leukozyten der Blutprobe,dadurch gekennzeichnet, daß die Suspension ein Polypeptid enthält, das durch Adsorption an- den magnetischen Teilchen angelagert ist und dadurch die magnetischen Teilchen durch Erhöhen ihrer positiven Oberflächeniadung sensibiiisiert.2C981 6/ 1 60024. Sediraentierungsmittel zur Verwendung bei dem Verfahren nach Anspruch 1 zum Zusammenballen und Absenken der Erythrozyten der Blutprobe,dadurch gekennzeichnet, daß das Sedimentierungsmittel ein Geraisch aus einem Absetzmittel und Äthylendiamintetraessigsäure (EDTA) enthält.25. Physiologisches Stabilisierungsmittel zur Verwendung bei dem Verfahren nach Anspruch 1 zur Stabilisierung der Blutprobe vor dem Trennen der Lymphozyten, dadurch gekennzeichnet, daß das Stabilisierungsmittel ein Dinatrium- oder Trikaliumsalz der Äthylendiamintetraessigsäure (EDTA) enthält.26. Physiologisches Stabilisierungsmittel zur Verwendung bei dem Verfahren nach Anspruch 1 zum Stabilisieren der Blutprobe vor dem Trennen der Lymphozyten, dadurch gekennzeichnet, daß das Stabilisierungsmittel Natriumsalze der CHEL-DPTA- oder CHEL-DM-Säure enthält.27. Trennungsmittel zur Verwendung bei dem Verfahren nach Anspruch 1 zum Trennen der Lymphozyten von einer physiologisch stabilisierten Gesamtblutprobe durch Kennzeichnen der phagozytischen Leukozyten der Blutprobe, mit Ausnahme der Lymphozyten, infolge Leukoadhäsion, Phagozytose und Zusamraenballung sowie durch Aggregation und Absenkung der Erythrozyten der Blutprobe, gekennzeichnet· durch in einem Sensibilisierungsmittel suspendierte magnetische Teilchen, wobei das Sensibilisierungsmittel durch Adsorption an den magnetischen Teilchen haftet und die magnetischen Teilchen durch Erhöhen ihrer positiven Oberflächenladung sensibilisiert, um das Kennzeichnen der209816/1600phagozytischen Leukozyten durch diese magnetische Teilchen infolge Leukoadhäsion, Phagozytose und Zusammenballung zu fördern, durch eine Lösung mit freien Magnesium- und Calciumionen, um in der physiologisch stabilisierten Gesamtblutprobe^ einen derartigen Ionengehalt wiederherzustellen, daß Leukoadhäsion, Phagozytose und Zusammenballung stattfindet, und durch ein Sedimentierungsmittel, um die Aggregation und das Absetzen der Erythrozyten zu bewirken.28. Trennungsmittel nach Anspruch 27, gekennzeichnet durch eine isotonische Lösung, die ein physiologisches Lösungsmittel zur Lymphozytentrennung darstellt, und durch eine .Energie abgebende Lösung, die die Energie für die Phagozytose liefert.29. Trennungsmittel nach Anspruch 28, gekennzeichnet durch ein Antikoagulationsmittel, das während der Lymphozytentrennung die Gerinnung der Blutprobe verhindert.30. Trennungsmittel nach Anspruch 27, dadurch gekennzeichnet, daß "das Sensibilisierungsmittel eine basische Polyaminosäure ist.31. Trennungsmittel nach Anspruch 27, dadurch gekennzeichnet, daß das Sensibilisierungsmittel ein Polypeptid ist.32. Trennungsmittel nach Anspruch 30, dadurch gek. ennzeichnet, daß die basische Polyaminosäure ein Poly-L-Lysin, PoIy-BL-Lysin, Poly-D-Lysin und bzw. oder Polyarginin ist.209816/160033. Trennungsmittel nach Anspruch 31, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei dem Polypeptid um ein Polybren handelt.34. Trennungsmittel nach Anspruch 28, dadurch gekennzeichnet,-daß das Sedimentierungsmittel ein Absetzmittel und Äthylendiamintetraessigsäure (EDTA) enthält.209816/1600Leerseite
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US7991370A | 1970-10-12 | 1970-10-12 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2150581A1 true DE2150581A1 (de) | 1972-04-13 |
DE2150581B2 DE2150581B2 (de) | 1980-12-04 |
DE2150581C3 DE2150581C3 (de) | 1981-10-22 |
Family
ID=22153605
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE2150581A Expired DE2150581C3 (de) | 1970-10-12 | 1971-10-11 | Verfahren und Vorrichtung zum Abtrennen der Lymphozyten aus einer Blutprobe |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US3700555A (de) |
JP (1) | JPS5727421B1 (de) |
AU (1) | AU452017B2 (de) |
BE (1) | BE772462A (de) |
CA (1) | CA957980A (de) |
CH (1) | CH553409A (de) |
DE (1) | DE2150581C3 (de) |
FR (1) | FR2120670A5 (de) |
GB (1) | GB1341509A (de) |
IT (1) | IT961514B (de) |
NL (1) | NL168431C (de) |
SE (1) | SE373212B (de) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2656317A1 (de) * | 1976-12-11 | 1978-06-22 | Kernforschungsanlage Juelich | Verfahren zur herstellung einer masse von in einer physiologischen loesung suspendierten beladenen zellen |
WO1978000005A1 (en) * | 1977-06-02 | 1978-12-07 | K H Mosbach | Magnetic polymer particles |
Families Citing this family (30)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3709791A (en) * | 1971-04-13 | 1973-01-09 | Technicon Instr | Method and apparatus for lymphocyte separation from blood |
GB1575805A (en) * | 1976-03-12 | 1980-10-01 | Technicon Instr | Automatic diagnostic apparatus |
US4508625A (en) * | 1982-10-18 | 1985-04-02 | Graham Marshall D | Magnetic separation using chelated magnetic ions |
US4731239A (en) * | 1983-01-10 | 1988-03-15 | Gordon Robert T | Method for enhancing NMR imaging; and diagnostic use |
US4487700A (en) * | 1983-02-18 | 1984-12-11 | Technicon Instruments Corporation | Method and apparatus for separating lymphocytes from anticoagulated blood |
US4672040A (en) * | 1983-05-12 | 1987-06-09 | Advanced Magnetics, Inc. | Magnetic particles for use in separations |
US4554088A (en) * | 1983-05-12 | 1985-11-19 | Advanced Magnetics Inc. | Magnetic particles for use in separations |
US4508821A (en) * | 1983-07-05 | 1985-04-02 | Becton Dickinson And Company | Detection of white cell associated bacteria with a fluorescent dye |
PT81498B (pt) * | 1984-11-23 | 1987-12-30 | Schering Ag | Processo para a preparacao de composicoes para diagnostico contendo particulas magneticas |
GB2170736B (en) * | 1984-12-19 | 1988-02-03 | Bio Separation Ltd | Process for magnetic separation of metals from aqueous media |
US4664796A (en) * | 1985-09-16 | 1987-05-12 | Coulter Electronics, Inc. | Flux diverting flow chamber for high gradient magnetic separation of particles from a liquid medium |
US4752563A (en) * | 1985-11-19 | 1988-06-21 | Coulter Corporation | Monoclonal antibody for recovery of leukocytes in human peripheral blood and method of recovery employing said monoclonal antibody |
US5069216A (en) * | 1986-07-03 | 1991-12-03 | Advanced Magnetics Inc. | Silanized biodegradable super paramagnetic metal oxides as contrast agents for imaging the gastrointestinal tract |
US5219554A (en) * | 1986-07-03 | 1993-06-15 | Advanced Magnetics, Inc. | Hydrated biodegradable superparamagnetic metal oxides |
DE3720844A1 (de) * | 1987-06-24 | 1989-01-05 | Stefan Miltenyi | Trennsaeule fuer die magnetische separierung von zellen, zellaggregaten, und zellulaeren bestandteilen |
US6013531A (en) * | 1987-10-26 | 2000-01-11 | Dade International Inc. | Method to use fluorescent magnetic polymer particles as markers in an immunoassay |
US4994192A (en) * | 1990-01-16 | 1991-02-19 | Eastman Kodak Company | Amine polymers as coagulator accelerators in blood phase separation |
US5693784A (en) * | 1994-09-19 | 1997-12-02 | Promega Corporation | Methods for creating agglomerates from colloidal particles |
US5567326A (en) * | 1994-09-19 | 1996-10-22 | Promega Corporation | Multisample magnetic separation device |
US5646263A (en) * | 1994-09-19 | 1997-07-08 | Promega Corporation | High efficiency method for isolating target substances using a multisample separation device |
WO2007079149A2 (en) | 2005-12-28 | 2007-07-12 | The General Hospital Corporation | Blood cell sorting methods and systems |
EP2306959A2 (de) * | 2008-07-11 | 2011-04-13 | The General Hospital Corporation | Magnetvorrichtung für bluttrennung |
DE102009043537B4 (de) * | 2009-09-30 | 2012-03-22 | Siemens Aktiengesellschaft | Verfahren und Anordnung zur Bestimmung von Zell-Vitalitäten |
US9376709B2 (en) * | 2010-07-26 | 2016-06-28 | Biomatrica, Inc. | Compositions for stabilizing DNA and RNA in blood and other biological samples during shipping and storage at ambient temperatures |
DK2597153T3 (en) | 2011-11-25 | 2016-12-05 | Miltenyi Biotec Gmbh | Method for cell separation |
US9636690B2 (en) * | 2013-06-03 | 2017-05-02 | Douglas S. De Lange | Gravity recovery system and method for recovery of heavy metals from sands and gravels |
US9114403B1 (en) * | 2013-06-03 | 2015-08-25 | Douglas Scott de Lange | Gravity recovery system and method for recovery of heavy metals from sands and gravels |
EP3942931A1 (de) | 2014-06-10 | 2022-01-26 | Biomatrica, INC. | Stabilisierung von thrombozyten bei umgebungstemperatur |
CN108700498B (zh) | 2015-12-08 | 2021-07-13 | 生物马特里卡公司 | 降低红细胞沉降速率 |
ES2802453T3 (es) * | 2016-03-24 | 2021-01-19 | Allflex Europe Sa | Uso de una composición acuosa para la disolución de biomoléculas de una muestra de tejido |
-
1970
- 1970-10-12 US US79913A patent/US3700555A/en not_active Expired - Lifetime
-
1971
- 1971-09-03 CA CA122,100A patent/CA957980A/en not_active Expired
- 1971-09-10 BE BE772462A patent/BE772462A/xx not_active IP Right Cessation
- 1971-09-17 AU AU33607/71A patent/AU452017B2/en not_active Expired
- 1971-10-08 SE SE7112778A patent/SE373212B/xx unknown
- 1971-10-08 GB GB4694971A patent/GB1341509A/en not_active Expired
- 1971-10-11 NL NLAANVRAGE7113902,A patent/NL168431C/xx not_active IP Right Cessation
- 1971-10-11 DE DE2150581A patent/DE2150581C3/de not_active Expired
- 1971-10-11 CH CH1482771A patent/CH553409A/de not_active IP Right Cessation
- 1971-10-11 JP JP7952771A patent/JPS5727421B1/ja active Pending
- 1971-10-12 IT IT7129811A patent/IT961514B/it active
- 1971-10-12 FR FR7136578A patent/FR2120670A5/fr not_active Expired
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
NICHTS ERMITTELT * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2656317A1 (de) * | 1976-12-11 | 1978-06-22 | Kernforschungsanlage Juelich | Verfahren zur herstellung einer masse von in einer physiologischen loesung suspendierten beladenen zellen |
WO1978000005A1 (en) * | 1977-06-02 | 1978-12-07 | K H Mosbach | Magnetic polymer particles |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS5727421B1 (de) | 1982-06-10 |
GB1341509A (de) | 1973-12-25 |
BE772462A (fr) | 1972-03-10 |
NL7113902A (de) | 1972-04-14 |
IT961514B (it) | 1973-12-10 |
NL168431B (nl) | 1981-11-16 |
US3700555A (en) | 1972-10-24 |
CA957980A (en) | 1974-11-19 |
AU452017B2 (en) | 1974-09-05 |
DE2150581B2 (de) | 1980-12-04 |
SE373212B (de) | 1975-01-27 |
AU3360771A (en) | 1973-03-22 |
CH553409A (de) | 1974-08-30 |
NL168431C (nl) | 1982-04-16 |
FR2120670A5 (de) | 1972-08-18 |
DE2150581C3 (de) | 1981-10-22 |
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