DE1810823A1 - Verfahren zur Reinigung von Labfermenten aus Mikroorganismen - Google Patents
Verfahren zur Reinigung von Labfermenten aus MikroorganismenInfo
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Description
Verfahren zur Reinigung von Labfermenten aus Mikroorganismen
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Reinigung von Labpräparaten
aus Mikroorganismen durch Entfernung von verunreinigenden Begleitstoffen, insbesondere unspezifischen Enzymen mittels
eines Absorptionsmittels.
Das Lab natürlichen Ursprungs, (öhymosin) Rennin (IUB 3.4.
4.3), das auch als Milchgerinnungsenzym bezeichnet wird, wird aus dem vierten Magen von saugenden Kälbern gewonnen. Wegen des
Mangels an Ausgangsmaterial zur Herstellung von Rennin wurden weitläufige Untersuchungen auf die Gewinnung eines Ersatzstoffs
als Ausgangsmaterial gerichtet. Es ist seit langem bekannt, dass proteolytische Enzyme die Milch gerinnen lassen. Bekannte Beispiele
derartiger Enzyme sind Pepsin, Chymotrypsin, Papain sowie proteolytische von Bakterien gebildete Enzyme, wie sie z,B.
von Pseudomonas fluorescens und Bacillus subtilis hervorgebracht werden.
Bei der Käseherstellung wird jedoch nur in manchen Fällen Pepsin verwendet, weil die genannten proleolytischen Enzyme auch
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eine starke proteolytische Wirkung entfalten, was natürlich unerwünscht
ist·
Die Entdeckung einer Anzahl von Mikroorganismen, die ein Milchgerinnungsenzym hervorbringen, das im folgenden als Lab aus
Mikroorganismen bezeichnet werden soll, wobei das Enzym eine sehr geringe profceolytische Wirksamkeit besitzen soll, ist daher von
sehr grosser Bedeutung. Es ist bekannt, dass Labfermente eine
spezifische proteolytische Wirksamkeit hinsichtlich des Schutzkolloids X-Casein besitzen und nach der Verdauung des Schutzkolloids
das Milchcasein gerinnen lassen. Die Herstellung von Labfermenten aus Mikroorganismen ist in der britischen Patentschrift
970 331 und der USA-Patentschrift 3 275 453 beschrieben» Solche Mikroorganismen finden sich unter den Gattungen Mucor,
Rhizopus, Monascus, Colletrichum und Endothia<» Die praktische
Anwendung dieser Enzyme bei der Käsebereitung anstelle von Labferment
tierischen Ursprungs ist von grosser Bedeutung. E3 ergab
sich, dass die Verwendung eines kristallinen Labs aus Mikroorganismen die Herstellung von Käse guter Qualität erlaubt«,
Obwohl die proteolytische Wirksamkeit von Lab aus Mikroorganismen fast zu vernachlässigen ist, zeigte sich in der Praxis,
dass das Lab trotzdem etwas mit- unerwünschten proteolytischen. ".
Enzymen verunreinigt sein kann, die auch die Caseine der geronnenen
Milch zersetzen. Es gibt verschiedene Ursachen für diese
mit
Verunreinigungen. Z.B« kann ein Labferment/einem anderen Mikroorganismus
infiziert sein, der unerwünschte und spezifische proteolytische Enzyme ausscheidet, wenn das Lab von einer Kultur
des gewünschten Mikroorganismus isoliert wird«i Es ist ebenfalls
möglich, dass während einer längeren Bebrütung des Organisnras
beispielsweise zur Erzielting höherer Ausbeuten ein unspezifisches
proteolytisches Enzym zusammen mit dem Lab vom Mikroorganismus :
ausgeschieden wird, Es kann weiterhin sein^ dass ein für die Herstellung von Lab interessanter Mikroorganismus nicht verwendet
werden kann, weil der Prozentsatz an unspezifischen proteolytischen
Enzymon zu hoch ist. Es ist daher bekannt, dass bestimmte
Bakterienarten viel Labferment hervorbringen^ jedoch ebenfalls
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grosse Mengen eines unspezifischen Enzyms (vgl, z.B. Appl. Microbiol.
12, Seite 475 (1964)).
Das Auftreten einer unspezifischen proteolytischen Aktivität in Labpräparaten aus Mikroorganismen hat verschiedene Nachteile
bei der Käseherstellung. Es wurde bereits ausgeführt, dass die in der Milch vorliegenden Proteine weiter abgebaut werden,
wodurch die Konsistenz des Käsesunbefriedigend wird· Darüber
hinaus können unerwünschte Gewichtsverluste auftreten, weil die Abbauprodukte der Proteine zusammen mit der Molke aus dem Quark
gezogen werden.
Ein weiterer Nachteil der Gegenwart unspezifischer proteo- | lytischer Enzyme in Labpräparaten aus Mikroorganismen besteht
darin, dass während des Alterns des Käses dieser einen bitteren Geschmack entwickelt, der durch kleine Mengen sehr bitterer
Peptide verursacht wird, die sich durch die Zersetzung des Caseins
unter dem Einfluss sehr kleiner Mengen von unspezifischem Enzym
bildet, das im Labferment vorhanden ist, vgl. Proc. 16th Int. Dairy Gongr. Kopenhagen 1961, Bd. B 353. Die Entwicklung dieses
bitteren Geschmacks ist natürlich ein grosser Nachteil bei der Anwendung von Lab aus Mikroorganismen zur Käseherstellung.
Wegen d4r genannten Nachteile ist es wünschenswert, zur Koagulierung
von Milch ein Labpräparat zu verwenden, dan einen fast
zu vernachlässigenden Gehalt an unspezifischen proteolytischen %
Enzymen besitzt, damit ein Käse mit gutem Geschmack hergestellt werden kann.
Die Erfindung betrifft daher die Schaffung eines gereinigten Labferments aus Mikroorganismen, mit dem Käse erster Qualität
mit einem sehr guten Seschmack hergestellt werden kann. Um
diese Aufgabe zu lösen, erwies sich als notwendig, das KlIchger innungs enzym von den unspezifischen proteolytischen Enzymen
selektiv abzutrennen.
Es ist bekannt, dass Proteine an eine grosse Zahl vcn Absoi'ptionsmitteln
gebunden werden können. Es ist insbesondere
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bekannt, dass Silikate eine unspezifische Proteinabsorption zeigen,
vgl.z.B. Advances in Enzymology 14, Seite 400 (1953)· Beispiele dafür sind die nicht spezifische Absorption von Proteinen
aus dem Urin auf Permutit (j.Biol.Chenu 148, Seite 501 (1943))
oder aus Cabunit (Acta Endocrinologica 20, 101 (1955)) und die
Reinigung von Galactokinase mittels Bentonit (Arch.Bioch. 18, Seite 137 (1948)), wobei etwa 50 $ der Proteine unspezifisch ■
absorbiert werden«
Es wurde ein Verfahren zur Entfernung von unspezifischen geschmacksverschlechternden Enzymen aus Lab aus Mikroorganismen
. gefunden, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man eine wässrige Lösung des verunreinigten Labferments mit einem absorbierend
wirkenden Silikat bei einem pH-Wert zwischen 3 und 9 behandelt und anschliessend das Absorptionsmittel aus der Lösung abtrennt.
Durch dieses Verfahren werden die unspezifischen Enzyme, insbesondere
Proteasen u*a· unerwünschte Produkte aus dem Labpräparat
durch Absorption entfernt und es verbleibt gereinigtes Labferment in Lösung.
Dass in einer Lösung von Labferment aus Mikroorganismen duroh
Silikate eine selektive Abtrennung des Labs von den der Art nahe verwandten unspezifischen proteolytischen Enzymen erreicht werden
kann, ist durchaus überraschend, Nach dem erfindungsgemässen Verfahren werden die unspezifischen Enzyme zum grössten Teil absorbiert
und das Lab bleibt in Lösung zurück, ohne "dass es seine Aktivität verliert. Die Absorption der verunreinigenden Enzyme
des kann durch Zugabe eines Absorptions-mittels zur Lösung/Labferments
und Rühren des Gemisches über eine Zeitspanne und anschliessender Entfernung des Absorptionsmittels, z.B. durch Filtrieren oder
Zentrifugieren oder mittels Durchleiten der zu reinigenden Lösung durch eine Sä,ule des Absorptionsmittels durchgeführt werden.
Es wird schliesslich ein Enzymkonzentrat oder, falls dies gewünscht wird, ein trockenes Enzympräparat erhalten, wenn das
Wasser der Lösung verdampft wird oder das Milchgerinnungsenzym
durch übliche Verfahren, a„B« durch Aussalzen oder Fällen mit
einem organischen Lösungsmittel ausgefällt wird» Anstelle eines
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einzigen ATdSorptionsmittels kann auch ein Gemisch von zwei oder
mehr Absorptionsmitteln verwendet werden· Es ist ebenfalls möglich,
die Behandlung mit dem gleichen oder einem anderen Absorptionsmittel
zu wiederholen.
Aus Labpräparaten, in denen das Verhältnis zwischen der Gerinnungsaktivität und der proteolytischen Aktivität etwa 6000
bis 11 000 betrug, wurden gereinigte Labpräparate erhalten, bei denen dieses Verhältnis auf einen Wert von etwa 14 000 bis 20
verbessert wurde.
Die Wahl des pH-Wertes während der Absorption wird durch die Stabilität des Labs aus Mikroorganismen bei verschiedenen pH-Werten
und durch die Absorptionseigenschaften des Absorptionsmittels bestimmt· Das Lab ist bei einem pH-Wert zwischen etwa 3
und 9, je nach der verwendeten Temperatur, stabil. Andererseits tritt die Absorption der proteolytischen Enzyme innerhalb dieses
gesamten pH-Bereichs auf» Die Absorptionseigenschaften fallen
dementsprechend, wenn der pH-Wert ansteigt. Unterhalb eines pH-Wertes
4 wird in der Regel auch etwas Lab aus Mikroorganismen absorbiert, während ausserhalb des pH-Bereichs 3 bis 9 das Lab
vergällt wirde Die Reinigung wird vorzugsweise bei einem pH-Wert
von etwa 5 durchgeführt, insbesondere zwischen 4,5 und 6, wobei
die besten Ergebnisse erhalten werden.
Als Ausgangsmaterial zur Reinigung kann ein Labpräparat in ^
Pulverform verwendet werden, das in Wasser oder einer Pufferlösung bei einem pH-Wert zwischen 3 und 9, vorzugsweise etwa 5
gelöst wird. Es ist jedoch ebenfalls möglich, zu diesem Zweck eine Fermentationsflüssigkeit zu verwenden, die das Labferment
enthält. Es ist sogar möglich, die Reinigung während der letzten
Phase der Fermentation eines das Lab produzierenden Mikroorganismus
durchzuführen. Vorzugsweise wird als Ausgangsmaterial eine Tauchkultur oder ein wässriger Extrakt einer Oberflächenkultur
eines das Lab erzeugenden Mikroorganismus verwendet, weil in diesem
Fall die Isolierung und Reinigung des Labs gleich-zeitig z.B. durch Filtrieren über einem Silikat vorgenommen werden kann.
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Beispiele sehr geeigneter Absorptionsmittel sind natürliche
und synthetische Silikate, insbesondere Beritonit, wie die Typen
BIV 350 bianco, BIV 220 alvorio und Micro BIV der Societa AZ. Mineraria Isole Pont ine, Rom, Permutit, wie Decalso Ϊ1 der Permutit
Company, London, Attapulgit und chemisch reines kolloidales Siliciumdioxyd, das unter der Bezeichnung Aerosil bekannt
ist. Eine gute Reinigung kann auch mittels Cabunit und Frankonit
erzielt werden. Andere Silikate können ebenfalls verwendet werden,
z.B. Asbest, Kaolin, Silicagel, Bimspulver, Tripoli und Celit. Die sechs erstgenannten Silikatgruppen sind besonders
gut geeignet wegen ihrer hohen Selektivität.
Es wurde weiter gefunden, dass Labpräparate* die erfindungsgemäss
hergestellt sind, hervorragend g-e zur Herstellung
von Käse guter Qualität und ohne bitterem Geschmack geeignet
sind· In diesen Labpräparaten wird durch die erfindungsgemässe Reinigung das Verhältnis zwischen der Gerinnungsaktivität und
der proteolytischen Aktivität stark erhöht» Es ist offenbar, dass das erfindungsgemässe Verfahren zur Herstellung von Labpräparaten
verwendet werden kann? deren Anwendung nicht auf bestimmte
Käsearten begrenzt ist. Es ist nunmehr möglich geworden, verschiedene Käsearten in grosstechnischem Maßstab mit einem Geschmack
herzustellen, der nicht von Käse unterschieden werden kann, der mit tierischem Labferment hergestellt worden ist«
Die Gerinnungsaktivität wird durch Messung der Zeit bestimmt,
die zwischen der Zugabe einer Lablösung zu Milch (oder umgekehrt)
und dem Gerinnen der Milch verstreicht, was als Maßstab für die
Wirksamkeit des Enzympräparats betrachtet wird« Die Gerinnungskraft wird gemäss Soxhlet bestimmt.
Eine Gerinnungseinheit bezeichnet die Enzymmenge, die die
Gerinnung von 1 ml Substrat in 40 Min» bei 35°C verursacht.
Die Gerinnungsaktivität wird wie folgt bestimmt; Ein graduierter Messzylinder von 50 ml wird mit 25 ml ürischmilch
gefüllt und 15 Min. auf 350O erwärmt. In einem zweiten graduierten Messzylinder von 50 ml wird ein ml einer Lablösung
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einige Minuten auf 350C erwärmt» Wenn ein Labpulverpräparat verwendet
wird, wird dieses in einer Pufferlösung nach Mulder gelöst, die 100 g Natriumchlorid und 10g Hatriumacetat je Liter
enthält und einen pH-Wert 5,65 besitzt, der mit Essigsäure eingestellt
ist» Anschliessend wird die vorerwärmte Milch schnell zur Lablösung zugegeben. Die Zeit die zur Ausflockung der Milch
erforderlich ist, wird bei 35°O gemessen. Die Aktivität des Präparats wird wie folgt berechnet:
Wenn die Gerinnungszeit t Minuten ist, beträgt die Labmenge η
mg je ml und die Aktivität ist gleich
25 x 40
Aktivität = Einheiten/mg f
η χ t ^
Die proteolytische Aktivität wird dadurch bestimmt, dass
die Absorption der in Trichloressigsäure löslichen Bruchstücke bei 280 m/U gemessen wird, die nach dem partiellen Abbau von
Casein beim pH-Wert 6,0 erhalten werden. Die Einheit der proteolytischen
Aktivität wird als die Enzymmenge definiert, die bei einem pH-Wert 6,0 und bei 35°C je Minute eine Menge löslicher
Fragmente bildet, die ein Mikromol Tyrosin entspricht, gemessen in einem Bereich, in dem Dosis und Wirkung eine gerade
lineare Beziehung aufweisen.
Die Bestimmung wird wie folgt durchgeführt: f
Zu 5 ml einer Lösung von 1 $ Casein in 0,1 m- Phosphatpuff er vom
pH-Wert 6,0, die vorher 5 Min. auf 35°C erwärmt wurde, wird 1 ml der EnsymlÖsung zugefügt, die geprüft werden soll. Die Lösung
wird gründlich vermischt und 50 Ιίϊη. bei 55 C inkubiert. Anschliessend
werden 5 ml einer 5 5^-igen Lösung von Irichloressigsäure
zugefügt, wobei das nicht abgebaute Casein ausfällt. 10 Min· später wird die erhaltene Suspension abfiltriert und dann
die Absorption des Piltrats bei 280 m/U gemessen.
Das Ensya wird mit zwei Konsentrationen untersucht, die so
ausgewählt sind, dass die beiden Messpunkte innerhalb des Bereichs
fallen, in dem eine lineare Beziehung zwischen der Enzym-
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dosis und der Wirkung auftritt» Die Vergleichsbestimmung wird durchgeführt, indem zunächst Trichloressigsäure zur Gaseinlösung
zugesetzt wird und anschliessend die Enzymlösung. Der gefundene Wert wird mit dem einer standardisierten Tyrosinlösung verglichen,
die in gleicher Weise bestimmt wird.
Die Enzymaktivität wird wie folgt berechnetι ,
Aktivität = Einheiten/mg
30 χ Δη χ Έ ·
wobei ÄE die Absorptionsdifferenz ist, die bei.den beiden ver-'
schiedenen Enzymkonzentrationen gemessen wird und aufgrund der
Vergleichswerte korrigiert wird,
Δη die Differenz der Enzymkonzentration zwischen den beiden gemessenen
Lösungen in mg/ml ist und
E die Absorption ist, die für den Standard mit 1 Mikromol Tyrosin
gemessen wurde.
Das Verhältnis der Gerinnungsaktivität zur proteolytischen Aktivität wird aus den gefundenen Werten gemäss der 'Formel
30 000 χ Δη χ E3
η χ t χ Δε
η χ t χ Δε
gemessen. Der Geschmack von Käse, der mit gereinigten Labpräparaten
hergestellt wurde, wurde nach einem Untersuchungsverfahren beurteilt, das von "The Committee on Sensory Evaluation of the
Institute of Pood Technologists" gemäss Pood Technology 18S Seite
1135 (1964) empfohlen wurde* Der Geschmack von Käse, der mit
gereinigten Labpräparaten hergestellt wurde, wurde durch Vergleich
mit Käse bestimmt, der mit entsprechenden aber ungereinigten Labpräparat en hergestellt wurde, wobei die Prüfung durch eine
Gruppe erfahrener Geschmacksexperten im Laboratorium vorgenommen wurde.
Einzelproben-
Zu diesem Zweck wurde der sogenannte/Test mit einer Einzelprobe gemäss Food Technology 11, (1957)? Einschub 25 vorgenommen.
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_ 9 —
Dieser Test besteht darin, dass eine Gruppe erfahrener Geschmacksprüfer
befragt werden, ob in einem Produkt eine bestimmte Eigenschaft vorhanden oder abwesend ist und, falls möglich, wie stark
diese Eigenschaften zum Vorschein kommen. Die Ergebnisse einer vollständigen vergleichenden Prüfung werden nach ihrer Variationsbreite
analysiert·
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert,
wobei die Herstellung gereinigter labpräparate und deren Anwendung wiedergegeben ist»
10g eines festen Labpräparats aus Mikroorganismen aus Mucor
pusillus wurden in 250 ml destilliertem Wasser gelöst. Zur erhaltenen
Lösung wurden 10g Bentonit BIV 350 bianco zugegeben,
wonach der pH-Wert auf 5,0 mittels 1 η-Essigsäure eingestellt •wurde« Die erhaltene Suspension wurde 15 Min. gerührt und anschliessend
über ein Faltenfilter filtriert» Die Gerinnungsaktivität
und die proteolytische Aktivität wurden vor und nach der Absorption nach den oben genannten Verfahren gemessen und zusammen
mit dem Verhältnis R in folgender Tabelle zusammengestellt:
Aktivitäten vor der nach der
Einheiten/ml Absorption Absorption
Gerinnungsaktivität 13 600 E 13 450 E
proteolytische Aktivität 2,40 E 0,96 E
R 5,67 χ 103 14,01 χ 103
Zu 50 ml einea rohen wässrigen Extrakts einer Oberflächenkultur
νυη Mucor puaillus mit einem Gehalt von 600 fjoxhleb E/ml
wurden 500 mg Bentonit BIV 220 alvorio zugefügt. Die erhaltene
LiuspenBion wurde auf einen pH-Wert 5,0 mit 1 n-Essigßäure einge-
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stellt und 1 Std. bei Raumtemperatur gerührt« Anschliessend wurde
die Suspension zentrifugiert und die erhaltene überstehende Flüssigkeit auf -5°G abgekühlt und 42 ml eines klaren Extrakts erhalten.
Zu diesem Extrakt wurde unter Rühren 96 ml Äthanol von -150C
zugefügt. Der erhaltene Rückstand wurde filtriert und in einem Vakuumexsiccator getrocknet. Die Ausbeute betrug etwa 23 900
Soxhlet-Einheiten. In gleicher Weise wurde ein Präparat ohne Verwendung von Bentonit hergestellt. In diesem Falle betrug die Ausbeute
24 100 Soxhlet-Einheiten. Die Gerinnungsaktivität und die proteolytische Aktivität sind in der folgenden Tabelle zusammen
mit ihrem Verhältnissen dargestellt:
Aktivitäten Rohextrakt ungereinigtes gereinigtes
i Endprodukt Endprodukt'
Gerinnungsaktiv. 30 000 E 24 100 E 23 900 E
proteolytische Akt. 5,50 E 4,61 E 1,65 E
R 5,45 x 103 5,22 χ 103 14,48 χ 103
Das gereinigte Lab, das gemäss Beispiel 1 erhalten wurde, wurde zur Herstellung von Käse in einem Vergleichsversuch mit
ungereinigtem Lab verwendet.
Zu 20 1 ungekochter Frischmilch wurden 3 ml der gereinigten Lablösung, die gemäss Beispiel 1 erhalten wurde, sowie 4 g Kaliumnitrat
und 1 G/o einer Ausgangskultur zugegeben. Die Temperatur,
bei der die Koagulation erfolgt, betrug 300C und die Koagulationszeit 31 Min.
In gleicher Weise wurden 20 1 Milch mit 3 ml des ungereinigten
Labpräparats von Beispiel 1 koaguliert, wobei die Gerinnungsseit 30 1/2 Min· betrug.
Die geronnene Milch wurde in Scheiben geschnitten, wobei Molke austrat. Zur weiteren Abscheidung.der Molke wurde die Masse
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! Ι!!!!Ι!ΙΙ1ί!Ι!Ι!! "! , !1!!1It
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20 Min· mit einer Käseharfe in Bewegung gehalten. Bach Entfernung
von 10 1 Molke wurden 6 1 Wasser von 45°C zur geronnenen
Milch zugesetzt, wonach die Temperatur 370C betrug. Die Masse
wurde etwa 50 Min. mit einer Käseharfe bewegt. Danach wurde die geronnene Milch von der Molke mittels einer durchlöcherten Siebplatte
abgepresst. Schliesslich wurde die geronnene Milch in
zwei Teile eingeteilt. Diese Teile wurden in warme Käseformen eingefüllt, die unter eine Presse gelegt wurden. Nach 6 Wochen
bzw. 6 Monaten wurden die beiden erhaltenen Käse von einer Gruppe von acht erfahrenen Geschmacksprüfern einem Geschmackstest gemäss
Simone und Mitarbeitern unterworfen.
Jls wurden von den acht Geschmacksprüfern folgende Ergebnisse
erhalten:
Der mit dem gereinigten Lab erhaltene Käse ist unter A angeführt und der Käse aus dem ungereinigten Ausgangsmaterial unter B.
Käse | A | Käse | si | |
Nach 6 Wochen |
Nach 6 Monaten |
Nach 6 Wochen |
Nach 6 Monaten |
|
Bitter | υ | υ | 1 | 2 |
etwas bitter | 1 | 0 | Y | 6 |
nicht bitter | 7 | 8 | 0 | |
Beispiel 4 |
Hach der Fermentation in Gegenwart des Mycels wurden 10 g
Bentonite Micro BIV zu 4 1 einer Tauchkultur von Rhizcpus peka
zugesetzt. Die Aktivität der LL'sung betrug 120 000 Sc::hlet-Einheiten
je 1 und die proteolytische Aktivität 60 Einheiten je
Der pH-Wert der Fermentationsflüssigkeit wurde auf einen Viert 5,0 mit 1 η-Salzsäure eingestellt und die Suspension weitere
15 Min· gerührt. Anschliessend wurde die Gärung unterbrochen und die festen Substanzen aus der Kultur abfiltriert« Die Gerinnungsaktivität
und die proteclytische Aktivität vairde im
klaren Filtrat bestimmt. Eine Gerinnungsaktivität ve:: 11Λ 000
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Soxhlet-Einheiten je 1 und eine proteolytische Aktivität von
8 Einheiten je 1 wurde gefunden, so dass das Verhältnis R zwischen
der Gerinnungsaktivität und der proteolytischen Aktivität von 2 000 auf 14 250 verbessert wurde.
. In gleicher Weise wie gemäss Beispiel 3 wurde Käse mit einem labpräparat hergestellt, das mit 0,35 1 Bentonit behandelt worden
war, sowie mit einem unbehandelten Labpräparat· Die Geschmacksprüfung gemäss Beispiel 3 durch eine Gruppe erfahrener Geschmacksprüfer
zeigte, dass der Geschmack des mit dem gereinigten Lab hergestellten Käses erheblich rerbessert worden war, wie
< aus der folgenden Tabelle hervorgeht.
Käse aus gereinigtem Lab |
Nach 6 Monat en |
Käse aus | rohem Lab |
Nach 6 Wochen |
0 1 7 |
Nach 6 Wochen |
Nach 6 Monaten |
Bitter . 0 etwas bitter 1 nicht bitter 7 |
6 2 0 |
2 6 0 |
Zu 10 g eines Labferments aus Mikroorganismen aus einer Oberflächenkultur von Hueor pusillus, gelöst und 250 ml Wasser,
wurden 10g eines synthetischen Natriumaluminiumsilikats
Decalso F zugegeben. Der pH-Wert der Lablösung wurde auf 5,0 mit 1 η-Essigsäure eingestellt. Die iiösung wurde 20 Min· gerührt und
anschliessend das Absorptionsmittel abfiltriert. Das Labferment wurde durch Zugabe von 115g Ammoniumsulfat (bis zur Sättigung
ö,76) isoliert. Der Niederschlag wurde abfiltriert, dialysiert und zur Trockne eingedampft und 4,68 g gereinigtes Lab A mit
einer Aktivität von 790 000 Soxhlet-Einheiten/g erhalten« 10 g des gleichen Ausgangsmaterials wurden in gleicher Weise behandelt,
jedoch kein Absorptionsmittel zur Lösung des rohen Labs zugesetzt. Die Ausbeute betrug 4»92 g Lab B einer Aktivität von
765 000 Soxhiet-Einhei-fcen/g.
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Nach der Bestimmung der proteolytischen Aktivität der Proben
A und B zeigte eine Berechnung, dass das Verhältnis R beim
Lab A 23 500 und beim Lab B 6 475 betrug.
Auch in diesem Falle wurde durch erfahrene Geschmacksprüfer sichergestellt, dass mit dem gereinigten lab A hergestellter
Käse eine erhebliche Geschmacksverbesserung erzielt werden konnte.
100 ml von Lab aus Mikroorganismen aus Endothia parasitica ™
vom pH-Wert 5,0 mit einem Gehalt von 100 Soxhlet-Einheiten Gerinnungsaktivität je ml wurden über eine Säule mit 3 g eines .
synthetischen Hatriumaluminiumsilikats Decalso ¥ gegeben. Die
Säule wurde mit 15 ml einer Lösung von 0,01 m-Natriumacetat vom
pH-Wert 5,0 ausgewaschen.
Das gesamte Eluat der Säule enthielt 9 800 Soxhlet-Einheiten,
wobei die gesamte proteolytische Aktivität atif 0,47 Einheiten
abgesunken war, gegenüber 1,43 Einheiten im Ausgangsmaterial,
Auch in diesem Pail ergab die Geschmacksprüfung, dass der M
bittere Geschmack, der bei Verwendung von ungereinigtem Lab zur Käseherstellung auftrat, vollständig bei Käse verschwunden war,
der mit gereinigtem Lab hergestellt worden war.
10 g Lab aus Mikroorganismen aus Muoor pusillus Lindt wurde
in 125 ml 0,05 m-Phosphatpuffer vom pH-Wert 8,0 gelöst. Zu dieser
Lösung wurde eine Suspension von 10 g Asbestfaden! in 125 ml
Wasser, zugefügt. Die erhaltene Suspension wurde 15 Min. bei Raumtemperatur
gerührt und dann abfiltriert, Die Gerinnungsaktivität
und die proteolytische Aktivität des Filtrate wurden gemessen
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und mit den Werten der Ausgangslösung verglichen. Die Ergebnisse
sind in der folgenden Tabelle aufgeführt: - .
Aktivität in E/ml vor Absorption nach Absorption
Gerinnungsaktivität 13 400 E .11 000 E proteolytische Aktivität 2,38 E 0,96 E
R 5 630 11 460
10 g Lab aus Mikroorganismen aus Mucor pusillus lindt wurden
in 125 ml 0,05 m-Phosphatpuffer vom pH-Wert 3,5 gelöst. Zur
Lösung wurde eine Suspension von 10 g Bentonit in 125 ml "wasser zugefügt und die erhaltene Suspension 15 Min« bei Raumtemperatur
gerührt. Hacn der Entfernung des Bentonits durch Abfiltrieren
wurde die Gerinnungsaktivität und die proteolytische Aktivität der Lösung gemessen und mit den Vierten dei· AusgangsIosung
verglichen. Die Ergebnisse sind in folgender tabelle aufgeführt:
Aktivitäten in E/ml vor Absorption nach Absorption
Ger irinungs aktivität | 13 | 400 | E | 3 | 5 CiO | E |
proteolytische Aktivität | 2 | ,44 | E | o, | 15 | E |
R | 5 | 490 | 23 | 400 |
o 10 g Lab aus Mikroorganismen aus Mucor pusillus Lindt wur-
° den in 125 ml 0,05 m-Phosphatpuffer vom pH-Wert 5,0 gelöst« Zu
oo dieser Lösung wurde eine Suspension von 10g Aerosil in 125 ml
to Wasser zugefügt und das Gemisch 15 Min, bei Raumtemperatur ge-
^ rührt, liach dem Filtrieren wurde die Gerinnungsaktivität und die
cn proteolytische Aktivität der Lösung gemessen und mit den Werten
cn der Ausgangslösung verglichen. Die Ergebnisse sind in der folgenden
^Tabelle zufjammenges teilt: - -
. AIctiνitäten in lü/ml vor Absorption nach Absorption
Gerinnungsaktivität
"proteolytlsehe aktivität
R BAD ORIGINAL 5 4'JU COPY
13 | 400 | E | 11 | 030 | E |
2, | 44 | E | υ | ,96 | E |
490 | , . ''I | !.K)O |
Claims (1)
- Patentansprüche1· "Verfahren zur Reinigung von Labfermenten aus Mikroorganismen von unspezifischen geschmacksverschlechternden Enzymen, dadurch gekennzeichnet, dass man eine wässrige Lösung des unreinen Labferments mit einem absorbierenden Silikat bei einem pH-Wert zwischen 3 und 9 in Berührung bringt und das Absorptionsmittel anschliessend aus der Lösung entfernt·2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Behandlung bei einem pH-Wert von etwa i? durchführt«3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man als Ausgangsinaterial eine Tauchkultur oder einen wässrigen Extrakt einer Oberflächenkultur eines Mikroorganismus, der Lab produziert, verwendet.4. Verfahren nach Anspruch 1 eis 3, dadurch g e i: e η η -ζ ei ohne t, dass man die Behandlung in einer Säule durchführt.t?«Verfahren nach Anspruch 1 bis 4, dadurch g e k e η η ■zeichne t, dass man als Absorptionsmittel Aerosil, Permut it, Attapulgit, Bentonit, Cabunit, Frankonit oder ein Geraisch dieser Stoffe verv/endet.6. Verwendung des nach Anspruch 1· bis 5 gereinigten Labferments zur Herstellung von Käse.00984 3 / 1606COPY BAD ORIGINAL
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US4632903A (en) * | 1984-12-28 | 1986-12-30 | Novo Laboratories, Inc. | Enzyme modified soy protein for use as an egg white substitute |
US5354646A (en) * | 1986-03-26 | 1994-10-11 | Konishiroku Photo Industry Co., Ltd. | Method capable of rapidly processing a silver halide color photographic light-sensitive material |
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WO1992009687A1 (de) * | 1990-11-26 | 1992-06-11 | Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien | Fällungsverfahren für exocelluläre proteine |
US5453200A (en) * | 1990-11-26 | 1995-09-26 | Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien | Precifitation process for exocellular proteins |
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GB1249636A (en) | 1971-10-13 |
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