DE159714T1 - Herstellung von gamma-interferon. - Google Patents
Herstellung von gamma-interferon.Info
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Claims (19)
1. Eine Mischung aus
(a) einem ersten rekombinanten Vektor, enthaltend ,15 ,
eine Genom-DNA-Sequenz, die das vollständige, natürliche menschliche Gen für Interferon &ggr; enthält, sowie eine
DNA-Sequenz, die die frühe Promoter-Region von SV40 enthält, wobei die genannte Promoter-Sequenz so angeord-
_ net ist, daß sie die Steuerung der Transkription des ge-20
nannten Interferon-Gens ausübt, weiterhin ein Replikon
und intermittierende DNA und
(b) einem zweiten rekombinanten Vektor, der eine exprimierbare DNA enthält, die für die Hydrofolatreduktase
codiert.
2. Eine CHO-Zelle, die durch die Mischung des Anspruches
1 cotransformiert ist.
3. Eine Zelle, die die Identifizierungscharakter is tika
von CHO-# 301 aufweist, die beim Institut Pasteur unter der Hinterlegungsnummer I-31O hinterlegt wurde, sowie
jegliche Zelle, die sich von dieser Zelle ableitet.
4. Ein Cotransformationsvektor, der den selektierbaren Marker DHFR unter der Transkriptionssteuerung der
01597H
frühen Promoter-Sequenz des SV4O enthält, wobei die genannte Sequenz die 72- Basenpaar-Repetitions-Enhancer-Subsequenz
des genannten Promoters einschließt.
5. Ein Cotransformationsvektor, der den selektierbaren
Marker DHFR sowie eine Enhancer-Sequenz aus einer Retrovirus LTR-Region enthält.
6. Vektor nach Anspruch 5, wobei die Enhancer-Sequenz aus dem Harvey-Maus-Sarkom-Virus erhalten wurde.
7. Vektor nach Anspruch 6, der die Identifizierungscharakteristika
des Vektors pDHFR Ha aufweist oder ein Derivat von diesem.
8. Eine CHO-Zelle, cotransformiert durch den Cotransformationsvektor
aus Anspruch 5 und einem Vektor, der ein menschliches Interferon /-Gen trägt, der zur Expression
in der genannten Zelle fähig ist, wobei die
w Menge der Expression durch die Anwesenheit der genannten
Enhancer-Sequenz erhöht ist.
9. Im wesentlichen reines, reifes,menschliches Inter-
8 feron &ggr; , das eine Aktivität von mindestens 10 Einheiten/
mg Protein aufweist, das mit natürlichem menschlichem Interferon &ggr; -identisch ist.
10. Eine transformierte nichtmenschliche Zellinie,
die in der Lage ist, menschliches Interferon J* in einer
3^ Rate von mindestens etwa eine Million Einheiten pro einer
Million Zellen pro Tag herzustellen.
11. Verfahren zum Herstellen einer Zellinie, die fähig ist, menschliches Interferon f in einer Rate von
mindestens 10 Einheiten pro einer Million Zellen pro
Tag herzustellen, wobei DHFR Zellen mit einer Mischung
gemäß Anspruch 1 cotransformiert werden.
12. Verfahren zum Reinigen von Interferon l>
, wobei
(a) Interferon y an eine chromatographische Säule
mittels mit dieser verbundenen monoklonalen Antikörpern, die eine Affinität für Interferon &ggr; haben, gebunden wird,
und
(b) das Interferon &ggr; aus der Säule mittels eines alkalischen
eluierenden Mittels eluiert wird.
13. Eine Zelle, die die Identifizierungscharakteristika
von CHO-^ 21 aufweist und jede hiervon abgeleitete
Zelle.
14. Eine Mischung gernäß Anspruch 1, wobei mindestens
einer der genannten Vektoren weiterhin eine Enhancer-Sequenz aufweist.
o
15. Eine Mischung gemäß Anspruch 14, wobei die Enhancer-Sequenz
aus dem Harvey-Maus-Sarkoma-Virus abgeleitet ist.
16. Eine Zelle nach Anspruch 8, die fähig ist, In-
_,_ terferon / in einer Rate herzustellen, die über 4x10 Ein-Zo
heiten/ml pro Tag liegt.
17. Vektor, der eine Genom-DNA-Sequenz enthält, die das vollständige natürliche menschliche Interferon-
^ - Gen enthält sowie einf konstitutive Promotersequenz,
die so angeordnet ist, daß sie in der Lage ist, die Steuerung der Transkription des genannten Interferon-Gens
auszuüben.
18. Vektor nach Anspruch 17, der die Identifizierungs-
charakteristika von pSVE^ 121 aufweist oder Abkömmlinge
dieses Vektors.
19. Vektor, der pSVE 3 enthält, aus dem die SV4O-Sequenz
2770 bis 5171 entfernt wurde und der die Identifizierungscharakteristika
von pSVE 42 aufweist und Abkömmlinge von diesem Vektor.
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