DE1517837C - Verfahren zur biochemischen Herstellung von delta-(N-Acetyl)-L-Ornithin - Google Patents
Verfahren zur biochemischen Herstellung von delta-(N-Acetyl)-L-OrnithinInfo
- Publication number
- DE1517837C DE1517837C DE1517837C DE 1517837 C DE1517837 C DE 1517837C DE 1517837 C DE1517837 C DE 1517837C
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- ornithine
- acetyl
- fermentation
- pyrimidine
- atcc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 title claims description 29
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 5
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical group O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 289-95-2 Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000001963 growth media Substances 0.000 claims description 6
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline zwitterion Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 5
- 229940035893 Uracil Drugs 0.000 claims description 5
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 claims description 5
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 claims description 5
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N precursor Substances N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 claims description 3
- UHDGCWIWMRVCDJ-XVFCMESISA-N Cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-XVFCMESISA-N 0.000 claims description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-UCVXFZOQSA-N Uridine Natural products O[C@H]1[C@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UCVXFZOQSA-N 0.000 claims description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 claims description 3
- 229940045145 Uridine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N Cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940104302 Cytosine Drugs 0.000 claims description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 22
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 22
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 17
- 239000002609 media Substances 0.000 description 16
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 229960003104 Ornithine Drugs 0.000 description 9
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 9
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 9
- 235000005824 corn Nutrition 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000209149 Zea Species 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940041514 Candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 5
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N n-butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N Ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010078762 Protein Precursors Proteins 0.000 description 3
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 3
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- PRKQVKDSMLBJBJ-UHFFFAOYSA-N Ammonium carbonate Chemical compound N.N.OC(O)=O PRKQVKDSMLBJBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003563 Calcium Carbonate Drugs 0.000 description 2
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 2
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N Fructose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N Maltose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@H]1CO)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N 0.000 description 2
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 2
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 2
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Chemical class [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L mgso4 Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N monochloramine Chemical compound ClN QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing Effects 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Chemical class [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- DVARTQFDIMZBAA-UHFFFAOYSA-O Ammonium nitrate Chemical compound [NH4+].[O-][N+]([O-])=O DVARTQFDIMZBAA-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L Calcium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-KCDKBNATSA-N D-(+)-Galactose Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-KCDKBNATSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L Dipotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 229960002989 Glutamic Acid Drugs 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 240000007842 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M Monopotassium phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HLKXYZVTANABHZ-REOHCLBHSA-N N-carbamoyl-L-aspartic acid Chemical compound NC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O HLKXYZVTANABHZ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- MGCYUOUICIKOIP-UHFFFAOYSA-N NC(=O)N.O.C(C)O Chemical compound NC(=O)N.O.C(C)O MGCYUOUICIKOIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N Ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229960004793 Sucrose Drugs 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical Effects 0.000 description 1
- 230000001488 breeding Effects 0.000 description 1
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N chromium Chemical class [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Chemical class 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt Chemical class [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052803 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Chemical class 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Chemical class 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N copper Chemical class [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 corn steep liquor Chemical class 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 description 1
- XKUUMWKWUZRRPD-UHFFFAOYSA-N heptan-2-amine;sulfuric acid Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O.CCCCCC(C)[NH3+].CCCCCC(C)[NH3+] XKUUMWKWUZRRPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001145 hydrido group Chemical group *[H] 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N magnesium Chemical class [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003390 magnesium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N manganese Chemical class [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Chemical class 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate monohydrate Chemical compound O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O ISPYRSDWRDQNSW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N molybdenum Chemical class [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Chemical class 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 235000018343 nutrient deficiency Nutrition 0.000 description 1
- 235000021048 nutrient requirements Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 1
- KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N phenol;hydrate Chemical compound O.OC1=CC=CC=C1 KSSNXJHPEFVKHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015108 pies Nutrition 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 239000010421 standard material Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N zinc Chemical class [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Chemical class 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N α-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur biochemischen Herstellung von <5-(N-Acetyl)-L-Ornithin.
Dieses Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß man Paräcolobactrum coliforme ATCC 21031 in
Citrullin oder Arginin und mindestens ein Pyrimidin oder einen Pyrimidin-Vorläufer als notwendige Wachstumsstoffe
enthaltenden Nährmedien ansonsten üblicher Zusammensetzung bei üblichen Bedingungen
züchtet.
o-(N-Acetyl)-L-Oniithin ist als Aminosäuiebestandteile
von bestimmten spezifischen Pflanzen bekannt, jedoch wurde bisher kein Verfahren zur industriellen
Herstellung desselben in der Praxis erfolgreich ausgeführt. Dies bedeutet einen großen Nachteil insofern,
als <5-(N-Acetyl)-L-Ornithin als brauchbares Süßungsmittel
als auch als Bestandteil verschiedener Nahrungsstoffe, Medizinen u. dgl. wertvoll ist. Auf Grund der
vorliegenden Erfindung ergibt sich die Herstellung durch einen bestimmten Mikroorganismen, so daß
r5-(N-Acetyl)-L-Ornithin in der Fermentationsflüssigkeit
gebildet und angesammelt wird. Es ist völlig neu, daß i5-(N-Acetyl)-L-Orn.ithin bei einem Fermentierverfahren
mit einem Mikroorganismen in der Fermentationsflüssigkeit gebildet wird.
Somit kann zum ersten Mal die Herstellung von i%(N-Acetyl)-L-Ornithin im Industriemaßstab mit den
sich daraus ergebenden wirtschaftlichen Vorteilen durchgeführt. Darüber hinaus werden bei dem vorliegenden
Verfahren in der Fermentationsflüssigkeit niemals racemische Verbindungen gebildet, wie das
bei den synthetischen Herstellungsverfahren üblich ist, und es wird nur die L-Förm des <%(N-Acetyl)-Derivats
gebildet. Darüber hinaus ist es sehr einfach, das gewünschte Produkt aus der Fermentationsflüssigkeit zu
gewinnen, da nur kleine Mengen an L-Ornithin sich im Kulturmedium als Nebenprodukt bilden. Da die
im Vergleich zur Menge an <HN-Acetyl)-L-Ornithin
gebildete Menge an L-Ornithin nur sehr klein ist und
da auch <5-(N-Acetyl)-L-Ornithin eine neutrale Substanz
ist, läßt sich die Isolierung und Gewinnung dieser Substanz sehr einfach bewirken.
Der erfindungsgemäß verwendete Paräcolobactrum coliforme ATCC 21031 wurde durch Ultraviolettbestrahlung
des Stammes Paracolobactrum coliforme erhalten, wobei der letztere Stamm gut bekannt ist,
dessen bakteriologische Eigenschaften in Bergey's »Manual of Determinative Bacteriology«, 7. Auflage,
1957, S. 348, beschrieben sind. Paracolobactrum coliforme ATCC 21 031 unterscheidet sich von seinem
Elternstamm insofern, als er Citrullin (welches auch durch Arginin ersetzt werden kann) und Pyrimidine,
welche auch durch Pyrimidinvorläufer ersetzt werden können, für sein Wachstum benötigt. Somit ist der
genannte Mutantenstamm ein Mikroorganismus mit Nährstoffmangelerscheinung gegenüber dem Eltern-.
stamm. Tabelle I zeigt die für den Mutantenstamm Paracolobactrum coliforme ATCC 21 031 signifikanten Nährstofferfordernisse.
.
Mutantenstamm Paracolobactrum coliforme
■ ATCC 21 031
Nährstoff bedürfnis: Citrullin oder Arginen und Pyrimidine
wie Uracil, Uridin, Cyto
sin, Cytidin oder Carbamylasparaginsäure
Hinsichtlich der Zusammensetzung des für Para-
ao colobactrum coliforme ATCC 21 031 anzuwendenden Nährmediums sind sowohl synthetische als auch
natürliche Nährmedien geeignet, solange sie die wesentlichen Nährstoffe für das Wachstum des Mikroorganismus
enthalten. Derartige Nährstoffe sind an
as sich bekannt, und hierzu gehören Substanzen wie eine
Kohlenstoffquelle, eine Stickstoffquelle, anorganische Verbindungen u. dgl. sowie die für den angewandten
Organismus wesentlichen Nährstoffe in geeigneten Mengen. So seien als Kohlenstoffquellen hier z. B.
aufgeführt: Glucose, Glyzerin, Fructose, Mannose, Galactose, Rohrzucker, Maltose, Lactose, verzuckerte
Stärkelösung und Melassen. Die Kohlenstoffquelle kann aus einer einzigen dieser Substanzen oder aus
Gemischen von zwei oder mehr bestehen. Als Stickstoffquelle können verschiedene Arten von anorganischen
oder organischen Salzen oder Verbindungen, wie Ammoniak, Ammoniumsulfat, Ammoniumchlorid,
Ammoniumnitrat, Ammoniumkarbonat, Ammoniumacetat, Ammoniumphosphat u. dgl., andere geeignete
Nitrate, Harnstoff oder andere stickstoffhaltige Verbindungen, wie Pepton, Bouillon, Kaseinhydrolysate,
Maisquellwasser, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Fischmehl, lösliche Brauereirückstände u. dgl., verwendet
werden. Die Stickstoffquelle kann ebenfalls eine dieser Substanzen oder eine Kombination von zwei oder
mehr derartiger sein. Anorganische Verbindungen, die zu dem Kulturmedium zugegeben werden können,
umfassen Kaliumdihydrogenphosphat, Kaliummonohydrogenphosphat, Natriumchlorid sowie andere wasserlösliche
Salze von Magnesium, Eisen, Mangan, Nickel, Molybdän, Zink, Kobalt, Kupfer, Chrom
u. dgl., beispielsweise Magnesiumsulfat, Calciumkarbonat, Mangansulfat u. dgl.
Es ist auch hotwendig, zu dem Nährmedium Nährstoffe wie Aminosäuren und die für das Wachstum des
Mikroorganismus erforderlichen Pyrimidinsubstanzen zuzusetzen. Diese Nährstoffe können entweder durch
Verwendung der reinen Stoffe oder durch Verwendung von Nährstoffen, in denen sie enthalten sind, beispielsweise
natürliche organische Stickstoffquellen, geliefert werden. Für den Paracolobactrum coliforme ATCC
21 031 werden sowohl Citrullin als auch Arginin als; Aminosäurennährstoff und auch Pyrmidine (UraciL
Uridin, Cytosin, Cytidin u. dgl.) dem Nährmediurr zugegeben. Arginin kann dem Nährmedium in Forrr
eines aminosäurenhaltigen Materials, wie Bouillon Pepton, Maisquellwasser, Kaseinhydrolysat, Hefe
extrakt oder Gluten- oder Sojabohnenmehl-Hydro
lysat, aus dem die Glutaminsäure entfernt, ist oder als
Hydrolysate von Fischmehl; Sojabohnenflecken, Kokons
oder Fermentationsrückständen zugegeben werden. Die Pyrimidine oder deren Vorläufer können dem
Kulturmedium in Form von hukleinsäurehaltigen Materialien, wie Maisquellwasser, Hefeextrakt oder
Bouillon, zugefügt werden. Somit können die hier aufgeführten Stoffe als Quelle für z. B. Arginin oder
für die erforderlichen Pyrimidine oder deren Vorläufer verwendet werden.
Das Fermentierverfahren gemäß der Erfindung wird unter Aerobbedingungen, beispielsweise unter aerobem
Schütteln oder durch Belüftung und Rühren bei einer Temperatur von etwa 25 bis 40° C, vorzugsweise 28
bis 37°C durchgeführt. Der pH-Wert zeigt eine Neigung
zum Abfallen während der Züchtung, und es ist notwendig, den pH-Wert auf einen Wert im Bereich
von 5,5 bis 8,5 durch Verwendung geeigneter Neutralisiermittel am Beginn der Züchtung oder während der
Züchtung einzustellen, damit eine hohe Ausbeute des Produktes erhalten wird. Zu den zu diesem Zweck
verwendbaren Neutralisiermitteln gehören Alkalien, wie wäßriges Ammoniak, Natriumhydroxyd, Kaliumhydroxyd
u. dgl., oder Verbindungen, wie Ammoniumkarbonat, Calciumkarbonat, Calciumhydroxyd u. dgl.
Die Kultivierung.wird im allgemeinen während 3 bis 5 Tagen fortgeführt. Während dieser Zeit sammeln
sich bemerkenswerte Mengen an (5-(N-Acetyl)-L-Ornithin
in der Fermentationsflüssigkeit an.
Nach beendeter Fermentierung kann das <5-(N-Acetyl)-L-Ornithin
aus dem Fermentationsfiltrat durch übliche Maßnahmen, beispielsweise Behandlung mit
einem Ionenaustauschharz, Extraktion mit Lösungsmitteln sowie nach anderen physikalischen oder chemischen
Verfahren, wie sie im allgemeinen zur Abtrennung und Reinigung von <$-(N-Acetyl)-L-Ornithin
angewandt werden, abgetrennt werden. Das im folgenden Absatz beschriebene Verfahren mit einem
Ionenaustauschharz kann mit Vorteil zur Abtrennung und Reinigung des <5-(N-Acetyi)-L-Ornithinproduktes
verwendet werden.
Eine Fermentationsflüssigkeit, aus der die Bakterienzellen entfernt wurden, wurde in Berührung mit einem
stark sauren Kationenaustauschharz (NH4-Typ) gebracht.
Anschließend wurde das <5-(N-Acetyl)-L-0rnithin m't Wasser eluiert, wobei vorteilhafter Gebrauch
von den äußerst schwachen Adsorbtionseigenschaften von <3-(N-Acetyl)-L-Ornithin gemacht wurde. Infolgedessen
wird ö-(N-Acetyl)-L-Ornithin mit Wasser aus
der Kollone entfernt, während das Nebenprodukt t-Ornithin auf dem Ionenaustauschharz adsorbiert
bleibt. Wie vorstehend ausgeführt, kann die (5-(N-Acetyl)-L-Ornithin
enthaltende Lösung dann verschiedenen ... physikalischen oder chemischen Verfahren zur weiteren
Abtrennung und Reinigung des 5-(N-Acetyl)-L-Ornithins
unterworfen werden. Beispielsweise wird die vorstehend aufgeführte Eluierflüssigkeit, d. h. die das
£-(N-Acetyl)-L-Ornithin enthaltende Lösung auf einen
sauren pH-Wert eingestellt, in Berührung mit einem stark sauren Kationenaustauschharz (Η-Typ) gebracht
und mit wäßrigem Ammoniak eluiert, nachdem mit Wasser gewaschen wurde. Die das f5-(N-Acetyl)-L-Ornithin
enthaltenden Eluierfraktionen werden vereinigt, unter vermindertem Druck eingeengt und der Abkühlung
durch Stehenlassen nach Zugabe von geeigneten organischen Lösungsmitteln, wie Alkoholen, beispielsweise
Methanol, Äthanol, n-Butanol u. dgl., überlassen. Dabei werden die Kristalle von 0-(N-Acetyl)-L-Ornithin
erhalten. Gewünschtenfalls können die Kristalle weiterhin durch Umkristallisation gereinigt werden.
Die folgenden Beispiele dienen zur Erläuterung der vorliegenden Erfindung. Falls nichts anderes angegeben,
sind die Prozentsätze GewichtS'/Volumprozent.
B eis pie! I
Paracolobactrum coliforme ATCC 21 031 wurde in ίο ein Nährmedium gebracht, das aus 2% Glucose, 1%
Ammbniumsulfat, 0,3% Harnstoff, 2% Maisquellwasser, 400|i.g/ml Uracil und 1% CaCO3 bestand.
Die Züchtung wurde dann unter aerobem Schütteln während 24 Stunden ausgeführt. Die Kultur wurde
als Impfkultur bei der nachstehend beschriebenen Fermentierung verwendet.
Mengen von etwa 5% der Impf kultur wurden zu einzelnen konischen Kolben von 250 ml gegeben, die
jeweils; 20 ml eines Nährmediums von folgender Zur
ao sammensetzung enthielten:
7% Glucose. ,
200 μg/ml Arginenhydrochlorid"
300 g/ml Uracil -
300 g/ml Uracil -
1,6% Ammoniumchlorid
0,15% KH2PO4
0,05% K2HPO4
0,05% MgSO4-7H3O
0,001 % FeSO4 · 7H2O '
0,002% MnSO4-4H2O
0,002% MnSO4-4H2O
2% CaCO3
Der pH-Wert des Fermentiermediums betrug 7,2.
Die das Fermentiermedium enthaltenden Kolben wurden vor der Zugabe der Impf kühlflüssigkeit sterilisiert.
Die Züchtung wurde mit aeroben Schütteln der
Kultur bei 28° C während 5 Tagen durchgeführt. Die dabei erhaltene Durchschnittsmenge an <5-(N-Acetyl)-L-Ornithin
betrug in der Fermentationsflüssigkeit 4,5 mg/ml. Die Menge des Nebenproduktes L-Ornithin
betrüg 1,3 ms/ml im Durchschnitt.
Nach beendeter Züchtung wurden die einzelnen Fermentationsflüssigkeiten aus jedem Kolben vereinigt,
wobei ein Gesamtvolumen von ungefähr 11
erhalten wurde. Die Bakterienzellen wurden entfernt und der pH-Wert auf 7,0 eingestellt. Die erhaltene
bakterienfreie Lösung wurde auf eine mit"500 ml eines stark sauren Kationenaustauschharzes (NH4-Typ) gepackte
Ionenaustauschkolonne gegossen, und anschließend wurde Wasser durch diese Kolonne geführt,
wobei die erhaltene Flüssigkeit gesammelt und auf einen pH-Wert von 3,0 eingestellt wurde. Die aus
der Kolonne erhaltene Lösung wurde auf eine andere mit einem stark sauren Kationenaustauschharz H-Typ
gepackte Kolonne gegossen und die nicht adsorbierten Substanzen durch Auswaschen mit Wasser entfernt,
während der adsorbierte Anteil anschließend mit wäßrigem 2 η-Ammoniak eluiert wurde. L
Durch Unterteilen des erhaltenen Eluäts in 50-ml-Fraktionen und Vereinigung nur der auf ninhydrinpositiven Fraktionen und Einengen dieser unter vermindertem Druck, worauf hierzu die dreifache Menge des erhaltenen Volumsns an 98%ig3n Äthanol zur Auskristallisation des r5-(N-Acetyl)-L-Orn".thins zügegeben wurde, wurden.2,8 g roher Kristalle an ό-(Ν-Acetyl)-L-Ornithin erhalten. Die rohen Kristalle wurden in einer kleinen Menge Wasser gelöst, mittels Aktivkohle entfärbt und dann umkristallisiert. Die wesent-
Durch Unterteilen des erhaltenen Eluäts in 50-ml-Fraktionen und Vereinigung nur der auf ninhydrinpositiven Fraktionen und Einengen dieser unter vermindertem Druck, worauf hierzu die dreifache Menge des erhaltenen Volumsns an 98%ig3n Äthanol zur Auskristallisation des r5-(N-Acetyl)-L-Orn".thins zügegeben wurde, wurden.2,8 g roher Kristalle an ό-(Ν-Acetyl)-L-Ornithin erhalten. Die rohen Kristalle wurden in einer kleinen Menge Wasser gelöst, mittels Aktivkohle entfärbt und dann umkristallisiert. Die wesent-
lichen physikalischen und chemischen Eigenschaften
der .dabei erhaltenen Kristalle sind' folgende:
• Tabellen
*i (c = 1,5 n-HCl) Versuchswert
24,8
Werte erhalten durch
Elementaranalyse
Elementaranalyse
C. 47,920/0
H 8,O5°/O
N ... 16,00%
Literaturwert 24,0
48,3 %
8,0% 16,1 °/o
ATCC 21 031. erhalten wurden, wobei 0,5 °/0 Pepton,
1,0% Maisquellwasser oder 0,7% Bouillon zu dem vorstehend aufgeführten Fermentierungsmedium als
Argininquelle zugegeben worden war.
Weiterhin wurden beim Vergleich der papierchromatographischen Wanderung dieser Substanz bei den
Lösungsmittelsystemen Butanol-, Essigsäure-, Wasser, Lutidin-Collidin (wassergesättigt), Phenol-Wasser und
Äthanol-Wasser-Harnstoff, Rt-Werte von 0,47, 0,17, 0,84 und 0,64 erhalten. Diese Werte sind identisch
mit den Rf-Werten für das Standardmaterial. Weiter- -hin ist auch das erhaltene Infrarotabsorptionsspektrum
völlig identisch mit dem in der Literatur für
ö-(N-Acetyl)-L-Ornithin angegebenen. Weiterhin wurden
in einer Hydrolysatlösung der erhaltenen Kristalle, die durch Behandlung derselben mit verdünnter Schwefelsäure
erhalten worden war, L-Ornithin und Essigsäure nachgewiesen.
Somit werden praktisch reine Kristalle von ö-(N-Acetyl)-L-Ornithin
wirksam unter Verwendung des erfindungsgemäßen Verfahrens erhalten.
B'ei.-spie-l .2
Die Züchtung wurde in der gleichen Weise wie im Beispiel 1 durchgeführt mit der Ausnahme, daß das
Fermentierungsmedium die folgende Zusammensetzung hatte:
. 8% Glucose
300 μg/ml Uracil
2°/o Ammoniumsulfat
0,15% KH8PO4
0,05% K2HPO1
0,05% MgSO4-7H2O
2% CaCO3
300 μg/ml Uracil
2°/o Ammoniumsulfat
0,15% KH8PO4
0,05% K2HPO1
0,05% MgSO4-7H2O
2% CaCO3
Der pH-Wert des Fermentiermediums betrug 7,2.
Aus der nachfolgenden Tabelle III ergeben si;h die
Mengen an <5-(N-Acetyl)-L-Ornithin und L-Ornithin,
die bei der Züchtung von Paracolobactnim coliforme
: Zugabe zu dem Fermentierungsmedium ■' |
<5-(N-Acetyl)- ' · L-Qrnithin ·'"·' gebildet |
L-Ornithin ., gebildet |
Maisquellwasser (1,0%) Pepton (0,5%) Bouillon (0,7%) |
10,8 mg/ml 12,0 mg/ml 2,3 mg/ml |
0,8 mg/ml 0,5 mg/ml 0,7 mg/ml |
Es ergibt sich daraus, daß große Mengen von <5-(N-Acetyl)-L-Ornithin, insbesondere bei Verwendung
von" Maisquellwasser oder Pepton gebildet werden, wobei nur sehr geringe Mengen an L-Ornithin als
Nebenprodukt erhalten werden.
B ei sp i el 3
Die Züchtung wurde in der gleichen Weise wie im Beispiel 1 und mit dem gleichen Mikroorganismus
ausgeführt, mit der Ausnahme, daß die Zusammensetzung des Fermentiermediums folgende war:
14% Glucose
0,15% KH2PO4
0,05% K2HPO4
0,05% MgSO4-7H2O
1,7% Ammoniumsulfat
3% CaCO3
0,15% KH2PO4
0,05% K2HPO4
0,05% MgSO4-7H2O
1,7% Ammoniumsulfat
3% CaCO3
Der pH-Wert des Kulturmediums betrug 7,2.
Die Mengen an 0-(N-Acetyl)-L-Ornithin im Kulturmedium
bei Züchtung in Anwesenheit von 1,0 % Maisquellwasser, 0,75% Hefeextrakt oder 1,0 %
Bouillon als Quelle für das erforderliche Arginin und die Pyrimidine sind in Tabelle IV zusammengefaßt.
40 . Tabelle IV | <HN-Acetyl)- L-Ornithin gebildet |
L-Ornithin -gebildet |
Zugabe zu dem Fermentierungsmedium |
4,4 mg/ml 5,3 mg/ml 3,3 mg/ml |
0,8 mg/ml 0,4 mg/ml 0,2 mg/ml |
45 Hefeextrakt (0,75%) .. Maisquell wasser (1,0%) Bouillon(1,0%) ...... |
Claims (2)
1. Verfahren zur biochemischen Herstellung von i5-(N-Acetyl)-L-Ornithin, dadurch gekennzeichnet,
daß man Paräcolobactrum coliforme ATCC 21 031 in Citrullin oder Arginin und mindestens
ein Pyrimidin oder einen Pyrimidin-Vorläufer als notwendige Wachstumsstoffe enthaltenden
Nährmedien ansonsten üblicher Zusammensetzung bei üblichen Bedingungen züchtet.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Pyrimidin Uracil, Uridin. Cytosin
oder Cytidin zugesetzt wird.
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE3486277T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Riboflavin. | |
DE1517837C (de) | Verfahren zur biochemischen Herstellung von delta-(N-Acetyl)-L-Ornithin | |
DE1517823A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von L-Lysin durch Fermentierung | |
DE2135246C3 (de) | ||
DE1695326A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Nicotinsaeureamidadenindinucleotid | |
DE2350210A1 (de) | Verfahren zur herstellung von larginin durch fermentierung | |
DE1517837B (de) | Verfahren zur biochemischen Herstel lung von delta (N Acetyl)-L Ornithin | |
DE2220508B2 (de) | Verfahren zur biotechnischen Herstellung cyclischer Adenosin-3',5'-monophosphorsäure | |
DE1795721C2 (de) | Verfahren zur fermentativen Herstellung von Orotidylsäure | |
DE2358496A1 (de) | Verfahren zur herstellung von l-serin | |
DE1642706B2 (de) | Verfahren zur mikrobiellen herstellung von guanosindi- und -triphosphat | |
DE1926072C (de) | Verfahren zur biochemischen Herstel lung von cyclischem Adenosin-3,5-monophosphat | |
DE1916813A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Nicotinsaeuremononucleotid | |
DE1517837A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von delta(N-Acetyl)-L-Ornithin | |
DE1517831C (de) | Verwendung von Fermentationsflussig keiten zur Gewinnung von Flavinadenindi nucleotid | |
DE1517860C (de) | Verfahren zur biotechnischen Herstel lung von Inosinsaure | |
DE1767612C (de) | Verfahren zur Herstellung von 5-Dehydroshikimisäure durch aerobes Züchten von Mikroorganismen | |
DE1770167C3 (de) | Verfahren zur fermentativen Herstellung von Orotidylsäure | |
DE1792724C3 (de) | Verwendung eines Fermentationsmediums zur Gewinnung von Nicotinamidadenin-dinucleotid | |
AT215077B (de) | Verfahren zur Herstellung 5, 6-Dimethylbenzimidazolcobalamin | |
DE1792819C2 (de) | Tenebrimycin-Antibiotikum VI und ein Verfahren zu dessen Herstellung | |
DE3248420C2 (de) | ||
DE2000879A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Uridin-5'-diphospho-glucose | |
DE1041896B (de) | Verfahren zur Herstellung von Aminosaeuren auf biotechnischem Wege | |
DE1543724B1 (de) | Verfahren zur mikrobiellen Herstellung von 5-Aminovaleriansaeure |