DE1293757B

DE1293757B - Reines, stabiles Tetracyclin-hexahydrat und Verfahren zu seiner Herstellung

Info

Publication number: DE1293757B
Application number: DEB79399A
Authority: DE
Inventors: Kaplan Murray A; Granatek Alphonse P
Original assignee: Bristol Myers Co
Current assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1963-11-27
Filing date: 1964-11-19
Publication date: 1969-04-30
Also published as: US3301899A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft reines, stabiles Komplexverbindungen zeigen zusätzlich antibakterielle Tetracyclin-hexahydrat und ein Verfahren zu seiner Wirksamkeit, wodurch sie nützlich zur Entfernung von Herstellung. Mikroorganismen von Laboratoriumsglaswaren sind.

Tetracyclin ist eine bekannte Verbindung und ein Das nach dem erfindungsgemäßen Verfahren geäußerst wertvolles Antibiotikum. Es ist besonders 5 reinigte Tetracyclin-hexahydrat hat eine helle Farbe wertvoll als Antibiotikum wegen seines breiten Wir- und zeigt eine bemerkenswerte Färb- und Wirksamkungsspektrums gegenüber pathogenen Mikroorga- keitsstabilität gegenüber Wärme und Licht, wenn es nismen. Gegenüber anderen bekannten Tetracyclinen längere Zeit gelagert wird. Die Verbindung ist somit wie Chlortetracyclin und Oxytetracyclin ist Tetracyclin wirksamer und besitzt vorteilhaftere Eigenschaften als in der Chemotherapie von bakteriellen Erkrankungen io Tetracyclin oder Tetracyclintrihydrat. wertvoller, da es bessere Blutspiegel und geringere In der Technik sind verschiedene Verfahren zur

Kontraindikationen als Chlortetracyclin und Oxy- Reinigung von Tetracyclin bekannt. Nach der USA.-tetracyclin ergibt und außerdem in alkalischen Medien Patentschrift 2 988 569 werden Verunreinigungen aus stabiler als Chlortetracyclin ist. einer sauren, wäßrigen Lösung von Tetracyclin durch

Tetracyclin wird gewöhnlich durch katalytische 15 Zugabe eines Alkanolamids ausgefällt. Nach dem EntHydrierung von Chlortetracyclin hergestellt, wie in der fernen der ausgefällten Verunreinigungen wird Tetra-USA.-Patentschrift 2 699 054 beschrieben ist, oder es cyclin durch Zugabe von Alkali ausgefällt. Nach der wird direkt durch Fermentation von Streptomyces deutschen Patentschrift 1 045 392 wird Tetracyclin aureofaciens oder Streptomyces viridifaciens gemäß durch die Bildung einer Tetracyclin-Harnstoff-Addiden USA.-Patentschriften 2 712 517, 2 734 018 oder 20 tionsverbindung mit nachfolgender Regenerierung des 2 739 924 erhalten. Die Hydrierung von Chlortetra- Tetracyclins durch Behandlung einer Lösung der cyclin ergibt eine Mischung von Tetracyclin in Chlor- Komplexverbindung in einem organischen Lösungstetracyclin, während Chlortetracyclin, Anhydrotetra- mittel mit Wasser oder einer Säure gereinigt, cyclin und Quatrimycin (4-Epitetracyclin) zusammen Mit diesem Verfahren wird zwar eine gewisse

mit dem Tetracyclin im Fermentationsprozeß erzeugt 25 Reinigung des Tetracyclins erreicht, das gebildete werden können. Die chemischen und physikalischen Produkt ist aber nicht beständiger als zuvor. Eigenschaften dieser Verunreinigungen sind so ähnlich, Nach der deutschen Patentschrift 1 038 036 erfolgt

daß sie durch Verfahren, die für die industrielle An- die Reinigung von Tetracyclin über dessen Methanolwendung geeignet sind, nur äußerst schwierig entfernt addukt. Das daraus hergestellte Tetracyclin-trihydrat werden können. Es ist jedoch wesentlich, daß diese 30 ist unbeständig, da es gegen Licht und Sauerstoff Verunreinigungen entfernt werden, bevor das Tetra- empfindlich ist.

cyclin therapeutisch angewandt wird. Bisher wurden Dieser Stand der Technik wird durch die Erfindung

die bei der Herstellung von Tetracyclin vorliegenden bereichert. Denn es wird nicht nur eine Reinigung des Verunreinigungen in befriedigendem Maße für die Tetracyclins erzielt, sondern das neue Produkt, Tetratherapeutische Verwendung verringert. Tetracyclin- 35 cyclin-hexahydrat, ist auch beständiger gegen Licht puder, Suspensionen und Lösungen haben jedoch und Wärme als andere Formen von Tetracyclin, häufig eine geringe Farbstabilität, wobei man annimmt, Bei der Durchführung des erfindungsgemäßen Ver-

daß diese besonders auf gewisse Verunreinigungen zu- fahrens wird Tetracyclin mit Formamid, Methylformrückzuführen ist, die im Tetracyclin nach der Reini- amid, Äthylformamid oder Dimethylformamid zugung verbleiben. Einige Tetracyclinprodukte neigen 40 sammengebracht. Diese Stufe wird am besten durch zum beträchtlichen Nachdunkeln innerhalb kurzer Zusetzen des Tetracyclins zu dem Amid unter Mischen Zeit; dadurch werden sie unansehnlich. durchgeführt. Nach kurzer Zeit bildet sich die Tetra-

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher cyclin-amidkomplexverbindung und fällt in kristalliner ein Verfahren zur Herstellung einer besonders reinen Form aus. In der Praxis wird Tetracyclin dem flüssigen und stabilen Tetracyclinverbindung, nämlich des 45 Amid in einer Menge von etwa 200 bis 500 mg Tetra-Tetracyclin-hexahydrats. cyclin pro Milliliter Amid und vorzugsweise von 300

Die Erfindung ist dadurch gekennzeichnet, daß bis 350 mg Tetracyclin pro Milliliter Amid zugesetzt. Tetracyclin bei einer Temperatur von ungefähr 5°C Die Temperatur wird vorzugsweise auf etwa 20 bis bis ungefähr 40⁰C mit Formamid, Methylformamid, 30⁰C gehalten; gewöhnlich wird das Verfahren jedoch Äthylformamid oder Dimethylformamid umgesetzt, 50 bei Raumtemperatur durchgeführt. Der Zusatz von die gebildete Tetracyclin-amidkomplexverbindung in etwa 1 ml Wasser zu 20 ml des Amids vor der Zugabe Wasser bei einer Temperatur unter 4O⁰C auf ge- des Tetracyclins steigert oft die Ausbeute an der schlämmt und das kristallene Tetracyclin-hexahydrat Tetracyclin-amidkomplexverbindung. aus dem Reaktionsgemisch abgetrennt wird. Das Tetracyclin wird gewöhnlich als Trihydrat der

Die in der ersten Stufe erhaltenen Komplexverbin- 55 freien Base zugesetzt. Rohes Tetracyclin und gereinigdungen enthalten eine äußerst reine Form des Tetra- tes Tetracyclin sind beide in gleicher Weise anwendbar, cyclins. Verunreinigungen, wie Chlortetracyclin, 4-Epi- Das Verfahren ist natürlich besonders wertvoll zur anhydrotetracyclin, Anhydrotetracyclin und Quatri- Reinigung von rohem Tetracyclin, mycin (4-Epitetracyclin) werden vorteilhafterweise Die ausgefällte Tetracyclin-amidkomplexverbindung

vom Tetracyclin durch die Bildung der Tetracyclin- 60 wird durch irgendeines der üblichen Trennverfahren, amidkomplexverbindungen abgetrennt. beispielsweise Filtration, gewonnen. Die Komplexver-

Die als Zwischenprodukte erhaltenen Komplexver- bindung enthält das Tetracyclin im wesentlichen frei bindungen Tetracyclin—Formamid, Tetracyclin—Me- von Chlortetracyclin, 4-Epianhydrotetracyclin, Anthylformamid, Tetracyclin—Äthylformamid und Tetra- hydrotetracyclin und Quatrimycin (4-Epitetracyclin). cyclin—Dimethylformamid sind neue Verbindungen. 65 Die Komplexverbindung kann getrocknet, falls ge-Sie können unmittelbar in Tetracyclin-hexahydrat um- wünscht, gelagert und anschließend unmittelbar in gewandelt oder längere Zeit gelagert werden, bevor sie Tetracyclin-hexahydrat übergeführt werden, in Tetracyclin-hexahydrat übergeführt werden. Die Dabei wird die Tetracyclin-amidkomplexverbindung

in feuchter oder trockner Form einfach in Wasser aufgeschlämmt, wobei sich Kristalle von Tetracyclinhexahydrat bilden. Vorzugsweise werden etwa 5 bis 20 ml Wasser pro Gramm der Tetracyclin-amidkomplexverbindung verwendet und die Temperatur auf weniger als 40⁰C gehalten.

Das Tetracyclin-hexahydrat wird durch Filtrieren oder andere geeignete Verfahren zur Abtrennung von Kristallen von der Mutterlauge gewonnen und an der Luft vorzugsweise bei etwa 37° C oder weniger getrocknet. Das nach diesem Verfahren hergestellte Tetracyclin-hexahydrat ist sehr färb- und wirksamkeitsstabil gegenüber Wärme und Licht und kann lange Zeit in trockenem Zustand oder in Form chemotherapeutischer Suspensionen gelagert werden. Es hat sich als farbstabiler gegenüber Wärme und Licht im trockenen Zustand als Tetracyclin-trihydrat erwiesen. Außerdem ist das aus der Tetracyclin-Dimethylformamidkomplexverbindung erhaltene mikrokristalline Tetracyclin-hexahydrat nahezu weiß und bleibt auch in wässerigen Suspensionen nahezu weiß.

Die folgenden Beispiele dienen zur Erläuterung der vorliegenden Erfindung.

Beispiel 1

a) Herstellung der Tetracyclin-Formamidkomplexverbindung

20 g des Trihydrats der Tetracyclinbase wurde in Formamid (100 ml) gelöst. Es trat eine rasche Kristallisation ein. Die Mischung wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die sehr hellgelbgefärbten Kristalle wurden abfiltriert, mit Formamid (25 ml) und Isopropanol (50 ml) gewaschen und 24 Stunden bei 37⁰C an der Luft getrocknet. Das Produkt, Tetracyclin-Formamidkomplexverbindung, hatte ein Gewicht von 18 g. Die Bildung der Tetracyclin-Formamidkomplexverbindung wurde durch Infrarotanalyse und Gaschromatographie bestätigt. Die Komplexverbindung hatte folgende Eigenschaften:

Biologische Wirksamkeit 940 y/mg

Prozent Wasser (Karl Fischer) 2,0

Prozent Stickstoff 11,52

Schmelzpunkt (kapillar,

unkorrigiert) 132 bis 133⁰C

Klett-Farbe¹) 4

[«]ff (0,1 n-HCl) -250°

r bei 215 πιμ = 240 EJ*_m (0,1 n-HCl) \ bei 267 ηιμ = 313

( bei 355 ηιμ = 243

*) Lösen von 10 mg/ml der Tetracyclin-Formamidkomplexverbindung in Formamid, Ablesen auf einem photoelektrischen Klett-Summerson-Colorimeter, das mit einem Grünfilter # 54 ausgerüstet war.

Man kann die Tetracyclin-Formamidkomplexverbindung wie folgt herstellen:

Das Hydrat der rohen Tetracyclinbase (750 g) mit einer biologischen Wirksamkeit von 980y/mg wurde langsam in Anteilen von 250 g unter schnellem Rühren des Formamide (3 1) diesem zugesetzt. Der viskose Brei wurde 2 Stunden gerührt. Die Kristalle wurden abfiltriert und mit Isopropanol (750 ml) gewaschen.

b) Herstellung von Tetracyclin-hexahydrat

Die feuchten Kristalle der Tetracyclin-Formamidkomplexverbindung wurden unter schnellem Rühren

in Wasser (2,5 1) gegeben, das Gemisch wurde 2 Stunden gerührt. Die Kristalle wurden abfiltriert, mit Wasser (11) und Isopropanol (500 ml) gewaschen und Stunden bei 37°C an der Luft getrocknet. Das Produkt, Tetracyclin-hexahydrat, wog 660 g und war frei von Formamid, wie durch Infrarotanalyse und Gaschromatographie gezeigt werden konnte; es hatte folgende Eigenschaften:

Biologische Wirksamkeit¹) .. 1020 (1220) y/mg
Chemische Wirksamkeit ... (1075) y/mg
Prozent Wasser

(Karl Fischer) 19,6

Prozent Stickstoff (6,16)

Schmelzpunkt
(kapillar, unkorrigiert) .... 165° C

Klett-Farbe²) 3

[«]f (0,1 n-HCl) -250° (-299°)

f bei 215 ηιμ = 264 (315) Ear; (0,1 n-HCl) bei 267 ηιμ = 340 (404)

( bei 215 ΐημ = 259 (309)

*) Die Werte auf wasserfreier Basis sind in Klammern angegeben.

²) 10 mg/ml Tetracyclin-hexahydrat in Formamid, Ablesen auf einem photoelektrischen Klett-Summerson-Colorimeter, das mit einem Grünfilter # 54 ausgerüstet ist.

Beispiel 2

a) Herstellung der

Tetracyclin-Dimethylformamidkomplexverbindung

300 g des Trihydrats der Tetracyclinbase wurden langsam einer Lösung von Wasser (75 ml) und Dimethylformamid (1500 ml) zugegeben und 3 Stunden gemischt. Die weißen Mikrokristalle wurden abfiltriert, mit Isopropanol (300 ml) gewaschen und Stunden bei 5O⁰C im Vakuum getrocknet. Das Produkt, die Tetracyclin-Dimethylformamidkomplexverbindung, hatte ein Gewicht von 254 g. Die Bildung derTetracyclin-Dimethylformamidkomplexverbindung wurde durch Infrarotanalyse und Gaschromatographie bestätigt. Die Verbindung hatte folgende Eigenschaften:

Biologische Wirksamkeit 930 y/mg

Chemische Wirksamkeit 945 y/mg

Prozent Wasser

(Karl Fischer) 0

Prozent Stickstoff 8,16

Schmelzpunkt
(kapillar, unkorrigiert) 151⁰C

Klett-Farbe¹) 6

[«]? (0,1 n-HCl) -226°

E}^% fOln-HCn /bei 270; ηιμ = 356

J—'lent l^i-L -¹-¹· J-Av-'l/ · <-, * ^y cc t^ss

^v \bei 355; ηιμ = 266

^x) Lösen von 10 mg/ml der Tetracyclin-Dimethylformamidkomplex-Verbindung in Formamid, Ablesen auf einem photog₀ elektrischen Klett-Summerson-Colorimeter, das mit einem Grünfilter # 54 ausgerüstet war.

Die Komplexverbindung kann auch in folgender Weise hergestellt werden:

g b) Herstellung von Tetracyclin-hexahydrat

100 g Tetracyclin-trihydrat wurden in 400 ml Dimethylformamid gegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden gerührt. Die Kristalle wurden abfiltriert, mit

ml Isopropanol gewaschen und dann unter schnellem Rühren in 250 ml Wasser gegeben. Das Rühren wurde 2 Stunden fortgesetzt. Dann wurde filtriert, und die abgetrennten Kristalle wurden mit ml Wasser und dann mit 200 ml Isopropanol gewaschen. Danach wurden sie 24 Stunden bei 37° C an der Luft getrocknet.

Das Produkt, Tetracyclin-hexahydrat, wog 94 g und war frei von Dimethylformamid, wie durch

Beispiel 4

a) Herstellung der Tetracyclin-N-Äthylformamidkomplexverbindung

Das Trihydrat der Tetracyclinbase (65 g) wurde in N-Äthylformamid (200 ml) gelöst. Die Kristallisation trat schnell ein. Die Mischung wurde 2 Stunden auf Raumtemperatur gehalten. Die Kristalle wurden abfiltriert, mit N-Äthylformamid (25 ml) und Iso-

Infrarotanalyse und Gaschromatographie festgestellt io propanol (100 ml) gewaschen und 24 Stunden bei

wurde; es hatte folgende Eigenschaften:

930 (1145) y/mg (1080) y/mg

Biologische Wirksamkeit¹)
Chemische Wirksamkeit .

Prozent Wasser

(Karl Fischer) 19

Prozent Stickstoff 5,13 (6,3)

Schmelzpunkt

(kapillar, unkorrigiert) ... 164° C

Klett-Farbe²) 3

[«]£ (0,1 n-HCl) -257° (-317°)

f bei 217 ;m^ = 240 (296)

El?» (0,1 n-HCl) \ bei 270; m^ = 322 (400)

[ bei 355; mji = 251 (310)

*) Die Werte auf wasserfreier Basis sind in Klammern angegeben.

^a) Lösen von 10 mg/ml Tetracyclin-hexahydrat in Formamid, Ablesen auf einem photoelektrischen Klett-Summerson-Colorimeter, das mit einem Grünfilter + 54 ausgerüstet ist.

Beispiel 3

a) Herstellung der Tetracyclin-N-Methylformamidkomplexverbindung

50 ° C im Vakuum getrocknet. Es wurden 51 g der Tetracyclin-N-Äthylformamidkomplexverbindung gewonnen, die gemäß der Infrarotanalyse eine Amidstruktur besaß und folgende Elementaranalyse aufwies: C = 58,4%; H = 6,08%; N = 8,25% hatte folgende Eigenschaften:

Biologische Wirksamkeit 1000 y/mg

Prozent Wasser

(Karl Fischer) 5

Schmelzpunkt

(kapillar, unkorrigiert) 133 bis 135⁰C

Ia]¹S (0,1 n-HCl) -230°

b) Herstellung von Tetracyclin-hexahydrat

Die vorstehend hergestellte Tetracyclin-N-Äthylf ormamidkomplexverbindung (50 g) wurde in Wasser (500 ml) gegeben und 1 Stunde auf geschlämmt. Die Kristalle wurden abfiltriert mit Wasser (150 ml) gewaschen und 24 Stunden bei 37⁰C an der Luft getrocknet. Das 48 g wiegende Tetracyclin-hexahydrat wurde zurückgewonnen und enthielt 20,2% Wasser (Karl Fischer), während die biologische Wirksamkeitsprobe 980 y/mg Tetracyclin ergab.

60 g des Trihydrats der Tetracyclinbase wurden in B e i s ρ ι e 1 5

N-Methylf ormamid (200 ml) gelöst. Die Kristalli- 25 g einer Mischung, die 75 % des Trihydrats der

sation trat schnell ein. Die Mischung wurde 2 Stunden Tetracyclinbase, 5 % des Hydrats der Chlortetracyclinauf Raumtemperatur gehalten. Die Kristalle wurden base, 10 % Ammonium-Quatrimycin (4-Epitetracyclin) abfiltriert, mit N-Methylf ormamid (25 ml) und Iso- 40 und 10% Anhydrotetracyclinbase enthielt, wurde in propanol (100 ml) gewaschen und 24 Stunden bei Formamid (150 ml) gelöst und konnte 2 Stunden 50° C im Vakuum getrocknet. Es wurden 48 g der kristallisieren. Die entstandenen Kristalle der Tetra-Tetracyclin-N-Methylf ormamidkomplexverbindung ge- cyclin-Formamidkomplexverbindung wurden abfilwonnen, welche die Amidstruktur aufwies, wie durch triert, mit Formamid (30 ml) und anschließend mit Infrarotanalyse gezeigt wurde, und die folgende 45 Isopropanol (100 ml) gewaschen. Die feuchten Kristalle Elementaranalyse besaß: C = 58%; H = 5,85%; wurden dann in Wasser (300 ml) gegeben und 1 Stunde

gemischt. Die gebildeten Kristalle wurden abfiltriert, mit Wasser (100 ml) gewaschen und 24 Stunden bei 37°C an der Luft getrocknet.

Die Reinheit des Tetracyclin-hexahydrats wurde durch Papierchromatographie nach dem Verfahren von M. A. Kaplan und F. H. Buckwalter, Anhydroquatrimycin, An Epimer of Anhydrotetracycline: Antibiotics Annual 1957/1958, Medical Encyclopedia, Inc., New York, bestimmt. Die Papierchromatographie ergab im wesentlichen nur eine

N = 13,78 %· Die Komplexverbindung hatte folgende Eigenschaften:

Biologische Wirksamkeit 830 y/mg

Prozent Wasser

(Karl Fischer) 1,1

Schmelzpunkt

(kapillar, unkorrigiert) 107 bis 110°C

[«]ff (0,1 n-HCl) -194°

b) Herstellung von Tetracyclin-hexahydrat

Die vorstehend hergestellte Tetracyclin-N-Methylformamidkomplexverbindung (35 g) wurde in Wasser (350 ml) gegeben. Die Mischung wurde 1 Stunde aufgeschlämmt. Die Kristalle wurden abfiltriert, mit Wasser (100 ml) gewaschen und 24 Stunden bei 37° C an der Luft getrocknet. Das 35 g wiegende Tetracyclinhexahydrat wurde zurückgewonnen und enthielt 19,9% Wasser (Karl Fischer), während die biologische Wirksamkeitsprobe 1030 mg Tetracyclin ergab.

Tetracyclinzone. Wesentliche Anteile an Chlortetracyclin-, Anhydrotetracyclin- und Quatrimycinzonen waren unter ultraviolettem Licht nicht sichtbar.

Vergleich der Färb- und Wirksamkeitsstabilität

Es wurde ein Vergleich der Färb- und Wirksamkeitsstabilität des Hexahydrats der Tetracyclinbase durchgeführt, die über die Bildung von Tetracyclin-Formamid- und Dimethylformamidkomplexverbindungen aus rohem Tetracyclin hergestellt wurde, und zwar gegenüber dem Trihydrat der Tetracyclinbase, die durch zweimaliges Umkristallisieren von rohem Tetra-

cyclin aus Aceton und aus wässerigen Lösungen, die Natriumbisulfit enthielten, gereinigt wurde.

Es wurden wässerige Suspensionen der drei gereinigten Tetracyclinprodukte hergestellt, die 25 mg/ml Tetracyclin und 0,1 Gewichtsprozent Natriumpyrosulfit Na₂S₂O₅ enthielten. Die Suspensionen wurden durch ein Stahlsieb aus rostfreiem Stahl mit 0,074 mm lichter Maschenweite gegeben, mit Phosphorsäure auf einen pH-Wert von 4,2 eingestellt und ohne Entlüftung oder Ausspülen mit Stickstoff in Flintglasflaschen gefüllt.

Die auftretenden Farbwerte der Suspensionen wurden wöchentlich bei 56 ⁰C gemessen. Diese wurden durch Auflösen von 0,5 ml der Tetracyclin-Wasser-Suspensionen in 9,5 ml Formamid und Ablesen auf einem photoelektrischen Klett-Summerson-Colorimeter erhalten, das mit einem Grünfilter # 54 ausgerüstet war. Das prozentuale Absinken der Wirksamkeit wurde aus wöchentlichen biologischen Wirksamkeitsprüfungen berechnet.

Die Daten zeigen, daß die Tetracyclin-Wasser-Suspsnsionen, die das gemäß dem Verfahren der vorliegenden Erfindung hergestellte Tetracyclin-hexahydrat enthalten, eine verbesserte Färb- und Wirksamkeitsstabilität aufweisten; sie sind in der nachfolgenden Tabelle enthalten.

Färb- und Wirksamkeitsstabilität von Tetracyclin-Wasser-Suspensionen, die bei 56⁰C gelagert wurden

Original farbe Klett-Farbe
Lagerung in Wochen

Absinken der Wirksamkeit
in Prozent

Lagerung in Wochen

1 I 2 I 3 I 4

Zweimal umkristallisiertes Tetracyclin-trihydrat

Tetracyclin-hexahydrat, über die Formamid-komplexverbindung hergestellt

Tetracyclin-hexahydrat, über die Dimethylformamidkomplexverbindung hergestellt

29 ! 244

20

24

42

123

32

12

59 I —

16

12 21 49

Aus der vorstehenden Tabelle ist ersichtlich, daß das hergestellte Tetracyclin-hexahydrat rein, als auch färb- und wirksamkeitsbeständig gegenüber Licht und

Wärme ist. _. .. .

Claims

Patentansprüche:

1. Tetracyclin-hexahydrat.

2. Verfahren zur Herstellung von reinem, stabilen Tetracyclin-hexahydrat, dadurch gekennzeichnet, daß Tetracyclin bei einer Temperatur von ungefähr 5°C bis ungefähr 4O⁰C mit Formamid, Methylformamid, Äthylformamid oder Dimethylformamid umgesetzt, die gebildete Tetracyclinamidkomplexverbindung in Wasser bei einer Temperatur unterhalb 40⁰C aufgsschlämmt und das kristallene Tetracyclin-hexahydrat aus dem Reaktionsgemisch abgetrennt wird.

909 518/558