CZ45395A3

CZ45395A3 - Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu

Info

Publication number: CZ45395A3
Application number: CZ95453A
Authority: CZ
Inventors: Michael Catt; John Coley; Paul James Davis
Original assignee: Unilever N. V.
Priority date: 1992-08-21
Filing date: 1993-08-10
Publication date: 1999-07-14
Also published as: NO950636D0; PL307572A1; CA2142264A1; WO1994004926A1; BG99437A; US5467778A; KR950703149A; JPH08500671A; EP0656120A1; AU5538698A; NZ254823A; US6234974B1; DE69308147D1; CZ286000B6; RU95106505A; GB9217864D0; AU4709493A; BG62063B1; NO950636L; FI950759A0

Description

(54) Název přihlášky vynálezu:

Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu (57) Anotace:

Řešení tvoří způsob monitorování stadia ovulačního cyklu u samic savců, zejména člověka, spočívající v opakovaném testování koncentrace alespoň jedné látky v tělní tekutině, která má významný vztah ke stadiu ovulačního cyklu při nejmenším v preovulační fázi, postup spočívá v tom, že a/ testování koncentrace uvedené látky je zahájeno v průběžném ovulačním cyklu v časovém rozmezí alespoň 2 dny po začátku menstruace až 2 dny přede dnem, v němž nastala ovulace u téhož subjektu v jednom nebo více předcházejících cyklech nejdříve, b/ ze získaných výsledků se identifikuje změna koncentrace analyzované látky, indikující blížící se ovulaci srovnáním s referenční hodnotou této látky, získanou sledováním odpovídající koncentrace této látky v průběhu alespoň jednoho předchozího cyklu u téhož subjektu.

Ti/te

T/í

Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu

Oblast techniky ⁵

Vynález se zabývá způsoby monitorování ovulačního cyklu u samic savců, a zvláště u žen,

Dosavadní stav techniky

Hlavním, i když ne jediným, aspektem vynálezu je zajištění spolehlivé informace o stavu plodnosti.

_η _ ženy v rámci antikoncepce, a to jednoduchým způsobem, který mohou snadno používat i laici v domácím prostředí.

Výraz plodná fáze používaný v této patentové přihlášce označuje v menstruačním cyklu ženy časový interval kolem ovulace, ve kterem vece pohlavní styk ve většině případů k početí.

Zajištěním spolehlivé informace o stavu plodnosti se rozumí, že je uživatelka pomocí určitého způsobu monitorování informována o začátku plodné fáze cyklu. Navrhované způsoby monitorování cyklu jsou založeny na sledování jednoho nebo více parametrů měnících se v závislosti na ovulaci. Příkladem těchto parametrů může být koncentrace analyzované látky v

3q tělní tekutině, jako je koncentrace estradiolu nebo jeho metabolitů, například estron-3-glukuronidu (E3G).

Jinými používanými parametry jsou měření bazální

ŠíduL O].02.qš teploty nebo sledování různých fyziologických změn, jako je například charakter vaginálního hlenu.

Těmito parametry se zabývá mnoho vynikajících akademických studií. Vyplývá z nich, že používané parametry korelují se stavem plodnosti průměrného člena velkého populačního vzorku.

Avšak při pokusu vypracovat skutečně praktický způsob monitorování cyklu vhodný pro jednotlivce vychází najevo skutečnost, že mnoho individuálních subjektů se od průměru liší délkou cyklu a nebo trváním a načasováním plodné fáze. Rozdíly mezi jednotlivci, a dokonce rozdíly mezi jednotlivými cykly u téhož jedince, vedou k tomu, že jsou průměrná data z populace pro praktické použití příliš nespolehlivá.

Také prahová nebo základní hladina parametru, který je zvolen za signál nadcházející plodné fáze, se může od jednotlivce k jednotlivci výrazně lišit. Průměrná prahová nebo základní hladina stanovená na základě dat z populace může být tedy pro individuální použití zcela nevhodná.

Vynález spočívá ve způsobu monitorování ovuíačního cyklu zejména pro účely antikoncepce, který je založen na sledování významných charakteristik individuálního subjektu a který bere v úvahu možné odchylky.

Důležitým aspektem vynálezu je zajištění spolehlivé informace o stavu plodnosti bez nutnosti častého (např. denního) testování v průběhu každého ovuíačního cyklu. Nezbytnost pravidelného, např. denního, testování v průběhu cyklu je charakteristická pro mnoho dříve navrhovaných způsobů monitorování ovulačního cyklu.

V odborné literatuře lze najít řadu studií zabývajících se profily hormonů v moči v průběhu ovulačního cyklu. Největší pozornost je, coby ukazatelům stadia cyklu, věnována derivátům estradiolu, zvláště estron-3-glukuronidu (E3G), luteinizačnímu hormonu (LH) a derivátům progesteronu, zvláště pregnandiol-3glukuronidu (P3G).

LH je využíván komerčně pro zvýšení pravděpodobnosti početí.

Předpovídáním plodné fáze ovulačního cyklu pomocí každodenního měření hladin hormonů E3G a Pd-3-G (t.j. P3G) v první ranní moči se zabývá práce A prospective multicentre study to develop universal tests for predicting the fertile period in women (WHO, Int J Fertil, 30 (3), 1985, str. 18-30). Ačkoli hlavním cílem této studie je analyzovat rozdíly ve výpočtech plodné fáze cyklu u žen různých ras, vychází tato práce z předpokladu, že relativní hladiny E3G a Pd-3-G mohou být použity k určení začátku a konce plodné fáze. Pokud je začátek plodné fáze definován jako trvalý vzestup hladiny E3G v moči, pak konec této plodné fáze (t.j. začátek luteální fáze) nastává 5 dni po pozorovaném vrcholu E3G. Podobně, pokud je začátek plodné fáze definován jako vzestup poměru E3G : Pd-3-G, pak konec plodné fáze nastává 6 dní po té, co je pozorována nejvyšší hodnota tohoto poměru.

V článku New asseys for identifying the fertile phase, (Int J Gynecol Obstet, 1989, Suppl 1, str. 111-122) diskutují autoři Brown, Blackwell, Holmes a Smyth možnost předpovědi ovulace pomocí stanovení hladiny estrogenu, ačkoli estrogen sám o sobě je pro předpověď ovulace nespolehlivý. Za hormonální markér je považován také pregnandiol, který označuje konec plodného období. Ve výše zmíněných studiích je nezbytné zdržet se pohlavního styku v průměru 17 dní; spokojenost uživatelky s takovou antikoncepční metodou a ochota testovaných párů v ní pokračovat, jsou nepřímo úměrné počtu dnů, po které je nutno se zdržet pohlavního styku. Ve studii jsou hladiny É3G a P3G měřeny denně, ale autory článku je zvažována možnost, že pro stanovení plodného období měřením E3G a P3G stačí 12 měření měsíčně. Ve snaze snížit počet dnů sexuální abstinence na teoretických minimálních sedm dní je navrhováno používat pro předpověď plodného období kombinaci hodnocení stavu cervikálního hlenu se stanovením nesymptomatických markérů.

Určování plodného období pomocí stanovení několika látek v moči diskutuje Collins v článku Biochemical Indices of Potential Fertility (Int J Gynecol Obstet, 1989, Suppl. 35-43). Avšak užívané testy jsou v předpovědi plodné fáze úspěšné jen v 80% i méně, navíc ve všech případech je délka plodné fáze (a tím i doby zdrženlivosti) větší než 10 dní.

Patentová přihláška EP 367 615 (Monocloňal Antibodies lne) popisuje způsob přirozené kontroly porodnosti využívající měření metabolitu (progesteronu) v moči, coby ukazatele stadia menstruačního cyklu. Jedinými sledovanými hormony jsou metabolity progesteronu, takže metoda stanovuje pouze bezpečnou luteální fázi.

V článku Fertility Awarness: Jet-Age Rhythm Method? (Science, 1 June 1990, str. 1061-2) navrhuje Djerassi určování plodné fáze pro účely antikoncepce, a zvláště koncepce, pomocí analýzy tělních tekutin (t.j.

krve, moči a slin). V článku se předpokládá, že začátek plodného období lze bezpečně stanovit pomocí nárůstu koncentrace estradiolu (nebo jeho metabolitů). Začátek luteální fáze může být určen buď pomocí druhého vzestupu koncentrace estradiolu nebo pomocí většího nárůstu koncentrace progesteronu (nebo jeho metabolitů).

Z této literatury vyplývají následující závěry:

estradiol a jeho metabolity, zvláště E3G, jsou 15 jedinými hormony v moči, které mohou být použity v preovulační fázi cyklu jako dostatečně včasné varování pro antikoncepční účely; a jakýkoli test, který má spolehlivě určit stav ₂θ plodnosti pro účely antikoncepce, musí zahrnovat měření

E3G nebo ekvivalentní molekuly a zároveň musí zaznamnenat vzestup koncentrace E3G, který předchází ovulaci.

Nicméně, z literatury (například viz Djerassi) ²³ zároveň vyplývá, že žádný uspokojivý test založený na měření E3G zatím vyvinut nebyl.

Jelikož bazální hladina E3G výrazně kolísá od jedince k jedinci, má se obecně za to, že není možné

2Q žádnou jednoduchou, univerzálně použitelnou zkoušku vyvinout.

Ve snaze obejít tento problém jsou užívány složité matematické postupy, (např. CUSUM”). Pomocí nich je možné během ovulačního cyklu vypočíst prahovou koncentraci E3G a zaznamenat každý signifikantní vzestup koncentrace E3G vůči prahové hodnotě. Nevýhodou těchto systémů ale je, že v okamžiku, kdy je matematicky zaznamenána signifikantní změna, může být z hlediska antikoncepce příliš pozdě. Z tohoto důvodu se obecně soudí, že pomocí CUSUM nelze zajistit prospektivní informaci o stavu plodnosti. Přehled metod založených na CUSUM podává Royston ve Statistics in

Medicine, Vol. 10 (1991) 221-240.

Při shrnutí výsledků dříve navrhovaných způsobů určování plodné fáze je zřejmé, že stanovená plodná fáze je příliš dlouhá a tak je příliš dlouhá i doba, kdy je nutno zdržet se pohlavního styku. Velmi často, například v EP 367 615, trvá doba zdrženlivosti od menstruace do konce plodné fáze. To je bezpochyby dáno obtížností přesného stanovení začátku plodného období. Jedním z rysů dříve navrhovaných způsobů určování plodné fáze také je, že metoda je z hlediska antikoncepce spolehlivá jen při častém, většinou každodenním, měření hladin hormonů v moči během cyklu.

Pro zajištění spolehlivosti antikoncepční metody je důležité, aby byl pomocí určitého způsobu monitorování v cyklu zcela zřetelně označen začátek normálně nadcházející plodné fáze. Přičemž termín normálně může znamenat jak normálně v rámci dat z populace, tak normálně pro individuální subjekt.

2Q Dříve navržené způsoby monitorování se vyznačují velkou opatrností a tudíž nezbytností provádět testování příslušného parametru v průběhu celého cyklu, a zvláště ihned od začátku cyklu (od začátku menstruace). Z hlediska uživatelky je nesporně výhodnější, pokud stačí, aby prováděla testování po srovnatelně kratší dobu než je celý cyklus. Vedle pohodlnosti zde hraje roli i cena způsobu monitorování, která je samozřejmě nižší, když je, například, pro každý měsíc potřeba menší množství testovacího zařízení na jedno použití.

Obecně lze počet testů snížit tak, že je pomocí dat získaných v populaci definováno, do kterého určitého dne cyklu, nebo po jaký časový interval od začátku menstruace není nutné testy provádět. Avšak vzhledem k individuální variaci nejsou jakékoli všeobecně platné závěry odvozené z dat v populaci dostatečně bezpečné (viz výše).

L5

Podstata vynálezu

Pro účely této patentové přihlášky bude estradiol a všechny jeho měřitelné metabolity souhrnně označen jako E3G. Vedle již zmíněného estron-3-glukuronidu je možné podle vynálezu testovat tyto metabolity estradiolu: estradiol-3-glukuronid, estradiol-17-glukuronid, estriol-3-glukuronid, estriol-16-glukuronid a (pouze u subjektů nehumánního původu) estron-3-sulfát. Jak vyplyne z následujícího· popisu, vynález lze aplikovat na data získaná měřením koncentrací jiných látek analyzovaných v tělní tekutině, které mají vztah ke stadiu ovulačního cyklu. Nejvhodnějšími látkami k analýze jsou hormony a jejich metabolity, například folikuly stimulující hormon (FSH). Příkladem relativně dostupné tělní tekutiny jsou sliny, cervikální hlen, pot, kožní maz, slzy a poševní hlen. Samozřejmě lze použít i vnitřní tělní tekutiny, například krev, jejichž nevýhodou .'ale je, že jsou odebírány invazívními technikami.

I

Výhodou tohoto způsobu monitorováni cyklu je, že měření koncentrace vybrané látky nebo látek v O tělní tekutině nemusí být absolutní. Stačí, aby byl ¹ testováním analyzované látky získán určitý signál, , i který má vztah k aktuální koncentraci a který lze převést na číselnou hodnotu. Porovnáním takto získaných číselných hodnot z různých stádií cyklu se určí, zdali došlo k' signifikantní změně aktuální koncentrace nebo ne. Termín koncentrace analyzované látky užívaný v této patentové přihlášce a v nárocích má tedy přenesený význam. .

, Podstatu vynálezu tvoří způsob monitorování stadia ovulačního cyklu u samic savců, zejména člověka, spočívající v opakovaném testování koncentrace alespoň jedné látky v tělní tekutině, která má významný vztah ke stadiu ovulači ního cyklu při nejmenším v preovulační fázi, postup spočívá;

v tom, že

a) testování koncentrace uvedené látky je zahájeno v průběžném ovulačním cyklu v časovém rozmezí alespoň 2 dny po začátku menstruace až 2 dny přede dnem, v němž nastala ovulace u téhož subjektu v jednom nebo více předcházejících cyklech nejdříve,

I ! b) ze získaných výsledků se identifikuje změna koncentrace analyzované látky, indikující blížící se ovulaci srovnáním s referenční hodnotou této látky, získanou sledováním odpovídající koncentrace této látky v průběhu alespoň

I jednoho předchozího cyklu u téhož subjektu.

i

Ke stanovení je možno použit testovací kit, který se skládá z:

a) jednoho nebo více zařízení na testování výše zmíněné alespoň jedné analyzované látky ve výše zmíněné tělní tekutině;

b) zařízení, které podle srovnání koncentrace analyzované látky s referenční hodnotou, odvozenou z jednoho nebo více předcházejících cyklů, umožní uživatelce určit stav plodnosti v současném cyklu; a

c) zařízení, které podle dne, na něž nastala u téhož subjektu ovulace v alespoň jednom předcházejícím cyklu, umožní uživatelce přesně stanovit den začátku testování.

Je výhodné pokud jsou v testovacím kitu zařízení b) a c) spojená a obsahují elektronické zařízení naprogramované pro použití při způsobu monitorování cyklu podle vynálezu.

Součástí kitu je také elektronické zařízení pro způsob monitorování stadia ovulačního cyklu u savce, které je naprogramované na zpracování dat z testování analyzované látky v tělní tekutině v průběhu alespoň části preovulační fáze cyklu.a na rozpoznání takové změny koncentrace analyzované látky vůči referenční hodnotě, která je známkou blížící se ovulace (referenční hodnota je odvozená z dat získaných testováním koncentrace analyzované látky v průběhu jednoho nebo více předcházejících cyklů). Toto zařízení je zároveň schopno určit začátek testování analyzované látky, který nastává několik dní po zahájení menstruace, ale nejméně 2 dny před dnem, na který nastala u téhož individuálního subjektu ovulace v jednom nebo více předcházejících cyklech.

Užívá se tedy zařízení na monitorování ovulačního cyklu u lidí, jehož součástí je zařízení na zahájení zaznamenávání cyklu, zařízení na měření (v případě potřeby ve spojení s jedním nebo více zařízeními na testování koncentrace analyzované látky čitelnými monitorovacím zařízením) a zaznamenávání koncentrace E3G v moči, zařízení na stanovení prahové koncentrace E3G podle měření během neplodné a přechodné fáze alespoň v jednom přecházejícím cyklu a prostředky na upozornění uživatelkv v případě, že naměřená koncentrace E3G přesahuje před začátkem plodné fáze cyklu určený práh, zařízení na měření (v případě potřeby ve spojení s jedním nebo více testovacími zařízeními čitelnými monitorovacím zařízením) a zaznamenávání koncentrace LH a nebo P3G v moči, zařízení, které z koncentrací LH a nebo F3G určí den, na který nastala ovulace v jednom nebo více předcházejících cyklech nejdříve a zařízení, které upozorní uživatelku na nejvhodnější den pro začátek testování E3G v současném cyklu, přičemž tento nejvhodnější den pro začátek testování E3G je alespoň 5 dní po začátku menstruace současného cyklu, ale nejméně 2 dny před dnem, ne který nastala ovulace v předchozích cyklech nejdříve.

Koncentrace analyzované látky může být stanovena v hodnotách absolutních nebo v hodnotách relativních, například jako její poměr k referenční koncentraci analyzované látky ze stejného vzorku tělní tekutiny.

Vynález zahrnuje jakýkoli způsob monitorování stadia cyklu, při němž jsou srovnávány vlastnosti tělní tekutiny (například vazkost, iontová pevnost nebo tažnost) se vztahem ke stadiu ovuíačního cyklu s referenční hodnotou, která je pro subjekt stanovena na základě dat získaných v průběhu jednoho nebo více předchozích cyklů.

Nejpohodlněji lze příslušnou referenční hodnotu, např. prahovou hodnotu, určit z hodnot získaných pomocí rolling referenční baze sestávající . z neměnného počtu po sobě následujících cyklů těsně předcházejících cyklu současnému. Tuto rolling referenční bázi tvoří 4 až 10 těsně předcházejících cyklů, s výhodou 5 až 6 těsně předcházejících cyklů. Pomocí takové rolling referenční baze je možné zachvrit každý významný posun v prahové hodnotě u individuálního subjektu. Referenční hodnota pro další . cyklus může být, například, průměr referenčních hodnot z dat volitelně získaných v cvklu nebo cyklech těsně předcházejících.

Je výhodné, když jsou při tomto způsobu monitorování cyklu testovány pouze vzorky moči.

• Tento způsob monitorování stadia ovuíačního cyklu nezahrnuje měření bazální teploty, zvláště pokud je nutné provádět měření v průběhu každého cyklu.

Vhodnou látkou k analýze je estradiol nebo jeho metabolit, například estron-3-glukuronid.

Dále se popisuje také elektronické zařízení pro způsob monitorování stadia ovuíačního cyklu u savce, například u ženy, které je naprogramované na zpracování dat z testování analyzované látky v tělní tekutině v průběhu alespoň části preovulační fáze současného cyklu a na rozpoznání takové změny koncentrace analyzované látky vůči referenční hodnotě, která je známkou bližici se ovulace (referenční hodnota je pro individuální subjekt odvozená z dat získaných testováním koncentrace analyzované látky v průběhu jednoho nebo více předcházejících ovuiačnich cyklů).

Elektronické zařízení je součástí zaznamenávaciho zařízení, které jednak zaznamenává výsledky z testování koncentrace analyzované látky a jednak zobrazuje informaci o stadiu probíhajícího cvulačního cyklu individuálního subjektu, jehož vzorky' jsou testovány. Je výhodné, pokud má zaznamenávaci zařízení prostředky, jimiž měří výsledky ze zařízení na testování koncentrace analyzované látky po jeho přiloženi k zaznamenávacímu zařízení.

Dále bude popsánotaké zařízení na testování koncentrace analyzované látky v tělní tekutině, které se používá v kombinaci s elektronickým zařízením a se zaznamenávacím zařízením podle vynálezu. Zařízení na testování koncentrace analyzované látky obsahuje součást na sebrání vzorku tělní tekutiny a prostředky na provedení imunochromatografie, které podávají výsledky testování ve formě čitelné pro měřící zařízení zaznamenávaciho zařízení.

Využívá se tedy testovací kit pro zjištění' stadia probíhajícího ovulačního cyklu u savce, resp. u ženy, který se skládá z jednoho nebo více zařízení na určování koncentrace (relativní nebo absolutní) analyzované látky, která má vztah ke stadiu ovulačního cyklu, v tělní tekutině a z elektronického zařízení naprogramovaného na zpracování dat z testování koncentrace analyzované látky v průběhu alespoň části preovulační fáze cyklu a na rozpoznání takové změny koncentrace analyzované látky vůči referenční hodnotě, která je známkou blížící se ovulace (referenční hodnota je odvozena z dat získaných testováním koncentrace

-* analyzované látky během jednoho nebo více předcházejících cyklů).

¹⁰ ? Testovací kit obsahuje několik zařízení na testování koncentrace analyzované látky v tělní tekutině na jedno použití.

Nej lepší uspořádání testovacího kitu je, pokud na něm lze, kromě estradiolu nebo jeho metabolitu v moči, např. E3G, testovat.a elektronicky zpracovat současně koncentraci LH v moči.

Důležitým aspektem vynálezu je způsob _2Q předpovídání plodného období v probíhajícím cyklu u individuálního savčího, např. lidského, subjektu podle změny koncentrace analyzované látky v tělní tekutině během preovulační fáze, která má vztah ke stadiu ovulačního cyklu. Změna koncentrace je hodnocena vzhledem k prahové hodnotě, která je určena podle měření koncentrace analyzované látky v tělní tekutině v průběhu preovulační fáze nejméně jednoho předcházejícího ovulačního cyklu. Vhodnou analyzovanou látkou je E3G v moči; prahová koncentrace odvozená pro právě probíhající cyklus je ta koncentrace, která je v předcházejícím cyklu častěji překračována během, celkového počtu dnů přechodné fáze než během stejného počtu dnů neplodné fáze, která přechodné fázi předchází.

Kit zahrnuje zařízení na monitorování savčího,, např. lidského, ovulačního cyklu, jehož součástí je zařízení na zahájení zaznamenávání cyklu, zařízení na měření (v případě potřeby ve spojení s jedním nebo více zařízeními na testování koncentrace analyzované látky čitelnými monitorovacím zařízením) a zaznamenávání koncentrace E3G v moči, zařízení na stanovení prahové koncentrace E3G v moči podle měření koncentrace E3G během neplodné a přechodné fáze alespoň v jednom přecházejícím cyklu a prostředky na upozornění uživatelky v případě, že naměřená koncentrace E3G přesahuje před začátkem plodné fáze cyklu určený práh. Součástí vynálezu je také kit na monitorování savčího, např. lidského, ovulačního cyklu, který se skládá z výše popsaného zařízení a z alespoň jednoho zařízení schopného testovat koncentraci E3G v moči.

Uvedený kit zahrnuje také elektronické zařízení, jako je mikroprocesor, naprogramované na použití při způsobu monitorování stadia ovulačního cyklu podle vynálezu.

Nikde v literatuře nelze najít zmínku o tom, že se referenční hodnota koncentrace analyzované látky, t.j. prahová hodnota, stanovuje nikoli na základě měření získaných během probíhajícího cyklu, ale na základě měření v jednom nebo více cyklech předcházejících u téhož subjektu.

Vynález spočívá v kombinovaném způsobu monitorování stadia ovulačního cyklu, který respektuje charakteristiky individuálního subjektu.

Testování začíná alespoň 3, s výhodou alespoň 4, dny před dnem, na který nastala ovulace v jednom nebo více předcházejících dnech u téhož individuálního subjektu nejdříve.

Nej časnější termín aktuální ovulace je odvozen z dat sbíraných během posledních 3, s výhodou během posledních 5, po sobě následujících předcházejících cyklů.

Nej časnější termín aktuální ovulace pro výpočet časového intervalu pro testování v současném cyklu je v nej lepším případě odvozen z hodnot získaných v posledním těsně předcházejícím cyklu.

Nejpohodlněji lze den, na který nastala ovulace v předchozích cyklech nejdříve, určit z hodnot získaných pomocí rolling referenční baze sestávající z neměnného počtu po sobě následujících cyklů těsně předcházejících cyklu současnému. Tuto rolling referenční bázi tvoří 4 až 10 těsně předcházejících cyklů, s výhodou 5 až 6 těsně předcházejících cyklů. Pomocí takové rolling referenční baze je možné zaznamenat každý významný posun v ovulaci a upravit podle něj začátek dalšího testování.

Svrchu popsaný testovací kit se tedy skládá z jednoho nebo více testovacích zařízení na stanovení koncentrace (absolutní nebo relativní) výše zmíněné alespoň jedné analyzované látky ve výše zmíněné tělní tekutině, z návodu, ve kterém se uživatelka dozví, že s testováním se začíná v průběhu výše popsaného časového intervalu a ze zařízení, které uživatelce umožní odvodit výše popsaný časový interval a nebo přesně určit začátek testování, pokud je znám den ovulace v alespoň jednom předcházejícím cyklu.

Vynález může být obecně aplikován na jakýkoli způsob monitorování stadia ovulačního cyklu individuálního savčího, např. lidského, ženského subjektu spočívající v měření určitého parametru, který má vztah ke stadiu ovulačního cyklu a který vykazuje zaznamenatelnou změnu v průběhu preovulační fáze cyklu, přičemž tato změna nastává nejméně 2 a s výhodou nejméně 3 dny před začátkem ovulace.

Určení začátku testování je ovlivněno časovým intervalem mezi začátkem menstruace a dnem, na který nastala v předchozích cyklech ovulace nejdříve. Interval mezi začátkem menstruace a dnem, na který nastala ovulace v předchozích cyklech nejdříve, může být u některých subjektů poměrně dlouhý. Toto je pozorováno především u žen, jejichž cyklus je často nebo vždy delší než průměrných 28 dní. Pokud u těchto žen nastane ovulace dříve, než je pro ně obvyklé, je nutné posunout začátek testování vpřed. Začátek testování je výhodné vypočítat podle následujícího vztahu:

Den, na který nastala ovulace v předchozích cyklech	Den začátku testování
nejdříve
8-10	-4
11 - 14	-5
15 - 18	-6
19-23	-7
24 - 28	-8
29+	-9

Parametr nebo parametry signalizující blížící se ovulaci musí v časovém intervalu od začátku testování (tak jak je zde popsán) do konce neplodných dnů před nadcházející ovulací projevit zachytitelnou změnu. Nejvhodnějším parametrem je obecně změna koncentrace (absolutní nebo relativní) určité analyzované látky v tělní tekutině. Zvláště vhodnou látkou k analýze je hormon nebo jeho metabolit.

Nej vhodnější tělěsnou tekutinou je moč.

Pro stanovení prahové hodnoty koncentrace analyzované látky u individuálního subjektu je vhodné rozdělit část ovulačního cyklu, kdy je hladina E3G měřitelná, na následující fáze:

i) Plodná fáze, je období od -3 do +2 dnů kolem aktuální ovulace. Den ovulace může být přesně stanoven podle hladiny LH v moči, například tak, že ovulace nastává den poté, kdy jsou v moči naměřeny nejvyšší koncentrace LH.

θ ii) Přechodná fáze, je období, během něhož by měla být žena upozorněna na blížící se ovulaci. Tato fáze je období od -8 do -4 dnů před aktuální ovulací.

iii) Neplodná fáze, je období od začátku menstruace do ”-9 dne, včetně, před aktuální ovulací.

Prahová hodnota koncentrace E3G je stanovena podle měření koncentrace E3G v průběhu přechodné a prefertilní fáze v jednom nebo více předcházejících cyklech. Při stanovování prahové hodnoty koncentrace E3G individuálního subjektu jsou v průběhu těchto fází prováděna měření koncentrace E3G v moči pravidelně (nejlépe denně) v jednom a více cyklech, s výhodou alespoň ve dvou cyklech, a zvláště ve třech cyklech.

Při více než jednom zahajujícím cyklu následují tyto cykly za sebou.

V případě potřeby lze zároveň stanovit den aktuální ovulace, a to již známými způsoby, jako je nález rázu LH, vzestup P3G, nebo pomocí jiných tělesných změn, například zvýšené bazáíní teploty (BT) . Nejvhodnější z těchto způsobů je nález rázu LH. Zde užívaný výraz ráz LH označuje výrazný vzestup koncentrace LH, který předchází ovulaci. V oboru je ráz LH označován také jako LH max, t.j. vrchol koncentrace LH. U většiny žen je z praktických důvodů vhodné monitorovat cyklus každý den. U části populace, asi u 20% žen, nelze vrchol LH pozorovat, dokud nezačne koncentrace LH klesat. Pro účely vynálezu je kritickým parametrem pozorovatelný vrchol LH.

Po té, co je prahová koncentrace E3G stanovena, je možné pravidelné testování E3G v současném cyklu během časné fáze neplodného období přerušit. Testování' může být, například, započato až po určité době od začátku menstruace.

Je-li popisovaný způsob monitorování stadia ovulačního cyklu užíván pro účely antikoncepce, musí být uživatelka upozorněna, že již v okamžiku, kdy začne hladina E3G stoupat, existuje jistá malá pravděpodobnost, že uživatelka je plodná.

Z praktických důvodů může být prahová koncentrace E3G definována jako ta koncentrace E3G, k

která je častěji překračována ve fázi přechodné než ve fázi neplodné. Prahová koncentrace E3G je tedy například koncentrace, která není překračována ve více než 30% dnů neplodné fáze, ale je překračována alespoň v 60% dnů přechodné fáze. Je výhodné, pokud je prahová koncentrace E3G taková koncentrace, která není v neplodné fázi překračována ve více než ve 20% dnů, ale která je překračována nejméně v 80% dnů přechodné fáze.

Prahová koncentrace E3G se výrazně liší u jednotlivých subjektů, ale vždy se pohybuje v rozmezí od 5 do 40 ng/ml. U mnoha žen je prahová hodnota E3G kolem 30 ng/ml.

Přesné stanovení prahové koncentrace E3G je sice možné, ale pohodlnější je používat prahová pásma, např. pásma prahových koncentrací 5, 10, 15,

20, 30, 40 a 50 ng/ml, kdy je na základě koncentrací

E3G odvozených z předešlých cyklů každému subjektu přiřazeno určité prahové pásmo. Použití prahových pásem je pro účely antikoncepce dostatečně přesné. Zkoušky užívané při způsobu monitorování stadia ovulačního cyklu podle vynálezu lze upravit tak, aby jimi byla ^:θ taková prahová pásma rozpoznávána.

V článku New assays for identifying the fertile period, Int. J. Gynecol. Obstet., 1989 Suppl. 1, 111-112, popisuje Brown se spolupracovníky způsob monitorování cyklu, založený na měření hladiny estrogenů v moči, s tímto závěrem:

.... denní nárůst produkce estradiolu v průběhu preovulačního vrcholu je nápadně stálý ve všech cyklech a blíží se faktoru 1,4 za den.

Z hladiska statistiky populace je tato'hodnota faktoru 1,4 přesná, ale v praxi se u jednotlivých subjektů výrazně liší. Při užití nárůstového nebo raciometrického způsobu odvození dat z řady po sobě následujících hodnot testování estradiolu nebo jeho metabolitu (např.E3G v moči) je nevhodné spolehnout se na nárůst 1,4 za den jako na univerzálně významný

5. spouštěč preovulačního vzestupu. V praxi se zjišťuje, že spouštěčem je faktor nárůstu 2,0 a že tedy faktor nárůstu 1,4 neodráží typické kolísání v koncentraci E3G u jednotlivých subjektů. Jiné individuální subjekty mají spouštěč významně nižší než 1,4, takže při použití faktoru nárůstu 1,4 není preovulační vzestup koncentrace E3G zachycen.

Vynález může být použit pro kterýkoli způsob monitorování stadia ovulačního cyklu, který je založen na analýze nárůstu (raciometrické analýze) detekovatelného parametru významně se měnícího v průběhu preovulační fáze a ve kterém je nadcházející ovulace signalizována, když je rozpoznán předem stanovený referenční poměr, který je pro subjekt

2θ odvozen z dat získaných v jednom nebo více předcházejících cyklech. Zde užívaný výraz referenční hodnota koncentrace analyzované látky zahrnuje referenční hodnoty ve formě poměru.

Vynález lze s výhodou použít v kterémkoli zkušebním systému založeném na matematické analýze po sobě následujících koncentrací testované látky, zvláště analýze koncentrací E3G v moči, a to například na analýze CUSUM. Obvykle jsou po sobě následující koncentrace (nebo po sobě následující měření jakéhokoli

3° relevantního parametru v souladu s vynálezem) zaznamenávány několik po sobě následujících dní.

Obvykle je v probíhajícím cyklu první zkouška provedena nejméně 5 dní po začátku menstruace.

Jednou zjištěné zvýšení hladiny E3G, t.j. hladiny přesahující předem stanovený práh, neznamená, že žena je v plodné fázi cyklu, ale že je jisté, že se blíží její ovulace.

Výhodou tohoto způsobu monitorování stadia ovulačního cyklu je, že může pracovat s jedním parametrem, například se zvýšenou hladinou jednoho hormonu. Jedním z provedení vynálezu ale zároveň je, že srovnáním hodnot z testování dvou a více analyzovaných látek je získán například poměr koncentrací dvou nezávisle na sobě testovaných látek.

V dalším textu je vynález popisován na příkladu hormonů E3G, LH a P3G v moči, avšak princip vynálezu lze použít i na testování dalších biochemických markérů, například na testování hormonů estrogenu a progesteronu v krvi nebo ve slinách. Vynález je možné použít v kombinaci s pozorováním jiných fyziologických známek stavu plodnosti ženy a nebo jej lze na tato pozorování přímo aplikovat, příkladem je sledování markérů v jiných tělních tekutinách.

O c

Den ovulace lze stanovit pomocí kteréhokoli chemického nebo fyziologického parametru, nejvhodnějším způsobem je ale měření hladiny LH. Ráz LH je jistou známkou blížící se ovulace. Den ovulace stanovený podle rázu LH slouží jako výchozí orientační bod. Je vysoce

3° pravděpodobné, že ode dne ovulace, přesně stanoveného podle rázu LH, nebude uživatelka plodná déle než tři dny (4 dny od vzestupu hladiny LH). Z praktického hlediska je důležité, že za všech okolností je indikačním prahem pro ráz LH koncentrace LH v moči 20 mlU/ml.

Konec plodného období (to znamená ne přímo den ovulace) se určuje měřením hladin hormonu P3G v moči. Hladina P3G v moči je poměrně nízká až do začátku luteální fáze, kdy prudce stoupá. Nález zvýšené hladiny P3G tedy znamená, že v cyklu nastala luteální fáze, t.j. poslední neplodné období. Zvýšení hladiny P3G v moči lze stanovit při jejím porovnání s výší hladiny P3G v současném cyklu nebo v jednom nebo více cyklech předchozích. Hladina P3G je například zvýšená jak v případě, kdy je vyšší než součet čtyř předchozích hladin P3G v témže cyklu, tak v případě, kdy je vyšší než 3500 ng/ml. Hladina P3G je zvýšená, dosáhne-li jednoho ze dvou těchto prahů, i když je hodnota tohoto dosaženého prahu nižší než hodnota prahu druhého. Nález zvýšené hladiny P3G znamená, že žena je již do konce cyklu neplodná.

Nález jak LH, tak P3G je znamením, že žena je od této chvíle až do konce cyklu neplodná, přičemž jeden hormon je pojistkou tomu druhému. Nálezu LH lze s výhodou použít jako primárního indikátoru ovulace právě probíhající nebo těsně nadcházející, neboť na rozdíl od P3G je možné z hladin LH den ovulace přesně určit.

Způsob monitorování stadia ovulačniho cyklu podle vynálezu má tu výhodu, že podle něj lze s vysokou přesností určit den ovulace a plodné období v průběhu cyklu. Pro účely antikoncepce vyžaduje tento způsob určení plodné fáze velmi krátkou dobu zdrženlivosti od nechráněného pohlavního styku v jakémkoli typu menstruačním cyklu.

Výhodou vynálezu také je, že tento způsob monitorování stadia ovulačního cyklu vyžaduje méně testování v průběhu měsíce, čímž se snižuje finanční náročnost a nepohodlnost pro uživatelku bez ovlivnění spolehlivosti metody. Určení vrcholu LH není nezbytné, ale může posloužit jako pojistka, která v případě, že není pozorována zvýšená hladina E3G upozorní na to, že uživatelka může být plodná.

Další výhodou způsobu monitorování cyklu podle vynálezu je, že při něm uživatelka nemusí měřit bazální teplotu, čímž se vyhne časově náročné a nepohodlné proceduře, jejíž spolehlivost je diskutabilní.

Dále bude popsáno zařízení na monitorování ovulačního cyklu u samice savce, zvláště u ženy, sestávající ze zařízení, zahajujícího zaznamenávání cyklu, ze zařízení.na měření (v případě potřeby ve spojení s jedním nebo více zařízeními na testování vzorků moči čitelnými monitorovacím zařízením) a zaznamenávání koncentrací E3G v moči, ze zařízení na určování prahové koncentrace E3G z výsledků měření získaných v průběhu neplodné a přechodné fáze alespoň jednoho předcházejícího cyklu a ze zařízení, které upozorní uživatelku, pokud koncentrace E3G naměřená během přechodné fáze probíhajícího cyklu překročí předem stanovený práh.

Zařízení zahajující zaznamenávání cyklu je vstupní zařízení, jako je spínač nebo tlačítko, kterým uživatelka zadává začátek nebo konec menstruace.

Je výhodné, pokud monitorovací zařízení obsahuje také prostředky na určování aktuální ovulace, například prostředky na měření a zaznamenávání rázu LH nebo vzestupu koncentrace P3G v moči..

Informace je uživatelce předána například pomocí tekutého krystalu nebo LED displeje. Informace o stavu plodnosti je znázorněna jednoduchou vizuální indikací, například kombinací barev, kdy zelená značí neplodnost, červená plodnost a žlutá mezistav, ve kterém je koncepce méně pravděpodobná, ale stále možná. Lze také použít kombinaci žluté a červené, kde červená signalizuje možnost koncepce. Zvláště v případě, kdy je zařízení užíváno jako pomocník při antikoncepci, je důležitá zejména indikace signálu plodná.

Monitorovací zařízení musí být (v případě potřeby) schopno na základě aktuálních měření z jednoho nebo více předcházejících cyklů modifikace předem stanoveného prahu pro právě probíhající cyklus nebo pro cyklus další.

Použít je možno kit pro monitorování ovulačního cyklu u samice savce, respektive u ženy, který sestává z monitorovacího zařízení popsaného výše a z alespoň jednoho testovacího zařízení schopného měřit hladinu jedné nebo více složek v moči. Je zřejmé, že monitorovací zařízení je možné použít v průběhu mnoha cyklů. Naproti tomu testovací zařízení pro měření· složek v moči je na jedno použití, což je vhodnější, ale uživatelka je nucena jej doplňovat.

Jednou z vhodných forem je jedno balení několika testovacích zařízení na měření složek v tělní tekutině (např. v moči) na jedno použití s přiloženým návodem na použití způsobu monitorování stadia ovulačního cyklu podle vynálezu. Pokud je to žádoucí, lze na každém z těchto testovacích zařízení určit současně koncentraci E3G a LH v moči (a nebo P3G)(v případě potřeby ve spojení s monitorovacím zařízením nebo elektronikou popsanou výše).

Způsoby detekce analyzovaných látek v tělních tekutinách, jako jsou metabolity hormonů v moči, vhodné pro účely vynálezu, jsou známy z oboru. Vhodné testovací metody a zařízení k jejich provádění jsou popsány v žadatelově patentové přihlášce GB 2204398. Na tuto přihlášku jsou také odkazy dále v textu.

Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle vynálezu spočívá v měření složky v moči, je tedy nutné testovat vzorek moči. Složku v moči lze stanovit vhodnou imunologickou zkouškou. Pro určování složek v moči je možné snadno upravit některé z mnoha testovacích zařízení na pevné bázi, jako jsou dipsticks nebo chromatografické proužky popsané v literatuře. Zařízení musí indikovat alespoň relativní hladiny analyzované látky, například E3G, v prahových pásmech.

V patentových přihláškách EP 0225054, EP 0183442, EP 0186799, GB 2204398 a EP 383619 jsou uvedeny příklady jednoduchého testovacího zařízení, které lze snadno upravit pro použití v domácím prostředí. V textu jsou odkazy na závěry z těchto publikací. K testování je možné použít testovací proužky na jedno použití popsané v patentových přihláškách GB 2204398 a EP 383619. Tyto testovací proužky jsou jednoduchým způsobem kontaktovány s močí a výsledek testu je zřejmý v semikvalitativní formě: na proužku je umístěna například serie testovacích zon, jejichž reakce je tím více pozitivní, čím vyšší jsou hladiny analyzované látky. Při testování lze použít jeden proužek nebo více proužků reagujících na různé prahy analyzované látky.

Jinou možností je vizuálně odečitatelná kvantitativní zkouška založená na postupu viditelné (např. barevné) plochy nebo čela po povrchu (např. radiální difúze). Lze použít například enzymem značenou esej .

Ve vypracovanější verzi přístroje může být zaznamenávací zařízení vybaveno prostředky pro odečítání výsledků testů v moči, například pro měření reflektance nebo fluorescence testovacích proužků. Takové vybavení umožňuje přesněji číselně definovat hladinu analyzované látkv, a tím ¹⁵ zvyšuje spolehlivost metody. .

Při současném měření dvou a více analyzovaných •s.

látek je možné použít zařízení na testování jedné tělní tekutiny, a to například tím způsobem, že zařízení testuje více zkušebních proužků, nebo tím způsobem, že je testován proužek jeden,· na kterém lze zjišťovat hladiny různých analyzovaných látek nezávisle na sccě.

Zaznamenávací zařízení musí být schopno asimilace, zapamatování a podržení dat o koncentraci analyzované látky, stejně jako předpovídání dalších cyklů na základě těchto dat. Pro odborníky v oboru elektroniky, kteří jsou informováni o faktorech, které musí být při výrobě takového zařízení vzaty v úvahu a o· skutečnosti, že zařízení musí být přizpůsobeno uživatelce, je snadné vybavit takové zařízení přesnou elektronikou s vybranými charakteristikami zde již dříve diskutovanými. Tato detailní elektronika není součástí vynálezu. Pro ilustraci jsou základní funkce tohoto zařízení načrtnuty v Obrázku 3, který je součástí doprovodných vyobrazení a který je popsán dále.

Pokud je zařízení, které měří hladiny hormonů ve vzorku moči, elektronické, pak může upravovat prahovou hodnotu E3G podle individuálních potřeb uživatelky, například ze 30 ng/ml na 20 ng/ml nebo 40 ng/ml v případě, že je doba zdrženlivosti pro uživatelku příliš dlouhá nebo krátká.

Dále jsou pro ilustraci popsány praktická provedení vynálezu s odkazy na připojené výkresy.

Přehled obrázků na výkresech

- Na Obr.l je zpbrazen^ zajízení na monitorování hs-rouctCÍibCA, ovulačního cyfcluj/podle vynalezu spolu s přidruženým zařízením na testování vzorku moči;

Obr.2 ukazuje detail zařízení na testování vzorků moči;

Na Obr.3 je schéma základních funkcí elektronického monitoru podle vynálezu.

Příklady provedení vynálezu ^z

Zařízení na testování vzorků moči na Obrázku^lV má plochý podlouhlý kryt 100, na jehož spodní ploše 102je umísťovací výstupek 101. Z jednoho konce krytu vystupuje součást pro nasátí vzorku 103. \

Na horní stěně 112 krytu monitoru 110 je výklenek 111 pro umístění plochého podlouhlého krytu zařízení na testování vzorků moči. Ve výklenku 111 je umísťovací drážka 113, do které zapadá umísťovací výstupek 101 na krytu zařízení na testování vzorků moči, čímž je toto zařízení udržováno ve správném postavení vůči odečítacínu oknu 114 ve výklenku. Pod krytem 110 je zařízení (nezobrazeno) na odečítání výsledků testování koncentrace analyzované látky v moči z testovacího zařízení, například odečítač fluorescence.

Na zkosené čelní stěně 115 krytu monitoru je umístěno velké okno 116, které zprostředkovává informaci uživatelce, a to například pomocí LED displeje nebo jinou vizuální cestou. Tato informace může mít různé formy. Může být například zobrazen 5 - ,’Ξ/τ;:· kalendář s avizováním nutnosti provádět testování moči nebo může být zobrazen aktuální stav ovuíačního cyklu.

Na zkosené čelní stěně 115 krytu monitoru je také ...... , , tlačítko 117, jehož stištěním užívatelka indikuje začátek ovuíačního cyklu a tím uvádí monitor s cyklem do souladu.

Energetickým zdrojem monitoru jsou baterie.

Na boční stěně 118 krytu monitoru je vstup, například odklopitelná dvířka 119, která umožňují baterie vkládat a měnit.

Na Obrázku 2 je znázorněno zařízení na testování vzorků moči z druhé strany. Umísťovací výstupek 101 je nyní na horní ploše 200. Na této horní . ploše 200 je nejvýše umístěno výsledkové okno 201. Do zařízení na testování vzorků moči se vkládá imunochromatografický proužek (nezobrazen), na němž jsou nanesena všechna nezbytná reagenční činidla ke stanovení koncentrace analyzované látky imunologickou zkouškou ve vzorku moči, který je aplikován do součásti pro nasátí vzorku 103. Pokud je ve vzorku moči přítomna₇analyzovaná látka, dochází k imobilizaci značené .5 komponenty sendvičovou nebo kompetiční reakcí, přičemž značená komponenta se koncentruje v zóně viditelné skrz výsledkové okno. Po otočení zařízení na testování vzorků moči a jeho umístění do výklenku 111 v krytu monitoru je výsledkové okno přiloženo na odečítací okno

114 v monitoru a výsledek zkoušky může být stanoven.

Pokud je komponenta značená fluorescenčním činidlem, pak odečítací zařízení monitoru detekuje a měří výdej fluorescence v detekční zóně proužku, kde je značená komponent a,.:nahromaděná.:.^ Tak,. můž'e;.:být::hodnota.·..... . . .

koncentrace.·.anaiyzov.ané;7látkyxveírvzorku’mo.čír:pře'sněⁱ:’sxr. .

číselně.'definovaná. Tuto:, informaci, zpracuje monitor. tak, že ji dá do souladu s kalendářem (po té, co uživatelka....'zadala .začátek:.,cyklu): :a,-s.daty.. z,'p.ředcho.z±chh. cyklů, která drží v. paměti.......

Na Obrázku 3 jsou zobrazeny základní součásti elektronického monitorovacího zařízení. Jednotlivé součásti tohoto zařízení mohou být zcela konvenční, ale pro účely vynálezu lze vytvářet jiné kombinace a sestavy.. Místo běžných mikroprocesorů na bázi čipu*' lze použít například takzvané hard - wired systémy a neurální sítě. Na Obrázku 3 se kombinace skládá ze :

čtecí jednotky 300 odvozující informace ze zařízení na testování vzorků moči, například z testovacího proužku. Čtecí jednotka obsahuje iluminátor 301 a odečítač 302 (zde reprezentovaný fotodiodou) . Na čtecí jednotku navazuje konverzní jednotka 303, ve které je optický signál přeměněn na formu použitelnou v mikroprocesoru 304 . Volitelně může být připojen kalibrační systém 305, který mění signál ze čtecí jednotky na data odpovídající, například, hodnotě absolutní koncentrace. Časoměřič, jako jsou hodiny 306, koordinuje měření s cyklem. Mikroprocesor

304 zpracovává, ukládá do paměti a interpretuje aktuální výsledky ve vztahu k výsledkům získaným dříve, a zvláště ve vztahu k výsledkům zaznamenaným v předchozích cyklech. Na styčné ploše pro užívatelku 307 je alespoň tlačítko, jehož stištěním zadává uživatelka začátek ovulačního cyklu, čímž zahajuje práci celého zařízení. Ve zdroji energie 308 je zabudován kondenzátor 309 pro zálohování paměti, který brání ztrátě dat při výměně baterií.

.......

Pro ilustraci jsou dále uvedeny Příklady vynálezu. Tyto příklady se týkají monitorování ovulačního cyklu u žen.

V příkladu jsou předvedeny profily E3G u dvou.

žen. První žena má hladiny E3G v moči relativně nízké, druhá žena má hladiny E3G v moči relativně vysoké. V každé tabulce označuje první sloupec den cyklu a druhý sloupec stav plodnosti. První fáze cyklu je fáze neplodná a je to ta část folikulární fáze, kdy nechráněný pohlavní styk nevede k otěhotnění. Po ní následuje fáze přechodná, ve které se objevují změny vedoucí k nástupu plodné fáze. V této přechodné fázi by měla žena být pomocí signálu upozorněna, že nadchází plodná fáze. Plodná fáze je období před a po ovulaci, ve kterém nechráněný pohlavní styk vede ve většině případů k otěhotnění. Trvání plodné fáze před ovulací je dáno dobou přežití spermií, která závisí zvláště na stavu hlenu, jež je řízen ženskými pohlavními hormony.

Období po skončení plodné fáze je opět fáze neplodná, fáze luteální, ve které vejce opustilo dělohu a početí již není ve stávajícím cyklu možné.

Ve třetím sloupci každé z tabulek jsou 5 zaznamenány hodnoty E3G v prvních 20 dnech cyklu. Tyto hodnoty jsou výsledkem každodenního testování prvních ^J ranních vzorků moči imunologickou zkouškou.

Imunologická zkouška je běžně užívaná zkouška typu ELISA. Hodnoty E3G jsou měřeny v ng/ml.

Ovulace nastává 24 hodin poté, co jsou naměřeny nejvyšší hodnoty LH. Hodnoty LH jsou stanovovány ze stejných vzorků moči běžně užívanou imunologickou zkouškou, ale v. tabulkách. zaneseny, nejsou, neboť' nejdůležitější hodnotou, je termín, ovulace.

Pro určování prahové hodnoty E3G pro následuj íci cyklus ,j sou stanovena následující pravidla:

1. Práh E3G může mít hodnotu 5, 10, 15, 20, 25 a 30 ng/ml, ale ne vyšší.

2. Signál plodná má uživatelka v ideálním případě dostat 6 dnů před ovulací.

3. Překročeni prahové hodnoty 4. nebo 5. den přechodné fáze je významnější než její překročení v časnějších dnech přechodné fáze.

4. První hodnota koncentrace E3G zvolená jako 30 prahová musí být ta hodnota koncentrace E3G, která je v zahajujícím cyklu během přechodné fáze překračována nej častěji a během naplodné fáze nejméně často. Je výhodné, pokud tato hodnota není v neplodné fázi přakročena vůbec.

5. V prvním cyklu musí být testování prováděno každý den, dokud není rozpoznán ráz LH a není tak 5 určena hlavní zahajující fáze.

6. V následujícím cyklu může být prahová hodnota upravena v případě, že

a) stanovená prahová hodnota není překročena 4. a nebo 5. den přechodné fáze;

b) stanovená prahová hodnota je zbytečně nižší než hodnota, která je nutná pro signál přicházející 4.

a nebo 5. den přechodné fáze.

7. Prvních 5 dnů cyklu nej sou hladiny E3G vzaty v úvahy s tím předpokladem, že v domácím prostředí se nebude testování provádět ihned v průběhu menstruace.

Po skončení prvního měřeného ovulačního cyklu se u jednotlivých subjektů určuje v domácích podmínkách začátek testování (v tabulce je označen ***) v dalším cyklu podle vzorce popsaného výše. Takže například v cyklu AI nastala ovulace 18. den, v cyklu A2 začne tedy 25 testování 12. den (18-6).

Z výsledků měření v cyklu A2 vyplývá, že začátek testování, t.j. 12. den cyklu, koinciduje se zvyšováním hladiny E3G, což je známkou blížící se ovulace. Ovulace v cyklu A2 nastává 17. den. Podle vzorce začne testování v dalším cyklu A3 11. děn.

Ovulace v cyklu A3 nastává 4 dny po začátku testování - 11. den. Začátek testování v dalším cyklu A4 je stanoven na 9. den.

.V cyklu A4 nastává ovulace 14. den, což je 5 dní po začátku testování (9. den). V dalším cyklu A5 začne testování opět 9. den.

V cyklu A5 nastává ovulace až 17. den. Tím u této ženy končí posun ovulace do časnější fáze cyklu a ovulace se nyní vrací k původnímu normálnímu načasování. Začátek testování by však měl zůstat na 9. dnu, alespoň po dobu překlenutí dalšího posunu ovulace do časné fáze cyklu.

Na této sérii ovulačních cyklů je ukázáno, jak je výhodné, je-li optimální den pro začátek testování stanovován pomocí několika za sebou následujících cyklů.

U druhé ženy (B) je podle cyklu B1 stanoven začátek testování na 13, den, podle cyklu B2 na 11. den a nakonec po skončení cyklu B4 na 10. den.

Při určování prahové, hodnoty E3G je u ženy B v cyklu 1 hodnota 25 překročena 8. a 11. den (neplodné fáze), tudíž prahová hodnota musí být vyšší než tato hodnota. Hodnota 30 je překročena 4. a 5. den přechodné fáze (15. a 16. den cyklu), takže tato hodnota 30 je vybrána jako nejvyšší volba prahové hodnoty, která zároveň vyhovuje pravidlu 2, 3 a 4.

Prahová hodnota 30 vyhovuje, ale v cyklu 3 je

13. den (5. den přechodné fáze) hodnota E3G 23,9 a tak je podle pravidla 6a třeba snížit prahovou hodnotu na

20, což je nejvyšší volba prahové hodnoty, která je ten den překročena.

V cyklu 4 je podle pravidla 6b prahová hodnota upravena na 25, protože z hodnot dosažených ve dvou 5 vybraných vhodných dnech přechodné fáze vyplývá, že hodnota 20 je příliš nízká a že hodnota 25 vyhovuje lépe.

V cyklu 5 je podle pravidel 2, 3 a 6b prahová hodnota pro další cyklus upravena na hodnotu 30.

První den, na který je zvolená prahová hodnota E3G překročena, je v tabulce označen (****) .

CYKLUS A 1: Zahajující cyklus

ŽENA A

Den	Fáze	Hodnota E3G	Ovulace
1	neplodná	2,7
2	»1	3,3
3	n	2,4
4	π	1,8
5	VI	3, 6
6	n	2,5
7	IV	1,7
8	VI	1,9
9	VI	3,1
10	přechodná	5,4
11	IV	2,1
12	VI	5,3
13	If	10,5
14	IV	7,7
15	plodná	5,2
16	VI	8,3
¹⁷	II	6,8
18	II	4,3	LHM + 1
19	IV	4,9
20	II	5,3
21	neplodná
22	VI
23	VI
24	VI
25	VI
26	II
27	VI
28	VI
29	II
30	VI
	Ovulace avizována:	0 dnů předem	(zahajuj ící

cyklus) Prahová hodnota E3G pro další cyklus: 5 ng/ml Začátek testování v příštím cyklu: 12. den

CYKLUS A 2
Den	Fáze	Hodnota	E3G Ovulace
1	.neplodná	2,0
2	VV	1,5
3	VV	1,1
4	»1	4,1
5	n	4,0
6	IV	3,5
7	VI	2,3
8	II	1,9
9	přechodná	3, 6
10	II	3,7
11	II	3,0
12***	IV	9,2
13	II	8,9
14	plodná	14,6
15	11	12, 6
16	VI	8,8
17	VI	15, 8	LHM + 1
18	VI	6,9
19	IV	6, 5
20	neplodná	6,5
21	VI
22	VI
23	IV
24	II
25	IV
26	vv
27	vv
28	vv
29	vv
30	vv
Ovulace	avizována: 6 dní	předem
Prahová	hodnota E3G pro	příští cyklus: 5 ng/ml

Začátek testování v dalším cyklu: 11. den

Den

9

11*** ¹⁶

21 22

CYKLUS A 3

Fáze neplodná vv

IV

VI

VI přechodná vv

VI

IV

IV plodná

VI

IV

VI vv

VI neplodná

Hodnota E3G

2,0

2,7

2,9

2.7

1,6

2,5

5.4

4,0

5, 6

3.7 θ,2**** 23, 6 21,3

8.3

4.5

3.7

3.4

2.8

3,1

Ovulace

LHM + 1 ng/ml den

Ovulace avizována: 3 dny předem

Prahová hodnota E3G v dalším cyklu: 5

Začátek testování v příštím cyklu: 9.

CYKLUS A 4

Den	Fáze	Hodnota E3G	Ovula<
1	neplodná	2,4
2	II	2,8
3	»1	5,2
4	1»	3, 6
5	II	2,5
6	přechodná	3,1
7	II	3,9
8	IV	4,6
g ***	II	5,1 ****
10	II	6,1
11	plodná	16,7
12	II	10,8
13	II	22,8
14	II	21, 3	LHM +
15	II	9,4
16	II	12,2
17	neplodná	5,7
18	II	5, 2
19	II	7,5
20	II	9,0
21	II
22	II
23	II
24	II
25	II
26	II
27	II
28	II
29	II
30	ir
Ovulace	avizována: 6 dní	předem
Prahová	hodnota E3G pro	příští cyklus:	5 ng/ml
Začátek	testování v příštím cyklu: 9.	den

CYKLUS A 5

Den	Fáze	Hodnota E3G	Ovulace
1	neplodná	2,3
2	Vf	2,8
3	»1	2,7
4	VV	2,3
5	Vf	2, 8
6	fl	4,8
7	Π	5, 6
8	11	4,5
g***	přechodná	3,2
10	H	8,5****
11	Vf	7,3
12	VI	6,3
13	Vf	7,0
14	plodná	11, 8
15	u	19, 3
16	11	18,5
17	11	9,2	LHM + 1
18	11	5, 3
19	11	4,8
20	neplodná	6,1
21	Vf
22	IV
23	Vf
24	Vf
25	VI
2 6	II
27	Vf
28	Vf
29	Vf
30	Vf

Ovulace avizována: 7 dní předem

Prahová hodnota E3G pro další cyklus: 5 ng/ml

Začátek testování v příštím cyklu: 9. den

ŽENA B

CYKLUS B 1: Zahajující cyklus

Den	Fáze
1	neplodná
2	If
3	VI
4	VI
5	IV
6	IV
7	VI
8	II
9	VI
10	»1
11	v*
12	přechodn
13	II
14	II
15	IV
16	II
17	plodná
18	II
19	II
20	II
21	II
22	II
23	neplodná
24	II
25	II
26	II
27	II
28	II
29	II
30	IV

Hodnota E3G Ovulace 10, 9

15.2

21.2

12.7

11.8 16, 5

15, 6

25.1

10.1

16, 8 28,2

24.6

28.7

27.7 62, 6 68,5 61,9

103,4 85, 4

45, 4 LHM + 1

Ovulace avizována: 0 dní předem (ustavující parametry)

Prahová hodnota E3G pro další cyklus: 30 ng/ml

Začátek testování v příštím cyklu: 13. den

CYKLUS B 2

Den	Fáze
1	neplodná
2	11
. 3 .
4	11
5	11
6	11
7	11
8	ir
9	11
10	přechodn,
11	II
12	Π
13***	»r
14	11
15	plodná
16	11
17	11
18	11
19	11
20	11
21	neplodná
22	11
23	11
24	11
25	11
26	11
27	11
28	11
29	11
30	11

Hodnota E3G Ovulace

27.5 28,8 24,7 22, 6

24.9

28.9 14, 6

8,4 24,7 33, 6

39.3 25, 6

43,2****

67,1

62,0

94.6

58.4 LHM + 1

42.4

60.4 56, 0

Ovulace avizována: 4 dny předem

Prahová hodnota E3G pro další cyklus: 30 ng/ml

Začátek testování v příštím cyklu: 11. den

CYKLUS Β 3

Den	Fáze	Hodnota E3G
1	neplodná	46, 4
2	II	30,0
3	VI	12,4
4	VI	6,5
5	IV	8,7
6	VI	17,2
7	VI	14,9
8	VI	11, 8
9	přechodná	11, 0
10	VI	13,1
11***	IV	25, 6
12	IV	32,5****
13	VI	23, 9
14	plodná	63,8
15	VV	22,1
16	vv	65, 9
17	vv	41,2
18	vv	7,6
19	vv	35,3
20	neplodná	33,7
21	VV
22	IV
23	vv
24	vv
25	vv
26	vv
27	vv
28	vv
29	vv
30	vv
Ovulace	avizována : 6	dní předem
Prahová	hodnota E3G pro další cyklus:

Ovulace

LHM + 1 ng/ml

	Začátek testování v	příštím cyklu: CYKLUS B 4	11.den	(beze	změny)
	Den	Fáze	Hodnota	E3G	Ovulace
	1	neplodná	17,7
5	2	vr	12,2
	3	IV	7,2
	4	11	6,2
	5	11	13, 9
	6	11	12, 9
10	7	vr	12,7
	8	přechodná 9,3
	9	IV	16, 5
	10	vv	17, 7
	11***	vv	26,0****
	12	IV	38,3
15	13	plodná	70, 6
	14	VV	74, 6
	15	vv	70,6
	16	vv	49,7		LHM +	1
	17	II	23,5
	18	II	29, 8
20	19	neplodná	44,4
	20	II	32,7
	21	II
	22	II
	23	II
	24	II
25	25	II
	26	II
	27	II
	28	11
	29	11
30	30	11
	Ovulace	avizována: 6	dní předem.
	Prahová	hodnota E3G ]	pro další cyklus: 25 ng/ml.
	Začátek	testování v ]	příštím cyklu:	10.den.

CYKLUS B 5

Den	Fáze	Hodnota E3G	Ovulace
1	neplodná	33, 9
2	II	27,3
3	1»	20,2
4	IV	7,0
5	ri	12,7
6	II	7,2
7	II	14,5
8	II	14,8
9	II	10, 8
10***	přechodná	8,7
11	VI	14,1
12	II	17,4
13	11	41,3****
14	11	57,5
15	plodná	42,0
16	II	55,4
17	II	60,1
18	1»	39, 4	LHM + 1
19	II	24,7
20	II	10,5
21	neplodná
22	VI
23	VI
24	IV
25	IV
26	VI
27	VI
28	VI
29	91
30	VI
Ovulace	avizována: 6 dní	předem.
Prahová	hodnota E3G pro	další cyklus:	30 ng/ml.
Začátek	testování v příštím cyklu: 10.	den (beze

změny)

Zastupuje :

TiSR

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu u samic savců, zejména člověka, spočívající v opakovaném testování koncentrace alespoň jedné látky v tělní tekutině, která má významný vztah ke stadiu ovuiačního cyklu přinejmenším v preovuiační fázi, vyznačující se tím, že

10 a) testovánu koncentrace uveaer.e látky Je sahaje»© v průběžném ovulačním cyklu v časovém rozmezí alespoň 2 dny pozačátku menstruace až 2 dny přede dnem, v němž nastala ovulace u téhož subjektu v jednom nebo více předcházejících cyklech nejdříve,

b) ze získaných výsledků se identifikuje změna koncentrace, analyzované látky, indikující blížící se ovulaci srovnáním s referenční hodnotou teto látky, získanou sledováním odpovídající koncentrace této látky v průběhu alespoň jednoho předchozího cyklu u téhož subjektu.

υι
2. Způsob monitorování stadia ovuiačního cyklu podle nároku 1, vyznačují, cí se tím, že testování se zahájí alespoň 3 dny před dnem, ve kterém nastala u téhož subjektu ovulace v jednom nebo více

25 předcházejících cyklech nejdříve.
3. Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle nároku i, vyznačující se tím, že se testování zahájí alespoň 4 dnv před dnem, ve kterém nastala ovulace v jednom nebo více předcházejících cyklech u téhož subjektu nejdříve.
4. Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle kteréhokoli z nároků 1 až 3, vyznačující s _e•tím, že testování se zahaj í alespoň 5 dní po začátku menstruace.

Způsob monitorování

nároku 1, vyznač >4 j testování se zahaj í den ovulace v jednom nebo více

stadia ovulačního cyklu pod. ící se tím, že před dnem, na který nastala předcházejících cyklech u téhož subjektu nejdříve, přičemž tento začátek testování se vypočte podle vztahu, ve kterém 8 až 10,

11 až 14, 15 až 18, 19 až 23, 24 až 28 a 29+, přičemž hodnoty 8 až 29+ udávají den, ve kterém nastala ovulace v předchozích cyklech nejdříve a odpovídají -4, -5, -6,

-7, -8, resp. -9, přičemž hodnoty -4 až -9 udávají začátek testování ve dcnech průběžného cyklu.

6. Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle kteréhokoli z nároků 1 až 5, vyznačující se t í. m, ž e tělní tekutinou je moč.

7. Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle kteréhokoli z nároků I až o, vyznačující se tím, že analyzovanou látkou je estradiol nebo jeho metabolit, například estron-3-glukuronid, E3G.

8. Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle kteréhokoli z nároků 1 až 7, vyznačující se t í m, ž e .se testuje 2 nebo více látek k porovnání dat, například ke stanovení poměru 5 koncentrací dvou analyzovaných látek testovaných samostatně.

9. Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle kteréhokoli z nároků 1 až 8, vyznačující se

10 tím, že nej časnější termín aktuální ovulace se odvodí z dat shromážděných alespoň v posledních 3 po sobě následujících cyklech.

10. Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle

15 kteréhokoli z nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že nej časnější termín aktuální ovulace se odvodí z dat nasbíraných alespoň v 5 posledních, po sobě následujících cyklech.

20 11· Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle kteréhokoli z nároků 1 až 10, vyznačuj ící se tím, že nej časnější termín aktuální ovulace še odvodí z dat získaných alespoň v těsně předcházejícím cyklu.

12. Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle nároku 11,vyznačující se tím, že nejčasnější termín ovulace se odvodí z dat referenční baze, která se skládá z neměnného počtu po

30 sobě následujících cyklů bezprostředně předcházejících cyklu současnému.

13. Způsob monitorováni stadia ovulačního cyklu podle nároku 12,vyznačující se tím, že referenční baze se skládá ze 4 až 10 bezprostředně předcházejících cyklů.

⁵

14 . Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle nároku 12, vyznačující se tím, že referenční baze se skládá z 5 až 6 bezprostředně předcházejících cyklů.

15. Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle ' kteréhokoli z,nároků 1 až 14, vyznačuj lcí se tím, že den aktuální ovulace je dán nálezem vrcholu koncentrace luteinizačního hormonu LH v moči.’

15. Způsob monitorováni stadia ovulačního cyklu podle . kteréhokoli z nároků 1 až 14, v y z n a č u j i c í se tím, že ovulace je určena podle nálezu rázu LH v moči.

17. , Způsob monitorování stadia ovulačního cyklu podle kteréhokoli z nároků 1 až 16, vyznačující se tím, že změna koncentrace analyzované látky se vztahem ke stadiu ovulačního cyklu je definována

I
5 vzhledem k prahové koncentraci analyzované látky, která je pro individuální subjekt odvozena z měření koncentrace analyzované látky v tělní tekutině během preovulační fáze alespoň jednoho předcházejícího cyklu.

I

18. Z působ podle nároku 1, vyznačující se tím, že zvýšená koncentrace E3G v moči je definována

15 vzhledem k prahové koncentraci, která je pro individuální subjekt stanovena podle měření koncentrace ··- E3G v moči v preovulační fázi alespoň jednoho předcházejícího cyklu.

I

20 1θ· Způsob podle nároku 18, vyznačující se tím, že prahová kocentrace E3G v moči odvozená pro současný cyklus je ta koncentrace E3G, která je v předchozím ovulačním cyklu během celkového počtu dní přechodné

25 fáze překročena častěji než během stejného počtu dní fáze neplodné, těsně předcházející přechodné fázi.

20. Způsob podle nároku ¹⁹», vyznačující se tím, že 30 prahová koncentrace E3G v moči je ta koncentrace E3G, která není překročena ve více než 30% dnů neplodné

I fáze, ale je překročena alespoň v 60% dnů přechodné fáze.

21. Způsob podle nároku 20/ vyznačující se tím, že prahová kocentrace je ta koncentrace E3G, která není překročena ve více než 20% dnů neplodné fáze, ale je

5 překročena alespoň v 80% dnů přechodné fáze.

i

22. způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 21, _v y z n a č u j í c í se tím, že
10 referenční hodnota koncentrace E3G je odvozena z dat ¹ získaných pomocí. referenční baze, která se skládá z neměnného počtu po sobě následujících cyklů

těsně předcházejících cyklu současnému. 15 23. Způsob podle nároku 22 z v y z načující se tím, že se referenční baze skládá ze 4 až 10 těsně předcházej

cyklů.

20 24. Způsob : vyznačující se podle nároku 23, t í m, že se

referenční baze skládá z 5- nebo 6 těsně předcházejících cyklů.

I

25. Způsob podle nároku 19» vyznačující se tím, že konec plodného období je určen podle měření koncentrace LH a nebo P3G v moči.

Zastupuje:

I

I

Ί>\1