CZ292482B6 - Způsob čištění trombinu podobných proteáz z hadího jedu - Google Patents
Způsob čištění trombinu podobných proteáz z hadího jedu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ292482B6 CZ292482B6 CZ19982697A CZ269798A CZ292482B6 CZ 292482 B6 CZ292482 B6 CZ 292482B6 CZ 19982697 A CZ19982697 A CZ 19982697A CZ 269798 A CZ269798 A CZ 269798A CZ 292482 B6 CZ292482 B6 CZ 292482B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- solution
- protease
- glass beads
- eluate
- matrix
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6402—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from non-mammals
- C12N9/6418—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from non-mammals from snakes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
- Y10S435/815—Enzyme separation or purification by sorption
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Zp sob spo v v tom, e roztok obsahuj c prote zu se ist afinitn chromatografi , nebo na m ni i aniont , z roztoku elu tu z afinitn chromatografie, nebo m ni e aniont se eluuje prote za, roztok elu tu z p°edchoz ho stupn se ist v z sadit m roztoku p°i pH 7,5 a 9,0 na matrici ze sklen n²ch perel, p°i em tyto sklen n perly maj pr m r p r 25 a 35 nm a velikost stic 30 a 60 .mi.m, tak e sklen n perly adsorbuj trombinu podobn prote zy z had ho jedu, v roztoku elu tu z matrice ze sklen n²ch perel se eluuje prote za, roztok elu tu z p°edchoz ho stupn se v kysel m roztoku ist na gelu, nebo na matrici sklen n²ch perel, p°i em tyto sklen n perly maj pr m r p r 25 a 35 nm a velikost stic 30 a 60 .mi.m, na e se eluuje a regeneruje ist prote za.\
Description
Oblast techniky
Předložený vynález se týká způsobu čištění trombinu podobných proteáz z hadího jedu, vybraných ze skupiny zahrnující ankrod a silně zásaditou proteázu.
Dosavadní stav techniky
Příkladem takovýchto proteáz jsou batroxobin, krotalaze a zejména ankrod. Posledně uvedený je antikoagulant, který se izoluje z jedu hada Agkistrodon rhodostoma, viz. Merck-Index 1089, č. 664. Kjeho výrobě z hadího jedu bylo popsáno již více metod, viz. GB 1 094 301, GB 1 177 506, GB 1 293 793, US 3 743 722, US 3 879 369, DE-OS 2 428 955, DE-OS 2 734 427. Tyto způsoby spočítají v podstatě na chromatografických krocích a připravují ankrod v různých výtěžcích a čistotě.
Výroba velmi čistého ankrodu z hadího jedu se dosud nepodařilo, byla vždy izolována směs enzymů s ankrodem jako hlavní komponentou, který byl po výrobě více či méně znečištěn cizími proteiny.
Podstata vynálezu
Byla nalezena cesta vyrábět proteázy z hadích jedů ve velmi čisté podobě.
Předmětem vynálezu je způsob čištění trombinu proteáz z hadích jedů, který spočívá v tom, že
a) roztok obsahující proteázu se čistí afinitní chromatografií nebo na měniči aniontů,
b) z roztoku eluátu z afinitní chromatografie, nebo měniče aniontů se eluuje proteáza,
c) roztok eluátu ze stupně b) se čistí v zásaditém roztoku při pH 7,5 až 9,0 na matrici ze skleněných perel, přičemž tyto skleněné perly mají průměr pórů 25 až 35 nm a zrnitost 30 až 60 μιη, takže skleněné perly adsorbují trombinu podobné proteázy z hadího jedu,
d) v roztoku eluátu z matrice ze skleněných perel se eluuje proteáza,
e) roztok eluátu ze stupně d) se v kyselém roztoku čistí na gelu, nebo na matrici skleněných perel, přičemž tyto skleněné perly mají průměr pórů 25 až 35 nm a zrnitost 30 až 60 pm,
f) eluuje se a regeneruje se čistá proteáza.
Produktem způsobu podle vynálezu jsou trombinu podobné proteázy z hadího jedu v čistotě mezi 95 až 100%.
K čištění afinitní chromatografií jsou vhodné zejména agmatínsepharóza, argininsepharóza nebo heparinsepharóza.
Jako měniče aniontů jsou pro čištění vhodné zejména DEAE-celulóza a DEAE-sepharóza.
Jako pufr se pro iontovou výměnu při chromatografíi uvádí zejména tris-fosforečnan a fosforečnan sodný.
Chromatografie iontovou výměnou se provádí při hodnotě pH 5 až 9, přednostně 6 až 8,5.
Při čištění se oddělí 70 až 80 % cizích proteinů a jiných složek ze surového enzymu.
Jestliže se čištění provádí iontovou výměnou, pak přichází do úvahy: CM-SEPHASE, pH 5 až 9 a AMBERLITE CG50, pH 5 až 9.
Chromatografie na skle znamená, že se ankrod a použité enzymy podobné trombinu a rovněž silně zásadité proteázy váží při hodnotě pH 7,5 až 9,0, přednostně 8,0 až 8,5 na skleněnou matrici. Cca 60 % ze sloupce, především kyselých cizích proteinů nespojených s pufrem, přednostně tris-fosforečnanem, případně fosforečnanem sodným se vypere. Ankrod se v čistotě přes 90 %, frakcionovaný sklem, eluuje, tím že se zvýší iontová síla pufru pomocí přídavku kuchyňské soli na 0,3 až 1,0 M.
Při dalším čištění se enzym upravuje až na 90 %.
Pro gelovou chromatografii přichází zejména do úvahy jako čisticí krok: SEPHACRYL S-100HR, SUPERDEX, SEPHADEX, UTRAGEL A SUPEROSE.
Jestliže se pro tento čisticí krok volí chromatografie na skle, tak se v kyselé pH oblasti 4 až 6 adsorbují zásadité cizí proteiny z akrodového roztoku na povrch skla, zatímco lze ankrod v čistotě přes 95 % eluovat přímo ze sloupce v Pufru. Požadovaná iontová síla pufru se reguluje přídavkem soli, jako je kuchyňská sůl.
Nový způsob je vhodný zvláště pro přípravu čistého ankrodu, který se po tomto způsobu čištění získává v čistotě zřetelně přes 95 %.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
a. Předčištění g sušeného jedu malajsijské zmije byly rozpuštěny v 50 ml pufru fosforečnanu tris-(hydroxymethylj-aminomethanu (TRIS fosforečnanu) s pH 8.5. nerozpuštěné buněčné části jedu byly odstraněny centrifugou, jasný, žlutý roztok se nanese na chromatografický sloupec, který má průměr 1,6 cm a byl naplněn až do výšky 30 cm DEAE-SEPHAROSE-FF, firma Pharmacia. Enzymy jedu, podobné trombinu, a rovněž proteiny s kyselým charakterem se vázaly na matrici. Chromatografie byla provedena s průtočnou rychlostí 150 až 200 ml/h. Praním sloupce při teplotě okolí 300 ml pufru (100 mM TRIS fosforečnanu, pH 8,5) byla hodnota A28o mm eluátu snížena pod 0,5 a dalším praním ve 400 ml 35 mM TRIS fosforečnanového pufru, PH 6,0, až byla hodnota A2go mm eluátu pod 0,4, se eluovalo 70 až 80 % cizích proteinů, vztaženo na optickou hustotu výchozího roztoku při 280 nm. Hlavní frakce s ankrodem byla eluována s 85% výtěžkem ve 150 až 200 ml 150 mM pufru TRIS fosforečnanu, pH 6,0.
b. Hlavní čištění
Eluát, který obsahuje ankrod, byl koncentrován pomocí ultrafiltrace na membráně s nominálním dělícím rozhraním 10000 na 20 ml a pufrován 100 mM pufru TRIS fosforečnanu, pH 8,0. Tento roztok byl nanesen na sloupec, který měl průměr 1,6 cm a byl naplněn až do výšky 15 cm BIORAN-CPG sklem (firma Schott, porézní průměr 25 až 35 nm, zrnitost 30 až 60 pm). Praní sloupce při teplotě okolí 300 ml 100 mM TRIS fosforečnanu, pH 8,0 a rychlostí protékání 250 ml za hodinu bylo ze sloupce eluováno cca 60 % cizích proteinů, vztaženo na optickou hustotu navážky.
-2CZ 292482 B6
K eluci byl použit 0,5 M roztok chloridu sodného, který byl pufrován 100 mM TRIS fosforečnanu na hodnotu pH 8,0. Eluát byl automaticky zachycen a cca 10 ml frakcích. Enzym podobný trombinu byl eluován v zóně s připojenou upravovači oblastí. K udržení hlavní komponenty, odpovídající ankrodu, která obsahuje nejvíce 5 % vedlejších komponent podobných trombinu, byly při přechodu hlavní zóny k upravovači oblasti vyšetřeny jednotlivé frakce z hlediska jejich specifické fibrogenozní aktivity, jakož také z hlediska jejich složení pomocí inverzní fáze HPLC. Hlavní zónou byly čištěny jen frakce (cca 80 ml), které mají specifickou aktivitu více než 1700 ot/OD280nm Ά mají v HPLC méně než 10 % vedlejších produktů. Hlavní komponenta byla získána s čistoto 96 % a výtěžkem 72 % z bioranového sloupce.
c. Jemné čištění
Eluát s hlavní komponentou ankrod byl koncentrován pomocí ultrafíltrace na membráně YM 10 (firma Amicon) na 2 ml a obdržený koncentrát byl nanesen na sloupec, který měl průměr 1,6 cm a byl naplněn až do výšky 58 cm SEPHARYLem S-100 HR. Sloupec byl předtím ekvilibrován pufrem 100 mM chloridu sodného a 100 mM fosforečnanu sodného, který má hodnotu pH 6,0. Touto gelovou chromatografií byly od ankrodu odděleny zbytkové proteázy a rovněž TRIS. Výtěžek činil při tomto kroku 90 %.
Příklad 2
a. Předčištění
2,1 g jedu malajsijské zmije bylo rozpuštěno v 50 ml 35 mM pufru TRIS fosforečnanu s pH 8,5, nerozpuštěné buněčné části jedu byly odstraněny centrifugou, jasný, žlutý roztok se nanese na chromatografický sloupec, který má průměr 1,6 cm a byl naplněn až do výšky 30 cm DEAESEPAHROSE-FF, firma Pharmacia. Praním sloupce při teplotě okolí 600 ml uvedeného pufru, až byla hodnota A280 eluátu menší než 0,2, bylo eluováno 70 % cizích proteinů, vztaženo na optickou hustotu výchozího roztoku při 280 nm. Hlavní frakce byla eluována s 90 až 100% výtěžkem 200 až 250 ml 150 mM 150 mM pufru TRIS fosforečnanu, pH 6,0.
b. Hlavní čištění
Eluát byl jako v příkladu 1 koncentrován na 20 ml a pufrován 50 mM pufru fosforečnanu sodného, pH 8,5. Tento roztok byl nanesen na sloupec BIORAN-CPG-Glas, který měl průměr 1,6 cm a výšku 15 cm, porézní průměr 25 až 35 nm a zrnitost 30 až 60 pm. Praním sloupce při teplotě okolí 300 ml 50 mM pufru fosforečnanu sodného, pH 8,5 a rychlostí protéká 250 ml za hodinu bylo ze sloupce eluováno cca 60 % cizích proteinů, vztaženo na optickou hustotu navážky při 280 nm.
K eluaci enzymů podobných trombinu byl použit 1 M roztok chloridu sodného, který byl pufrován 50 mM fosforečnanu sodného na hodnotu pH 8,0. 150 ml pufru bylo eluováno cca 80% vloženého množství enzymu.
c. Jemné čištění
Eluát byl koncentrován, jak je shora uvedeno, na 20 ml a pufrován 50 mM pufru fosforečnanu sodného, který má hodnotu pH 5,0. Tento roztok byl vnesen na sloupec, který měl průměr 1,6 mm a byl naplněn až do výšky 15 cm BIORAN-CPG-Glas, který měl porézní průměr 90 až 110 nm a zrnitost 30 až 60 pm. Při pH 5,0 byly na BIORAN-Glas vázány jen zásadité proteiny a rovněž vedlejší komponenty, zatímco hlavní komponenta ankrod byla eluována pufrem na čistotu 100 % a s výtěžkem cca 80 až 90 %, vztaženo na vložené množství.
-3CZ 292482 B6
Příklad 3
a. b. Předčištění a hlavní čištění
2,1 g sušeného jedu malajsijské zmije bylo analogicky s příkladem 2 předem rozděleno do frakcí na DEAE-SEPHAROSE, eluát byl analogicky s příkladem 1 koncentrován na 20 ml a pufrován pufrem 40 mM TRIS fosforečnanu. Tento roztok byl nanesen na sloupec chromatografu, který má průměr 1,6 cm a je naplněn až do výšky 20 cm CM-SEPHAROSE-FF, firma Pharmacia, a působilo se na něj shora uvedeným pufrem. Praním sloupce při teplotě okolí 300 ml pufru a rychlostí proudění 250 ml/h bylo ze
K eluaci enzymů podobných trombinu byl použit 1 M roztok chloridu sodného, který byl pufrován 50 mM fosforečnanu sodného na hodnotu pH 8,0. 150 ml pufru bylo eluováno cca 80% vloženého množství enzymu podobného trombinu.
c. Jemné čištění
Jemné čištění ankrodu bylo provedeno analogicky s příkladem 2 na BIORAN-CPG-Glas, porézní průměr cca 100 nm a zrnitost 30 až 60 pm, 50 mM fosforečného pufru, pH 5,0. Ankrod byl ze sloupce eluován s 95% čistotou a cca 85% výtěžkem, vztaženo na vložené množství.
Claims (4)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob čištění trombinu podobných proteáz z hadích jedů, vybraných ze skupiny zahrnující ankrod a silně zásaditou proteázou, vyznačujícísetím, žea) roztok obsahující proteázu se čistí afinitní chromatografií, nebo na měniči aniontů,b) z roztoku eluátu z afinitní chromatografie, nebo měniče aniontů se eluuje proteáza,c) roztok eluátu ze stupně b) se čistí v zásaditém roztoku při pH 7,5 až 9,0 na matrici ze skleněných perel, přičemž tyto skleněné perly mají průměr pórů 25 až 35 nm a zrnitost 30 až 60 pm, takže skleněné perly obsahují trombinu podobné proteázy z hadího jedu,d) v roztoku eluátu z matrice ze skleněných perel se eluuje proteáza,e) roztok eluátu ze stupně d) se v kyselém roztoku čistí na gelu, nebo na matrici skleněných perel, přičemž tyto skleněné perly mají průměr póru 25 až 35 nm a zrnitost 30 až 60 pm,f) eluuje se a regeneruje se čistá proteáza.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že hadí jed je z hada rodu Agkistrodon.
- 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že hadí jed je z hada Agkistrodon rhodostoma.
- 4. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 3, kde produktem je ankrod v čistotě přes 95 %.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19607210A DE19607210A1 (de) | 1996-02-26 | 1996-02-26 | Verfahren zur Reinigung von thrombinähnlichen Proteasen aus Schlangengiften |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ269798A3 CZ269798A3 (cs) | 1999-01-13 |
CZ292482B6 true CZ292482B6 (cs) | 2003-09-17 |
Family
ID=7786490
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ19982697A CZ292482B6 (cs) | 1996-02-26 | 1997-02-18 | Způsob čištění trombinu podobných proteáz z hadího jedu |
Country Status (32)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6200791B1 (cs) |
EP (1) | EP0883684B1 (cs) |
JP (1) | JP3817269B2 (cs) |
KR (1) | KR100493835B1 (cs) |
CN (1) | CN1188517C (cs) |
AR (1) | AR005995A1 (cs) |
AT (1) | ATE283350T1 (cs) |
AU (1) | AU711650B2 (cs) |
BG (1) | BG64875B1 (cs) |
BR (1) | BR9707738A (cs) |
CO (1) | CO4771158A1 (cs) |
CZ (1) | CZ292482B6 (cs) |
DE (2) | DE19607210A1 (cs) |
ES (1) | ES2233997T3 (cs) |
HK (1) | HK1017380A1 (cs) |
HR (1) | HRP970108B1 (cs) |
HU (1) | HU225489B1 (cs) |
ID (1) | ID16046A (cs) |
IL (1) | IL125395A (cs) |
MX (1) | MX9806304A (cs) |
MY (1) | MY130458A (cs) |
NO (1) | NO319561B1 (cs) |
NZ (1) | NZ331120A (cs) |
PL (1) | PL186211B1 (cs) |
PT (1) | PT883684E (cs) |
RU (1) | RU2186849C2 (cs) |
SK (1) | SK284874B6 (cs) |
TR (1) | TR199801668T2 (cs) |
TW (1) | TW505696B (cs) |
UA (1) | UA46831C2 (cs) |
WO (1) | WO1997032015A1 (cs) |
ZA (1) | ZA971597B (cs) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1102173C (zh) * | 1999-03-26 | 2003-02-26 | 福建医科大学 | 蕲蛇酶及其生产工艺 |
US20030219431A1 (en) * | 2002-05-24 | 2003-11-27 | Empire Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of neuronal and neurological damage associated with spinal cord injury |
CN101489655A (zh) | 2006-07-14 | 2009-07-22 | 威斯康星旧生研究基金会 | 捕获病毒用吸附膜 |
CN103160486A (zh) * | 2013-04-02 | 2013-06-19 | 黑龙江迪龙制药有限公司 | 一种猪凝血酶的制备方法 |
CN109929020A (zh) * | 2017-12-15 | 2019-06-25 | 浙江京新药业股份有限公司 | 一种眼镜蛇毒的纯化方法及其产品 |
CN108559740B (zh) * | 2018-05-12 | 2021-05-18 | 吉林天衡康泰生物技术有限公司 | 重组安克洛酶及工业规模制备方法和治疗急性脑梗的应用 |
CN109652398B (zh) * | 2018-12-29 | 2021-07-20 | 上海太阳生物技术有限公司 | 凝血因子ⅹ激活剂rvv-ⅹ的制备方法及制得的rvv-ⅹ |
CN110016471B (zh) * | 2019-04-10 | 2020-10-02 | 北京博康宁生物医药科技有限公司 | 重组安克洛酶及工业规模制备和纯化方法及其组合物 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1177506A (en) | 1964-02-21 | 1970-01-14 | Nat Res Dev | Improvements relating to Anticoagulants. |
GB1094301A (en) * | 1964-02-21 | 1967-12-06 | Nat Res Dev | Improvements relating to anticoagulants |
GB1293793A (en) | 1969-04-28 | 1972-10-25 | Chrysler United Kingdom Ltd Fo | Improvements in or relating to valves |
US3743722A (en) * | 1971-07-14 | 1973-07-03 | Abbott Lab | Anti-coagulant isolation |
US3879369A (en) | 1972-05-12 | 1975-04-22 | Abbott Lab | Anti-coagulant isolation from malayan pit viper using affinity chromatography |
GB1472574A (en) | 1973-09-03 | 1977-05-04 | Biochimici Fargal Pharmasint S | Process for the extraction of components having anticoagulant activity -in vivo- from snake venoms and related products |
NL7605805A (nl) * | 1976-05-28 | 1977-11-30 | Stichting Rega V Z W | Werkwijze voor het zuiveren van interferon. |
CH626917A5 (cs) | 1976-08-17 | 1981-12-15 | Pentapharm Ag | |
JPS5569595A (en) * | 1978-11-20 | 1980-05-26 | Suguru Abe | Novel substance having fibrinolytic activity, remedy for thrombotic embolic disease comprising it, and its preparation |
EP0328256A1 (en) * | 1988-01-21 | 1989-08-16 | Owens-Corning Fiberglas Corporation | Glass fibers coated with agarose for use as column packing or chromatographic media for bioseparations |
US5712117A (en) * | 1995-02-08 | 1998-01-27 | Zymogenetics, Inc. | Cytoplasmic antiproteinase-2 and coding sequences |
-
1996
- 1996-02-26 DE DE19607210A patent/DE19607210A1/de not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-02-18 KR KR10-1998-0706648A patent/KR100493835B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-02-18 ES ES97903312T patent/ES2233997T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-18 HU HU9900505A patent/HU225489B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1997-02-18 RU RU98117870/13A patent/RU2186849C2/ru active
- 1997-02-18 AU AU17913/97A patent/AU711650B2/en not_active Ceased
- 1997-02-18 BR BR9707738A patent/BR9707738A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-02-18 US US09/125,374 patent/US6200791B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-18 AT AT97903312T patent/ATE283350T1/de active
- 1997-02-18 PT PT97903312T patent/PT883684E/pt unknown
- 1997-02-18 NZ NZ331120A patent/NZ331120A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-02-18 TR TR1998/01668T patent/TR199801668T2/xx unknown
- 1997-02-18 WO PCT/EP1997/000755 patent/WO1997032015A1/de active IP Right Grant
- 1997-02-18 MX MX9806304A patent/MX9806304A/es unknown
- 1997-02-18 JP JP53055397A patent/JP3817269B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-18 SK SK1132-98A patent/SK284874B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-02-18 DE DE59712093T patent/DE59712093D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-18 UA UA98094992A patent/UA46831C2/uk unknown
- 1997-02-18 EP EP97903312A patent/EP0883684B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-18 CN CNB971925852A patent/CN1188517C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-02-18 CZ CZ19982697A patent/CZ292482B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-02-18 PL PL97328568A patent/PL186211B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-02-18 IL IL12539597A patent/IL125395A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-02-21 TW TW086102111A patent/TW505696B/zh not_active IP Right Cessation
- 1997-02-24 MY MYPI97000700A patent/MY130458A/en unknown
- 1997-02-24 ID IDP970561A patent/ID16046A/id unknown
- 1997-02-25 CO CO97010013A patent/CO4771158A1/es unknown
- 1997-02-25 AR ARP970100755A patent/AR005995A1/es active IP Right Grant
- 1997-02-25 ZA ZA971597A patent/ZA971597B/xx unknown
- 1997-02-26 HR HR970108A patent/HRP970108B1/xx not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-07-31 BG BG102663A patent/BG64875B1/bg unknown
- 1998-08-25 NO NO19983893A patent/NO319561B1/no not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-06-10 HK HK99102524A patent/HK1017380A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH11506603A (ja) | 新規因子ix精製法 | |
CN1308442C (zh) | 纯化酶的方法和按此产生出的经纯化的酶以及该酶的用途 | |
US5614500A (en) | Compositions containing highly purified factor IX proteins prepared by immunoaffinity chromatography | |
US4137127A (en) | Process for the preparation of thrombin-like enzymes from snake venoms | |
CZ292482B6 (cs) | Způsob čištění trombinu podobných proteáz z hadího jedu | |
US4929560A (en) | Recovery of tissue plasminogen activator | |
EP0379545B1 (en) | Recovery of urokinase compounds | |
Pastore et al. | [23] Pteroyllysine-agarose in the purification of dihydrofolate reductase | |
CA2247016C (en) | Purification of thrombin-like proteases from snake venoms | |
US4495096A (en) | Process for producing and obtaining anaphylatoxin-and cocytotaxin-containing leucotaxine preparations and of anaphylatoxin and cocytotaxin proteins in molecularly homogeneous, biologically active form | |
WO1990015865A1 (en) | Chymosin recovery and purification | |
CZ34797A3 (en) | Process for preparing soluble recombinant proteins from bacterial cells | |
JPH01108985A (ja) | 組織プラスミノーゲン活性化因子の精製方法 | |
JPS6317436B2 (cs) | ||
JPH03157396A (ja) | ペクチン酸―セルロースゲルによる蛋白質分離方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20120218 |