CZ283587B6

CZ283587B6 - Kombinovaná dětská očkovací látka

Info

Publication number: CZ283587B6
Application number: CZ932272A
Authority: CZ
Inventors: Peter R. Paradiso; Deborah A. Hogerman; Jill G. Hackell; Dace Viceps Madore
Original assignee: American Cyanamid Company
Priority date: 1992-10-27
Filing date: 1993-10-26
Publication date: 1998-05-13
Also published as: LV12271A; HK1009931A1; DE69323264T4; CZ227293A3; AU5029093A; FI934725A; ATE176157T1; RU2121365C1; NZ250029A; EP0594950B1; HUT67239A; ES2126616T3; KR940008698A; AU669570B2; UA27754C2; JPH07300427A; NO933856D0; PL174130B1; LV12271B; CA2109159A1

Abstract

Kombinovaná dětská očkovací látka, která v jediné imunizační dávce obsahuje směs antigenů zášrtu, tetanu a černého kašle a konjugát fragmentů kapsulárního polysacharidového antigenu Haemophilus influezae typu b a proteinu CRM.sub.197 .n.ve farmaceuticky vhodném nosiči, přičemž tato kombinovaná očkovací látka poskytuje zvýšenou protilátkovou odpověď u nemluvňat na každou ze složek očkovací látky proti záškrtu, tetanu, černému kašli a Haemophilus influenzae typu b.ŕ

Description

Kombinovaná dětská očkovací látka

Oblast techniky

Vynález se týká kombinované dětské očkovací látky pro zajištění zvýšené protilátkové odpovědi u nemluvňat na každý z patogenů záškrtu, tetanu, černého kašle a Haemophilus typu b.

Dosavadní stav techniky

Kombinované očkovací látky mají mnoho výhod a jejich používání se obecně dává přednost. V optimálním případě se očkování proti mnoha chorobám provádí u nemluvňat nebo u malých dětí. V tomto období tedy dochází obvykle k tomu, že jsou mnohé očkovací akce naplánovány v krátkém časovém rozmezí. Simultánní podávání může snížit náklady spojené s podáváním očkovacích látek, zvýšit podíl dětí, u nichž se očkování ujme a umožňuje časné očkování dětí v širokém rozsahu.

Jako příklady kombinací očkovacích látek používaných při očkování dětí je možno uvést kombinaci toxoidů záškrtu a tetanu s usmrcenými celými buňkami Bordetella pertussis (DTP); nebo s nebuněčnými antigeny pertussis; kombinaci živých očkovacích látek proti spalničkám, příušnicím a zarděnkám (MMR); kombinaci tří serotypů polioviru, jako je živá (orální poliovirová očkovací látka) nebo inaktivní očkovací látka (IPV); a kombinaci DTP-IPV.

Současná praxe při očkování v USA vyžaduje očkování nemluvňat počínaje dvěma měsíci věku jak 1) očkovací látkou obsahující toxoidy záškrtu a tetanu a očkovací látku proti černému kašli (DTP), tak 2) konjugátovou očkovací látkou proti Haemophilus influenzae typu b. Dvěma takovými obchodně dostupnými očkovacími látkami jsou Tri-Immunol(R) (Lederle Laboratories), a HibTITER(R) (Praxis Biologics, lne.) Obě tyto očkovací látky jsou doporučovány pro podávání ve dvou, čtyřech a šesti měsících věku, s přeočkováním v 15 až 18 měsících věku. Přídavná dávka DTP se doporučuje ve věku 4 až 6 let. Obě tyto očkovací látky podávané odděleně byly pozoruhodně úspěšné při snižování výskytu chorob v USA.

Bylo by sice žádoucí zkombinovat DTP a konjugát Haemophilus influenzae typu b do jediné očkovací látky, aby se snížil počet očkování, které děti musí prodělat, taková kombinace však musí mít přijatelný profil bezpečnosti a ochranné imunogenicity, které nejsou nižší než v případě, že se obě očkovací látky podávají odděleně.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je kombinovaná dětská očkovací látka pro zajištění zvýšené protilátkové odpovědi u nemluvňat na každý z patogenů záškrtu, tetanu, černého kašle a Haemophilus typu b., jejíž podstata spočívá v tom, že v jediné imunizační dávce obsahuje směs antigenů záškrtu, tetanu a černého kašle a konjugát fragmentů kapsulámího polysacharidového antigenu Haemophilus influenzae typu b a proteinu CRMi₉₇ ve farmaceuticky vhodném vodném nosiči.

Tato kombinovaná očkovací látka vykazuje zlepšenou imunogenicitu u malých dětí, vzhledem ke každé z těchto 4 složek očkovací látky, ve srovnání s případem, kdy se očkovací látky DTP a konjugát Haemophilus influenzae typu b (Hib konjugát) podávají ve stejné době, ale odděleně. Zvýšené imunogenicity u malých dětí se dosahuje v případě všech čtyř složek očkovací látky.

Kombinační očkovací látka podle tohoto vynálezu obsahuje zejména sterilní směs toxoidu záškrtu adsorbovaného na fosforečnanu hlinitém, toxoidu tetanu, adsorbovaném na fosforečnanu

- 1 CZ 283587 B6 hlinitém, inaktivované Bordetella pertussis a konjugátu fragmentů kapsulámího polysacharidu Haemophilus influenzae typu b s proteinem CRM197 ve farmaceuticky vhodném vodném nosiči. Po protřepání tvoři kombinovaná očkovací látka podle tohoto vynálezu homogenní bílou suspenzi. Kromě toho, složky očkovací látky jsou stálé a kompatibilní a nevykazují mezisložkovou inhibiční účinnost.

Kombinovaná dětská očkovací látka podle tohoto vynálezu obsahuje tedy směs antigenů záškrtu, tetanu a černého kašle s konjugátem fragmentů kapsulámího polysacharidu Haemophilus influenzae typu b, které jsou kovalentně vázány k CRM197. V přednostním provedení je záškrtovým antigenem toxoid záškrtu adsorbovaný na fosforečnanu hlinitém a tetanovým antigenem toxoid tetanu adsorbovaný na fosforečnanu hlinitém. Tyto toxoidy je možno připravovat způsoby, které jsou o sobě známé v tomto oboru. Toxoid záškrtu je odvozen od Corynebacterium diphtheriae a toxoid tetanu od Clostridium tetani, které se kultivují na médiích způsobem podle Muellera a Millera, J. Immunol., 1941, 40: 21 až 32 a J. Immunol., 1947 56: 143 až 147 a detoxikují se za použití formaldehydu. Toxoidy se čistí Pillemerovou frakcionační metodou za použití alkoholu, J. Immunol., 1946, 54: 213 až 224 a ředí se vodným roztokem obsahujícím hydrogenfosforečnan sodný, dihydrogenfosforečnan sodný, glycin a thimerosal (derivát rtuti), jako konzervační prostředek.

Antigenem pertussis je přednostně inaktivovaný přípravek na bázi celých buněk kmene nebo kombinace kmenů Bordetella pertussis. Inaktivovaný přípravek s celými buňkami pertussis se připravuje pěstováním Bordetella pertussis fáze I v modifikované Cohen-Wheelerově půdě obsahující kyselý hydrolyzát kaseinu. Bordetella pertussis se inaktivuje thimerosalem, sklidí a potom suspenduje ve vodném roztoku obsahujícím hydrogenfosforečnan draselný, dihydrogenfosforečnan sodný, chlorid sodný a thimerosal (derivát rtuti), jako konzervační prostředek.

Složky DTP se mohou dodávat ve formě směsi. Tak například lze pro kombinovanou očkovací látku podle vynálezu použít obchodně dostupného přípravku DTP, jako je přípravek, který je dostupný od Lederle Laboratories pod obchodním označením Tri-Immunol^(R).

Konjugátová složka Hib kombinační očkovací látky podle tohoto vynálezu zahrnuje fragmenty bakteriálního kapsulámího polysacharidu Haemophilus influenzae typu b, které jsou kovalentně vázány k proteinu CRM19-. Tyto fragmenty se připravují jodistanovým štěpením purifikovaného kapsulámího polysacharidu izolovaného z Haemophilus influenzae typu b pěstovaného na chemicky definovaném mediu. Protein CRM197 je netoxickou variantou záškrtového toxinu, která se izoluje z kultur C. diphtheriae kmene C7 (Beta 197) pěstovaných na médiu s kasaminovými kyselinami a kvasničným extraktem. Fragmenty Haemophilus influenzae typu b se kovalentně vážou k proteinu CRM₁₉7. Obzvláště přednostním způsobem kovalentního připojování sacharidu k proteinu je redukční aminace. Příprava konjugátů Haemophilus influenzae typu b a CRM197 redukční aminací je popsána v US patentech č. 4 673 574, 4 761 283 a 4 902 506. Konjugát se přečistí diafiltrací, aby se odstranil nezreagovaný protein nebo fragmenty polysacharidu a reakční činidla a sterilizuje se filtrací. Pro kombinační očkovací látku podle tohoto vynálezu se může použít obchodně dostupného konjugátu Haemophilus influenzae typu b, jako je výrobek dostupný od firmy Praxis Biologics, lne. pod označením HibTITER^(R).

Kombinovaná očkovací látka podle tohoto vynálezu se připravuje přidáním koncentrátu konjugátu Haemophilus influenzae typu b k přípravku na bázi DTP, pokud je očkovací látka na bázi DTP zředěna na konečný objem. Výsledná imunizační dávka tedy zůstává 0,5 ml. Každá jednotková dávka 0,5 ml kombinované očkovací látky podle vynálezu se připravuje tak, aby obsahovala přinejmenším 7,5 Lf toxoidu záškrtu, 5 Lf toxoidu tetanu (oba toxoidy indukují alespoň dvě jednotky antitoxinu na ml při zkoušce účinnosti na morčeti), 10 pg přečištěného sacharidu Haemophilus influenzae typu b a přibližně 25 pg proteinu CRM197. Každá 0,5 ml

-2CZ 283587 B6 dávka očkovací dávky se připravuje tak, aby obsahovala méně než 160PU inaktivovaných buněk pertussis. Celková humánní imunizační dávka (první tři podané 0,5ml dávky) obsahuje odhadem 12 jednotek očkovací látky proti pertussis při odhadem čtyřech ochranných jednotkách na jednotlivou humánní dávku. Každá složka této očkovací látky, toxoid záškrtu, toxoid tetanu, konjugát pertussis a Haemophilus inffluenzae typu b splňuje požadované normy na účinnost.

Jako konzervační prostředek se ke kombinované očkovací látce podle vynálezu přidává thimerosal (derivát rtuti) do konečné koncentrace 1:10 000. Složka hliníku v konečném produktu nepřekračuje 0,85 mg, vztaženo na 0,5ml dávku (výsledek zkoušení). Zbytkový obsah formaldehydu je < 0,02 % (výsledek zkoušení).

Kombinovaná očkovací látka obsahující všechny čtyři složky (D,T,P a Hib konjugát) je k dispozici ve formě vodného přípravku. Po protřepání je očkovací látka homogenní a má povahu bílé suspenze. Do kombinované očkovací složky podle vynálezu se také mohou přidat vhodné adjuvanty. Očkovací látka se podává intramuskulámě.

Čtyřsložková kombinovaná očkovací látka podle vynálezu se připravuje výše popsaným způsobem za použití DTP (Tri-Immuneol^(R), Lederle Laboratories) a Hib konjugátu (HibTITER^tR), Praxis Biologics).

Zvýšená imunogenicita každé ze čtyř složek očkovací látky ve formě kombinace byla potvrzena klinickými zkouškami. Byly provedeny zkoušky multicentrální bezpečnosti u batolat a u nemluvňat. Kromě toho byla provedena studie ve velkém měřítku u nemluvňat, za účelem zjištění výskytu řídkých negativních účinků při zkoušení na velkém počtu jedinců.

Jak při zkouškách bezpečnosti u batolat a nemluvňat, tak při zkouškách imunogenicity byly děti náhodným způsobem rozděleny tak, že některé obdržely jedinou 0,5ml dávku jedné ze tří konzistentních várek čtyřsložkové kombinované očkovací látky (kombinace D,T,P a Hib konjugátu) a jiné 0,5ml dávku každé z očkovacích látek, jednak na bázi DTP a jednak na bázi Hib konjugátu, zvolených vždy z jedné ze tří odpovídajících várek DTP a Hib konjugátu při současném podávání ve formě separátních injekcí (DTP-Hib konjugát - odděleně) v 18 ± 3 měsících věku nebo přibližně 2, 4 a 6 měsících věku. Podle ošetření byly tedy děti rozděleny do jedné ze šesti skupin. Akutní bezpečnost byla odhadována na základě zpráv rodičů o negativních účincích do 72 hodin od očkování. Imunogenicita byla stanována serologickou analýzou protilátek proti polysacharidu Haemophilus influenzae typu b (Hib polysacharidu), záškrtu, tetanu a černému kašli.

Každý studijní protokol byl analyzován nezávisle. Primární analýza dat vztahujících se k bezpečnosti a immunogenicitě ukázala, že všechny tři konzistentní várky čtyřsložkové kombinované očkovací látky byly podobné ve všech zkoušených parametrech, a proto byla data spojena. Tentýž případ nastal u tří odpovídajících várek DTP a Hib konjugátu, které byly podány současně ve formě oddělených injekcí.

a. Studie bezpečnosti u batolat a studie imunogenicity

Celkem se zkoušce podrobilo 215 batolat (kombinovaná očkovací látka - 107 batolat, konjugát DTB-Hib, separátně - 108 batolat). Na všech čtyřech klinických místech se zařazení batolat provádělo statisticky. Demografické charakteristiky všech batolat jsou podobné.

Serologické analýzy před očkováním a 1 měsíc po něm na vzorcích séra neukázaly žádný rozdíl v odpovědi na polysacharid Hib, záškrtový ani tetanový antigen (viz tabulka 1). Protilátková odpověd” na aglutininy pertussis byla však významně vyšší u skupiny, která obdržela kombinovanou očkovací látku (142,58) ve srovnání se skupinou, která obdržela konjugát DTP-Hib odděleně (82,44; p = 0,013).

-3CZ 283587 B6

b. Studie bezpečnosti u nemluvňat a studie imunogenicity

Celkem se zkoušce podrobilo 378 nemluvňat (kombinovaná očkovací látka - 189 nemluvňat, DTP-Hib konjugát, odděleně - 189 nemluvňat. Na všech pěti klinických místech byla nemluvňata pro zkoušky roztříděna statisticky. Demografické charakteristiky všech nemluvňat byly podobné.

Odpověď na polysacharid Hib po každém ze tří očkování byla vyšší u jedinců, kteří obdrželi kombinovanou očkovací látku (viz tabulka 2). Po dvou dávkách byl geometrický střední titr (GMT) skupiny, která obdržela kombinovanou očkovací látku, 0,66 pg/ml, ve srovnání s hodnotou 0,34 pg/ml, v případě skupiny, které byl konjugát DTP-Hib podán odděleně (p < 0,001). Stejný trend byl pozorován i po třetí dávce, 6,67 pg/ml u kombinované očkovací látky, ve srovnání s dávkou 4,42 pg/ml u separátních očkovacích látek DTP-Hib-konjugát (p = 0,034).

Serologická odpověď na složky DTP byla měřena 1 měsíc po třetí dávce. GMT protilátky proti záškrtu (0,71 IU/ml) proti 0,40 IU/ml; p - 0,009), tetanu (8,20 proti 4,51; p < 0,001) a aglutininům pertussis (51,93 proti 23,34; p - 0,008) byl ve všech případech významně vyšší v případě skupiny, která obdržela kombinovanou očkovací látku, ve srovnání se skupinou, která očkovací látky obdržela odděleně (viz tabulka 2). V případě záškrtu a černého kašle byl tento významný rozdíl ztracen při porovnávání poměru odpovědi vůči základnímu titru. Podskupina sér byla analyzována na protilátky proti specifickým antigenům pertussis: toxinu pertussis (PT), FHA a proteinu 69K. Odpověď na PT (85,92 proti 17,60; p = 0,001) a FHA (2,32 proti 0,79; p = 0,0001) byla významně vyšší v případě skupiny, jíž byla podána kombinovaná očkovací látka, ve srovnání se skupinou, která obdržela očkovací látky odděleně (viz tabulka 3). Žádný rozdíl však nebyl zjištěn u 69K (kombinovaná vakcína, 66,43, proti oddělenému podání, 41,55; P = 0,U).

c. Studie bezpečnosti ve velkém měřítku na nemluvňatech a studie imunogenicity na podskupině nemluvňat

Jako součást programu Kaiser Permanente Medical Care Program of Northem Califomia byla provedena studie bezpečnosti ve velkém měřítku. Při této studii bylo použito jak nestatistického tak statistického modelu. U nestatistického modelu byla sbírána data vztahující se k kombinované očkovací látce u velkého počtu jedinců (počet jedinců 5777) Statistický model představoval řízenou studii, při níž bylo možno popřípadě porovnávat bezpečnost kombinované očkovací látky (počet zkušebních nemluvňat 720) za použití skupiny, která obdržela DTP-Hib konjugát ve stejné době ve formě separátních injekcí (počet zkušebních nemluvňat 691). Tři dávky kombinované očkovací látky (D,T,P a Hib konjugát - kombinovaně) obdrželo tedy celkem 6497 nemluvňat, přibližně ve věku 2, 4 a 6 měsíců.

Byl sledován výskyt lokálních a systemických účinků do 24 hodin od očkování. Řídké účinky, jako například křeče, byly zjišťovány vyhodnocováním počtu hospitalizací do 60 dnů a počtu návštěv na ambulanci do 30 dnů od očkování. V sérii tří návštěv nedošlo k lokálním ani systemickým reakcím konzistentně s větší frekvencí po podání kombinované očkovací látky ve srovnání se samotným DTP. Kromě toho, nedošlo k žádnému podstatnému rozdílu v počtu lékařsky zjištěných nepříznivých účinků na základě sledování hospitalizace a návštěv na ambulanci. Poměr lethality SIDS byl poněkud nižší u skupiny, která obdržela kombinovanou očkovací látku, ve srovnání s kontrolní skupinou.

Odpověď na polysacharid Hib, záškrt, tetanus a pertussis byla měřena 1 měsíc po třetí dávce kombinované očkovací látky na podskupině 123 jedinců. Zjištěné hodnoty byly srovnatelné s hodnotami zjištěnými ve studii multicentrální bezpečnosti a imunogenicity u nemluvňat, popsané výše (viz tabulka 4).

-4CZ 283587 B6

Serologické postupy

Serologické zkoušky byly prováděny zkouškou Elisa na přítomnost protilátek proti polysacharidu Haemophilus influenzae typu b a tetanu (v případě zkoušek na nemluvňatech), zkouškou ve Verově cele (J. Biol. Stand. 2: 189 až 201; J. Biol. Stand. 2: 203 až 209) na přítomnost protilátek proti záškrtu, zkouškou s usmrcením myší (Bull WHO 43: 453 až 459; Minimum Requirements: Tetanus Toxoid Appendix A, 15. června 1953, Pub., Health Serv., NIH; Craig, 1986, Manual of Clinical Laboratory Immunol., str. 408 až 414, 3. vydání) na přítomnost protilátek proti tetanu (studie na batolatech) a mikroaglutinační zkouškou (Manclark et al, 1986, Manual of Clinical Laboratory Immunol., str. 388 až 394, 3. vydání) na protilátky proti černému kašli.

Jak je zřejmé z klinických studií, které jsou zde uvedeny, byla odpověď nemluvňat na každou ze složek očkovací látky vyšší v případě kombinované očkovací látky, ve srovnání s případem, kdy byly očkovací látky na bázi DPT a Hib konjugátu podávány sice současně, ale odděleně. Za použití kombinované očkovací látky podle vynálezu je tedy možno snížit počet očkování nemluvňat na polovinu, což představuje důležitý krok kupředu při zlepšování očkování.

Tabulka 1

Porovnávací protilátkové odpovědi v případě kombinované očkovací látky a v případě oddělených očkovacích látek¹

titr protilátky (GMT)
složka (n²)	kombinovaná (107)	separátní (108)	hodnota p³
Hib konjugát (pg/ml) pre post Diphteria (IU/ml) pre post Tetanus (U/ml) pre post aglutininy pertussis (reciproční ředění) pre post	0,21 2,77 0,12 9,56 0,60 9,68 14,20 142,58	0,25 3,19 0,13 10,79 0,52 8,60 11.43 82.44	0,270 0,689 0,812 0,637 0,542 0,582 0,451 0,013

1. Kombinovaná čtyřsložková očkovací látka (D, T, P a Hib konjugát) nebo separátní očkovací látky (DTP-hib konjugát) byly podávány ve věku 15 až 18 měsíců s odběrem krve na serologickou analýzu po jednom měsíci.

2. Celkový počet účastníků zkoušky

-5CZ 283587 B6

3. Vztaženo na účinky od primárního (kovariát nastaven) modelu zahrnujícího: ošetření, střed, várku, věk, základní hodnotu úrovně protilátky.

Tabulka 2

titr protilátky (GMT)
složka (n²)	kombinovaná (189)	separátní (189)	hodnota p³
Hib konjugát (gg/ml) pre	0,09	0,09	0,762
post	6,67	4,42	0,034
Diphteria (IU/ml) pre	0,04	0,05	0,624
post	0,71	0,40	0,009
Tetanus (U/ml) pre	0,45	0,50	0,404
post	8,20	4,51	<0,001
aglutininy pertussis (reciproční ředění) pre	6,53	4,69	0,121
post	51,93	23,34	0,008

2. Celkový počet účastníků zkoušky

Tabulka 3

Porovnání protilátkové odpovědi na tři složky očkovací látky proti černému kašli jednak v případě kombinované očkovací látky a jednak v případě oddělených očkovacích látek

-6CZ 283587 B6

titr protilátky (GMT¹)
složka očkovací látky	kombinovaná očkovací látka (n = 52)	oddělené očkovací látky (n = 34)	hodnota p²
pertussis toxin
pre	1,09	1,80
post 3	85,92	17,60	0,001
69K
bpre	6,13	5,98
post 3	66,43	41,55	0,11
FHA
pre	3,97	4,73
post 3	2,32	0,79	0,0001

1. Titr protilátky je uveden v jednotkách ELISA na ml

2. Hodnoty p vypočteny za použití Wilcoxonova dvouvzorkového testu

Tabulka 4 ío Protilátková odpověď na každou ze složek kombinované očkovací látky (D, T, O a Hib konjugát)

složka	n	titr protilátky (GMT)
Hib konjugát (pg/ml)	123	8,20
Diphteria (IU/ml)	123	0,92
Tetanus (U/ml)	123	7,52
aglutininy pertussis (reciproční ředění)	123	110,10

1. Titr protilátky jeden měsíc po třetí dávce. Nebylo získáno žádné sérum před očkováním.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Kombinovaná dětská očkovací látka pro zajištění zvýšené protilátkové odpovědi u nemluvňat na každý z patogenů záškrtu, tetanu, černého kašle a Haemophilus typu b., vyznačující se tím, že v jediné imunizační dávce obsahuje směs antigenů záškrtu, tetanu a černého kašle a konjugát fragmentů kapsulámího polysacharidového antigenu Haemophilus influenzae typu b a proteinu CRM₁₉₇ ve farmaceuticky vhodném vodném nosiči.
2. Kombinovaná dětská očkovací látka podle nároku 1, vyznačující se tím, že jako antigen záškrtu obsahuje záškrtový toxoid, jako antigen tetanu tetanový toxoid a jako antigen černého kašle inaktivované buňky Bordetella pertussis.
3. Kombinovaná dětská očkovací látka podle nároku 2, vyznačující se tím, že toxoid záškrtu je adsorbován na fosforečnanu hlinitém, toxoid tetanu je adsorbován na fosforečnanu hlinitém a inaktivované buňky Bordetella pertussis jsou suspendovány v roztoku obsahujícím hydrogenfosforečnan draselný, dihydrogenfosforečnan sodný a chlorid sodný.