CZ282054B6

CZ282054B6 - 1-/Pyrido/3,4-b/-1,4-oxazin-4-yl/-1H-indoly, meziprodukty a způsob jejich přípravy a jejich použití jako léčiv

Info

Publication number: CZ282054B6
Application number: CS921135A
Authority: CZ
Inventors: Richard Charles Effland; Larry Davis; Gordon Edward Olsen
Original assignee: Hoechst Marion Roussel, Inc.
Priority date: 1991-04-15
Filing date: 1992-04-14
Publication date: 1997-05-14
Also published as: JPH05112572A; EP0509400B1; NO921490L; PL294221A1; IE74907B1; HU9201290D0; NO301765B1; HUT62588A; ATE140006T1; JP2608359B2; DE69211892T2; NO921490D0; DK0509400T3; DE69211892D1; NZ242309A; ES2094840T3; IL101589A0; AU1485292A; KR920019796A; FI921641A

Abstract

Sloučeniny vzorce I, kde R.sub.1 .n.je vodík nebo nižší alkyl, R.sub.2 .n.je vodík nebo nižší alkyl a R.sub.3 .n.je vodík, nižší alkyl, halogen, nitro, amino, hydroxy, nižší alkoxy, benzyloxy nebo -O-C/O/-NR.sub.4.n.R.sub.5.n., kde R.sub.4 .n.je vodík nebo nižší alkyl a R.sub.5 .n.je nižší alkyl, aryl nebo aryl/nižší/alkyl, nebo R.sub.4 .n.a R.sub.5 .n.tvoří společně heterocyklický kruh vybraný ze skupiny uvedených vzorců, kde R.sub.6 .n.je vodík, nižší alkyl, aryl nebo aryl/nižší/alkyl nebo jejich farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami. Sloučeniny jsou použitelné ke zmírnění deprese a různých poruch paměti, charakterizovaných cholinergním nebo adrenergním deficitem, jako je Alzheimerova nemoc a mohou se tudíž užívat jako léčiva.ŕ

Description

Vynález se týká l-(pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indolů, postupu přípravy těchto sloučenin, meziproduktů, používaných při provádění tohoto postupu přípravy uvedených sloučenin, farmaceutického prostředku, obsahujícího přinejmenším některou z této nové skupiny sloučenin, a použití uvedených sloučenin pro zmírňování různých paměťových dysfunkcí, které se vyznačují cholinergním nebo adrenergním deficitem, a/nebo použití těchto sloučenin jako antidepresív.

Dosavadní stav techniky

Pokud se týče dosavadního stavu techniky, je možno uvést, že v této oblasti nejsou známy žádné podobné sloučeniny, které by projevovaly stejný účinek jako sloučeniny podle předmětného vynálezu.

Podstata vynálezu

Podstatou předmětného vynálezu jsou nové l-(pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indoly obecného vzorce I:

(I), ve kterém znamená:

R[ atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku,

R₂ představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, a

R₃ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, atom halogenu, nitroskupinu, aminovou skupinu, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, benzyloxyskupinu nebo skupinu —O—C—NR4R5

II o

ve které:

R4 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, a

R₅ znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu, obsahující v alkylové části 1 až 7 atomů uhlíku, nebo R4 a R₅ dohromady tvoří heterocyklický kruh, vybraný ze souboru, zahrnujícího

- 1 CZ 282054 B6

ve kterých:

R$ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku v alkylové části, přičemž ve všech uvedených případech znamená arylová skupina fenylovou skupinu, nesubstituovanou nebo substituovanou jedním nebo dvěma substituenty, vybranými nezávisle ze souboru, zahrnujícího alkylové skupiny, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, alkoxyskupiny, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, atomy halogenu nebo trifluormethylovou skupinu, a farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami, odvozené od těchto sloučenin.

Mezi výhodný l-(pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indol patří výše uvedená sloučenina obecného vzorce I, ve kterém Rj znamená atom vodíku.

Rovněž jsou podle uvedeného vynálezu výhodné l-(pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indoly výše uvedeného obecného vzorce I, ve kterém R₃ znamená atom vodíku, hydroxyskupinu, benzyloxyskupinu nebo skupinu —O—C—NR4R5

II o

ve které R₅ znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku.

Jako konkrétní příklad nových l-(pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indolů výše uvedeného obecného vzorce I je možno uvést:

- (pyrido[3,4-bj-1,4-oxazin-4-yl)-1 H-indol-5-yl-methylkarbamát, a

4-(3-methy 1-1 H-indol-1 -yl)-pyrido[3,4-b]-1,4-oxazin.

Podstata způsobu přípravy nových l-(pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indolů výše uvedeného obecného vzorce I podle vynálezu spočívá v tom, že se:

(a) cyklizuje sloučenina obecného vzorce II:

-2CZ 182054 B6

(lib) ve kterém mají R_b R₂ a R₃ stejný význam, jak bylo uvedeno výše, v přítomnosti silné bázické sloučeniny za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém mají R_b R₂ a R₃ stejný význam, jak bylo uvedeno shora, (b) popřípadě se sloučenina obecného vzorce I, ve kterém mají Ri a R₂ stejný význam, jak bylo uvedeno shora, a R₃ znamená bezyloxyskupinu, podrobí katalytické hydrogenolýze za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R| a R₂ mají stejný výše uvedený význam a R₃ znamená hydroxyskupinu, (c) popřípadě se sloučenina obecného vzorce I, ve kterém R! a R₂ mají stejný význam, jak bylo uvedeno shora, a R₃ znamená hydroxyskupinu, uvede do reakce s isokyanátem obecného vzorce

Rs—NCO ve kterém R₅ znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku v alkylové části, přičemž arylová skupina má výše uvedený význam, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R₃znamená skupinu obecného vzorce

ve kterém R₅ má stejný výše uvedený význam, (d) nebo se popřípadě sloučenina obecného vzorce I, ve kterém Ri aR₂ mají stejný výše uvedený význam a R₃ znamená hydroxyskupinu, uvede do reakce se sloučeninou

H

nebo

kde Ré má stejný výše uvedený význam, v přítomnosti karbonyldiimidazolu, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R_t a R₂

-3CZ 282054 B6 mají výše uvedený význam a R₃ znamená skupinu obecného vzorce

-C—NR4R5 II o ve kterém R4 a R₅ tvoří společně s atomem dusíku heterocyklický kruh, vybraný ze souboru, zahrnujícího

kde Ré má stejný význam, jak bylo uvedeno shora.

Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž patří sloučeniny obecného vzorce II:

ve kterém:

Ri znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku,

R₂ představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku,

R₃ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, atom halogenu, nitroskupinu, aminovou skupinu, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, benzyloxyskupinu nebo skupinu —NR4R5

O ve které:

R5 znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo

-4CZ 282054 B6 arylalkylovou skupinu, obsahující v alkylové části 1 až 7 atomů uhlíku, nebo R4 a R₅ dohromady tvoří heterocyklický kruh, vybraný ze souboru, zahrnujícího

nebo

ve kterých:

R« znamená atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku v alkylové části,

X znamená atom halogenu, a

R₇ znamená skupinu (CH₂)₂OH, CH₂CO₂R₈ nebo

O

II ch₂ch kde R₈ znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, přičemž ve všech uvedených případech znamená arylová skupina fenylovou skupinu, nesubstituovanou nebo substituovanou jedním nebo dvěma substituenty, vybranými nezávisle ze souboru, zahrnujícího alkylové skupiny, obsahující 1 až Ί atomů uhlíku, alkoxyskupiny, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, atomy halogenu nebo trifluormethylovou skupinu, a farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami, odvozené od těchto sloučenin, které představují meziprodukty pro přípravu sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu.

Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží farmaceutický prostředek pro zmírňování paměťových dysfunkcí a/nebo s antidepresivní účinností, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje jako účinnou složku l-(pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indol obecného vzorce I podle vynálezu a vhodnou nosičovou látku.

Tyto nové l-(pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indoly obecného vzorce I podle vynálezu jsou vhodné pro zmírňování různých paměťových dysfunkcí, které se vyznačují cholinergním nebo adrenergním deficitem, a/nebo je možno jich použít jako antidepresív. Do rozsahu předmětného vynálezu tedy rovněž náleží použití výše uvedených sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu k výše uvedeným účelům.

Pokud nebude výslovně uvedeno jinak, potom mají v popisné části a v patentových nárocích dále definované termíny následující význam.

Termín nižší alkylová skupina označuje alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, jako je například methylová skupina, ethylová skupina, n-propylová skupina, isopropylová skupina, n-butylová skupina, isobutylová skupina, sekundární

-5CZ 282054 B6 butylová skupina, terciární butylová skupina, a rovněž tak následující skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem: pentylová skupina, hexylová skupina a heptylová skupina.

Termínem halogen se míní atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu.

Termín aryl označuje fenylovou skupinu, nesubstituovanou nebo substituovanou jedním až dvěma substituenty, z nichž každý je nezávisle vybrán ze skupiny, zahrnující nižší alkylové skupiny, nižší alkoxyskupiny, halogeny a trifluormethylovou skupinu.

V popisu předmětného vynálezu a v patentových nárocích zahrnují všechny ilustrované strukturní vzorce sloučenin a jejich názvy všechny stereoisomery, optické isomery, geometrické isomery a tautomemí isomery, pokud takové isomery existují.

V dalším popisu bude postup přípravy sloučenin podle vynálezu obecného vzorce I popsán podrobněji. V tomto reakčním postupu mají substituenty R_t, R₂, R₃, Ri a R₅ stejný shora uvedený význam, pokud nebude výslovně uvedeno jinak.

Při provádění postupu přípravy sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu se nejdříve sloučenina vzorce Ha:

CH₃ (Ha), uvede do reakce s lithiumaluminiumhydridem nebo jiným vhodným redukčním činidlem za standardních redukčních podmínek za vzniku sloučeniny vzorce lib:

(Kb)

Tato reakce se obvykle provádí v etherickém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran nebo ether, při teplotě v rozmezí od asi 0 °C do 10 °C a po dobu v rozmezí od 1 do 4 hodin.

-6CZ 282054 B6

Sloučenina vzorce Ila se připraví reakcí sloučeniny vzorce III:

(ΠΙ) s ethylacetátem v přítomnosti silné bázické látky, jako je například hydrid sodný.

Získaná sloučenina vzorce lib se potom cyklizuje za použití silné bázické sloučeniny, jako je například hydrid sodný nebo terciární butoxid draselný, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu, ve kterém R₃ znamená atom vodíku.

Tato reakce se obvykle provádí v polárním aprotickém rozpouštědle, jako je například dimethylformamid, dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, hexamethylfosforamid nebo dimethylsulfoxid, při teplotě v rozmezí od asi 25 °C do asi 100 °C a po dobu v rozmezí od 1 hodiny do 10 hodin.

Sloučeniny, ve kterých R₃ neznamená atom vodíku, se mohou připravit následujícím způsobem

Sloučenina vzorce IV

se redukuje obdobným způsobem, jak bylo uvedeno shora, za použití lithiumaluminiumhydridu nebo jiného vhodného redukčního činidla, za vzniku sloučeniny vzorce V:

Takto získaná sloučenina vzorce V se potom cyklizuje obdobným způsobem, jak bylo uvedeno shora, čímž se získá sloučenina podle vynálezu vzorce VI:

(VI)

Sloučenina vzorce VI se potom podrobí katalytické hydrogenolýze za vzniku sloučeniny podle vynálezu vzorce VII:

(VII)

Tato hydrogenolýza se obvykle provádí v přítomnosti katalyzátoru, kterým je vzácný kov, jako například platina nebo palladium na aktivním uhlí, v prostředí nižšího alkanolu, který slouží jako rozpouštědlo, jako je například ethanol nebo isopropanol, při teplotě v rozmezí od asi 25 °C do 80 °C.

Sloučenina vzorce VII se potom uvede do reakce s isokyanátem vzorce:

-8CZ 282054 B6

R—NCO ve kterém R₅ znamená nižší alkylovou skupinu, arylovou skupinu nebo aryl(nižší alkyl)-skupinu, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve které R₃ znamená skupinu:

—O—C—NHR₅

II o

Tato reakce se obvykle provádí v přítomnosti bázické látky, jako je například uhličitan draselný, v rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, při teplotě v rozmezí od asi 0 °C do 50 °C po dobu 1 až 24 hodin.

K přípravě sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R4 a R₅ tvoří společně heterocyklický kruh, se sloučenina vzorce VII uvede do reakce se sloučeninami, vybranými ze skupiny, zahrnující:

H

v přítomnosti karbonyldiimidazolu. Tato reakce se obvykle provádí v etherickém rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran nebo dioxan, při teplotě asi 0 °C až 70 °C, po dobu 1 až 24 hodin.

Sloučeniny vzorce I podle vynálezu jsou použitelné k léčení různých poruch paměti, které se vyznačují sníženou cholinergní nebo adrenergní funkcí, jako je Alzheimerova choroba, a ke zmírnění deprese.

Tato užitečnost se projevuje schopností uvedených sloučenin inhibovat enzym acetylcholinesterázu a tím zvyšovat hladinu acetylcholinu v mozku.

Zkouška inhibice cholinesterázy

Cholinesterázy se nacházejí v celém těle, jak v mozku, tak i v séru. Avšak pouze distribuce mozkové acetylcholinesterázy /AChE/ je ve vztahu k centrální cholinergní inervaci. Předpokládá se, že tato inervace je u pacientů, postižených Alzheimerovou chorobou, zeslabena. Podle metody, popsané dále, byla stanovena inhibice aktivity acetylcholinesterázy v krysím striatu in vitro.

Inhibice aktivity acetylcholinesterázy v krysím striatu in vitro

Acetylcholinesteráza /AChE/, která se někdy nazývá vlastní nebo specifická cholinesteráza, se nachází v nervových buňkách, kosterním svalstvu, hladkém svalstvu a v červených krvinkách. AChE se může lišit od jiných cholinesteráz specifičností substrátu a inhibitoru a oblastní distribucí. Její distribuce v mozku je ve vztahu k cholinergní inervaci a subfrakcionace ukazuje

-9CZ 282054 B6 nejvyšší hladinu v nervových zakončeních.

Všeobecně se soudí, že fyziologická úloha AChE spočívá v rychlé hydrolýze a inaktivaci acetylcholinu. Inhibitory AChE vykazují markantní cholinomimetické účinky v cholinergicky inervovaných efektorech orgánů a užívají se terapeuticky při léčení glaukomu, těžké svalové ochablosti /myasthenia gravis/ a paralytického ilea. Avšak poslední výzkumy naznačují, že inhibitory AChE mohou být užitečné při léčení Alzheimerovy demence.

Níže popsaná metoda byla použita pro zkoumání aktivity cholinesterázy podle tohoto vynálezu. Je to modifikace metody, kterou popsal Ellman et al., Biochem. Pharmacol. 7, 88 /1961/.

Postup:

A. Reakční činidla

1. 0,05M fosfátový pufr, pH 7,2:

/a/ 6,85 g NaH₂PO₄ . H₂O/100 ml destilované H₂O, /b/ 13,40 gNa₂HPO₄.7 H₂O/100 ml destilované H₂O, /c/ roztok /a/ se přidá k roztoku /b/ za dosažení hodnoty pH 7,2, /d/ zředit 1:10,

2. substrát v pufru:

/a/ 198 mg acetylcholinchloridu /10 mM/, /b/ doplnit do 100 ml pomocí 0,05M fosfátového pufru, pH 7,2 /činidlo 1/,

3. DTNB v pufru:

/a/ 19,8 mg 5,5-dithiobisnitrobenzoové kyseliny/DTNB//0,5 mM/, /b/ doplnit do 100 ml pomocí 0,05M fosfátového pufru, pH 7,2 /činidlo 1/,

4. 2 mM zásobní roztok testovaného léčiva se smíchá s vhodným rozpouštědlem a doplní se na objem pomocí 0,5mM DTNB /činidlo 3/. Léčiva se postupně ředí /1 : 10/ tak, že finální koncentrace /v kyvetě/je ÍO^M, sleduje se aktivita. Jsou-li účinné, stanoví se hodnoty IC50 z inhibiční účinnosti postupných koncentrací.

B. Příprava tkáně

Samci krys Wistar se dekapitují, mozky se rychle vyjmou a uvolní se corpora striata, zváží se a homogenizují v 19 objemech /přibližně 7 mg proteinu/ml/ 0,05M fosfátového pufru, pH 7,2, za použití homogenizátoru Potter-Elvehjem. Alikvotní podíl 25 mikrolitrů homogenizátu se přidá kl ml vehikula nebo k různým koncentracím testovaného léčiva apreinkubuje se 10 minut při 37 °C.

C. Test

Aktivita enzymu se měří spektrofotometrem Beckman DU-50. Tato metoda se může použít ke stanovení IC₅₀ a pro měření kinetických konstant.

-10CZ 282054 B6

Nastavení přístroje

Kinetics Soft - Pac Module # 598273 /10/

Program # 6 Kindata:

Zdroj - Vis

Vlnová délka - 412 nm

Sipper - není

Kyvety - 2 ml kyvety, užívající 6-automatický vzorkovač

Slepá kontrola - 1 pro každou koncentraci substrátu

Interval - 15 sekund /15 nebo 30 sekund pro kinetiku/

Celkový čas - 5 minut /5 nebo 10 minut pro kinetiku/

Záznam - ano

Rozpětí - samočinná stupnice

Směrnice - vzrůstající

Výsledky - ano /poskytuje směrnice/

Faktor - 1

Činidla se přidávají do kyvet pro slepý pokus a do kyvet se vzorkem takto:

slepé: 0,8 ml fosfátový pufr/DTNB,

0,8 ml pufr/substrát, kontrolní: 0,8 ml fosfátový pufr/DTNB/enzym,

0,8 ml fosfátový pufr/substrát, s léčivem: 0,8 ml fosfátový pufr/DTNB/léčivo/enzym,

0,8 ml fosfátový pufr/substrát,

Slepé hodnoty se stanovují pro každou zkoušku ke kontrole neenzymatické hydrolýzy substrátu a tyto hodnoty se automaticky odečítají pomocí programu kindata, dosažitelném na kinetics soft - pac modulu. Tento program rovněž vypočítává rychlost změny absorbance pro každou kyvetu.

Stanovení IC50

Koncentrace substrátu 10 mM, zředěná 1 : 2 v testu, poskytuje finální koncentraci 5 mM. Koncentrace DTNB 0,5 mM poskytuje finální koncentraci 0,25 mM směrnice kontroly - směrnice léčiva /100/ směrnice kontroly

Výsledky tohoto testu pro některé ze sloučenin podle vynálezu a pro fysostigmin /srovnávací sloučenina/jsou uvedeny v tabulce 1.

Tabulka 1

Sloučenina inhibiční koncentrace /μΜ/ AChE mozku

-/Pyrido[3,4-b]-1,4-oxazin-4-yl/-1 H-indol-5-yl methylkarbamát

Fysostigmin

0,054

0,006

- 11 CZ 282054 B6

Tato prospěšnost je dále demonstrována schopností uvedených sloučenin obnovovat cholinergicky sníženou paměť při testu vyhýbání se tmě /Dark Avoidance Assay/, popsanému níže.

Test vyhýbání se tmě

Při tomto testu se zkoumají myši z hlediska jejich schopnosti zapamatovat si nepříjemný podnět po dobu 24 hodin. Myš se umístí do komůrky, která obsahuje temnou přihrádku; silně rozžhavené světlo zahání myš do temné přihrádky, kde je jí pomocí kovových destiček na podlaze udělen elektrický šok. Zvíře se odstraní z testovacího zařízení a po 24 hodinách se testuje znovu schopnost zapamatovat si elektrický Šok.

Jestliže se zvířatům před jejich umístěním do testovací komůrky podá skopolamin, anticholinergní prostředek, o němž je známo, že je příčinou snížení paměti, pak po 24 hodinách zvíře vstoupí do temné přihrádky krátce po tom, co je znovu umístěno do testovací komůrky. Tento účinek skopolaminu je blokován účinnou testovanou sloučeninou, což se projevuje delším intervalem před opětovným vstupem do temné přihrádky.

Výsledky tohoto testu pro některé ze sloučenin podle vynálezu a pro tacrin a pilokarpin /srovnávací sloučeniny/ jsou uvedeny v tabulce 2.

Tabulka 2

sloučenina	dávka mg/kg těl. hmot. s.c.	% zvířat, u nichž došlo k reverzi skopolaminem vyvolaného deficitu paměti
l-/Pyrido-[3,4-b]-	0,01	27%
1,4-oxazin-4-yl/-1H-	0,03	20%
indol-5-yl methylkarbamát	0,10	33%
Tacrin	0,63	13 %
Pilokarpin	5,0	13 %

Uvedené sloučeniny se podávají pacientu, u něhož je potřebné zlepšení paměti, v orální, parenterální nebo intravenózní účinné dávce od asi 1 do 100 mg/kg tělesné hmotnosti za den. Zvlášť účinné množství je asi 10 mg/kg tělesné hmotnosti za den. Je samozřejmé, že pro každého jednotlivého pacienta by měl být upraven specifický dávkovači režim podle individuální potřeby a profesionálního úsudku ošetřujícího, nebo osoby, kontrolující podávání uvedené sloučeniny. Dále je samozřejmé, že zde uvedená dávkování jsou pouze příkladná a v žádném směru neomezují rozsah nebo provedení vynálezu.

Absorpce ³H-norepinefrinu v synaptosomech neporušeného krysího mozku

Tato zkouška se užívá jako biochemický screening pro sloučeniny, které zvyšují adrenergní mechanismus blokací absorpce norepinefrinu.

Mechanismus neuronové zpětné absorpce norepinefrinu /NE/ je nejdůležitější prostředek k inaktivaci NE odstraněním transmiteru ze synaptické štěrbiny. Absorpce NE se dosáhne účinným transportním systémem, který je saturovatelný, stereospecifický, má vysokou afinitu, je závislý na sodíku, jehož existence byla zjištěna jak v tkáni periferní, tak i centrální nervové soustavy. Absorpce NE je potenciálně inhibována kokainem, fenethylaminy a tricyklickými antidepresanty. Rovněž je inhibována oubainem, metabolickými inhibitory a fenoxybenzaminem. Inhibice NE klinicky použitelnými tricyklickými antidepresanty je důležitým článkem v katecholaminové hypotéze afektivních poruch a měly by být provedeny rozsáhlé studie

- 12CZ 282054 B6 souvislostí mezi strukturou a aktivitou při absorpci NE.

Existují značné místní odchylky v absorpci NE, které jsou v korelaci s endogenní hladinou NE. Hypothalamus vykazuje nejvyšší hladinu NE a největší absorpci. Absorpce synaptosomálního ³H-NE je prospěšným znakem neporušenosti noradrenergních neuronů po poškozujících experimentech, jakož i při testech sloučenin, které potencují funkci NE blokací mechanismu zpětné absorpce.

Postup

A. Pokusná zvířata: samci krys CR Wistar /100-125 g/

B. Reakční činidla

1. Bikarbonátový pufr Krebs-Henseleit, pH 7,4 /KHBB/ Připraví se 1 litr várky, obsahující následující soli:

	g/i	mM
NaCl	6,92	118,4
KC1	0,35	4,7
MgSO₄.7 H₂O	0,29	2,2
NaHCO₃	2,10	24,9
CaCI₂	0,14	1,3
Před použitím se přidá:
Dextróza	2 mg/ml	11,1
Iproniazid	0,30 mg/ml	0,1
fosfát

Provzdušňuje se 60 minut 95 % O₂/5 % CÓ₂, ověří se pH /7,4 ± 0,1/.

2. 0,32M sacharóza: 21,9 g sacharózy doplnit do 200 ml

3. 0,1 mM zásobní roztok L/-/-norepinefrinbitartrátu se smísí s 0,01N HC1. Tento roztok se užívá k ředění specifické aktivity radioaktivně značeného NE.

4. Levo-/kruh-2,5,6-³H/-norepinefrin /40-50 Ci/mmol/ se získá zNew England Nuclear. Finální požadovaná koncentrace ³H-NE v testuje 50 mM. Ředicí faktor je 0,8; KHBB se tudíž upraví na obsah 62,5 nM [³H]-NE. Ke 100 ml KHBB se přidá:

A. 59,4 μΐ 0,1 mM NE = 59,4 nM ⁺B. 0,31 nmol³H-NE = 3,1 nM

62,5 nM ⁺přidaný objem, vypočítaný ze specifické aktivity ³H-NE.

5. Pro většinu testů se 1 mM zásobní roztok testované sloučeniny přidá do vhodného rozpouštědla a postupně se ředí tak, že finální koncentrace v testu je v rozmezí od 2 x 10'⁸do 2 x 10‘⁵M. Pro každý test se užívá sedm koncentrací. Vyšší nebo nižší koncentrace mohou být užity v závislosti na účinnosti testované sloučeniny.

- 13 CZ 282054 B6

C. Příprava tkáně

Samci krys Wistar se dekapitují a mozky se rychle vyjmou. Každý neporušený mozek bez mozečku nebo hypothalamu se zváží a homogenizuje v 9 objemech ledově chladné 0,32M sacharózy za použití homogenizátoru Potter-Elvejhem. Homogenizace by měla být provedena při pohybech média čtyřmi až pěti rázy nahoru a dolů, aby se minimalizovaly synaptosomální léze. Homogenát se odstřeďuje při 1 000 g po dobu 10 minut při 0 až 4 °C. Supematant /S]/ se dekantuje a použije se pro zkoušky absorpce.

D. Test

800 μΐ KHBB, obsahující [³H]-NE μΐ vehikula nebo vhodné koncentrace léčiva

200 μΐ tkáňové suspenze

Zkumavky se inkubují při 37 °C pod atmosférou, tvořenou 95 % O₂/5 % CO₂ po dobu 5 minut. Pro každou zkoušku se inkubují 3 zkumavky s 20 μΐ vehikula při 0 °C v ledové lázni. Po inkubaci se všechny zkumavky okamžitě odstředí při 4 000 g 10 minut. Kapalný supematant se odsaje a peletky se rozpustí přídavkem 1 ml rozpouštědla /Triton X-100 + 50% EtOH, 1 : 4 obj./obj./. Zkumavky se energicky protřepou, dekantují se do scintilačních nádobek a počítají se impulzy v 10 ml Liquiscintní scintilační kapaliny. Účinná absorpce je rozdíl mezi cpm při 37 °C a 0 °C. Procento inhibice pro každou koncentraci léčívaje průměrem tří stanovení. Hodnoty inhibiční koncentrace /IC₅₀/ se odvodí z log-probitové analýzy.

Výsledky tohoto testu jsou uvedeny v tabulce 3.

Tabulka 3

sloučenina	ΙΟίο/μΜ/
4-/3-Methy 1-1 H-indol-1 -y l/pyrido[3,4-b]-1,4-oxazin	6,0
Amitriptylin /srovnávací/	7,7
Nortriptylin /srovnávací/	4,0

Účinná množství sloučenin podle tohoto vynálezu se mohou podávat pacientovi kteroukoliv z různých metod, například perorálně ve formě tobolek nebo tablet, parenterálně ve formě sterilních roztoků nebo suspenzí a v některých případech intravenózně ve formě sterilních roztoků. Sloučeniny podle tohoto vynálezu, i když jsou samy o sobě účinné, se mohou formulovat a podávat ve formě svých farmaceuticky použitelných adičních solí, a to z důvodů jejich stálosti, možnosti krystalizace, zvýšené rozpustnosti apod.

Kyseliny, použitelné pro přípravu farmaceuticky přijatelných adičních solí sloučenin podle vynálezu, zahrnují anorganické kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina fosforečná a kyselina chloristá, jakož i organické kyseliny, jako je kyselina vinná, kyselina citrónová, kyselina octová, kyselina jantarová, kyselina maleinová, kyselina fumarová a kyselina šťavelová.

Účinné sloučeniny podle předloženého vynálezu se mohou podávat perorálně, například společně s inertním ředidlem nebo s poživatelnou nosnou látkou. Mohou být uzavřeny v želatinových kapslích, nebo mohou být slisovány do tablet. Pro účely orální terapeutické aplikace se mohou účinné látky mísit s pomocnými látkami a používat ve formě tablet, pastilek, tobolek, elixírů, suspenzí, sirupů, oplatek, žvýkací gumy apod. Tyto přípravky obsahují alespoň 0,5 % účinné sloučeniny, ale toto množství se může pohybovat v závislosti na aplikační formě a může obvykle

- 14CZ 282054 B6 činit 4 až asi 75 % hmotnostních dávkovači jednotky. Množství sloučeniny v takovém prostředku má být takové, aby se dosáhlo vhodné dávky. Výhodně se přípravky a kompozice podle vynálezu připravují tak, aby jednotková orální dávka obsahovala mezi 1,0 a 300 mg účinné látky.

Tablety, pilulky, tobolky, pastilky apod. mohou obsahovat následující složky: pojivo, jako je mikrokrystalická celulóza, arabská guma nebo želatina; pomocnou látku, jako je škrob nebo laktóza, látku usnadňující rozpad, jako je alginová kyselina, Primogel™, kukuřičný škrob apod.; lubrikant, jako je stearát hořečnatý nebo Sterotex^R; kluznou látku, jako je koloidní oxid křemičitý; a sladidlo, jako je sacharóza nebo sacharin, nebo aromatizující látky, jako je peprmint, methylsalicylát nebo pomerančová příchuť. Jestliže je formou dávkovači jednotky tobolka, pak může kromě látek shora uvedených obsahovat navíc kapalnou nosnou látku, jako je mastný olej. Jiné formy dávkovačích jednotek mohou obsahovat ještě další různé látky, které modifikují fyzikální formu dávkovači jednotky, například povlaky. Tak se mohou tablety nebo pilulky povlékat cukrem, šelakem nebo jiným enterickým povlakem. Sirup může obsahovat kromě účinných látek sacharózu jako sladidlo a určité konzervační prostředky, barviva, barevné a aromatizující prostředky. Látky, používané pro přípravu těchto různých směsí, mají být farmaceuticky čisté a v používaných množstvích netoxické.

Pro účely parenterální terapeutické aplikace se mohou účinné sloučeniny podle vynálezu převádět na roztok nebo suspenzi. Tyto přípravky mají obsahovat alespoň 0,1 % uvedené sloučeniny, ale mohou obsahovat 0,5 až asi 30 % hmotnostních účinné látky. Množství účinné látky v takových kompozicích se volí tak, aby se získala vhodná dávka. Výhodné kompozice a přípravky podle vynálezu se připravují tak, aby parenterální dávkovači jednotka obsahovala mezi 0,5 a 100 mg účinné látky.

Roztoky nebo suspenze mohou rovněž obsahovat následující složky: sterilní ředidlo, jako je voda pro injekce, solný roztok, stálé oleje, polyethylenglykoly, glycerin, propylenglykol nebo jiná syntetická rozpouštědla, antibakteriální činidla, jako je benzylalkohol nebo methylparabeny; antioxidační činidla, jako je kyselina askorbová nebo hydrogensiřičitan sodný; chelatační činidla, jako je ethylendiamintetraoctová kyselina; pufry, jako jsou acetáty, citráty nebo fosfáty a prostředky k úpravě tonicity, jako je chlorid sodný nebo dextróza. Přípravek pro parenterální aplikaci může být uzavřen do ampulí, použitelných injekčních stříkaček nebo lahviček ze skla nebo plastů, které obsahují násobnou dávku.

Příklady sloučenin podle vynálezu zahrnují:

N-/3-fluorpyridin-4-yl/-N-/3-methyl-1 H-indol-1 -yl/-2-aminoethanol,

N-/3-fluorpyridin-4-yl/-N-/l H-indol-1 -yl/-2-aminoethanol, /4-/3-methyl-1 H-indol-1 -yl/-pyrido[3,4-b] -1,4-oxazin,

N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/5-benzyloxy-1 H-indol-1 -yl/-2-aminoethanol,

4-/1 H-indol-1 -yl/-pyrido [3,4-b]-1,4-oxazin,

4-/5-benzy loxy-1 H-indol-1 -y l/-py rido [3,4-b]-1,4-oxazin,

-/pyrido-[3,4-b]-1,4-oxazin-4-yl/-1 H-indol-5-ol,

-/pyrido-[3,4-b]-1,4-oxazin-4-yl/-1 H-indol-5-yl methylkarbamát, l-/pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazin-4-yl/-2,3-dimethyl-lH-indol-5-yl heptylkarbamát,

- 15 CZ 282054 B6 l-/pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazin-4-yl/-lH-indol-5-yl 1,2,3,4-tetrahydroisochinolylkarbamát, l-/pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazin-4-yl/-lH-indol-5-yl isopropylkarbamát,

-/pyrido-[3,4-b]-1,4-oxazin-4-yl/-1 H-indol-5-yl fenylmethylkarbamát, l-/pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazin-4-yl/-3-ethyl-lH-indoI-5-yl piperidinylkarbamát, l-/pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazin-4-yl/-lH-indol-5-yl morfolinylkarbamát, l-/pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazin-4-yl/-lH-indol-5-yl 4-methylpiperazinylkarbamát,

1- /pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazin-4-yl/-lH-indol-5-yl 4-fenylmethylpiperazinylkarbamát,

N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/lH-indol-l-yl/ glycin ethylester,

N-/3-fluorpyridin-4-yl/-N-/l H-indol-l-yl/-2-aminoethanol,

4-/1 H-indol-1 -yl/-pyrido[3,4-b]-1,4-oxazin,

N-/3-chlor-4-pyridinyl/-N-/5-benzyloxy-lH-indol-l-yl/glycin ethylester,

N-/3-chlor-4-pyridinyl/-N-/5-benzyloxy-1 H-indol-1 -y l/-2-aminoethanol, ethylester N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/5-benzyloxy-2-methyl-l H-indol- 1-yl/glycinu,

N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/5-benzyloxy-2-methyl-lH-indol-l-yl/-2-aminoethanol,

4-/5-benzyloxy-2-methyl-lH-indol-l-yl/-pyrido[3,4-b]-l,4-oxazin,

2- methy 1-1 -/pyrido[3,4-b]-1,4-oxazin-4-yl/-1 H-indol-5-ol,

2-methy 1-1 -/pyrido[3,4-b]-1,4-oxazin-4-yl/-1 H-indol-5-yl methyIkarbamát,

2-methy 1-1 -/pyrido[-3,4-b]-1,4-oxazin-4-yl/-1 H-indol-5-yl fenylmethylkarbamát,

N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/5-methoxy-l H-indol-l-yI/-2-aminoethanol,

4-/5-methoxy-1 H-indol-1 -yl/-pyrido[3,4-b]-1,4-oxazin,

N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/5-methyl-lH-indol-l-yl/-2-aminoethanol,

4-/5-methyl-1 H-indol-1 -y l/-pyrido[3,4-b]-1,4-oxazin,

N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/6-chlor-1 H-indol-1 -yl/-2-aminoethanol a

4-/6-chlor-1 H-indol-1 -yl/-pyrido[3,4-b]-l ,4-oxazin.

Následující příklady slouží k bližšímu objasnění tohoto vynálezu a v žádném směru jej neomezují. Všechny teploty jsou udány ve stupních celsia /°C/, pokud není uvedeno jinak.

- 16CZ 282054 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad la

N-/3-Fluor-4-pyridiny l/-3-methyl-1 H-indol-1 -amin

Ke 200 ml isopropanolu se přidalo 10 g 4-chlor-3-fluorpyridinhydrochloridu a 5,9 g 3-methyl1 H-indol-1-aminu. Směs se míchala při teplotě 90 °C čtyři hodiny, ochladila se, potom se vlila do 500 ml ledové vody, pH se upravilo pomocí roztoku Na₂CO₃ na 10 a provedla se extrakce ethylacetátem. Organická vrstva se promyla vodou a vysušila /nasycený NaCl, bezvodý MgSO₄/. Po filtraci se odpaří rozpouštědlo, získá se olej, který se eluuje na sloupci silikagelu pomocí CH₂C1₂ /DCM/ a potom mžikovou chromatografií směsí ether : petrolether v poměru 1:1. Žádané frakce se spojily a odpařily /45 °C/, získalo se 6,2 g pevné látky. Vzorek látky se překrystaloval z isopropyletheru a hexanu v poměru 1:1, získala se pevná látka o t.t. 141-142 °C.

Analýza:

vypočteno pro Ci₄Hi₂FN₃: 69,69 % C, 5,02 % H, 17,42 % N, nalezeno: 69,52 % C, 5,01 % H, 17,57 % N.

Příklad lb

Ethylester N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/3-methyl-lH-indol-l-yl/glycinu

K roztoku NaH /60 % v oleji, 1,48 g/ v 10 ml dimethylformamidu /DMF/ se při teplotě ledové lázně přikapal roztok 8,5 g N-/3-fluor-4-pyridinyl/-3-methyl-lH-indol-l-aminu ve 40 ml DMF. Po ukončení přidávání se směs míchala 15 minut při teplotě ledové lázně a potom se ochladila na -20 °C. 3,95 ml ethylchloracetátu se přikapalo do 10 ml DMF. Směs se míchala při -20 °C jednu hodinu. Směs se potom vlila do vody a extrahovala ethylacetátem. Organická vrstva se promyla vodou a vysušila /nas. NaCl, bezvod. MgSO₄/. Po zfiltrování se odpařilo rozpouštědlo a získalo se 12,2 g oleje, který se eluoval 10 % ethylacetát/DCM na sloupci silikagelu pomocí HPLC. Žádané frakce se odpařily, čímž se získalo 6,9 g pevné látky, t.t. 105-108 °C.

Analýza:

vypočteno pro C]8Hi₈FN₃O₂: 66,04 % C, 5,54 % H, 12,84 % N, nalezeno: 66,00 % C, 5,53 % H, 12,81 % N.

Příklad lc

N-/3-fluorpyridin-4-yl/-N-/3-methyl-lH-indol-l-yl/-2-aminoethanol

K 5,0 g ethylesteru N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/3-methyl-lH-indol-l-yl/glycinu ve 100 ml tetrahydrofuranu, chlazenému na teplotu ledové lázně, se přikapal injekční stříkačkou lithiumaluminiumhydrid /1M roztok v tetrahydrofuranu, 30 ml/. Reakční směs se míchala 0,5 hodiny. Směs se ochladila pomocí NH₄C1 a extrahovala třikrát ethylacetátem. Organické vrstvy se spojily a promyly nasyceným NaCl a vysušily nad MgSO₄. Po zfiltrování se rozpouštědlo odpařilo, získalo se 3,9 g pevné látky, která se eluovala 50 % ethylacetátu a dichlormethanu na sloupci silikagelu pomocí vysokotlaké kapalné chromatografie /HPLC/. Žádoucí frakce se odpařily a získalo se 3,7 g pevné látky, o t.t. 123-125 °C.

Analýza:

vypočteno pro Ci₆Hi₆FN₃O: 67,35 % C, 5,65 % H, 14,73 % N, nalezeno: 67,45 % C, 5,67 % H, 14,72 % N.

- 17CZ 282054 B6

Příklad ld

4-/3-methyl-1 H-indol-1 -yl/-pyrido[3,4-b] -1,4-oxazin

K. suspenzi 0,34 g NaH v 5 ml dimethylformamidu se přidaly 2,0 g N-/3-fluorpyridin-4-yl/-N-/3methyl-1 H-indol- l-yl/2-aminoethanolu v 50 ml dimethylformamidu. Reakční směs se zahřála na 70 °C a míchala se čtyři hodiny. Směs se vlila do vody a extrahovala ethylacetátem. Organická vrstva se promyla vodou a vysušila /nas. NaCI, MgSOV. Po zfiltrování se odpařilo rozpouštědlo a získalo se 2,8 g oleje, který se eluoval směsí 50 % ethylacetátu a dichlormethanu na sloupci silikagelu pomocí HPLC. Žádané frakce se odpařily a získalo se 1,0 g pevné látky o t.t. 139-141 °C.

Analýza: vypočteno pro Ci₆Hi₅N₃O: 72,43 % C, 5,70 % H, 15,48 % N, nalezeno: 72,37 % C, 5,74 % H, 15,76 % N.

Příklad 2a

N-/3-Fluor-4-pyridinyl/-N-/5-benzyloxy-lH-indol-l-yl/-2-aminoethanol

K. roztoku 18,7 g ethylesteru N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/5-benzyloxy-lH-indol-1-yl/glycinu ve 100 ml tetrahydrofuranu, chlazenému na teplotu ledové lázně, se přikapalo 89,16 ml lithiumaluminiumhydridu. Roztok se míchal 0,5 hodiny, potom se ochladil chloridem amonným a extrahoval ethylacetátem. Organická vrstva se promyla vodou a vysušila /nasyc. NaCI, MgSO^. Po zfiltrování se rozpouštědlo odpařilo a získalo se 12,5 g pevné látky, která se eluovala směsí 50 % ethylacetátu a dichlormethanu na silikagelu pomocí HPLC. Žádané frakce se odpařily a získalo se 9,65 g pevné látky o t.t. 130-132 °C.

Analýza:

vypočteno pro C₂₂H₂oFN₃0₂: 70,01 % C, 5,34 % Η, 11,13 % N, nalezeno: 69,98 % C, 5,28 % Η, 11,04 % N.

Příklad 2b

4-/5-Benzyloxy-l H-indol-l-yl/-pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazin

1,0 g Hydridu sodného se suspendoval v 10 ml dimethylformamidu a tato směs se ochladila na teplotu ledové lázně. K. suspenzi se přikapal roztok 8,25 g N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/5benzyloxy-lH-indol-l-yl/-2-aminoethanolu ve 100 ml dimethylformamidu a reakční směs se potom zahřála na 70 °C a míchala se tři hodiny. Směs se ochladila, vlila do vody a extrahovala ethylacetátem. Organická vrstva se promyla vodou a vysušila /nasyc. NaCI, bezv. MgSO₄/. Po zfiltrování se odpařilo rozpouštědlo a získalo se 12,2 g pevné látky, která se eluovala směsí 50 % ethylacetátu a dichlormethanu na sloupci silikagelu pomocí HPLC. Žádané frakce se odpařily a získalo se 7,4 g pevné látky, která se rozetřela s etherem, získalo se 4,04 g pevné látky o t.t. 181-183 °C.

Analýza: vypočteno pro C₂₂Hi₉N₃O₂: 73,93 % C, 5,36 % Η, 11,75 % N, nalezeno: 73,67 % C, 5,39 % Η, 11,68 % N.

- 18CZ 282054 B6

Příklad 3 l-/Pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazin-4-yl/-lH-indol-5-ol

5,0 g 4-/5-benzyloxy-lH-indol-l-yl/-pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazínu ve 240 ml ethanolu se přidalo k suspenzi 0,6 g 10 % Pd/C v 10 ml ethanolu. Směs se hydrogenovala v Parrově hydrogenační aparatuře po dobu dvou hodin při teplotě 50 °C. Reakční směs se potom ochladila, zfiltrovala a filtrát se odpařil, získalo se 3,5 g pevné látky, která se eluovala směsí 5 % methanolu a dichlormethanu na sloupci silikagelu pomocí HPLC. Žádané frakce se odpařily a získalo se 2,7 g pevné látky. 0,9 g této látky se překrystalovalo z acetonitrilu a získalo se 0,62 g pevné látky o t.t. 221-222 °C.

Analýza: vypočteno pro C_I5H_]3N₃O₂: 67,40 % C, 4,90 % H, 15,72 % N, nalezeno: 67,38 % C, 4,85 % Η, 15,68 % N.

Příklad 4

-/Pyrido-[3,4-b] -1,4-oxazin-4-y 1/-1 H-indol-5 -y 1 methylkarbamát

1,3 g Uhličitanu draselného se přidalo k roztoku 2,0 g l-/pyrido-[3,4-b]-l,4-oxazin-4-yl/-lHindol-5-olu ve 100 ml tetrahydrofuranu. Směs se míchala 10 minut při teplotě místnosti a potom se přidalo po kapkách 0,46 g methylisokyanátu. Reakce se nechala probíhat jednu hodinu při teplotě místnosti a potom se reakční směs zfiltrovala a filtrát se odpařil. Získalo se 2,8 g pevné látky, která se eluovala směsí 5 % methanolu a dichlormethanu na sloupci silikagelu pomocí HPLC. Žádané frakce se odpařily a získalo se 3,2 g pevné látky, která se překrystalovala z acetonitrilu, čímž se získalo 1,5 g pevné látky o t.t. 196-198 °C.

Analýza:

vypočteno pro C_rH₁₆N₄O₃: 62,95 % C, 4,97 % H, 17,28 % N, nalezeno: 62,95 % C, 4,91 % H, 17,30 % N.

Příklad 5 a

Ethylester N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/lH-indol-l-yl/glycinu

K suspenzi 3,6 g hydridu sodného ve 20 ml dimethylformamidu se při 0 °C přidal roztok 19 g N-/3-fluor-4-pyridinyl/-lH-indol-l-aminu ve 120 ml dimethylformamidu v průběhu patnácti minut a výsledná směs se míchala při 0 °C dvacet minut. Po ochlazení směsi na -20 °C se v průběhu patnácti minut přidal k reakční směsi roztok 9,6 ml ethylchloracetátu ve 25 mi dimethylformamidu a výsledná směs se míchala jednu hodinu při teplotě -20 °C.

Směs se vlila do 400 ml vody, míchala pět minut a potom extrahovala ethylacetátem. Organická vrstva se promyla vodou a nasyceným roztokem NaCI a potom vysušila nad bezvodým MgSO₄.

Po zfiltrování se odpařilo rozpouštědlo a získalo se 26 g oleje, který se eluoval na sloupci silikagelu směsí 10 % ethylacetátu a dichlormethanu pomocí HPLC. Žádané frakce se spojily a odpařily, získalo se 13,3 g ethylesteru N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/lH-indol-l-yl/glycinu ve formě pevné látky o t.t. 86-87 °C.

- 19CZ 282054 B6

Analýza:

vypočteno pro C_t-H₁₆FN₃O₂: 65,16 % C, 5,15 % H, 13,41 %N, nalezeno: 65,00 % C, 5,14 % H, 13,19 % N.

Příklad 5 b

N-/3-Fluorpyridin-4-yl/-N-/1 H-indol-l-yl/-2-aminoethanol

K 70 ml 1M roztoku lithiumaluminiumhydridu, chlazenému na teplotu 0 °C, se v průběhu třiceti minut přidal roztok 11,4 g N-/3-fluor-4-pyridinyl/-N-/lH-indol-l-yl/glycinu ve formě ethylesteru ve 125 ml tetrahydrofuranu. Směs se míchala jednu hodinu při teplotě 0 °C, potom se k ní přidal roztok chloridu amonného a po něm 300 ml ethyletheru. Směs se zfiltrovala a filtrát se odpařil. Získalo se 10 g pevné látky, která se eluovala na sloupci silikagelu směsí ethylacetátu a dichlormethanu v poměru 1 : 1 pomocí HPLC. Žádané frakce se spojily a odpařily, čímž se získalo 6,1 g N-/3-fluorpyridin-4-yl/-N-/lH-indol-l-yl/-2-aminoethanolu ve formě pevné látky o t.t. 133-135 °C.

Analýza: vypočteno pro Ci₅H_I4FN₃O: 66,41 % C, 5,20 % H, 15,49 % N, nalezeno: 66,33 % C, 5,22 % H, 15,41 % N.

Příklad 5c

4-/lH-Indol-l-yl/-pyrido[3,4-b]-l,4-oxazin

K. suspenzi 0,8 g hydridu sodného v 10 ml dimethylformamidu se přidal roztok 4,8 g N-/3-fluorpyridin-4-yl/-N-/lH-indol-l-yl/-2-aminoethanolu ve 100 ml dimethylformamidu. Po čtyřhodinovém míchání při 70 °C se směs vlila do 300 ml ledové vody, pět minut se míchala a potom extrahovala ethylacetátem. Organická vrstva se promyla vodou a potom nasyceným roztokem NaCl a vysušila nad bezvodým MgSO₄.

Po zfiltrování se rozpouštědlo odpařilo a olejový zbytek se eluoval na sloupci silikagelu směsí ethylacetátu a dichlormethanu v poměru 1 : 2 pomocí HPLC. Žádané frakce se spojily a odpařily na hustý olej, který stáním tuhnul. Získalo se 3,4 g 4-/lH-indol-l-yl/-pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinu ve formě pevné látky o t.t. 108-110 °C.

Analýza:

vypočteno pro C₁₅H,₃N₃O: 71,70 % C, 5,21 % H, 16,72 % N, nalezeno: 71,38 % C, 4,91 % H, 16,52 % N.

-20CZ 282054 B6

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. l-(Pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indoly obecného vzorce:

(I), ve kterém znamená:

Ri atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku,

R₂ představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, a

R₃ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, atom halogenu, nitroskupinu, aminovou skupinu, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, benzyloxyskupinu nebo skupinu

-O-C-NR4R5

II

O ve které:

Rt znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, a

R₅ znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu, obsahující v alkylové části 1 až Ί atomů uhlíku, nebo R4 a R₅ dohromady tvoří heterocyklický kruh, vybraný ze souboru, zahrnujícího nebo

-21 CZ 282054 B6 ve kterých:

znamená atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku v alkylové části, přičemž ve všech uvedených případech znamená arylová skupina fenylovou skupinu, nesubstituovanou nebo substituovanou jedním nebo dvěma substituenty, vybranými nezávisle ze souboru, zahrnujícího alkylové skupiny, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, alkoxyskupiny, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, atomy halogenu nebo trifluormethylovou skupinu, a farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami, odvozené od těchto sloučenin.
2. l-(Pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-l H-indol obecného vzorce I podle nároku 1, ve kterém R_tznamená atom vodíku.
3. l-(Pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indol obecného vzorce I podle nároku 1, ve kterém R₃znamená atom vodíku, hydroxyskupinu, benzyloxyskupinu nebo skupinu

-O-C-NR4R5

II o

ve které R₅ znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku.
4. l-(Pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-l H-indol obecného vzorce I podle nároku 1, kterým je l-(pyrido[3,4-bj-1,4-oxazin-4-yl)-l H-indol-5-yl-methylkarbamát.
5. l-(Pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indol obecného vzorce I podle nároku 1, kterým je 4-(3-methy 1-1 H-indol-1 -yl)-pyrido[3,4-b] -1,4-oxazin.
6. Farmaceutický prostředek pro zmírňování paměťových dysfunkcí a/nebo s antidepresivní účinností, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku l-(pyrido[3,4-b]l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indol obecného vzorce I podle nároku 1 a vhodnou nosičovou látku.
7. l-(Pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indoly obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva pro zmírňování paměťových dysfunkcí a/nebo s antidepresivní účinností.
8. Způsob přípravy l-(pyrido[3,4-b]-l,4-oxazinyl-4-yl)-lH-indolů obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se tím, že se (a) cyklizuje sloučenina obecného vzorce lib:

-22CZ 282054 B6 (Hb) ve kterém mají R_b R₂ a R₃ stejný význam, jak bylo uvedeno výše, v přítomnosti silné bázické sloučeniny za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém mají Ri, R₂ a R₃ stejný význam, jak bylo uvedeno shora, (b) popřípadě se sloučenina obecného vzorce I, ve kterém mají Ri a R₂ stejný význam, jak bylo uvedeno shora, a R₃ znamená bezyloxyskupinu, podrobí katalytické hydrogenolýze za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Ri a R₂ mají stejný výše uvedený význam a R₃ znamená hydroxyskupinu, (c) popřípadě se sloučenina obecného vzorce I, ve kterém Ri a R₂ mají stejný význam, jak bylo uvedeno shora, a R₃ znamená hydroxyskupinu, uvede do reakce s isokyanátem obecného vzorce

Rj-NCO ve kterém R₅ znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku v alkylové části, přičemž arylová skupina má výše uvedený význam, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R₃ znamená skupinu obecného vzorce

-O-C-NH-R;

II o

ve kterém R₃ má stejný výše uvedený význam, (d) nebo se popřípadě sloučenina obecného vzorce I, ve kterém R_t a R₂ mají stejný výše uvedený význam a R₃ znamená hydroxyskupinu, uvede do reakce se sloučeninou

-23CZ 282054 B6 nebo kde má stejný výše uvedený význam, v přítomnosti karbonyldiimidazolu, za vzniku sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R_t aR₂ mají výše uvedený význam a R₃ znamená skupinu obecného vzorce

-O-C-NR4R₅

O ve kterém R4 a R₅ tvoří společně s atomem dusíku heterocyklický kruh, vybraný ze souboru, zahrnujícího kde Rs má stejný význam, jak bylo uvedeno shora.
9. Sloučenina obecného vzorce II:

(Π),

-24CZ 282054 B6 ve kterém:

Ri znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku,

R₂ představuje atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku,

R₃ znamená atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, atom halogenu, nitroskupinu, aminovou skupinu, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, benzyloxyskupinu nebo skupinu

-O-C-NR4R5

O ve které:

R4 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, a

R₅ znamená alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu, obsahující v alkylové části 1 až 7 atomů uhlíku, nebo R4 a R₅ dohromady tvoří heterocyklický kruh, vybraný ze souboru, zahrnujícího >

ve kterých:

Ré znamená atom vodíku, alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, arylovou skupinu nebo arylalkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku v alkylové části,

X znamená atom halogenu, a

R₇ znamená skupinu (CH₂)₂OH, CH₂CO₂R₈ nebo

O

CH₂CH kde R₈ znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, přičemž ve všech uvedených případech znamená arylová skupina fenylovou skupinu, nesubstituovanou nebo substituovanou jedním nebo dvěma substituenty, vybranými nezávisle ze souboru, zahrnujícího alkylové skupiny, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, alkoxyskupiny, obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, atomy halogenu nebo trifluormethylovou skupinu, a farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinami, odvozené od těchto sloučenin, jako meziprodukty pro přípravu sloučenin obecného vzorce I podle nároku 1.