CZ2003418A3

CZ2003418A3 - Polymorfy analogu epothilonu

Info

Publication number: CZ2003418A3
Application number: CZ2003418A
Authority: CZ
Inventors: John D. Dimarco; Jack Z. Gougoutas; Imre M. Vitez; Martha Davidovich; Michael Galella; Timothy M. Malloy; Zhenrong Guo; Denis Favreau
Original assignee: Bristol-Myers Squibb Company
Priority date: 2000-08-16
Filing date: 2001-08-01
Publication date: 2004-01-14
Also published as: WO2002014323A2; SI21100B; PL205628B1; ES2288518T3; HUP0300826A2; SK287876B6; GEP20053495B; PE20020290A1; JP2004506638A; PL365610A1; MXPA03001431A; AU8108201A; BR0113234A; CY1107758T1; AR034259A1; IL153993A; CA2418109A1; JP5046467B2; EP1309597A2; HK1052010A1

Description

Oblast techniky

Vynález se týká krystalických polymorfnich forem vysoce účinného analogu epothilonu, který se vyznačuje zdokonalenými vlastnostmi.

Dosavadní stav techniky

Epothilony jsou makrolidové sloučeniny, které nachází uplatnění v oblasti farmacie. Například u epothilonů A a B obecného vzorce

Epothilon A R=H

Epothilon B R=Methyl se zjistilo, že mohou mít účinky stabilizace míkrotubulů podobně jako paclitaxel (TAXOL®) a tudíž mít cytotoxickou aktivitu proti rychle proliferujícím buňkám jako jsou nádorové buňky nebo jiná onemocnění zhoubného bujení buněk, viz. Hofle, G., a kol., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., sv. 35, č.13/14, 1567-1569 (1996); W093/10121 publikované 27. května 1993 a W097/19086 publikované 29. května 1997.

85509 (2785509 CZ.doc) 1.4.2003 • ♦ · # · · · • ···· · · • · • · * • · « • · ·»

Byly syntetizovány různé analogy epothilonu a lze je použit k léčbě různých rakovinných a jiných abnormálních proliferativních onemocnění. Takové analogy byly popsány v Hofle a kol., Id., Nicolaou, K.C., a kol., Angew Cmem. Int.

Ed. Engl., sv. 36, č.

kol., Angew Chem. Int, (1997).

19, 2097-2103 (1997); a Su, D.-S., a

Ed. Engl., sv. 36, č. 19, 2093-2097

Zvláště výhodný analog epothilonu, u kterého byl zjištěn vhodný účinek, je (IS-[IR*, 3R*(£),7R*,10S*,1IR*,12R*,16S*]}-7,11-dihydroxy8, 8, 10, 12, 16-pentamethyl-3-[l-methyl-2-(2-methyl-4thiazolyl)ethenyl]-4-aza-17-oxabicyklo[14.1.0]heptadekan5,9-dion. Podle tohoto vynálezu jsou zajištěny dvě krystalické formy tohoto analogu epothilonu. Tyto polymorfy, které byly označeny jako forma A resp. B, jsou nové krystalické formy a jsou popsány dále.

Podstata vynálezu

Podle tohoto vynálezu jsou zajištěny dvě krystalické polymorfní formy analogu epothilonu představované obecným vzorcem I.

Me

U jednoho z těchto polymorfů, označeného jako forma A,

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 byly zjištěny zvláště výhodné vlastnosti. Tento vynález, se týká krystalických polymorfních forem A a B a jejích směsí. Tento vynález se dále týká použití těchto krystalických forem při léčbě rakoviny a dalších onemocnění zhoubného bujení a farmaceutických přípravků s jejich obsahem.

Popis obrázků obr. 1 představuje práškový difrakční rentgenogram (Cu Kct λ=1,5406.10^_1°m při teplotě místnosti) formy A příslušného analogu epothilonu.

obr. 2 představuje práškový difrakční rentgenogram formy B (Cu Κα λ=1,54 06.10^-1°m při teplotě místnosti) příslušného analogu epothilonu.

obr. 3 představuje práškový difrakční rentgenogram směsi formy A a B (Cu Κα λ=1,5406.10~^lom při teplotě místnosti) příslušného analogu epothilonu.

obr.	4	představuj e práškových příslušného	srovnání simulovaných a difrakčních rentgenogramů analogu epothilonu. -	skutečných forem A a B
obr.	5	představuj e příslušného	Ramanovo spektrum analogu epothilonu.	formy A
obr.	6	představuj e příslušného	Ramanovo spektrum analogu epothilonu.	formy B
obr.	7	představuj e	Ramanovo spektrum směsí	formy A a

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 ·· ··· · • · • ···· ♦ · • · · · · · · formy B příslušného analogu epothilonu.

obr. 8 představuje konformace formy A příslušného analogu epothilonu v pevném stavu.

obr. 9 představuje konformace formy B příslušného analogu epothilonu v pevném stavu.

Detailní popis vynálezu

Podle tohoto vynálezu jsou poskytnuty polymorfy analogu epothilonu představované dále uvedeným obecným vzorcem I

Analog epothilonu představovaný vzorcem I je chemicky {IS-[IR*,3R*(£),TR*,10S*,11R*,12R*,16S*]}-7,11-dihydroxy8,8, 10,12,16-pentamethyl-3-[l-methyl-2-(2-methyl-4thiazolyl)ethenyl]-4-aza-17-oxabicyklo[14.1.0]heptadekan5,9-dion. Tento analog a jeho příprava jsou popsány v U.S. patentové přihlášce pořadové č. 09/170 582, podané 13. října 1998, jejíž popis je zde začleněn odkazem. Polymorfy analogu představovaného výše uvedeným obecným vzorcem I jsou látky stabilizující mikrotubuly. Jsou tedy užitečné při léčbě řady rakovinných onemocnění a jiných proliferativních onemocnění, zahrnujících, ale neomezujících se na následující:

- karcinom, který zahrnuje karcinom močového měchýře, prsu, tlustého střeva, ledvin, jater, plic, vaječníků, slinivky břišní, žaludku, děložního hrdla, štítné žlázy a

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 • ·

kůže zahrnující karcinom skvamózních buněk,

- hematopoetické nádory lymfoidní řady zahrnující leukémii akutní lymfocytární leukémii akutní lymfoblastickou leukémii, lymfom z B-buněk, lymfom z Tbuněk, Hodgkinský lymfom, non-Hodgkinský lymfom, lymfom z vlasatých buněk a Burkettův lymfom,

- hematopoetické nádory myeloidní řady, zahrnující akutní a chronickou myeloidní leukémii a promyelocytární leukémii,

- nádory mezenchymového původu, zahrnující fibrosarkom a rhabdomyosarkom,

- další nádory zahrnující melanom, semínom, teratokarcinom, neuroblastom a gliom,

- nádory centrálního a periferního nervového systému, zahrnující astrocytom, neuroblastom, gliom a schwannomy,

- nádory mezenchymového původu, zahrnující fibrosarkom, rhabdomyosarkom a osteosarkom a

- další nádory, zahrnující melanom, xeroderma pigmentosum, keratoakantom, seminom, folikulární karcinom štítné žlázy a teratokarcinom.

Příslušné polymorfy také inhibují angiogenezi, čímž ovlivňují růst nádorů a zajišťují tak léčbu nádorů a onemocnění spojených s nádorem. Takové anti-angiogenezní vlastnosti budou také použitelné při léčbě jiných stavů citlivých na anti-angiogenezní látky zahrnující, ale neomezující se na určité formy slepoty související s prokrvením sítnice, artritidy, zejména zánětlivé artritidy, roztroušené sklerózy, restinózy a psoriázy.

Polymorfy analogu představovaného obecným vzorcem I budou indukovat nebo potlačovat apoptózu, proces fyziologického odumírání buněk, který je rozhodující pro

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 • *

• · normální vývoj a homeostázu. Alterace cest apoptózy přispívá k patogenezi různých lidských onemocnění. Příslušné polymorfy, jako například modulátory apoptózy, budou užitečné při léčbě řady lidských onemocnění s aberacemi a apoptóze zahrnující, ale neomezující se na rakovinné a prekancerogenní léze, nemoci týkající se odpovědi imunitního systému, virové infekce, ' degenerativní onemocnění muskuloskeletálního systému a onemocnění ledvin.

Aniž si přejeme být vázáni na jakýkoliv mechanismus nebo morfologii, lze takové krystalické formy epothilonu představované obecným vzorcem I také použít k léčbě jiných stavů, než je rakovina nebo jiná proliferativní onemocnění. Takové stavy zahrnují, ale neomezují se na virové infekce, jako například herpesvirus, poxvirus, virus Epstein-Barrové virus, Sindbis virus a adenovirus, autoimunní nemoci jako systémový lupus erythematosus, imunitně vyvolanou glomerulonefritidu, revmatickou artritidu, psoriázu, zánětlivá onemocnění střev a autoimunní diabetes mellitus; neurodegenerativní poruchy jako například Alzheimerovu chorobu, demenci u AIDS, Parkinsonovu nemoc, amyotrofickou laterální sklerózu, retinitis pigmentosa, spinální muskulární atrofii a cerebalární degradaci, AIDS, myelodysplastické syndromy, aplastickou anemii, ischemické poškození při infarktech myokardu, cévní příhody mozkové a reperfúzní poškození, restenózu, arytmii, aterosklerózu, onemocnění jater způsobená intoxikací nebo-· alkoholem, hematologické nemoci jako například chronickou anemii a aplastickou anemii, degenerativní onemocnění muskuloskeletálního systému, jako například osteoporózu a artritidu, rinosinusitidu citlivou na aspirin, cystickou fibrózu, roztroušenou sklerózu, onemocnění ledvin a rakovinnou bolest.

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003

Účinné množství příslušných polymorfů, konkrétně formy A, může stanovit odborník v oboru, a zahrnuje typické dávky pro člověka v množství od přibližně 0,05 do 200 mg/kg/den, kterou lze podávat v jedné dávce nebo ve formě jednotlivě rozdělených dávek, například 1 až 4 krát denně. Výhodně se příslušný polymorf podává v dávce menší než 100 mg/kg/den, v jedné dávce, nebo ve 2 až 4 rozdělených dávkách. Bude zřejmé, že tato specifická úroveň dávkování a frekvence dávkování může být v konkrétních případech různá a bude záviset na mnoha faktorech zahrnujících aktivitu konkrétní použité sloučeniny, metabolickou stabilitu a dobu působení této sloučeniny, druh, věk, tělesnou hmotnost, celkový zdravotní stav, pohlaví a stravu pacienta, režim a čas podávání, míru exkrece, kombinaci léků a závažnost konkrétního stavu. Příslušné polymorfy se přednostně podávají parenterálně, předpokládají se ovšem i jiné cesty podávání, jak uzná odborník v onkologických oborech. Upřednostňované subjekty pro léčbu zahrnují zvířata, nejvýhodněji savce jako například lidi, domácí zvířata, jako například psi, kočky a podobně, podle výše uvedených onemocnění.

Příprava analogů epothilonu představovaných obecným vzorcem I popsaná v U.S. patentové přihlášce pořadové č. 09/170 582 vytváří příslušný analog epothilonu jako olej, který lze chromatografovát a vyčistit, aby se získal amorfní prášek. Upřednostňovaná příprava je popsána v navazující přihlášce pod pořadovým číslem 09/528 526 podané 20 března 2000, jejíž popis je zde začleněn odkazem. V této přípravě týkající se analogů představovaných obecným vzorcem I, se nechá epothilon B reagovat s azídovým donorem a pufrovacím činidlem za přítomnosti katalýzujícího palladia a, redukčního

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003

- 8 • · * tt · tt ·

9··· · · ·· ···· > · · » · · • · ► 9 · · ·· ·· činidla, aby se vytvořil meziprodukt představovaný obecným vzorcem

Na reakce, vzorcem meziproduktu aby se I. Bylo potom proběhne makrolaktamizačni vytvořil analalog představovaný obecným zjištěno, že tento analog se ve své krystalické formě skládá ze směsi forem A a B, jak je zde plně

Amorfní formu analogu představovanou obecným vzorcem I lze rozpustit ve vhodném rozpouštědle, přednostně ve směsi rozpouštědel, jako je například ethylacetát/dichloromethan/triethylamin, vyčistit například filtrací přes silikagelovou přepážku a vykrystalizovat ochlazením na teplotu přibližně 5 °C aby se vytvořil krystalická látka, který je směsí formy A a formy B. Krok čištění využívající směsi rozpouštědel obsahující složku jako je například dichlormethan, odstraňuje ze syntézy zbytky rozpouštědel, které by mohly interferovat s krystalizačním procesem.

popsáno, epothilonu

Obecně, vpravením vyčištěného materiálu do omezeného množství ethylacetátu a zahřátí výsledné suspenze na teplotu přibližně 75-80 °C způsobí vznik formy A. Omezeným množstvím se míní množství přibližně od 8 do přibližně 16 ml, přednostně od přibližně 8 do 12 ml ethylacetátu na jeden gram vyčištěného materiálu. Zahřátím roztoku vznikne jemná suspenze, která je, jak bylo zjištěno,' tvořena především formou B. Za teploty přibližně 75 °C dojde ke zhuštění suspenze, které je, jak bylo zjištěno, tvorbou formy A.

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003

Φ Φ

Φ ·

Φ Φ *

Φ Φ Φ

Φ ΦΦ· φ ΦΦΦΦΦ Φ Φ Φ ·

ΦΦ « φφφφ φ φ

Φ Φ

Roztok se udržuje přibližně jednu hodinu při teplotě přibližně 75-80 °C, aby se zajistilo dokončení tvorby formy A, během které se do suspenze přidá cyklohexan v poměru k ethylacetátu od přibližně 1:2 do 2:2, přednostně přibližně 1:2 a směs se nechá vychladnout na teplotu místnosti, při které se za míchání udržuje po dobu od přibližně 12 až 96 hodin. Potom se směs ochladí na teplotu přibližně 5 °C po dobu přibližně dvou hodin, po kterých dojde k regeneraci krystalů formy A předmětného analogu epothílonu. Forma A je zajištěna v dobrém výtěžku a čistotě.

Alternativní postupy přípravy formy A zahrnují přidáni zárodečných krystalů. V následujících popisech byly použity zárodečné krystaly formy A, ale stejně dobře lze použít krystaly formy B nebo jejich směsi. V jednom takovém způsobu výroby se vyčištěný materiál vmísí do omezeného množství ethylacetátu, jak bylo popsáno výše, a zahřeje se na teplotu přibližně 75 °C, do směsi se přidají zárodečné krystaly a ta se udržuje po dobu přibližně 30 minut na uvedené teplotě. Množství cyklohexanu, jak bylo popsáno výše, se potom přidá po kapkách za udržování teploty přibližně 70 °C. Směs se potom ochladí na 20 °C při které se za míchání udržuje po dobu 18 hodin, pak se ochladí na 5 °C a bílé krystaly formy A se získají fyzickým oddělením, například filtrací.

Ve druhém postupu se výchozí roztok materiálu v ethylacetátu zahřeje na 75 °C alespoň na jednu hodinu, dokud se nevytvoří roztok. Tento roztok se ochladí na přibližně 50 °C v průběhu přibližně dvou hodin za přidání zárodečných krystalů formy A při dosažení teploty 60 °C. Krystaly se začínají objevovat při teplotě přibližně 55 °C. Během dalších dvou hodin se teplota znovu sníží na přibližně 20 °C a zároveň se po dobu jedné hodiny přidává po kapkách

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 fl · * · • 9 9

9 9 · · • ···· «

množství cyklohexanu, jak bylo popsáno výše. Výsledná suspenze se během dvou hodin dále ochladí na -10 °C a udržuje se na této teplotě další hodinu. Suspenze se potom zfiltruje, aby se obdržely bílé krystaly formy A.

V další alternativním postupu se látka vmísí do většího množství, tedy alespoň přibližně 40 ml/g, ethylacetátu a výsledná suspenze se zahřeje na přibližně 80 °C, dokud se nevytvoří roztok, který se potom ochladí na přibližně 70 °C během přibližně jedné hodiny. Zárodečné krystaly formy A se přidají, když teplota roztoku dosáhne přibližně 70 °C. Teplota se potom během dalších tří hodin sníží na přibližně 30 °C. Krystaly se začnou objevovat při teplotě přibližně 65 °C. Teplota se během dalších tří hodin sníží na -10 °C a zároveň se po dobu třiceti minut přidává po kapkách množství cyklohexanu, jak bylo popsáno výše. Teplota se udržuje na 10 °C po dobu jedné hodiny. Výsledná suspenze se zfiltruje, aby se získaly bílé krystaly formy A. Výtěžek a čistota formy A získané těmito procedurami se považují za velmi dobré.

Forma B předmětných analogů epothilonu přestavovaných výše uvedeným obecným vzorcem I se získá vytvořením suspenze ze surového látky ve větším množství ethylacetátu, tj . od přibližně 40 do 50 ml na gram a zahřátím na 70 °C až 80 °C po dobu jedné hodiny, aby se vytvořil roztok, který se potom udržuje při této teplotě přibližně třiceti minut. Potom se roztok během dvou hodin ochladí na teplotu přibližně 30 °C, přičemž krystaly se začnou objevovat při teplotě přibližně 38 °C. Teplota se během jedné hodiny dále sníží na přibližně -10 °C a zároveň se po dobu třiceti minut po kapkách přidává množství cyklohexanu, jak bylo popsáno výše. Výsledná suspenze se udržuje na -10 °C po dobu dalších dvou hodin a

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 • ·

• « • · φ φ φ φ φ φ φφφ φ φφφφ φ φ · • φ · zfiltruje se, aby se získaly bílé krystaly formy B.

V altertnativním způsobu přípravy k předchozímu se surová látka suspenduje v podobném množství ethylacetátu a ohřeje se na teplotu přibližně 78 °C, aby se vytvořil roztok, který se potom na této teplotě udržuje po dobu přibližně třiceti minut. Tento roztok se během dvou hodin ochladí na přibližně 10 °C, a když teplota dosáhne přibližně 10 °C, přidají se zárodečné krystaly formy A. Teplota se během dalších dvou hodin dále sníží na -10 °C a zároveň se po dobu třiceti minut přidává množství cyklohexanu po kapkách, jak bylo popsáno výše. Teplota se udržuje na -10 °C po dobu dvou hodin. Výsledná suspenze se zfiltruje, aby se získaly bílé krystaly formy B.

V dalším alternativním postupu se vyčištěný materiál vpraví do jiného rozpouštědla, přednostně toluenu, v množství přibližně mezi 10 a 20 ml na gram a zahřeje se na 75 °C až 80 °C po dobu 30 minut, a potom se nechá vychladnout na teplotu 20 °C, při které se za míchání udržuje po dobu 18 hodin. Bílé krystaly formy B se z emulze získají fyzikálním oddělením. Výtěžek a čistota formy B získané těmito postupy se považují za velmi dobré.

Obrázky 1 až 3 jsou práškové difrakční rentgenogramy forem A, B a jejích směsi v uvedeném pořadí předmětného analogu epothilonu. Obrázek 4 je srovnání práškových difrakčních rentgenogramů simulované na jednotlivých krystalických strukturách pro formy A a B se skutečným rentgenogramem každé z nich. Difrakční rentgenogramy byly vygenerovány Philips Xpert s generátorovým zdrojem 44kV a 40 mA a Cu Kot vláknem vyzařujícím záření vlnové délky λ=15,406 nm při teplotě místnosti. Z výsledků zobrazených na

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003

• * ···· ♦ 9

99 obrázcích 1-4,. stejně jako z následujících tabulek 1 a 2, které obsahují data v souhrnné podobě, rozdíly jasně ukazují na to, že formy A a B předmětného analogu epothilonu mají různé krystalické struktury. V tabulkách jsou intenzity maxima od 1 do 12 klasifikovány jako velmi slabé, od 13 do 32 jako slabé, od 33 do 64 jako průměrné, od 65 do 87 jako silné a od 88 do 100 jako velmi silné.

Tabulka 1

Hodnoty pro formu A

Poloha maxima (dvě theta) (Cu Κα λ=1, 5406.10'¹⁰m při teplotě místnosti)	Relativní intenzita maxima	Poloha maxima (dvě theta)	Relativní intenzita maxima
5,69	Velmi slabá	21,06	Velmi silná
6,76	Velmi slabá	21,29	Slabá
8,38	Velmi slabá	22,31	Slabá
11,43	Slabá	23,02	Slabá
12,74	Velmi slabá	23, 66	Slabá
13, 62	Velmi slabá	24,18	Velmi slabá
14,35	Velmi slabá	24,98	Slabá
15,09	Velmi slabá	25,50	Slabá
15, 66	Slabá	26,23	Velmi slabá
16,43	Velmi slabá	26,46	Velmi slabá
17,16	Velmi slabá	27,59	Velmi slabá
17, 66	Velmi slabá	28,89	Velmi slabá
18,31	Slabá	29,58	Velmi slabá
19,03	Slabá	30,32	Velmi slabá
19,54	Průměrná	31,08	Velmi slabá
20,57	Slabá	31,52	Velmi slabá

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 • fc * ···· • · • · · • ···«

Tabulka 2

Hodnoty pro formu B

Poloha maxima (dvě theta) (Cu Κα λ=1, 5406.10’¹⁰m při teplotě místnosti)	Relativní intenzita maxima	Poloha maxima (dvě theta)	Relativní intenzita maxima
6, 17	Velmi slabá	21,73	Průměrná
10,72	Velmi slabá	22,48	Velmi silná
12, 33	Slabá	23,34	Průměrná
14, 17	Slabá	23,93	Průměrná
14, 93	Průměrná	24,78	Průměrná
15,88	Průměrná	25,15	Slabá
16, 17	Průměrná	25,90	Slabá
17, 11	Průměrná	26,63	Průměrná
17, 98	Slabá	27,59	Velmi slabá
19, 01	Velmi silná	28,66	Slabá
19, 61	Průměrná	2 9,55	Slabá
20, 38	Průměrná	30,49	Slabá
21,55	Průměrná	31,22	Slabá

Obrázky 5 až 7 jsou výsledky Ramanovy spektroskopie forem A, B a jejich směsi v uvedeném pořadí předmětného analogu epothilonu. Spektra také ukazují dvě odlišné formy krystalů, zejména pásy na 3130 cm'¹ a 3115 cm'¹.

Odlišující fyzikální vlastnosti těchto dvou polymorfních forem jsou uvedeny v následující tabulce 3. Kalorimetrie roztoku byla stanovena použitím termometrického mikrokalorimetru v etanolu při teplotě 25 °C. Rozpustnosti byly podobně určeny při teplotě 25 °C. Z některých údajů je dále zřejmé, konkrétně z rozpouštěcího tepla, že forma A je stabilnější, a tudíž je forma A preferována.

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003

4444

Tabulka 3

Vlastnost	Forma A	Forma B
Rozpustnost ve vodě	0,1254	0,1907
Rozpustnost ve 3% polysorbátu 80 (vodný roztok)	0,2511	0,5799
Rozpouštěcí teplo	20,6 kJ/mol	9,86 kJ/mol

Formu A a formu B analogů epothilonu představovaných obecným vzorcem I lze dále charakterizovat parametry elementárních buněk získanými z rentgenové krystalografické analýzy jednotlivých krystalů, jak je uvedeno dále. Podrobný popis elementárních buněk lze nalézt v kapitole 3 Stout & Jensen, „X-Ray structure Determination: A Practical Guide, (MacMillian Co., New York, NY 1968).

Parametry elementární buňky formy A rozměry buňky a = 14 , 152 ( 6) . 10~¹⁰m b = 30,72 (2) . 10^_1°m c = 6,212 (3) . 10~¹⁰m objem = 27 01(4) . 10’³°m³ prostorová skupina Ρ2ι2_χ2ι kosočtveřečná molekul na elementární buňku 4 hustota (vypočtená) (g/cm³) 1,247 teplota tání 182-185° C (rozklad)

Parametry elementární buňky formy B rozměry buňky a = 16,675 (2) .10^_10m b = 28,083(4). 10’^lcm c = 6, 054 (1) . 10’¹⁰m

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 • fc · • fc ·· fcfcfc* • · · • · · · fc · fcfcfc · fcfcfc • fc · • · ···· • fc • fc objem = 2835 (1) . 10~³°m³prostorová skupina Ρ2χ2χ2χ kosočtverečná molekul na elementární buňku 4 hustota (vypočtená) (g/cm³) 1,187 teplota tání 191-199° C (rozklad)

Rozdíly mezi formami A a B předmětného analogu epothilonu jsou dále ilustrovány jejich konformacemi v pevném stavu zobrazenými na obrázcích 8 a 9 v uvedeném pořadí, na základě dílčích souřadnic atomů uvedených v následujících tabulkách 4 až 7.

Tabulka 4

Dílčí souřadnice atomů analogu epothilonu obecného vzorce I: forma A

Atom Cl	X	Y	Z 9)	Ull*10e2 60 ( 6)
0,3879(	3)	0,4352 (	1)	0,5503(
Ol	0,4055(	2)	0,4300(	1)	0,7435 (	5)	68 ( 4 )
C2	0,2864(	3)	0,4340(	1)	0,4675(	7)	42 ( 6)
C3	0,2696(	3)	0,4210 (	1)	0,2325 (	7)	56( 6)
03	0,3097(	2)	0,4550 (	1)	0,1027 (	5)	71( 4)
C4	0,1615 (	3)	0,4154 (	1)	0,1852 (	7)	50 ( 6)
C5	0,1289(	3)	0,3732 (	1)	0,2895 (	3)	58 ( 6)
05	0,0935 (	3)	0,3748 (	1)	0,4713 (	6)	135 ( 6)
C6	0,1343 (	3)	0,3296(	1)	0,1769(	8)	6 6 ( 6)
C7	0,1503 (	3)	0,2921 (	1)	0,3353 (	8)	84 ( 6)
07	0,1410 (	3)	0,2528 (	1)	0,2127 (	6)	127 ( 5)
C8	0,2449(	4)	0,2936(	1)	0,4540(	8)	83 ( 7)
C9	0,3284(	4)	0,2824(	1)	0,3072 (	9)	81 ( 7)
CIO	0,4258 (	4)	0,2877 (	1)	0,4141 (	8)	76 ( 7)
Cil	0,44 67 (	3)	0,3359 (	1)	0,4622(	8)	67 ( 6)

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 ♦ · to • to ··· ·

	- 16 -	• to to to « ·to··* · • · · ·· «	• · • · • · ··
C12	0,5220(	3)	0,3426(	1)	0,6294 (	8)	53 (	6)
012	0,6171 (	2)	0,3288(	1)	0,5612(	5)'	56 (	4)
C13	0,5983 (	3)	0, 3746 (	1)	0,5991 (	8)	50 (	6)
C14	0,6099(	3)	0,4053(	1)	0,4113 (	8)	47 (	6)
05	0,5568 (	3)	0,4477 (	1)	0,4538 (	8)	44 (	6)
N16	0,4552 (	3)	0,4426(	1)	0,4005 (	6)	41 (	5)
07	'0,14 82 (	4)	0,4138 (	2) -	0,0603 (	8)	103 (	7)
08	0, 1043 (	4)	0,4539(	1)	0,2734 (	8)	62 (	6)
09	0,0386 (	4)	0,3232(	2)	0,0572(10)	92 (	8)
C20	0,2404 (	5)	0,2630(	2)	0,6482(10)	145 (	9)
C21	0, 4 974 (	4)	0,3301(	2)	0,8563 (	9)	109 (	8)
C22	0,5935(	3)	0,4860 (	1)	0,3281 (	8)	48 (	6)
C23	0,5989 (	4)	0,4815 (	2)	0,0875 (	8)	132 (	8)
C24	0,6154 (	3)	0,5222(	1)	0,4376(	8)	59 (	6)
C25	0,6392 (	3)	0,5656(	1)	0,3573 (	8)	61 (	6)
N26	0,6786(	3)	0, 5941 (	1)	0, 5076 (	6)	75(	6)
C27	0,6902 (	3)	0,6325(	2)	0, 4255 (	8)	59 (	6)
S28	0,6529(	1)	0,6381 (	1)	0,1655 (	2)	92 (	2)
C29	0,6196 (	4)	0,5846(	2)	0,1632 (	9)	85 (	7)
C30	0,72 92 (	4)	0, 6703 (	2)	0,5523(10)	106 (	8)

• · ··· ·« ··

Tabulka 4 - pokračování

U22*10e2	U33*10e2	U12*10e2	Ul3*10e2	U23*10e2
25 (	4)	138 (	8)	-2 (	4)	16 (	5)	-9(	4)
85 (	4)	100 (	5)	6 (	3)	4 (	3)	1 (	3)
64 (	5)	106 (	6)	0 (	4)	3(	4)	-5 (	4)
44 (	5)	103 (	6)	-7 (	4)	5(	4)	13 (	4)
58 (	3)	128 (	4)	-6(	3)	18 (	3)	3 (	3)
63 (	5)	112 (	6)	-12 (	4)	-3 (	4)	7 (	4)
82 (	6)	103 (	7)	-6(	4)	-13 (	5)	4 (	5)
83 (	4)	144 (	5)	-16 (	4)	39 (	4)	5(	3)

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 •4 44··

71 (	5)	118 (	6)	-13 (	5)	-7 (	4)	-10 (	4)
43 (	5)	134 (	β)	-27 (	4)	-2 (	5) .	-10 (	5)
61 (	4)	163 (	5)	-34 (	3)	-17 (	4)	-9 (	3)
56 (	5)	127 (	6)	-26 (	5)	-4 (	5)	3(	5)
68 (	5)	153 (	7)	-ί (	5)	-4 (	5)	-26 (	5)
56 (	5)	166(	8)	13 (	5)	-19 (	5)	-15(	5)
61 (	5)	126(	7)	-3(	4)	-19(	4)	-5 (	5)
64 (	5)	138 (	7)	16 (	4)	8 (	5)	-1 (	5)
61 (	3)	155 (	4)	15 (	3)	8 (	3)	4 (	3)
45 (	5) '	162 (	7)	3 (	4)	2 (	5)	-8 (	5)
63 (	5)	159 (	7)	2 (	4)	5 (	5)	7 (	5)
44 (	5)	143 (	6)	-4 (	4)	7 (	4)	-ί (	4)
65 (	4)	106 (	5)	-3(	3)	6(	3)	-2 (	3)
128 (	7)	104 (	7)	-29(	6)	-10 (	5)	18 (	5)
67 (	5)	164 (	7)	17 (	5)	9 (	5)	12 (	5)
115 (	7)	217 (10)	-17 (	6)	-70 (	7)	-19 (	7)
114 (	7)	158 (	8)	-34 (	6)	-20 (	6)	47 (	6)
92 (	6 )	131 (	7)	19 (	5)	10 (	-5)	^{8 (}	5)
63 (	5)	122 (	6)	6 (	4)	4 (	5)	-ί (	5)
78 (	6)	116(	7)	-7 (	5)	12 (	5)	-13 (	5)
55 (	5)	132 (	6)	-6 (	4)	9(	5)	7 (	5)
65 (	5)	127 (	7)	-12 (	4)	8 (	5)	5 (	5)
58 (	5)	129 (	5)	-9 (	4)	4 (	4)	-5 (	4.)
69 (	6)	128 (	6)	9(	4)	2 (	5)	⁷ (	5)
79 (	1)	163 (	2)	-10 (	1)	-3 (	1)	20 (	1)
78 (	6)	161 (	8)	-13 (	5)	-9 (	6)	3 (	6)
75 (	6)	186(	8)	-29(	5)	-5 (	6)	-10 (	6)

Tabulka 5	Polohy atomů	vodíku:	forma A
Atom	X	Y	Z	U*10e2
Η21	0,2475( 0) 0,	4114 ( 0)	0,5659( 0)	4,86( 0)

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 · 4 • · ♦ · · * · · · • · · » ···· · · « • ······· ·····«« · «

H22	0,2576( 0)	0,4663(	0)	0,4871 (	0)	4,86( 0)
H31	0,3056(	0)	0,3905(	0)	0,2005(	0)	4,59(	0)
H3	0,3433 (	0)	0,4414 (	0)	-0,0241(	0)	5,55 (	0)
H61	0,1951 (	0)	0,3304 (	0)	0,0646(	0)	5,55 (	0)
H71	0,0960 (	0)	0,2932 (	0)	0,4607 (	0)	5,80(	0)
H7	0, 1332 (	0)	0,2276(	0)	0,3158 (	0)	7,23 (	0)
H81	0,2588 (	0)	0,3266(	0)	0,5107 (	0)	5,85 (	0)
H91	0,3274 (	0)	0,3037 (	0)	0,1672 (	0)	6,41 (	0)
H92	0,3217 (	0)	0,2491(	0)	0,2527(	0)	6,41 (	0)
H1O1	0,4802 (	0)	0,2743(	0)	0,3130(	0)	6,34 (	0)
H102	0, 4253 (	0)	0,2697(	0)	0,5663 (	0)	6,34 (	0)
Hlll	0, 4687 (	0)	0,3519(	0)	0,3132 (	0)	5, 60 (	0)
H112	0,3823 (	0)	0,3519(	0)	0,5172 (	0)	5, 60 (	0)
H131	0,6275 (	0)	0,3905 (	0)	0,7410(	0)	5, 60 (	0)
H141	0,6837 (	0)	0,4117 (	0)	0,3814 (	0)	5,88(	0)
H142	0,5803 (	0)	0,3901(	0)	0,2659 (	0)	5,88 (	0)
H151	0,5633 (	0)	0, 4542 (	0)	0,6281(	0)	5,35 (	0)
H16	0,4353 (	0)	0,4447 (	0)	0,2429 (	0)	4,88(	0)
H171	0,17 22 (	0)	0,4437 (	0)	-0,1367(	0)	6, 90 (	0)
H172	0,1919 (	0)	0,3871(	0)	-0,1308(	0)	6, 90 (	0)
H173	0,0763(	0)	0, 4077 (	0)	-0,1076(	0)	6, 90 (	0)
H181	0,1273 (	0)	0,4835 (	0)	0,1956(	0)	6,31 (	0)
H182	0,0295 (	0)	0,4491 (	0)	0,2355 (	0)	6, 31 (	0)
H183	0,1123 (	0)	0,4566(	0)	0,4436(	0)	6,31 (	0)
H191	0,0370 (	0)	0,2923 (	0)	-0,0226(	0)	8,78 (	0)
H192	-0,0186 (	0)	0,3233(	0)	0,1794 (	0)	8,78(	0)
H193	0,0259(	0)	0,3491 (	0)	-0,0525(	0)	8,78 (	0)
H201	0,3050 (	0)	0,2635(	0)	0,7355 (	0)	8,17 (	0)
H202	0,1828 (	0)	0,2733 (	0)	0,7536(	0)	8,17 (	0)
H203	0,2252 (	0)	0,2304 (	0)	0,5923(	0)	8,17 (	0)
H211	0, 4260 (	0)	0,3415(	0)	0,8951(	0)	6,84 (	0)
H212	0, 4998 (	0)	0,2955 (	0)	0,8754 (	0)	6,84 (	0)

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 • · · · · · • · · · ···· ·· · _ ···«···«········

19- ······♦«· ^x . ··«·*♦·«·*

Tabulka 6

Dílčí souřadnice atomů analogu epothilonu obecného vzorce I: forma A

Atom	X	Y	Z	Ull*10e2
Cl	0,2316(	2)	0,1043 (	2)	0,7342( 8)	56 (	4)
Ol	0,2321(	2)	0,1159 (	1)	0,5376( 5)	131 (	4)
C2	0,1812(	2)	0,0623(	1)	0,8106( 7)	62 (	4)
C3	0,1535 (	2)	0,0622 (	1)	1,0506( 7)	52 (	4)
03	0,2226(	2)	0,0539 (	1)	1,1856( 5)	65 (	3)
C4	0,0876(	2)	0,0237 (	1)	1,0903( 7)	63 (	4)
05	0,0096(	2)	0,0415(	1)	0, 9838( 8)	57 (	4)
05	-0,0132 (	2)	0,0252 (	1)	0,8117( 6)	100 (	4)
C6	-0,0409(	2)	0,0796(	1)	1,1023( 6)	53 (	4)
C7	-0,0754 (	2)	0,1151 (	1)	0, 9373( 9)	60 (	4)
07	-0,1316(	2)	0, 1434 (	1)	1,0606( 7)	79 (	3)
C8	-0,0135 (	3)	0,1468(	I)	0,8213( 8)	75 (	5)
C9	0, 0274 (	2)	0,1817 (	1)	0,9812( 9)	80 (	5)
CIO	0,0946(	3)	0,2107 (	2)	0, 8766 (10)	95 (	5)
Cil	0,1389(	3)	0,2407 (	2)	1,0447(11)	97 (	5)
C12	0,2065(	3)	0,2688 (	2)	0, 9440 (11)	110 (	6)
012	0,2653 (	2)	0,2862 (	1)	1,1070( 8)	124	(4)
C13	0,2894(	3)	0,2520 (	2)	0,9406(10)	104 (	6)
C14	0,3190 (	3)	0,2049(	2)	1,0281(10)	117 (	6)
C15	0,3253 (	3)	0,1676(	1)	0, 8388( 8)	86 (	5)
N16	0,2738 (	2)	0,1273 (	1)	0,8901( 7)	64 (	4)
017	0,0762 (	3)	0,0176(	2)	1,3416( 8)	102 (	6)
C18	0,1109 (	2)	-0,0244 (	1)	0,9909( 8)	82 (	5)
C19	-0,1098 (	3)	0,0529(	2)	1,2197 (10)	79 (	5)
C20	-0,0528 (	3)	0,1729 (	2)	0,6272( 9)	149 (	7)
021	0,1829(	4)	0,3056(	2)	0,7748 (15)	175 (	9)
C22	0,4128 (	3)	0, 1527 (	2)	0,7991( 8)	80 (	5)

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 • · · · · « • ·

C23	0,4521 (	4)	0, 1784 (	3)	0,6109(13)	141( 8)
C24	0, 4477 (	3)	0,1216(	2)	0,9319( 9)	88 (	5)
C25	0,5303 (	3)	0,1032 (	2)	0,9346( 9)	76 (	5)
N26	0,5822 (	2)	0,1091 (	2)	0,7577( 8)	71 (	5)
C27	0, 6498 (	3)	0,0890 (	2)	0,7986(10)	98 (	6)
S28	0, 6565 (	1)	0,0612 (	1)	1,0487( 3)	107 (	1)
C29	0,5605 (	3)	0,0785 (	2)	1,1053 (10)	93 (	6)
C30	0,7206 (	4)	0,0891(	3)	0,6410(12)	102 (	7)

Tabulka 6 - pokračování

U22*10e2	U33*10e2	Ul2*10e2	U13*10e2	U23*10e2
74 (	5)	86 (	6)	5 (	4)	-6 (	4)	-16 (	5)
88 (	3)	74 (	4)	-24 (	3)	-13 (	3)	-7 (	3)
85 (	5)	68 (	5)	-7 (	4)	-6(	4)	-22 (	5)
67 (	4)	71 (	5)	1 (	3)	-19 (	4)	-6 (	4)
123 (	4)	96 (	4)	7 (	3)	-29 (	3)	-19 (	4)
75 (	4)	63 (	5)	5 (	4)	-4 (	4)	-10 (	4)
61 (	4)	78 (	5)	-7 (	3)	-2 (	4)	-10 (	4)
103 (	4)	100 (	4)	19(	3)	-38 (	3)	-38 (	4)
77 (	4)	92 (	6)	14 (	4)	2 (	5)	-17 (	5)
111 (	4)	185 (	5)	40 (	3)	22 (	4)	-10 (	4)
74 (	5)	106 (	6)	4 (	4)	8 (	5)	-14 (	5)
69 (	4)	136 (	7)	-10 (	4)	-i (	5)	-19 (	5)
89 (	5)	175 (	8)	-21 (	4)	15 (	7)	-27 (	6)
98 (	6)	191 (	9)	-22 (	5)	27 (	7)	-48 (	7)
64 (	5)	208 (	9)	-16 (	5)	10 (	7)	-28 (	6)
98 (	4)	241 (	7)	-36 (	3)	30 (	5)	-77 (	5)
82 (	5)	169 (	9)	-25 (	5)	23 (	6)	-38 (	6)
102 (	6)	160 (	8)	-3 (	5)	-26 (	6)	-53 (	6)
74 (	5)	107 (	6)	-18 (	4)	-17 (	5)	-15 ('	5)
100 (	4)	98 (	5)	-26 (	3)	-13 (	4)	-19 (	4)

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 ···* ···· « · φ * ·♦···'··-····· φ» · · • · · ··* ♦··· • · * · · * · · ··

129(	6)	6 6 ( 5)	-13 (	5)	-5 (	5)	10 (	5)
58 (	4)	113( 6)	13 (	4)	-11 (	5)	-9 (	5)
139 (	7)	187( 9)	1 (	5)	54 (	6)	29 (	7)
116 (	6)	123( 8)	10 (	β)	-19 (	β)	22 (	6)
86 (	6)	338(15)	-8 (	6)	0 (	11)	21 (	9)
80 (	5)	108( 6)	-29 (	4)	-5 (	5)	-6(	5)
261 (11)	237 (13)	28 (	8)	54 (	9)	146(11)
111 (	6)	111 ( Ί)	-5 (	5)	3 (	5)	21 (	6)
9 6 (	5)	119 ( 7)	-12 (	4)	2 (	5)	-2 (	6)
192 (	7)	114( 6)	2 (	5)	-6 (	5)	3 (	6)
165 (	7)	125 ( 7)	-5 (	6)	-13 (	6)	-19 (	7)
128 (	2)	173( 2)	12 (	1)	-25(	2)	0(	2)
122 (	6)	166( 9)	4 (	5)	3 (	6)	43 C	7)
443 (17)	150 (10)	45(10)	18 (	7)	-17 (12)

Tabulka 7 Polohy atomů	vodíku:	: forma B
Atom		X		Y		Z	U*10E2
H21	0,1283(	0)	0,0616(	0)	0,7084(	0)	4,86 (	0)
H22	0,2159 (	0)	0,0306(	0)	0,7857 (	0)	4,86(	0)
H31	0,1272 (	0)	0,0969(	0)	1,0910(	0)	4,51 (	0)
H3	0,2243(	0)	0,0785(	0)	1,3075(	0)	6,11 (	0)
H61 -	0,0043 (	0)	0,0983(	0)	1,2199 (	0)	4,99(	0)
H71 -	0,1059(	0)	0,0964(	0)	0,8057(	0)	5,69 (	0)
H7	0,1609(	0)	0,1655(	0)	0, 9542 (	0)	7,62 (	0)
H81	0,0313 (	0)	0,1244(	0)	0,7484 (	0)	5,58(	0)
H91 -	0, 0180 (	0)	0,2062 (	0)	1,0453(	0)	6, 10 (	0)
H92	0,0520(	0)	0,1619(	0)	1,1189 (	0)	6,10 (	0)
H101	0,1365(	0)	0,1874 (	0)	0,7953 (	0)	7,47 (	0)
H102	0,0691(	0)	0,2349(	0)	0, 7527 (	0)	7,47 (	0)
Hlll	0,0976(	0)	0,2651(	0)	1,1204 (	0)	7,74 (	0)

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 ·· · « · • · · · · • · • * ·

H112	0,1633( 0)	0,2170(	0)	1,1686( 0)	7,74 (	0)
H131	0,3308 (	0)	0,2613(	0)	0,8107(	0)	7,31 (	0)
H141	0,3779(	0)	0,2094(	0)	1,1016(	0)	-7,61 (	0)
H142	0,2780(	0)	0,1920(	0)	1,1530 (	0)	7,61 (	0)
H151	0,3046(	0)	0,1836(	0)	0,6859(	0)	5,74 (	0)
H16	0,2693 (	0)	0,1161 (	0)	1,0487(	0)	5,71 (	0)
H171	0,0304 (	0)	-0,0088(	0)	1,3753 (	0)	6, 33 (	0)
H172	0,1318 (	0)	0,0064(	0)	1,4171 (	0)	6,33 (	0)
H173	0,0577 (	0)	0,0512(	0)	1,4165 (	0)	6, 33 (	0)
H181	0, 0633 (	0)	-0,0501(	0)	1,0184(	0)	5,58 (	0)
H182	0,1192 (	0)	-0,0207 (	0)	0,8122 (	0)	5,58(	0)
H183	0,1655 (	0)	-0,0370 (	0)	1,0628 (	0)	5,.58 (	0)
H191	-0,1481 (	0)	0,0774 (	0)	1,3099 (	0)	8,04 (	0)
H192	-0,1459 (	0)	0,0330 (	0)	1,1036(	0)	8,04 (	0)
H193	-0,0849 (	0)	0,0274 (	0)	1,3402 (	0)	8,04 (	0)
H201	-0, 0094 (	0)	0,1955 (	0)	0,5429 (	0)	7,89 (	0)
H202	-0,0763 (	0)	0, 1475 (	0)	0,5059 (	0)	7,89 (	0)
H203	-0,1024 (	0)	0,1951 (	0)	0,6816(	0)	7,89 (	0)
H211	0,1596(	0)	0,2886(	0)	0,6259(	0)	11,47(	0)
H212	0, 1382 (	0)	0,3292 (	0)	0,8404(	0)	11,47 (	0)
H213	0,2355 (	0)	0,3265 (	0)	0,7267 (	0)	11,47 (	0)
H231	0,5051 (	0)	0,1602 (	0)	1,0559 (	0)	6,57 (	0)
H291	0,5291 ί-	0)	0,0702 (	0)	1,2584 (	0)	7,73 (	0)
H301	Ο, 7003 (	0)	0,0920 (	0)	0,4744 (	0)	13,05(	0)
H302	0, 7623 (	0)	0,1165 (	0)	0,6811 (	0)	13,05(	0)
H303	0,7525(	0)	0,0542 (	0)	0, 6572 (	0)	13,05 (	0)

Na základě předchozích dat se usuzuje, že formy A a B jsou jedinečné krystalické entity.

Následující neomezující příklady slouží k ilustraci praktického provedení vynálezu.

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003

Příklad 1 {IS-[IR*, 3R*(£),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*])-7,11dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3-[1-methyl-2-(2-methyl4-thiazolyl)ethenyl]-4-aza-17-oxabicyklo[14.1.0]heptadekan5,9-dion.

V baňce s kulatným dnem o objemu 125 ml, vybavené mechanickým míchadlem, se sloučilo 5,08 g epothilonu-B, 3,55 g azidu tetrabutylammoného (Bu₄NN₃) (1,25 ekvivalentu), 1,07 g chlorid amonný (2 ekvivalenty), 1,8 ml vody (10 ekvivalentů), 15 ml tetrahydrofuranu (THF) a 15 ml Ν,N-dimethylformamid (DMF). Vnitřním prouděním dusíku se směs udržovala inertní 15 minut. Druhá baňka se naplnila 70 ml tetrahydrofuranu, a následně 1,56 ml trimethylfosfinu (PMe₃) (1,5 ekvivalentu), potom 0,259 g aduktu tris(dibenzilidenaceton)-dipalladium(0)-chloroformu [ Pd₃ (dba) ₃CHC1₃] ( 0,025 ekvivalentu). Směs katalyzátoru se míchala 20 minut při teplotě místnosti a potom se přidala ke směsi epothilonu-B. Kombinovaná směs se míchala 4,5 hodiny při teplotě 30 °C. Hotová reakční směs se potom zfiltrovala, aby se odstranil pevný chlorid amonný (NH₄C1). Filtrát obsahoval (pS, zR, QS, r\S, 2R, 3S)-3-[(2S, 3£)-2-amino-3methyl-4-(2-methyl-4-thiazolyl)-3-butenyl]-β,ζ-dihydroxyγ,γ,ε, η, 2-pentamethy-5-oxooxiranundekanovou kyselinu, tetrabutylammonnou sůl (1:1) s HPLC plochou 94.1 %.

V 500ml baňce se smíchalo 3,82 g l—[3— (dimethylamino)propyl]-3-ethylkarbodiimid-hydrochloridu (EDCI) (2 ekvivalenty), 1,68 g l-hydroxy-7-benzotriazolhydrát (HOBt) (1,1 ekvivalentu), 1,38 g uhličitanu draselného (1 ekvivalent), 40 ml Ν,Ν-dimethylformamidu (DMF) a 60 ml tetrahydrofuranu (THF) . Směs se zahřála na teplotu

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 °C a během tří hodin se do ní po kapkách přidával výše uvedený filtrát. Tato směs se potom míchala další 1 hodinu při teplotě 35 °C. Ke snížení objemu reakční směsi na přibližně 80 ml se potom použila vakuová destilace. Výsledný roztok se rozdělil mezi 100 ml ethylacetátu a 100 ml vody. Vodná vrstva se potom zpětně vyextrahovala 100 ml ethylacetátu. Shromážděné organické vrstvy se extrahovaly 50 ml vody, a potom 20 ml roztoku chloridu sodného. Výsledný roztok se filtroval přes Zeta Plus® přepážku a potom se oddělil olej. Surový olej se rozpustil ve 20 ml dichloromethanu a propláchnul vodou, aby se.' odstranily poslední zbytky rozpouštědel ze syntézy a oddělila se pevná látka Surová pevná látka byla chromatografována na silikagelu 60 (35 ml siliky na jeden gram teoretického produtku) s eluentem obsahujícím 88 % dichlormethanu (CH₂C1₂), 10 %-3Q % ethylacetátu (EtOAc) a 2 % triethylaminu (Et₃N). Frakce se analyzovaly HPLC, z nich nejčistší se shromáždily a oddělily, aby se získala vyčištěná pevná látka. Přibližně 2 g výsledné pevné látky bylo 40 minut při teplotě 75 °C suspendováno ve 32 ml ethylacetátu, potom se pomalu přidalo 16 ml cyklohexanu (C6H12) a směs se pomalu ochladila na 5 °C. Vyčištěná látka se shromáždila na filtračním papíře, promyla studeným ethylacetátem/cyklohexanem a vysušila. Výtěžilo se 1,72 g (38% výtěžek) produktu, {1S[1R*, 3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S* ]}-7,11-dihydroxy8,8,10,12,16-pentamethyl-3-[1-methyl-2-(2-methyl-4thiazolyl)ethenyl]-4-aza-17-oxabicyklo[14.1.0]heptaděkan5,9-dionu jako bílé pevné látky s HPLC plochou 99,2 %.

Příklad 2 (IS-[IR*,3R*(E),7R*,10S*,11R*,12R*,16S*))-7,1127 85509 (2785509_CZ.doc) 1,4.2003 • φ φ φφφ φ φ φ • ·· · dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3-[l-methyl-2-(2-methyl4-thiazolyl)ethenyl]-4-aza-17-oxabicyklo[14.1.0]heptadekan5,9-dion, forma A.

Baňka o objemu 250 ml láhev se třemi hrdly se naplnila 0,61 g sloučeniny pojmenované v nadpise, která byla vyčištěna (filtrace přes silikagelovou přepážku se směsí ethylacetátu, hexanu a triethylaminu jako eluenty, HPLC plocha 96,88), a 28 ml ethylacetátu (46 ml/1 g) . Výsledná suspenze se zahřála na teplotu 75 °C. Všechny látky se rozpustily poté, co se suspenze míchala 60 minut při teplotě 75 °C. Získaný roztok se během 120 minut ochladil z 75 °C na 50 °C a při 60 °C se přidaly zárodečné krystaly formy A. Krystaly se objevily při 55 °C. Teplota se potom během 120 minut snížila na 20 °C a zároveň se během 60 minut přidalo po kapkách 35 ml cyklohexanu (57 ml/1 g) . Získaná suspenze se během 120 minut ochladila na -10 °C a při této teplotě se udržovala dalších 60 minut. Suspenze se zfiltrovala a získané bílé krystaly se vysušily, aby se dostalo 0,514 g sloučeniny pojmenované v nadpise, formy A, s výtěžkem 84,3 % s HPLC plochou 99,4.

Forma A - alternativní postup

Baňka o objemu 250 ml se třemi hrdly se naplněnila 0,51 g sloučeniny pojmenované v nadpise, která se vyčistila (filtrace přes silikagelovou přepážku se směsí ethylacetátu, hexanu a triethylaminu jako eluenty, HPLC plocha 96) a 8,5 ml ethylacetátu (16,7 ml/1 g). Výsledná suspenze se zahřála na teplotu 80 °C. Získaný roztok se během 60 minut ochladil z 80 °C na teplotu 70 °C, zárodečné krystaly formy A se přidaly při teplotě 70 °C. Teplota se potom během 180 minut snížila na 30 °C. Krystaly se objevily při teplotě

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003

• · • · • · · • · · · · ·

°C. Roztok se během 180 minut dále ochladil na -10 °C a zároveň se během 30 minut přidalo do směsi po kapkách 10,2 ml cyklohexanu (20 ml/1 g) . Získaná suspenze se udržovala v chladu dalších 60 minut. Suspenze se zfiltrovala a získané bílé krystaly se vysušily, aby se dostalo 0,43 g sloučeniny pojmenované v nadpise, formy A, s výtěžkem 84,3 % s HPLC plochou 99,7.

Forma A - alternativní postup

Baňka o objemu 500 ml se třemi hrdly se naplnila 18,3 g směsi forem A a B, které byly předtím vyčištěny (filtrace přes silikagelovou přepážku se směsí ethylacetátu, dichlormethanu a triethylaminu jako elnuenty, HPLC plocha 99) a 183 ml ethylacetátu (10 ml/1 g) . Výsledná suspenze se zahřála na teplotu 75 °C, přidaly se zárodečné krystaly formy A a teplota se udržovala 30 minut. Při teplotě 70 °C se do směsi po kapkách přidalo 90,2 ml cyklohexanu (5 ml/1 g) . Po dokončení přidávání byla teplota snížena na 20 °C a směs se udržovala za míchání dalších 18 hodin. Teplota se potom snížila na 5 °C a udržovala se 5 hodin. Suspenze se zfiltrovala a získané bílé krystaly vysušily, aby se dostalo 16,1 g sloučeniny pojmenované v nadpise, formy A, s výtěžkem 88 % s HPLC plochou 99,49.

Příklad 3 {IS-[IR*,3R*(£),7R*,10S*,11R*,12R*, 16S*] )-7,11dihydroxy-8,8,10,12,16-pentamethyl-3-[1-methyl-2-(2-methyl4-thiazolyl)ethenyl)-4-aza-17-oxabicyklo[14.1.0]heptadekan5,9-dion, forma B.

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003

Baňka o objemu 250 ml se třemi hrdly se naplnila 0,108 g sloučeniny pojmenované v nadpise, která nebyla vyčištěna jako v příkladu 2, 0,0216 g N,N-dimethylformamidu a 5 ml ethylacetátu (46 ml/1 g). Výsledná suspenze se zahřála na teplotu 80 °C a míchala se 30 minut, aby se rozpustily všechny pevné látky. Získaný roztok se ochladil z 80 °C na 30 °C během 120 minut, přičemž krystaly se objevily při 38 °C. Po kapkách se během 30 minut ke směsi přidalo 7,5 ml cyklohexanu (69,5 ml/1 g) zatímco se teplota během 60 minut snížila na -10 °C a udržovala se dalších 120 minut. Suspenze se zfiltrovala a získané bílé krystaly se vysušily, aby se dostalo 0,082 g sloučeniny pojmenované v nadpise, formy B, s výtěžkem 76 % s HPLC plochou 99,6.

Forma B - alternativní postup

Baňka o objemu 250 ml se třemi hrdly se naplnila 0,458 g sloučeniny pojmenované v nadpise, která nebyla vyčištěna jako v příkladě 2 a obsahovala přibližně 6 % N,Ndimethylformamidu a 10 ml ethylacetátu (21,8 ml/1 g) . Výsledná suspenze se zahřála na teplotu 78 °C a míchala 30 minut, aby se rozpustily všechny pevné látky. Získaný roztok se během 120 minut ochladil z 78 °C na 10 °C. Zárodečné krystaly formy A se přidaly při teplotě 10 °C. Během 60 minut se po kapkách přidalo 20 ml cyklohexanu (43,7 ml/1 g), zatímco se teplota během 120 minut snížila na -10 °C a udržovala se tak dalších 120 minut. Suspenze se zfiltrovala a získané bílé krystaly se vysušily, aby se dostalo 0,315 g sloučeniny pojmenované v nadpise, formy B, s výtěžkem 68,8 % s HPLC plochou 98,2.

Forma B - alternativní procedura

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 • ti · · ti ti • ti ti • *

Wheatonova láhev o objemu 5 ml se naplnila 250 mg sloučeniny pojmenované v nadpise, která nebyla vyčištěna jako v příkladu 2 a 3,75 ml toluenu (15 ml/g) a výsledná suspenze se zahřála na teplotu 75 °C a udržovala tak 30 minut. Výsledná suspenze se nechala vychladnout na 20 °C a udržovala se při této teplotě za míchání 18 hodin. Suspenze se zfiltrovala a získané bílé krystaly se vysušily, aby se dostalo 150 mg sloučeniny pojmenované v nadpise, formy B, s výtěžkem 60 % s HPLC plochou 99,2.

Zastupuj e:

Dr. Petr Kalens

.......----- · ►»·· «< KALEfiiSKÝ

A i .Uv .„u -Mna ', ngwova 2 Česká republika

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 .

vzorce I,

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY • · · · · • ··· · ··· • · · ··· · · ····· • · · · · · ·· · ·· · epothilonu

Krystalický polymorf analogu

Me • · ··« · obecného obsahující formu A, parametry elementární následujícím hodnotám: rozměry buňky vyznačující se tím, že:

buňky se přibližně rovnají a = 14,152(6). 10'¹⁰m b = 30,72 (2) . 10^_1°m c = 6,212 (3) .10~¹⁰m. objem = 2701 (4 ) . 10“³°m³ prostorová skupina Ρ2χ2ι2ι kosočtverečná (orthorombická) molekul na elementární buňku 4 hustota (vypočtená) (g/cm³) 1,247 teplota tání 182-185 °C (rozklad) a

charakteristická maxima v práškovém difrakčním rentgenogramu jsou v hodnotách dvě theta (Cu Κα λ=1,54 0 6.10“¹⁰m při 22 °C) : 5,69, 6,76, 8,38, 11,43, 12,74, 13,62, 14,35, 15,09, 15,66,

16,43, 17,16, 17,66, 18,31, 19,03, 19,54, 20,57, 21,06, 21,29, 22,31, 23,02, 23,66, 24,18, 14,98, 25,50, 26,23, 26,23, 26,46, 27,59, 28,89, 29,58, 30, 32, 31, 08 a 31, 52

vyznačující se tím, že:

nebo formu B,

85509 (2785509_CZ.doc) 1.4.2003 ·· ·

»· · • ♦ · • · · · - 30 - : :··;· ·· » ·· · • · · • * · « • · · · · · · • · » ·· · parametry elementární buňky se přibližně rovnaj i následujícím hodnotám: rozměry buňky a = 16, 675 (2) . 10^_1°m prostorová skupina b = 28,083(4). 10¹⁰m c = 6, 054 (1) . 10¹⁰m obj em = 28 35(1). 10’³°m ³ P2!2i2i

• · ··« · kosočtverečná (orthorombická) molekul na elementární buňku 4 hustota (vypočtená) (g/cm³) 1,187 teplota tání 191-199 °C (rozklad) a

charakteristická maxima v práškovém difrakčním rentgenogramu

jsou v hodnotách dvě theta (Cu Κα λ=1, 5406.10’ ’¹⁰m při 22 °C): 6,17, 10,72, 12,33, 14,17, 14,93, 15,88, 16,17, 17,11, 17,98, 19,01, 19,61, 20,38, 21,55, 21,73, 22,48, 23,34, 23,93, 24,78, 25,15, 25,90, 26,63, 27,59, 28,66, 29,55,

30,49 a 31,22.

2 . Krystalický polymorf analogu epothilonu obecného vzorce I, Me Me O, 1 ^Me .Me 1 HN_S p ^Me O OH o (I) obsahuj ící formu A, vyznačujíc í se práškovým difrakčním rentgenogramem v podstatě, jako je zobrazený na