CN102712654B - 杂环氨基小檗胺衍生物、其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
式I的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法、其药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的用途。
Description
技术领域
本发明属于天然药物及药物化学领域,涉及杂环氨基小檗胺衍生物,还涉及制备这些化合物的方法、包含该化合物的组合物及其在制备抗肿瘤药物中的用途。
背景技术
小檗胺(berbamine,BBM)又称为6,6’,7-三甲氧基-2,2’-二甲基升白胺-12-醇(6,6’,7-trimethoxy-2,2’-dimethylberbaman-12-ol),是从中国中草药小檗属植物中提取的一种双苄基异喹啉类生物碱。小檗胺的生物活性引起了众多研究者对其本身和其类似物的广泛研究。
小檗胺以及其类似物
小檗胺具有刺激髓细胞增殖作用,能提高造血干细胞集落因子(GCSF)的含量,促进骨髓造血干细胞和粒祖细胞的增殖,并向粒系细胞分化,促进白细胞的增生(林传荣等,升白胶(小檗胺)治疗化疗性白细胞减少症的临床观察,中成药,1994,16(7):29)。
小檗胺通过诱导细胞凋亡和影响细胞周期的方式抑制***癌PC-3细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性(孙鹏等,小檗胺诱导***癌PC-3细胞凋亡及及机制,中华实验外科杂志,2007,24(8):957)。
小檗胺在体外对K562细胞具有明显的增殖抑制作用及明确的诱导凋亡作用,并呈时间-浓度依赖关系;在荷瘤裸鼠体内,小檗胺同样具有显著的抑制K562细胞生长的作用,尤其能下调瘤体组织细胞bcr/abl mRNA的表达水平(吴东等,小檗胺对K562细胞体外及体内作用的实验研究,中华实验血液学杂志,2005,13(3):373)。
小檗胺对细胞毒性T淋巴细胞有抑制作用,对小鼠体外自然杀伤细胞活性有明显促进作用,在体内外可诱生出较高水平白细胞介素II(IL-2),可避免用大剂量IL-2***时引起的毒副反应。实验证明,小檗胺对辐射损伤小鼠免疫***有良好防护作用(刘新等,小檗胺对BALB/C小鼠的免疫调节作用,中国医科大学学报,1996,25(3):229;罗崇念等,小檗胺对小鼠脾细胞毒性T淋巴细胞活性的抑制作用,中国药理学与毒理学杂志,1995,9(2):159-160;葛明珠等,盐酸小檗胺对辐射小鼠的免疫防护作用的实验研究,免疫学杂志,1998,14(4):238)。
小檗胺诱导人白血病Jurkat细胞凋亡机制也有研究与报道。其结果表明,小檗胺能选择性抑制人白血病Jurkat细胞凋亡,使细胞周期阻滞于S期,同时细胞caspase-3蛋白表达增高。且随着药物作用浓度从0.5ug/mL增加到10ug/mL,细胞存活率由93.69%降低为14.85%,在此作用浓度范围内小檗胺对正常人外周血白细胞无明显细胞毒作用(董志煜等,小檗胺诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的实验研究,中国肿瘤,2007,16(9):722)。
中国已经批准盐酸小檗胺片的上市销售,用于治疗各种原因引起的白细胞减少症,包括预防癌症放疗、化疗后白细胞的减少。
也有报道小檗胺对细胞增殖的抑制作用,例如小檗胺及其某些衍生物对脑恶性胶质瘤细胞、人***细胞、腹水癌细胞及黑色素瘤细胞有明显的抑制作用(张金红等,小檗胺及其衍生物的结构对***(CHeLa)细胞生长增殖的影响,南开大学学报(自然科学),1996,29(2):89;张金红等,小檗胺及其衍生物对恶性黑色素瘤细胞增殖的影响,中草药,1997,28(8):483;张金红等,小檗胺衍生物(EBB)体内抗肿瘤作用初探,中草药,1998,29(4):243;段江燕等,小檗胺类化合物对黑色瘤细胞内钙调蛋白水平的影响,中草药,2002,33(1):59)。其中[O-(4-乙氧基)-丁基]-小檗胺(EBB)为专一性强的CaM拮抗剂,专一性系数高出小檗胺6.5倍。EBB诱导肺癌细胞凋亡,同时维护主要器官细胞正常生物功能(段江燕等,[O-(4-乙氧基)-丁基]-小檗胺诱导肺癌细胞凋亡的初探,山西师范大学学报(自然科学版),2001,15(4):55)。另一小檗胺衍生物为O-丹磺酞基小檗胺(DB),其含有疏水性萤光基团。DB对依赖于CaM的红细胞膜Ca2++Mg2+ATPase抑制活性比小檗胺强25倍;DB对细胞内的颗粒酶磷酸二酯酶活性有明显的抑制作用,且存在剂量与活性的关联性。另外,还发现DB对肺癌细胞的作用比小檗胺强,而对人胚肺细胞细胞毒性小,其抑制肺癌细胞除了与抑制原癌基因有关,也与控制失活的抑癌基因有关(张金红等,钙调素拮抗剂O-丹酰基基小檗胺对磷酸二酯酶及肺细胞增殖的影响,南开大学学报(自然科学),2001,34(3):64)。
本发明人前期的研究已证实,小分子化合物小檗胺具有明显抗人白血病作用(Leukemia Research.2006,30:17-23)。
本发明人在专利CN101273989A描述了一类小檗胺衍生物用于制备治疗抗肿瘤药物中的应用,主要涉及苯甲酰基和苄基衍生物。
迄今为止,所报道的化合物只能短暂抑制肿瘤细胞生长,不能完全清除肿瘤。尤其是对血液***恶性肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤,和实体肿瘤如肝癌、肺癌、乳腺癌、***癌、骨肉瘤等。显而易见,抗肿瘤活性更高的小檗胺衍生物仍有待继续研究与开发。
发明内容
本发明的一个目的是提供式(I)的新型小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐:
其中,
n=1-15;
R1选自H、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、卤代C1-C6烷硫基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C7环烷基、卤代C3-C7环烷基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C6烷基取代的氨基和氰基;
R2为被选自C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、卤代C1-C6烷硫基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C7环烷基、卤代C3-C7环烷基、羟基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C6烷基取代的氨基和氰基的取代基任选取代的芳基氨基甲酰基、芳基羰基氨基、杂芳基氨基甲酰基、杂芳基羰基氨基或氮连接的含氮杂环基羰基;
X、Y独立地为不存在、CH、N或S,条件是X和Y不能同时为不存在。
本发明的另一个目的是提供制备本发明式(I)化合物的方法:
(路线1)
其中,目标式(I)化合物由式(II)化合物与式(III)化合物进行氨基化反应来制备,其中,化合物(II)和(III)中的n、X、Y、R1和R2与上文在式(I)中的定义相同。
式(II)化合物由式(IV)/(IV’)化合物与式(V)/(V’)化合物通过亲核取代反应来制备
(路线2)
其中,化合物(II)、(IV)和(IV’)中的X、Y、R1和R2与上文在式(I)中的定义相同。
其中,式(V)化合物优选为被选自C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、卤代C1-C6烷硫基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C7环烷基、卤代C3-C7环烷基、羟基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C6烷基取代的氨基和氰基的取代基任选取代的芳基胺、杂芳基胺或含氮杂环。
式(V’)化合物优选为被选自C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、卤代C1-C6烷硫基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C7环烷基、卤代C3-C7环烷基、羟基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C6烷基取代的氨基和氰基的取代基任选取代的芳基甲酰卤、杂芳基甲酰卤或氮连接的含氮杂环基甲酰卤。
式(IV)化合物由式(VI)化合物与式(VII)化合物通过羧羟基的卤置换反应来制备
(路线3)
其中,化合物(VI)和(IV)中的X、Y和R1与上文在式(I)中的定义相同。
其中,式(VII)卤代试剂可以为但不限于三氯氧磷(POCl3)、氯化亚砜(SOCl2)或草酰氯((COCl)2)。
本发明的另一个目的是提供包含本发明化合物的药物组合物,所述药物组合物包括至少一种本发明化合物,和任选的药学上可以接受的赋形剂。
本发明的另一个目的是提供本发明化合物或包含该化合物的药物组合物在制备药物、特别是抗肿瘤药物中的用途。相应地,本发明提供一种***患者的方法,包括给予需要治疗的患者治疗有效量的至少一种本发明的化合物。所述肿瘤特别选自白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、肝癌、胃癌、乳腺癌、胆管细胞癌、胰腺癌、肺癌、大肠癌、骨肉瘤、黑色素瘤、***癌等。
本发明还涉及用于***的本发明的化合物。
具体实施方式
本发明提供通式(I)的新型小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐:
其中,
n=1-15;
R1选自H、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、卤代C1-C6烷硫基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C7环烷基、卤代C3-C7环烷基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C6烷基取代的氨基和氰基;
R2选自被选自C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、卤代C1-C6烷硫基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C7环烷基、卤代C3-C7环烷基、羟基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C6烷基取代的氨基和氰基的取代基任意取代的芳基氨基甲酰基、芳基羰基氨基、杂芳基氨基甲酰基、杂芳基羰基氨基、氮连接的含氮杂环基羰基;
X、Y为不存在、CH、N或S,X和Y不能同时为不存在。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中n为1-10的整数。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中n为1-7的整数。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中n为3-5的整数,例如n为3,4或5。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R1为H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C6烷基取代的氨基或氰基。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R1为H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基或卤素。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R1为H、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基或C5-C6环烷基。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R1为H、甲氧基或甲基。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R1为甲基。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R1为氢。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R2为被选自C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、羟基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C6烷基取代的氨基和氰基的取代基任意取代的芳基氨基甲酰基、芳基羰基氨基、杂芳基氨基甲酰基、杂芳基羰基氨基、氮连接的含氮杂环基羰基。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R2为被选自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C5-C6环烷基、羟基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C3烷基取代的氨基和氰基的取代基任意取代的芳基氨基甲酰基、芳基羰基氨基、杂芳基氨基甲酰基、杂芳基羰基氨基、氮连接的含氮杂环基羰基。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R2为被选自C1-C3烷氧基和卤素的取代基任意取代的芳基氨基甲酰基、芳基羰基氨基、杂芳基氨基甲酰基、杂芳基羰基氨基或氮连接的含氮杂环基羰基。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R2为被选自甲氧基、氯和氟的取代基任意取代的芳基氨基甲酰基、芳基羰基氨基、杂芳基氨基甲酰基、杂芳基羰基氨基、氮连接的含氮杂环基羰基。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中R2为被选自甲氧基、氯和氟的取代基任意取代的苯基氨基甲酰基、苯基羰基氨基、吗啉-4-基羰基。。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中X=N,Y=CH。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中X=S,Y=不存在。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中X=CH,Y=N。
在一种实施方式中,本发明涉及式I的化合物,其中X=CH,Y=CH。
本发明不同实施方案中的不同的优选条件在化学上允许的情况下可以任意组合。
在另一种实施方式中,本发明特别优选如下的式I化合物:
12-O-(3-(5-(2-氯-5-甲氧基苯甲酰氨基)-嘧啶-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(1)),
12-O-(3-(5-(2-氯-6-甲基苯氨甲酰基)-噻唑-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(2)),
12-O-(3-(5-(3-甲氧基苯氨甲酰基)-4-甲基噻唑-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(3)),
12-O-(3-(5-(3-甲氧基苯氨甲酰基)-吡嗪-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(4)),
12-O-(3-(5-(吗啉-4-甲酰基)-吡嗪-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(5)),
12-O-(3-(5-(3-甲氧基苯氨甲酰基)-吡啶-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(6)),
12-O-(3-(5-(4-氟苯氨甲酰基)-吡啶-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(7))。
本发明涉及以下形式的本发明的式(I)化合物:它们的盐、溶剂化物、水合物、加成物、复合物、多晶型物或前药。
如本文所使用,术语“C1-C6烷基”是指含有1-6个碳原子的直链或支链烃基。C1-C6烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正戊基和正己基。术语“C1-C6烷氧基”是指-O-C1-C6烷基。
术语“C1-C6烷硫基”是指-S-C1-C6烷基。
术语“C3-C7环烷基”是指具有饱和环的3-7元单环***的烃,C3-C7环烷基可以为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“芳基”是指6-20个碳原子的单价芳香烃基。优选,本发明中的芳基最多含有18、17、16、15、14、13、12、11或10个碳原子。该芳基可任选被一个或多个R2定义中规定的取代基取代。在一个实施方式中,芳基各环的0、1、2、3、4、5或6个环原子上被取代基取代。芳基的例子包括但不限于苯基、萘基、蒽基、芴基、茚基等,优选苯基或萘基。
术语“杂芳基”是指一个或多个碳原子和一个或多个选自N、O、S的杂原子的单价芳香基。杂芳基可以是含有2到6个碳原子和1到3个选自N、O、S的杂原子的具有3到7个环成员的单环杂芳基或含有4到9个碳原子和1到3个选自N、O、S的杂原子的具有7到10个环成员的双环杂芳基。该杂芳基可任选被一个或多个R2定义中规定的取代基取代。在一个实施方式中,杂芳基的各环的0、1、2、3或4个环原子上可以被取代基取代。杂芳基的例子包括但不限于吡啶基、1-氧代-吡啶基、呋喃基、苯并[1,3]二氧杂环戊烯基(dioxolyl)、苯并[1,4]二氧芑基(dioxinyl)、噻吩基,吡咯基、噁唑基、噁二唑基、咪唑基、噻唑基、异噁唑基、喹啉基、吡唑基、异噻唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、***基、噻二唑基、异喹啉基、吲唑基、苯并噁唑基、苯并呋喃基、中氮茚基(indolizinyl)、咪唑并吡啶基、四唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并噁二唑基、吲哚基、四氢吲哚基、氮杂吲哚基、咪唑并吡啶基、喹唑啉基、嘌呤基、吡咯并[2,3]嘧啶基、吡唑并[3,4]嘧啶基和苯并(b)噻吩基、3H-噻唑并[2,3-c][1,2,4]噻二唑基、咪唑并[1,2-d]-1,2,4-噻二唑基、咪唑并[2,1-b]-1,3,4-噻二唑基、1H,2H-呋喃并[3,4-d]-1,2,3-噻二唑基、1H-吡唑并[5,1-c]-1,2,4-***基、吡咯并[3,4-d]-1,2,3-***基、环戊***基、3H-吡咯并[3,4-c]异噁唑基、1H,3H-吡咯并[1,2-c]噁唑基、吡咯并[2,1-b]噁唑基等。
术语“含氮杂环-N-基”是指一个或多个碳原子和一个或多个N原子以及任选的一个或多个O或S原子的N-连接的饱和或非芳香不饱和的单环或双环基团。该含氮杂环-N-基可以是含有2到6个碳原子和1到3个选自N、O、S的杂原子(其中至少一个为氮)的具有3到7个环成员的N-连接单环杂环基或含有4到9个碳原子和1到3个选自N、O、S的杂原子(其中至少一个为氮)的具有7到10个环成员的N-连接双环杂环基。该杂环基可任选被一个或多个R2定义中规定的取代基取代。在一个实施方式中,杂环基的各环的0、1、2、3或4个环原子上可以被取代基取代。
所述氮连接的杂环的例子包括但不限于,在氮丙啶、吖丁啶、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氢吲哚、1H-吲唑的1位,异吲哚或异二氢吲哚的2位,吗啉的4位和咔唑或β-咔啉的9位连接的那些。更典型地,氮连接的杂环包括但不限于1-氮丙啶基、1-吖丁啶基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基、1-哌啶基和4-吗啉基。
术语“取代的”是指一个或多个取代基(其可以是相同或不同的),各个取代氢原子。
如本文所使用,术语“式(I)化合物的药学上可以接受的盐”的例子是由形成药学上可以接受的阴离子的有机酸形成的有机酸盐,包括但不限于甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、苹果酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸盐;也可形成合适的无机盐,包括但不限于盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、碳酸氢盐和碳酸盐、磷酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐等。
药学上可以接受的盐可使用本领域熟知的标准程序获得,例如,通过将足量的碱性化合物和提供药学上可以接受的阴离子的合适的酸反应生成。
术语“加成物和复合物”是指本发明的化合物与其他小分子或生物大分子以非化学键形成的药学上可以接受的物质。
如本文所使用,术语“多晶型物”是指本发明的化合物或其复合物的固体晶体形式。相同化合物的不同的多晶型物可以显示不同的物理、化学和/或光谱性质。不同的物理性质包括但不限于稳定性(例如,对热或光)、可压缩性和密度(对于配制制剂和产品生产是重要的)和溶解速率(其可以影响生物利用度)。稳定性的不同会造成化学反应性(例如差异氧化,使得当由一种多晶型物构成时比由另一多晶型物构成时剂型更快地褪色)或机械性能(例如,储存时作为动力学有利的多晶型物的片剂碎末转化成热力学更加稳定的多晶型物)或两者(例如,一种多晶型物的片剂在高潮湿度时更加容易破碎)中的变化。多晶型物的不同的物理性质可以影响它们的加工。例如,一种多晶型物可能比另一种更可能形成溶剂化物或可能比另一种更加难以过滤或洗去杂质,这是由于例如其颗粒的形状或大小分布。
如本文所使用,术语“水合物”是指本发明的化合物或其盐,其进一步包含通过非共价分子间力结合的化学计量的或非化学计量的量的水。
如本文所使用,除非另外说明,术语“前药”是指可以在生物学条件(体外或体内)下水解、氧化或进行其他反应以提供本发明的化合物的衍生物。前药仅在生物学条件下经过该反应成为活性化合物,或者它们在它们不反应的形式中具有活性。通常可以使用公知的方法制备前药,例如1Burger′s Medicinal Chemistry and Drug Discovery(1995)172-178,949-982(Manfred E.Wolff编,第5版)中描述的那些方法。
本发明化合物中小檗胺环部分具有式I结构式所显示的立体化学结构。本文使用的立体化学的定义和约定一般遵循MCGRAW-HILLDICTIONARY OF CHEMICAL TERMS(S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill BookCompany,New York,1984);和ELIEL,E.和WILEN,S.,STEREOCHEMISTRYOF ORGANIC COMPOUNDS(John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994)。许多有机化合物以光学活性形式存在,即它们具有旋转平面偏光的平面的能力。本文使用的术语“治疗”一般是指获得需要的药理和/或生理效应。该效应根据完全或部分地预防疾病或其症状,可以是预防性的;和/或根据部分或完全稳定或治愈疾病和/或由于疾病产生的副作用,可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖了对患者疾病的任何治疗,包括:(a)预防易感染疾病或症状但还没诊断出患病的患者所发生的疾病或症状;(b)抑制疾病的症状,即阻止其发展;或(c)缓解疾病的症状,即,导致疾病或症状退化。
本发明的化合物可以按照常规的有机化学合成方法制备。例如,本发明涉及一种制备式(I)化合物的方法,
(路线1)
其中,目标式(I)化合物由式(II)化合物与式(III)化合物进行氨基化反应来制备,其中,化合物(II)、(III)中的n、X、Y、R1和R2与上文在式(I)中的定义相同,所述反应一般在碱性、加热条件下进行。
(路线2)
式(II)化合物由式(IV)化合物与式(V)化合物或式(IV’)化合物与式(V’)化合物通过亲核取代反应来制备。其中,化合物(II)、(IV)和(IV’)中的X、Y、R1和R2与上文在式(I)中的定义相同。
式(V)化合物优选为被选自C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、卤代C1-C6烷硫基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C7环烷基、卤代C3-C7环烷基、羟基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C6烷基取代的氨基和氰基取代基任意取代的芳基胺、杂芳基胺或含氮杂环;更优选为邻位、对位卤素取代的苯胺、间位烷氧基取代的苯胺或吗啉。优选的式(V)化合物的实例为氯代或氟代苯胺、甲氧基取代的苯胺或吗啉。
式(V’)化合物优选为被选自C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、卤代C1-C6烷硫基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、C3-C7环烷基、卤代C3-C7环烷基、羟基、卤素、硝基、任选由一个或两个C1-C6烷基取代的氨基和氰基的取代基任选取代的芳基甲酰卤、杂芳基甲酰卤或氮连接的含氮杂环基甲酰卤;更优选为邻位、对位卤素、C1-C6烷氧基取代的苯甲酰卤。优选的式(V’)化合物的实例为氯代、甲氧基取代的苯甲酰氯。
该反应步骤一般采用过量胺或加入有机碱来中和产生的卤化氢,反应一般在低温或常温下进行;对于反应活性低的底物,需要加热以促使反应完成。
(路线3)
式(IV)化合物由羧酸化合物(VI)与式(VII)化合物通过羧羟基的卤置换反应来制备。其中,化合物(VI)和(IV)中的X、Y和R1与上文在式(I)中的定义相同。其中,式(VII)化合物优选为三氯氧磷(POCl3)、氯化亚砜(SOCl2)或草酰氯((COCl)2),当卤代试剂为三氯氧磷、氯化亚砜时,需要将羧酸与其一起加热回流;卤代试剂为草酰氯时,反应条件比较温和。
常规的化学转换可用于实施本发明。本领域的技术人员可以决定用于这些化学转换的适当的化学剂、溶剂、保护基和反应条件。相关信息描述于,例如,R.Larock,Comprehensive OrganicTransformations,VCH出版商(1989);T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,第3版,John Wiley andSons(1999);L.Fieser和M.Fieser,Fieser and Fieser’s Reagents forOrganic Synthesis,John Wiley and Sons(1994);及L.Paquette编辑的Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley andSons(1995)及其后来的版本。
保护基指那些一旦连接活性部分(例如,羟基或氨基),防止这些部分被后来的反应干扰并可在反应后通过常规的方法去除的基团。羟基保护基的例子包括但不限于,烷基、苯甲基(苄基)、烯丙基、三苯甲基(即,三苯基甲基)、酰基(例如,苯甲酰基、乙酰基或HOOC-X”-CO-,X”为亚烷基、亚链烯基、亚环烷基或亚芳基)、甲硅烷基(例如,三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基和叔丁基二甲基甲硅烷基)、烷氧基羰基、氨基羰基(例如,二甲基氨基羰基、甲基乙氨基羰基和苯基氨基羰基)、烷氧甲基、苯甲氧甲基和烷基巯甲基。氨基保护基的例子包括但不限于,烷氧基羰基、烷酰基、芳氧基羰基、芳基取代的烷基等。羟基和氨基保护基已在T.W.Greene和P.G..M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,第2版,John Wiley andSons(1991)中讨论。羟基和氨基保护基都可在反应后通过常规的方法去除。
本发明还提供了包含本发明式I化合物的药物组合物。本发明提供了这样的药物组合物,其包含至少一种如上所述的本发明的式I化合物,和任选的药学上可以接受的赋形剂。
制备各种含有一定量的活性成分的药物组合物的方法是已知的,或根据本发明的公开内容对于本领域技术人员是显而易见的。如REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES,Martin,E.W.,ed.,MackPublishing Company,19th ed.(1995)所述,制备所述药物组合物的方法包括掺入适当的药学赋形剂、载体、稀释剂等。
以已知的方法制造本发明的药物制剂,包括常规的混合、溶解或冻干方法。本发明的化合物可以制成药物组合物,并向患者以适于选定的施用方式的各种途径施用,例如,口服或肠胃外(通过静脉内、肌内、局部或皮下途径)。
因此,本发明的化合物结合药学上可以接受的载体(如惰性稀释剂或可同化的可食用的载体)可以全身施用,例如,口服。它们可以封闭在硬或软壳的明胶胶囊中,可以压为片剂。对于口服治疗施用,活性化合物可以结合一种或多种赋形剂,并以可吞咽的片剂、颊含片剂、含片、胶囊剂、酏剂、悬浮剂、糖浆、圆片等的形式使用。这种组合物和制剂应该包含至少0.1%的活性化合物。这种组合物和制剂的比例当然可以变化,可以占给定的单位剂型重量的大约1%至大约99%。在这种治疗有用的组合物中,活性化合物的量使得能够获得有效剂量水平。
片剂、含片、丸剂、胶囊剂等也可以包含:粘合剂,如黄蓍胶、***胶、玉米淀粉或明胶;赋形剂,如磷酸氢二钙;崩解剂,如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等;润滑剂,如硬脂酸镁;和甜味剂,如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦;或调味剂,如薄荷、冬青油或樱桃香味。当单位剂型是胶囊时,除了上面类型的材料,它还可以包含液体载体,如植物油或聚乙二醇。各种其他材料可以存在,作为包衣,或以其他方式改变固体单位剂型的物理形式。例如,片剂、丸剂或胶囊剂可以用明胶、蜡、虫胶或糖等包衣。糖浆或酏剂可以包含活性化合物,蔗糖或果糖作为甜味剂,对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯作为防腐剂,染料和调味剂(如樱桃香料或桔子香料)。当然,用于制备任何单位剂型的任何材料应该是药学上可以接受的且以应用的量基本上无毒。此外,活性化合物可以掺入缓释制剂和缓释装置中。
活性化合物也可以通过输注或注射来静脉内或腹膜内施用。可以制备活性化合物或其盐的水溶液,任选地混和无毒的表面活性剂。也可以制备在甘油、液体聚乙二醇、甘油三乙酸酯及其混合物以及油中的分散剂。在普通的储存和使用条件下,这些制剂包含防腐剂以防止微生物生长。
适于注射或输注的药物剂型可以包括包含适于无菌的可注射或可输注的溶液或分散剂的即时制剂的活性成分(任选封装在脂质体中)的无菌水溶液或分散剂或无菌粉末。在所有情况下,最终的剂型在生产和储存条件下必须是无菌的、液体的和稳定的。液体载体可以是溶剂或液体分散介质,包括,例如水、乙醇、多元醇(例如,甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒的甘油酯及其合适的混合物。可以维持合适的流动性,例如,通过脂质体的形成,通过在分散剂的情况下维持所需的粒子大小,或通过表面活性剂的使用。可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等)产生预防微生物的作用。在许多情况下,优选包括等渗剂,如糖、缓冲剂或氯化钠。通过使用延缓吸收剂的组合物(例如,单硬脂酸铝和明胶)可以产生可注射的组合物的延长吸收。
通过将合适的溶剂中的需要量的活性化合物与需要的上面列举的各种其他成分结合,然后进行过滤灭菌,制备无菌可注射溶液。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下,优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术,这会产生活性成分加上任何另外需要的以前无菌过滤溶液中存在的成分的粉末。
有用的固体载体包括粉碎的固体(如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等)。有用的液体载体包括水、乙醇或乙二醇或水-乙醇/乙二醇混合物,本发明的化合物可以任选在无毒的表面活性剂的帮助下以有效含量溶解或分散在其中。可以加入佐剂(如香味)和另外的抗微生物剂来优化对于给定用途的性质。
增稠剂(如合成的聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性无机材料)也可和液体载体用于形成可涂覆的糊剂、凝胶、软膏、肥皂等,直接用于使用者的皮肤上。
化合物或其活性盐或衍生物的治疗需要量,不仅取决于选择的特定的盐,而且取决于施药方式、待治疗的疾病的本质和患者的年龄和状态,最终取决于在场医师或临床医生的决定。
上述制剂可以以单位剂型存在,该单位剂型是含有单位剂量的物理分散单元,适于向人体和其它哺乳动物体给药。单位剂型可以是胶囊或片剂,或是很多胶囊或片剂。根据所涉及的具体治疗,活性成分的单位剂量的量可以在大约0.1到大约1000毫克或更多之间进行变化或调整。
本发明还提供本发明的化合物或包含该化合物的组合物在制备药物、特别是抗肿瘤药物中的用途。相应地,本发明提供一种***患者的方法,包括给予需要治疗的患者治疗有效量的至少一种本发明的化合物。本发明的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐例如可用于治疗白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、肝癌、胃癌、乳腺癌、胆管细胞癌、胰腺癌、肺癌、大肠癌、骨肉瘤、黑色素瘤、***、神经胶质瘤、鼻咽癌、喉癌、食管癌、中耳肿瘤、***癌等肿瘤。
在下列实施例中,将更加具体地解释本发明。但应理解,下列实施例旨在说明本发明而不对本发明的范围构成任何限制。
以下实施例中所用的化学原料均为商购获得或通过本领域熟知的合成方法获得。
实施例
实施例1:化合物(8)的合成
在搅拌下向3-氯丙胺盐酸盐(11.0g,110mmol)和三乙胺(18.42ml,130mmol)的氯仿溶液(50ml),缓慢加入二叔丁基二碳酸酯(23.79g,110mmol)的氯仿溶液(50ml)。室温下搅拌过夜。获得棕色油,作为粗制产物。在低于48℃下,克氏蒸馏(Kugelrohr distillation)产生无色固体化合物(8-2)(22g,95%)。
将二盐酸小檗胺(7.0g,10.28mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(150ml)中。在氮气下,冷却溶液至0℃。向溶液中加入NaH(1.65g,60%,41.12mmol)。搅拌混合物1小时,在15分钟内逐滴加入化合物(8-2)(2.18g,11.3mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(30ml)溶液。在0℃下搅拌1小时后,然后使混合物升温至室温,并搅拌3小时,再加热至80℃过夜。真空蒸发反应混合物,用水稀释,并用二氯甲烷(3*150ml)萃取。合并的有机相用水和盐水洗涤,经无水硫酸钠干燥,并过滤。真空浓缩后,残留物经制备高效液相色谱纯化,产生化合物(8-3)(3.0g,38.1%)。
将化合物(8-3)(3g,3.9mmol)溶于二氯甲烷/甲醇(50ml,10∶1)。将溶液冷却到0℃。10分钟内逐滴加入于二氧六环中的盐酸(4N,5ml,20mmol)溶液中。使溶液升温至室温并搅拌过夜后,真空蒸发反应混合物以产生化合物(8)(2.8g,98.6%)。
实施例2:化合物(1)的合成
将2-氯-5-甲氧基苯甲酸(4.0g,21.5mmol)和二氯亚砜(2ml,27mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液,加热回流3小时。浓缩反应混合物,以生成产物。反应所得粗品可直接用于下一步反应而不必另外的纯化。
将醋酸(15ml,261mmol,8当量)缓慢滴加到含有铁粉(11g,196mmol,6当量)和2-氯-5-硝基-嘧啶(5.3g,33.33mmol,1当量)和甲醇(75ml)的混合物中。3小时后,用乙酸乙酯(300ml)稀释反应混合物,用硅藻土过滤,有机相依次用饱和碳酸钾水溶液(200ml)和盐水(200ml)洗涤,无水硫酸钠干燥,并浓缩产生黄色固体化合物(1-2)(2.0g,46.4%)。
将5-氨基-2-氯嘧啶(1-2)(2.7g,20.6mmol)、2-氯-5-甲氧基苯甲酰氯(4.2g,20.6mmol)和三乙胺(7ml)溶于二氯甲烷(40ml)中。所得混合物在室温下搅拌过夜。然后蒸发除去溶剂,将残余物倾入乙酸乙酯和水中进行萃取分离。合并的有机相经无水硫酸钠干燥,真空浓缩,并通过硅胶柱色谱纯化,以产生白色固体化合物(1-3)(5.7g,82.6%)。
将化合物(8)(200mg,0.6mmol)和化合物(1-3)(270mg,0.90mmol)溶于N,N-二异丙基乙基胺(2mL),并加热至110℃。然后真空蒸发反应混合物,并通过制备性薄层色谱法纯化,产生白色或淡黄色化合物(1)(16mg,2.9%)。
LC/MS m/z:M+1927.4100%(纯度)。
1H NMR(CDCl3)δ:8.424(s,2H),7.734(s,1H),7.273~7.253(m,2H),7.210~7.192(m,1H),7.058~7.043(d,1H,J=7.5Hz),6.902~6.878(dd,1H,J=9.0Hz,9.0Hz),6.769~6.753(d,1H,8.0Hz),6.704~6.688(d,1H,J=8.0Hz),6.588~6.571(d,1H,J=8.5Hz),6.462(s,1H),6.339(s,1H),6.206(s,1H),5.907(s,1H),5.555~5.534(t,1H,J=5.0Hz,5.5Hz),4.136~4.112(m,2H),3.766(s,4H),3.681(s,3H),3.622~3.584(dd,2H,J=12.5Hz,12.5Hz),3.538(s,3H),3.411(s,1H),3.346~3.299(m,1H),3.226~3.147(m,2H),3.052(s,3H),2.972~2.943(d,1H,J=14.5Hz),2.884~2.716(m,5H),2.541~2.497(m,4H),2.321~2.302(m,1H),2.184(s,3H),2.133~2.063(m,2H)。
实施例3:化合物(2)的合成
在-10℃下,用N-溴代丁二酰亚胺(19.6g,0.11mol)处理3-乙氧基丙烯酸乙酯(14.4g,0.1mol)的水/二氧六环(1∶1)(100mL)溶液。室温下搅拌反应混合物1小时,然后加入硫脲(7.6g,0.1mol),并加热反应至80℃1小时。反应液冷却至室温后,加入氨水(20mL)。室温下搅拌产生的浆状物10分钟,并过滤。产生的滤饼用水洗涤并真空干燥,产生化合物(2-1)(12.1g,70%)。
在23℃下,向亚硝酸叔丁酯(1.3mL,9.52mmol)和氯化亚铜(1.0g,7.6mmol)的乙腈(10mL)和四氢呋喃(10mL)的溶液(10mL)中加入2-氨基噻唑-4-甲酸乙酯(1.0g,6.35mmol)的乙腈(10mL)和四氢呋喃(10mL)的溶液。反应混合物需要在65℃下加热,直到薄层色谱法(40%的乙酸乙酯-己烷)表明的原料完全消耗。之后,将混合物冷却至室温,在水和乙酸乙酯之间分配,真空浓缩有机层,并通过以20%的乙酸乙酯-己烷洗脱的快速硅胶柱色谱纯化,以产生2-氯噻唑-4-甲酸乙酯(2-2)(0.49g,40%)。
将2-氯噻唑-4-甲酸乙酯(8.8g,45mmol)溶于乙醇(100mL),加入氢氧化钠(2.13g,53.3mmol)和水(50mL)。室温下搅拌过夜后,减压除去乙醇,用水(50mL)稀释反应混合物。用***(50mL)洗涤混合物后,用HCl将pH值调节为大约2。通过过滤收集产生的固体,用水洗涤并干燥,生成化合物(2-3)(5.12g,70%)。
在0℃下,将于二氯甲烷(10mL)中的草酰氯(2.52g,0.02mol)逐滴加到2-氯噻唑-5-甲酸(1.64g,0.01mol)和N,N-二甲基甲酰胺(1滴)的二氯甲烷(10mL)悬浮溶液中,并在室温下搅拌过夜。真空蒸发反应混合物,然后通过用另外的二氯甲烷(100mL)共沸混合物两次除去微量的草酰氯,以产生化合物(2-4)(1.82g,100%)。
在0℃下,将溶于二氯甲烷(20mL)的化合物(2-4)(0.91g,5mmol)加入2-氯-6甲基苯胺(0.79g,5mmol)和三乙胺(1.01g,10mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中,并在室温下搅拌过夜。将产生的溶液在二氯甲烷和水之间分配。有机层经无水硫酸钠干燥,并浓缩以产生化合物(2-5)(0.86g,60%)。
化合物(8)(200mg,0.3mmol)和化合物(2-5)(129mg,0.45mmol)溶于N,N-二异丙基乙胺(2mL),并加热至110℃过夜。然后真空蒸发反应混合物,并通过制备性薄层色谱法产生白色或淡黄色化合物(2)(68.6mg,24.9%)。
LC/MS m/z:(M+2)/2458.6100%(纯度)。
1H NMR(CDCl3)δ:7.687(s,1H),7.291~7.258(m,2H),7.157~7.102(m,4H),6.909(s,1H),6.821~6.761(m,2H),6.666~6.651(d,1H,J=7.5Hz),6.528(s,1H),6.401(s,1H),6.277(s,1H),5.972(s,1H),4.240~4.196(m,2H),3.823~3.805(m,2H),3.746(s,3H),3.637~3.578(m,5H),3.386~3.363(m,1H),3.300~3.256(m,1H),3.197~3.158(m,1H),3.114(s,3H),3.034~2.767(m,6H),2.591~2.545(m,4H),2.400~2.361(m,1H),2.275(s,3H),2.237(s,2H),2.197~2.153(m,2H),2.010(s,2H)。
实施例4:化合物(3)的合成
将2-羟基-4-甲基噻唑-5-甲酸(10g,62.9mmol)溶于三氯氧磷(50ml)。回流加热反应混合物过夜。然后真空蒸发反应混合物,以产生化合物(3-2),其可直接用于下一步反应而不必另外的纯化。
在0℃下,在30分钟内向3-甲氧基苯胺(9.3g,75.5mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液逐滴加入于二氯甲烷(50mL)中的化合物(3-2),然后将反应混合物加热至室温过夜。用二氯甲烷(250mL)稀释反应混合物。有机相用水和盐水洗涤,经无水硫酸钠干燥并过滤。蒸发后,残留物经硅胶柱色谱纯化以产生化合物(3-3)(18.5g,89.07%)。
将化合物(8)(200mg,0.3mmol)和化合物(3-3)(129mg,0.45mmol)溶于N,N-二异丙基乙胺(2mL),并加热至110℃过夜。然后真空蒸发反应混合物,并通过制备性薄层色谱法纯化,产生白色或淡黄色化合物(3)(80.9mg,24.9%)。
LC/MS m/z:M+1912.5100%(纯度)。
1H NMR(CDCl3)δ:9.320(s,1H),7.184~7.247(m,2H),7.099~7.148(m,1H),7.042~7.142(m,1H),6.963~7.001(m,1H),6.794~6.851(m,1H),6.687~6.783(m,2H),6.540~6.611(m,1H),6.431~6.352(m,1H),6.182~6.242(m,1H),5.888~5.959(m,1H),4.092~4.183(m,2H),3.770~3.874(m,2H),3.729(s,3H),3.672(s,3H),3.612~3.653(m,2H),3.524(s,3H),3.240~3.460(m,3H),3.134(s,3H),2.982~3.066(m,1H),2.863~2.964(m,2H),2.829~2.933(m,4H),2.500(s,3H),2.449(s,3H),2.185(s,3H),2.041~2.123(m,2H)。
实施例5:化合物(4)的合成
在0℃下,将草酰氯(2.52g,0.02mol)的二氯甲烷(10mL)溶液逐滴加到5-氯吡嗪-2-甲酸(1.56g,0.01mol)和N,N-二甲基甲酰胺(1滴)的二氯甲烷(100mL)悬浮溶液中。在室温下搅拌过夜后,真空蒸发反应混合物,然后通过用另外的二氯甲烷(100mL)共沸混合物两次除去微量的草酰氯,以产生化合物(4-2)(1.77g,100%)。
在0℃下,在30分钟内,将化合物(4-2)(0.89g,5mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液加入3-甲氧基苯胺(0.62g,5mmol)和三乙胺(1.01g,10mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中,并加热反应混合物至室温过夜。用二氯甲烷(100ml)稀释反应混合物。有机相用水和盐水洗涤,经无水硫酸钠干燥并过滤。蒸发后,残留物经硅胶柱色谱纯化以产生化合物(4-3)(1.1g,80.0%)。
在氮气下,向烧瓶中加入于叔戊醇(5.0mL)中的Pd2(dba)3(2.4mg,0.005当量,相当于0.01当量的钯)和Bippyphos(5.1mg,0.02当量,相当于配体和钯的摩尔比为2∶1),然后加入水(0.10mL)以保持均相反应。搅拌暗紫色反应混合物5-15分钟后,加入氢氧化钾(87-89%的颗粒状物)(47.8mg,1.5当量)和化合物(8)(399.4mg,6.00mmol,1.2当量),接着加入化合物(4-3)(0.13g,0.50mmol,1.0当量)。产生的反应混合物变成橙色,并加热至100℃。搅拌3小时后,反应冷却至室温,并用甲基叔丁基醚(100mL)和水(10mL)稀释。有机层经无水硫酸钠干燥,并真空浓缩,通过制备性薄层色谱法产生白色或灰白色化合物(4)(55.7mg,12.5%)。
LC/MS m/z:(M+2)/2447.2100%(纯度)。
1H NMR(CDCl3)δ:9.320(s,1H),8.835~8.842(m,1H),7.595~7.605(m,1H),7.540~7.548(m,1H),7.330~7.396(m,1H),7.207~7.258(m,2H),7.112~7.185(m,2H),6.781~6.549(m,2H),6.628~6.728(m,3H),6.419~6.507(m,2H),6.251~6.315(m,1H),4.194~4.320(m,2H),3.770~3.794(m,2H),3.833(s,3H),3.753(s,3H),3.562~3.603(m,2H),3.612(s,3H),3.180~3.420(m,3H),3.134(s,3H),2.942~3.026(m,1H),2.823~2.924(m,2H),2.799~2.893(m,4H),2.587(s,3H),2.202(s,3H),2.144~2.210(m,2H)。
实施例6:化合物(5)的合成
在0℃下,将草酰氯(2.52g,0.02mol)的二氯甲烷(10mL)溶液逐滴加到5-氯吡嗪-2-甲酸(1.56g,0.01mol)和N,N-二甲基甲酰胺(1滴)的二氯甲烷(100mL)悬浮溶液中。在室温下搅拌过夜后,真空蒸发反应混合物,然后通过用另外的二氯甲烷(100mL)共沸混合物两次除去微量的草酰氯,以产生化合物(5-2)(1.77g,100%)。
在0℃下,在30分钟内,将化合物(5-2)(0.89g,5mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液加入吗啉(0.44g,5mmol)和三乙胺(1.01g,10mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中,然后加热反应混合物至室温过夜。用二氯甲烷(100ml)稀释反应混合物。有机相用水和盐水洗涤,经无水硫酸钠干燥并过滤。蒸发后,残留物经硅胶柱色谱纯化以产生化合物(5-3)(0.83g,73.0%)。
在氮气下,向烧瓶中加入于叔戊醇(5.0mL)中的Pd2(dba)3(2.4mg,0.005当量,相当于0.01当量的钯)和Bippyphos(5.1mg,0.02当量,相当于配体和钯的摩尔比为2∶1),然后加入水(0.10mL)以保持均相反应。搅拌暗紫色反应混合物5-15分钟后,加入氢氧化钾(87-89%的颗粒状物)(47.8mg,1.5当量)和化合物(8)(399.4mg,6.00mmol,1.2当量),接着加入化合物(5-3)(0.13g,0.50mmol,1.0当量)。产生的反应混合物变成橙色,然后加热至100℃。搅拌3小时后,反应冷却至室温,并用甲基叔丁基醚(100mL)和水(10mL)稀释。有机层经无水硫酸钠干燥,并真空浓缩,通过制备性薄层色谱法产生淡黄色化合物(5)(42.9mg,10.0%)。
LC/MS m/z:M+1858.3100%(纯度)。
1H NMR(CDCl3)δ:8.440~8.450(m,1H),7.620~7.630(m,1H),7.300~7.330(m,1H),7.120~7.140(m,1H),6.780~6.830(m,2H),6.650~6.670(m,1H),6.540~7.550(m,1H),6.389~6.460(m,1H),6.249~6.303(m,1H),5.938~6.046(m,1H),4.196~4.302(m,2H),3.820~3.834(m,2H),3.500~3.800(m,4H),3.752(s,3H),3.602~3.643(m,2H),3.609(s,3H),3.180~3.410(m,3H),3.128(s,3H),2.982~3.066(m,1H),2.863~2.964(m,2H),2.759~2.883(m,4H),2.400~2.610(m,4H),2.584(s,3H),2.254(s,3H),2.114~2.198(m,2H)。
实施例7:化合物(6)的合成
将6-氯-烟酸(5.0g,31.8mmol)于二氯亚砜(20ml)中的混合物回流加热过夜。真空蒸发反应混合物,以产生化合物(6-2),其可直接用于下一步反应而不必另外的纯化。
在0℃下,在30分钟内,将化合物(6-2)的二氯甲烷(30mL)溶液逐滴加入3-甲氧基苯胺(5.5g,47.7mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中,并加热反应混合物至室温,搅拌过夜。用二氯甲烷(250ml)稀释反应混合物。有机相用水和盐水洗涤,经无水硫酸钠干燥并过滤。蒸发后,残留物经硅胶柱色谱纯化以产生化合物(6-3)(7.5g,90.0%)。
化合物(8)(200mg,0.3mmol)和化合物(6-3)(118mg,0.45mmol)溶于N,N-二异丙基乙胺(2mL),并加热至110℃过夜。然后真空蒸发反应混合物,并通过制备性薄层色谱法纯化,产生白色或灰白色化合物(6)(13.0mg,4.9%)。
LC/MS m/z:M+1892.4100%(纯度)。
1H NMR(CDCl3)δ:8.485~8.584(m,1H),7.632~7.650(m,1H),7.540~7.550(m,1H),7.331~7.345(m,1H),7.231~7.253(m,1H),7.146~7.178(m,1H),7.045~7.060(m,1H),6.950~7.060(m,1H),6.739~6.755(m,1H),6.696~6.712(m,1H),6.596~6.616(m,2H),6.460~6.465(m,1H),6.372(brs,1H),6.264~6.282(m,1H),6.210~6.215(m,1H),5.922~6.001(m,2H),4.110~4.144(m,2H),3.770~3.794(m,2H),3.758(s,3H),3.682(s,3H),3.562~3.603(m,2H),3.539(s,3H),3.140~3.370(m,3H),3.054(s,3H),2.942~3.026(m,1H),2.823~2.924(m,2H),2.699~2.823(m,4H),2.502(s,3H),2.178(s,3H),2.054~2.138(m,2H)。
实施例8:化合物(7)的合成
将6-氯-烟酸(5.0g,31.8mmol)于二氯亚砜(20ml)中的混合物加热回流过夜。真空蒸发反应混合物,以产生化合物(7-2),其可直接用于下一步反应而不必另外的纯化。
在0℃下,在30分钟内,将化合物(7-2)的二氯甲烷(30mL)溶液逐滴加入4-氟苯胺(5.3g,47.7mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中,加热反应混合物至室温,并搅拌过夜。用二氯甲烷(250ml)稀释反应混合物。有机相用水和盐水洗涤,经无水硫酸钠干燥并过滤。蒸发后,残留物经硅胶柱色谱纯化以产生化合物(7-3)(7.0g,88.05%)。
化合物(8)(200mg,0.3mmol)和化合物(7-3)(118mg,0.45mmol)溶于N,N-二异丙基乙胺(2mL),并加热至110℃。然后真空蒸发反应混合物,并通过制备性薄层色谱法纯化,产生白色或灰白色化合物(7)(10.3mg,3.9%)。
LC/MS m/z:M+1880.4100%(纯度)。
1H NMR(CDCl3)δ:8.554~8.564(m,1H),7.966(s,1H),7.690~7.712(m,1H),7.509~7.537(m,2H),7.283~7.303(m,1H),7.098~7.112(m,1H),6.928~7.010(m,2H),6.759~6.807(m,2H),6.640~6.659(m,1H),6.530~6.480(m,1H),6.430(brs,1H),6.270~6.310(m,2H),5.980~6.050(m,2H),4.178~4.210(m,2H),3.810~3.834(m,2H),3.741(s,3H),3.602~3.643(m,2H),3.609(s,3H),3.180~3.410(m,3H),3.119(s,3H),2.982~3.066(m,1H),2.863~2.964(m,2H),2.739~2.863(m,4H),2.502(s,3H),2.236(s,3H),2.094~2.178(m,2H)。
实施例9:本发明小檗胺衍生物抗白血病活性测定
(1)实验材料
白血病细胞株:人K562白血病细胞系(慢性髓系白血病,CML)、K562/adr(耐药慢性髓系白血病,CML)、NB4(急性早幼粒细胞白血病,AML)、Kasumi-1(急性髓系白血病M2型,AML-M2)、Jurkat(急性淋巴细胞白血病,ALL)、H9(急性淋巴细胞白血病,ALL)。
试剂:小檗胺(BBM)标准品购自四川什邡普康生化有限公司,
本发明小檗胺衍生物:
12-O-(3-(5-(2-氯-5-甲氧基苯甲酰氨基)-嘧啶-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(1)),
12-O-(3-(5-(2-氯-6-甲基苯氨甲酰基)-噻唑-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(2)),
12-O-(3-(5-(3-甲氧基苯氨甲酰基)-4-甲基噻唑-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(3)),
12-O-(3-(5-(3-甲氧基苯氨甲酰基)-吡嗪-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(4)),
12-O-(3-(5-(吗啉-4-甲酰基)-吡嗪-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(5)),
12-O-(3-(5-(3-甲氧基苯氨甲酰基)-吡啶-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(6)),
12-O-(3-(5-(4-氟苯氨甲酰基)-吡啶-2-氨基)-丙基)-小檗胺(化合物(7))。
主要仪器:细胞培养箱,酶标仪
(2)实验方法
取生长良好的白血病细胞6000个,接种到96孔细胞培养板孔内。培养液为含10%胎牛血清的1640细胞培养液。加入不同浓度的小檗胺类化合物,混匀后,置于二氧化碳(5%CO2)细胞培养箱37℃培养72小时。然后用MTT法测定活细胞浓度。在本实验中对照组(不加化合物处理)细胞活力设为100%,并计算出化合物作用后细胞活力(%)和72小时白血病细胞半数生长抑制浓度(72小时IC50值)。
(3)实验结果
实验结果见表1。表1显示本发明的小檗胺衍生物能诱导人慢性髓系白血病、急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病细胞死亡和抑制这些白血病细胞生长,与小檗胺本身比较,本发明小檗胺衍生物抗白血病细胞活性明显增强,其中本发明小檗胺衍生物(3)抗人K562白血病细胞系(慢性髓系白血病,CML)和人K562白血病细胞系(慢性髓系白血病,CML)活性提高8倍以上;化合物(4)抗Jurkat急性淋巴细胞白血病活性提高13倍以上。
实施例10:本发明小檗胺衍生物抗人多发性骨髓瘤和淋巴瘤细胞活性测定
(1)实验材料
骨髓瘤和淋巴瘤细胞株:RPMI8226(多发性骨髓瘤)。
试剂:同实施例9
主要仪器:细胞培养箱,酶标仪。
(2)实验方法
取生长良好的上述肿瘤细胞6000个,接种到96孔细胞培养板孔内。培养液为含10%胎牛血清的1640细胞培养液。加入不同浓度的小檗胺类化合物,混匀后,置于二氧化碳(5%CO2)细胞培养箱37℃培养72小时。然后用MTT法测定活细胞浓度。在本实验中对照组(不加化合物处理)细胞活力设为100%,并计算出化合物作用后细胞活力(%)和72小时白血病细胞半数生长抑制浓度(72小时IC50值)。
(3)实验结果
实验结果见表1。表1显示本发明的小檗胺衍生物能诱导人骨髓瘤和淋巴瘤细胞死亡和抑制这些肿瘤细胞生长,与小檗胺本身比较,本发明小檗胺衍生物抗骨髓瘤和淋巴瘤细胞活性明显增强,其中本发明小檗胺衍生物(4)抗RPMI8226(多发性骨髓瘤)活性提高117倍以上。
表1:小檗胺衍生物对白血病,淋巴瘤和多发性骨髓瘤细胞半数生长抑制浓度测定(72小时,IC50值)
表1
实施例11:本发明小檗胺衍生物抗人实体瘤作用测定
(1)实验材料
人实体瘤细胞株:HepG2(人肝细胞肝癌,HCC)、A549(人肺癌)、MCF-7(乳腺癌)、PANC-1(胰腺癌)、PC-3(***癌)、MG63(骨肉瘤)、AGS(胃癌)、Huh7(人肝癌细胞)、Becap37(人乳腺癌细胞)、Hela(人***细胞)、RKO(人结肠腺癌细胞)、SW620(人结肠腺癌细胞)、SW480(人结肠癌细胞)、MGC803(人胃癌细胞)。
试剂:同实施例9
主要仪器:细胞培养箱,酶标仪。
(2)实验方法
取生长良好的人实体瘤细胞4000个,接种到96孔细胞培养板孔内。培养液为含10%胎牛血清的DMEM高糖细胞培养液。置二氧化碳(5%CO2)细胞培养箱37℃培养24小时,然后,加入不同浓度的小檗胺类化合物,混匀后,继续置于二氧化碳(5%CO2)细胞培养箱37℃培养72小时。然后用MTT法测定活细胞浓度,并计算出药物作用后细胞活力(%)。在本实验中对照组(不加化合物处理)细胞活力设为100%。
(3)实验结果
实验结果见表2。表2显示本发明的小檗胺衍生物能诱导人实体瘤细胞死亡和抑制这些肿瘤细胞生长,与小檗胺本身比较,本发明小檗胺衍生物抗实体瘤细胞活性明显增强,其中本发明小檗胺衍生物(4)抗MCF-7(乳腺癌)活性提高26倍以上,抗HepG2(人肝细胞肝癌,HCC)活性提高近9倍,抗MGC803(人胃癌细胞)活性提高8倍以上,抗SW480(人结肠癌细胞)活性提高6倍以上。本发明小檗胺衍生物(2)抗MG63(骨肉瘤)活性提高12倍以上。本发明小檗胺衍生物(6)抗A549(人肺癌)活性提高14倍以上。
表2小檗胺衍生物对人实体瘤细胞半数生长抑制浓度测定(72小时,IC50值)
表2(续)
Claims (16)
1.通式(I)的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐:
其中,
n=3-5;
R1选自H或C1-C6烷基;
R2选自氯、氟、甲基或甲氧基取代的苯基胺基甲酰基、苯基羰基氨基或吗啉-4-基羰基;
X选自N、S或CH;
Y选自CH、N或不存在。
2.根据权利要求1任一项的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐,其中R1为H或C1-C3烷基。
3.根据权利要求1任一项的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐,其中R1为H或甲基。
4.根据权利要求1任一项的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐,其中R1为氢。
5.根据权利要求1-4任一项的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐,其中X=N,Y=CH。
6.根据权利要求1-4任一项的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐,其中X=S,Y=不存在。
7.根据权利要求1-4任一项的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐,其中X=CH,Y=N。
8.根据权利要求1-4任一项的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐,其中X=CH,Y=CH。
9.根据权利要求1的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐,选自下述化合物:
10.一种制备式I化合物的方法,
包括将式(III)化合物与式(II)化合物进行氨基化反应,生成式(I)化合物,其中,化合物(I)、(II)、(11I)中的n、X、Y、R1和R2如权利要求1-8中任一项所定义。
11.根据权利要求10的方法,其中,所述式(II)化合物由式(IV)化合物与式(V)化合物或式(IV’)化合物与式(V’)化合物通过亲核取代反应来制备
其中,化合物(II)、(IV)和(IV’)中的X、Y、R1和R2如权利要求1-8中任一项所定义。
12.根据权利要求11的方法,其中,所述式(V)化合物为氯代或氟代苯胺、甲氧基取代的苯胺或吗啉,式(V’)化合物为氯代、甲氧基取代的苯甲酰氯。
13.根据权利要求11的方法,其中,所述式(IV)化合物由羧酸化合物(VI)与式(VII)化合物通过羧羟基的卤置换反应反应来制备
其中,化合物(VI)和(IV)中的X、Y和R1如权利要求1-8中任一项所定义。
14.根据权利要求13的方法,其中,所述式(VII)卤代试剂为三氯氧磷(POCl3)、氯化亚砜(SOCl2)或草酰氯((COCl)2)。
15.一种药物组合物,其包含权利要求1-9中任一项的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐和任选的药学上可以接受的赋形剂。
16.权利要求1-9中的任一项的小檗胺衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途,其中所述肿瘤选自白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、肝癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、骨肉瘤、***、结肠癌、结肠腺癌和***癌。
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