CZ20013269A3 - Bakterie mléčného kvaąení - Google Patents
Bakterie mléčného kvaąení Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20013269A3 CZ20013269A3 CZ20013269A CZ20013269A CZ20013269A3 CZ 20013269 A3 CZ20013269 A3 CZ 20013269A3 CZ 20013269 A CZ20013269 A CZ 20013269A CZ 20013269 A CZ20013269 A CZ 20013269A CZ 20013269 A3 CZ20013269 A3 CZ 20013269A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- lactobacillus
- cells
- strain
- milk
- bacteria
- Prior art date
Links
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims description 45
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 36
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 title claims description 18
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 title claims description 18
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims abstract description 37
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims abstract description 37
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 claims abstract description 32
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims abstract description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 25
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 14
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 9
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 8
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 claims description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 7
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 claims description 5
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 claims description 5
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims description 5
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 claims description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 2
- 238000003304 gavage Methods 0.000 claims description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 2
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 claims 2
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 claims 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 241001468155 Lactobacillaceae Species 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 78
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 17
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 14
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 14
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 13
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 13
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 11
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 9
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 8
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 6
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 6
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 6
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 6
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 6
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 4
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 3
- 206010048832 Colon adenoma Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 3
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 3
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 3
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- 241000617996 Human rotavirus Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 2
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 108700010850 rotavirus proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 244000223760 Cinnamomum zeylanicum Species 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000224432 Entamoeba histolytica Species 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 1
- 101710168537 High mobility group protein B1 Proteins 0.000 description 1
- 102100028999 High mobility group protein HMGI-C Human genes 0.000 description 1
- 101000986379 Homo sapiens High mobility group protein HMGI-C Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000606999 Plesiomonas shigelloides Species 0.000 description 1
- 241000186429 Propionibacterium Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 240000003085 Quassia amara Species 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241001607429 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium str. SL1344 Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 244000290333 Vanilla fragrans Species 0.000 description 1
- 235000009499 Vanilla fragrans Nutrition 0.000 description 1
- 235000012036 Vanilla tahitensis Nutrition 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000001142 anti-diarrhea Effects 0.000 description 1
- 230000002953 anti-rotaviral effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 230000010065 bacterial adhesion Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000002082 fibula Anatomy 0.000 description 1
- 206010016766 flatulence Diseases 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 1
- 229960000308 fosfomycin Drugs 0.000 description 1
- YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N fosfomycin Chemical compound C[C@@H]1O[C@@H]1P(O)(O)=O YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012543 microbiological analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000897 modulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 210000004915 pus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229960005404 sulfamethoxazole Drugs 0.000 description 1
- JLKIGFTWXXRPMT-UHFFFAOYSA-N sulphamethoxazole Chemical compound O1C(C)=CC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1 JLKIGFTWXXRPMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N trimethoprim Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001082 trimethoprim Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 210000002438 upper gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
- A23G9/32—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G9/36—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
- A23G9/363—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
- A23C19/061—Addition of, or treatment with, microorganisms
- A23C19/062—Addition of, or treatment with, microorganisms using only lactic acid bacteria, e.g. pediococcus, leconostoc or bifidus sp., or propionic acid bacteria; Treatment with non-specified acidifying bacterial cultures
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/065—Microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/104—Fermentation of farinaceous cereal or cereal material; Addition of enzymes or microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C2270/00—Aspects relating to packaging
- A23C2270/05—Gelled or liquid milk product, e.g. yoghurt, cottage cheese or pudding being one of the separate layers of a multilayered soft or liquid food product
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/175—Rhamnosus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S426/00—Food or edible material: processes, compositions, and products
- Y10S426/807—Poultry or ruminant feed
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/853—Lactobacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Cereal-Derived Products (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Confectionery (AREA)
Description
Vynález se týká nového mikroorganismus rodu Lactobacillus, vhodného pro prevenci průjmu, vyvolaného pathogenními bakteriemi nebo rotaviry. Vynález se zvláště týká použití uvedeného mikroorganismu pro přípravu poživatelného nosiče a prostředku, který tento nosič obsahuje.
/
Dosavadní stav technůky
----- -—
Organismy, které produkují kyselinu mléčnou jako svou hlavní metabolickou složku, jsou již dlouhou dobu známé. Tyto bakterie se vyskytují v mléce, v živých nebo v rozkládajících se rostlinách a také ve střevech člověka i jiných živočichů. Tyto mikroorganismy se souhrnně označují jako bakterie mléčného kvašení a představují značně nehomogenní skupinu, která zahrnuje například rody Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium, Pediococcus a podobně.
Bakterie mléčného kvašení jsou využívány jako fermentační činidla pro konzervaci potravin při využití nízkého pH a působení fermentačních produktů, vytvářených v průběhu fermentace k inhibici růstu nežádoucích typů bakterií. K tomuto účelu se využívají bakterie mléčného kvašení pro výrobu nejrůznějšich potrávit, jako jsou sýry, jogurty a další fermentované výrobky z mléka.
V současné době se věnuje bakteriím mléčného kvašení zvýšená pozornost vzhledem k tomu, že bylo prokázáno, že • ·
po požiti mají některé kmeny těchto bakterií velmi cenné vlastnosti u člověka i u jiných živočichů. Zvláště specifické kmeny rodů Lactobacillus a Bifidobacterium, mají schopnost kolonizovat střevní sliznici a napomáhat tak udržování dobrého zdravotního stavu u člověka i u jiných živočichů.
V patentovém spisu EP 768 375 se popisují specifické kmeny rodu Bifidobacterium, které mohou být implantovány do střevní flóry a mohou lnout ke střevním buňkám. Tyto mikroorganismy mohou napomáhat modulaci imunitního systému a mohou kompetitivně bránit přilnutí pathogenních bakterií na střevní buňky, čímž mohou napomáhat udržení dobrého zdravotního stavu.
V posledních několika letech byl výzkum zaměřen na potenciální použití bakterií mléčného kvašení jako probiotických prostředků. Probiotické prostředky jsou životaschopné mikrobiální prostředky, které podporují zdravotní stav jednotlivce zachováváním přírodní střevní mikroflóry. Mikrobiální prostředky je možno uznat za probiotické prostředky při znalosti příslušných mikroorganismů a způsobů jejich účinku. Při podání těchto prostředků dochází k přilnutí bakterií na střevní sliznici, ke kolonizaci střevní sliznice těmito bakteriemi a tím i k zábraně přilnutí škodlivých mikroorganismů na tuto sliznici. Zásadním předpokladem 'pro působení probiotických bakterií je skutečnost, že se tyto bakterie musí dostat na střevní sliznici v životaschopné formě, takže nesmí dojít k jejich narušení v horní části zažívací soustavy, zvláště působením nízké hodnoty pH, která převažuje v žaludku.
• ·· · ·· ·· • · · · ··«·· • · · ♦ ··· · ······ · · ·· · · • · · ·· · · « ·· ··· ·· ····
V mezinárodní patentové přihlášce WO 97/00078 se popisuje specifický kmen Lactobacillus GG, ATCC 53103 jako probiotický prostředek. Uvedený mikroorganismu je zvláště možno použít při prevenci a léčení přecitlivělosti na různé potraviny tak, že se mikrobiální kmen podává společně s potravinou, která byla hydrolyzována pepsinem a/nebo trypsinem. Uváděný kmen Lactobacillus je schopen přilnout na střevní sliznici a kolonizovat ji, přičemž produkuje enzym proteázu, takže proteiny, obsažené v potravinách, jsou dále hydrolyzovány proteázami, vylučovanými specifickým kmenem Lactobacillus. Při uváděném postupu mohou být bílkoviny vstřebávány ve střevě, přičemž nevyvolávají již žádnou alergii.
Mimo to patentový spis EP 577903 uvádí použití bakterií mléčného kvašení, které mají schopnost nahradit Heliobacter pylori, který je uznávanou příčinou vzniku žaludečních vředů, takže při použití bakterií mléčného kvašení je možno bránit vzniku žaludečního vředu nebo léčit již vzniklé vředy, spojené s působením Heliobacter pylori.
V mezinárodní přihlášce WO 99/29833 se popisuje určitý kmen LMG P 17806, který obsahuje 3 plasmidy definovaného rozměru. Tento kmen se uvádí jako mikroorganismus, schopný chránit střevní buňky před invazí Salmonella typhimurium.
Je zřejmé, že vzhledem k cenným vlastnostem určitých kmenů bakterií mléčného kvašení by bylo žádoucí mít k dispozici další kmeny s příznivým účinkem na organismus člověka á/nebo jiných živočichů.
• ·
Vynález si klade za úkol navrhnout další bakteriální kmeny s novými vlastnostmi, které by byly příznivé pro člověka a/nebo jiné živočichy.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří nový mikroorganismus mléčeného kvašení, náležející do rodu Lactobacillus a schopný bránit kolonizaci střev pathogenními bakteriemi, vyvolávajícími průjmy a současně zabránit infekci střevních epitheliálních buněk rotaviry. Ve výhodném provedení je kmen Lactobacillus schopný přilnout ke střevní sliznici hostitele a kolonizovat ji.
Podle dalšího výhodného provedení mohou kmeny Lactobacillus růst v přítomnosti až 0,4 % žlučových solí, takže mohou snadno projít zažívací soustavou ve v podstatě účinném stavu.
Podle dalšího výhodného provedení se bakterie mléčného kvašení zvolí ze skupiny, tvořené Lactobacillus rhamnosus nebo Lactobacillus paracasei, s výhodou Lactobacillus paracasei a zvláště Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116.
Mikroorganismy podle vynálezu jsou grampozitivní, jsou negativní na katalázu, negativní na arginin a produkci NH3 z argininu a také na produkci oxidu uhličitého. Uvedené mikroorganismy produkují kyselinu L(+) mléčnou, jsou schopné růst v přítomnosti žlučových solí v koncentraci až 0,4 % a jsou schopné v podstatě zabránit infekci epitheliálních buněk rotaviry.
Nové mikroorganismy je možno použít pro přípravu celé řady poživatelných nosičů, jako je mléko, jogurt, tvaroh, fermentované mléko, výrobky na bázi fermentovaného mléka, výrobky na bázi fermentovaných obilovin nebo na bázi práškového mléka, výživy pro kojence a podobně, přičemž mikroorganismy mohou být obsaženy v nosiči v množství přibližně 105 cfu/g až 1011 cfu/g. Pro účely vynálezu znamená zkratka cfu „jednotky, vytvářející kolonie, tato hodnota je definována počtem bakteriálních buněk při počítání buněk na agarových plotnách.
Součást podstaty vynálezu tvoří rovněž potravinářský nebo farmaceutický výrobek, který obsahuje alespoň jeden kmen Lactobacillus se svrchu uvedenými vlastnostmi.
Při přípravě potravinářských prostředků podle vynálezu se uloží alespoň jeden kmen Lactobacillus podle vynálezu do vhodného nosiče v množství přibližně 105 cfu/g až 1011 cfu/g, s výhodou 106 cfu/g až 1O10 cfu/g a zvláště 107 cfu/g až 109 cfu/g.
V případě farmaceutického prostředku je možno tento prostředek připravit ve formě tablet, kapalných bakteriálních suspenzí, sušených doplňků pro perorální podání, vlhkých doplňků pro perorální podání, prostředků pro podání sondou v suchém nebo vlhkém stavu, přičemž množství kmene Lactobacillus v těchto prostředcích může být až 1012 cfu/g, s výhodou 107 až 10u cfu/g a zvláště 107 až 1O10 cfu/g.
Účinnost nového mikroorganismu na střevní sliznici samozřejmě závisí na jeho dávce. To znamená, že čím vyšší množství nového mikroorganismu se přivádí spolu s potravou nebo jako farmaceutický prostředek, tím vyššího ochranného a/nebo léčebného účinku mikroorganismu je možno dosáhnout. Vzhledem k tomu, že nové mikroorganismy nemají žádné škodlivé účinky pro člověka ani pro jiné živočichy a často jsou náhodně izolovány z kojenecké stolice zdravých kojenců ve vysokém množství, je možno tyto mikroorganismy použít i ve vysokém množství k zajištění kolonizace střevní sliznice těmito mikroorganismy.
Vynález bude dále osvětlen v souvislosti s přiloženými výkresy.
Přehled obrázků na výkresech
Na obr. 1 je znázorněno schéma vyšetření buněčné kultury na ochranné účinky bakteriálních kmenů proti rotavirům.
Na obr. 2 je znázorněno okyselení různých růstových prostředí působením L. casei CNCM 1-2116, označovaným STU.
Na obr. 3 je znázorněno přežívání kmene L. casei ST11 při teplotě 10 °C v průběhu 30 dnů.
Na obr. 4 je znázorněna indukce mRNA cytokinů IL-12 a IL-10 u myších buněk, odvozených od kostní dřeně po inkubaci těchto buněk se sériovým ředěním ST11.
• ·
Na obr. 5 je znázorněna diferenciace Th2, prokázána snížením produkce IL-4.
Na obr. 6 je znázorněno schéma výsledků pokusů na buněčné kultuře, v pokusu byly užity buňky STU, které byly sledovány na inhibici přilnutí pathogenních bakterií E. coli na epitheliální buňky.
Na obr. 7 jsou schématicky znázorněny výsledky pokusů na buněčné kultuře, v tomto případě byl supernatant kultury STU užit k inhibici přilnutí pathogenních bakterií E. coli na epitheliální buňky.
Na obr. 8 jsou schematicky znázorněny výsledky pokusu na buněčné kultuře, v tomto případě byly buňky STU z buněčné kultury použity ke sledování inhibice invaze Salmonella typhimurium do epitheliálních buněk.
Na obr. 9 jsou schematicky znázorněny výsledky pokusu v buněčné kultuře, při pokusu byl použit supernatant kultury STU k inhibici invaze Salmonella tiphimurium do epitheliální buněk.
V průběhu extensivních studií, které vedly ke zjištění bakteriálních kmenů podle vynálezu, došlo k vyšetření velké řady kojeneckých stolic a k izolaci různých bakteriálních kmenů z tohoto materiálu. Získané kmeny pak byly postupně sledovány na svou schopnost bránit infekci epitheliálních buněk rotaviry a pathogenními bakteriemi, o nichž je známo, že vyvolávají průjmová onemocnění.
• ·
Několik rodů bakterii, a to Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus bylo sériově vyšetřeno na inhibični vlastnosti. Zkoušky byly prováděny se třemi serotypy rotaviru, představujícími hlavní původce virových průjmových onemocněni u člověka, jde o serotypy Gl, G3 a G4, současně byly prováděny také zkoušky s pathogennimi kmeny E. coli a Salmonella typhimorium jako reprezentativními pathogennimi mikroorganismy, vyvolávajícími průjmová onemocnění.
Různé bakterie mléčného kvašení byly pěstovány ve vhodných živných prostředích, jako MRS, Hugo-Jago nebo M17 při teplotách 30 až 40 °C podle optimální růstové teploty pro jednotlivé organismy. Po dosažení stacionárního růstu byly bakterie izolovány odstředěním a uvedeny do suspenze ve fyziologickém roztoku chloridu sodného. Mezi různými zkouškami byly bakteriální buňky uloženy ve zmrazeném stavu při teplotě -20 °C.
Zkoušky na rotavirus
Zásobní vzorky rotaviru byly připraveny infekcí souvislých buněčných kultur. Rotavirus byl inkubován před infekcí. Buněčný materiál byl infikován 20 dávkami, jichž je zapotřebí pro infekci tkáňové kultury. Aby bylo možno stanovit ochranné účinky proti rotaviru, bylo použito dvou postupů. Při jednom postupu byly různé bakteriální kmeny podrobeny zkouškám na přímou interakci s rotavirem, kdežto při druhém postupu byly bakterie sledovány na svou interakci s buněčnými receptory pro rotavirus. Při prvním uvedeném postupu se suspenze bakterií uváděly do styku s různými kmeny rotavirů a vzorky byly inkubovány ve vhodném prostředí. Pak byla směs viru a bakterií nanesena • · · ♦ · · * · na souvislou buněčnou kulturu buněk nediferenciovaného lidského adenomu tlustého střeva HT-29 a kultura byla dále inkubována. Pak byla sledována replikace viru. Při druhém typu zkoušek byla bakteriální suspenze inkubována nejprve s buněčnou kulturou buněk nediferencivaného lidského adenomu tlustého střeva HT-29 a až potom byl přidán virus. Po další inkubaci byla opět sledována replikace viru. Replikaci rotaviru je možno snadno prokázat histoimunologickým barvením proteinů rotaviru v infikovaných buňkách. Inhibiční efekt na rotaviru byl průkazný v případě, že počet infikovaných buněk v buněčné kultuře, naočkované rotavirem a zkoumanou bakterií byl snížen o 90 % ve srovnání s buňkami, které byly naočkovány pouze rotavirem.
Z 260 různých původně izolovaných bakteriálních kmenů bylo možno prokázat pouze u devíti kmenů podstatnou inhibici replikace rotaviru. Bylo prokázáno, že všechny bakterie je možno zařadit do rodu Lactobacillus, subsp. rhamnosus nebo paracasei. Jeden z kmenů, který byl označen Lactobacillus casei STU, byl uložen v souladu s Budapešťskou úmluvou pod přístupovým číslem NCC 2461 (1-2116). Bylo prokázáno, že tento kmen je velmi účinný při prevenci infekce lidských buněk rotavirem. Mimo to tento kmen velmi dobře roste, jak je možno prokázat okyselením v různých prostředích. Uvedený kmen také dobře přežívá v průběhu skladování při nízkých teplotách přibližně 10 °C, takže je možno jej velmi dobře zařadit do potravinářských výrobků nebo farmaceutických prostředků, které mají být uloženy v chladničce.
• · »· ··♦ ·· ·· · · · ·* ·» · · ··· · · · 9 99
9999 9 9 9 9 99 99
9 9 9 9 9 99
999 9 99 999 99 9999
Zkoušky na antibakteriální vlastnosti
Aby bylo možno stanovit antibakteriální vlastnosti nových kmenů, byl podle jednoho postupu kmen Lactobacillus podle vynálezu podroben zkouškám na svou schopnost zabránit přilnutí pathogenních bakterii, vyvolávajících průjem ke střevním buňkám nebo zabránit průniku těchto bakterií do střevních buněk. K tomuto účelu byly střevní buňky uvedeny do styku s pathogenními bakteriemi a s kmeny Lactobacillus podle vynálezu a byla sledována míra adhese nebo invaze. Při druhém postupu byl supematant buněčné kultury kmenů Lactobacillus podle vynálezu přidáván spolu s pathogenními mikroorganismy ke střevním buňkám a byla sledována míra adheze nebo invaze pathogenního organismu. V průběhu pokusů bylo možno prokázat, že kmeny Lactobacillus i supernatant kultury tohoto kmene byly velmi účinné při prevenci adheze i invaze, což prokazuje, že metabolické látky, které jsou novými mikroorganismy vylučovány, mají patrně protiprůjmový účinek v případě invaze pathogenních bakterií.
Kromě svrchu uvedených zjištění bylo rovněž možno prokázat, že zcela neočekávaně uvedené kmeny mají také antialergické vlastnosti tím, že zřejmě ovlivňují syntézu různých mediátorů imunitního systému.
Obvykle se uznává, že humorální imunitní odpověď a alergické reakce jsou zprostředkovány buňkami CD4+T, které nesou fenotyp typu 2 (Th2). Buňky Th2 jsou charakterizovány produkcí velkého množtství interleukinu 4, IL-4, jde o cytokin, nezbytný pro sekreci IgE, což je • 4 44 · 4444 • «4 · 4 · · 4 4 44
4444 444 · 4 · 44
4 44 4 444
444 4 ·· 444 44 4444 hlavní skupina protilátek, které se účastní vzniku alergických reakcí.
Diferenciace buněk Th2 je nepříznivě ovlivňována IFN-γ, což je specifický cytokin, který je tvořen výlučně podskupinou Thl buněk CD4 + T. K indukci buněk Thl přitom dochází působením interleukinu 12, IL-12. Naproti tomu IL-10, jiný cytokin, má silný inhibiční účinek na proliferaci buněk Thl a pravděpodobně tedy hraje úlohu při potlačování reakce imunitního systému.
Souhrnně tedy mají jak IL-12, tak IL-10 silné modulační účinky na vývoj buněk CD4 + T tak, že ovlivňují vývoj podskupiny Thl. IL-12 je klíčovým řídícím cytokinem pro indukci diferenciace Thl a vyvolává inhibici tvorby Th2. Hlavní cestu pro inhibici buněk Th2 je tedy možno pozorovat ve stimulaci syntézy IL-12.
Je známo, že některé složky gramnegativních bakterií, například LPS indukují velké množství IL-12 u některých buněk, například makrofágů a dendritických buněk. Bylo také prokázáno, že gramnegativní bakterie mohou silně ovlivnit diferenciaci buněk CD4+ T směrem k fenotypu Thl.
Mikroorganismus STU, jako příklad kmenů Lactobacillus podle vynálezu, byl podroben zkouškám na svou potenciální úlohu při indukci cytokinů, účastnících se řízení diferenciace buněk CD+ T. Zvláště byl sledován účinek STU na fenotyp Th2 u buněk CD4+ T v průběhu jejich diferenciace.
4 ♦ · 4 4444 • · « · 4 · · 4 4 44
4444 444 444»4
4 444444
444 φ 44 444 44····
Schopnost STU indukovat syntézu kódové mRNA pro uvedené dva řídicí cytokiny u myších buněk, odvozených od kostní dřeně, byla srovnávána se schopností 4 jiných kmenů Lactobacillus a s kontrolním kmenem gramnegativní bakterie E. coli K12. Množství mRNA bylo, měřeno semikvantitativně pomocí RT-PCR po 6 hodinách inkubace buněk se sériovým ředěním bakterii v množství 109 až 107 cfu/ml.
Přestože všechny kmeny Lactobacillus byly schopné indukovat transkripci IL-12 mRNA do určitého stupně, kmen STU vyvolává nej silnější indukci vzhledem k tomu, že bylo možno prokázat silný PCR signál i při nejnižší dávce těchto bakterií. Ve skutečnosti byla schopnost ST11 indukovat transkripci IL-12 mRNA tak silná jako uvedená schopnost v případě E. coli. Indukce pro IL-10 mRNA byla obecně slabší než pro IL-12 mRNA vzhledem k tomu, že pouze při vyšší dávce bakterií bylo možno prokázat signál. Platí však, že STU je kmenem, vyvolávajícím nej silnější indukci IL-10 mRNA ve srovnání s ostatními kmeny bakterií mléčného kvašení a s kontrolním kmenem E. coli.
Je tedy možno kmen STU považovat za kmen, který vyvolává účinnou indukci cytokinů, řídících imunitní systém a účastnících se diferenciace buněk CD4+ T. Vzhledem k silné indukci IL-12 by tento kmen mohl vyvolávat inhibici odpovědi Th2 a vzhledem ke své měřitelné indukci IL-10 by uvedený kmen mohl bránit zánětlivé odpovědi.
Kromě svrchu uvedených zjištění bylo také zkoumáno, zda má kmen ST11 inhibiční účinek na buňky CD4+ T v • « ·· · ·· ·· ♦ · 9 9 9 99 ··*· «······ 9 9 · 9 9 9 • · · · ♦ · · · ··· · ♦· ··· «· ···· průběhu diferenciace Th2 nebo zda má kladný účinek na funkce Thl. Byl použit běžně užívaný systém pro zkoušky na diferenciaci buněk v kultuře, v němž byly prekurzorové buňky CD4 + T polyklonálně aktivovány a modulovány tak, aby došlo k diferenciaci Thl nebo Th2. Tyto zkoušky byly prováděny v závislosti na přídatných podnětech v živném prostředí kultury. Diferenciace Thl/Th2 byla indukována v průběhu prvních sedmi dnů primární kultury, pak byly buňky znovu stimulovány dva dny v sekundární kultuře, obsahující pouze živné prostředí, načež byly stanoveny specifické fenotypy Thl nebo Th2 měřením typu produkovaného cytokinů v supernatantu (IFN-γ nebo IL-4).
Je známo, že prekurzorové buňky CD4+ T myší kmene BABL/c se přednostně diferencují na fenotyp Th2 (v supernatantu sekundární kultury je možno prokázat vysoké množství IL-4 a malé množství IFN-γ) po aktivaci za neutrálních podmínek v přítomnosti samotného živného prostředí v primární kultuře. Tento fenotyp mohl být zcela zaměněn na fenotyp Thl (vysoké množství IFN-γ, nízké množství IL-4) po přidání blokující monoklonální protilátky proti IL-4 v primární kultuře.
Aby bylo možno prokázat potenciální úlohu kmene STU při inhibici Th2, byl aktivován čištěný prekurzor buněk CD4+ T myší kmene BALB/c v přítomnosti buněk z kostní dřeně jako přídatných buněk v průběhu primární kultury. Tyto buňky byly společně pěstovány buď v samotném živném prostředí nebo v přítomnosti 1 mg/ml LPS nebo v přítomnosti 108 cfu/ml kmene STU nebo v přítomnosti 108 cfu/ml jiného kmene Lactobacillus. Po uvedené době byly buňky promyty a buňky CD4+ T byly znovu čištěny a restimulovány v sekundární kultuře pouze v živném prostředí. Po dvou dnech byly měřeny cytokiny, produkované diferenciovanými buňkami CD4 + T. Jak bylo možno očekávat, měly buňky, diferenciované pouze v přítomnosti živného prostředí převažující fenotyp Th2. Přidáním ST11 k primární kultuře silně pozměnilo tuto diferenciaci ve smyslu Th2, jak bylo možno prokázat osminásobným poklesem produkce IL-4. Tato inhibice měla podobný rozsah jako inhibice, pozorovaná u buněk, k jejichž diferenciaci došlo v přítomnosti LPS. Na druhé straně jiné kmeny Lactobacillus neměly žádný měřitelný vliv na množství IL-4. Je zajímavé, že po přidání ST11 k primární kultuře, nedošlo k vzestupu koncentrace IFN-γ.
Je tedy možno shrnout, že kmen ST11 specificky snižuje produkci IL-4 buňkami CD4+ T při jejich diferenciaci ve smyslu Th2, avšak prokazatelně nesnižuje sekreci IFN-γ. Skutečnost, že STU nezvyšuje produkci IFN-γ, může být způsobena schopností tohoto kmene indukovat IL-10 s tím důsledkem, že může být zachována jen nízká zánětlivá reakce přes účinnost proti Th2.
Je tedy možno prokázat, že kmen STU je kmen Lactobacillus, který potlačuje Th2, takže je tento kmen možno velmi dobře využít jako bakterii s antialergickým a probiotickým účinkem.
Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.
• ·
Příklady provedení vynálezu
Prostředí a roztoky:
MRS (Difco)
Hugo-Jago (Trypton Difco 30 g/1, extrakt z kvasnic Difco 10 g/1, laktóza Difco 5 g/1, dihydrogenfosforečnan draselný 5 g/1, extrakt z hovězího masa Difco 2 g/1, agar Difco 2 g/1)
M17 (Difco)
M199 (Seromed)
Ringerův roztok (Oxoid)
PBS (NaCl 8 g/1, KC1 0,2 g/1, Na2HPO4 1,15 g/1, KH2PO4 0,2 g/1) bujón s tryptózou a fosfátem (Flow) roztok trypsinu a EDTA (Seromed)
Lidský rotavirus Wa (serotyp Gl) a opičí rotavirus SA-11 (serotyp G3) byly získány od P.A. Offit, Children's Hospital of Philadelphia, U.S.A. Virus DS-lxRRV byl získán od A. Kapikian, NIH Bethesda U.S.A. Lidský rotavirus Hochi, serotyp 4, byl získán od P. Bachmann, University of Munich, SRN. E. coli DAEC C 1845 byl získán od Washington University, Seattle a E. coli JPN15 byl získán od Center for Vaccine Development of the University of Maryland, USA. Kmen Salmonella typhimurium SL1344 byl získán z Department of microbiology, Stanford University, CA, USA).
Příklad 1
Izolace bakterií mléčného kvašení ze stolice novorozenců
Čerstvé stolice byly odebrány z plen 16 zdravých novorozenců ve stáří 15 až 27 dnů. Vždy 1 g čerstvé
| 9 99 | 9 9 | 99 9 9 | 9 99 99 «9 9999 | |
| 16 | 9 | 9 9 | 9 9 | 9 9 9 9 |
| 9 9*9 | 9 9 9 9 «9 | 9 9 9 9 999 99 9999 |
stolice byl přepraven do laboratoře za anaerobních podmínek a v průběhu 2 hodin byla provedena mikrobiologická analýza sériovým ředěním v Ringerově roztoku a nanesením na plotny se selektivním živným prostředím. Pro izolaci bakterií mléčného kvašení byl použit agar MRS s antibiotiky (fosfomycin 80 pg/ml, sulfamethoxazol 93 pg/ml, trimethoprim 5 pg/ml) a plotny byly inkubovány 48 hodin při teplotě 37 °C. Kolonie byly náhodným způsobem izolovány a čištěny. U izolovaných kolonií byla provedena fyziologická a genetická charakteristika.
Příklad 2
Zkoušky kmenů v buněčné kultuře na účinnost proti rotaviru
Několik bakteriálních rodů Lactobacillus, Lsctococcus, Streptococcus bylo podrobeno zkouškám na účinnost proti rotaviru v buněčné kultuře, v níž byl proveden test na inhibici. Rod Lactococcus byl představován kmenem Lc. lactis, a to Lc. lactis subsp. lactis a cremoris. Zkouškám bylo podrobeno celkem 30 kmenů. Z rodu Streptococcus byl použit S.thermophilus s celkem 45 kmeny. Rody Leuconostoc a Propionibacterium byly zastoupeny šesti kmeny, kdežto Enterococcus a Staphylococcus byly zastoupeny celkem 17 kmeny.
Celkem bylo podrobeno zkouškám na inhibiční účinnost proti rotaviru 260 bakteriálních kmenů.
Postup 1:
μΐ bakteriální suspenze s průměrným obsahem
| • * | ·· · | 99 | ||||
| ·· » | 9 | 9 | 99 | 9 | • | • · |
| • · · | • | 9 | • | • | • | |
| • ···· | • « | 9 | 9 | • · | • | • |
| • · | 9 | 9 | 9 | • | • | • |
| 99 | 999 | <·· | ···· |
3x 106 bakterií bylo smíseno se 70 μΐ prostředí M199, doplněného 10 % bujónu s tryptózou a fosfátem (Flow) a 5 % roztoku trypsinu a EDTA (Seromed) v případě buněk HT-29 bylo použito ředění 1:4, mimo to bylo přidáno 100 μΐ viru v prostředí M199 s doplňky. Směs bakterií a viru byla inkubována 1 hodinu při teplotě 4 °C a 1 hodinu při teplotě 37 °C. Buňky nediferenciovaného lidského adenomu tlustého střeva HT-29, rostoucí v souvislé vrstvě na mikrotitrační plotně s 96 vyhloubeními, byly 3x promyty fyziologickým roztokem chloridu sodného s fosfátovým pufrem o pH 7,2. Pak byla na buňky nanesena směs viru a bakterií a mikrotitrační plotny byly inkubovány 18 hodin v inkubátoru s atmosférou C02 (Heraeus). Replikace viru byla prokazována dále uvedeným způsobem.
Postup 2:
μΐ svrchu uvedené bakteriální suspenze bylo smíseno se 70 μΐ prostředí M199, doplněného 10 % bujónu s tryptózou a fosfátem (Flow) a 5 % roztoku trypsinu a EDTA (Seromed), v případě buněk HT-29 bylo užito ředění 1:4. Materiál byl přímo nanesen na vrstvu buněk na mikrotitrační plotně. Po inkubaci 1 hodinu při teplotě 100 μΐ bylo k buňkám na mikrotitrační plotě přidáno 100 μΐ viru v prostředí M199, doplněném svrchu uvedeným způsobem. Inkubace pokračovala 18 hodin v inkubátoru s atmosférou CO2 (Heraeus). Replikace viru pak byla stanovena dále uvedeným způsobem.
Replikace rotaviru byla prokazována histoimunologickým barvením proteinů rotaviru v infikovaných buňkách, jak bude dále popsáno.
··
Jeden den po infekci bylo živné prostředí slito z mikrotitračních ploten a buněčný materiál byl fixován 10 minut absolutním ethanolem. Ethanol byl slit a plotny byly 3krát promyty pufrem PBS. Pak bylo do každého vyhloubení přidáno 50 μΐ séra proti rotaviru (převážně proti proteinu VP6) , produkovaného králíky (získanými z ISREC University of Lausanne) po zředění v poměru 1:2000 v PBS a vzniklá směs byla inkubována 1 hodinu při teplotě 37 °C, přičemž plotny byly překryty, aby nedošlo k vyschnutí vyhloubení. Pak bylo antisérum slito a plotny byly 3krát promyty PBS. Pak bylo přidáno 50 μΐ antiséra (v ředění 1:500 v PBS) proti králičímu imunoglobulinu G (IgG), produkovaného u koz a byla provedena vazba na peroxidázu (GAR-IgG-PO, Nordic). Pak bylo do každého vyhloubení přidáno 100 μΐ následující směsi substrátů: 10 ml 0,5 M tris-hydrochloridu o pH 7,8, 1 ml peroxidu vodíku (30% Suprapur v ředění 1:600 ve vodě, Měrek) a 200 μΐ 3-amino-9-ethylkarbazolu (0,1 g/10 ml ethanolu, uložený po podílech 200 μΐ při teplotě -80 °C, A-5754, Sigma). Plotny byly inkubovány alespoň 30 minut při teplotě místnosti. Pak byl substrát slit a vyhloubení byla naplněna 200 μΐ vody k zastavení reakce. Infikované buňky pak byly počítány v invertním mikroskopu (Diavert, Leitz).
Bylo zřejmé, že s rotavirem se dostává do interakce jen velmi malé množství bakteriálních kmenů. Pouze 9 kmenů z původně vybraných 260 bakteriálních kmenů mělo schopnost vyvolat inhibici replikace rotaviru. Lactobacillus paracasei NCC 2461 (ST11) měl velmi vysokou účinnost proti rotaviru, serotyp 1, rotaviru SA-11, serotyp 3 a a rotaviru Hochi, serotyp 4.
Příklad 3
Pěstování buněk Caco-2
Pro zkoušky na inhibici (pathogenních) bakterií byla užita buněčná linie Caco-2 jako model střevních buněk. Tato buněčná linie má vlastnosti střevních buněk, jako jsou například polarizace, exprese střevních enzymů, produkce určitých strukturních polypeptidů a podobně.
Buňky byly pěstovány buď na plotnách z plastu s plochou 25 cm2 (Corning) nebo na sterizovaných skleněných plotnách se 6 vyhloubeními o velikosti 22 x 22 mm (Corning) při zkouškách na adhezi nebo na skleněných plotnách s 24 vyhloubeními (Corning) pro zkoušky na inhibici.
Po druhém dnu v kultuře bylo prostředí DMEM každý den vyměněno. Před použitím bylo živné prostředí doplněno 100 U/ml penicilinu/streptomycinu, 1 μg/ml amphoterinu a 20 % FCS po inaktivaci 30 minut při teplotě 56 °C. Buněčný materiál byl pěstován při teplotě 37 °C v atmosféře, obsahující 90 % vzduchu a 10 % oxidu uhličitého. Buňky byly přeočkovány každých 6 dnů. Buněčný materiál byl oddělen od stěn vyhloubení působením PBS s 0,25 % trypsinu a 3 mM EDTA o pH 7,2. Pro neutralizaci účinku trypsinu byl k získané buněčné suspenzi přidán stejný objem FCS, směs byla odstředěna 10 minut při 1000 otáčkách za minutu a usazenina byla znovu použita k pěstování. Přibližně 3,5 x 105 buněk bylo přeneseno do nové lahve pro pěstování kultur a pěstováno až do dosažení souvislé vrstvy buněk.
• · ·· · ·· ·· • · · ···· · · · · • · · ··· · · · ······· · · ·· · · • · ·»· · · · ··· · ·· ··· ·· ····
Přiklad 4
Pěstování bakterií
STU
Tento bakteriální kmen byl uložen při -20 °C v prostředí MRS s obsahem 15 % glycerolu. Kmen byl pěstován za anaerobních podmínek v MRS a 2krát přenesen do nového živného prostředí v intervalu 24 hodin před použitím k inhibičním zkouškám. Při provádění zkoušek byla užita koncentrace 2 x 109 cfu/ml.
Supematant byl oddělen odstředěním 1 hodinu při 20 000 otáčkách za minutu a získaný supematant byl podroben zkouškám na přítomnost bakterií.
E. coli kmeny E. coli, a to E coli DAEC C 1845 (Diffuse Adhesion E. coli) a E. coli JPN15 (EPEC, Entero-Pathogenic E. coli) byly použity k provedení zkoušek.
První pasáž po roztátí byla uskutečněna na agaru CFA-Muller Hinton, který je vhodný pro expresi faktorů pro adhezi bakteriemi.
Před každým pokusem byly bakteriální buňky inkubovány při teplotě 37 °C a vždy po 24 hodinách byl buněčný materiál přenesen do nového živného prostředí. Tento postup byl dvakrát opakován. Vzhledem k tomu, že kmen JPN15 obsahuje gen pro odolnost proti ampicilinu, bylo toto antibiotikum použito pro selekci uvedeného kmene v průběhu růstu.
• · · · · ···· ··· ···· · * · · ······· · · · · · · • · · · · · · · ··· · ·· ··· ·· ····
Salmonella
K pokusům byl použit také mikroorganismus Salmonella typhimurium kmen SL1344, který byl před použitím pěstován v živném prostředí LB.
Příklad 5
Zkouška na inhibici E. coli
Po druhé pasáži do nového prostředí byly patogenní kmeny bakterií označeny radioizotopy, byl použit C14-acetát v množství 10 gCi/ml v prostředí LB. Inkubace kmenů v tomto živném prostředí byla prováděna 18 hodin při teplotě 37 °C.
Bakteriální suspenze pak byla odstředěna 15 minut při 1041g, tak aby byl odstraněn supernatant se zbylým C14-acetátem. Usazenina byla uvedena do suspenze a promyta PBS a buňky byly znovu uvedeny do suspenze v koncentraci 108 buněk/ml v 1% sterilní mannóze, o níž je známo, že vyvolává inhibici nespecifické adheze.
Různé bakteriální kmeny patogenních bakterií E. coli byly uvedeny do styku se souvislou vrstvou buněk Caco-2 při teplotě 37 °C ve směsi 90 % vzduchu a 10 % oxidu uhličitého na 3 hodiny. Tytéž pokusy byly provedeny při použití supernatantu, získaného odstředěním po dobu 40 minut při 20 000 otáčkách za minutu.
Při kontrolním pokusu byly pathogenní bakterie uvedeny do styku se souvislou vrstvou Caco-2 bez současného přidání ST-11 nebo supernatantu kultury.
Po třech hodinách inkubace bylo živné prostředí vyměněno a souvislá vrstva byla třikrát promyta PBS. Při každém promytí byl roztok PBS 20krát promíchán tak, aby bylo možno v podstatě vyloučit jakoukoliv nespecifickou adhezi. Pak byly buňky rozrušeny přidáním 1 ml uhličitanu sodného a inkubovány 40 minut při teplotě 37 °C. Po homogenizaci byl podíl 250 μΐ materiálu zředěn 5 ml scintilační kapaliny (Hionic-fluor Packard) a výsledek byl sledován na počítači (Packard 2000). Procentuální adheze pathogenních buněk na buňky Caco-2 byla vypočítána ve srovnání s kontrolou, která byla považována za 100 %. Obdobným způsobem byla sledována invaze, jak bude uvedeno v příkladu 6.
Přiklad 6
Zkouška na inhibici v případě bakterií Salmonella
Salmonella jsou bakterie, které napadají epitheliální buňky a množí se v nich. Při stanoveni inhibiční účinnosti kmene STU byl kmen Salmonella typhimurium SL1344 inkubován svrchu uvedeným způsobem v prostředí, obsahujícím 14C-acetát, načež byl podroben zkouškám podle příkladu 5.
Po inkubaci byly buňky Caco-2 promyty PBS k odstranění všech buněk, které nepřilnuly. Pak bylo přidáno prostředí, obsahující 20 pg/ml gentamycinu a inkubace pokračovala 1 hodinu při teplotě 37 °C. Gentamycin je antibiotikum, které neproniká do střevních buněk, takže všechny extracelulární organismy uhynou, kdežto organismy, které se již dostaly do střevních buněk přežívají. Po dvojím promytí buněk PBS byly buňky ·· • · ·· rozrušeny přidáním sterilní destilované vody a pak byla měřena radioaktivita způsobem, popsaným v příkladu 4.
Výsledky pokusů 5 a 6 jsou znázorněny na obr. 6 až 9. Je zřejmé, že buňky kmene STll i supernatant této kultury byly velmi účinné při prevenci adheze i invaze do střevních buněk v případě pathogenních mikroorganismů, vyvolávajících průjmová onemocnění.
Příklad 7
Vlastnosti STll
Kmen STll byl inkubován v simulované žaludeční šťávě. Simulovaná žaludeční šťáva byla připravena tak, že byl suspendován pepsin v množství 3 g/1 ve sterilním 0,5% roztoku chloridu sodného a pH bylo upraveno na 2,0 až 3 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Kmen STll byl pěstován na svrchu uvedených prostředích v různém množství a byla stanovena odolnost mikroorganismů.
Získané výsledky jsou shrnuty v následující tabulce I.
Tabulka I
| pH | cfu/ml při TO | cfu/ml při T 1 min | cfu/ml při T 15 min | cfu/ml při T 30 min | cfu/ml při T 60 min |
| 2,0 | 2,0xl0a | 1,8xl0y | l,2xlOy | 3,7xlOtí | 7,0xl0J |
| 3,0 | 2,0xl0y | 1,9xlOy | 1,7xlOy | 1,7xlOy | 8,4xlOb |
STll má následující vlastnosti, jak je definováno postupy pro rody bakterií mléčného kvašení, Ed. B.J.B. Wood a W.H. Hozapfel, Blackie A&P.
- bakterie jsou grampozitivní,
- negativní na katalázu,
- negativní na NH3 formu argininu
- negativní na produkci C02,
- produkují kyselinu L(+)mléčnou,
- rostou v přítomnosti žlučových solí do koncentrace až 0,4 % .
Příklad 8
Růst ST11 za různých podmínek
Kmen STU byl inkubován při 37 °C v prostředí na bázi rajčat (4 % rajčat v prášku po rehydrataci v destilované vodě), prostředí je doplněno sacharózou v množství 0, 0,5, 1 nebo 2 % nebo sojovým peptonem v množství 0,5 % nebo glukózou v množství 0,5 % na různé časové období. Výsledky jsou znázorněny na obr. 2.
Kmen ST11 byl dále přidán v množství 2,5 % do prostředí, obsahujícího 3 % rýžové mouky, 2 % pšeničné mouky a 3 % sacharózy a směs byla inkubována při teplotě 37 °C až do dosažení pH 4,4. Po zchlazení byl produkt balen, popřípadě za přidání vitaminu C a uložen při teplotě 10 °C.
Příklad 9
Indukce syntézy mRNA pro IL-12 a IL-10 u myších buněk v přítomnosti STU. Buňky kostní dřeně byly izolovány ze stehenní kosti a z lýtkové kosti bez patogenních myší C57BL/6 ve stáří 8 týdnů a byly inkubovány v koncentraci 2 x 106 buněk/ml v prostředí RPMI (Gibco) s obsahem 10 % fetálního séra skotu, 1 mM L-glutaminu, 12 mM hepes, 0,05 mM 2-merkaptoethanolu, 100 U/ml penicilinu a 100 gg/ml streptomycinu (všechny složky od Gibco) celkem 12 hodin při teplotě 37 °C v atmosféře s 5 % oxidu uhličitého. Buňky, které nepřilnuly, byly odstraněny trojím promytím teplým živným prostředím a zbývají lnoucí buňky byly odebrány a inkubovány v koncentraci 106 buněk/ml celkem 6 hodin v přítomnosti nebo nepřítomnosti bakterií. Před tím bylo stanoveno, že 6 hodin představuje optimální časové období pro syntézu mRNA pro cytokiny u myších buněk při odpovědi na LPS. Bakterie byly přidány v různé koncentraci od 109 do 107 cfu/ml. Bakterie byly pěstovány a uloženy tak, jak bylo uvedeno svrchu.
Na konci období 6 hodin byl buněčný materiál oddělen odstředěním a rozrušen při použití reakčního balíčku TRIzol (GibcoBRL, číslo katalogu 15596-018) podle instrukcí výrobce. Celková RNA byla izolována vysrážením isopropanolem a byla provedena reverzní transkripce do cDNA po dobu 90 minut při teplotě 42 °C při použití 20 U reversní transkriptázy (Superscript II, BRL) v reakčním objemu 40 μΐ s obsahem 200 mM Tris o pH 8,3, 25 mM KC1, 1 μρ/ml oligo d(T)i5 (Boehringer Mannheim), 1 mM DTT (Boehringer Mannheim), 4 mM každého z dNTP (Boehringer Mannheim) a 40 U/ml Rnasin (Promega). Primery pro PCR a použité podmínky jsou popsány v publikaci Kopf a další, Journal of Experimental Medicine 1996, 1 září, 184(3): 1127-36. Množství cDNA bylo ve vzorcích upraveno při použití primerů, specifických pro provozní gen ( -2-mikroglobulin). Produkty PCR byly odděleny na 2% agarózovém gelu a jednotlivé pásy byly analyzovány v ultrafialovém světle.
Jak je znázorněno na obr. 4, bylo možno pro STU prokázat nejsilnější indukci mRNA pro IL-12 a IL-10, tato . ·· ··
.. . «... · » · · • · · ·.· ··.· o r »············
Z O ·.······ • · · · 4« «44 4 · 4 4· 4 indukce byla srovnatelná s indukcí pro pozitivní kontroly E. coli. Rozdíly jsou nejzřejmější při nejnižších koncentracích bakterií 107 cfu/ml.
Příklad 10
Potlačení syntézy IL-4 působením STU
Buňky CD4+ T byly čištěny ze sleziny specifických bezpathogennich myší BALB/c při použití balíčku MiniMACS (Miltenyi Biotec, č. katalogu 492-01). Buňky CD4+ T byly pěstovány v koncentraci 2 x 105 buněk/ml v prostředí RPMI, obsahujícím 10 % fetálniho séra skotu, 1 mM L-glutaminu, 12 mM hepes, 0,05 mM 2-merkaptoethanolu, 100 U/ml penicilinu a 100 pg/ml streptomycinu, buňky byly aktivovány v průběhu 1 týdne zesítěním s monoklonálními protilátkami CD3 (klon 2C11) a CD28 (klon 37.51, Pharmingen), vázanými na plotnu. V průběhu této primární kultury byly buňky CD4+ T pěstovány společně s buňkami kostní dřeně, izolovanými svrchu uvedeným způsobem jako přídatnými buňkami a s 108 cfu/ml STU nebo 108 cfu/ml Lal nebo 1 mg/ml LPS nebo v samotném živném prostředí. Po této době byly buňky promyty a buňky CD4+ T byly znovu čištěny s použitím balíčku MiniMACS a restimulovány v sekundární kultuře, obsahující pouze živné prostředí. Cytokiny, produkované buňkami CD4+ T po diferenciaci, byly měřeny v supernatantech po dvou dnech při použití zkuošky ELISA (balíčky Endogen a Pharmingen).
Získané výsledky jsou znázorněny na obr. 5. Buňky, u nichž došlo k diferenciaci pouze v přítomnosti živného prostředí, měly převažující fenotyp Th2, což se projevovalo vysokou koncentrací IL-4. Přidáním STU k primární kultuře silně ovlivnilo diferenciaci Th2 vzhledem k tomu, že došlo k osminásobnému poklesu produkce IL-4. Tato inhibice přibližně odpovídala inhibici, kterou bylo možno pozorovat u kultur buněk, k jejichž diferenciaci došlo v přítomnosti LPS. Na druhé straně druhý kmen Lactobacillus neměl žádný prokazatelný vliv na koncentraci IL-4. Je zajímavé, že po přidání STU k primárním kulturám nedošlo k vzestupu koncentrace
IFN-γ.
Z toho, co bylo svrchu uvedeno je zřejmé, že kmeny Lactobacillus podle vynálezu je možno dobře využít pro výrobu potravinových a/nebo farmaceutických nosičů při využití cenných vlastností těchto mikroorganismů.
Příklad 11
Kmen STU byl podroben klinickým zkouškám u komunity na předměstí Guatemala City tak, aby bylo možno sledovat vliv tohoto kmene na přenos a vznik průjmových onemocnění na začátku období dešťů, tomuto onemocnění je vystavena většina dětí v oblasti. Do studie bylo zahrnuto celkem 203 dětí ve stáří 35 až 70 měsíců, těmto dětem byla podána po dobu 29 dnů cílová dávka 1O10 životaschopných mikroorganismů ST11 nebo bylo podáno placebo. Děti, které byly vybrány k těmto pokusům, měly typické znaky snížené hmotnosti a malé výšky, tak jak je to charakteristické pro podvyživené děti.
Před začátkem pokusu u předškolních dětí byla vyhodnocena in vitro i in vivo bezpečnost. Zkoušky in vitro prokazovaly odolnost proti antibiotikům, obdobnou pro podobné kmeny, používané pro potravinářské účely, přičemž nebyla prokázána žádná schopnost tvorby
9-9 · • ♦ t · • ·
biogenních aminů, schopnosti degradovat mucin nebo dekonjugovat žlučové soli. Při klinických zkouškách, zahrnujících 42 dospělých dobrovolníků, jimž byl podán ST11 nebo placebo, byl kmen STU dobře znášen a nevyvolával žádné nepříznivé účinky při sledovaných parametrech, jako byly plynatost, počet stolic denně a jejich konzistence, při sledování bílkovin v krevním séru nebylo možno pozorovat žádné změny, které by ukazovaly na potenciální zánětlivou reakci.
Vzorky kmene a placebo byly uloženy do sáčků v Nestlé Product Technology Center manufacturing facility v Konolfingenu ve Švýcarsku a byly ve zmrazeném stavu dopraveny do Guatemaly. V každém z lOg sáčků byl uložen nosič, ochucený čokoládou a 0,2 g ST11 (1O10 cfu) nebo v případě placeba 0,2 g práškového mléka. Nosič, ochucený čokoládou obsahoval kakakový prášek, cukr, sojový lecithin, vanilku a skořici. Sáčky byly uloženy při teplotě 4 až 6 °C do dvou hodin před použitím. Před použitím byly sáčky rozpuštěny ve 100 ml vody, dodané Nestlé a prosté jakéhokoliv bakteriálního znečištění.
Podle použitého protokolu byl průjem definován jako výskyt tří nebo většího počtu kapalných nebo netvarovaných stolic v průběhu 24 hodin. Průjmová epizoda byla definována jako jev, prokazující průjmové onemocnění (trojí vyprázdnění řídké stolice v průběhu 24 hodin). Celkové trvání v hodinách bylo počítáno od první do třetí zaznamenaní stolice a pak až do vzniku první tvarované stolice nebo do období 24 hodin bez jakékoliv stolice. V případě dítěte bylo zapotřebí, aby před novou průjmovou epizodou uplynulo 48 hodin od konce předchozího průjmu. V případě kratšího období byl průjem považován za
pokračování téže epizody a bylo pak vyhodnoceno celkové trvání. Šlo například o dítě, u kterého se vyskytlo větší množství dokumentovaných epizod v průběhu pozorování po dobu 29 dnů. Intenzita epizody se určuje podle celkového počtu řídkých stolic. Závažnost epizody zahrnuje také přítomnost krve, hlenu nebo hnisu ve stolici, popřípadě se současnými dalšími příznaky, jako je horečka a zvracení. V případě více než 7 stolic za 24 hodin nebo v případě nutnosti intervence v léčebném zařízení nebo nemocnici se rovněž epizoda považuje za závažnou.
V případě, že byla diagnostikována epizoda průjmového onemocnění, byl vzorek průjmové stolice odebrán na mikroskopické pozorování a na pěstování k identifikaci patogenních bakterií při této epizodě. Vzorek byl sledován na antigen rotaviru, Giardia a E. histolytica v případě dysenterie a na bakteriální pathogeny včetně Shigella, Salmonella, Aeromonas, Plesiomonas shigelloides, E. coli a také V. cholerae.
V průběhu sledování byly odebírány vzorky také na sledování životaschopnosti mikroorganismu v průběhu období podávání. Bylo možno prokázat, že mikroorganismus zůstává životaschopný v sáčcích v průběhu celé studie, takže také na konci celého pokusu bylo možno po rekonstituci ve vodě prokázat v sáčku 1O10 životaschopných buněk mikroorganismu.
Studie potvrdily, že probiotický mikroorganismus může snížit výskyt průjmových onemocnění ve srovnání s kontrolní skupinou, jíž bylo podáno placebo přibližně o 30 %. Avšak také kontrolní skupina měla nižší počet průjmových epizod než normální populace, které nebyl
podán ani mikroorganismus ani placebo. To je zčásti možno vysvětlit tím, že dětem byla podávána bohatší výživa a voda, která nebyla znečištěna bakteriemi. Avšak vzhledem k tomu, že studie byla provedena přímo v terénu, je zcela zřejmé, že ST11 může snížit výskyt průjmových onemocnění.
Claims (13)
1. Bakterie mléčného kvašeni, náležející k rodu Lactobacillus, vyznačující se tím, že mají schopnost zabránit kolonizaci střev pathogenními bakteriemi, vyvolávajícími průjmová onemocnění a zabránit infekci epitheliálních střevních buněk rotaviry.
2. Kmen Lactobacillus podle nároku 1, vyznačujíc íse tím, že je schopen přilnout ke střevní sliznici hostitelského organismu a kolonizovat ji.
3. Kmen Lactobacillus podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že je schopen růstu v přítomnosti až 0,4 % žlučových solí.
4. Kmen Lactobacillus podle některého z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se volí ze skupiny Lactobacillus rhamnosus nebo Lactobacillus paracasei.
5. Kmen Lactobacillus podle nároku 4, vyznačující se tím, že jde o Lacobacillus paracasei.
6. Lactobacillus paracasei podle nároku 5, kterým je Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116 (NCC 2461).
7. Použití kmene Lactobacillus podle některého z nároků 1 až 7 pro výrobu poživatelného nosiče.
• ·
8. Použiti podle nároku 7, při němž je kmen Lactobacillus obsažen v nosiči v množství 105 až 1012 cfu/g nosiče.
9. Použití supernatantu nebo kultury kmene Lactobacillus podle některého z nároků 1 až 6 pro výrobu poživatelného nosiče.
10. Použití podle některého z nároků 7 až 9, při němž je nosičem potravinový výrobek ze skupiny mléko, jogurt, tvaroh, sýr, fermentované mléko, fermentované produkty na bázi mléka, zmrzlina, fermentované produkty na bázi obilovin, práškové mléko nebo kojenecká výživa.
11. Použití podle některého z nároků 7 až 10, vyznačující se tím, že se nosič užije pro léčení a/nebo profylaxi poruch, spojených s průjmovým onemocněním.
12. Potravinový nebo farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden kmen Lactobacillus podle některého z nároků 1 až 6 nebo supematant kultury tohoto kmene.
13. Potravinový nebo farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že se volí ze skupiny mléko, jogurt, tvaroh, sýr, fermentované mléko, fermentované produkty na bázi mléka, zmrzlina, fermentované produkty na bázi obilovin, práškové mléko nebo kojenecká výživa, tablety, kapalné bakteriální suspenze, sušené perorální doplňky, vlhké perorální doplňky nebo suché nebo vlhké prostředky pro výživu sondou. Zastupuje:
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99104924A EP1034788A1 (en) | 1999-03-11 | 1999-03-11 | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhea |
| EP99104922A EP1034787A1 (en) | 1999-03-11 | 1999-03-11 | Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20013269A3 true CZ20013269A3 (cs) | 2002-04-17 |
Family
ID=26152924
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20013269A CZ20013269A3 (cs) | 1999-03-11 | 2000-03-02 | Bakterie mléčného kvaąení |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6887465B1 (cs) |
| EP (1) | EP1165105A1 (cs) |
| JP (1) | JP3765983B2 (cs) |
| CN (1) | CN1244684C (cs) |
| AU (1) | AU779789B2 (cs) |
| BR (1) | BR0008920A (cs) |
| CA (1) | CA2364440A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20013269A3 (cs) |
| HK (1) | HK1046864B (cs) |
| HU (1) | HUP0200374A2 (cs) |
| IL (2) | IL145080A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA01009017A (cs) |
| NO (1) | NO20014298L (cs) |
| NZ (1) | NZ513804A (cs) |
| PL (1) | PL203281B1 (cs) |
| RO (1) | RO121700B1 (cs) |
| WO (1) | WO2000053202A1 (cs) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1034788A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-13 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhea |
| EP1034787A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-13 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria |
| MXPA02011595A (es) | 2000-05-25 | 2003-03-27 | Nestle Sa | Nuevos probioticos para aplicaciones de alimento de mascotas. |
| KR100419132B1 (ko) * | 2000-12-29 | 2004-02-18 | 조성근 | 위·장 점막 부착성과 증식성, 내산성, 내담즙성 및헬리코박터 파일로리, 대장균 0157:ｈ7에 대한 항균성이우수한 락토바실러스 파라카제이 서브스패시즈 파라카제이ｃｓｋ 01 |
| GB0124580D0 (en) | 2001-10-12 | 2001-12-05 | Univ Reading | New composition |
| KR100356672B1 (ko) * | 2001-12-27 | 2002-10-19 | 주식회사 바이로박트 | 신규한 락토바실러스 속 미생물 및 그 용도 |
| EP1384483A1 (en) * | 2002-07-23 | 2004-01-28 | Nestec S.A. | Probiotics for treatment of irritable bowel disease (IBS) through improvement of gut neuromuscular function |
| AU2005215858B2 (en) * | 2004-02-24 | 2010-07-15 | Chr. Hansen A/S | Frozen lactic acid bacteria culture of individual pellets |
| MY143693A (en) * | 2004-03-24 | 2011-06-30 | Nestec Sa | Shelf stable product wih living micro-organisms |
| EP1951272B1 (en) | 2005-10-06 | 2016-06-15 | Probi Ab | Use of lactobacillus for treatment of virus infections |
| ES2351230T3 (es) * | 2007-02-02 | 2011-02-01 | May, Amadeus Alexander | Producto con microorganismos prebióticos vivos. |
| WO2010130662A1 (en) * | 2009-05-11 | 2010-11-18 | Nestec S.A. | LACTOBACILLUS JOHNSONII La1 NCC533 (CNCM I-1225) AND IMMUNE DISORDERS |
| EP2485744A4 (en) * | 2009-10-09 | 2014-01-22 | Prothera Inc | COMPOSITIONS AND METHODS COMPRISING THE PEDIOCOCCUS TO REDUCE AT LEAST ONE SYMPTOM ASSOCIATED WITH DEVELOPMENT-INVASIVE DISORDER IN A PERSON IN WHICH A DEVELOPMENT-INVASIVE DISORDER HAS BEEN DIAGNOSED |
| PT2693885T (pt) * | 2011-04-08 | 2018-06-04 | Chr Hansen As | Efeito antimicrobiano sinérgico |
| JP6028962B2 (ja) * | 2012-02-16 | 2016-11-24 | 国立大学法人金沢大学 | ウイルス感染予防乳酸菌組成物及びウイルス感染予防乳酸発酵食品 |
| CN112869170B (zh) * | 2019-11-29 | 2023-05-23 | 伊利伊诺科技(上海)有限责任公司 | 可提高胃肠道免疫能力的益生菌益生元营养组合物及应用 |
| CN112869168B (zh) * | 2019-11-29 | 2023-06-06 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 可提高胃肠道免疫能力的益生菌益生元组合物及其应用 |
| CN115024382B (zh) * | 2022-05-05 | 2023-03-14 | 浙江大学 | 一株抗动物腹泻动物联合乳杆菌zjuids-r2及其应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ239370A (en) * | 1990-08-22 | 1994-04-27 | Merck & Co Inc | Bioerodible implantable controlled release dosage form comprising a poly(ortho ester) or a polyacetal with an active agent incorporated into the chain backbone |
| DE69223615T2 (de) * | 1992-07-06 | 1998-04-09 | Nestle Sa | Lactobacillus Acidophilus enthaltende Antigastritis-Mittel |
| AU686389B2 (en) * | 1994-05-26 | 1998-02-05 | Dibra S.P.A. | Lactobacillus strains of human origin, their compositions and uses thereof |
| US5837238A (en) | 1996-06-05 | 1998-11-17 | Biogaia Biologics Ab | Treatment of diarrhea |
| IT1284877B1 (it) * | 1996-08-09 | 1998-05-22 | Dicofarm Spa | Trattamento delle diarree acute del bambino e prevenzione della sensibilizzazione allergica verso alimenti introdotti nella fase |
| IT1289984B1 (it) * | 1997-02-27 | 1998-10-19 | Proge Farm Srl | Ceppi di lattobacilli utili nel trattamento di disfunzioni del sistema gastrointestinale |
| SE510813C2 (sv) * | 1997-12-08 | 1999-06-28 | Arla Ekonomisk Foerening | Bakteriestam av arten Lactobacillus Paracasei subsp. paracasei, sammansättning därav för användning i livsmedel, samt produkt innehållande stammen |
-
2000
- 2000-03-02 AU AU31629/00A patent/AU779789B2/en not_active Ceased
- 2000-03-02 CA CA002364440A patent/CA2364440A1/en not_active Abandoned
- 2000-03-02 PL PL350776A patent/PL203281B1/pl unknown
- 2000-03-02 US US09/936,542 patent/US6887465B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 MX MXPA01009017A patent/MXPA01009017A/es not_active Application Discontinuation
- 2000-03-02 JP JP2000603691A patent/JP3765983B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 HU HU0200374A patent/HUP0200374A2/hu unknown
- 2000-03-02 NZ NZ513804A patent/NZ513804A/en unknown
- 2000-03-02 IL IL14508000A patent/IL145080A0/xx active IP Right Grant
- 2000-03-02 BR BR0008920-6A patent/BR0008920A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-03-02 RO ROA200101019A patent/RO121700B1/ro unknown
- 2000-03-02 CZ CZ20013269A patent/CZ20013269A3/cs unknown
- 2000-03-02 EP EP00909292A patent/EP1165105A1/en not_active Withdrawn
- 2000-03-02 WO PCT/EP2000/001798 patent/WO2000053202A1/en active IP Right Grant
- 2000-03-02 CN CNB00807402XA patent/CN1244684C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-08-23 IL IL145080A patent/IL145080A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-09-04 NO NO20014298A patent/NO20014298L/no not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-11-22 HK HK02108478.2A patent/HK1046864B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL203281B1 (pl) | 2009-09-30 |
| EP1165105A1 (en) | 2002-01-02 |
| CN1350462A (zh) | 2002-05-22 |
| NO20014298L (no) | 2001-11-05 |
| HK1046864A1 (en) | 2003-01-30 |
| CA2364440A1 (en) | 2000-09-14 |
| WO2000053202A1 (en) | 2000-09-14 |
| IL145080A (en) | 2006-12-10 |
| CN1244684C (zh) | 2006-03-08 |
| HUP0200374A2 (en) | 2002-06-29 |
| MXPA01009017A (es) | 2002-04-24 |
| JP3765983B2 (ja) | 2006-04-12 |
| HK1046864B (zh) | 2006-10-27 |
| NO20014298D0 (no) | 2001-09-04 |
| AU3162900A (en) | 2000-09-28 |
| US6887465B1 (en) | 2005-05-03 |
| JP2002537867A (ja) | 2002-11-12 |
| IL145080A0 (en) | 2002-06-30 |
| PL350776A1 (en) | 2003-02-10 |
| RO121700B1 (ro) | 2008-02-28 |
| AU779789B2 (en) | 2005-02-10 |
| NZ513804A (en) | 2001-09-28 |
| BR0008920A (pt) | 2001-12-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2247569C2 (ru) | Штамм lactobacillus paracasei cncm i-2116 (ncc 2461), обладающий способностью предотвращать колонизацию кишечника патогенными бактериями, вызывающими диарею, и предотвращать заражение эпителиальных клеток кишечника ротавирусами, пищевой продукт и фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения заболеваний, связанных с диареей | |
| EP1165104B1 (en) | Lactobacillus parcasei strain capable of preventing diarrhoea | |
| CZ20013269A3 (cs) | Bakterie mléčného kvaąení | |
| AU1896899A (en) | Strain of bacteria of the species lactobacillus paracasei subsp. paracasei, composition thereof for use in food and product containing said strain | |
| EP2101596A1 (en) | Immunomodulating probiotic lactic acid bacteria | |
| MXPA01008927A (en) | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhoea | |
| MXPA01008976A (en) | Lactobacillus strains preventing diarrhoea pathogenic bacteria |