RU2247569C2 - Штамм lactobacillus paracasei cncm i-2116 (ncc 2461), обладающий способностью предотвращать колонизацию кишечника патогенными бактериями, вызывающими диарею, и предотвращать заражение эпителиальных клеток кишечника ротавирусами, пищевой продукт и фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения заболеваний, связанных с диареей - Google Patents
Штамм lactobacillus paracasei cncm i-2116 (ncc 2461), обладающий способностью предотвращать колонизацию кишечника патогенными бактериями, вызывающими диарею, и предотвращать заражение эпителиальных клеток кишечника ротавирусами, пищевой продукт и фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения заболеваний, связанных с диареей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2247569C2 RU2247569C2 RU2001127527/13A RU2001127527A RU2247569C2 RU 2247569 C2 RU2247569 C2 RU 2247569C2 RU 2001127527/13 A RU2001127527/13 A RU 2001127527/13A RU 2001127527 A RU2001127527 A RU 2001127527A RU 2247569 C2 RU2247569 C2 RU 2247569C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- diarrhea
- strain
- ncc
- milk
- Prior art date
Links
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 title claims abstract description 28
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 title claims abstract description 11
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 title claims abstract description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 title abstract description 9
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 title abstract 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 title description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims abstract description 12
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 24
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 12
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 10
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 claims description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims description 4
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract description 2
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical class C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 abstract 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 77
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 45
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 25
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 25
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 22
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 19
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 15
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 15
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 14
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 13
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 13
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 13
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 11
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 10
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 10
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 9
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 8
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 7
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 7
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 6
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 230000002953 anti-rotaviral effect Effects 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 5
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 4
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 4
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010048832 Colon adenoma Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 3
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 108700010850 rotavirus proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011767 Acute-Phase Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010062271 Acute-Phase Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 241000224489 Amoeba Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 244000223760 Cinnamomum zeylanicum Species 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 1
- 101710168537 High mobility group protein B1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000651298 Homo sapiens TRAF-interacting protein with FHA domain-containing protein A Proteins 0.000 description 1
- 241000617996 Human rotavirus Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- 244000172809 Leuconostoc cremoris Species 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000606999 Plesiomonas shigelloides Species 0.000 description 1
- 241000186429 Propionibacterium Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241001493038 Rotavirus G4 Species 0.000 description 1
- 206010067470 Rotavirus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 102100027651 TRAF-interacting protein with FHA domain-containing protein A Human genes 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 208000037063 Thinness Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001142 anti-diarrhea Effects 0.000 description 1
- 230000001775 anti-pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000741 diarrhetic effect Effects 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 206010016766 flatulence Diseases 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N fosfomycin Chemical compound C[C@@H]1O[C@@H]1P(O)(O)=O YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012543 microbiological analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000004915 pus Anatomy 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229960005404 sulfamethoxazole Drugs 0.000 description 1
- JLKIGFTWXXRPMT-UHFFFAOYSA-N sulphamethoxazole Chemical compound O1C(C)=CC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1 JLKIGFTWXXRPMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N trimethoprim Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001082 trimethoprim Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 206010048828 underweight Diseases 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 1
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
- A23G9/32—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G9/36—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
- A23G9/363—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/065—Microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/175—Rhamnosus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Confectionery (AREA)
- Cereal-Derived Products (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, может быть использовано в пищевой промышленности и медицине при профилактике и/или лечении заболеваний, связанных с диареей. Штамм Lactobacillus paracasei CNCM I-2116 (NCC 2461) способен прикрепляться к слизистой оболочке кишечника млекопитающегося и расти в присутствии до 0,4% солей желчных кислот и предотвращать заражение эпителиальных клеток кишечника ротавирусами. Пищевой продукт характеризуется содержанием от 1·105 до 1·1012 КОЕ штамма L.paracasei I-2116 (NCC 2461)/г пищевого носителя, выбранного из молока, йогурта, творога, сыра, сухого молока, детского питания и т.п. Фармацевтическая композиция содержит эффективное количество КОЕ штамма L.paracasei CNCM I-2116 (NCC 2461) или надосадочной фракции его культуры и физиологически приемлемый носитель. Изобретение обеспечивает высокий уровень активности против SA-11 серотина 3 и ротавируса Hochi серотипа 4. 3 н.п. ф-лы, 9 ил., 1 табл.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новым микроорганизмам рода Lactobacillus, которые применимы для предотвращения (профилактики) диареи, вызванной как патогенными бактериями, так и ротавирусами соответственно. В частности, настоящее изобретение касается использования упомянутых микроорганизмов для приготовления пищевого носителя и содержащей их композиции.
Уровень техники
Организмы, вырабатывающие молочную кислоту в качестве основного метаболического компонента, известны уже в течение длительного времени. Такие бактерии могут быть обнаружены в молоке или на фабриках по переработке молока, соответственно в живых или разлагающихся растениях, а также в кишечнике человека и животных. Такие микроорганизмы, известные под общим названием “молочнокислых бактерий”, представляют собой весьма неоднородную группу и включают, например, роды Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium, Pediococcus и др.
Молочнокислые бактерии могут быть использованы в качестве ферментирующих агентов для консервирования пищевых продуктов, преимущества которых связаны с низким рН и действием продуктов ферментации, образующихся в результате их ферментационной активности по подавлению роста гнилостных бактерий. С учетом этого молочнокислые бактерии используют для приготовления различных пищевых продуктов, таких как сыр, йогурт и другие ферментированные молочные продукты.
Недавно молочнокислые бактерии стали объектом пристального внимания в связи с тем, что для некоторых штаммов были установлены ценные для человека и животных свойства, проявляемые после попадания в организм с пищей. В частности, для конкретных штаммов родов Lactobacillus или Bifidobacterium была установлена способность колонизировать слизистую кишечника и способствовать поддержанию хорошего самочувствия у человека и животного.
В этом отношении европейская патентная заявка ЕР 0-768375 описывает конкретные штаммы рода Bifidobacterium, которые способны имплантироваться в кишечную флору и могут соединяться с клетками кишечника. Было сообщено, что такие Bifidobacterium способствуют иммуномодуляции и способны по конкурентному механизму исключать адгезию патогенных бактерий на кишечных клетках, тем самым способствуя поддержанию здоровья субъекта.
В последние несколько лет исследования также были сосредоточены на возможном использовании молочнокислых бактерий в качестве пробиотических средств. Под пробиотическими средствами понимаются препараты живых микробов, которые способствуют здоровью субъекта за счет защиты нативной микрофлоры кишечника. Обычно микробный препарат может быть принят как пробиотический в том случае, когда активные микробы в его составе и характер их активности известны. Считается, что пробиотические средства присоединяются к слизистой кишечника, колонизируют пищеварительный тракт и тем самым предотвращают присоединение к нему опасных микроорганизмов. Ключевая предпосылка их действия состоит в том, что они должны достигать слизистой кишечника будучи активными и живыми, не подвергаясь разрушению в верхних отделах желудочно-кишечного тракта, особенно под влиянием низких рН, характерных для желудка.
В связи с этим международная патентная заявка WO 97/00078 описывает конкретный штамм, обозначенный Lactobacillus GG (АТСС 53103) в качестве такого пробиотического средства. В частности, данный микроорганизм используется в способе профилактики или лечения реакций гиперчувствительности пищевой этиологии таким образом, что его вводят реципиенту наряду с пищевым продуктом, который был подвергнут гидролитической обработке с помощью пепсина и/или трипсина. Выбранный штамм Lactobacillus описан как проявляющий адгезивные и колонизирующие свойства и обладающий протеазной системой таким образом, что входящий в состав вводимого пищевого продукта белковый материал дополнительно гидролизуется под действием протеаз, секретируемых данным конкретным штаммом
Lactobacillus. Обсуждаемый в указанном документе способ в конечном счете должен приводить в поглощению белкового продукта кишечником в таком виде, который не содержит существенного количества какого-либо аллергенного материала.
Кроме того, ссылка на европейскую патентную заявку ЕР 0-577903 сделана в связи с использованием таких молочнокислых бактерий, обладающих способностью вытеснять Heliobacter pylori, известной в качестве возбудителя развития язвенной болезни, при приготовлении носителя, предназначенного для лечения или профилактики язвенной болезни, связанной с действием Heliobacter pylori.
В международной патентной заявке WO 99/29833 описан конкретный штамм LMG-P-17806, несущий три плазмиды определенного размера. Описано, что данный штамм способен защищать клетки кишечника от инвазии сальмонеллой Salmonella typhimurium,
Учитывая возможность получения известных ценных свойств конкретных штаммов молочнокислых бактерий, в данной области техники имеется необходимость в дополнительных штаммах молочнокислых бактерий, которые бы имели преимущества в обеспечении благополучного состояния человека и/или животного.
Сущность изобретения
Задачей настоящего изобретения является представление дополнительных бактериальных штаммов, которые проявляют новые свойства, полезные для человека и/или животного.
Указанная выше задача была решена путем представления новых микроорганизмов, а именно молочнокислых бактерий, относящихся к роду Lactobacillus, свойствами которых является способность предотвращать колонизацию кишечника патогенными бактериями, вызывающими (диарею) понос, и предотвращать заражение клеток кишечного эпителия ротавирусами. В соответствии с предпочтительным вариантом штаммы Lactobacillus способны соединяться со слизистой кишечника организма-реципиента и способны в существенной степени колонизировать ее.
В соответствии с еще одним предпочтительным вариантом штаммы Lactobacillus способны расти в присутствие вплоть до 0,4% солей желчных кислот, благодаря чему они смогут легко проходить по желудочно-кишечному тракту, по существу сохраняя свою активность.
В соответствии с другим предпочтительным вариантом молочнокислую бактерию выбирают из группы, которая включает Lactobacillus rhamnosus или Lactobacillus paracasei, предпочтительно Lactobacillus paracasei, а наиболее предпочтительно Lactobacillus paracasei CNCM I-2116.
Как было показано, микроорганизмы по настоящему изобретению проявляют следующие свойства: они являются грамположительными, негативными по каталазе, негативными по NН3-образованию аргинина и негативными по выработке CO2. Они вырабатывают L(+)-молочную кислоту, способны расти в присутствии солей желчных кислот в концентрации вплоть до 0,4% и могут в существенной степени предотвращать заражение эпителиальных клеток ротавирусами.
Новые микроорганизмы могут быть использованы для приготовления различных пищевых материалов-носителей, таких как молоко, йогурт, творог, ферментированное молоко, ферментированные молочные продукты, ферментированные продукты переработки хлебных злаков, порошковое молоко, детское питание, и могут быть включены в состав носителей в количестве от примерно 105 КОЕ/г до примерно 1011 КОЕ/г. Для целей настоящего изобретения аббревиатура “КОЕ” должна соответствовать “колониеобразующей единице”, которая определяется как число бактериальных клеток, исходя из микробиологических подсчетов на агаровых пластинах.
Также настоящее изобретение представляет пищевой продукт или фармацевтическую композицию, содержащие, по крайней мере, один из штаммов Lactobacillus, обладающий указанными выше признаками.
Для приготовления пищевой композиции по настоящему изобретению, по крайней мере, один из штаммов Lactobacillus по настоящему изобретению вносят в подходящий носитель в количестве от примерно 105 КОЕ/г до примерно 1011 КОЕ/г, предпочтительно от примерно 106 КОЕ/г до примерно 1010 КОЕ/г, более предпочтительно от примерно 107 КОЕ/г до примерно 109 КОЕ/г.
В случае фармацевтической композиции продукт может быть приготовлен в виде таблеток, жидких бактериальных суспензий, сухих пищевых добавок, влажных пищевых добавок, сухих пищевых тюбиков или влажных пищевых тюбиков и т.п. при количестве вносимых в их состав штаммов Lactobacillus в диапазоне вплоть до 1012 КОЕ/г, предпочтительно от примерно 107 КОЕ/г до примерно 1011 КОЕ/г, более предпочтительно от примерно 107 КОЕ/г до примерно 1010 КОЕ/г.
Активность новых микроорганизмов в кишечнике субъекта по сути своей зависит от дозы. Следовательно, чем больше новых микроорганизмов попадает вместе с указанным выше пищевым продуктом или фармацевтической композицией, тем сильнее защитная и/или терапевтическая активность микроорганизмов. Поскольку новые микроорганизмы не являются вредными для человека и животных и, в конечном счете, были выделены из детских испражнений, то значительное их количество может быть включено таким образом, чтобы значительная часть кишечника субъекта была колонизирована новыми микроорганизмами.
Краткое описание фигур
На фигуре 1 показана схема, отображающая скрининг клеточных культур в целью оценки противоротавирусных защитных свойств бактериальных штаммов.
На фигуре 2 показано подкисление культуры L.casei штамма CNMC I-2116 (обозначенного ST11) в различных питательных средах.
На фигуре 3 показана выживаемость L.casei штамма ST11 при 10°С, измеренная в течение 30 дней.
На фигуре 4 показаны параметры мРНК IL-12 и IL-10 в адхерентных мышиных клетках, производных от клеток костного мозга, после инкубации этих клеток с различными разведениями ST11.
На фигуре 5 показан результат дифференцировки Th2, выражающийся в снижении выработки IL-4.
На фигуре 6 показана схема, иллюстрирующая результаты эксперимента по культивированию клеток, в котором культивируемые клетки ST11 используют в тесте на подавление адгезии патогенных бактерий E.coli к эпителиальным клеткам.
На фигуре 7 приведена схема, показывающая результаты эксперимента по культивированию клеток, в котором надосадочную фракцию культуры ST11 используют в тесте на подавление адгезии патогенных бактерий E.coli к эпителиальным клеткам.
На фигуре 8 показана схема, иллюстрирующая результаты эксперимента по культивированию клеток, в котором культивируемые клетки ST11 используют в тесте на подавление инвазии Salmonella typhimurium к эпителиальным клеткам.
На фигуре 9 показана схема, иллюстрирующая результаты эксперимента по культивированию клеток, в котором надосадочную фракцию культуры ST11 используют в тесте на подавление инвазии Salmonella typhimurium в эпителиальные клетки.
Подробное раскрытие изобретения
В ходе интенсивных исследований, приведших к настоящему изобретению, авторы исследовали детские испражнения и выделили из них ряд различных бактериальных штаммов. После этого штаммы были проанализированы по их способности предотвращать заражение эпителиальных клеток ротавирусами и патогенными бактериями, известными как вызывающие диарею.
Некоторые роды бактерий, включая Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus, подвергали скринингу по их ингибирующей способности. По существу тесты проводили с тремя ротавирусными серотипами, представляющими основные этиологические группы возбудителей вирусной диареи человека (серотипы G1, G3 и G4), а также с патогенными E.coli и Salmonella typhimurium, являющимися представителями патогенных микроорганизмов, вызывающих понос у пораженного субъекта.
Различные молочнокислые бактерии выращивали в подходящей культуральной среде, такой как MRS, Hugo-Jago или М17, при температуре от примерно 30 до 40°С, в соответствии с оптимальной для их роста температурой. По достижении фазы стационарного роста культуры бактерий собирали центрифугированием и ресуспендировали в физиологическом растворе NaCl. Между проведением различных тестов бактериальные клетки хранили замороженными (-20°С).
Тесты с ротавирусами
Различные вирусные штаммы были получены путем заражения монослоев слившихся клеток. Перед заражением проводили инкубацию ротавирусов. Клетки инфицировали 20 инфекционными для тканевых культур дозами. Для оценки противоротавирусных свойств использовали два способа. В соответствии с одним из них различные бактериальные штаммы анализировали по их непосредственному взаимодействию с ротавирусами, а в другом способе бактерии подвергали скринингу с целью нахождения таких штаммов, которые взаимодействуют с клеточными ротавирусными рецепторами. Первый способ включает контактирование каждой соответствующей суспензии бактерий с отдельным ротавирусным штаммом и инкубацию в подходящей культуральной среде. После этого смесь бактерий с вирусами наносили на монослой клеток недифференцированной клеточной линии НТ-29 аденомы толстой кишки человека, после чего продолжали инкубацию. После этого оценивали размножение вирусов. Второй способ включает инкубацию соответствующей бактериальной суспензии сначала вместе с клеточным монослоем недифференцированной клеточной линии НТ-29 аденомы толстой кишки человека и затем добавление вируса. После инкубации оценивали размножение вируса. Размножение ротавирусов можно легко оценить с помощью гистоиммунологического окрашивания ротавирусных белков в инфицированных клетках. Эффект по подавлению ротавирусов считается присущим данной бактерии тогда, когда число инфицированных клеток в культуре, зараженной ротавирусом вместе с указанной бактерией, снижается на 90% по сравнению с клетками, инокулированными только ротавирусом.
Из общего числа в 260 различных исходно выделенных бактериальных штаммов только для 9 удалось выявить существенное подавление размножения ротавирусов. Различные
бактерии были идентифицированы как относящиеся к роду Lactobacillus вида rhamnosus или paracasei. Один штамм, обозначенный как Lactobacillus casei ST11, который был депонирован в соответствии с Будапештским Договором с получением депозитарного номера NCC-2461 (I-2116), как было показано, является исключительно эффективным в предотвращении заражения клеток человека ротавирусом. Более того, данный конкретный штамм проявляет отличные ростовые качества, что можно видеть при подкислении различных культуральных сред. Этот штамм также характеризуется хорошей устойчивостью, на что указывает уровень выживаемости в ходе хранения при низких температурах на уровне примерно 10°С, что делает его отличным перспективным компонентом для включения в состав пищевых продуктов или фармацевтических композиций, для которых предусматривается хранение в условиях холодильника.
Тесты на антипатогенные бактерии
Для оценки антибактериальных свойств были выбраны следующие подходы. В соответствии с одним из способов культивируемые штаммы Lactobacillus по настоящему изобретению были исследованы на их способность предотвращать адгезию патогенных бактерий, вызывающих диарею, с клетками кишечника или инвазию в кишечные клетки соответственно. Для этого клетки кишечника контактировали с патогенными бактериями и культивируемыми штаммами Lactobacillus по настоящему изобретению с последующей оценкой уровня адгезии или инвазии соответственно. В соответствии со вторым способом надосадочную фракцию культуры клеток штаммов Lactobacillus по настоящему изобретению добавляли вместе с патогенными микроорганизмами к клеткам кишечника с последующей оценкой уровня адгезии или инвазии соответственно. В процессе эксперимента можно видеть, что подтверждается исключительная эффективность культивируемых молочных бактерий и надосадочной фракции в предотвращении как адгезии, так и инвазии клеток кишечника: это указывает на то, что соединения-метаболиты, секретируемые новыми микроорганизмами, по-видимому, обеспечивают противодиарейную активность, направленную на патогенную бактерии.
В дополнение в сказанному выше неожиданно удалось установить, что штаммы также проявили противоаллергические свойства благодаря тому, что упомянутые штаммы участвуют в регуляции синтеза различных иммунных модуляторов.
В целом известно, что гуморальные иммунные ответы и аллергические реакции опосредуются Т-лимфоцитами CD4+ фенотипа Th2. Клетки Th2 характеризуются выработкой высоких уровней интерлейкина-4 (IL-4) - цитокина, необходимого для секреции IgE, который представляет собой основной класс иммуноглобулинов, связанных с аллергическими реакциями.
Дифференцировка клеток Th2 нарушается γ-интерфероном цитокином, происходящим от проявляющей эффект взаимного исключения популяции СD4-позитивных Т-клеток фенотипа Тh1. Упомянутые клетки Тh1, в свою очередь, интенсивно индуцируются интерлейкином-12 (IL-12). В противоположность этому другой цитокин - IL-10, - как было показано, обладает мощным эффектом супрессии в отношении пролиферации клеток Th1: следовательно, считается, что он участвует в иммуносупрессионных механизмах.
Таким образом, и IL-12 и IL-10 обладают мощным модулирующим действием в отношении дифференцировки Т-клеток CD4+ за счет влияния на развитие популяции Th1. IL-12 является ключевым регуляторным цитокином с точки зрения индукции дифференцировки Th1, что тем самым подавляет выработку ответов Th2. Основным механизмом подавления клеток Th2, следовательно, считается стимуляция синтеза IL-12 вспомогательными клетками.
Хорошо известно, что некоторые компоненты грамотрицательных бактерий, такие как липополисахариды (ЛПС), индуцируют высокие уровни IL-12 в адхерентных (“прилипших”) клетках, таких как макрофаги и дендритные клетки. Следовательно, было установлено, что грамотрицательные бактерии способны обусловливать существенный сдвиг дифференцировки Т-клеток CD4+ в сторону фенотипа Th1.
Микроорганизм ST11, являющийся примером штамма Lactobacillus по настоящему изобретению, был протестирован на его возможное участие в индукции цитокинов, вовлеченных в регуляцию дифференцировки Т-клеток CD4+. В частности, было исследовано влияние ST11 на фенотип Т-клеток CD4+, претерпевающих дифференцировку в направлении Th2.
В связи с этим способность ST11 индуцировать синтез мРНК, кодирующую эти два регуляторных цитокина в адхерентных клетках, происходящих от костного мозга, сравнивали с 4 другими штаммами Lactobacillus и контрольными грамотрицательными бактериями (E.coli K12). мРНК измеряли с помощью полуколичественной RT-PRC через 6 часов инкубации клеток с различными разведениями бактерий в диапазоне от 109 до 107 КОЕ/мл.
Хотя все штаммы Lactobacillus могут в некоторой степени индуцировать транскрипцию мРНК IL-12, штамм ST11, как было показано, оказывается наиболее мощным индуктором, потому что наиболее мощный сигнал в ПЦР может быть выявлен даже при наименьшей дозе бактерий. Действительно, способность ST11 индуцировать транскрипцию мРНК IL-12 была такой же сильной, что и у E.coli. Индукция мРНК IL-10 была в целом слабее по сравнению с мРНК IL-12, поскольку только при наибольших дозах бактерий может быть выявлен сигнал. Однако ST11 был наиболее сильным индуктором мРНК IL-10 по сравнению с другими молочными бактериями и контрольной E.coli.
Таким образом, считается, что ST11 будет индуктором иммунорегуляторных цитокинов, участвующих в дифференцировке Т-клеток CD4+. Его способность к интенсивной индукции IL-12 делает его вероятным средством подавления ответов Th2, a существенная индукция им IL-10 может предотвращать воспалительные ответы.
В дополнение к указанным выше данным также анализировали, проявляет ли ST11 эффект по подавлению Т-клеток CD4+, претерпевающих дифференцировку в Th2, и положительное действие на функции Th1. Использовали хорошо отработанную систему культивируемых клеток, способных дифференцироваться, в которой Т-клетки-предшественики CD4+ активировали по поликлональному типу и направляли на дифференцировку в фенотип либо Th1, либо Th2, что зависело от типа костимулятора, включаемого в культуральную среду. Дифференцировку Тh1/Th2 индуцировали в течение 7-дневной первичной культуры, после чего клетки повторно стимулировали в течение 2 дней во вторичной культуре, содержащей чистую питательную среду, а приобретение конкретного фенотипа (Th1 или Th2) оценивали путем определения типов цитокинов, секретируемых в надосадочную фракцию (γ-интерферон или IL-4).
Известно, что Т-клетки-предшественники CD4+ мышей генетического типа BALB/c предпочтительно дифференцируются в преобладающий фенотип Th2 (высокий уровень IL-4, низкий уровень γ-интерферона в надосадочных фракциях вторичной культуры) после активации в нейтральных условиях (только питательная среда в первичной культуре). Такой фенотип может быть полностью ревертирован в фенотип Th1 (высокий уровень γ-интерферона, низкий уровень IL-4) путем добавления в первичную культуру блокирующего моноклонального антитела, специфичного по отношению к IL-4.
Для изучения возможной роли ST11 в подавлении Th2 очищенные Т-клетки-предшественники CD4+ мышей BALB/c активировали в процессе первичного культивирования в присутствии адхерентных клеток костного мозга, выполняющих функции вспомогательных клеток. Эти клетки культивировали совместно либо только в питательной среде либо в присутствии 1 мг/мл ЛПС, или 108 КОЕ/мл ST11, или 108 КОЕ/мл другого Lactobacillus. После этого клетки промывали, и Т-клетки CD4+ снова очищали и повторно стимулировали во вторичной культуре в “пустой” питательной среде. Цитокины, вырабатываемые дифференцированными Т-клетками CD4+, анализировали через 2 дня. Как и ожидалось, клетки, дифференцировавшиеся в присутствии только питательной среды, проявляли преобладающий фенотип Th2. Добавление ST11 в первичную культуру жестко изменяло результат Тh2-дифференцировки, следствием чего являлось 8-кратное усиление выработки IL-4. Такое подавление было по уровню сходным с подавлением, наблюдаемом в культурах, происходящих от клеток, которые дифференцировались в присутствии ЛПС. Напротив, другие штаммы Lactobacillus не влияли в сколько-нибудь существенной степени на уровни IL-4. Интересно, что уровни γ-интерферона в результате добавления ST11 в первичные культуры не возрастали.
Таким образом, ST11 специфически нарушает выработку IL-4 Т-клетками CD4+, претерпевающими дифференцировку в Th2, но в существенной степени не увеличивает секрецию γ-интерферона. Тот факт, что ST11 не увеличивает выработку γ-интерферона, может объясняться его способностью индуцировать IL-10, следствием чего может являться поддержание низкой воспалительной активности, несмотря на его активность против Th2.
Следовательно, удалось показать, что ST11 является штаммом Lactobacillus, для которого характерно свойство эффективного противодействия Th2, что делает его прекрасным вероятным средством для использования в качестве бактерии, обладающей свойствами противоаллергического пробиотического средства.
Далее настоящее изобретение будет описано с помощью примеров, которые не должны восприниматься как ограничивающие, но как иллюстрирующие осуществимость изобретения
Культуральные среды и растворы
MRS (Difco)
Hugo-Jago (триптон Difco - 30 г/л, дрожжевой экстракт Difco - 10 г/л, лактоза Difco - 5 г/л, КН2РO4 - 5 г/л, мясной экстракт Difco - 2 г/л, агар Difco - 2 г/л)
М17 (Difco),
М199 (Seromed),
физиологический раствор (Oxoid),
ФСБ (NaCl - 8 г/л, КСl - 0,2 г/л, Na2HPO4 - 1,15 г/л, КН2РO4 - 0,2 г/л),
триптозо-фосфатный бульон (Flow),
раствор трипсина-ЭДТА (Seromed).
Ротавирус человека Wa (серотип G1) и обезьяний ротавирус SA-11 (серотип G3) были получены от Р.A.Of fit. Children’s Hospital of Philadelphia, США. Рекомбинантный вирус DS-1×RRV был получен от A.Kapikian, NIH Bethesda, США. Серотип-4 ротавируса человека Hochi был получен от P.Bachmann, University of Munich, Германия. E.coli DAEC-C-1845 получили из Washington University, Seattle, a E.coli JPN15 получили из Center for Vaccine Development, University of Maryland, США. Salmonella typhimurium штамма SL1334 была получена из Department of Microbiology, Stanford University, CA, США.
Пример 1
Выделение молочнокислых бактерий из детских испражнений
Свежие фекалии были взяты из пеленок 16 здоровых детей в возрасте 15-27 дней. По 1 г свежих фекалий помещали в бескислородные условия для доставки в лабораторию, и микробиологический анализ проводили в течение 2 часов на материале серий разведений образца в физиологическом растворе путем высева на селективную среду. Агар MRS с антибиотиками (фосфомицин 80 мкг/мл, сульфаметоксазол 93 мкг/мл, триметоприм 5 мкг/мл), проинкубированный при 37°С в течение 48 часов, использовали для выделения молочнокислых бактерий. Колонии случайным образом вырезали и очищали. На материале изолятов определяли физиологические и генетические характеристики.
Пример 2
Тестирование штаммов в клеточной культуре на противоротавирусную активность
Некоторые роды бактерий, включая Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus, были отобраны и протестированы на их представителей, которые проявляют противоротавирусную активность в тесте на ингибирование в клеточной культуре. Род Lactococcus был представлен единственным видом (L.lactis), включающим два подвида (L.lactis supsp. lactis и L.l.cremoris). Всего было протестировано 30 штаммов. Род Streptococcus был представлен единственным видом (S.thermophilus) с 45 штаммами. Роды Leuconostoc и Propionibacterium были представлены единственными видами (6 штаммов), в то время как роды Enterococcus и Staphylococcus были представлены двумя видами каждый, включая всего 17 штаммов.
Всего на активность по подавлению ротавирусов были протестированы 260 бактериальных штаммов.
1-й способ:
30 мкл бактериальной суспензии (содержащей в среднем 3×106 бактерий) смешивали с 70 мкл среды M199, дополненной 10% триптозо-фосфатного бульона (Flow) и 5% раствора трипсина-ЭДТА (Seromed) (в соотношении 1:4 в случае клеток НТ-29), и 100 мкл вируса в дополненной среде М199. Смесь бактерий с вирусом инкубировали в течение 1 часа при 4°С и в течение 1 часа при 37°С. Недифференцированные клетки аденомы толстой кишки человека НТ-29, растущие до стадии слившегося монослоя на 96-луночных микротитровальных планшетах, трижды промывали фосфатно-солевым буфером (ФСБ: рН 7,2). Смесь бактерий с вирусом добавляли к клеткам, и микротитровальные планшеты инкубировали в течение 18 часов в углекислотном инкубаторе (Heraeus). Размножение вируса оценивали в соответствии с описанным далее.
2-й способ:
30 мкл бактериальной суспензии (см. выше) смешивали с 70 мкл среды М199, дополненной 10% триптозо-фосфатного бульона (Flow) и 5% раствора трипсина-ЭДТА (Seromed) (в соотношении 1:4 в случае клеток НТ-29), и вносили непосредственно в клетки на микротитровальных планшетах. После 1-часовой инкубации при 37°С к клеткам на микротитровальных планшетах добавляли 100 мкл вируса в дополненной среде M199. Инкубацию продолжали в течение 18 часов в углекислотном инкубаторе (Heraeus). Размножение вируса оценивали в соответствии с описанным далее.
Размножение ротавирусов оценивали с помощью гисто-иммунологического окрашивания ротавирусных белков в инфицированных клетках в соответствии с описанным здесь далее.
Через день после инфицирования культуральную среду удаляли из микротитровальных планшетов, и клетки фиксировали абсолютным этиловым спиртом в течение 10 минут. Этанол удаляли, и планшеты трижды промывали в буфере ФСБ. После этого
50 мкл антиротавирусной сыворотки (в основном специфична в отношении белка VP6), сформированной кроликами (полученных от ISREC, University of Lausanne) и разведенной 1:2000 в ФСБ, добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 1 часа при 37°С, накрыв покровным стеклом для предотвращения обсыхания лунок. После этого антисыворотку удаляли, и планшеты трижды промывали в ФСБ. Затем 50 мкл козьей антикроличьей иммуноглобулиновой-G (IgG) антисыворотки, соединенной с пероксидазой (GAR-IgG-PO; Nordic), добавляли в разведении 1:500 в ФСБ в каждую лунку, и планшеты инкубировали в течение 1 часа при 37°С. Сыворотку удаляли, и планшеты опять три раза промывали в ФСБ. Затем в каждую лунку добавляли по 100 мкл следующей субстратной смеси: 10 мл 0,05 М Трис-гидрохлорида (рН 7,8), 1 мл Н2O2 (30% Suprapur, разведение 1:600 в воде: Merck) и 200 мкл 3-амино-9-этилкарбазола (0,1 г на 10 мл этанола, хранение в 200-мкл аликвотах при -80°С; А-5754, Sigma). Планшеты инкубировали в течение по крайней мере 30 минут при комнатной температуре. Субстрат удаляли, и лунки заполняли 200 мкл Н2О для остановки реакции. Очаги инфицированных клеток подсчитывали с помощью инверсионного микроскопа (Diavert, Leitz).
Только очень небольшое число бактериальных штаммов взаимодействовало с ротавирусами. Всего 9 из 260 исходно отобранных бактериальных клеток подавляли размножение ротавирусов по крайней мере в одном из способов. Lactobacillus paracasei NCC-2461 (ST11) показала исключительно высокий уровень активности против ротавируса серотипа 1, ротавируса SA-11 серотипа 3 и ротавируса Hochi серотипа 4.
Пример 3
Культивирование клеток Сасо-2
Для тестов на подавление (патогенных) бактерий клеточную линию Сасо-2 использовали в качестве модели кишечника. Для этой клеточной линии характерны такие свойства кишечных клеток, как, например, поляризация, экспрессия кишечных ферментов, выработка специфичных структурных полипептидов и т.п.
Клетки культивировали на трех разных носителях, а именно на корнинговских пластмассовых чашках (25 см2: Corning) для роста и размножения, на обезжиренных и стерилизованных 6-луночных стеклянных планшетах (22 × 22 мм; Corning) для тестов на адгезию и на 24-луночных стеклянных планшетах (Corning) для тестов на ингибирование.
Со второго дня культивирования питательную среду (DMEM) заменяли ежедневно. Перед использованием культуральную среду дополняли 100 ед./мл пенициллина/стрептомицина, 1 мкг/мл амфотерина и 20% ПТС, инактивированной нагреванием до 56°С в течение 30 минут. Культивирование проводили при 37°С в атмосфере, содержащей 90% воздуха и 10% СO2. Клетки расщепляли каждые шесть дней. Клетки отделяли от стенок лунок с помощью обработки ФСБ с 0,25% трипсина и 3 мМ ЭДТА при рН 7,2. Для нейтрализации действия трипсина равный объем ПТС добавляли к полученной клеточной суспензии, смесь центрифугировали (10 минут при 1000 об/мин), и полученный осадок опять ставили в культуру. Примерно 3,5×105 клеток переносили в новый сосуд для культивирования и культивировали до стадии слияния монослоя.
Пример 4
Культивируемые бактерии ST11:
Бактериальный штамм хранили при -20°С в культуральной среде MRS, содержащей 15% глицерина. Этот штамм культивировали при бескислородных условиях в MRS и дважды переносили в новую среду с интервалами в 24 часа перед использованием в тестах на подавление. Для анализа использовали концентрацию 2×109 КОЕ/мл.
Надосадочную фракцию собирали центрифугированием в течение 1 часа при 20000 об/мин, и полученную надосадочную фракцию после этого проверяли на присутствие бактерий.
E.coli:
Использовали два штамма E.coli - E.coli DAEC-C-1845 (диффузная адгезионная E.coli) и E.coli JPN15 (ЕРЕС; энтеропатогенная кишечная палочка E.coli).
Первый пересев после оттаивания проводили на агар CFA -Muller Hinton, который пригоден для обеспечения экспрессии бактерией адгезионных факторов.
Перед каждым экспериментом бактериальные клетки инкубировали при 37°С с переносом в новую среду, осуществляемым дважды по прошествии каждых 24 часов. Поскольку штамм JPN15 несет ген резистентности к ампициллину, то упомянутый антибиотик использовали для отбора в процессе роста.
Salmonella:
В экспериментах использовали Salmonella typhimurium штамма SL1334, которую до использования культивировали в среде LB.
Пример 5
Тест на подавление E.coli
После второго пересева в новую питательную среду штаммы патогенных бактерий помечали радиоактивным изотопом с использованием 14С-ацетата при дозе 10 мКи/мл в среде LB. Инкубацию штаммов в этой культуральной среде проводили в течение 18 часов при 37°С.
После этого бактериальную суспензию подвергали центрифугированию (1041 g, 15 минут) таким образом, чтобы удалить надосадочную фракцию с остатками 14С-ацетата. Сгусток суспендировали и промывали в ФСБ, и клетки суспендировали при концентрации примерно 108 клеток на 1 мл в 1%-ной стерильной маннозе. Известно, что манноза подавляет неспецифическую адгезию.
Различные патогенные бактериальные штаммы (E.coli) приводили в контакт с монослоем клеток Сасо-2 (37°С, 10% СO2, 90% воздуха) в течение 3 часов. Такой же эксперимент проводили с использованием надосадочной фракции (полученной путем центрифугирования при 20000 об/мин в течение 40 минут).
В качестве контроля патогенных бактерий контактировали с монослоем Сасо-2 без одновременного добавления ST11 или культуральной надосадочной фракции соответственно.
После инкубации в течение 3 часов культуральную среду заменяли, и монослой трижды промывали в ФСБ. Каждый этап промывки включает 20х перемешивание в растворе ФСБ таким образом, чтобы удалить по существу всю неспецифическую адгезию. После этого клетки лизировали добавлением 1 мл карбоната натрия и 40-минутной инкубацией при 37°С. После гомогенизации аликвоту (250 мкл) разводили в 5 мл сцинтилляционной жидкости (Hionic-fluor Packcard) и проводили подсчет (Packard-2000). Процент адгезии патогенных клеток с клетками Сасо-2 подсчитывали как отношение к контролю, умноженное на 100% (уровень адгезии; или инвазии в примере 6).
Пример 6
Тест на подавление сальмонелл
Сальмонеллы - это бактерии, которые инвазируют эпителиальные клетки и размножаются в них. Для определения ингибиторной активности ST11 клетки Salmonella typhimurium штамма SL1334 инкубировали в соответствии с описанным выше в среде, содержащей 14С-ацетат, и включали в эксперимент, описанный в примере 5.
После инкубации клетки Сасо-2 промывали в ФСБ так, чтобы удалить все несоединившиеся клетки. После этого добавляли культуральную среду, содержащую гентамицин (20 мкг/мл), и инкубацию продолжали в течение 1 часа при 37°С. Гентамицин является антибиотиком, не проникающим в кишечные клетки, в результате чего все внеклеточные микроорганизмы уничтожаются, в то время как сальмонеллы, уже проникшие в клетки кишечника, остаются живыми. После двукратной промывки клеток в ФСБ их лизировали добавлением стерильной дистиллированной воды, и уровень радиоактивности измеряли в соответствии с описанным в примере 4.
Результаты экспериментов 5 и 6 показаны на фигурах 6-9. Можно видеть, что культивируемые клетки ST11 и культуральная надосадочная фракция были исключительно эффективными в предотвращении адгезии и инвазии кишечных клеток патогенными микроорганизмами, вызывающими диарею.
Пример 7
Свойства ST11
ST11 инкубировали в модели желудочного сока. Модельный желудочный сок приготавливали путем суспендирования пепсина (3 г/л) в стерильном физиологическом растворе (0,5%; маc/об) с доведением рН до 2,0 и рН 3 соответственно с помощью
концентрированной НСl. ST11 культивировали при различных количествах указанной выше среды с определением резистентности микроорганизмов.
Полученные результаты суммированы ниже в таблице 1.
| Таблица 1 | |||||
| рH | КОЕ/мл при Т=0 | КОЕ/мл при Т=1 мин | КОЕ/мл при Т=15 | КОЕ/мл при Т=30 | КОЕ/мл при Т=60 |
| 2,0 | 2,0×109 | 1,8×109 | 1,2×109 | 3,7×108 | 7,0×103 |
| 3,0 | 2,0×109 | 1,9×109 | 1,7×109 | 1,7×108 | 8,4×108 |
ST11 обладает следующими свойствами в соответствии с определениями с помощью способов, описанных в "Genera of lactic acid bacteria", eds. B.J.B.Wood & W.H.Holzapfel, Blackie A&P.:
- грамположительные;
- негативные по каталазе;
- негативные по NН3-образованию аргинина;
- негативные по выработке СО2;
- выработка L(+)-молочной кислоты;
- рост в присутствии солей желчных кислот в концентрации вплоть до примерно 0,4%.
Пример 8. Рост ST11 при различных условиях
ST11 инкубировали при 37°С в среде на основе помидора (4% помидорного порошка, регидратированного дистиллированной водой), дополненной сахарозой (0, 0,5, 1 или 2%) или соевым пептоном (0,5%), или глюкозой (0,5%) в течение различных периодов времени. Полученные результаты показаны на фиг.2.
ST11 дополнительно добавляли в количестве 2,5% к культуральной среде, составленной рисовой мукой (3%), пшеничной мукой (2%) и сахарозой (3%), и инкубировали при 37°С до достижения рН 4,4. После охлаждения полученный продукт расфасовывали с добавлением витамина С или без него и хранили при 10°С.
Пример 9
Индукция синтеза мРНК IL-12 и IL-10 в адхерентных клетках мыши ST11
Костномозговые клетки были выделены из бедренной и большеберцовой костей 8-недельных, свободных от конкретного патогена мышей линии C57BL/6, и проинкубированы при концентрации 2×106 клеток на 1 мл в культуральной среде RPMI (Gibco), содержащей 10% плодной телячьей сыворотки, 1 мМ L-глутамина, 12 мМ HEPES, 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (все реагенты от фирмы Gibco), в течение 12 часов при 37°С в атмосфере при 5% CO2. Неслившиеся клетки удаляли путем 3 последовательных промывок теплой культуральной средой, и оставшиеся слившиеся (адхерентные) клетки собирали и инкубировали при концентрации 106 клеток на 1 мл в течение 6 часов в присутствии или отсутствие бактерий. Ранее было установлено, что 6 часов соответствуют оптимальному отрезку времени для синтеза мРНК цитокинов в мышиных адхерентных клетках в ответ на ЛПС. Бактерии добавляли при различных концентрациях в диапазоне от 109 до 107 КОЕ/мл. Бактерии культивировали и хранили в соответствии с описанным выше.
По окончании 6-часового периода культивирования клетки выделяли центрифугированием и лизировали с использованием набора реагентов TRIzol (Gibco BRL, № по каталогу 15596-018) в соответствии с инструкциями производителя. Тотальную (общую) РНК выделяли путем преципитации изопропанолом и конвертировали в кДНК в реакции обратной транскрипции в течение 90 минут при 42°С с использованием 200 ед. обратной транскриптазы (Superscript II, BRL) в объеме реакции 40 мкл, содержащем 200 мМ Трис (рН 8,3), 25 мМ КСl, 1 мкг/мл олиго-д(Т)15 (Boehringer Mannheim), 1 мМ дитиотреитола (Boehringer Mannheim), по 4 мМ каждого из dNTP (Boehringer Mannheim) и 40 ед./мл Rnasin (Promega). Праймеры и условия ПЦР были использованы в соответствии с уже описанным у Kopf et al. (Journal of Experimental Medicine, 1996, 184 [3], 1127-1136). Количество кДНК нормализовали по образцам с использованием праймеров, специфичных для гена “домашнего хозяйства” (α2-микроглобулин). ПЦР-продукты разделяли в 2%-ном агарозном геле, и бэнды проявляли в УФ.
Как показано на фигуре 4, ST11 проявил наивысший уровень индукции мРНК IL-12 и IL-10, который сравним с уровнями, наблюдаемыми с использованием позитивного контроля (E.coli). Различия были наиболее отчетливыми при наименьших концентрациях бактерий (107 КОЕ/мл).
Пример 10
Подавление синтеза IL-4 действием ST11
Т-клетки CD4+ очищали из селезенки свободных от конкретного патогена мышей BALB/c с использованием набора MiniMACS от фирмы Miltenyi Biotec (№ по каталогу 492-01). Т-клетки CD4+ культивировали в концентрации 2×105 клеток на 1 мл в среде RPMI, содержащей 10% плодной телячьей сыворотки, 1 мМ L-глутамина, 12 мМ HEPES, 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола, 100 ед./мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина, и активировали в течение одной недели путем перекрестного сшивания со связанными на планшете моноклональными антителами, специфичными в отношении CD3 (клон 2С11) и CD28 (клон 37.51; оба антитела от Pharmingen). В процессе этого первичного культивирования Т-клетки CD4+ культивировали совместно с адхерентными клетками костного мозга (выделенными в соответствии с описанным выше), взятыми в качестве вспомогательных клеток, а также 108 КОЕ/мл ST11 или 108 КОЕ/мл Lal, или 1 мг/мл ЛПС, или только культуральной среды. По прошествии указанного времени клетки промывали, и Т-клетки CD4+ очищали опять с использованием набора MiniMACS и повторно стимулировали во вторичной культуре, содержащей только питательную среду. Цитокины, вырабатываемые дифференцированными Т-клетками CD4+, анализировали в надосадочных фракциях через 2 дня с использованием “сэндвич”-варианта ТИФА (наборы реактивов от Endogen и Pharmingen).
Полученные результаты показаны на фигуре 5. Клетки, дифференцировавшиеся в присутствии только питательной среды, проявляли преобладающий фенотип Th2, характеризующийся высоким уровнем IL-4. Добавление ST11 к первичным культурам жестко модулирует результат Тh2-дифференцировки, что приводит к 8-кратному снижению выработки IL-4. Это подавление имело тот же порядок, который наблюдается в культурах, происходящих от клеток, дифференцировавшихся в присутствии ЛПС. В противоположность этому другой штамм Lactobacillus не обладал выявляемым эффектом в отношении уровней IL-4. Интересно, что уровни γ-интерферона не возрастали после добавления ST11 к первичным культурам.
Как можно видеть из изложенного выше, штаммы по настоящему изобретению могут быть эффективно приготовлены для получения пищевого и/или фармацевтического носителя, сохраняющего преимущества ценных свойств микроорганизмов.
Пример 11
Штамм ST11 тестировали в клинических испытаниях в группе жителей предместий Гватемалы по его способности влиять на передачу и распространение острой связанной с сезоном дождей диареи, поражающей большинство детского населения этого региона. Всего в анализ были вовлечены 203 ребенка в возрасте 35-70 месяцев, которые получали вместе с пищей дозу 1010 живых организмов (ST11) или не получали ее (плацебо) за период в 29 дней. Дети, отобранные и в экспериментальную, и в контрольную группы, соответственно имели характерные для соответствующего возраста признаки недостаточного веса и роста из-за недоедания.
Перед началом пищевых испытаний на детях дошкольного возраста была проведена оценка безопасности с помощью тестов in vitro и in vivo. Анализ in vitro выявил параметры резистентности к антибиотикам, сходные с таковыми у других молочных бактерий, используемых для приготовления пищевых продуктов, а также отсутствие возможного образования биогенных аминов и потенциала по разрушению муцина и деконъюгированию солей желчных кислот. В плацебоконтролируемом клиническом испытании, включавшем 42 взрослых добровольца, была установлена хорошая переносимость ST11 и отсутствие индукции каких-либо вредных эффектов в группе контролируемых возможных проявлений, таких как метеоризм, количество испражнений за сутки и консистенция испражнений; не отмечено повышения уровней белков острой фазы в сыворотке, которые могли бы иметь отношение к воспалительной реакции.
Образцы и плацебо были упакованы в пакетики в соответствии с технологией Nestle Product Technology Center в условиях фабрики в Конольфингене (Швейцария), после чего отправлены в Гватемалу в холодильнике. Каждая 10 г упаковка содержала ароматизированный шоколадом наполнитель и либо 0,2 г ST11 (1010 КОЕ), либо в случае плацебо 0,2 г сухого молока. Ароматизированный шоколадом наполнитель содержал какао-порошок, сахар, лецитин сои, ванилин и корицу. Упаковки хранили при 4-6°С вплоть до 2 часов до начала их использования. Перед использованием содержимое упаковки должно быть растворено в 100 мл воды, предоставляемой Nestle, которая лишена какого бы то ни было бактериального загрязнения.
В соответствии с применяемым протоколом, диарею диагностировали как наличие трех или большего числа жидких или бесформенных испражнений за 24 часа. Приступ диареи определяли как событие, подтверждающее наличие поноса (диареи) (три испражнения диарейного типа за 24 часа). Ее общую продолжительность в часах подсчитывали от момента первого из трех регистрируемых испражнений до появления первого оформленного испражнения или до 24-часого периода полного отсутствия дефекации. Наличие “нового” приступа у ребенка определяли по прошествии 48 часов после окончания предыдущего приступа. Если этого не происходило, то тот же самый приступ считался продолжающимся, и для оценки использовали величину его общей продолжительности. Отмечали детей, для которых было задокументировано два или большее число приступов диареи в течение 29-дневного периода наблюдений. Интенсивность приступа определяли по общему числу случаев слабого стула. Элементами тяжести приступа считали присутствие крови, слизи или гноя в испражнениях наряду с симптомами лихорадки и рвоты. Интенсивность в 7 испражнений за 24 часа или необходимость вмешательства профессионального врача в условиях клиники, центра здоровья или госпиталя также классифицировали как тяжелый приступ.
Когда приступ диареи диагностировали в условиях непосредственного обследования, то брали образец диарейного стула для микроскопического анализа и посева с целью идентификации возможных патогенов-возбудителей данного приступа. Образец диагностировали на ротавирусный антиген, лямблии и дизентерийную амебу в том случае, когда образец был дизентерийным, а также на бактериальные патогены, включая Shigella, Salmonella, Aeromonas, Plesiomonas shigelloides, E.coli и, возможно, холерного вибриона.
За период исследований образцы продуктов собирали с целью анализа жизнеспособности микроорганизмов, включая период введения. Можно было видеть, что микроорганизм сохранял жизнеспособность в упаковках в течение всего периода исследования так, что даже в конце исследования упаковки были способны дать по 1010 живых микроорганизмов после разведения в воде.
Исследование показало, что образец, содержащий пробиотический микроорганизм, может снижать распространение поноса по сравнению с контрольной группой (плацебо) примерно на 30%. Также контрольная группа уже проявляла сниженную частоту встречаемости поноса по сравнению с нормальной популяцией, не получавшей, соответственно ни образцов, ни плацебо. Это последнее наблюдение отчасти можно объяснить тем, что дети получали дополнительное полноценное питание и чистую воду. Однако поскольку анализ был проведен в полевых условиях, то можно сделать четкий вывод о том, что ST11 может надежно снижать распространение диареи in vivo.
Claims (3)
1. Штамм Lactobacillus paracasei CNCM I-2116 (NCC 2461), обладающий способностью предотвращать колонизацию кишечника патогенными бактериями, вызывающими диарею, и предотвращать заражение эпителиальных клеток кишечника ротавирусами.
2. Пищевой продукт, характеризующийся тем, что он содержит от 1·105 до 1·1012 КОЕ штамма Lactobacillus paracasei 1-2116 (NCC 2461)/г пищевого носителя, выбранного из молока, йогурта, творога, сыра, ферментированного молока, ферментированных продуктов на основе молока, мороженого, продуктов на основе ферментированных хлебных злаков, сухого молока, детского питания.
3. Фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения заболеваний, связанных с диареей, содержащая эффективное количество КОЕ штамма Lactobacillus paracasei CNCM I-2116 (NCC 2461) или надосадочной фракции его культуры и физиологически приемлемый носитель, выбранный из молока, йогурта, творога, сыра, ферментированного молока, ферментированных продуктов на основе молока, мороженого, продуктов на основе ферментированных хлебных злаков, сухого молока, детского питания, таблеток, жидких бактериальных суспензий, сухих пищевых добавок, влажных пищевых добавок, сухих пищевых тюбиков или влажных пищевых тюбиков.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99104922A EP1034787A1 (en) | 1999-03-11 | 1999-03-11 | Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria |
| EP99104922.2 | 1999-03-11 | ||
| EP99104924.8 | 1999-03-11 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2001127527A RU2001127527A (ru) | 2003-07-20 |
| RU2247569C2 true RU2247569C2 (ru) | 2005-03-10 |
Family
ID=8237746
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001127528/13A RU2243779C2 (ru) | 1999-03-11 | 2000-03-02 | Штамм молочно-кислых бактерий lactobacillus paracasei cncm i - 2116 (ncc 2461), обладающий способностью предотвращать колонизацию кишечника патогенными бактериями, вызывающими диарею, супернатант его культуры и принимаемое внутрь средство для профилактики и/или лечения нарушений, ассоциируемых с диареей |
| RU2001127527/13A RU2247569C2 (ru) | 1999-03-11 | 2000-03-02 | Штамм lactobacillus paracasei cncm i-2116 (ncc 2461), обладающий способностью предотвращать колонизацию кишечника патогенными бактериями, вызывающими диарею, и предотвращать заражение эпителиальных клеток кишечника ротавирусами, пищевой продукт и фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения заболеваний, связанных с диареей |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001127528/13A RU2243779C2 (ru) | 1999-03-11 | 2000-03-02 | Штамм молочно-кислых бактерий lactobacillus paracasei cncm i - 2116 (ncc 2461), обладающий способностью предотвращать колонизацию кишечника патогенными бактериями, вызывающими диарею, супернатант его культуры и принимаемое внутрь средство для профилактики и/или лечения нарушений, ассоциируемых с диареей |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6835376B1 (ru) |
| EP (2) | EP1034787A1 (ru) |
| JP (1) | JP2002537865A (ru) |
| CN (1) | CN1350461A (ru) |
| AR (1) | AR022912A1 (ru) |
| AU (1) | AU779414B2 (ru) |
| BR (1) | BR0008911A (ru) |
| CA (1) | CA2364435A1 (ru) |
| CO (1) | CO5241327A1 (ru) |
| CZ (1) | CZ20013264A3 (ru) |
| HK (1) | HK1042657A1 (ru) |
| HU (1) | HUP0200205A3 (ru) |
| ID (1) | ID30438A (ru) |
| IL (2) | IL145079A0 (ru) |
| MY (1) | MY125941A (ru) |
| NO (1) | NO20014299L (ru) |
| NZ (1) | NZ513806A (ru) |
| PE (1) | PE20001557A1 (ru) |
| PL (1) | PL355226A1 (ru) |
| RO (1) | RO121701B1 (ru) |
| RU (2) | RU2243779C2 (ru) |
| WO (1) | WO2000053200A1 (ru) |
| ZA (2) | ZA200107290B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2452243C2 (ru) * | 2007-02-02 | 2012-06-10 | МАЙ Амадеус Александер | Натуральный продукт с пробиотическими микроорганизмами |
Families Citing this family (105)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7029702B2 (en) * | 1998-07-07 | 2006-04-18 | Ritter Natural Sciences Llc | Method for increasing lactose tolerance in mammals exhibiting lactose intolerance |
| SE523771C2 (sv) * | 1999-05-21 | 2004-05-18 | Probi Ab | Sportdryck innehållande mikronäringsämnen i kombination med levande laktobaciller |
| PL207930B1 (pl) * | 2000-05-25 | 2011-02-28 | Nestle Sa | Zastosowanie wyizolowanego probiotycznego szczepu bakterii kwasu mlekowego o aktywności probiotycznej, kompozycja pokarmowa i izolowany szczep bakterii kwasu mlekowego |
| SE0003100D0 (sv) | 2000-09-01 | 2000-09-01 | Probi Ab | New strains |
| SE0003576D0 (sv) * | 2000-10-04 | 2000-10-04 | Probi Ab | New strain |
| KR100419132B1 (ko) * | 2000-12-29 | 2004-02-18 | 조성근 | 위·장 점막 부착성과 증식성, 내산성, 내담즙성 및헬리코박터 파일로리, 대장균 0157:ｈ7에 대한 항균성이우수한 락토바실러스 파라카제이 서브스패시즈 파라카제이ｃｓｋ 01 |
| SE0103695D0 (sv) | 2001-11-07 | 2001-11-07 | Thomas Boren | A novel non-antibiotic strategy against OGIP infections based on a cereal product |
| US8460917B2 (en) | 2002-03-21 | 2013-06-11 | Bifodan A/S | Lactobacillus strains |
| JP4308481B2 (ja) * | 2002-06-18 | 2009-08-05 | 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 抗アレルギー剤 |
| EP1565547B2 (en) | 2002-06-28 | 2012-09-19 | Biosearch S.A. | Probiotic strains, a process for the selection of them, compositions thereof, and their use |
| EP1384483A1 (en) * | 2002-07-23 | 2004-01-28 | Nestec S.A. | Probiotics for treatment of irritable bowel disease (IBS) through improvement of gut neuromuscular function |
| JP2004189672A (ja) * | 2002-12-11 | 2004-07-08 | Gen Corp:Kk | 抗下痢症組成物 |
| TWI324068B (en) * | 2003-03-13 | 2010-05-01 | Kirin Holdings Kk | Antiallergic composition |
| EP1608737A1 (en) * | 2003-04-02 | 2005-12-28 | Axcan Pharma S.A | Lactobacillus fermentum strain and uses thereof |
| US20050158294A1 (en) | 2003-12-19 | 2005-07-21 | The Procter & Gamble Company | Canine probiotic Bifidobacteria pseudolongum |
| US8877178B2 (en) | 2003-12-19 | 2014-11-04 | The Iams Company | Methods of use of probiotic bifidobacteria for companion animals |
| MY143693A (en) | 2004-03-24 | 2011-06-30 | Nestec Sa | Shelf stable product wih living micro-organisms |
| ITRM20040166A1 (it) * | 2004-03-31 | 2004-06-30 | Alberto Cresci | Ceppi batterici lab con proprieta' probiotiche e composizioni che contengono gli stessi. |
| WO2006012536A2 (en) * | 2004-07-22 | 2006-02-02 | Ritter Andrew J | Methods and compositions for treating lactose intolerance |
| TW200637908A (en) * | 2005-01-04 | 2006-11-01 | Calpis Co Ltd | Method for preparation of lactic acid bacterium having anti-allergic activity |
| MX2007012697A (es) | 2005-04-13 | 2008-01-14 | Nestec Sa | Formula para infantes con probioticos. |
| US20060263311A1 (en) * | 2005-05-19 | 2006-11-23 | Scavone Timothy A | Consumer noticeable improvement in wetness protection using solid antiperspirant compositions |
| AU2006253006B8 (en) | 2005-05-31 | 2011-09-15 | Alimentary Health Ltd | Feline probiotic Lactobacilli |
| AU2006253007B2 (en) | 2005-05-31 | 2012-12-20 | Alimentary Health Ltd | Feline probiotic Bifidobacteria |
| PL1986669T3 (pl) | 2006-02-15 | 2012-09-28 | Nestec Sa | Zastosowanie Bifidobacterium longum do zapobiegania i leczenia zapalenia |
| BRPI0708689A2 (pt) | 2006-03-07 | 2011-06-07 | Nestec Sa | mistura simbiótica |
| EP1974735A1 (en) | 2007-03-28 | 2008-10-01 | Nestec S.A. | Reduction of risk of diarrhoea |
| CN101273738B (zh) * | 2007-03-28 | 2011-06-01 | 哈尔滨正方科技有限公司 | 在常温下保持高活菌数的调配型酸性乳饮料的制备方法 |
| EP1974743A1 (en) | 2007-03-28 | 2008-10-01 | Nestec S.A. | Probiotics to Improve Gut Microbiota |
| RU2469558C2 (ru) * | 2007-07-06 | 2012-12-20 | Н.В. Нютрисиа | Применение пробиотиков и волокон при диарее |
| US20090110663A1 (en) * | 2007-10-24 | 2009-04-30 | Halow George M | Method for treatment of bowel disorders |
| EP2072052A1 (en) | 2007-12-17 | 2009-06-24 | Nestec S.A. | Prevention of opportunistic infections in immune-compromised subjects |
| JP2011509677A (ja) | 2008-01-24 | 2011-03-31 | ネステク ソシエテ アノニム | 栄養原料を含むカプセル、及び、カプセルから栄養液体を送出する方法 |
| SG188887A1 (en) | 2008-03-14 | 2013-04-30 | Nestec Sa | Synbiotic mixture |
| EP2127661A1 (en) | 2008-05-27 | 2009-12-02 | Nestec S.A. | Probiotics to improve gut microbiotica |
| US9771199B2 (en) | 2008-07-07 | 2017-09-26 | Mars, Incorporated | Probiotic supplement, process for making, and packaging |
| US20110189148A1 (en) * | 2008-06-25 | 2011-08-04 | Ritter Pharmaceuticals, Inc. | Lactose compositions with decreased lactose content |
| EP2147678A1 (en) | 2008-07-21 | 2010-01-27 | Nestec S.A. | Probiotics to increase IgA secretion in infants born by caesarean section |
| ATE492628T1 (de) * | 2008-12-31 | 2011-01-15 | Syngen Biotech Co Ltd | Neues lactobacillus paracasei subsp. paracasei sg96, eine bakteriostatische zusammensetzung damit und verwendung davon |
| US20100196341A1 (en) * | 2009-02-05 | 2010-08-05 | Syngen Biotech Co., Ltd. | Novel Lactobacillus paracasei subsp. paracasei SG96, a Bacteriostatic Composition Containing the same and Use Thereof |
| WO2010098822A1 (en) | 2009-02-24 | 2010-09-02 | Ritter Pharmaceuticals, Inc. | Prebiotic formulations and methods of use |
| JP2012526752A (ja) * | 2009-05-11 | 2012-11-01 | ネステク ソシエテ アノニム | ビフィドバクテリウム・ロンガムｎｃｃ２７０５（ｃｎｃｍｉ−２６１８）及び免疫障害 |
| US10104903B2 (en) | 2009-07-31 | 2018-10-23 | Mars, Incorporated | Animal food and its appearance |
| WO2011069987A1 (en) | 2009-12-08 | 2011-06-16 | Nestec S.A. | Infant formula with probiotics and milk fat globule membrane components |
| WO2011137249A1 (en) | 2010-04-28 | 2011-11-03 | Ritter Pharmaceuticals, Inc. | Prebiotic formulations and methods of use |
| EP2510932A1 (en) * | 2011-04-15 | 2012-10-17 | Nestec S.A. | Lactobacillus paracasei NCC2461 (ST11) for use by perinatal maternal administration in the reduction and prevention of allergies in progeny |
| JP2014516589A (ja) | 2011-06-20 | 2014-07-17 | エイチ．ジェイ．ハインツ カンパニー | プロバイオティック組成物及び方法（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｍｅｔｈｏｄｓ） |
| DK2861242T3 (en) | 2012-06-18 | 2018-10-29 | Heinz Co Brands H J Llc | GLUTEN RELATED DISORDERS |
| BR112015028164B1 (pt) | 2013-05-10 | 2022-02-08 | H.J. Heinz Company Brands Llc | Usos da bactéria probiótica, lactobacillus paracasei, para tratar uma infecção microbiana e para prevenir ou reduzir a gravidade de uma infecção microbiana |
| ES2894034T3 (es) | 2014-12-05 | 2022-02-11 | Synlogic Operating Co Inc | Bacterias modificadas para tratar enfermedades asociadas con hiperamonemia |
| US9688967B2 (en) | 2014-12-05 | 2017-06-27 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat diseases associated with hyperammonemia |
| CA2969724A1 (en) | 2014-12-05 | 2016-06-09 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat diseases associated with hyperammonemia |
| WO2016183532A1 (en) | 2015-05-13 | 2016-11-17 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat a disease or disorder |
| US20160206666A1 (en) | 2014-12-22 | 2016-07-21 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat diseases that benefit from reduced gut inflammation and/or tighten gut mucosal barrier |
| CN107636146A (zh) | 2015-03-02 | 2018-01-26 | 同生公司 | 被工程化为治疗受益于降低的消化道炎症和/或收紧的消化道粘膜屏障的疾病的细菌 |
| EP3882259A1 (en) | 2015-05-13 | 2021-09-22 | Synlogic Operating Company, Inc. | Bacteria engineered to reduce hyperphenylalaninemia |
| JP6817966B2 (ja) | 2015-06-10 | 2021-01-20 | シンロジック オペレーティング カンパニー インコーポレイテッド | 高アンモニア血症に関連する疾患を治療するために操作された細菌 |
| WO2016210373A2 (en) | 2015-06-24 | 2016-12-29 | Synlogic, Inc. | Recombinant bacteria engineered for biosafety, pharmaceutical compositions, and methods of use thereof |
| WO2016210378A2 (en) | 2015-06-25 | 2016-12-29 | Synlogic, Inc. | Multi-layered control of gene expression in genetically engineered bacteria |
| WO2016210384A2 (en) | 2015-06-25 | 2016-12-29 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat metabolic diseases |
| EP3328988A1 (en) | 2015-07-31 | 2018-06-06 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat disorders involving propionate catabolism |
| US11273184B2 (en) | 2015-08-31 | 2022-03-15 | Synlogic Operating Company, Inc. | Bacteria engineered to treat disorders in which oxalate is detrimental |
| EP3988107A1 (en) | 2015-10-30 | 2022-04-27 | Synlogic Operating Company, Inc. | Bacteria engineered to treat diseases that benefit from reduced gut inflammation and/or tightened gut mucosal barrier |
| US11685925B2 (en) | 2015-10-30 | 2023-06-27 | Synlogic Operating Company, Inc. | Bacteria engineered to treat diseases that benefit from reduced gut inflammation and/or tightened gut mucosal barrier |
| WO2017075485A1 (en) | 2015-10-30 | 2017-05-04 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat disorders in which trimethylamine (tma) is detrimental |
| ES2925049T3 (es) | 2015-11-16 | 2022-10-13 | Synlogic Operating Co Inc | Bacterias manipuladas para reducir la hiperfenilalaninemia |
| WO2017123592A1 (en) | 2016-01-11 | 2017-07-20 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat disorders associated with bile salts |
| US11723932B2 (en) | 2016-01-11 | 2023-08-15 | Synlogic Operating Company, Inc. | Microorganisms programmed to produce immune modulators and anti-cancer therapeutics in tumor cells |
| WO2017123676A1 (en) | 2016-01-11 | 2017-07-20 | Synlogic, Inc. | Recombinant bacteria engineered to treat diseases and disorders associated with amino acid metabolism and methods of use thereof |
| WO2017123418A1 (en) | 2016-01-11 | 2017-07-20 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat metabolic diseases |
| WO2017123610A2 (en) | 2016-01-11 | 2017-07-20 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to detoxify deleterious molecules |
| WO2017136795A1 (en) | 2016-02-04 | 2017-08-10 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat diseases associated with tryptophan metabolism |
| WO2017136792A2 (en) | 2016-02-04 | 2017-08-10 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat diseases that benefit from reduced gut inflammation and/or tightened gut mucosal barrier |
| WO2017139708A1 (en) | 2016-02-10 | 2017-08-17 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat nonalcoholic steatohepatitis (nash) |
| WO2017139697A1 (en) | 2016-02-10 | 2017-08-17 | Synlogic, Inc. | Bacteria engineered to treat diseases associated with hyperammonemia |
| WO2018129404A1 (en) | 2017-01-06 | 2018-07-12 | Synlogic, Inc. | Microorganisms programmed to produce immune modulators and anti-cancer therapeutics in tumor cells |
| US10941433B2 (en) | 2017-06-15 | 2021-03-09 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Neurotransmitter transport in probiotics |
| CN111655841A (zh) | 2017-06-21 | 2020-09-11 | 同生运营公司 | 用于治疗紊乱的细菌 |
| US20200149053A1 (en) | 2017-07-12 | 2020-05-14 | Synlogic Operating Company, Inc. | Microorganisms programmed to produce immune modulators and anti-cancer therapeutics in tumor cells |
| WO2019090101A1 (en) | 2017-11-03 | 2019-05-09 | Synlogic Operating Company, Inc. | Engineered bacteria expressing racemase for treating diseases associated with hyperammonemia |
| US11274275B2 (en) | 2018-09-30 | 2022-03-15 | Inner Mongolia Yili Industrial Group Co., Ltd. | Lactobacillus paracasei ET-22 and use thereof |
| CN110960559B (zh) * | 2018-09-30 | 2021-02-26 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 用于抑制口腔病原菌的乳酸菌菌株的食品、口腔清洁以及医药组合物 |
| EP3963046A1 (en) | 2019-04-29 | 2022-03-09 | Synlogic Operating Company, Inc. | Enumeration of genetically engineered microorganisms by live cell counting techniques |
| MX2022000903A (es) | 2019-07-23 | 2022-02-14 | Frieslandcampina Nederland Bv | Composicion nutricional que comprende inmunoglobulina y grasa de la leche. |
| CA3151145A1 (en) | 2019-09-24 | 2021-04-01 | David N. Cook | Compositions and methods for treatment of inflammatory and immune diseases |
| EP4081229A1 (en) | 2019-12-24 | 2022-11-02 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Control of histamine to promote health and control enterocolitis using probiotic compositions and/or histamine degrading enzymes |
| CN113355252A (zh) * | 2020-03-06 | 2021-09-07 | 南京卫岗乳业有限公司 | 一种副干酪乳杆菌及其应用 |
| CN115298308A (zh) | 2020-03-20 | 2022-11-04 | 同生运营公司 | 经工程化以减轻高苯丙氨酸血症的微生物 |
| JP2023537608A (ja) | 2020-08-14 | 2023-09-04 | プロラクタ バイオサイエンス，インコーポレイテッド | 細菌療法で使用するためのヒトミルクオリゴ糖組成物 |
| EP4256039A2 (en) | 2020-12-02 | 2023-10-11 | Synlogic Operating Company, Inc. | Engineered microorganisms |
| WO2022146718A1 (en) | 2020-12-31 | 2022-07-07 | Synlogic Operating Company, Inc. | Microorganisms engineered to reduce hyperphenylalaninemia |
| CA3204530A1 (en) | 2021-01-12 | 2022-07-21 | Gregory Mckenzie | Synbiotic treatment regimens |
| CN112625983B (zh) * | 2021-03-05 | 2021-05-28 | 山东中科嘉亿生物工程有限公司 | 一种对腹泻有治疗效果的干酪乳杆菌L.Casei21及其应用 |
| CN112877260B (zh) * | 2021-03-30 | 2022-08-09 | 江南大学 | 一株缓解泻剂结肠的副干酪乳杆菌及其应用 |
| AU2022259522A1 (en) | 2021-04-13 | 2023-10-19 | Synlogic Operating Company, Inc. | Bacteria engineered to secrete active proteins |
| CN115671144A (zh) * | 2021-07-26 | 2023-02-03 | 锦乔生物科技有限公司 | 使用乳酸菌菌株的培养物来抑制肠道病原菌生长和预防和/或治疗与肠道病原菌有关的疾病 |
| WO2023044479A1 (en) | 2021-09-17 | 2023-03-23 | Synlogic Operating Company, Inc. | Methods for reducing hyperphenylalaninemia |
| WO2023245168A1 (en) | 2022-06-17 | 2023-12-21 | Synlogic Operating Company, Inc. | Bacteria engineered to treat diseases associated with bile acid metabolism and methods of use thereof |
| WO2023245171A1 (en) | 2022-06-17 | 2023-12-21 | Synlogic Operating Company, Inc. | Bacteria engineered to treat diseases associated with bile acid metabolism and methods of use thereof |
| US20230414679A1 (en) | 2022-06-22 | 2023-12-28 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Control of histamine to promote health and control enterocolitis using probiotic compositions |
| WO2023250478A1 (en) | 2022-06-23 | 2023-12-28 | Synlogic Operating Company, Inc. | Recombinant bacteria engineered to treat diseases associated with methionine metabolism and methods of use thereof |
| WO2024081768A1 (en) | 2022-10-12 | 2024-04-18 | Synlogic Operating Company, Inc. | Bacteria engineered to produce active epidermal growth factor (egf) and their medical uses |
| WO2024086557A1 (en) | 2022-10-17 | 2024-04-25 | Synlogic Operating Company, Inc. | Recombinant bacteria expressing phenylalanine ammonia lyase, phenylalanine transporter and l- aminoacid deaminase for reducing hyperphenylalaninemia |
| WO2024129974A1 (en) | 2022-12-14 | 2024-06-20 | Synlogic Operating Company, Inc. | Recombinant bacteria for use in the treatment of disorders in which oxalate is detrimental |
| WO2024130119A2 (en) | 2022-12-16 | 2024-06-20 | Prolacta Bioscience, Inc. | Synbiotic compositions for short chain fatty acid production |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0768375T4 (da) * | 1992-07-06 | 2002-09-16 | Nestle Sa | Mælkesyrebakterier |
| EP0577903B1 (fr) * | 1992-07-06 | 1997-12-17 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Agent antigastrite |
| JP3653277B2 (ja) * | 1994-05-26 | 2005-05-25 | ブラッコ エッセ ピ ア | ラクトバチルス菌株、該菌株の組成物および該菌株の使用法 |
| JP3004890B2 (ja) * | 1995-03-28 | 2000-01-31 | 雪印乳業株式会社 | 病原体感染防御剤 |
| US5837238A (en) * | 1996-06-05 | 1998-11-17 | Biogaia Biologics Ab | Treatment of diarrhea |
| IT1284877B1 (it) * | 1996-08-09 | 1998-05-22 | Dicofarm Spa | Trattamento delle diarree acute del bambino e prevenzione della sensibilizzazione allergica verso alimenti introdotti nella fase |
| IT1289984B1 (it) * | 1997-02-27 | 1998-10-19 | Proge Farm Srl | Ceppi di lattobacilli utili nel trattamento di disfunzioni del sistema gastrointestinale |
| SE511524C2 (sv) * | 1997-06-02 | 1999-10-11 | Essum Ab | Lactobacillus casei rhamnosus-stam samt farmaceutisk beredning för bekämpning av patogena tarmbakterier |
| SE510813C2 (sv) * | 1997-12-08 | 1999-06-28 | Arla Ekonomisk Foerening | Bakteriestam av arten Lactobacillus Paracasei subsp. paracasei, sammansättning därav för användning i livsmedel, samt produkt innehållande stammen |
| RO121700B1 (ro) * | 1999-03-11 | 2008-02-28 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Bacterii lactobacillus capabile să prevină diareea cauzată de bacterii patogene şi rotavirusuri |
-
1999
- 1999-03-11 EP EP99104922A patent/EP1034787A1/en not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-03-02 IL IL14507900A patent/IL145079A0/xx active IP Right Grant
- 2000-03-02 CN CN00807401A patent/CN1350461A/zh active Pending
- 2000-03-02 PL PL00355226A patent/PL355226A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-03-02 CA CA002364435A patent/CA2364435A1/en not_active Abandoned
- 2000-03-02 BR BR0008911-7A patent/BR0008911A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-03-02 HU HU0200205A patent/HUP0200205A3/hu unknown
- 2000-03-02 RU RU2001127528/13A patent/RU2243779C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 JP JP2000603689A patent/JP2002537865A/ja active Pending
- 2000-03-02 RU RU2001127527/13A patent/RU2247569C2/ru active
- 2000-03-02 WO PCT/EP2000/001795 patent/WO2000053200A1/en active IP Right Grant
- 2000-03-02 EP EP00909290A patent/EP1162986A1/en not_active Withdrawn
- 2000-03-02 US US09/936,489 patent/US6835376B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 NZ NZ513806A patent/NZ513806A/en unknown
- 2000-03-02 ID IDW00200101965A patent/ID30438A/id unknown
- 2000-03-02 AU AU31627/00A patent/AU779414B2/en not_active Ceased
- 2000-03-02 CZ CZ20013264A patent/CZ20013264A3/cs unknown
- 2000-03-02 RO ROA200101020A patent/RO121701B1/ro unknown
- 2000-03-10 CO CO00017678A patent/CO5241327A1/es not_active Application Discontinuation
- 2000-03-10 PE PE2000000213A patent/PE20001557A1/es not_active Application Discontinuation
- 2000-03-10 MY MYPI20000954A patent/MY125941A/en unknown
- 2000-03-10 AR ARP000101088A patent/AR022912A1/es unknown
-
2001
- 2001-08-23 IL IL145079A patent/IL145079A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-09-03 ZA ZA200107290A patent/ZA200107290B/xx unknown
- 2001-09-03 ZA ZA200107293A patent/ZA200107293B/xx unknown
- 2001-09-04 NO NO20014299A patent/NO20014299L/no not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-06-18 HK HK02104517.4A patent/HK1042657A1/zh unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ШЕНДЕРОВ Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т.II. - М., 1998, Грантъ, с.91-94. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2452243C2 (ru) * | 2007-02-02 | 2012-06-10 | МАЙ Амадеус Александер | Натуральный продукт с пробиотическими микроорганизмами |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2002537865A (ja) | 2002-11-12 |
| PL355226A1 (en) | 2004-04-05 |
| CN1350461A (zh) | 2002-05-22 |
| ID30438A (id) | 2001-12-06 |
| NO20014299D0 (no) | 2001-09-04 |
| BR0008911A (pt) | 2002-01-15 |
| RO121701B1 (ro) | 2008-02-28 |
| AU3162700A (en) | 2000-09-28 |
| AU779414B2 (en) | 2005-01-20 |
| HK1042657A1 (zh) | 2002-08-23 |
| EP1034787A1 (en) | 2000-09-13 |
| NZ513806A (en) | 2003-08-29 |
| IL145079A (en) | 2006-08-01 |
| MY125941A (en) | 2006-09-29 |
| ZA200107290B (en) | 2003-02-26 |
| CO5241327A1 (es) | 2003-01-31 |
| HUP0200205A3 (en) | 2002-06-28 |
| IL145079A0 (en) | 2002-06-30 |
| ZA200107293B (en) | 2003-02-26 |
| AR022912A1 (es) | 2002-09-04 |
| EP1162986A1 (en) | 2001-12-19 |
| NO20014299L (no) | 2001-11-05 |
| RU2243779C2 (ru) | 2005-01-10 |
| CZ20013264A3 (cs) | 2002-01-16 |
| CA2364435A1 (en) | 2000-09-14 |
| HUP0200205A2 (hu) | 2002-05-29 |
| WO2000053200A1 (en) | 2000-09-14 |
| US6835376B1 (en) | 2004-12-28 |
| PE20001557A1 (es) | 2001-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2247569C2 (ru) | Штамм lactobacillus paracasei cncm i-2116 (ncc 2461), обладающий способностью предотвращать колонизацию кишечника патогенными бактериями, вызывающими диарею, и предотвращать заражение эпителиальных клеток кишечника ротавирусами, пищевой продукт и фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения заболеваний, связанных с диареей | |
| US7029669B1 (en) | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhoea | |
| KR100386144B1 (ko) | 헬리코박터 파일로리 （Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）제균성 식음료 제품 | |
| US6887465B1 (en) | Lactobacillus strains capable of preventing diarrhoea caused by pathogenic bacteria and rotaviruses | |
| US6998119B1 (en) | Feed composition containing Bifidobacterium CNCM 1-2168 capable of preventing diarrhea | |
| MXPA01008927A (en) | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhoea | |
| MXPA01008976A (en) | Lactobacillus strains preventing diarrhoea pathogenic bacteria |