RO121700B1 - Bacterii lactobacillus capabile să prevină diareea cauzată de bacterii patogene şi rotavirusuri - Google Patents
Bacterii lactobacillus capabile să prevină diareea cauzată de bacterii patogene şi rotavirusuri Download PDFInfo
- Publication number
- RO121700B1 RO121700B1 ROA200101019A RO200101019A RO121700B1 RO 121700 B1 RO121700 B1 RO 121700B1 RO A200101019 A ROA200101019 A RO A200101019A RO 200101019 A RO200101019 A RO 200101019A RO 121700 B1 RO121700 B1 RO 121700B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- cells
- lactobacillus
- bacteria
- cfu
- milk
- Prior art date
Links
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title claims abstract description 35
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 title claims description 28
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 title claims description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 36
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims abstract description 32
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 24
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 16
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 16
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 13
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 10
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 claims description 9
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 9
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims description 4
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims description 4
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 claims 1
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 claims 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 73
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 24
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 15
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 13
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 13
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 13
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 13
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 11
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 10
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 10
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 9
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 9
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 9
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 8
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 7
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 7
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 7
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 6
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 6
- 230000000741 diarrhetic effect Effects 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 5
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 4
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 3
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 2
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical compound O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 description 1
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 244000223760 Cinnamomum zeylanicum Species 0.000 description 1
- 206010048832 Colon adenoma Diseases 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000224432 Entamoeba histolytica Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000606999 Plesiomonas shigelloides Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 210000000173 T-lymphoid precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 244000290333 Vanilla fragrans Species 0.000 description 1
- 235000009499 Vanilla fragrans Nutrition 0.000 description 1
- 235000012036 Vanilla tahitensis Nutrition 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 201000009840 acute diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001142 anti-diarrhea Effects 0.000 description 1
- 230000001775 anti-pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002953 anti-rotaviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000010065 bacterial adhesion Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000009920 food preservation Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011868 grain product Nutrition 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 230000000897 modulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000008775 paternal effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000004915 pus Anatomy 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 230000001718 repressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 108700010850 rotavirus proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 235000000112 undernutrition Nutrition 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
- A23G9/32—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G9/36—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
- A23G9/363—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
- A23C19/061—Addition of, or treatment with, microorganisms
- A23C19/062—Addition of, or treatment with, microorganisms using only lactic acid bacteria, e.g. pediococcus, leconostoc or bifidus sp., or propionic acid bacteria; Treatment with non-specified acidifying bacterial cultures
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/065—Microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/104—Fermentation of farinaceous cereal or cereal material; Addition of enzymes or microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C2270/00—Aspects relating to packaging
- A23C2270/05—Gelled or liquid milk product, e.g. yoghurt, cottage cheese or pudding being one of the separate layers of a multilayered soft or liquid food product
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/175—Rhamnosus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S426/00—Food or edible material: processes, compositions, and products
- Y10S426/807—Poultry or ruminant feed
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/853—Lactobacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Confectionery (AREA)
- Cereal-Derived Products (AREA)
Abstract
Prezenta invenţie se referă la noi bacterii alegenului Lactobacillus, care sunt utile în prepararea suportului ingerabil, pentru prevenirea diareei provocate de două tipuri patogene: bacterii ?i virusuri.
Description
Prezenta invenție se referă la noi microorganisme ale genului Lactobacillus, care sunt utile în prevenirea diareei provocate de două tipuri de patogeni: bacterii și rotavirusuri. în special, prezenta invenție se referă la utilizarea sus numitelor microorganisme pentru prepararea suportului ingerabil și a compoziției conținând aceleași microorganisme.
Organismele care produc acid lactic drept component metabolic major sunt cunoscute de multă vreme. Aceste bacterii pot fi găsite în lapte sau în fabricile care prelucrează laptele, în plante vii sau putrezite, dar și în intestinul omului sau animalelor. Aceste microorganisme, cunoscute sub denumirea restrânsă de „bacterii ale acidului lactic”, reprezintă mai degrabă un grup neomogen care conține diferite genuri precum Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium, Pediococcus, etc.
Bacteriile acidului lactic au fost utilizate ca agenți de fermentare pentru conservarea hranei având avantajul unui pH scăzut și acțiunea produșilor de fermentație generați în timpul activității fermentative ale acestora de a inhiba creșterea bacteriilor nocive. în acest scop, bacteriile acidului lactic au fost utilizate pentru prepararea de variate alimente diferite cum sunt brânza, iaurtul și alte produse fermentate din lapte ce se găsesc în magazinele de profil.
Foarte recent bacteriile acidului lactic au atras atenția în cel mai înalt grad prin aceea că la anumite sușe s-a descoperit că prezintă proprietăți prețioase pentru om și animale în legătură cu ingerarea. în special, au fost găsite sușe specifice de Lactobacillus sau Bifidobacterium capabile să colonizeze mucoasa intestinală și să participe la menținerea stării de sănătate a omului și animalului.
în această privință, EP 0768375 dezvăluie anumite sușe specifice din genul Bifidobacterium, care sunt capabile să stea bine implantate în flora intestinală și să poată adera la celulele intestinale. Aceste Bifidobacterii sunt raportate că participă în procesul imunomodulator, fiind capabile de a exclude competitiv aderarea bacteriilor patogene la celulele intestinale, deci participă la menținerea sănătății individuale.
în timpul ultimilor câțiva ani cercetarea a fost de asemenea centrată pe folosirea bacteriilor acidului lactic ca agenți probiotici. Probioticii sunt considerați a fi preparate microbiene viabile care favorizează sănătatea individuală prin prezervarea microflorei naturale din intestin. Un preparat microbian poate fi în mod obișnuit acceptat ca probioticîn cazul în care microbii eficace al acestuia și modul lor de acțiune sunt cunoscute. Probioticii sunt apreciați pentru că se atașează de mucoasa intestinală, colonizează tractul intestinal și, de asemenea, împiedică atașarea microorganismelor nocive pe acesta. O condiție prealabilă crucială pentru acțiunea lor constă în aceea că ei trebuie să atingă mucoasa intestinului într-o formă proprie și viabilă și să nu fie distruși în partea superioară a tractului gastro-intestinal, în special sub influența pH-ului scăzut ce predomină în stomac.
în legătură cu aceasta, WO 97/00078 dezvăluie o sușe specifică, denumită Lactobacillus GG (ATCC 53103) drept un astfel de probiotic. Microorganismul este în mod special utilizat într-o metodă de prevenire sau tratare a reacțiilor de hipersensibilitate induse de hrană atunci când el este administrat la un beneficiar împreună cu materialul alimentar care a fost supus unui tratament de hidroliză cu pepsină și/sau tripsină. Sușa de Lactobacillus selectată este descrisă ca prezentând proprietăți de aderare și colonizare și deținând un sistem de protease-enzime, astfel ca materialul proteic conținut în aliment pentru a fi administrat este mai departe hidrolizat cu ajutorul proteazelor secretate de sușa specifică de Lactobacillus. Metoda discutată în acest document va conduce eventual la preluarea materialului proteic de către intestinul care nu mai prezintă nici o cantitate substanțială de material alergenic.
RO 121700 Β1
Mai mult, în EP 0577903 recomandarea este făcută pentru utilizarea unei astfel de 1 bacterii a acidului lactic care are abilitatea de a înlocui pe Heliobacter pylori, cauza recunoscută a dezvoltării ulcerelor, în prepararea unui suport care să fie utilizat în viitor 3 pentru tratamentul terapeutic sau profilactic al ulcerului asociat cu acțiunea lui Heliobacter pylori. 5 în documentul intervenit între timp, WO 99/29833, este descrisă o sușă specifică,
LMG P 17806, care găzduiește trei plasmide de mărime definită. Această sușe este 7 prezentată ca fiind capabilă de a preveni invadarea celulelor intestinale de către Salmonella typhimurium. 9 în cunoașterea proprietăților valoroase ale sușelor speciale de bacterii ale acidului lactic se poate prevedea existența unei cerințe în domeniu pentru sușe bacteriene adiționale 11 de acid lactic care sunt benefice pentru menținerea stării de sănătate a omului și/sau animalului. 13
Problema pe care o rezolvă invenția constă în furnizarea de noi bacterii producătoare de acid lactic aparținând genului Lactobacillus capabilă să colonizeze mucoasa intestinală 15 cu bacterii patogene și care poate preveni infectarea celulelor epiteliale intestinale cu rotavirusuri și utilizarea acestora pentru fabricarea unor compoziții alimentare sau farmaceutice 17 ca material de suport ingerabil.
Bacteria producătoare de acid lactic, aparținând genului Lactobacillus capabilă să 19 adere la mucoasa intestinală, în esență capabilă să colonizeze mucoasa intestinală cu bacterii patogene și care poate preveni infectarea celulelor epiteliale intestinale cu 21 rotavirusuri, conform invenției înlătură dezavantajele de mat sus prin aceea că este reprezentată de Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116 utilizată pentru fabricarea unei 23 compoziții alimentare sau farmaceutice ca material de suport ingerabil.
Prin aplicarea invenției se obține următorul avantaj: 25
- noile tulpini sunt capabile să creascăîn prezența sărurilor biliare într-o concentrație de până la circa 0,4% și pot preveni în mod esențial infectarea celulelor epiteliale cu 27 rotavirusuri.
în consecință, o problemă a prezentei invenții este aceea de a furniza sușe 29 bacteriene adiționale care să prezinte proprietăți noi benefice pentru om și/sau animale.
Problema de mai sus a fost rezolvată prin furnizarea de noi microorganisme, în 31 principal bacterii ale acidului lactic, aparținând genului Lactobacillus având ca trăsături capacitatea de a preveni colonizarea intestinului cu bacterii patogene ce provoacă diareea 33 și de preveni infectarea celulelor epiteliale intestinale cu rotavirusuri.
în conformitate cu varianta preferatăsușeledeLacfobac///t/ssuntcapabiledeaderare 35 la mucoasa intestinală a organismului gazdă și sunt capabile de a-l coloniza în cea mai mare parte. 37 în conformitate cu varianta preferată, sușele de Lactobacillus sunt capabile să crească în prezența a până la 0,4% săruri biliare, astfel încât ele pot trece cu ușurință în 39 tractul gastrointestinal și rămâne în mod esențial active.
în conformitate cu o altă variantă preferată, bacteria acidului lactic este selectată 41 dintr-un grup constând din Lactobacillus rhamnosus sau, de preferință Lactobacillus paracasei și, cel mai de preferat, Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116. 43
S-a arătat ca microorganismele prezentei invenții etalează următoarele proprietăți: sunt gram pozitive, catalază-negativă, NH3 din arginină negativ și producția de CO2 negativă. 45 Ele produc L(+) acid lactic, sunt capabile să crească în prezența sărurilor biliare într-o concentrație de până la circa 0,4% și pot preveni în mod esențial infectarea celulelor 47 epiteliale cu rotavirusuri.
RO 121700 Β1
Noile microorganisme pot fi folosite pentru prepararea unei varietăți de materiale suport ingerabile, cum ar fi de exemplu laptele, iaurtul, laptele prins, laptele fermentat, produse de fermentație pe bază de lapte, produse bazate pe cereale fermentate, pudre pe bază de lapte, formule pentru copii mici (sugari sau până la 7 ani) și pot fi incluse în suport în cantități de la circalO5 cfu/g până la 1011 cfu/g. Pentru scopul prezentei invenții prescurtarea cfu va desemna „o unitate formatoare de colonii” care este definită ca număr de celule bacteriene ce sunt găsite prin numărătoarea microbiologică a plăcilor de agar.
Prezenta invenție furnizează și compoziții alimentare sau farmaceutice conținând cel puțin una din sușele de Lactobacillus având caracteristicile de mai sus.
Pentru prepararea unei compoziții alimentare conforme cu prezenta invenție cel puțin una din sușele de Lactobacillus corespunzătoare prezentei invenții este încorporată într-un suport convenabil, într-o cantitate de la circa 105 cfu/g la circa 1011 cfu/g, de preferat de la circa 10® cfu/g la circa 1O10 cfu/g, cel mai preferabil de la circa 107 cfu/g la circa 109 cfu/g.
în cazul preparatului farmaceutic produsul poate fi realizat sub formă de tablete, suspensii bacteriene lichide, supliment oral uscat, supliment oral umed, hrănire uscată prin tub sau hrănire umedă prin tub etc, în care cantitatea de sușe de Lactobacillus încorporată să fie în zona de până la 1012 cfu/g, de preferat de la circa 107 cfu/g la circa 1011 cfu/g, cel mai preferabil de la circa 107 cfu/g la circa 1011 cfu/g.
Activitatea noilor microorganisme în intestinul individului este în mod natural dependentă de doză. Aceasta înseamnă că cu cât mai multe microorganisme noi sunt încorporate pe calea ingerării materialului alimentar de mai sus sau a compoziției farmaceutice cu atât mai mare este activitatea de protecție și/sau de vindecare a microorganismelor. Deoarece noile microorganisme nu sunt dăunătoare pentru specia umană și animale și au fost eventual izolate din materiile fecale ale copiilor, o mare cantitate din acestea poate fi încorporată, astfel încât în mod esențial o mare parte a intestinului individului va fi colonizată de către noile microorganisme.
în timpul studiilor extinse care au condus la prezenta invenție, cercetătorii au investigat materiile fecale ale copiilor și au izolat o varietate de sușe bacteriene diferite din acestea. Aceste sușe au fost ulterior examinate din punct de vedere al capacității lor de a preveni infectarea celulelor epiteliale cu rotavirusuri și bacterii patogene care sunt cunoscuți a fi cauza diareei.
Câteva genuri bacteriene cuprinzând Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus au fost analizate pentru proprietățile lor de inhibare. Testele au fost executate în mod esențial cu trei serotipuri de rotavirusuri reprezentând agenți majori etiologici ai diareei umane virale (serotipurile G1, G3 și G4) și cu patogenii E. coli și Salmonella typhimurium considerați a fi reprezentativi pentru microorganismele patogene ce provoacă diareea la un individ afectat.
Diferitele bacterii ale acidului lactic au fost crescute pe medii convenabile, cum ar fi MRS, Hugo-Jago sau M17 la temperaturi de la 30 la 40°C corespunzător temperaturii lor optime de creștere. După atingerea stării de creștere staționară bacteriile au fost colectate prin centrifugare și suspendate în soluție fiziologică NaCI. între diferitele teste, celulele bacteriene au fost conservate prin înghețare (-20°C).
Teste pentru rotavirusuri
Diferitele stocuri de rotavirusuri au fost preparate prin infectarea de celule confluente monostrat, Rotavirusurii au fost incubați înainte de infectare. Celulele au fost infectate cu 20 de doze de culturi tisulare infecțioase. Pentru stabilirea proprietăților antivirale două protocoale diferite au fost aplicate. Conform unui protocol diferitele sușe bacteriene au fost examinate din punctul de vedere al interacțiunii lor directe cu rotavirusurile în timp ce în al doilea protocol, bacteriile au fost analizate pentru acele sușe care interacționează cu
RO 121700 Β1 receptorii celulari ai rotavirusurilor. Primul protocol a implicat contaminarea fiecărei suspensii 1 bacteriene respective cu o sușă diferită de rotavirus și incubarea pe medii propice. Ulterior, amestecul virus-bacterie a fost aplicat pe un monostrat de celule de tip celule de adenom de 3 colon uman nediferențiat HT-29 și incubarea a fost continuată. Replicarea virusului a fost apoi analizată. Al doilea protocol a implicat incubarea respectivei suspensii bacteriene mai 5 întâi împreună cu monostratul de celule de tip celule de adenom de colon uman nediferențiat HT-29 și adăugarea ulterioarăde virus. După continuarea incubării, replicarea virusului a fost 7 analizată. Replicarea rotavirusului poate fi analizată ușor prin colorarea histo-imunologică a proteinelor rotavirusului din celulele infectate. Efectul inhibitor al rotavirusului pentru o 9 bacterie dată a fost atribuit doar atunci când numărul de celule infectate a fost redus cu 90% în cultura celulară inoculată cu rotavirusuri plus bacteria indicată în comparație cu celulele 11 inoculate numai cu rotavirusuri.
Din totalul de 260 de diferite sușe bacteriene izolate inițial doar 9 au putut fi desem- 13 nate a inhiba în mod esențial replicarea rotavirusului. Diferitele bacterii au fost determinate ca aparținând genului Lactobacillus subspeciile rhamnosus sau paracasei. O sușe, denumită 15 Lactobacillus casei ST11, care a fost depusă în conformitate cu Tratatul de la Budapesta și a primit numărul de depozit NCC 2461 (1-2116), s-a arătat a fi extrem de eficientă în 17 prevenirea infecției celulelor umane la rotavirusuri. Mai mult, această sușe specială prezintă proprietăți de creștere excelente așa cum s-a arătat prin acidificarea din diferitele medii de 19 cultură. Sușa prezintă, de asemenea, o bună performanță cu privire la rata de supraviețuire în timpul depozitării la temperaturi scăzute de circa 10°C, ceea ce o face un candidat 21 excelent pentru a fi inclusă în compozițiile alimentare sau farmaceutice care vorfi păstrate în condiții de refrigerație. 23
Teste pentru bacterii anti-patogene
Pentru evaluarea proprietăților anti-bacteriene au fost alese următoarele abordări. în 25 conformitate cu un protocol, sușele de Lactobacillus de cultură ale prezentei invenții au fost examinate pentru capacitatea de a preveni aderarea la celulele intestinale a bacteriilor 27 patogene ce produc diareea sau invazia acestora în celulele intestinale. în acest scop, celule intestinale au fost contaminate cu bacterii patogene și au fost evaluate sușele de 29 Lactobacillus de cultură din punct de vedere al ratei de aderare sau de invazie. în conformitate cu cel de al doilea protocol, supernatantul din cultura celulară a sușelor de 31 Lactobacillus ale prezentei invenții a fost adăugat împreună cu microorganismele patogene peste celulele intestinale și s-a evaluat rata de aderare sau de invazie. în timpul experi- 33 mentării a putut fi arătat că Lactobacilii de cultură și supernatantul s-au dovedit a fi extrem de eficiente în prevenirea atât a aderării, cât și a invaziei în celulele intestinale indicând 35 faptul că compușii metabolici secretați de noile microorganisme sunt probabil responsabili de activitatea anti-diareică cu privire la bacteriile patogene. 37 în plus față de cele menționate mai sus, poate fi de asemenea arătat că, în mod surprinzător, sușele manifestă și proprietăți anti-alergice, altfel spus, sușele au impact 39 asupra sintezei de diferiți mediatori imunologici.
în general, se recunoaște că răspunsurile imuno-umorale și reacțiile alergice sunt 41 mediate de celulele T CD4+ purtătoare ale tipului de fenotip 2 (Th2). Celulele Th2 sunt caracterizate prin producerea de nivele înalte de interleukină 4 (IL-4), o citokină necesară 43 pentru secreția de IgE, care este clasa de anticorpi majori implicați în reacțiile alergice.
Diferențierea celulelor Th2 este diminuată de IFN-γ, o citokină specială care provine 45 din subsetul Th1 exclusiv comun al celulelor T CD4+. Așa numitele celule Th1 sunt una după alta puternic induse de interleukină 12 (IL-12). în contrast cu aceasta s-a demonstrat că 47 IL-10, o altă citokină, are un impact puternic de reprimare asupra proliferării de celule Th1 și este deci desemnată să joace un rol în mecanismele imunosupresoare. 49
RO 121700 Β1 în rezumat, ambele citokine, IL-12 și IL-10, au puternice efecte modulatoare asupra dezvoltării celulelor T CD4+ prin influențarea dezvoltării subsetului Th1. IL-12 este o citokină reglatoare cheie pentru inducerea diferențierii Th1 și astfel inhibă generarea de răspunsuri Th2. O cale majoră de inhibare a celulelor Th2 este prin urmare văzută prin stimularea sintezei de IL-12 de către celulele accesorii.
Este bine cunoscut că unii componenți ai bacteriilor gram negative, cum ar fi LPS, induc nivele înalte de IL-12 în celulele aderente, cum ar fi macrofagele și celulele dendritice. S-a constatat, în mod consecvent, că bacteriile gram negative pot înclina puternic diferențierea celulelor T CD4+ spre fenotipul Th1.
Microorganismele ST 11, ca exemplu de sușe de Lactobacillus din prezenta invenție, au fost testate pentru rolul potențial de inducere al citokinelor implicate în reglarea diferențierii celulelor T CD4. în special, a fost studiat efectul ST 11 asupra fenotipului celulelor T CD4+ supuse diferențierii Th2.
în acest scop, capacitatea ST 11 de a induce sinteza de mARN codificând aceste două citokine reglatoare în celulele aderente de șoarece derivate din măduva osoasă a fost comparată cu alte 4 sușe de Lactobacillus și cu o bacterie gram negativă martor (E. coli K12). mARN-ul a fost măsurat prin RT-PCR semi-cantitativ după 6 h de incubare a celulelor cu diluții seriate de bacterii situate de la 10® la 107 cfu/ml.
Deși toate sușele de Lactobacillus au putut induce transcripția de mARN IL-12 până la un anumit grad, ST 11 s-a demonstrat a fi cel mai puternic inductor, deoarece un puternic semnal PCR a putut fi detectat la cea mai scăzută doză bacteriană. De fapt, capacitatea lui ST 11 de a induce transcripția de mARN IL-12 a fost la fel de puternică ca cea de E. coli. Inducerea de mARN IL-10 a fost în general mai slabă decât pentru mARN IL-12, astfel că numai la dozele bacteriene cele mai înalte semnalul a putut fi detectat. Cu toate acestea, ST 11 a fost inductorul cel mai puternic de mARN IL-10 comparativ cu ceilalți Lactobacili și cu martorul, E. coli.
Astfel, ST 11 este considerat a fi eficient în inducerea citokinelor imunoreglatoare implicate în diferențierea celulelor T CD4+. Capacitatea ei puternică de a induce IL-12 o desemnează drept candidat pentru inhibarea răspunsurilor Th2 iar inducerea cumpătată de IL-10 poate preveni răspunsurile inflamatorii.
în plus față de cele descrise mai sus, a fost de asemenea determinat dacă ST 11 are un efect inhibitor asupra celulelor T CD4+ ce suferă diferențierea Th2 și efectul pozitiv asupra funcțiilor Th1. Un sistem de cultură de celule diferențiate bine stabilit a fost utilizat, unde celule T CD4+ precursoare au fost activate policlonal și modulate de a parcurge fiecare diferențierea spre Th1 sau Th2, dependent de tipul de co-stimuli suplimentați în mediul de cultură. Diferențierea Th1/Th2 a fost indusă în timpul celor 7 zile de cultură primară, după care celulele au fost restimulate pentru 2 zile într-o cultură secundară, conținând numai mediu de cultură, iar dobândirea fenotipului specific (Th1 sau Th2) a fost stabilită prin măsurarea tipurilor de citokine produse în supernatant (IFN-γ contra IL-4).
Se știe că aceste celule precursoare T CD4+ de șoarece de origine BALB/c diferențiază preferențial spre fenotipul Th2 predominant (IL-4 ridicat, IFN-γ scăzut în supernatantul culturii secundare) după activarea în condiții neutre (mediu singur în cultura primară). Acest fenotip ar putea fi întors complet la paternul Th1 (IFN-γ ridicat, IL-4 scăzut) sub adăugarea de anticorpi monoclonali blocanți pentru IL-4 în cultura primară.
Pentru a investiga rolul potențial al lui ST 11 asupra inhibării Th2, celule precursoare T CD4+ purificate de șoarece BALB/c au fost activate în prezența celulelor aderente de măduvă osoasă ca celule suplimentare în timpul primei culturi. Aceste celule au fost co-cultivate fie în mediu singur sau în prezența a 1 mg/ml LPS, sau a 10 cfu /ml. ST 11, sau
RO 121700 Β1 a 10 cfu/ml din alt Lactobacillus. După acest timp, celulele au fost spălate și celulelor T CD4 1 au fost purificate încă o dată și restimulate în cultura secundară pe mediu singur. Citokinele produse prin diferențierea celulelor T CD4+ au fost măsurate după 2 zile. După cum era de 3 așteptat, celulele diferențiate în prezența mediului singur au prezentat un fenotip Th2 dominant. Adăugarea de ST 11 în cultura primară a modulat puternic rezultatul diferențierii 5 Th2, conducând la o descreștere de 8 ori a producției de IL-4. Această inhibare a fost de o magnitudine similară cu cea observatăîn culturile derivate din celule diferențiate în prezența 7 LPS. în contrast, o altă sușe de Lactobacillus n-a avut nici un impact măsurabil asupra nivelurilor de IL-4. Interesant, nivelele de IFN-γ n-au crescut după adăugarea de ST 11 în 9 cultura primară.
în rezumat, ST 11 diminuează specific producția de IL-4 prin celulele T CD4+ care 11 parcurg diferențierea Th2, dar nu cresc în mod semnificativ secreția de IFN-γ. Faptul că ST 11 nu crește producția de IFN-γ poate fi datorat capacității sale de a induce IL-10 cu 13 consecința că poate păstra un impact scăzut inflamator în ciuda activității sale anti-Th2.
în consecință, s-a putut arăta că ST11 este o sușe de Lactobacillus care are un bun 15 profil anti-Th2 ceea ce face din el un candidat excelent pentru utilizarea lui ca bacterie cu activitate probiotică, anti-alergică. 17 în continuare de prezintă 11 exemple de realizare a invenției în legătură cu fig. 1 ...
9, care reprezintă: 19
- fig. 1, o schemă ilustrând trierea unei culturi celulare pentru stabilirea proprietăților protectoare a sușelor bacteriene contra rotavirusurilor; 21
- fig. 2, acidificarea produsă de sușa L. casei CNCM1-2116 (denumită ST11) pe diferite medii de creștere; 23
- fig. 3, rata de supraviețuire a sușei L. casei ST11 la 10°C măsurată pe parcursul a de zile; 25
- fig. 4, modelul mARN-ului pentru celulele aderente de șoarece IL-12 și IL-10 derivate din măduva osoasă după incubarea celulelor cu diluții seriate de STI; 27
- fig. 5, consecința diferențierii Th2 ca rezultat al scăderii producției de IL-4;
- fig. 6, o schemă ilustrând rezultatele unui experiment pe culturi celulare, în care 29 celule ST 11 cultivate au fost utilizate în încercarea de inhibare a adeziunii bacteriei patogene E. coli la celulele epiteliale; 31
- fig. 7, o schemă ilustrând rezultatele unui experiment pe culturi de celule, în care supernatantul culturii de ST 11 a fost utilizat în încercarea de inhibare a adeziunii bacteriei 33 patogene E. coli la celulele epiteliale;
- fig. 8, o schemă ilustrând rezultatele unui experiment pe culturi celulare, în care 35 celule ST 11 cultivate au fost utilizate în încercarea de inhibare a invaziei de Salmonella typhimurium asupra celulelor epiteliale; 37
- fig. 9, o schemă ilustrând rezultatele unui experiment pe culturi de celule, în care supernatantul culturii de ST 11 a fost utilizat în încercarea de inhibare a invaziei de 39 Salmonella typhimurium asupra celulelor epiteliale.
Medii și soluții 41
MRS (Difco),
Hugo-Jago (Tryptone Difco 30 g/l, Yeast Extract Difco 10 g/l, Lactose Difco 43
5g/l, KH2PO4 5 g/L, Beef Extract Difco 2 g/L, agar Difco 2 g/L)
M17 (Difco) 45
M199 (Seromed)
Soluție Riger (Oxoid) 47
PBS (NaCI 8 g/l, KCI 0,2 g/l, NaHPO41,15 g/1, KH2PO4 0,2g/l)
RO 121700 Β1
O zi după infecție, mediu de cultură celular a fost îndepărtat din plăcile de microtitrare și celulele au fost fixate cu etanol absolut timp de 10 min.
Etanolul a fost îndepărtat și plăcile au fost spălate de trei ori în tampon PBS. Apoi 50 pl de ser anti-rotavirus ( direcționat în principal contra proteinei V P6), produs în iepuri (obținuți de la Universitatea ISREC din Lausanne) și diluat 1:2000 în PBS au fost adăugați pe fiecare lamă și incubați pentru 1 h la 37°C cu o lamelă deasupra pentru a împiedica uscarea lamelor. Antiserumul a fost îndepărtat după aceea și plăcile au fost spălate de trei ori cu PBS. Apoi 50 μΙ de anti-serimunoglobulin anti-iepure G (IgG) produs în capre și cuplat la peroxidază (GAR-lg-PO; Nordic) au fost adăugați în diluție de 1:500 în PBS la fiecare placă și plăcile au fost incubate pentru 1 h la 37°C. Serul a fost îndepărtat și plăcile au fost încă o dată spălate de trei ori cu PBS. Apoi 100 μΙ din următorul amestec de substrat a fost adăugat fiecărei plăci: 10 ml de 0,05 M Tris-hydrochloride (pH 7,8), 1 ml de H2O2 (30% suprapur, diluat 1:600 în H2O; Merck) și 200 μΙ de 3-amino-9-etilcarbazole (0,1 g/10 ml de etanol păstrat în 200 μΙ aliquot la -80”C; A-5754; Sigma). Plăcile au fost incubate pentru cel puțin 30 min la temperatura camerei. Substratul a fost îndepărtat și plăcile au fost acoperite cu 200 μΙ de H2O pentru a stopa reacția. Celulele infectate cu materii fecale au fost numărate cu un microscop inversat (Diavert; Leitz)
Numai foarte puține sușe bacteriene au interacționat cu rotavirusurile. Doar 9 din 260 de celule bacteriene selectate primar au inhibat replicarea rotavirusurilor în cel puțin unul din protocoale. Lactobacillus paracasei NCC 2461 (ST 11) a prezentat o activitate extrem de înaltă contra Rotavirus Serotip 1, Rotavirus SA-11 Serotip 3 și Rotavirus Hochi Serotip 4.
Exemplul 3. Cultivarea liniei celulare Caco-2
Pentru evaluarea inhibiției bacteriene (patogenă) linia celulară Caco-2 a fost utilizată ca model de intestin. Această linie celulară prezintă trăsături caracteristice de celulă intestinală cum sunt: polarizarea, expresia enzimelor intestinale, producerea de polipeptide cu o structură specială, etc.
Celulele au fost crescute pe trei suporturi diferite, și anume plăci din plastic (Corning, de 25 cm) pentru creștere și propagare, pe plăci de sticlă de 6 well (Corning, 22 x 22 mm) degresate și sterilizate pentru testul de aderare și pe plăci de sticlă de 24 well (Corning) pentru testul de inhibare.
După a doua zi de cultură, mediu (DMEM) a fost schimbat zilnic. înainte de utilizare mediu a fost suplimentat cu 100 U/ml penicilină/streptomicină, 1 pg/ml amphoterine și 20% FCS inactivat la 56°C pentru 30 min. Cultura a fost efectuată la 37’C într-o atmosferă conținând 90% aer și 10% CO2. Celulele au fost desprinse la fiecare 6 zile. Celulele au fost detașate de pereții plăcilor prin tratare cu 0,25% tripsină și 3 mM EDTA în PBS la un pH de 7,2. Pentru neutralizarea efectului tripsinei un volum egal de FCS a fost adăugat la suspensia celulară obținută, amestecul a fost centrifugat (10 min la 1000 rpm) și sedimentul a fost din nou pus în cultură. Circa 3,5 x 105 celule au fost transferate într-un nou flacon de cultură și cultivate până când un monostrat confluent a fost obținut.
Exemplul 4. Cultivarea bacteriilor
ST 11
Sușa bacteriană a fost conservată la -20’C pe mediu MRS cu 15% glicerol. Sușa a fost crescută în condiții anaerobe pe mediu MRS și transferată de două ori pe medii noi la intervale de 24 h înaintea folosirii în testele de inhibare. Pentru acestea s-a utilizat o concentrație de 2 x 109 cfu/ml.
Supernatantul a fost colectat prin centrifugare timp de 1 h la 20.000 rpm și produsul astfel obținut a fost ulterior verificat pentru prezența bacteriilor.
RO 121700 Β1
E. coli: 1
Două sușe de E. coli au fost utilizate: E. coli DAEC C 1845 (Diffuse Adhesion E. coli) și E. coli JPN15 (EPEC; Entero-Pathogenic E. coli). 3
Primul pasaj după dezghețare a fost efectuat pe CFA - Miiller Hinton agar, care este convenabil pentru realizarea expresiei factorilor de aderare ai bacteriei. 5 înaintea fiecărui experiment celulele bacteriene au fost incubate la 37°C cu un transfer pe un mediu proaspăt ce s-a efectuat de două ori după 24 h fiecare. Deoarece 7
JPN15 conține gena pentru rezistența la ampicilina sus numitul antibiotic a fost folosit pentru selecție în timpul creșterii. 9
Salmonella:
Pentru experimente a fost utilizata sușa SL1344 de Salmonella typhimurium, 11 care a fost crescută pe mediu LB înaintea folosirii.
Exemplul 5. Testarea inhibării pentru E. coli 13
După al doilea pasaj pe mediu proaspăt, sușele de bacterii patogene au fost marcate cu radioizotopi folosind 10 pCi/ml C14 - acetat în mediu de cultură LB. Incubarea sușelor pe 15 acest mediu a fost efectuată timp de 18 h la 37°C.
Suspensia bacteriană a fost ulterior centrifugată (la 1041 g, timp de 15 min) pentru 17 a elimina supernatantul cu resturi de C14 - acetat. Sedimentul a fost suspendat și spălat în PBS, iar celulele au fost suspendate la o concentrație de circa 10 celule/ml în soluție de 1% 19 manoză sterilă. Manoza este cunoscută pentru inhibarea aderării nespecifice.
Sușe bacteriene patogene diferite (£ coli) au fost puse în contact cu monostratul de 21 celule Caco-2 (37°C, 10% CO2, aer 90%) pentru 3 h. Aceleași experimente au fost efectuate folosind supernatantul (obținut prin centrifugare la 20.000 rpm, timp de 40 minute). 23
Drept martor s-au folosit bacterii patogene care au fost puse în contact cu monostratul de celule Caco-2 fără adaos paralel de ST 11 sau de supernatantul culturii. 25 După 3 h de incubare mediu a fost schimbat și monostratul de celule a fost spălat de trei ori cu PBS. Fiecare pas de spălare a inclus un număr de 20 de rotiri ale soluției PBS 27 astfel încât să se elimine în mod esențial tot ce reprezintă aderare nespecifică. Celulele au fost lizate după aceea prin adăugarea de 1 ml carbonat de sodiu și incubare timp de 40 29 minute la 37“C. După omogenizare aliquot-ul (o cantitate mică de probă de 250 pl) a fost diluat în 5 ml fluid de scintilație (Hionic-fluor Packcard) și supus numărătorii (Packard 2000) 31
Procentajul de aderare al celulelor patogene la celulele Caco-2 a fost calculat în raport cu controlul, care a fost stabilit la 100% (aderare; sau invazie în cazul exemplului 6). 33
Exemplul 6. Test de inhibare pentru Salmonella
Salmonelele sunt bacterii care invadează celulele epiteliale și se multiplică în ele. 35 Pentru determinarea activității de inhibare a ST 11 sușa SL1344 de Salmonella typhimurium a fost incubată după descrierea de mai sus pe mediu conținând 14C- acetat și s-a procedat 37 în continuare conform experimentului descris în exemplul 5.
După incubare, celulele Caco-2 au fost spălate cu PBS pentru eliminarea tuturor 39 celulelor ne-aderente. Pe urmă s-a adăugat mediu conținând gentamicină (20 pg/ml) și incubarea a fost continuată timp de 1 h la 37’C. Gentamicină este un antibiotic care nu 41 penetrează celulele intestinale astfel că toate microorganismele extracelulare au fost omorâte, în timp ce Salmonella care a invadat celulele intestinale va supraviețui. După 43 spălarea celulelor de două ori cu PBS, celulele au fost lizate prin adaos de apă distilată sterilă și radioactivitatea a fost măsurată conform descrierii din exemplul 4. 45
Rezultatele experimentelor 5 și 6 sunt prezentate în fig. de la 6 la 9. Se poate vedea că celulele ST 11 din cultură și supernatantul culturii au fost extrem de eficiente în prevenirea 47 aderării la celulele intestinale și a invaziei în celulele intestinale de către microorganismele patogene care cauzează diareea. 49
RO 121700 Β1
Exemplul 7. Proprietățile sușei ST 11
Sușa ST 11 a fost supusă incubației în suc gastric simulat. Sucul gastric simulat a fost preparat prin suspendarea de pepsină (3 g/l) în soluție salină sterilă (0,5% g/v) și ajustat la un pH de 2,0 și, respectiv, un pH de 3,0 cu HCI concentrat. Sușa ST 11 a fost crescută în cantități variate pe mediile de mai sus și s-a determinat rezistența microorganismelor.
Rezultatele sunt rezumate în tabelul de mai jos.
| pH | cfu/ml la T = 0 | cfu la T=1 min | cfu la T=15 min | cfu la T=30 min | cfu la T=60 min |
| 20 | 2,0 x 109 | 1,8 x 109 | 1,2 x 109 | 3,7x108 | 7,0 x 103 |
| 30 | 2,0 x 109 | 1,9 x 109 | 1,7 x 109 | 1,7 x109 | 8,4x10® |
Sușa ST 11 are următoarele proprietăți, așa cum sunt ele definite conform cu metodele dezvăluite în „Genurile de bacterii ale acidului lactic, Ed. B.J.B. Wood and W.H. Holzapfel, Blackie A&P.
- gram pozitivă,
- catalază negativă,
- NH3 din arginină negativă,
- producția de CO2 negativă,
- producere de L (+) acid lactic,
- creștere în prezență de săruri biliare în concentrații de până la 0,4%.
Exemplul 8. Creșterea sușei ST 11 în condiții diferite
ST 11 a fost incubat la 37°C pe mediu de cultură pe bază de roșii (pudră de roșii 4% rehidratată cu apă distilată) suplimentat cu zaharoză (0; 0,5; 1 sau 2%) sau peptonă de soia (0,5%) sau glucoză (0,5%) pentru diferite perioade de timp. Rezultatele sunt prezentate în fig. 2.
ST 11 a fost mai departe adăugat într-o cantitate de 2,5% unui mediu compus din faină de orez (3%), faină de grâu (2%) și zaharoză (3%) și incubat la 37°C până ce s-a atins un pH de 4,4. După răcire produsul a fost împachetat cu sau fără adaos de vitamina C și depozitat la 10°C.
Exemplul 9. Inducerea sintezei de mARN IL-12 și IL-10 în celulele aderente de șoarece de către ST 11
Celule de măduvă osoasă au fost izolate din femur și tibie de șoarece în vârstă de 8 săptămâni C57BL/6 liber de patogen specific și incubate la o concentrație de 2x106 pe mediu RPMI (Gibco) conținând ser fetal de bovine 10%, L-Glutamină 1 mM, Hepes 12 mM, 2-mercaptoethanol 0,05 mM, penicilină 100 U/ml și streptomicină 100 pg/ml (toți reactivii sunt Gibco) timp de 12 h la 37°C în atmosferă de CO2 5%. Celulele neaderente au fost îndepărtate prin trei spălări consecutive cu mediu de cultură cald și celulele aderente rămase au fost recoltate și incubate la o concentrație de 106 celule/ml timp de 6 h în prezența sau absența bacteriei. S-a determinat anterior că perioada de 6 h reprezintă timpul optim de sinteză al mARN citokinei de către celulele aderente de șoarece ca răspuns la LPS. Bacteriile au fost adăugate în diferite concentrații situate între 109 până la 107 cfu/ml. Bacteriile au fost crescute și păstrate după indicațiile de mai sus (pagina 6).
La sfârșitul perioadei de cultură de 6 ore, celulele au fost izolate prin centrifugare și lizate folosind kitul de reactivi TRIzol (GibcoBRL, Nr. Cat. 15596-018) și instrucțiunile de utilizare. ARN-ul total a fost izolat prin precipitare cu isopropanol și revers transcris în cADN timp de 90 min la 42°C folosind revers transcriptază 200 U (Superscript II, BRL) într-un volum
RO 121700 Β1 de reacție de 40 μΙ conținând Tris 200 mM la un pH de 8,3, KCI 25 mM, 1 μ9/ΓπΙ oligo d(T)15 1 (Boehringer Mannheim), 1 mM DTT (Boehringer Mannheim), 4 mM din fiecare dNTP (Boehringer Mannheim) și Rnasin (Promega) 40 U/ml. Primerii PCR și condițiile folosite ai 3 fost cele descrise de Kopf și colaboratorii (Journal of Experimental Medicine 1996, sept. 1; 184(3):1127-36). Cantitățile de cADN au fost normalizate în interiorul probelor folosind 5 primeri specifici pentru gena house-keeping ((3-2-microglobulin). Produșii PCR au fost separați pe gel de agaroză 2% și benzile au fost analizate la UV. 7
Așa cum este arătat în fig. 4, ST 11 manifestă cea mai puternică inducere de mARN IL-12 și IL-10, care a fost comparabilă cu nivelele observate la martorul pozitiv (E.co/î). 9
Diferențele sunt văzute cel mai bine la concentrațiile bacteriene cele mai scăzute (107 cfu/ml). 11
Exemplul 10. Represia (supresarea) sintezei de IL-4 de către ST 11
Celule T CD4+ au fost purificate din splină de șoarece BALB/c liber de patogen 13 specific folosind kitul MiniMACS de la Miltenyi Biotec (Nr. Cat. 492-01). Celulele T CD4+ au fost cultivate la o concentrație de 2x105 celule/ml pe mediu RPMI conținând ser fetal de 15 bovine 10%, L-Glutamină 1 mM, Hepes 12 mM, 2-mercaptoetanol 0,05 mM, penicilină 100 U/ml și streptomicină 100 pg/ml și activate timp de o săptămână prin lincare-încrucișată 17 (cross-linking) cu anticorpi monoclonali plate-bound la CD3 (clona 2C11) și CD28 (clona 37.51, ambii anticorpi de la Pharmingen). în timpul acestei prime cultivări, celulele T CD4 au 19 fost co-cutivate împreună cu celule aderente de măduvă osoasă (izolate după cum s-a descris mai sus) drept celule accesorii și cu 10 cfu/ml ST 11, sau 10 cfu/ml La1, sau 1 mg/ml 21 LPS sau mediu simplu. După acest timp, celulele au fost spălate și celulele T CD4+ au fost purificateîncăodatăfolosind tehnologia kitului MiniMACSși restimulateîncultura secundară 23 care conținea doar mediu singur. Citokinele produse de celulele T CD4+ diferențiate au fost măsurate în supernatante după 2 zile folosind tehnica ELISA intercalată (sandwich) (kituri 25 de la Endogen și pH armingen).
Rezultatele sunt prezentate în fig. 5. Celulele diferențiate în prezența mediului singur 27 au etalat un fenotip Th2 dominant caracterizat prin nivele înalte de IL-4. Adaosul de ST 11 la culturile primare a modulat puternic rezultatul diferențierii Th2, care s-a soldat cu o 29 descreștere de 8 ori a producției de IL-4. Această inhibare a avut o magnitudine similară cu cea observată în culturile derivate din celule diferențiate în prezența LPS-ului. în contrast cu 31 aceasta, celelalte sușe de Lactobacillus nu au avut impact măsurabil asupra nivelelor de IL-4. Interesant, nivelele de IFN-γ nu au crescut după adaosul de ST 11 în culturile primare. 33
Așa cum putem vedea din cele prezentate mai sus sușele prezentei invenții pot fi bine preparate pentru producția de cărăuș alimentar și/sau farmaceutic având avantajul 35 proprietăților valoroase ale microorganismelor.
Exemplul 11. Sușa ST 11 a fost testată într-o clinică experimentală pe o comunitate 37 din suburbiile Guatemala City asupra abilității de a influența transmisia și experiența bolii diareice acute din sezonul ploios trăită de cei mai mulți copii din această zonă. Un total de 39
203 copii, în vârstă de 35 până la 70 de luni au fost cuprinși în studiu și au primit o doză țintă de 101° microorganisme viabile (ST 11) sau n-au primit nimic (placebo) pe o perioadă de 41 alimentare de 29 de zile. Copii selectați atât pentru probe cât și pentru placebo aveau deficite tipice în greutatea și înălțimea caracteristică vârstei datorită subnutriției. 43 înaintea inițierii experimentului de hrănire al copiilor preșcolari, o evaluare de siguranță a fost efectuată bazat pe studii in vitro și in vivo. Studiile in vitro au arătat un model 45 de rezistență la antibiotice similar ce cele ale altor Lactobacillus folosiți în aplicațiile alimentare și lipsa unui potențial de formare a aminelor biogene, pentru degradarea 47 mucin-ului și de-conjugarea sărurilor biliare. In studiu placebo controlat clinic în care au fost
RO 121700 Β1 implicați 42 de voluntari adulți, ST 11 a fost bine tolerat și nu a indus nici un efect advers, printre manifestările potențiale monitorizate au fost balonarea, numărul de scaune per zi și consistența scaunului; nivelele de proteine din faza acută în ser nu a atins nimic legat de o reacție potențial inflamatoare.
Produsele mostre și placebo au fost ambalate în pungi după tehnologia produselor Nestle beneficiind de facilitățile de fabricație ale centrului din Konolfingen, Elveția și transportate cu vaporul în condiții de refrigerare în Guatemala. Fiecare pungă de 10 g a constat dintr-un vehicul cu aromă de ciocolată și fiecare a avut 0,2 g de ST 11 (1010 cfu) sau, în cazul probelor placebo, 0,2 g de lapte praf. Vehiculul cu aromă de ciocolată a constat din pudra de cacao, zahăr, lecitină soia, vanilie și scorțișoară. Pungile au fost depozitate de la 4 la 6°C până cu două ore înainte de a fi folosite. înainte de folosire punga trebuia să fie dizolvată în 100 ml de apă furnizată de Nestle, care nu avea nici o contaminare bacteriană.
în conformitate cu protocolul aplicat diareea a fost definită drept producerea de trei sau mai multe evacuări fecale lichide sau fără formă pe durata a 24 h. Un episod diareic a fost definit ca un eveniment care prezintă dovada diareei (3 evacuări diareice în 24 h). Durata totală în ore a fost calculată de la momentul primului scaun din cele 3 menționate până la apariția primului scaun format sau a unei perioade de 24 h fără defecație. Pentru ca un copil să aibă un „nou episod înseamnă 48 h care s-au scurs de la terminarea episodului anterior. Dacă nu, se consideră o continuare a aceluiași episod și durata totală este apoi utilizată pentru evaluare. Un caz considerat era cel al unui copil care avusese experiența unuia sau a mai multor episoade documentate de diaree de-a lungul perioadei de 29 de zile de observație. Intensitatea unui episod diareic a fost bazat pe numărul total de scaune proaste produse. Elementele de severitate ale episodului sunt date de prezența sângelui, mucus sau puroi din scaune, alături de simptoame de febră și vomă. O intensitate de 7 scaune în 24 h sau necesitatea unei intervenții de personalului medical dintr-o clinică, centru de sănătate sau spital este de asemenea clasificat drept un episod sever.
Când un episod diareic a fost diagnosticat prin sistemul de supraveghere, o probă de scaun diareic a fost colectată pentru examinare microscopică și cultură pentru a identifica potențialul agent etiologic patogen pentru acel episod. Proba a fost diagnosticată pentru antigen rotaviral, Giardia și E.histolytica în caz de dezinterie și pentru patogeni bacterieni incluzând Shigella, Salmonella, Aeromonas, Plesiomonas shigelloides, E. coli și, posibil, V. cholerae.
în timpul perioadei de investigare mostre de produs au fost colectate pentru a examina viabilitatea microorganismelor incluse pe timpul perioadei de administrare. S-a demonstrat astfel că microorganismele au rămas viabile în pungi pe întreaga perioadă de timp studiată, iar la sfârșitul studiului pungile erau capabile să poarte 101° microorganisme viabile după rehidratarea cu apă.
Studiul relevă că mostrele conținând microorganisme probiotice au putut descrește evenimentele diareice în contrast cu grupul de control (placebo) cu aproape 30%. în afară de aceasta, însuși grupul de control a prezentat deja o descreștere a numărului de evenimente diareice față de populația normală care nu a primit nici mostre și nici placebo. Ultima constatare poate fi explicată pe baza faptului că acești copii au primit o nutriție suplimentară valoroasă și apă ne contaminată. Oricum, deoarece studiu a fost efectuat în împrejurimile orașului poate fi în mod clar constatat că ST 11 poate cu siguranță reduce producerea diareei in vivo.
Claims (6)
1. Bacterie producătoare de acid lactic aparținând genului Lactobacillus, capabilă să 3 adere la mucoasa intestinală, în esență capabilă să colonizeze mucoasa intestinală cu bacterii patogene și care poate preveni infectarea celulelor epiteliale intestinale cu 5 rotavirusuri, caracterizată prin aceea că este reprezentată de Lactobacillus paracasei CNCM1-2116. 7
2. Utilizarea bacteriei definite în revendicarea 1 pentru fabricarea unei compoziții alimentare sau farmaceutice ca material de suport ingerabil. 9
3. Utilizare în conformitate cu revendicarea 2, caracterizată prin aceea că tulpina de Lactobacillus este conținută în materialul de suport într-o cantitate cuprinsă între 11 aproximativ 105 cfu/g și aproximativ 1012 cfu/g material de suport.
4. Utilizarea unui supernatant sau a unei culturi de tulpină de Lactobacillus, definită 13 în revendicarea 1, pentru fabricarea unui material de suport ingerabil.
5. Utilizare în conformitate cu oricare dintre revendicările 1 și 3, caracterizată prin 15 aceea că, compoziția farmaceutică se administrează în tratamentul și/sau profilaxia tulburărilor însoțite de diaree. 17
6. Utilizare în conformitate cu oricare dintre revendicările 2 și 3, caracterizată prin aceea că, compoziția alimentară este selectată dintre lapte, iaurt, lapte prins, brânză, lapte 19 fermentat, produse lactate fermentate, înghețată, produse fermentate pe bază de cereale, pudre pe bază de lapte, formule pentru sugari, tablete, suspensii bacteriene lichide, 21 supliment oral uscat, supliment oral umed, produs uscat pentru alimentație prin sondă, produs umed pentru alimentație prin sondă. 23
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99104924A EP1034788A1 (en) | 1999-03-11 | 1999-03-11 | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhea |
| EP99104922A EP1034787A1 (en) | 1999-03-11 | 1999-03-11 | Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria |
| PCT/EP2000/001798 WO2000053202A1 (en) | 1999-03-11 | 2000-03-02 | Lactobacillus strains capable of preventing diarrhoea caused by pathogenic bacteria and rotaviruses |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO121700B1 true RO121700B1 (ro) | 2008-02-28 |
Family
ID=26152924
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA200101019A RO121700B1 (ro) | 1999-03-11 | 2000-03-02 | Bacterii lactobacillus capabile să prevină diareea cauzată de bacterii patogene şi rotavirusuri |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6887465B1 (ro) |
| EP (1) | EP1165105A1 (ro) |
| JP (1) | JP3765983B2 (ro) |
| CN (1) | CN1244684C (ro) |
| AU (1) | AU779789B2 (ro) |
| BR (1) | BR0008920A (ro) |
| CA (1) | CA2364440A1 (ro) |
| CZ (1) | CZ20013269A3 (ro) |
| HK (1) | HK1046864B (ro) |
| HU (1) | HUP0200374A2 (ro) |
| IL (2) | IL145080A0 (ro) |
| MX (1) | MXPA01009017A (ro) |
| NO (1) | NO20014298L (ro) |
| NZ (1) | NZ513804A (ro) |
| PL (1) | PL203281B1 (ro) |
| RO (1) | RO121700B1 (ro) |
| WO (1) | WO2000053202A1 (ro) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1034788A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-13 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhea |
| EP1034787A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-13 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria |
| EP1541673B1 (en) | 2000-05-25 | 2007-04-04 | Société des Produits Nestlé S.A. | Probiotics for pet food applications |
| KR100419132B1 (ko) * | 2000-12-29 | 2004-02-18 | 조성근 | 위·장 점막 부착성과 증식성, 내산성, 내담즙성 및헬리코박터 파일로리, 대장균 0157:ｈ7에 대한 항균성이우수한 락토바실러스 파라카제이 서브스패시즈 파라카제이ｃｓｋ 01 |
| GB0124580D0 (en) | 2001-10-12 | 2001-12-05 | Univ Reading | New composition |
| KR100356672B1 (ko) * | 2001-12-27 | 2002-10-19 | 주식회사 바이로박트 | 신규한 락토바실러스 속 미생물 및 그 용도 |
| EP1384483A1 (en) * | 2002-07-23 | 2004-01-28 | Nestec S.A. | Probiotics for treatment of irritable bowel disease (IBS) through improvement of gut neuromuscular function |
| AU2005215858B2 (en) * | 2004-02-24 | 2010-07-15 | Chr. Hansen A/S | Frozen lactic acid bacteria culture of individual pellets |
| MY143693A (en) * | 2004-03-24 | 2011-06-30 | Nestec Sa | Shelf stable product wih living micro-organisms |
| PL1951273T3 (pl) | 2005-10-06 | 2014-07-31 | Probi Ab | Zastosowanie lactobacillus do leczenia chorób autoimmunologicznych |
| ATE478568T1 (de) * | 2007-02-02 | 2010-09-15 | May Amadeus Alexander | Produkt mit lebenden probiotischen mikroorganismen |
| RU2556124C2 (ru) * | 2009-05-11 | 2015-07-10 | Нестек С.А. | Lactobacillus johnsonii La1 NСС533 (CNCM 1-1225) И ИММУННЫЕ НАРУШЕНИЯ |
| EP3260126A1 (en) * | 2009-10-09 | 2017-12-27 | Prothera, Inc. | Compositions and methods comprising pediococcus for reducing at least one symptom associated with autism spectrum disease in a person diagnosed with an autism spectrum disease |
| DK2693885T3 (en) * | 2011-04-08 | 2018-05-22 | Chr Hansen As | Synergistic antimicrobial effect |
| JP6028962B2 (ja) * | 2012-02-16 | 2016-11-24 | 国立大学法人金沢大学 | ウイルス感染予防乳酸菌組成物及びウイルス感染予防乳酸発酵食品 |
| CN112869169B (zh) * | 2019-11-29 | 2023-07-18 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 副干酪乳杆菌et-22提升肠道细菌感染抗性和肠道免疫力的应用 |
| CN112869167A (zh) * | 2019-11-29 | 2021-06-01 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 副干酪乳杆菌k56提升肠道细菌感染抗性和肠道免疫力的应用 |
| CN115024382B (zh) * | 2022-05-05 | 2023-03-14 | 浙江大学 | 一株抗动物腹泻动物联合乳杆菌zjuids-r2及其应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ239370A (en) * | 1990-08-22 | 1994-04-27 | Merck & Co Inc | Bioerodible implantable controlled release dosage form comprising a poly(ortho ester) or a polyacetal with an active agent incorporated into the chain backbone |
| ES2111625T3 (es) | 1992-07-06 | 1998-03-16 | Nestle Sa | Agente antigastritis. |
| CN1094972C (zh) * | 1994-05-26 | 2002-11-27 | 伯拉考公司 | 人类来源的乳酸杆菌菌株、它们的组合物及其应用 |
| US5837238A (en) | 1996-06-05 | 1998-11-17 | Biogaia Biologics Ab | Treatment of diarrhea |
| IT1284877B1 (it) * | 1996-08-09 | 1998-05-22 | Dicofarm Spa | Trattamento delle diarree acute del bambino e prevenzione della sensibilizzazione allergica verso alimenti introdotti nella fase |
| IT1289984B1 (it) * | 1997-02-27 | 1998-10-19 | Proge Farm Srl | Ceppi di lattobacilli utili nel trattamento di disfunzioni del sistema gastrointestinale |
| SE510813C2 (sv) * | 1997-12-08 | 1999-06-28 | Arla Ekonomisk Foerening | Bakteriestam av arten Lactobacillus Paracasei subsp. paracasei, sammansättning därav för användning i livsmedel, samt produkt innehållande stammen |
-
2000
- 2000-03-02 IL IL14508000A patent/IL145080A0/xx active IP Right Grant
- 2000-03-02 JP JP2000603691A patent/JP3765983B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 RO ROA200101019A patent/RO121700B1/ro unknown
- 2000-03-02 CN CNB00807402XA patent/CN1244684C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 NZ NZ513804A patent/NZ513804A/en unknown
- 2000-03-02 EP EP00909292A patent/EP1165105A1/en not_active Withdrawn
- 2000-03-02 AU AU31629/00A patent/AU779789B2/en not_active Ceased
- 2000-03-02 CA CA002364440A patent/CA2364440A1/en not_active Abandoned
- 2000-03-02 WO PCT/EP2000/001798 patent/WO2000053202A1/en active IP Right Grant
- 2000-03-02 MX MXPA01009017A patent/MXPA01009017A/es not_active Application Discontinuation
- 2000-03-02 HU HU0200374A patent/HUP0200374A2/hu unknown
- 2000-03-02 CZ CZ20013269A patent/CZ20013269A3/cs unknown
- 2000-03-02 PL PL350776A patent/PL203281B1/pl unknown
- 2000-03-02 BR BR0008920-6A patent/BR0008920A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-03-02 US US09/936,542 patent/US6887465B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-08-23 IL IL145080A patent/IL145080A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-09-04 NO NO20014298A patent/NO20014298L/no not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-11-22 HK HK02108478.2A patent/HK1046864B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL350776A1 (en) | 2003-02-10 |
| MXPA01009017A (es) | 2002-04-24 |
| IL145080A0 (en) | 2002-06-30 |
| IL145080A (en) | 2006-12-10 |
| PL203281B1 (pl) | 2009-09-30 |
| WO2000053202A1 (en) | 2000-09-14 |
| AU3162900A (en) | 2000-09-28 |
| HK1046864B (zh) | 2006-10-27 |
| NO20014298L (no) | 2001-11-05 |
| CN1244684C (zh) | 2006-03-08 |
| NO20014298D0 (no) | 2001-09-04 |
| CN1350462A (zh) | 2002-05-22 |
| EP1165105A1 (en) | 2002-01-02 |
| CA2364440A1 (en) | 2000-09-14 |
| JP3765983B2 (ja) | 2006-04-12 |
| US6887465B1 (en) | 2005-05-03 |
| CZ20013269A3 (cs) | 2002-04-17 |
| BR0008920A (pt) | 2001-12-18 |
| HUP0200374A2 (en) | 2002-06-29 |
| AU779789B2 (en) | 2005-02-10 |
| HK1046864A1 (en) | 2003-01-30 |
| NZ513804A (en) | 2001-09-28 |
| JP2002537867A (ja) | 2002-11-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6835376B1 (en) | Lactobacillus paracasei strain for preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria | |
| CA2364436C (en) | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhoea | |
| RO121700B1 (ro) | Bacterii lactobacillus capabile să prevină diareea cauzată de bacterii patogene şi rotavirusuri | |
| PL195110B1 (pl) | Biologicznie czyste kultury bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus, kompozycje do immunostymulacji i zastosowanie biologicznie czystych kultur | |
| EP1332223B1 (en) | Method for screening probiotic strains of the genus bifidobacterium | |
| MXPA01008927A (en) | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhoea | |
| MXPA01008976A (en) | Lactobacillus strains preventing diarrhoea pathogenic bacteria |