CZ2001281A3 - Způsob in- vitro pro rozpoznání a diagnostiku akutních koronárních syndromů - Google Patents
Způsob in- vitro pro rozpoznání a diagnostiku akutních koronárních syndromů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2001281A3 CZ2001281A3 CZ2001281A CZ2001281A CZ2001281A3 CZ 2001281 A3 CZ2001281 A3 CZ 2001281A3 CZ 2001281 A CZ2001281 A CZ 2001281A CZ 2001281 A CZ2001281 A CZ 2001281A CZ 2001281 A3 CZ2001281 A3 CZ 2001281A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- choline
- alk
- group
- cctd
- enyl
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 122
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims description 31
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 64
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 claims abstract description 57
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims abstract description 45
- 229960001231 choline Drugs 0.000 claims abstract description 41
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 40
- HTZINLFNXLXRBC-CQLBIITFSA-N 1-(1Z-hexadecenyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC\C=C/OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C HTZINLFNXLXRBC-CQLBIITFSA-N 0.000 claims abstract description 31
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical class CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims abstract description 26
- 229950004354 phosphorylcholine Drugs 0.000 claims abstract description 26
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 23
- XYZZKVRWGOWVGO-UHFFFAOYSA-N Glycerol-phosphate Chemical class OP(O)(O)=O.OCC(O)CO XYZZKVRWGOWVGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 claims abstract description 17
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 32
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 27
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 24
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 23
- 229940112042 peripherally acting choline derivative muscle relaxants Drugs 0.000 claims description 22
- 150000003248 quinolines Chemical class 0.000 claims description 22
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 18
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 18
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 15
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 claims description 13
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical class CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical class NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 claims description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 9
- 239000006046 creatine Chemical class 0.000 claims description 6
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 claims description 6
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 claims description 3
- 238000001225 nuclear magnetic resonance method Methods 0.000 abstract 1
- 101100313185 Homo sapiens CCT4 gene Proteins 0.000 description 131
- 102100029958 T-complex protein 1 subunit delta Human genes 0.000 description 131
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 39
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 17
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 16
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 16
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 13
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 12
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 11
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 10
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 10
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 9
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 9
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 9
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 7
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 7
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000011420 Phospholipase D Human genes 0.000 description 6
- 108090000553 Phospholipase D Proteins 0.000 description 6
- 102000004903 Troponin Human genes 0.000 description 6
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 6
- -1 phosphorylcholine Chemical class 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 5
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 4
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 4
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 4
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 4
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 4
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 102000011720 Lysophospholipase Human genes 0.000 description 3
- 108020002496 Lysophospholipase Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000003851 biochemical process Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 3
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 3
- 102000036675 Myoglobin Human genes 0.000 description 2
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000014190 Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 108010011964 Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000002586 coronary angiography Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000007435 diagnostic evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 230000007576 microinfarct Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027324 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Human genes 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006298 Breast pain Diseases 0.000 description 1
- 101150073426 Ctsj gene Proteins 0.000 description 1
- 206010013496 Disturbance in attention Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 101001009252 Homo sapiens 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010024119 Left ventricular failure Diseases 0.000 description 1
- 241000283986 Lepus Species 0.000 description 1
- 208000006662 Mastodynia Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 201000009623 Myopathy Diseases 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000007718 Stable Angina Diseases 0.000 description 1
- 241000973887 Takayama Species 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000013394 Troponin I Human genes 0.000 description 1
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 description 1
- 102000004987 Troponin T Human genes 0.000 description 1
- 108090001108 Troponin T Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010022198 alkylglycerophosphoethanolamine phosphodiesterase Proteins 0.000 description 1
- 238000012801 analytical assay Methods 0.000 description 1
- 238000002583 angiography Methods 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 1
- 206010007625 cardiogenic shock Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000007813 chromatographic assay Methods 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007887 coronary angioplasty Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- LIIALPBMIOVAHH-UHFFFAOYSA-N herniarin Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(OC)=CC=C21 LIIALPBMIOVAHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JHGVLAHJJNKSAW-UHFFFAOYSA-N herniarin Natural products C1CC(=O)OC2=CC(OC)=CC=C21 JHGVLAHJJNKSAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000009916 joint effect Effects 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 238000000670 ligand binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000012594 liquid chromatography nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229940087646 methanolamine Drugs 0.000 description 1
- 108010077055 methylated bovine serum albumin Proteins 0.000 description 1
- ZLQJVGSVJRBUNL-UHFFFAOYSA-N methylumbelliferone Natural products C1=C(O)C=C2OC(=O)C(C)=CC2=C1 ZLQJVGSVJRBUNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000010995 multi-dimensional NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004305 normal phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000035778 pathophysiological process Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000000079 presaturation Methods 0.000 description 1
- 230000001536 pro-arrhythmogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Nuclear Medicine (AREA)
- Electrotherapy Devices (AREA)
- Excavating Of Shafts Or Tunnels (AREA)
- Measurement Of The Respiration, Hearing Ability, Form, And Blood Characteristics Of Living Organisms (AREA)
Description
ZPŮSOB IN-VITRO^ ROZPOZNÁNÍ A DIAGNOSTICKÉ AKUTNÍCH KORONÁRNÍCH SYNDROMŮ
Oblast techniky
Vynález se vztahuje na způsob in-vitro, sloužící k rozpoznání a k diagnostice akutních koronárních syndromů, především akutního infarktu myokardu (AMI) u člověka.
Dosavadní stav techniky
Akutní koronární syndromy zahrnují obrazy nemocí akutního infarktu myokardu (AMI) a instabilní (nestabilní) angíny pektoris, které jsou definovány podle klasifikace WHO (AMI) a Braunwaldovy klasifikace instabilní angíny pektoris (Gillum R. F. a spol. 1984, Am. Heart. J. 108: 150-158; Braunwald E. a spol. 1994, Circulation 90: 613622). Akutní koronární syndromy představují častý a život ohrožující komplex nemocí, u kterého jsou včasné rozpoznání a správná diagnóza a terapie rozhodující pro přežití pacienta. To platí především u akutního infarktu myokardu, u kterého opožděné určení správné diagnózy a terapie mohou mít závažné následky pro pacienta. Známé postupy diagnostiky infarktu myokardu jsou elektrokardiogram a určení rozličných laboratorních znaků. Elektrokardiogram a dosud známé laboratorní znaky se vyznačují v časné fázi akutního infarktu myokardu příliš malou citlivostí, než aby u většiny pacientů mohla být stanovena správná diagnóza. Tak leží citlivost na změny typické pro infarkt na RKG (ST-stahy) u 46 % (Rudé, R. E. a spol. 1983, Am. J. Cardiol. 52:936-942). Citlivost laboratorní zkoušky na aktivitu kreatínkinasy (CK), aktivitu CK-MB, hmotu CK-MB, isoformy CK-MB, na myoglobin a srdeční troponiny dosahuje v prvních dvou hodinách po začátku bolestí 11 až 29 % (Mair J., a spol. 1994, Mitteilungen der deutschen Gesellschaft fůr klinische Chemie 25: 1-6). Omezené diagnostické použití známých postupů v počátečních stadiích akutního infarktu myokardu je příčinou řady klinických problémů, jako je nebezpečí stanovení • ··· chybné diagnózy, zahájení neindikovaných terapií a opoždění terapií vedoucích k záchraně života.
U instabilní angíny pektoris je možno rizikové pacienty poměrně snadno a spolehlivě rozpoznat stanovením kardtálního troponinu, ale pomalá rychlost vylučování umožňuje i v tomto případě v prvních stadiích chybně-negativní nálezy. To je problematické, protože pacienti v tomto případě mohou mít stejně špatnou prognózu jako pacienti s AMI, kteří potřebují rychlou a cílenou antischemickou therapii. Je proto zapotřebí rychlý vývoj metod, které by umožňovaly včasné rozpoznání akutních koronárních syndromů, především akutního infarktu myokardu.
Podstata vynálezu
Předložený vynález si proto klade za cíl podat způsob, který umožňuje včasné rozpoznání akutních koronárních syndromů a tím možní zlepšení diagnostiky a terapii onemocnělých pacientů.
Tato úloha je řešena postupem využívajícím znaky podle nároku 1. V předloženém vynálezu metodiky k rozpoznání akutních koronárních syndromů, zvláště pak akutního infarktu myokardu, je zahrnuto stanovení a zhodnocení obsahu cholinu, derivátů cholinu a/nebo trimethylammoniových derivátů, vybraných ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin, které se nacházejí v tělních tekutinách nebo v tělních částech odebraných pacientovi.
Cholin, deriváty cholinu a trimethylammoniové deriváty vybrané ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin, jsou molekuly lipidové látkové výměny a jsou v následujícím společně označovány jako „CCTD“. CCTD mají následující obecné chemické vzorce:
···
Cholin:
CH3
H3C — Ní+)—C2H —C2H—OH
OHh (vzorec 1)
CH3
Cholinové deriváty: H3C—N(+)—C2H—C2H—-O—-R1 I
CH3
R1 - zbytek 1
CH3 t
Trimetylammonivé deriváty: H3C— N(+)— R2
(obecný vzorec 2) (obecný vzorec 3)
R2 - zbytek 2
R1 a R2 představují určité chemické substituenty, charakterizující skupinu látek zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lyseoplasmenylcholin. Plasmalogeny a lysoplasmenylcholin obsahují v těchto molekulových podílech alkenylovou skupinu.
Vzorec 1 představuje cholin [2-hydroxyethyl]trimethylammonium se svým protiiontem. Vzorec 2 představuje obecný vzorec cholinových derivátů a vzorec 3 je obecný vzorec trimethylammoniových derivátů jako jsou fosforylcholin a plasmalogeny, jako plasmenylcholin a lysoplasmenylcholin. Negativní náboj se může nalézat ve stejné molekule nebo v protiontu. Většina CCDT jsou buď díly fosfolípidů, představující stavební kameny biologických membrán nebo jsou úzce spojeny s látkovou výměnou fosfolípidů. Buňky srdečního svalu jsou obzvláště bohaté plasmenylcholinem, představující fosfolipídy obsahující charakteristickou alkenylovou skupinu v molekule. Plasmenylcholiny jsou součástí membrán mitochondrií, tvořící podstatnou část hmoty myokardu. Aktivace rozličných myokardiálních fosfolipas při těžké ischemii myokardu vede podle výsledků přihlašovatelů vynálezu ke zřetelnému uvolňování cholinu, cholinových derivátů a chemicky příbuzných trimethylammoniových derivátů, jako jsou fosforylcholin, plasmalogeny nebo lysoplasmenylcholin, a způsobují zvýšení koncentrace CCDT v t « « · určitých tělních tekutinách a tělních částech. Není známo, do jaké míry se toho zúčastňují nemyocytární prvky včetně endothelu a buněk hladkého svalstva. Chemická příbuznost cholinu, cholinových derivátů a trimethylammoniových derivátů, vybraných ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin a jejich podobné chování při pathologických procesech, tj. velmi brzké uvolňování ze srdce ve spojení s destrukcí ischemických membrán, vytváří souhrnný názor na CCTD.
Možné rozdíly mezi jednotlivými CCTD ustupují do pozadí před rozhodujícím společným působením při velmi rychlém uvolňování myokardiálních látek při akutním koronárním syndromu, a tento společný a souhrnný vliv je pro předložený vynález rozhodujícím znakem metodiky včasné diagnostiky v prvních hodinách po začátku bolestí.
Diagnostické využití uvolňování cholinu, cholinových derivátů a trimethyl-ammoniových derivátů, vybraných ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin a sloužící k rozpoznání akutních koronárních syndromů a akutního infarktu myokardu u člověka nebylo dosud popsáno. Je pouze známo, že při experimentálním uspořádání zkoušek v časném stadiu ischemie myokardu byl pozorován vzestup obsahu lysofosfoglyceridů (např. lysofosfatidyl-cholinu) v myokardu a v žilním a lymfatickém efluátu (Corr P. B. a spol., 19878, J. Mol. Cell Cardiol. 19: 34-53; Snyder D. W. 1981, Am. J.Physiol. 241: H700-H707; Akita H. a spol., 1986, J. Clin. Invest. 78: 271-280). Do žádné z publikací nebyla zařazena zmínka o postupu zhodnocení obsahu cholinu, derivátů cholinu a trimethylammoniových derivátů vybraných ze skupiny fosforylcholin, plasmalogenů a lysoplasmenylcholinu, obsažených v tělních tekutinách pro určení diagnózy akutního koronárního syndromu, resp. akutního infarktu myokardu u člověka. V pozadí uvedených publikací stojí pozorování, že lysofosfatidylcholin vykazuje zřejmě proarytmické efekty a že léčiva, mající anti-lysofosfatidylcholinový účinek by možná mohla být účelnými therapeutiky.
Vynález se vztahuje na postup ke stanovení cholinu, cholinových a/nebo trimethyl-ammoniových derivátů, jako jsou fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenyl-cholin a nebo určitých reakčních produktů ke včasné diagnóze akutních koronárních syndromů. Při tom je třeba rozlišovat mezi ve vynálezu nezařazeným diacyl-fosfatidylcholinem a do vynálezu zahrnutým plasmenylcholiny. Stejné je třeba rozlišovat mezi do vynálezu nezařazenými lysofosfatidylcholiny s jednou acylovou skupinou v molekule a do vynálezu spadajícími lysoplasmenylcholiny s jednou alkenylovou skupinou v molekule. Nespecifické postupy hodnocení, neodlišující do vynálezu spadající substance od jiných fosfolipidů nebo jejich součástí, nevykazují znaky postupu zahrnutého do vynálezu, které jsou podstatné pro včasnou diagnostiku akutních koronárních syndromů, a nemohou proto být postaveny na úroveň popisovaného postupu.
Tak nespecifické postupy stanovení celkové skupiny fosfolipidů nebo lysofosfatidylcholinů v plazme, séru, nebo celkové krvi neukazují charakteristické znaky postupu podle vynálezu pro včasnou diagnostiku akutních koronárních syndromů. Tyto v literatuře popisované nespecifické postupy stanovují obsah fosfolipidů v krvi, v podstatě tedy hepatitické fosfolipidy, které právě neobsahují plasmenylcholiny a lysoplasmenylcholin podle předloženého vynálezu, ale obsahují ve zcela převažujícím díle cholinové fosfolipidy bez alkenylove skupiny, např. diacylfosfatidylcholin. Protože tyto do vynálezu nespadající analytické postupy neměří specificky substance, které jsou při akutním koronárním syndromu uvolňovány ze srdce do krve, nemají z tohoto důvodu znaky podle postupu zahrnutého ve vynálezu. Analytickými postupy pro stanovení fosfolipidů, které nespadají do předloženého vynálezu, se buď nezjistí žádné podstatné koncentrační změny nebo dokonce se zjišťuje snížení jejich obsahu, a je tedy jasné, že tyto postupy nezachytí uvolňování látek ze srdce s odpovídajícím navýšením koncentrace v krvi. Při stanovení cefé skupiny lysolecitinů se při akutním infarktu myokardu často změří úbytek koncentrace, protože v rámci nespecifické akutní fáze reakce dochází ke snížené tvorbě rozličných acyl-lysofosfatidylcholinů redukcí aktivity lecitinové cholesterolové acyltransferasy (LCAT). Měření za použití nespecifických analytických postupů • · φφ fosfolípidů vedou tedy často k právě opačným výsledkům a závěrům, které se neobjevují u postupu zahrnutého do předloženého vynálezu.
Analytický postup podle předloženého vynálezu je možno provést různými analytickými technikami, pokud mohou být látky podle předloženého vynálezu dostatečně specificky stanoveny. Tak např. je možná spektroskopie NMR po předcházející odstředivé ultrafiltraci zkušebního vzorku a odstranění špatně rozpustných diacyl-fosfatidylcholinů vázaných na proteiny. Stejně dobře je možno použít chromatografickou, biochemickou nebo imunologickou analytickou techniku nebo i jiné postupy. Analytický postup může být proveden podle publikovaných analytických postupů, jako jsou např. biochemické nebo enzymatické postupy (Takayama M. a spol., 1977, Clin. Chím. Acta 79: 93-98), vysokovýkonná kapalinová chromatografie (HPLC) (Brouwers J. F. H. a spol., 1988, J. Lipid. Res. 39: 344-353; Potter P. a spol., 1983, J. Neurochem. 41: 188-94) nebo plynová chromatografie a/nebo hmotová spektrometrie (Myher J. J. a spol., 1989 Lipids 24: 396-407; Pomfret A. a spol., 1998, Anal. Biochem. 180: 95) nebo imunologické postupy (Smál M. a spol., 1991, Lipids 26: 1130-1135; Baldo B. A. a spol., 1991, Lipids 26: 11361139). Přehled analytiky fosfolípidů byl publikován Olssonem (Olsson N. U. a spol.) Tyto publikace jsou zahrnuty ve vynálezu.
U biochemických postupů zahrnutých do vynálezu jsou např. přísadou reagencií (např. enzymů) vyvolány chemické reakce nebo vytvořeny reakční produkty, které pak umožňují detekovat a měřit celkovou skupinu, nebo podskupinu nebo poddruhy CCDT (viz příklady použití).
U imunologických postupů podle vynálezu se např. používají imunologické reagencie (např. antilátky), zpravidla v kombinaci s dalšími chemickými a/nebo imunologickými reagenciemi, které vyvolávají reakce nebo dávají vznik reakčním produktům, které umožňují detekci a měření celkové skupiny, podskupiny nebo poddruhů CCTD (viz příklady použití).
• · ·· a · · · ·
U chromatografických postupů se např. podle vynálezu provede po předúpravě vzorku dělení na klidnou (stacionární) a pohyblivou (mobilní) fázi, které mají odpovídající kvalitativní a kvantitativní schopnost výpovědi o CCTD (víz příklady použití).
U každého jednotlivého analytického postupu a u vznikajících reakčních produktů je třeba uvážit, že mohou vznikat jednotlivé vrstvy CCTD, dvojité vrstvy, membrány, micely a/nebo vezikuly, a že tyto jevy mohou mít pro analytické určení svůj význam.
Vždy podle zvolené analytické techniky a podle postupu je možné na základě látek uvedených v předloženém vynálezu činit kvantitativní závěry na základě analytického určení jednotlivých určitých seskupení nebo celkových skupin. Jmenované tisky jsou převzaty do předložené přihlášky.
Při uvolnění kardiálních CCTD v rámci ischemické membránové destrukce buněk srdečního svalstva mají význam určité aktivované fosfolipasy. Tyto fosfolipasy odštěpují fosfolipidy, takže kromě CCTD vznikají také jednoduché reakční produkty, které sice nemají žádnou trimethylammoniovou skupinu, ale jsou uvolňovány shodným postupem. Protože tyto jednoduché reakční produkty CCTD jsou podílem společného uvolňovacího mechanizmu, je možné provést postup podle vynálezu také stanovením takových jednoduchých reakčních produktů. Kromě fosfolipasy A2, která kromě jiného přispívá k uvolňování zmíněného lysoplasmenylcholinu, jsou další významné enzymy této skupiny fosfolipasy A a D, které atakují esterovou vazbu mezi hydroxy skupinou na atomu 3-sn-C glycerolu a fosforylcholinu (důsledek působení fosfolipasy C) nebo vazbu mezi fosforylovou skupinou glycerolfosfátu substituovaného v polohách 1,2 a mezi fosforylovou skupinou zaesterovaného cholinu (působení fosfolipasy D). Reakční produkty aktivity obou těchto fosfolipas ve vlivu na plasmalogeny jsou podle toho 1-0-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerol (fosfolipasou C), resp. 1-O-alk-r-enyl-2-substítuovaný glycerolfosfát (fosfolipasou D). Tyto reakční produkty se uvolňují společně s cholinem, resp. fosforylcholinem při působení jmenovaných fosfolipas na plasmenylcholiny. Proto může postup podle vynálezu být použit k časné diagnóze akutních koronárních syndromů tím, že se • « · · stanoví cholin, deriváty cholinu a/nebo trimethylammoniové deriváty vybrané ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmaíogeny a lysoplasmenylcholin, a/nebo jejich reakční produkty, vybrané ze skupiny 1-O-alk-1'-enyl-2-substituovaného glycerolu a 1 -O-alk-1 '-enyl-2-substituovaného glycerolfosfátu.
Kromě zesílené aktivity fosfolipas mohou být pro stoupající obsah CCTD a jejich reakčních produktů významné i další následující pochody: Snížené odbourávání a/nebo zvýšení syntézy CCTD a jejich reakčních produktů (s odpovídajícími změnami za tuto činnost zodpovědných enzymů) a uvolňování buněčných oddílů a membrán jinými faktory (mechanické faktory, natékání buněk a jiné jevy myocytárního poškození).
Příklady provedení vynálezu
Vynález je vysvětlován na následujících příkladech provedení:
Obr. 1 ukazuje spektrum 1H-NMR krevního vzorku pacienta;
Obr. 2 ukazuje zvětšené úseky analogického spektra obr. 1 u pacienta s akutním infarktem myokardu (A) a u pacienta bez akutního infarktu myokardu (B). Analogické zvýšení plochy singletů N*(CH3)3 složky CCTD je možno pozorovat u pacienta s akutním infarktem myokardu.
Obr.3 ukazuje data k diagnostické hodnotě CCTD pro diagnózu akutního infarktu myokardu v celé době průběhu zkoušek.
Obr. 4 ukazuje data diagnostického hodnocení CCTD pro diagnózu akutního infarktu myokardu v časném stadiu AMI (0 až 6 hodin).
Obr. 5 ukazuje data diagnostického hodnocení CCTD pro diagnózu akutního infarktu myokardu ve velmi časném stadiu AMI (0 až 3 h), a • ««·
Obr. 6 ukazuje data diagnostického hodnocení CCTD pro diagnózu akutního infarktu myokardu v pozdním stadiu AMI (7 až 35 h).
Výběr a odběr vhodného zkušebního vzorku tělní tekutiny
K provedení zkoušky podle vynálezu je třeba odebrat vzorek tělní tekutiny. Při tom diagnostická hodnota zkoušky je záviská od volby této tekutiny. Provedení zkoušky je možné např. zkouškou vzorku krve, resp. zpracovaného vzorku krve na plazmu, sérum, nebo i z původního vzorku krve. Kromě vzorku krve je možné pro zkoušku použít i jiné tělní tekutiny, např. moč. CCTD se z určitého podílu glomerulámě odfiltruje a objeví se tím např. částečně také v moči. Dále je třeba počítat s určitým časovým zpožděním v porovnání se zkouškou provedenou ze vzorku krve v důsledku časového opoždění koncentračních změn, což je právě při zkoušce moče nevýhodné. Kromě toho není v každém případě tak snadné získat vzorek moče, jako vzorek krve, což rovněž představuje nevýhodu. Výhodná je v případě použití vzorku moče skutečnost, že je obvykle k dispozici větší množství vzorku, a že měřením koncentrace ve vzorku moče se zachytí vzorek produkovaný v delším časovém období, takže se zachytí patofyziologické pochody v delším časovém intervalu. Ale i tak je provedení uváděného postupu ze vzorku krve, resp. zpracovaného vzorku krve z dříve uvedených důvodů výhodnější. Provedení zkoušky z jiných částí těla a tělních tekutin, jako vzorků tkáně, lymfy nebo kapilární krve, je rovněž vhodné. Při odběru vzorků by se měly respektovat i další skutečnosti. Exogenní přívod většího množství cholinu, cholinových derivátů nebo trimethylammoniových derivátů před provedením zkoušky by měl být vyloučen. Kromě toho by pro včasné rozpoznání akutních koronárních syndromů se měl odběr vzorku uskutečnit co nejdříve, případně periodicky opakovat.
Stanovení obsahu CCTD ve vzorku tělní tekutiny
Diagnostický a vyhodnocovací postup podle předloženého vynálezu je dalekosáhle nezávislý na způsobu stanovení, pokud existuje dostatečná specifická citlivost pro jednotlivé látky, podskupiny, nebo všechny látky podle vynálezu. Podle vynálezu se • ··· stanovují látky jako cholin, deriváty cholinu a/nebo deriváty trimethylammonia, vybrané ze skupiny obsahující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin, a dále určité jednoduché reakční zplodiny CCTD, vybrané ze skupiny, která zahrnuje 1-O-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerol a 1-0-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerol-fosfát. Jako příklad výkladu byla použita 1H-NMR spektroskopie, která může jako primární analytický postup být použita i pro vyhodnocení. Kromě jaderné spinové rezonance (metody NMR) mohou být použity postupy, založené na biochemických, enzymatických, imunologických, klinicky chemických, chromatografických, hmotově spektrometrických, elektrochemických nebo fotometrických a jiných postupech, pokud jsou schopné s dostatečnou selektivitou zachytit kardiálně uvolněné CCTD (resp. jejich jednoduché reakční produkty) u pacientů, u kterých existuje podezření na akutní koronární syndromy.
Klinicky-chemické nebo jiné způsoby jakož i rychlotesty ke stanovení látek typu CCTD by se měly před použitím přezkoušet a vyhodnotit na analytickou vhodnost. Pro diagnostiku akutních koronárních syndromů by se měly pokud možno použít jen takové způsoby, které jsou v porovnání s 1H-NMR spektroskopií diagnosticky dalekosáhle stejně vhodné nebo i výkonnější. V následujícím jmenované analytické postupy jsou příklady; tj. mohou být použity kvalitativně i kvantitativně jiné chemikálie, roztoky, reagencie a přístroje, pokud se jimi dosáhnou porovnatelné výsledky. Zásadně postačí pro provedení zkoušky využití jedné hodnotné měřící metody pro stanovení obsahu CCTD v jedné tělní tekutině.
Příklad provedení: Stanovení CCTD 1H-NMR spektroskopií
Příprava vzorku • Odběr 10 ml krve • Příprava zkoušky krve podle voleného zkušebního materiáli (sérum, plasma nebo plná krev) • Odstředivá filtrace 4 ml zkušebního materiálu filtrem 10-kD (např. Ultrafree 4 B 10; Millipore) • · ·
··
• Odpipetování 600 μΙ ultrafiltrátu do 5 mm NMR trubičky např. 527-PP-7, Willmad, Buena, SA) • Odpipetování 100 μΙ roztoku 3,5-mM-d4-TST-D2O jako koncentračního standardu na objem vzorku 700 μΙ (TST - sodná sůl trimethylsilylpropionové kyseliny) • Měření pH v trubičce 5 mm NMR (např. 3 mm Minitrode, Hamilton), bezprostředně před nebo po zkoušce.
Vysokorozlišujfcf spektroskopie 1H NMfí
Spektroskopie 1H NMR se provede např. ria spektrometru 600 MHz (např. Bruker AMX 600) při následujících podmínkách:
• Jednoduchá pulzní technika • Potlačení vody předcházející saturační technikou • RF impuls 30° až 900 • Doba opakování pulzů 5 až 15 s • 64 až 128 skenů na vzorek..
Chemické posuny 1H se vztahují interně na TSPt. Charakterizace skupin CH-, CH2- a CH3- jakož i dalších nosičů protonových skupin známých substancí se provádí za použití publikovaných posunových dat 1H. Jako doplněk mohou být protonové rezonance u nezávislých zkoušek získány po přidání čistých látek. Stanovení koncentrací jednotlivých látek se provede integrací odpovídajících protonových rezonancí a koncentračního standardu TSP| s ohledem vždy na odpovídající počet rezonancí a na zřeďovací faktor. Kvantitativní vyhodnocení spektra se provede podle následujícího vzorce:
Ctsp Λμ Njsp
Cw -^tsp Nu (vzorec 4)
Cm
Koncentrace metabolitů (M)
CTSP - Koncentrace koncentračního standardu » ·
AM - Integrál pod zájmovým pikem (M)
ATSP Integrál koncentračního standardu
Fd - Zřeďovací faktor přidáním koncentračního standardu
Nm - Počet protonů M
Wtsp “ Počet protonů v koncentračním standardu
Zkušební postup byl přihlašovateli hodnocen a korelován pro stanovení nízkomolekulárních látek s korelačním koeficientem r - 0,998 za použití enzymatických metod. Obr. 1 ukazuje spektrum 1H NMR jednoho pacienta. Typický singlet skupiny N+(CH3)3 cholinu, cholinových derivátů a derivátů trimethylammonia je ve spektrech 1H NMR zpravidla dokazatelný v rozsahu mezi 2,5 až 4,5 ppm. Změny v protonové rezonanci jsou možné v důsledku předanalytických vlivů, jako pH, které mohou teoreticky vést k posunům, rozštěpení a překladům, a musí být proto při vyhodnocování zohledněny. Je vhodné chemické posuny protonových rezonancí CCTD pro zvolené zkušební podmínky analytiky NMR přesně stanovit separátní řadou zkoušek. Singlet N+(CH3)3 je zvláště vhodný pro kvantifikaci, protože reprezentuje devět ekvivalentních protonů. Singlet N*(CH3)3 představující typický nález u akutního infarktu myokardu znázorňuje obr. 2. Koncentrace CCTD byla stanovena podle shora uvedených postupů. Spektroskopie NMR umožňuje např. změnou analytiky a vyhodnocením stanovit celkovou skupinu, podskupinu nebo poddruh CCTD, zatím co imunologické nebo biochemické postupy podle předloženého postupu často určují podskupinu nebo poddruh DDTD. Další příklady provedení postupu podle vynálezu je možné za použití jiných postupů pro stanovení CCTD než je spektroskopie NMR. U biochemických postupů podle vynálezu se umožní reakce, resp, se připraví reakční produkty (např. přísadou enzymů), které následně umožní detekci a měření celkové skupiny, podskupiny nebo poddruhu CCTD. Takový postup podle vynálezu může představovat např. modifikace postupu publikovaného Takayamou (Takayama M. a spol., 1977, Clin. Chim. Acta 79: 9398). Stanovení cholinu se podle toho provede oxidací cholinu za použití chinolinodasy, a získají se reakční produkty betain a peroxid vodíku (H2O.|). Vznik peroxidu vodíku (H2OO se dokáže barevnou reakcí, např. kopulací 4-aminoantiporinu i ··♦ í í · » ’í ·♦···» ·»·* · • · · · · · · ·*· ··· ·· ·· ·· ·· ··· a fenolu za přítomnosti peroxídasy, a koncentrace se stanoví proměřením absorpce při 500 nm na cejchovaném spektrofotometru proti slepé zkoušce.
Podobný postup, ale nespadající do předmětu vynálezu, může být použit pro stanovení celkové skupiny cholinových fosfolipidů, ale použití nespecifické fosfolipasy D bez předcházejícího dalšího dělení nevykazuje znaky vynálezu, protože se současně měří i velká skupina diacylfosfolipidů, které do předmětu vynálezu nespadají. Specifičnost v analytickém postupu použité fosfolipasy, resp. využití předcházejícího dělení rozhoduje o specifičnosti, resp. o druhu analysované látky. Použije-li se nespecifická fosfolipasa D bez následného dělení, stanovuje se nespecifická celková skupina cholinových fosfolipas, a tím nejsou splněny základní znaky postupu podle vynálezu. Použijí-li se specifická fosfolipasa D nebo specifická lysofosfolipasa D, specifické pro substráty podle vynálezu pro plasmenylcholin a/nebo lysoplasmenylcholin, je možné provedení postupu podle vynálezu, protože se měří látky specifické podle předmětu vynálezu. Použití specifických fosfolipas pro plasmalogeny, resp. lysofosfolipasy pro analytiku CCTD nebylo dosud zveřejněno, zvláště ne pro diagnostické využití podle předmětu vynálezu při akutním koronárním syndromu. Je-li před použitím fosfolipasy vzorek specielně upraven (např. chromatografickým dělením, filtrací nebo postupy obohacení), takže se odstraní do předmětu vynálezu nespadající fosfolipidy, zvláště diacylfosfolipidy, pocházející z jater, nehraje substrátová specifičnost použité fosfolipasy, resp. lysofosfolipasy již žádnou takovou významnou roli, a specifičnost postupu je určena předcházejícím dělícím procesem. Vyloučení všech fosfolipas, resp. lysofosfolipas umožňuje v průběhu prováděné analytické zkoušky podle shora uvedeného stanovení obsahu cholinu, což je postup pro diagnostiku akutního koronárního syndromu odpovídající předloženému vynálezu. Stanovení obsahu cholinu je možno provést rovněž po jednoduché srážecí reakci s následným fotometrickým měřením, ale v každém případe by se měla při provedení tohoto jednoduchého způsobu analytického stanovení látek podle vynálezu ověřit specifičnost postupu. Při biochemickém stanovení cholinu nebo jiných CCTD v krvi podle vynálezu je možno před kvantitativním stanovením provést hemolýzu erytrocytů, např. pomocí saponinů.
Při použití imunologických postupů podle předloženého vynálezu jsou použity např. imunologické reagencie (např. antílátky), zpravidla v kombinaci s dalšími chemickými a/nebo imunologickými reagenciemi, při čemž se reakcemi získají reakční produkty, které umožňují detekci a stanovení celkové skupiny, podskupiny nebo poddruhu CCTD. K provedení imunologických zkoušek podle vynálezu může být použita metodika uveřejněná Smalem a Baldou (Smál M.A. a spol., Lipids 26:1130-1135; Baldo B.A. a spol., Lipids 26. 1136-1139). Tyto publikace jsou zahrnuty. Při vývoji imunologického zkušebního postupu podle vynálezu se v prvé řadě připraví imunogen CCTD. Při tom se syntetizované nebo dobře přečištěné CCTD přemění na analogy CCTD a pak navázány na protein (např. methylovaný serumalbumin skotu). Potom se živočichové (např. zajíci nebo ovce) imunisují konjugátem CCTD proteinu a vytvořené CCTD antílátky se izolují a přečistí, např. pomocí afiniční chromatografie. Specifičnost antilátek na CCTD a/nebo podskupiny nebo poddruhy CCTD by se měla náležitě přezkoušet. CCTD antílátky je konečně možno využít při různé technice ke kvantitativní diagnostice.
Při provedení radioimunní zkoušky radioaktivitou značené antigeny (např. 125l-CCTD) s antigenem zkoušené látky (CCTD) zkoušky ruší malé přítomné množství anti-CCTD- antilátek ve zkušebním vzorku. Vytlačení radioaktivně značených CCTD anti-CCDT-antilátkami je v kvantitativním vztahu ke koncentraci CCTD ve zkoušeném vzorku, a je možno je stanovit podle standardní křivky, např. po vysrážení radioaktivních CCTD vázaných na antílátky.
Pomocí podobného principu je možno provést stanovení CCTD pomocí chemiluminescenčního postupu (CCTD-CELIA). CCTD a luminolem značené antigeny ruší o limitované množství antilátek vázaných na pevnou fázi. Měřený světelný signál je nepřímo úměrný koncentraci CCTD ve vzorku z pacienta.
Dále může být imunologické stanovení CCTD provedeno též fluorescenčně polarizovanou imunizační zkouškou. Při tom ruší definované množství přítomných korespondujících CCTD značených fluoroforem s CCTD ve vzorku nepatrné množství přítomných odpovídajících anti-CCTD-antilátek ve vzorku. Registruje se vliv • 9 9 ·♦ fluoroforem značené CCTD po vytvoření antilátek. K měření se použije technika fluorescenční polarizace, při které se měří změna úhlu polarizovaného fluorescenčního záření, které po vybuzení emituje fluofor. Pokud jsou přítomné fluoroforem značené CCTD vázané na antilátky, mohou se málo, ale ve volném stavu dobře otáčet v čase mezi absorpcí a emisí. Polarizace je při nízké koncentraci CCTD veliká (změna úhlu emitovaného záření malá) a při vysoké koncentraci CCTD malá (změna úhlu veliká).
Imunologické stanovení obsahu CCTD podle vynálezu může být rovněž provedeno sendvičovou zkouškou, pokud sledované CCTD, resp. podskupiny nebo poddruhy CCTD mají nejméně dva rozdílné epitopy, nebo se nechají specifickou reakcí převést na látku s nejméně dvěma epitopy. V tomto případě je možné provedení imunoabsorbční zkoušky (linked immunoabsorbent assay) (CCTD-ELISA). Anti CCTD antilátky jsou v tuhé formě vázány, např. na mikrotitrační desce, na magnetických částicích, na plastických perlách nebo konečně na stěnu trubičky. Přidá-li se náležitě zpracovaný vzorek, váže se CCTD vzorku na antilátky. Množství vázaného antigenu CCTD se stanoví přidáním značené druhotné antilátky, která váže antigen CCTD za vzniku sendviče. Čím vyšší je koncentrace vázaného CCTD, tím větší je množství vázané v sendviči, tj. enzymem značená druhotná antilátka. Pro určitý rozsah koncentrace CCTD platí lineární vztah mezi koncentrací CCTD a aktivitou enzymu.
Podobný je podle vynálezu postup stanovení CCTD pomocí t. zv. zkoušky mikrobeadenzym-immunoassay (CCTD-MEIA enzymová mikroperlová imunitní zkouška), při které anti-CCTD-antilátka je vázána na mikroperly. Při prvním kroku postupu se inkubuje vzorek s mikroperlami antilátky, pak se přidá druhotná značená antilátka ve formě alkalické fosfatasy (AP). Dochází k vytvoření sendviče na mikroperlách. V dalším postupu se část reakční směsi odpipetuje na matrici ze skleněných vláken, která má vysokou afinitu k mikroperlám a váže je. Po promytí se matrice ze skleněných vláken s roztokem substance a po odstranění nevázané značené druhotné AP-látky se může v sendviči vázaná AP na mikroperlách ze substrátu, např, methylumbelliferrylfosfátu, odštěpit jako fosfátová skupina.
• · · · · · · · · ··»» ·· 4« ν· «4
Fluorescence vzniklého methylumbelliferonu se proměří v dopadajícím světle při 448 nm. Sendvičové techniky jsou nevhodné pro malé molekuly jen s jedním epitopem a je možno je použít jen u vybraných CCTD s nejméně dvěma epitopy, resp. u takových CCTD, které je možné specifickou chemickou reakcí převést na analogické molekuly s nejméně dvěma epitopy.
Dále je možné ke stanovení množství CCTD využít další varianty a specifikace imunologických metod. K tomu se přičítají přímá imunologická stanovení antigenu, stanovení jako rozpustné imunokomplexy, nepřímá imunologická stanovení, další stanovení antigenu, resp. antilátky značením reakčního partnera, stanovení pomocí vázání ligandu a další heterogenní a homogenní imunologické metody. V rámci imunologických metod pro stanovení obsahu CCTD mohou být využity dělící techniky jako adsorpce, srážení, imunní srážení a/nebo princip tuhé fáze a stejně i rozličné postupy využívající značení, jako radioaktivní značení (např. 126l), enzymatické značení (např. alkalická fosfatasa, křenová peroxidasa, glukosa-6-fosfat-dehydrogenasa), nebo fluorescenční a luminescenční značení (např. chemiluminescence, bioluminescence). Rozhodujícím kriteriem je specifické stanovení CCTD, resp. některé podskupiny nebo poddruhu CCTD nebo některého reakčního produktu a použití pro diagnostiku akutních koronárních syndromů.
U chromatografických postupů pro stanovení CCTD podle vynálezu je možné použít např. po předběžné úpravě vzorku dělení látek rozdělením na klidnou (stacionární) a pohyblivou (mobilní) fázi s odpovídající kvalitativní a kvantitativní výpovědí ohledně CCTD. Stanovení CCDT podle vynálezu se může provést podle metody Brouwerse (Brouwers J. F. H. A spol., 1998, J. Lipid. Res. 39: 344-353). Po preparaci vzorku a extrakci lipidu se napřed oddělí fosfatidylcholiny od jiných lipidů. To se může uskutečnit pomocí vysoceúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) např. jako normální fáze HPCL (NP-HPLC). Po odpovídajícím dělení a sběru eluátu se provede reverzní chromatografická fáze (RP-HPLC), např. acetonitrilem, methanolem a triethylaminem jako rozpouštědlem. Jako detektorový systém je vhodný lightscattering-detection - měření rozptylu světla). Proměřením standardních roztoků v • · • · • φ φ • φ φφφ kombinaci se stanovením fosforu je možné vytvořit cejchovní křivky umožňující kvantitativní stanovení CCTD a zvláště stanovení určitých poddruhů CCTD.
Postupy pro chromatografické a imunologické stanovení mají v porovnáni s NMR přednost v tom, že např. je možno specificky rozlišit určité poddruhy plasmenylcholinu s definovanou alkenylovou skupinou v poloze sn-1 a určitou acylovou skupinou v poloze sn-2, resp. odlišit od jiných podobných molekul a tím tak zvýšit specifičnost zkoušky ve vztahu ke sledovanému orgánu.
Odborníkovi je zřejmé, že podle lynálezu je možné ke stanovení obsahu reakčních zplodin CCTD použít pracovní postupy příbuzné shora uvedeným způsobům.
Pro stanovení poddruhů CCTD jsou vhodné především molekuly, s kterými se získá jen malý počet nesprávných pozitivních zkušebních výsledků pro diagnostiku koronárních syndromů. Kromě jiných poddruhů mají význam následující poddruhy CCTD včetně jejich reakčních produktů a mohou podle vynálezu být stanoveny buď samostatně nebo v libovolné kombinaci: 16:0-20:3 plasmenylcholin, 16:0-18:3 plasmenylcholin, 17:0-18:2 plasmenylcholin, 15:0-18:2 plasmenylcholin, 17:0-18:1 plasmenylcholin, 17:0-18:3 plasmenylcholin, 16:0-17:1 plasmenylcholin, 14:0-18:2 plasmenylcholin, 15:0-18:1 plasmenylcholin, 16:0 lysoplasmenyl- -cholin, 17:0 lysoplasmenylcholin, 15:0 lysoplasmenylcholin, 14:0 lysoplasmenylcholin a reakční produkty 16:0(alk-1-enyl)-20:3 glycerol, 16:0(alk-1-enyl)-18:3 glycerol, 17:0(alk-1enyl)-18:2 glycerol, 15:0(alk-1 -enyl)-18:2 glycerol, 17:0(alk-1 -enyl)-18:1 glycerol, 17.0(alk-1 -enyl)-18:3 glycerol, 16:0(alk-1 -enyl)-17:1 glycerol, 14:0(alk-1-enyl)18:2 glycerol, 15:0(alk-1 -enyl)-18:1 glycerol, 16:0(alk-1 -enyl)-20:3 glycerolfosfát, 16:0(alk-1 -enyl)-18:3 glycerolfosfát, 17:0(alk-1 -enyl)-18:2 glycerolfosfát, 15:0(alk-1enyl)-18:2 glycerolfosfát, 17:0(alk-1 -enyl)-18:1 glycerolfosfát, 17:0(alk-1 -enyl)-18:3 glycerolfosfát, 16:0(alk-1 -enyl)-17:1 glycerolfosfát, 14:0(alk-1 -enyl)-18:2 glycerolfosfát a 15:0(alk-1 -enyl)18:1 glycerolfosfát. Další poddruhy CCTD a reakční produkty mohou být voleny pro postup podle předloženého vynálezu, pokud jejich stanovení splní znaky podle vynálezu.
• · to · to ·· toto· • ··· · · * ♦ ··*·· · • · · · ♦ · « • to·· *· ·· ··
Při provedení analytického postupu pomocí spektroskopie NMR mohou být do analytického stanovení vztaženy kromě N+(CH3)3 singletu také jiné molekuly. Kromě toho může být NMR spektroskopie provedena jako jedno, dvou nebo vícerozměrná NMR spektroskopie nebo ji spojit s jinými zkušebními technikami NMR nebo také v napojení na chromatografické postupy (např. jako LC-NMR).
Jednotnost rozličných možných metod analýzy a techniky podle vynálezu je ve vysoké specifičnosti metody stanovení CCTD, takže jsou podle vynálezu splněny požadavky na včasnou diagnostiku akutních koronárních syndromů. Pro selektivní stanovení kardíálně uvolněných CCTD metodou podle vynálezu mohou být významné určité postupy přípravy vzorku. Tak např. podle popisované metodiky se předcházející ultrafiltrací redukuje nebo podle druhu filtru zcela odstraní množství přítomných a do vynálezu nespadajících hepatických diacyl-cholinfosfolipidů, vázaných na protein, zatím co rozpustná frakce kardíálně uvolněných CCTD včetně plasmalogenů se v ultrafiltrátu stanoví. Mohou být použity jiné metodické postupy čištění a/nebo extrakce nebo biochemická modifikace, které vedou k porovnatelným výsledkům. Dále je možné metodiku podle vynálezu provést tak, aby jedna, více nebo všechny molekulové poddruhy kardíálně uvolněných CCTD, resp. jejich reakční produkty, byly analyticky podchyceny.
Kromě stanovení CCTD nabízí 1H-NMR spektroskopie možnost ve stejném analytickém postupu stanovit další metabolity, jako kreatin (singlet 3,93 ppm) a dimethylamin (singlet 2,727 ppm), které mají rovněž význam pro diagnostiku infarktu. Kombinace a vyhodnocení vícero metabolitů v jednom analytickém postupu (např. CCTD, kreatin a dimethylamin) je zde označováno jako základní rozpoznání (pattern-recognition, vzorové stanovení). V porovnání s izolovaným stanovením koncentrace CCTD zlepšuje vyhodnocení podle uvedeného základního rozpoznání modus diagnostické schopnosti výpovědi metodiky pro rozpoznání akutních koronárních syndromů.
• « * • · ···
Zhodnocení výsledků stanovení CCTD
Zhodnocení výsledků stanovení je provedeno s ohledem na mezní hodnotu. Mezní hodnota je závislá na zkoušené tělní tekutině a na zvoleném analytickém postupu a musí být určena odpovídajícími stanoveními. Je-li naměřená hodnota CCTD vyšší než mezní hodnota, jedná se o akutní případ infarktu myokardu. Je-li naměřená hodnota CCTD nižší než mezní hodnota, je možno akutní infarkt myokardu téměř vyloučit. Analogické platí pro diagnózu instabilní angíny pektoris, při čemž je třeba mezní hodnoty stanovit přezkoušením dostatečného množství pacientů s ohledem na diagnostická zjištění. Při námi prováděném postupu stanovení koncentrace CCTD leží mezní hodnota podle způsobu vyhodnocení mezi 15 až 40 gmol/l. Uváděná klinická data se vztahují na vyhodnocení s mezní hodnotou 22 pmol/l. Při tom je třeba mezní hodnotu, jak již bylo uvedeno, určit jednotlivě pro zvolenou analytickou metodiku, způsob vyhodnocování a přesné stanovení požadavku a může ležet např. při imunologickém nebo chromatografickém stanovení obsahu poddruhů CCTD také v jiném měřícím rozsahu, např. v nanomolárním nebo subnanomolárním rozsahu.
Při použití 1H-NMR spektroskopie může dodatečně k izolovanému stanovení koncentrace CCTD být provedeno vyhodnocení podle postupu základního rozpoznání (pattern-recognition) (např. dodatečné stanovení kreatinu a dimethylaminu). Při vyhodnocování podle způsobu základního rozeznání se zvýšení obsahu CCTD nebo kreatinu při současné normální koncentraci dimethylaminu využije pro diagnózu AMI.
Nálezy u pacientů
Vcelku bylo sledováno 20 pacientů a probandů (pacientů svolných ke zkoušce - 8 žen, 12 mužů) ve věku od 22 do 68 let, zčásti periodicky, s celkovým množstvím provedených zkoušek 44. Další vzorky byly zkoušeny ze specielních důvodů. 10 pacientů mělo akutní infarkt myokardu ( 4 infarkty přední stěny; 6 infarktů zadní stěny). Vzorky byly odebrány v různých intervalech od 1 do 35 h po začatku bolestí. 60 % vzorků bylo odebráno v prvních šesti hodinách po začátku bolestí. U všech • ♦♦· pacientů byla provedena koronární angiografika (9 akutních pacientů a 1 pacient průběžně). U 9 pacientů s AMI byla provedena reperfuzní terapie, tj. trombolysa, primární perkutanní transluminální koronaroangioplastika (PTCA), trombolysa s rescue-PTCA nebo akutní koronární tepenní bypassová operace (ACVB-OP). U jedné pacientky došlo při akutně provedené koronaroangiografii ke spontánní rekanaiizaci v infarktní komoře a ke zbytkovému trombu s dobrým poststenotickým tokem, takže žádná primární PTCA již nebyla provedena. V porovnávané skupině byl jeden pacient se silnými bolestmi toraxu akutně koronaroangio-grafován, při Čemž mohlo být koronární srdeční onemocnění vyloučeno. V porovnávané skupině byla přítomná různá onemocnění, jako instabilní angína pektoris, stabilní angína pektoris, trauma kosterních svalů, myopathie, z.n. emboíie plic, pleuritida a ledvinová nedostatečnost. U pacientů s akutním infarktem myokardu došlo k typické vzorové komplikaci jako nedostatečnost levé části srdce a k poruchám srdečního rytmu. Pacient s infarktem přední stěny dostal reanimační kardiogenní šok, který však přežil po trombolyse, akutní PTCA s implantací stentu a intraaortálního balonového čerpadla (IABP).
U všech vzorků bylo provedeno stanovení koncentrace CCTD.
Hodnocení dosažených analytických výsledků určení koncentrace CCTD bylo provedeno s ohledem na stanovenou mezní hodnotu. Jak bylo již uvedeno, ukazují naměřené hodnoty nad mezní hodnotou na akutní infarkt myokardu; hodnoty pod mezní hodnotou naproti tomu na nepřítomnost akutního infarktu myokardu. Určení diagnostické hodnoty bylo vztaženo na vzorek, tj. hodnocení jednotlivých dosažených výsledků bylo provedeno bez ohledu na dřívější nebo pozdější výsledky stanovení u téhož pacienta. U 29 z 30 infarktových vzorků byly nalezeny hodnoty vyšší než mezní. Naopak s výjimkou jednoho vzorku byly hodnoty CCTD u všech pacientů bez infarktu nižší než mezní hodnota. Obr. 3 ukazuje data sloužící k diagnostickému hodnocení CCTD pro diagnózu akutního infarktu myokardu pro celkové časové období 0 až 35 h. Obr. 3 ukazuje, že CCTD má s 96,6 % nejvyšší citlivost a s 95,4 % nejvyšší diagnostickou hodnotu v porovnání se všemi ostatními ukazateli infarktu. Vysoká diagnostická hodnotnost CCTD je i proto pozoruhodná, že • ««· • ♦ byla zkoušena u mnohých diagnosticky obtížných pacientů, tj. u pacientů s mikroinfarkty (4 z 10 pacientů), u pacientů v prvních hodinách infarktu a u pacientů s traumatem kosterních svalů.
CCTD byla z hlediska diagnostického hodnocení v převaze především v časné fázi konvenčních ukazatelů AMI. Všichni infarktoví pacienti v časovém rozpětí 0 až 6 hodin po začátku bolestí byly na CCTD pozitivní, zatím co jen 37,5 % vzorků pacientů vykazovalo patologické hodnoty CK nebo CK-MB (viz obr. 4). Myoglobin v důsledku své rychlé kinetiky uvolňování vykazoval druhou nejvyšší citlivost s 62,5 %, je ale, jak známo, nespecifický pro myokard. V prvních 6 h vykazovalo jen 50 % vzorků pacientů s AMI patologickou koncentraci troponinu l/T.
Přednosti CCTD jsou ještě výraznější, uvažují-li se pouze vzorky pacientů v čase 0 až 3 h po začátku bolestí (obr. 5). Zatím co konvenční ukazatele infarktu v prvních třech hodinách po začátku bolestí sotva vykazovaly diagnostickou průkaznost s výkonností mezi 50 % a 71 %, rozpoznal se u vzorků pacientů postižených akutním infarktem stanovením CCTD infarkt již v prvních třech hodinách po začátku bolestí. Další výsledky zkoušek přihlašovatelů potvrzují rychlé uvolňování CCTD při akutních koronárních syndromech a jejich vysokou diagnostickou výpovědní hodnotu v časné fázi po začátku symptomatiky. V pozdní fázi AMI dochází k nepatrnému snížení citlivosti CCTD.
Obr. 6 ukazuje diagnostickou hodnotu CCTD v pozdní fázi AMI. V pozdní fázi AMI ležela citlivost CCTD u 91,6 %. U jednoho vzorku došlo k chybnému negativnímu výsledku zkoušky.
Zvýšení koncentrace CCTD byla až na 92,8 % specifická pro akutní infarkt myokardu. U jednoho vzorku byla rovněž nalezena vyšší koncentrace CCTD, bez nálezu akutního infarktu myokardu.
Vyhodnocení spekter 1H-NMR způsobem základního rozpoznání (patternrecognition-modus - sučasné stanovení CCTD, reakčních zplodin, kreatinu a • ·99 dimethylamínu, jakož i jejich libovolné kombinace) zlepšilo hodnotu diagnostické výpovědi metodiky, takže mohly být u všech provedených analys infarkty myokardu prokázány nebo vyloučeny se 100 %ní citlivostí a 100 %ní specifičností.
Pacienti s instabílní angínou pektoris mají, jak známo, horší prognózu, pokud se v průběhu vyšetřování zjistí vyšší hodnoty kardiálního troponinu (Ohman E. M. 1996, N. Engl. J. Med. 335: 1333-41). Předpokládá se, že tito pacienti prodělávají nejen ischemii myokardu, ale také myokardiální mikronekrosu, takže nelze vyloučit, že tito pacienti v budoucnosti podle nového klasifikačního systému AMI budou klasifikováni jako míkroinfarkty. Rychlá identifikace takových pacientů je významná především proto, že by se měli pokud možno terapeuticky ošetřit bez ztráty času a případně je nouzově podrobit angiografii. Zkoušky přihlašovatelů ukázaly, že pacienti s angínou pektoris a nekomplikovaným průběhem nemají zvýšené hodnoty CCTD, a že naproti tomu pacienti s myokardiální mikronekrosou vykazují vyšší hodnoty CCTD. Na základě dosavadních poznatků vykazují všichni pacienti s akutním koronárním syndromem, kteří jsou CCTD pozitivní, během času zvýšené hodnoty troponinu. Sériové zkoušky rovněž ukázaly, že pacienti s mikronekrosami ukazují pozitivní hodnoty CCTD o několik hodin dříve než na troponin I nebo troponin T. Dále je třeba vycházet z toho, že metodika je rovněž účelná při diagnostice těžkých myokardiálních ischemii, např. při katetrizační intervenci na koronariích, nebo při nemocech s účastí myokardu, např. myokarditidě. Výsledky přihlašovatelů dokazují, že metodika je cenná jak při akutních infarktech myokardu, a stejně tak u nestabilní angíny pektoris, tj. všeobecně při podezření na akutní koronární syndrom.
Různými biochemickými procesy uvolněné CCTD dále metabolizují, resp. modifikují, a vzniká cholin, cholinové deriváty a deriváty trimethylammonia a množství reakčních produktů CCTD. Tyto reakční produkty mohou být zlomky nebo určité metabolity CCTD. Jak je např. známo z izoenzymů CK, může současné stanovení takových reakčních produktů být diagnosticky významné jako ukazatelé infarktu myokardu. Sledování přihlašovatelů prokázalo u jedné části pacientů s infarktem vznik takových reakčních produktů CCTD. Vznik reakčních produktů je kromě jiného zapříčiněno zvýšenou aktivitou určitých fosfolipas. Kromě fosfolipasy A2, která • · · ·· • ♦ · kromě jiného přispívá k uvolňování jmenovaného lysoplasmenylcholinu, jsou ve hře, jak bylo úvodem řečeno, další významné enzymy této skupiny, fosfolipasy C a D. Reakční produkty aktivity těchto dvou fosfolipas při vlivu na plasmalogeny jsou např. 1-O-alk-1'enyl-2-substituovaný glycerol ( prostřednictvím fosfolipasy C), resp. 1-0-alk-r-enyl-2-substituovaný glycerolfosfát ( prostřednictvím fosfolipasy D). Tyto reakční produkty vznikají ve zvýšené míře společně s cholinem, resp. fosforylcholinem, pokud při ischemii myokardu spolupůsobí obě jmenované fosfolipasy na plasmenylcholiny. Popisovaný postup je tedy možno rovněž využít pro stanovení uvedených jednoduchých reakčních produktů CCTD, případně jejich kombinaci společně se stanovením CCTD.
Časový průběh uvolňování CCTD při akutním infarktu myokardu
Analýzy všech dostupných naměřených hodnot prokázaly (kromě vyloučení jednoho nerepresentativního vzorku), že CCTD se stanou během 60 minut po začátku bolestí pozitivní a vykazují zřejmě dvoufázovou kinetiku uvolňování s včasným maximem po 2 až 3 hodinách a druhým maximem po 5 až 6 hodinách. Porovnání s jinými ukazateli infarktu prokázalo, že kinetika uvolňování CCTD, s odpovídající nízkou molekulární hmotností, probíhá podstatně rychleji než uvolňování dosud známých ukazatelů, což vysvětluje vysokou diagnostickou hodnotu v časné fázi.
Další zkoušky provedené přihlašovateli u více než 100 pacientů s bolestmi na prsou prokázaly převahu postupu podle vynálezu oproti konvenčním příznakům a podle vynálezu potvrdily vlastnosti vhodné pro včasnou diagnostiku koronárních syndromů.
Metodika k rozpoznání akutního infarktu myokardu a těžkých forem instabilní angíny pektoris stanovením a zhodnocením obsahu cholinu, cholinových a/nebo trimethylammoniových derivátů, vybraných ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin a jejich jednoduché reakční produkty v tělních tekutinách zřejmě předčí všechny dosud zavedené neinvasivní postupy, včetně stanovení známých biochemických znaků pro diagnostiku akutních koronárních syndromů. Kromě akutního infarktu myokardu mohou být uvedeným postupem včas • · · rozpoznány i těžké formy instabilní angíny pektoris s myocytárními nekrosami, které ve svém průběhu vykazují zvýšený obsah troponinu. Výsledky dokazují, že předložený postup je cenný jak pro určení akutního infarktu myokardu, tak i pro stanovení nestabilní angíny pektoris, tj. všeobecně při podezření na akutní koronární syndrom. Zvláštní výhoda vynálezu je podtržena tím, že postupem in vitro podle vynálezu bude prvně umožněno pacienty s akutním koronárním syndromem a akutním infarktem myokardu včas a s určitostí diagnostikovat, tj. v prvních třech hodinách po začátku bolestí, resp. stanovit vylučující diagnózu. To neumožňuje žádný uveřejněný postup ín vitro s podobnou vysokou jistotou. Američan Heart Association a Američan College of Cardiology zjišťují, že „existuje jednoznačná potřeba pro lepší metody k okamžité identifikaci pacienta s akutním infarktem myokardu, které musí být přesné a použitelné tak brzy, jak je jen možné (přeloženo z Ryan T.J. a spol., ACC/AHA Guidelines for the Management of Patients with Acute Myocardial Infarction, 1996, J. Am. Cardiol. 28: 1328-1428, str. 1340). Taková metoda t.č. neexistuje a podle dat uvedených přihlašovateli splňuje postup podle vynálezu požadované požadavky.
Postup se vztahuje na diagnostiku jasně definovaných obrazů nemoci akutních koronárních syndromů, zahrnující instabilní angínu pektoris a akutní infarkt myokardu, který může probíhat jako infarkt typu Q-wave nebo jako non-Q-wave. Sledování jiných obrazů nemoci, jako např. mozkový infarkt, které jsou s ohledem na jejich patomorfologii a patobiochemii v mnohém ohledu rozdílné, nedovolují analogické úsudky podle postupu podle předloženého vynálezu.
Postup pro včasnou diagnostiku akutních koronárních syndromů podle vynálezu je možné provést různými analytickými postupy, resp. technikami, vzhledem k tomu, že stejně hodnotné výsledky stanovení určitých látek je možné získat různými způsoby, které jsou pro případ CCTD často v literatuře popisovány. Postup zahrnuje kromě výběru jedné vhodné metody měření i výběr jedné vhodné tělní tekutiny, zahrnuje odpovídající postupovou a zkušební techniku přípravy vzorku, specifické stanovení obsahu CCTD a/nebo jejich reakcních produktů, vybraných ze skupiny zahrnující 1-O-alk-T-enyl-2-substituovaný glycerol a 1-O-alk-T-enyl-2-substituovaný glycerol ··· « * • * · ··«· · · · ···· «« «· ·· ···
-fosfát, a odpovídající vyhodnocení pro diagnostiku pacienta s akutním koronárním syndromem. Protože uvolněné CCTD pronikají do různých tělních tekutin a tělních částí, je použití postupu možné i při zkouškách jiných tělních částí, např. tkání. Existuje ovšem možnost, že se diagnostická hodnota v porovnání s popsaným příkladem využití sníží. Protože v rámci uvolňování CCTD vzniká i větší množství reakčních produktů CCTD, spadající do skupiny zahrnující 1-O-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerol a 1-O-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerolfosfát, je možné podle předloženého postupu stanovit a tím i dokázat přítomnost takových reakčních produktů. Dále je možné postup provádět tak, aby byly získány polokvantitativní nebo kvantitativní výpovědi, tj. rychlotesty na CCTD barevnou reakcí a tím dokázat, zda se jedná o infarkt myokardu nebo ne. Postup může být prováděn tak, že se stavy nebo pochody determinované obsahem CCTD nebo reakčními zplodinami CCTD pozorují nebo vyvolají. Kromě rozpoznání akutních koronárních syndromů nabízí předložený postup výhled na získání dalších diagnostických informací jako je velikost infarktu, prognózy, kontrolu terapie a prognózy určitých možných komplikací, rizika a o klinickém průběhu. Zvláštní hodnota předloženého postupu podle vynálezu je zdůrazněna tím, že vykazuje diagnostické vlastnosti, které jsou již dlouho požadovány mezinárodní komisí expertů, jako Američan Heart Association a Američan College of Cardiology, pro vývoj metodiky in vitro pro včasnou diagnostiku akutních koronárních syndromů.
Vcelku má popsaný postup pomoci snížit značné problémy současné včasné diagnostiky akutních koronárních syndromů a zlepšit diagnostiku a terapii nemocného pacienta.
Ve shora uvedeném popisu, nárocích a výkresech znázorněné ukazatele mohou jak jednotlivě, tak i v libovolné kombinaci mít význam pro uskutečnění vynálezu.
« ·· • 4 4 44 *·· · 4··4 ·* 4 4 4 4«4 ·»·· ·· ·· ·· ·«
4··
| Ε tl c· L. τo A c | 69,5 % | 00 cv σι | 94,7 % | 52,0 % | 70,4 % |
| Myo (> 90 ng/ml) | 60,7 % | 64,2 % | 77,2 % | 45,0 % | 61,9 % |
| m * E O * ϋ ω Al, | I 57,1 % I | £ o o | 100 % | 53,6 % | 71,4 % |
| CK (> 100 U/l) | | 57,1 % I | 71,4 % | | 80,0 % | 45,4 % | 61,9 % |
| o F E O =L O CM Λ1 ,Λ, | I % 9‘96 I | | 92,8 % i | 96,6 % | 92.6 % | 95,4 % |
| Celkový čas {0 až 35 h) | | Citlivost | ] Citlivost | Pozitivní výpovědní hodnota | | Negativní výpovědní hodnota | Diagnostická výkonnost |
| • | 999 | • 9 9 | 9 | 9 | 9 | |
| 9 | • | « | • · 9 9 | 9 9 | 9 | 9 |
| • | • | 9 | 9 9 · · | • | • | • |
| 9999 | «1 | • 9 · | 99 | • 99 |
| O) c | 50,0 % | 92,8 % | 87,5 % | 65,0 % | 71,4 % |
| Myo (> 90 ng/ml) | I 62,5 % | 64,2 % | 66,6 % | % 0Ό9 | 63,3 % |
| CK-MB (> 6% CK) | ( 37,5 % | | | ioo % | | 100 % | 58, 3 % | 66,6 % |
| CK (> 100 U/l) | 37,5 % | | I 71,4 % | | 60,0 % | 50,0 % | 53,3 % |
| O o δ O ου CM | xo o o r- | | 92,8 % | | 94,7 % | 100 % | S? θ' CD cd O) |
| Časná doba AMl (0 až 6 h) | | Citlivost | I Citlivost j | Pozitivní výpovědní hodnota | Negativní výpovědní hodnota | Diagnostická výkonnost |
| • | ··· | • · · | • | • | • |
| * | • « | • · · · | • · | • | • |
| • | • » | to · · to | • | • | |
| toto·· | ·· | ·« ·« | • v | ··· |
| E t1 c u< v· o 4 c jo | 28,5 % | 92,8 % | 66,6 % | 72,2 % | 71,4 % |
| Myo (> 90 ng/ml) | 50,0 % I | 64,2 % | 44,4 % | 69,2 % | 59,0 % |
| CK-MB (;> 6% CK) | I 12,5% I | 100% I | % 001 | % 9‘99 | 68,1 % |
| CK (>100 U/l) | I 12,5 % | | | 71,4% | | 20,0 % | 58,8 % | 50,0 % |
| CCTD (> 22 μηποΙ/Ι) | | ioo % | | 92,8 % | | 88,8 % | o o | 95,4 % |
| Časná doba AMI (0 až 3 h) | | Citlivost | | Citlivost | | Pozitivní výpovědní hodnota | Negativní výpovědní hodnota | Diagnostická výkonnost |
--- wv » * * • ··· · · · · · ······ »··· • ♦ · · · · · A « ···· ♦· «« ·« ·· ···
| ? O) t Σ e | 100 % | 92,8 % | 90,0 % | xp 8^ O o | % 9‘69 |
| Myo (> 90 ng/ml) | 58,3 % | 64,2 % | 58,3 % | 64,2 % | % 9'1-9 |
| CK-MB (>6% CK) | | 83,3 % | £ o o | 100 % | 87,5 % | 92,3 % |
| CK (> 100 U/l) | [ 83,3 % | I 71,4 % | 71,4 % | 83,3 % | 76,9 % |
| CCTD (> 22 gmol/l) | | 91,6% | | | 92,8 % | | 91,6 % | 92,8 % | 92,3 % |
| Pozdní doba AMI (07 až 35 h) | | Citlivost | | | Citlivost | Pozitivní výpovědní hodnota | Negativní výpovědní hodnota | Diagnostická výkonnost |
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY9 9 »··1. Způsob in vitro pro rozpoznání a diagnostiku akutních koronárních syndromů, zvláště akutního infarktu myokardu, vyznačující se tím, že se v tělních tekutinách nebo tělních částech stanoví obsah cholinu, derivátů cholinu a derivátů trimethylammonia, vybraných ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin.
- 2. Způsob in vitro podle nároku 1, vyznačující se tím, že se obsah cholinu, derivátů cholinu a derivátů trimethylammonia, vybrané ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin, vyhodnotí s ohledem na mezní hodnotu.
- 3. Způsob in vitro k rozpoznání a diagnostice akutních koronárních syndromů, zvláště infarktu myokardu, vyznačující se tím, že se v tělních tekutinách nebo tělních částech stanoví reakční produkty cholinu, derivátů cholinu a derivátů trimethylammonia, vybrané ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin, při čemž jsou reakční produkty vybrané ze skupiny zahrnující 1 -O-alk-1 -enyl-2-substituovaný glycerol a 1 -O-alk-1 '-enyl-2-substituovaný glycerolf ostát.
- 4. Způsob in vitro k rozpoznání a diagnostice akutních koronárních syndromů, zvláště infarktu myokardu, vyznačující se tím, že se v tělních tekutinách nebo tělních částech pozoruje stav nebo pochody způsobené obsahem cholinu, cholinových derivátů nebo derivátů trimethylammonia, vybrané ze skupiny fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin, a/nebo jejich reakčních produktů, vybraných ze skupiny zahrnující 1-O-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerol a 1-O-alk-1'-enyl-2- substituovaný glycerolfosfát.„ZMĚNĚNÝ ÚST’ • 999999 · 9«9 9 9 99 9« • 999 99 9999
- 5. Způsob in vitro k rozpoznání a diagnostice akutních koronárních syndromů, zvláště infarktu myokardu, vyznačující se tím, že se provede polokvantitativní nebo kvalitativní pozorování a hodnocení obsahu cholinu, cholinových derivátů nebo derivátů trimethylammonia, vybrané ze skupiny fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholín, a/nebo jejich reakčních produktů, vybraných ze skupiny zahrnující 1-O-alk-r-enyl-2-substituovaný glycerol a 1-O-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerolfosfát, nalezené při jejich stanovení v tělních tekutinách a tělních částech.
- 6. Způsob in vitro podle předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se pro stanovení obsahu cholinu, cholinových derivátů nebo derivátů trimethylammonia, vybrané ze skupiny fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholín, a/nebo jejich reakčních produktů, vybraných ze skupiny zahrnující 1 -O-alk-1 -enyl-2-substituovaný glycerol a 1-O-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerolfosfát, použijí analytické způsoby zahrnující jadernou spinovou rezonanci (NMR), biochemické, enzymatické, imunologické, klinicky chemické, chromatografické, hmotově spektrometrické, elektrochemické, fotometrické postupy.
- 7. Způsob in vitro k rozpoznání a diagnostice akutních koronárních syndromů, zvláště infarktu myokardu, vyznačující se tím, že se provede NMR spektroskopie tělních tekutin nebo tělních částí a vyhodnocení podle „základního rozpoznání (pattern-recognition) více látek, zvláště cholinu, cholinových derivátů, a/nebo derivátů trimethylammonia, vybraných ze skupiny fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholín, a jejich reakčních produktů vybraných ze skupiny zahrnující 1 -O-alk-1 -enyl-2-substituovaný glycerol a 1 -O-alk-1 -enyl-2-substituovaný glycerolfosfát, a dále kreatín a dimethylamin.
- 8. Způsob in vitro podle předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se z tělních tekutin nebo tělních částí, zahrnujících sérum, plazma, krev, zpracované krevní „ZMĚNĚNÝ LIST’
- 9 9 9 • 9« ·♦*9*9 ♦ · 9 9 · · • 9 9 9 9 9 9· 9 ···· ·· ·· 99«99. Zkušební soupravu pro diagnózu a/nebo analýzu akutních koronárních syndromů, především akutního infarktu myokardu, vyznačující se tím, že obsahuje prostředky k odběru tělní tekutiny nebo tělní části a prostředky k důkazu cholinu, derivátů cholinu a/nebo derivátů trimethylammonia, vybrané ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin a/nebo jejich reakční produkty, vybrané ze skupiny zahrnující 1-O-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerol a 1 -O-alk-r-enyl-2-substituovaný glycerolfosfát, v tělní tekutině nebo tělní části.
- 10. Zkušební souprava, podle nároku 9, vyznačující se tím, že prostředky k důkazu ukazují překročení mezní hodnoty pro stanovení cholinu, derivátů cholinu a/nebo derivátů trimethylammonia, vybrané ze skupiny zahrnující fosforylcholin, plasmalogeny a lysoplasmenylcholin a/nebo jejich reakční produkty, vybrané ze skupiny zahrnující 1-O-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerol a 1-O-alk-1'-enyl-2-substituovaný glycerolfosfát, v tělní tekutině nebo tělní části.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19836617A DE19836617C2 (de) | 1998-08-12 | 1998-08-12 | In vitro Verfahren zur Erkennung und Diagnostik akuter koronarer Syndrome |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2001281A3 true CZ2001281A3 (cs) | 2001-07-11 |
| CZ299988B6 CZ299988B6 (cs) | 2009-01-14 |
Family
ID=7877351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20010281A CZ299988B6 (cs) | 1998-08-12 | 1999-08-11 | Zpusob in vitro k rozpoznání a diagnostice akutních koronárních syndromu |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6830932B1 (cs) |
| EP (1) | EP1104547B1 (cs) |
| JP (1) | JP2002522791A (cs) |
| AT (1) | ATE242488T1 (cs) |
| AU (1) | AU761226B2 (cs) |
| CA (1) | CA2339023C (cs) |
| CZ (1) | CZ299988B6 (cs) |
| DE (2) | DE19836617C2 (cs) |
| DK (1) | DK1104547T3 (cs) |
| ES (1) | ES2201764T3 (cs) |
| HU (1) | HUP0102984A3 (cs) |
| IL (2) | IL141152A0 (cs) |
| NZ (1) | NZ509406A (cs) |
| PT (1) | PT1104547E (cs) |
| WO (1) | WO2000010014A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA200101972B (cs) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001089554A2 (en) * | 2000-05-19 | 2001-11-29 | Bionebraska, Inc. | Treatment of acute coronary syndrome with glp-1 |
| US7262017B2 (en) | 2001-09-14 | 2007-08-28 | Torrey Pines Institute For Molecular Studies | Diagnostic markers for ischemia |
| US7491504B2 (en) * | 2005-11-22 | 2009-02-17 | Frantz Biomarkers, Llc | Method for detecting ovarian cancer |
| US20080020472A1 (en) * | 2005-11-22 | 2008-01-24 | Frantz Biomarkers, Llc | Method for detecting an inflammatory disease or cancer |
| US20070193886A1 (en) * | 2006-02-02 | 2007-08-23 | Ian Acworth | Detection methods and devices |
| WO2008027098A2 (en) * | 2006-05-31 | 2008-03-06 | Esa Biosciences, Inc. | Biosensor for measurement of species in a body fluid |
| CN101675337A (zh) | 2007-04-13 | 2010-03-17 | 菲诺梅诺米发现公司 | 用于缩醛磷脂缺乏介导的衰老疾病的诊断和危险评估的方法 |
| US7811749B2 (en) * | 2008-04-21 | 2010-10-12 | Abbott Laboratories | Measuring free choline to determine suitability of erythrocytes for transfusion |
| JP5662060B2 (ja) * | 2010-06-04 | 2015-01-28 | 学校法人帝京大学 | 検出方法 |
| JP2012024014A (ja) * | 2010-07-23 | 2012-02-09 | Asahi Kasei Pharma Kk | 全血コリンの測定方法 |
| CN102998274A (zh) * | 2012-11-30 | 2013-03-27 | 华南理工大学 | 一种快速测定制浆黑液中总硫含量的方法 |
| CN111505131B (zh) * | 2020-01-02 | 2023-03-31 | 东莞东华医院有限公司 | 基于血清代谢组学改变建立的预测冠心病斑块不稳定性临床模型 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1598739C3 (de) | 1965-01-26 | 1973-10-11 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Mittel zur Bestimmung der Chohnesteraseaktivitat im Serum |
| AU5959990A (en) * | 1989-08-14 | 1991-04-03 | Queen's University At Kingston | Method for stimulating fibrinolytic effect |
| US5604105B1 (en) * | 1990-10-12 | 1999-08-24 | Spectral Diagnostics Inc | Method and device for diagnosingand distinguishing chest pain in early onset thereof |
-
1998
- 1998-08-12 DE DE19836617A patent/DE19836617C2/de not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-08-11 ES ES99942859T patent/ES2201764T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-11 AT AT99942859T patent/ATE242488T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-08-11 PT PT99942859T patent/PT1104547E/pt unknown
- 1999-08-11 AU AU56219/99A patent/AU761226B2/en not_active Ceased
- 1999-08-11 DK DK99942859T patent/DK1104547T3/da active
- 1999-08-11 HU HU0102984A patent/HUP0102984A3/hu unknown
- 1999-08-11 IL IL14115299A patent/IL141152A0/xx active IP Right Grant
- 1999-08-11 EP EP99942859A patent/EP1104547B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-11 CZ CZ20010281A patent/CZ299988B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-08-11 CA CA002339023A patent/CA2339023C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-08-11 JP JP2000565402A patent/JP2002522791A/ja active Pending
- 1999-08-11 US US09/762,691 patent/US6830932B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-08-11 NZ NZ509406A patent/NZ509406A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-08-11 WO PCT/EP1999/005911 patent/WO2000010014A1/de active IP Right Grant
- 1999-08-11 DE DE59905860T patent/DE59905860D1/de not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-01-29 IL IL141152A patent/IL141152A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-03-09 ZA ZA200101972A patent/ZA200101972B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1104547A1 (de) | 2001-06-06 |
| PT1104547E (pt) | 2003-10-31 |
| DE19836617A1 (de) | 2000-03-16 |
| AU5621999A (en) | 2000-03-06 |
| US6830932B1 (en) | 2004-12-14 |
| CA2339023C (en) | 2009-11-17 |
| IL141152A0 (en) | 2002-02-10 |
| CZ299988B6 (cs) | 2009-01-14 |
| HUP0102984A3 (en) | 2005-06-28 |
| IL141152A (en) | 2006-08-01 |
| DK1104547T3 (da) | 2003-09-29 |
| ES2201764T3 (es) | 2004-03-16 |
| DE19836617C2 (de) | 2001-02-08 |
| AU761226B2 (en) | 2003-05-29 |
| NZ509406A (en) | 2003-05-30 |
| JP2002522791A (ja) | 2002-07-23 |
| WO2000010014A1 (de) | 2000-02-24 |
| DE59905860D1 (de) | 2003-07-10 |
| EP1104547B1 (de) | 2003-06-04 |
| CA2339023A1 (en) | 2000-02-24 |
| ZA200101972B (en) | 2003-07-02 |
| HUP0102984A2 (hu) | 2001-11-28 |
| ATE242488T1 (de) | 2003-06-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5167239B2 (ja) | 糖尿病の検出手段および検出方法 | |
| AU2012288742A1 (en) | Means and methods for diagnosing and monitoring heart failure in a subject | |
| CZ2001281A3 (cs) | Způsob in- vitro pro rozpoznání a diagnostiku akutních koronárních syndromů | |
| US8153594B2 (en) | Tacrolimus standard and methods of using same | |
| CN101443663A (zh) | 诊断糖尿病的工具和方法 | |
| JP7361650B2 (ja) | リソソーム蓄積障害の試験に関連する方法 | |
| CA2845117A1 (en) | Means and methods for assessing kidney toxicity | |
| Chan et al. | Time-resolved immunofluorometric assay of alpha-fetoprotein in serum and amniotic fluid, with a novel detection system. | |
| JP6466907B2 (ja) | ライソゾーム病の検査に関する化合物および方法 | |
| WO2024007778A1 (zh) | 一种血浆分子标志物犬尿氨酸在早期心力衰竭检测中的应用 | |
| US20130011870A1 (en) | Method For Assaying Diseases Characterized By Dyslipidemia | |
| JP2016522677A5 (cs) | ||
| CN114137193A (zh) | 一种用于评估冠状动脉疾病的试剂盒及其应用 | |
| US20230236206A1 (en) | Predicting a sepsis condition | |
| Frómeta et al. | Quantitative ultramicrotest for newborn screening of galactosemia in Cuba | |
| CN117110613A (zh) | 诊断试剂盒及LMWK-Fc在制备肝纤维化诊断试剂中的应用 | |
| JP2019109257A (ja) | 被験体における心不全を診断及びモニタリングするための手段及び方法 | |
| Moldoveanu et al. | Postmortem Specificity of Troponin for Acute Myocardial Infarction Diagnosis Through Qualitative Dosing from Pericardial Fluid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20100811 |