CS277643B6

CS277643B6 - Pseudoprimycin complex, its components and their addition salts with acids and process for preparing thereof

Info

Publication number: CS277643B6
Application number: CS903909A
Authority: CS
Inventors: Gyula Ing Dekany; Judit Dr Ing Frank; Istvan Pelczer; Gabor Dr Kulcsar; Eniko Dr Ing Schreiner
Original assignee: Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet
Priority date: 1988-06-14
Filing date: 1989-06-09
Publication date: 1993-03-17
Also published as: DD284878A5; YU116989A; PL160435B1; US5104857A; PL280010A1; TW201307B; CA1314285C; CS274695B2; EP0350430A3; YU46935B; FI892913A0; DK288889A; CS390989A3; FI90073C; DK288889D0; US5091411A; JPH0240377A; RU1831471C; CS351689A2; FI892913A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká komplexů pseudoprimycinu, jeho složek a jejich adičních solí s kyselinami, jakož i způsobu jejich přípravy. Dále se vynález týká farmaceutických přípravků, které obsahují zmíněný komplex pseudoprimycinu nebo/a jeho složky nebo/a jejich adiční soli s kyselinami.

Dosavadní stav techniky

Primycin je antibiotikum makrolidového typu (Nátuře 174, 1105/1954) vykazující antibakteriální účinnost a je účinnou složkou komerčně dostupného EBRIMYCINu^ (gel). Vykazuje vynikající antibakteriální účinnost a dosud se proti němu nevytvořila resistence. Na základě těchto výhodných vlastností se používá v širokém měřítku, avšak dosud se zpracovává jen ve formě alkoholického gelu a používá se pro vnější (povrchové) ošetření.

Vývoj dalších farmaceutických přípravků této účinné látky je značně omezen, protože primycin je ve vodě nebo v různých organických rozpouštědlech nerozpustný nebo jen nepatrně rozpustný. ...

Účelem předloženého vynálezu je dát k dispozici postup, pomocí kterého by bylo možno zlepšit rozpustnost a tak i prospěšnost primycinu.

S překvapením bylo nyní zjištěno, že primycin lze působením různých bázických látek, nukleofilních činidel nebo/a sloučenin kovů, přeměnit na novou formu (novou sloučeninu), která je dobře rozpustná ve vodě nebo/a v organických rozpouštědlech a navíc má vynikající gelotvorné vlastnosti. Reakcí, která probíhá, je ^c35“^c37“^{translaktonlzace/} tzn., že primycinový kruh, který původně obsahuje 35 atomů uhlíku, se transformuje na kruh, který obsahuje 37 atomů uhlíku. Primycin, získaný touto reakcí, se nazývá pseudoprimycin.

Pseudoprimycin, obdobně jako výchozí primycin, má rovněž komplexní charakter, tz., že obsahuje rovněž různé složky, které lze rozdělit metodami používanými pro separaci primycinu (srov. maďarský patentový spis č. 196 425).

Alternativně lze složky pseudoprimycinu rovněž připravit translaktonisací individuálně izolovaných složek primycinu. Všechny až dosud známé složky primycinu reagují obdobně.

Podle našich pokusů má pseudoprimycin, stejně jako jeho složky, antibakteriální účinnost a může se používat pro přípravu farmaceutických přípravků obsahujících účinnou složku ve vysoké dávce. V důsledku nové struktury se na tuto látku doposud nevytvořila resistence.

V souhlase se shora uvedenými údaji se vynález týká komplexu pseudoprimycinu obecného vzorce I nebo/a jeho složek a jejich adičních solí s kyselinami, jakož i způsobu jejich přípravy.

Podstata vynálezu

Předmětem předloženého vynálezu je komplex pseudoprimycinu obecného vzorce I

(I) ve kterém

R¹ znamená bytulovou skupinu, hexylovou skupinu nebo pentyovou skupinu,

R² znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo zbytek O-arabinosy,

X znamená iont anorganické kyseliny, výhodně sulfátový iont, nebo iont organické kyseliny, výhodně acetátový iont, a jeho adiční soli s kyselinami.

Předmětem předloženého vynálezu je dále způsob výroby složek komplexu pseudoprimycinu obecného vzorce I

(i) ve kterém

R¹ znamená butylovou skupinu, pentylovou skupinu nebo hexylovou skupinu,

R² znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo zbytek O-arabinosy,

X znamená iont anorganické kyseliny, výhodně sulfátový iont nebo iont organické kyseliny, výhodně acetátový iont, který spočívá v tom, že se za účelem C₃₅-C₃₇-translaktonizační reakce nechá reagovat kterákoli zesložek komplexu primycinu obecného vzorce II

ve kterém

R¹, R² a X mají shora uvedený význam, se solemi, rozkládajícími se na ionty, s kvarterními amoniovými solemi, nukleofilními látkami, oxidy kovů, hydroxidy kovů, organickými bázemi nebo heterocyklickými sloučeninami obsahujícími dusík nebo/a kyslík, ve vodném prostředí nebo v prostředí organického rozpouštědla, při teplotě mezi teplotou místnosti a teplotou varu rozpouštědla, a nezreagované výchozí látka se vysráží ethylesterem kyseliny mravenčí nebo se komplex , η o pseudopromycinu obecného vzorce I, ve kterem R , Ra X mají shora uvedené významy, chromatograficky rozdělí na jednotlivé složky.

Jako výchozí látka při postupu podle předloženého vynálezu se může používat kterákoli sůl primycinu, avšak výhodnou sloučeninou je primycinsulfát, připravený fermentaci, nebo primycinacetát, získaný z odpovídajícího sulfátu. Příprava primycinacetátu a dalších solí rozdílných od primycinsulfátu se popisuje v maďarském patentovém spisu č. 196 822.

Translaktonizace je rovnovážnou reakcí, při které se obecně získává směs v poměru 1:1 a provádí se buď za použití bázických látek nesoucích náboj nebo za použití sloučenin bez náboje.

Látkami nesoucími náboj jsou hlavně soli, které se rozkládají na ionty, přičemž anionty takovýchto solí mohou být organického charakteru, jako jsou například alkoxidy, výhodně methoxid, ethoxid nebo fenoxid, nebo karboxyláty, výhodně acetát, formiát, chloracetát, sukcinát, benzoát, nebo mohou být anorganického charakteru, jako je například uhličitan, hydrogenuhličitan, síran, sirník, fosfát, dihydrogenfosfát, nitrát, nitrit, kyanid, chlorid, bromid, fluorid. Kationty mohou být alkalické kovy, výhodně sodík,. draslík nebo kovy alkalické zeminy, například hořčík nebo přechodové kovy, výhodně železo.

Jako látky nesoucí náboj se mohou kromě toho používat následující látky: kvarterní amoniové soli, výhodně tetrabutylamoniumbromid, nebo nukleofilní látky, výhodně iontoměničové pryskyřice, například Amberlite IRA 401.

Sloučeniny bez náboje, používané pro translaktonisační reakci se mohou zvolit ze souboru látek, který zahrnuje oxidy kovů a hydroxidy kovů, výhodně hydroxid sodný, hydroxid barnatý a hydroxid hořečnatý, dále organické báze, výhodně diethylamin, triethylamin, anilin, dále heterocyklické sloučeniny obsahující dusík nebo kyslík, výhodně pyridin, chinolin, piperazin, imidazol a dioxan.

Translaktonisační reakce se provádí ve vodném prostředí nebo/a v organickém rozpouštědle. Jako organická rozpouštědla se používají protická rozpouštědla, například alifatické alkoholy s 1 až 4 atomy uhlíku, výhodně methylalkohol, ethylalkohol, n-butanol, halogenované uhlovodíky, výhodně chloroform, nebo aprotická rozpouštědla, například ether, nebo organické báze, například diethylamin, pyridin, acetonitril a dimethylformamid. Výhodnými sloučeninami jsou alifatické alkoholy s 1 až 4 atomy uhlíku samotné nebo ve směsi s vodou.

Reakce se může provádět při teplotě místnosti (tj. při teplotě 20 až 22 °C), i když se k dosažení vyšší reakční rychlosti může pracovat také při zvýšené teplotě, například při teplotě varu reakční směsi pod zpětným chladičem.

Podle výhodného provedení postupu podle vynálezu se výchozí sůl primycinu popřípadě převede na acetát, načež se podle shora popsané translaktonisační reakce připraví pseudoprimycinacetát, nezreagovaný primycinacetát se oddělí od pseudoprimycin-acetátu působením vhodného organického materiálu, výhodně působením ethylformiátu. Vysrážený primycin-acetát se odfiltruje a pseudoprimycin se izoluje z filtrátu ve formě acetátu nebo popřípadě po přidání odpovídající kyseliny - ve formě jiných solí, například sulfátu. Izolace se provádí výhodně pomocí etheru nebo/a vody nebo acetonitrilu, načež se získaný produkt odfiltruje a vysuší.

Používá-li se při postupu podle vynálezu k translaktonizaci individuálních složek komplexu primycinu, získají se odpovídající složky pseudoprimycinu. Postupuje se shora popsaným způsobem.

Komplex pseudoprimycinu lze rovněž postupem podle vynálezu rozdělit chromatografováním na jednotlivé složky. Dělení se může provádět sloupcovou chromatografii nebo chromatografii na tenké vrstvě. Protože rozpustnost pseudoprimycinu je lepší než rozpustnost primycinu, může se chromatografické dělení provádět jednoduchou sloupcovou chromatografii.

Podle předloženého vynálezu se dělení sloupcovou chromatografii provádí výhodně za použití silikagelu (například silikagelu 60) naplněného do kolony ve formě suspenze v používaném elučním činidle. Sůl primycinu, která se má rozdělit, se rovněž přidává do kolony ve formě roztoku v používaném elučním činidle. Elučním činidlem používaným pro vymývání může být směs vody a různých organických rozpouštědel, popřípadě směs vody a organického rozpouštědla. Bylo zjištěno, že přítomnost organické kyseliny v elučním činidle zlepšuje účinnost chromatografického dělení. Jako organická rozpouštědla se používají výhodně alkohol, popřípadě alkoholy, například methanol, ethanol, butanol nebo halogenovaná rozpouštědla, například chloroform, dichlormethan atd., a jako organické kyseliny se používá výhodně kyseliny octové, výhodným rozpouštědlovým systémem je spodní fáze směsi tvořené chloroformem, methanolem, octovou kyselinou a vodou v poměru 9:6:3:4, která je stabilizována 1 % objemovým methanolu.

Během vymývání frakcí, které obsahují shodné látky (podle chromátografie na tenké vrstvě) se izolují stejné frakce a po odpaření se získají 4 složky. Chromatografie na tenké vrstvě se provádí za použití silikagelu, výhodně silikagelu 60 F₂₅₄ (Merck) nebo na destičkách HPTLC HP-KF (Whátmann) za použití 10 μΐ vzorků. Elučním činidlem je směs chloroformu, methanolu, kyseliny mravenčí, vody, formaldehydu a n-butanolu v poměru 160:53:6:9:3 a pro vyvíjení se používá chlortoluidinu nebo ethanolu obsahujícího 1 % fosformolybdenové kyseliny.

Chromatografickým dělením komplexu pseudoprimycinu se získají složky obdobné složkám primycinu, tj . Af, A₂, A₃, Bf, B₂, B₃ ' ' *“2 ' ^3 ·

Složkami komplexu pseudoprimycinu obecného vzorce I jsou následující složky:

- pseudoprimycin-Af, ve kterem R znamena butylovou skupinu, R znamená zbytek O-arabinosy a X má shora uvedený význam;

2

- pseudoprimycin-A₂, ve kterém R znamená pentylovou skupinu, R znamená zbytek O-arabinosy a X má shora uvedený význam;

- pseudoprimycin-A₃, ve kterem R znamena hexylovou skupinu, R znamená zbytek O-arabinosy a X má shora uvedený význam;

- pseudoprimycin-Bf, ve kterém R¹ znamená butylovou skupinu, R²znamená atom vodíku a X má shora uvedený význam;

- pseudoprimycin-B₂, ve kterém R¹ znamená pentylovou skupinu, R²znamená atom vodíku a X má shora uvedený význam;

- pseudopnmycin-B₃, ve kterém R znamena hexylovou skupinu, R znamená atom vodíku a X má shora uvedený význam;

- pseudoprimycin-C-j_, ve kterém R¹ znamená butylovou skupinu, R²znamená hydroxylovou skupinu a X má shora uvedený význam;

- pseudoprimycin-C₂, ve kterém R¹ znamená pentylovou skupinu, R²znamená hydroxylovou skupinu a X má shora uvedený význam;

- pseudoprimycin-C₃, ve kterém R¹ znamená hexylovou skupinu, R²znamená hydroxylovou skupinu a X má shora uvedený význam, jakož i jejich adiční soli s kyselinami.

Hodnoty Rf následuj ící:

charakterizují složky pseudoprimycinu jsou

Af R_f — 0,30 A₂ R_f ⁼ 0,32 A₃ R_f ⁼ 0,34

B_x R_f = 0,55 B₂ Rf ⁼ 0,57 B₃ R_f = 0,59

C_x R_f = 0,36 C ₂ Rf ⁼ 0,38 C ₃ Rf = 0,40

Rozpustnost komplexu pseudoprimycinu nebo jeho složek podle tohoto vynálezu je mnohem lepší než rozpustnost výchozího komplexu primycinu nebo/a jeho složek. Tak například primycin-acetát je prakticky nerozpustný ve vodě, ethanolu a methanolu, zatímco rozpustnost pseudoprimycin-acetátu ve vodě činí 5 g/10 ml, v ethanolu 5 g/10 ml a v methanolu 10 g/10 ml, což představuje výrazné zlepšení rozpustnosti.

Zlepšení rozpustnosti jednotlivých složek pseudoprimycinu je stejné jak uvedeno shora v případě komplexu pseudoprimycinu, takže například rozpustnost pseudoprimycin-Aj-acetátu je ve vodě a v ethanolu 5 g/10 ml a v methanolu 10 g/10 ml. Na základě toho je komplex pseudoprimycinu nebo/a jeho složky vhodný, resp. vhodné, pro přípravu farmaceutických přípravků, které obsahují vyšší dávku účinné složky.

Další výhodnou vlastností pseudoprimycinu a jeho složek je vynikající gelotvorná schopnost: ve vodném prostředí začíná tvorba gelu bezprostředně při dosažení meze rozpustnosti a v prostředí organického rozpouštědla se tvoří stálý gel po několika hodinách stáním. .

Uvedená gelotvorná schopnost se může výhodně využít při přípravě určitých farmaceutických přípravků, například gelů, mastí atd.

Soli pseudoprimycinu nebo/a jeho složek se mohou přeměnit na volné sloučeniny - pokud je to žádoucí - nebo/a se mohou převést na jiné soli.

Obdobně jako původní komplex primycinu nebo/a jeho složky vykazuje také komplex pseudoprimycinu nebo/a jeho složky antibiotickou účinnost, především vůči grampositivním bakteriím, avšak ve vyšší dávce vykazuje rovněž účinnost proti gramnegativním bakteriím.

Tabulka 1

Spektrum účinnosti komplexu pseudoprimycinu a jeho složek proti polyresistentním pathogenním kmenům bakterií u lidí testované kmeny

1) Bacillus subtilis

2) Bacillus cereus

3) Bacillus licheniformis testované kmeny

4) Staphylococcus aureus

5) Staphylococcus epidermis

6) Micrococcus

7) Sporosarcina ureae testované sloučeniny

I) pseudoprimycin-acetát

II) pseudoprimycin-A-^-acetát

III) pseudoprimycin-A₃-acetát

IV) pseudoprimycin-B^-acetát

V) pseudoprimycin-B₃-acetát

VI) pseudoprimycin-C-L-acetát testovaný kmen hodnota minimální ihnibiční koncentrace (μςΑί) testované sloučeniny

	I	II	III	IV	V	VI
1)		2,5-5	5-10	2,5	2,5	2,5	2,5
2)		2,5-5	5-10	2,5	2,5	2,5	2,5
3)		2,5-5	5-10	2,5	2,5	2,5	2,5
4)		2,5-5	5-10	5	5	5	2,5
5) .		2,5-5	5-10	5	5	5	2,5
6)		0,75	2,5	2,5	2,5	1	1-2,5
7)		0,5	1	0,5	2,5	0,75	0,5
	Toxicita	komplexu	pseudoprimycinu	a jeho složek	podle
vynálezu byla	testována	na samicích a	samcích myší.	Získané
výsledky jsou	shrnuty v	tabulce	2 .

Tabulka 2

Hodnoty toxicity komplexu pseudoprimycinu a jeho složek
testovaná sloučenina	hodnoty LDc₀ (mg/kg)
i .v. samec samice	p.o. samec	samice
pseudoprimycin-acetát	17,66 18,78	1724	1583
pseudoprimycin-A-^-acetát	13,30 14,75	937	806

Příklady provedení vynálezu

Vynález blíže ilustrují následující příklady. Tyto příklady však rozsah vynálezu v žádném směru neomezují.

Příklad 1

60,0 g (53,23 mmol) primycin-sulfátu a 8,5 g (26,94 mmol) hydroxidu barnatého obsahujícího 8 mol krystalické vody se suspenduje ve směsi 800 ml methanolu a 200 ml vody a po 2,5 hodinovém zahřívání suspenze na teplotu varu se přidá 20 ml kyseliny octové a v zahřívání na teplotu varu se pokračuje dalších 30 minut. Potom se síran barnatý za horka odfiltruje, filtrát se odpaří, olejovitý zbytek se rozpustí ve 100 ml methanolu a k získanému roztoku se při teplotě místnosti za míchání v průběhu 20 minut přikape 200 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Poté se nezreagovaný primycin-acetát odfiltruje, filtrát se odpaří za sníženého tlaku, zbylý pevný zbytek se trituruje se 100 ml diethyletheru, produkt se odfiltruje a bílý prášek se vysuší při teplotě 70 °C za sníženého tlaku. Získá se 26,0 g pseudoprimycin-acetátu. Výtěžek 43,3 % teorie. Teplota tání 106 °C. Specifická otáčivost: +35° (v 0,2% roztoku methanolu).

Příklad 2

60,0 g (52,77 mmol) primycin-sulfátu se suspenduje v 800 ml methanolu a k získané suspenzi se přidá 2,14 g (53,5 mmol) hydroxidu sodného rozpuštěného ve 200 ml vody. Suspenze se za „ míchání zahřívá 2,5 hodiny na teplotu varu, poté se k horké reakční směsi přidá 20 ml kyseliny octové, v míchání se pokračuje po dobu 30 minut a poté se směs odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve 100 ml methanolu a k získanému roztoku se za míchání v průběhu asi 20 minut přidá 200 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Nezreagovaný primycin-acetát se odfiltruje, filtrát se odpaří za sníženého tlaku, zbytek se trituruje se směsí 450 ml diethyletheru a 9 ml vody, takto získaná suspenze se zfiltruje a získaný produkt se vysuší při teplotě 70 °C za sníženého tlaku. Získá se 25 g (41,6 %) pseudoprimycin-acetátu o teplotě tání 106 °C.

Příklad 3

60,0 g (53,23 mmol) primycin-sulfátu se suspenduje ve 200 ml vody obsahující 2,9 g (27,35 mmol) hydroxidu sodného, k získané suspenzi se přidá 800 ml methanolu a směs se zahřívá na teplotu varu za míchání po dobu 2,5 hodiny. Poté se přidá k roztoku 20 ml kyseliny octové a v zahřívání na teplotu varu se pokračuje dalších 30 minut. Reakční směs se odpaří za sníženého tlaku, zbytek se rozpustí ve 100 ml methanolu, nerozpustný materiál (síran sodný) se odfiltruje a k roztoku se za míchání v průběhu asi 20 minut přikape 200 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Poté se vysrážený nezreagovaný primycin-acetát odfiltruje. K filtrátu se za míchání přikape 33,5 ml 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové, získaný pseudoprimycin-sulfát se odfiltruje a vysuší se za sníženého tlaku. Získá se 24,5 g (40,8 %) pseudoprimycin-sulfátu ve formě bílého prášku o teplotě tání 127 °C. Specifická otáčivost: +26,5° (v 0,2% roztoku methanolu).

Příklad 4

30,0 g (26,38 mmol) primycin-acetátu se suspenduje v 900 ml směsi methanolu a vody v poměru 2:1, k získané suspenzi se přidá 10 g suché iontoměničové pryskyřice (Amberlite IRA-401, v OH-cyklu) a směs se míchá 4 hodiny při teplotě 60 ’C. Poté se pryskyřice odfiltruje, přidá se 10 ml octové kyseliny a 100 ml butanolu (k filtrátu) a roztok se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se rozustí v 50 ml methanolu a za intenzivního míchání se k němu během 15 minut při teplotě místnosti přikape 100 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Vyloučený nezreagovaný primycin-acetát se odfiltruje, filtrát se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se trituruje s diethyletherem. Suspenze se zfiltruje, pevná látka se vysuší za sníženého tlaku při teplotě 70 °C. Získá se 14,0 g (46,6 %) pseudoprimycin-acetátu o teplotě tání 106 °C.

Příklad 5

K roztoku methoxidu sodného, který byl připraven z 0,31 g (13,48 mmol) kovového sodíku a 50 ml methanolu za bezvodých reakčních podmínek, se přidá 15,0 g (13,19 mmol) primycin-acetátu, získaná suspenze se intenzivně míchá po dobu 1 hodiny, poté se přidá 10 ml kyseliny octové a reakční směs se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek po odpaření se rozpustí ve 250 ml methanolu za opatrného zahřívání a k získanému roztoku se při teplotě místnosti v průběhu 10 minut přikape 50 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Nezreagovaný primycin-sulfát se odfiltruje, filtrát se odpaří za sníženého tlaku, zbytek po odpaření se trituruje se směsí 112 ml diethyletheru a 2,2 ml vody, suspenze se zfiltruje a pevná látka se vysuší za sníženého tlaku při teplotě 70 °C. Získá se 7,0 g (46,6 %) pseudoprimycin-acetátu o teplotě tání 106 °C.

Příklad 6

15,0 g (13,19 mmol) primycin-acetátu se suspenduje v 50 ml methanolu, k získané suspenzi se přidá 1,56 g (13,48 mmol) fenoxidu sodného a suspenze se intenzivně míchá po dobu 1 hodiny při teplotě 60 °C. K získanému roztoku se přidá 10 ml octové kyseliny a rozpouštědlo se oddestiluje za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve 250 ml methanolu za opatrného zahřívání a k získanému roztoku se za míchání zhruba v průběhu 20 minut přikape 50 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Nezreagovaný primycin-acetát se odfiltruje, filtrát se odpaří za sníženého tlaku, zbytek po odpaření se trituruje se směsí 112 ml diethyletheru a 2,2 ml vody, načež se získaná suspenze zfiltruje, pevná látka se vysuší při sníženém tlaku při teplotě 70 °C.

Získá se 7,0 g (46,6 %) pseudoprimycin-acetátu, teplota tání 106 ‘C.

Příklad 7

6,0 g (5,27 mmol) primycin-acetátu se suspenduje ve 400 ml n-butanolu a 0,49 g (6,0 mmol) octanu sodného se přidá k získané' suspenzi. Reakční směs se vaří za míchání po dobu 1 hodiny, poté se rozpouštědlo oddestiluje a zbytek se rozpustí v 10 ml methanolu: K takto získanému roztoku se za míchání při teplotě místnosti během asi 20 minut přikape 20 ml ethylesteru kyseliny mravenčí, poté se nezreagovaný primycin-acetát odfiltruje, filtrát se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se trituruje s 30 ml acetonitrilu. Takto získaná suspenze se zfiltruje a pevný zbytek se vysuší při teplotě 70 °C za sníženého tlaku. Získá se

2,8 g (46,6 %) pseudoprimycin-acetátu o teplotě tání 106 ’C.

Příklad 8

6,0 g (5,27 mmol) primycin-acetátu se suspenduje ve 400 ml n-butanolu a k získané suspenzi se přidá 6,0 mmol anorganického činidla, například chloridu sodného, síranu sodného, sirníku sodného, hydrogenuhličitanu sodného, fosforečnanu železitého, dusičnanu draselného, dusitanu sodného, bromidu draselného, fluoridu draselného, oxidu hořečnatého, kyanidu sodného, dihydrogenfosforečnanu sodného, sirníku železnatého, atd. rozpuštěného částečně v methanolu. Reakční směs se vaří 1 hodinu za míchání, poté se k ní přidá 5 ml kyseliny octové, načež se rozpouštědlo oddestiluje za sníženého tlaku. Zbylý pevný produkt sé rozpustí za zahřívání v 10 ml methanolu, nerozpustný podíl se odfiltruje a k filtrátu se při teplotě místnosti za míchání v průběhu asi 20 minut přikape 20 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Nezreagovaný primycin-acetát se odfiltruje, filtrát se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se trituruje s diethyletherem. Takto získaná suspenze se zfiltruje a pevný podíl se vysuší při teplotě 70 °C za sníženého tlaku. Získá se

2,8 g (46,6 %) pseudoprimycin-acetátu o teplotě tání 106 ’C. Příklad 9

6,0 g (5,27 mmol) primycin-acetátu se suspenduje ve 400 ml n-butanolu a k získané suspenzi se přidá 1,0 g (3,1 mmol) tetrabutylamoniumbromidu, směs se vaří po dobu 2 hodin a poté se k ní přidá 5,0 ml kyseliny octové a rozpouštědlo se oddestiluje za sníženého tlaku. Pevný zbytek se trituruje s 30 ml chloroformu, získaná supenze se zfiltruje, pevná látka se rozpustí v 10 ml methanolu za zahřívání, načež se k roztoku přikape při teplotě místnosti za míchání v průběhu asi 20 minut 20 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Nezreagovaný primycin-acetátu se odfiltruje, filtrát se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se trituruje s diethyletherem. Získaná suspenze se zfiltruje a vysuší se při teplotě 70 ’C za sníženého tlaku. Získá se 2,8 g (46,6 %) pseudoprimycin-acetátu o teplotě tání 106 °C.

Příklad 10

6,0 g (5,27 mol) primycin-acetátu se suspenduje ve směsi 360 ml n-butanolu a 60 ml diethylaminu a poté se směs za míchání zahřívá na teplotu varu po dobu 4,5 hodiny. Poté se reakční směs zahustí na polovinu původního objemu za sníženého tlaku, přidá se k ní 5 ml kyseliny octové a rozpouštědlo se oddestiluje za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v 10 ml methanolu a k získanému roztoku se za míchání při teplotě místnosti během asi 20 minut přikape 20 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Nezreagovaný primycin-acetátu se odfiltruje, filtrát se odpaří, zbytek se trituruje s diethyletherem, suspenze se zfiltruje a pevný podíl se vysuší při teplotě 70 °C za síženého tlaku. Získá se 2,8 g (46,6 %) pseudoprimycin-acetátu o teplotě tání 106 °C.

V li

Příklad 11

60,0 g (52,77 mmol) primycin-acetátu se zahřívá k varu po dobu 3,5 hodiny ve 400 ml pyridinu, načež se takto získaný roztok odpaří ve vakuu. Odparek se promyje dvakrát 50 ml ethanolu a ethanol se oddestiluje. Zbytek se rozpustí ve 100 ml ethanolu a k takto získanému roztoku se při teplotě místnosti, za míchání v průběhu asi 20 minut přikape 200 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Nezreagovaný primycin-acetát se odfiltruje, filtrát se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se trituruje s diethyletherem. Takto získaná suspenze se zfiltruje a pevný zbytek se vysuší při teplotě 70 “C za sníženého tlaku. Získá se 25 g (41,6 %) pseudoprimycin-acetátu o teplotě tání 106 °C.

Příklad 12

1,0 g (0,89 mmol) primycin-A₁-sulfátu (připraveného podle maďarského patentového spisu č. 196 425) a 0,14 g (0,45 mmol) hydroxidu barnatého obsahujícího 8 mol krystalické vody se suspenduje ve směsi 13,5 ml methanolu a 3,5 ml vody. Reakčni směs se vaří za míchání 2,5 hodiny a poté se k ní za míchání přidá 0,4 ml octové kyseliny a v míchání se pokračuje po dobu 30 minut. Síran barnatý vzniklý v průběhu reakce se odfiltruje, filtrát se odpaří, olejovitý zbytek se rozpustí v 1,6 ml methanolu a k získanému roztoku se přikape za míchání při teplotě místnosti během asi 20 minut 3,4 ml ethylesteru kyseliny mravenčí. Nezreagovaný primycin-acetát se odfiltruje, filtrát se odpaří za sníženého tlaku, získaná supenze se zfiltruje a bílá pevná látka se vysuší za sníženého tlaku při teplotě 70 °C. Získá se 0,43 g (43 %) pseudoprimycin-A-^-acetátu o teplotě tání 108 °C.

Příklad 13

Rozdělení složek pseudoprimycinu sloupcovou chromatografii

1) Chromatografické dělení:

Vzorek určený k dělení: 6,8 g pseudoprimycin-acetátu (připraveného podle kteréhokoli z příkladů 1, 2, 4 až 11) rozpuštěného ve 30 ml elučniho činidla.

Sloupec: průměr 3,6 cm, délka 90 cm, naplněný silikagelem (silikagel 60, Merck, velikost částic: 0,063 až 0,100 mm) suspendovaným v elučním činidle.

Eluční činidlo: spodní fáze směsi chloroformu, methanolu a octové kyseliny v poměru 9:6:3:4 stabilizované 1 % objemovým methanolu.

Průtoková rychlost: 1,75 ml/směs.

Objem odebíraných frakcí: 10 ml.

Obsah účinné složky ve frakcích byl stanovován pomocí chromatografie na tenké vrstvě.

2) Chromatografie na tenké vstavě

Testování se provádí na silikagelových destičkách (silikagel

F₂54^# Merck) za použití 10 μΐ vzorku.

Jako rozpouštědlového systému se použivá směsi chloroformu, methanolu, kyseliny mravenčí, vody a formaldehydu v poměru 130:53:6:9:3:3 a detekce se provádí pomocí chlortoluidinu nebo ethanolu obsahujícího 1 % fosforomolybdenové kyseliny.

Chromatograficky identické frakce se spojí, zředí se 10 ml methanolu a odpaří se ve vakuu. Pevný zbytek se trituruje s diethyletherem, směs se zfiltruje a pevný bílý prášek se vysuší za sníženého tlaku při teplotě 70 °C.

Tímto způsobem byly získány následující složky:

25^x^ složka hmotnost výtěžek teplota [a]_n (g) (%) tání (’C) (oj pseudoprimycin-

-Af-acetát pseudoprimycin-	1,60	23,5	108	+38,4
-Ag-acetát	0,30	4,4	110	+ 52,1
pseudoprimycin- -Cf-acetát	0,98	14,4	104	+42,2
pseudoprimycin- -Bf-acetát	0,45	6,6	103	+50,0
pseudoprimycin- -B₃-acetát	0,10	1,4	103	+45,0
Legenda: x) specifická	otáčivost	se stanovuje	v 0,2 %

methanolickém roztoku.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Komplex pseudoprimycinu obecného vzorce I

O*

21¾ ve kterém (I)

R¹ znamená butylovou skupinu, pentylovou skupinu, hexylovou skupinu,

R² znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo zbytek O-ara binosy,

X znamená iont anorganické kyseliny, výhodně sulfátový iont, nebo iont organické kyseliny, výhodně acetátový iont, jakož i jeho adiční soli s kyselinami.
2. Složky komplexu pseudoprimycinu obecného vzorce I podle nároku představované

-pseudoprimycinem-A^, ve kterém R¹ znamená butylovou skupinu, R² znamená zbytek O-arabinosy a X má význam uvedený v nároku 1,

-pseudoprimycinem-A₂, ve kterém R¹ znamená pentylovou skupinu, R² znamená zbytek O-arabinosy a X má význam uvedený v nároku 1,

-pseudoprimycinem-A₃, ve kterém R¹ znamená hexylovou skupinu, R² znamená zbytek O-arabinosy a X má význam uvedený v nároku 1/

-pseudoprimycinem-B^, ve kterém R¹ znamená butylovou skupinu, o - , ,

R znamena atom vodíku a X má význam uvedený v nároku 1, -pseudoprimycinem-B₂, ve kterém R¹ znamená pentylovou skupinu, R znamena atom vodíku a X ma význam uvedený v nároku 1, -pseudoprimycinem-B₃, ve kterém R¹ znamená hexylovou skupinu,

R² znamená atom vodíku a X má význam uvedený v nároku 1, -pseudoprimycinem-C-L, ve-kterém R¹ znamená butylovou skupinu, R² znamená hydroxylovou skupinu a X má význam uvedený v nároku

1,

-pseudoprimycinem-C₂, ve kterém R¹ znamená pentylovou skupinu, znamená hydroxylovou skupinu a X má význam uvedený v nároku 1, -pseudoprimycinem-C₃, ve kterém R¹ znamená hexylovou skupinu, R² znamená hydroxylovou skupinu a X má význam uvedený v nároku • 1, jakož i jejich adičními solemi s kyselinami.
3. Způsob výroby složek komplexu pseudoprimycinu obecného vzorce (I) ve kterém skupinu, pentylovou skupinu nebo hydroxylovou skupinu nebo zbytek

R^x znamená butylovou hexylovou skupinu,

R² znamená atom vodíku,

O-arabinosy,

X znamená iont anorganické kyseliny, výhodně sulfátový iont, nebo.iont organické kyseliny, výhodně acetátový iont, podle nároku 1, vyznačující se tím, že se za účelem C₃₅-C₃7-translaktonizační reakce nechá reagovat kterákoli ze složek komplexu primycinu obecného vzorce II

R¹, R² a X mají shora uvedený význam, se solemi, rozkládajícími se na ionty, s kvarterními amoniovými solemi, nukleofilními látkami, oxidy kovů, hydroxidy kovů, organickými bázemi nebo heterocyklickými sloučeninami obsahujícími dusík nebo/a kyslík, ve vodném prostředí nebo v prostředí organického rozpouštědla, při teplotě mezi teplotou místnosti a teplotou varu rozpouštědla, a nezreagovaná výchozí látka se vysráží ethylesterem kyseliny mravenčí nebo se komplex pseudopromycinu obecného vzorce I, ve kterém R¹, R² a X mají shora uvedené významy, chromatograficky rozdělí na jednotlivé složky.
4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že se jako solí, které se rozkládají na ionty, pro translaktonizační reakci používá solí, jejichž aniont je buď organický, jako jsou například alkoxidy, výhodně methoxid, ethoxid, fenoxid; karboxyláty, výhodně formiát, acetát, chloracetát nebo sukcinát; nebo anorganický, jako je například uhličitan, hydrogenuhličitan, siřičitan, sirník, fosforečnan, dihydrogenfosforečnan, dusičnan, disutan, kyanid, chlorid, bromid a fluorid, zatímco kationty těchto solí mohou být představovány alkalickými kovy, výhodně sodíkem, draslíkem nebo kovy alkalických zemin, výhodně hořčíkem nebo transitními kovy, výhodně železem.
5. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že se jako kvarterní amoniové soli pro translaktonizační reakci používá tetrabutylamoniumbromidu.
6. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že se jako nukleofilních látek pro translaktonizační reakci používá iontoměničových pryskyřic.
7. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že se jako oxidů a hydroxidů kovů pro translaktonizační reakci používá oxidu a hydroxidu sodného nebo hydroxidu barnatého.
8. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že se jako organické báze pro translaktonizační reakci používá diethylaminu.
9. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že se jako heterocyklické sloučeniny obsahující dusík nebo/a kyslík pro translaktonizační reakci používá pyridinu.
10. Způsob podle kteréhokoli z nároků 3 až 9, vyznačující se tím, že se translaktonizační reakce provádí v prostředí organického rozpouštědla, přičemž se jako organického rozpouštědla používá rozpouštědla zvoleného, ze skupiny, která je tvořena alifatickými alkoholy s 1 až 4 atomy uhlíku, výhodně methanolem, ethanolem, n-butanolem, halogenovanými uhlovodíky, výhodně chloroformem, aprotickými rozpouštědly, výhodně ethery, organickými bázemi, výhodně diethylaminem, pyridinem a acetonitrilem.
11. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že se pro dělení jednotlivých složek používá sloupcové chromatografie nebo chromátogafie na tenké vrstvě.
12. Farmaceutické přípravky, vyznačující se tím, že obsahují 0,001 až 10 % komplexu pseudoprimycinu obecného vzorce I, ve • kterém R¹, R² a X mají významy uvedené v nároku 1, nebo/a kterékoli složky komplexu pseudoprimycinu obecného vzorce I, ve kterém R¹, R² a X mají významy uvedené v nároku 2, nebo/a směsi několika složek komplexu pseudoprimycinu, popřípadě v kombinaci s dalšími antibiotický účinnými, látkami, spolu s 99,999 až 90 % obvyklých farmaceutických nosných látek, ředidel nebo dalších přísad.