CS203080B2 - Method of preparing the imping agent against the influenza,containing the weakened h3 n2 strain of inflenza virus - Google Patents
Method of preparing the imping agent against the influenza,containing the weakened h3 n2 strain of inflenza virus Download PDFInfo
- Publication number
- CS203080B2 CS203080B2 CS746552A CS655274A CS203080B2 CS 203080 B2 CS203080 B2 CS 203080B2 CS 746552 A CS746552 A CS 746552A CS 655274 A CS655274 A CS 655274A CS 203080 B2 CS203080 B2 CS 203080B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- serum
- strain
- influenza
- virus
- influenza virus
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 43
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 title description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 64
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 48
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 36
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 19
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 7
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 claims description 11
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 4
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 claims description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 19
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 abstract description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 abstract description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 abstract 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 abstract 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 abstract 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 abstract 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 abstract 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 14
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 6
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 6
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 244000309464 bull Species 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229960001226 live attenuated influenza Drugs 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 241000371980 Influenza B virus (B/Shanghai/361/2002) Species 0.000 description 1
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 description 1
- 206010028735 Nasal congestion Diseases 0.000 description 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu výroby očkovací látky proti chřipce obsahující zeslabený H5N2 kmen chřipkového viru resistentní proti inhibitorům přítomným v séru.
Bylo zjištěno, že ochrana proti virovým onemocněním cest dýchacích závisí na vytvoření místní imunity ve sliznici dýchacích cest. Tento' aspekt byl nedávno znovu publikován Rossenem a spolupracovníky (Progr. Med. Virol. 1971, 13, 194).
V minulých letech bylo provedeno' mnoho pokusů o vyvolání imunity vůči chřipce intranasální aplikací inaktívované očkovací látky (viz například: Waldman a spoluprac., Nátuře, 1968, 218, 594; J. Immunol. 1969, 207, 520; WHO Bull. 1969, 41, 543). Avšak dosažené výsledky jsou rozporné, což je pravděpodobně způsobeno nedostatečnou stimulací imunitního systému inaktivovaným antigenem (Tyrrell se spoluprac., J. Hyg. 1970, 68, 359).
Živé očkovací látky proti chřipce jsou rovněž známé, avšak mají různou schopnost ochrany a bylo věnováno mnoho úsilí na snížení patogenity viru, například sériovým pasážováním viru na kuřecích embryích.
Posléze zmíněných vakcín proti chřipce je již několik roků používáno v Sovětském svazu a podle Smorodintseva a spoluprac. (Bull.
WHO, 1969, 41, 585 j bylo dosaženo dobrého ochranného účinku při epidemiích chřipky.
Z klinických pokusů, prováděných s viry izolovanými z pacientů s ' nadějí, že by některé z těchto virů mohly být nepathogenní (A. A. Smorodintsev, G. A. Alexandrova, O. M. Chalkina a A. A. Selivanov, Applied Virology (1965): lst Annual Symposium, Boča Raton, Florida, 1964, vydaný M. Saundersem a Ε. H. Lennettem, str. 142, Sheboygan, Wisconsin, El.lis) byl učiněn závěr, že ' viry resistentní vůči inhibitorům obsaženým v koňském séru způsobují méně nežádoucích reakcí než viry, které jsou citlivé na inhibitory v koňském séru.
Bylo však zjištěno, že mají-li se odstranit vedlejší reakce po podání očkovací látky obsahující živé chřipkové viry, musí být přeměna virů na formu resistentní vůči inhibitorům úplná, ' protože přítomnost ' i malého procenta částeček citlivých na Inhibitor může způsobit, že vir je příliš pathogenní pro humánní použití. Byly provedeny různé pokusy o izolaci kmenů chřipkového viru zcela resistentních vůči inhibitorům . z koňského séra, a byly popsány pracovní postupy vedoucí ke zvýšení resistence' chřipkových virů vůči inhibitorům; zmíněné pracovní postupy spočívají v podstatě v sériovém pasážování kmenů chřipkového viru na kuřecích embryích v přítomnosti séra.
Bylo zjištěno, že při alantoidním pasážování směsí dané dávky chřipkových virů a koňského séra se v případě chřipkového viru kmene A2/Anglie/501/68 (H2N2) vyvolá úplná resistence vůči inhibitorům z koňského séra, zatímco· v případě virů kmene A2 Hong-Kong (H3N2 )/1/68 nebylo dosaženo příznivých výsledků (A. S. Beare a M. L. Byone, British Medical Journal 4, 198—201, 1969).
Je též známo, že alantoidní pasáže směsi dané dávky chřipkového viru kmene A2 Hong-Kong (HsN2)/1/68 a morčního- séra nedávají positivní výsledky dříve než po 17. pasáži (D. Ikic, N. Pasini, N. Rajner, B. Jancikic, M. Juzbasic a M. Heclmovic, Proč. Symposium on Acute Respirátory Diseases, 1969, Jugoslávská akademie věd ' a umění, Záhřeb).
Rovněž bylo ukázáno, že je možné získat kmeny úplně resistentní vůči inhibitorům přítomným v séru po malém počtu pasáží, použije-H se při uvedených pasážích postupně koňského séra a morčího séra, tj., že je možné získat stálý a imunogenní chřipkový virus kmene A2 Hong-Kong (H3N2), úplně resistentní vůči inhibitorům obsaženým v séru, když se chřipkový vir kmene A2 Hong-Kong (H3N2), který byl nejdříve podroben sériovým pasážím v alantoidních vacích kuřecích ambryí v přítomnosti zvyšující se koncentrace koňského séra, podrobí dalším sériovým pasážím v alantoidních vacích kuřecích embryí v přítomnosti stoupajících koncentrací morčího· séra.
Autoři vynálezu nyní nalezli, že lze získat stálé H3N2 kmeny chřipkového viru, zcela resistentní vůči inhibitorům obsaženým v séru a použitelné pro· přípravu očkovací látky, · kterou lze' · aplikovat · intranasálně, když se rekombinovaný - H3N2 kmen chřipkového viru, - - získaný rekombinací H3N2 chřipkového viru - · a · · A/PRs chřipkového viru, pasážuje v alantoidních · · vacích - zárodků ptačích vajec v - přítomnosti - séra, · přičemž · se jako vajec použije výhodně slepicích vajec, a jako séra · se · použije - ' výhodně séra · morčat.
Způsob - · získávání rekombinovaných kmenů · chřipkového -viru · typu H3N2 rekombinací -H3N2 - · · chřipkových virů a · A/PRs chřipkových· virů je znám.
Jě - potom možné vybrat z těchto rekombinantů takové klony virů, které mají vysokou růstovou kapacitu (E. D. Kilbourne, Bull. Wld. Hlth. Org. 41, . 643 až 645, 1969). Bylo - · zjištěno, · že některé klony virů izolovaně z uvedených - rekombinací se chovají u lidí jako oslabené kmeny, protože -oslabení virů - se- nedalo - zjistit pomocí · ' žádných ukazatelů ani - in vitro, ani in vivo, musí se stupeň oslabení různých klonů virů testovat infikováním u lidí - (A. - S. Beare a T.- S. Halí, Lanc-et 1971, - II, 1271 -až 1273). Způsobem podle vynálezu se vybraný rekombinovaný H3N2 kmen chřipkového - viru, mající vysokou růstovou - schopnost, učiní resistentní - vůči inhibitorům obsaženým- v - séru. - Takto získaný modifikovaný -chřipkový virus, mající H3N2 antigenové složení, si udržuje svoji vysokou růstovou kapacitu. Autoři vynálezu vyvinuli tedy typ chřipkového- . viru vhodného* pro přípravu živé očkovací látky, u - kterého není nutné provádět třídění u lidí za účelem výběru klonu viru majícího vhodný stupeň oslabení, a který má in vitro stálé ukazatele. Tento typ viru lze získat pouze po jedné nebo dvou pasážích vybraného rekombinovaného H3N2 chřipkového viru v alantoidních vacích kuřecích -embryí v přítomnosti inhibitorů obsažených v séru, způsobem uvedeným výše.
Jeden kmen z kolekce H3N2 kmenů chřipkového viru zcela resistentních vůči inhibitorům -obsaženým v séru, získaný způsobem podle tohoto vynálezu, byl -označen jako „kmen Alice“. Vzorek chřipkového- viru kmene Alice je uložen v Americké sbírce typových kultur (Američan Type Culture CoUection, Rockville, Maryland, USA), kde dostal označení ATCC VR 776.
Vynález se tedy týká způsobu výroby stálých H3N2 kmenů chřipkového viru, zcela resistentních vůči inhibitorům obsaženým v séru, zvláště způsobu výroby chřipkového viru kmene Alice. Podstata vynálezu je v tom, že se rekombinovaný kmen chřipkového- viru [například klon MRC-2, uložený v Americké sbírce typových kultur . - - v - Rockville, Maryland, USA, pod označením ATCC VR 777), získaný předem z H3N2 - kmene chřipkového- viru, zvláště z kmene A/England/42/72, a z A/PRe kmene chřipkového viru, zvláště z kmene Mount Si-nai - A/PRs/34, podrobí alespoň jedné pasáži v alantoidních vacích zárodků ptačích vajec, zvláště slepicích vajec, v přítomností séra, zvláště séra morčat, přičemž se - kultivace - provede za - užití různých zředění virů - ve fyziologickém· roztoku soli, stoupajících - v - rozmezí -od - - 10 - 1 - - do 10“7, v přítomnosti stoupajícího -zředění séra - ve fyziologickém roztoku soli v - rozmezí od 1/4 do 1/1000, načež - -se - takto získané - - kmeny, resistentní vůči inhibitorům - - obsaženým - - v séru,- izolují, přičemž se výhodně izolují takové kmeny -chřipkového - viru, které - se získají v přítomnosti nejvyšší koncentrace séra a nejnižší koncentrace viru.
Samozřejmě lze pro - získání virových klonů a pro - pasážování v různých zředěních použít buď rekomibinovaného - kmene chřipkového viru, nebo Izolovaného - - resistentního kmene, nebo obou, aniž by - ' se tím změnila podstata vynálezu.
Chřipkový· -vir kmene Alice je jedním z kmenů, -které - byly získány - z MRC-2 klonu virů, který byl předem- podroben pěti pasážím v konečném zředění, pak byl jednou pasážován - v koncentraci 10~3 - v - přítomnosti morčího séra - - - zředěného 1:16 ve - fyziologickém roztoku - soli, - a --pak jednou - v koncentraci 1CT 7 v příjemnosti- morčího - ' séra - zředěného 1:4 ve fyziologickém roztoku soli, a dále podroben třem pasážím v konečném zředění v -nepřítomnosti - -séra a jedné - - další pasáži v nepřítomnosti - -séra k - získání inokula. Tento očkovací podíl odpovídá dvanácté pasáži původního· MRC-2 klonu, ''přičemž kmen použitý od sedmé pasáže výše 'je re-sistenitní к inhibitorům obsaženým v séru.
Takto získané kmeny virů, zcela rezistentní vůči inhibitorům obsaženým v séru, jsou nspátogenní, imunogenní a vhodné pro» výrobu očkovací látky .proti chřipce, obsahující živé chřipkové viry, přičemž pro výrobu a/nebo stabilizaci zmíněné živé vakcíny lzo použít jakéhokoliv známého pracovního postupu. Vynález se tudíž týká rovněž způsobu výroby živých očkovacích látek proti chřipce, obsahujících alespoň jeden kmen chřipkového» viru resistentní vůči inhibitorům přítomným v séru.
Podle vynálezu se způsob výroby očkovacích látky proti chřipce, obsahující živý эslabený chřipkový vir, vyznačuje tím, že se H3N2 kmen chřipkového viru, resistentní vůči inhibitorům přítomným v séru, získaný shora uvedenými způsobem, inkubuje v alantoidním. vaku kuřecího embrya po» dobu dostatečnou к růstu velkého množství uvedeného viru, získaný virový materiál se izoluje, a je-li třeba lyofilizuje.
Takto získaná očkovací látka proti chřipce Obsahující živé oslabené chřipkové viry se aplikuje místně dc- nosohltanu.
Používá-li se viru jako očkovací látky proti chřipce, přechovává se výhodně v lyofilizované formě a očkovací látka se rekonstituuje těsně před aplikací buď přidáním· vody, nebo přidáním jiných o sobě známých farmaceutických ředidel nebo pomocných látek, používaných při přípravě nosních přípravků, jako kapek nebo aerosolů.
Způsob podle vynálezu je blíže objasněn v následujících příkladech provedení, které však jeho rozsah nijak neomezují.
Příklady provedení
Příklad 1
Příprava modifikovaného chřipkového viru
Jako výchozího virovéh-o materiálu bylo použito vzorku MRC-2 klonů virů, který byl podroben pěti pasážím v konečném zředění a který byl vysoce citlivý vůči inhibitorům obsaženým v normálním séru. Suspenze uvedeného výchozího chřipkového viru ve fyziologickém roztoku soli byla ve stoupajícím zředění -(tj. ve zředění 1Ό-1, 10~3, Ю5 а 1O7) smíchána s roztoky sterilního séra morčat ve fyziologickém· roztoku ve stoupajícím zředění (tj. zředění 1/4, 1/8, 1/16, 1/40, 1/200 a. 1/4000); zmíněné mor čí sérum bylo nejprve zředěn»'; 1:4, zahříváno 15 minut na vroucí vodní lázni, dále zředěno, zhomoigenizovánc a centrifugováno 30 minut při 2000 otáčkách za minutu. Supernatantu bylQ použito pro další stupeň, který spočíval v inkubaci směsí viru se še rem při 37 °C po »dobu jedné hodiny a pak v inokulaci 0,2 mil podílů uvedených směsí do alantoidních vaků sérií kuřecích zárodků ve vejcích, předem inkubovaných po dobu 10 dnů při 37 °C a prosvícených (naočkována byla pouze přežívající embrya).
Vejce s kuřecími embryi byla po naočkování dále inkubována po dobu v rozmezí od 24 do 96 hodin. Po1 skončení inkubace byla vejce prosvícena a přežívající zárodky byly ochlazeny na 4 qC. Alantoidní tekutina z každé séirie přežívajících zárodků byla separátně izolována a otestována hemaglutinační metodou na přítomnosti chřipchřipkcvého viru. Izolovaný vir, vzniklý po inokulaci nejvíce zředěné virové kultury v přítomnosti nejkoncentrovanějšího morčího séra (tj. zředění viru 10' 3 a zředění séra 1:16), který vykazoval hemaglutinační aktivitu, byl použit ke druhé pasáži, která byla provedena za stejných pracovních podmínek. Izolovaný vir, vyprodukovaný po inokulaci nejvíce zředěné víroké kultury (tj. 10-7) v přítomnosti nejvíce koncentrovaného· séra (tj. séra zředěného 1:4) vykazoval hemaglutinační aktivitu a byl zcela resistentní vůči inhibitorům přítomnými v normálním séru, jak je ukázáno v tabulce
I.
Tři další pasáže viru v konečných zředěních byly provedeny v nepřítomnosti séra za účelem získání klonů uvedených resistentních mutantů a za účelem potvrzení stability jejich resiistentního charakteru. Jak je ukázáno v tabulce I, vir izolovaný po každé pasáži je zcela resistentní vůči inhibitorům obsaženým v normálním séru. Viru po poslední pasáži bylo použito jako inokula pro výrobu násady kmene Alice. Poté byla alantoidní kapalina izolovaná z jednotlivých embryí sebrána, spojena, otestována její sterilita a bezpečnost, a pak byla smíchána s peptonem tak, aby konečná koncentrace peptonu byla 5%. Získaná suspenze viru byla rozdělena po dávkách 0,5 ml do ampulek o obsahu 3 ml a zlyofilizována.
Charakteristika modifikovaného chřipkového viru in vitro a in vivo
1. reisistence vůči inhibitorům
Testování resistence vůči inhibitorům přítomným v normálním zahřátém zvířecím séru (v koňském, morčím nebo kravském séru, zahřívaném 1 hodinu na 75 °C) bylo provedeno1 tak, že к řadě vždy postupně dvojnásobně zředěných roztoků zahřátého séra bylo, přidáno po 4 hemaglutinačních jednotkách původního virového kmene a modifikovaného viru. Po jednohodinové inkubaci při teplotě místnosti byla přidána suspenze kuřecích červených krvinek a 0dečteny výsledky. Nalezené hodnoty jsou uvedeny v následující tabulce I.
Tabulka I
| Původní kmeny | Modifikovaný vir | |||||
| Sérum. A? (Engj MRC-2 | po 1. pa- | pof 2. pa- | poz f třech | kmen | kmen | kmen |
| ‘42/72 | sáž.! v pří- | sáži v pří- | pasážích | Alice | Alice | Alice |
| tomnosti | tomnosti | v koneč- | inokulum | podíl A | podíl B | |
| séra | séra | ném ře- | ||||
| dění |
| koňské | > 10 f 000 | > 10 000 | <20 | <20 | <20 | <20 | <20 | <20 |
| morčí | > 10 000 | >10 000 | <20 | <20 | <20 | <20 | <20 | <20 |
| kravské | 1 f 000 | 1000 | <20 | <20 | <20 | <20 | <20 | <20 |
Z uvedených dat vyplývá, že inokulum a dva následující experimentální podíly A a B, vyprodukované z uvedeného inokula, ' jsou zcela resistentní vůči inhibitorům přítomným v séru.
2. stálost resistentního charakteru vůči inhibitorům přítomným v séru
Stálost resistentního charakteru chřipkového viru kmene Alice vůči inhibitorům obsaženým v séru byla potvrzena testy in vitro ina kuřecích embryích a in vivo na laboratorních zvířatech f f fretkách ).
In vitiro byl kmen Alice podroben pěti dalším pasážím na kuřecích embryích, aniž by se změnil charakter jeho resistence vůči inhibitorům přítomným v séru,
In vivo bylo zjištěno·, že virus izolovaný za tři dny po intranasální inokulaci fretkám (v dávce [ 107 EIDso) je rovněž zcela resistentní vůči inhibitorům obsaženým v v séru.
3. antigenlcita a nepřítomnost vedlejších účinků
První skupina 4 fretek byla intranasálně naočkována [chřipkovým virem kmene Alice v dávce 10? EID50. Po dobu pěti dnů byla denně [ měřena teplota zvířat. Nebylo zaznamenáno žádné signifikantní zvýšení teploty zvířat [ (maximální naměřená f teplota 39,8 °Cj. Druhá skupina dvou fretek byla naočkována intranasálně dávkou IO? EIDso původního chřipkového viru kmene AafEng) 4272. Za dva dny po naočkování vykazovala obě zvířata zvýšenou teplotu (40,8 °С, resp. 41,2 f °C). Třetí skupina 2 fretek byla naočkována intranasálně dávkou Ю? EIDso kmene chřipkového viru, izolovaného v Austrálii v roce 1972 .(^A\7u:tc^oii^y'104/ř72). Obě zvířata vykazovala za dva dny po naočkování positivní reakci (teploty vyšší než
40,5 °C). Тт^у na< protiiatky v féru fna základě inhibice hemaglutinace) ukázaly, že resistence virů vůči inhibitorům nezměnila anitigeniicltu viru u fretek: za 14 dnů po intranasálním naočkování byly tltry protilátek v séru naočkovaných zvířat velmi vysoké (titr 1/1*024 j ve srovnání s kontrolní skupinou zvířat (titr > 1/8).
Příklad 2
Příprava očkovací látky proti chřipce
Za užití lyofilizovaného výchozího materiálu, získaného způsobem podle příkladu 1 (tj. za užití kmene Alice), jako inokula pro výrobu očkovací látky proti chřipce v širokém měřítku, byla provedena další pasáž viru v alantoidní kapalině další série vajec s kuřecími embryi, která byla inokulována 3 dny při 36
Alantoidní tekutina z jednotlivých embryí byla izolována, spojena, otestována na sterilitu a bezpečnost, smíchána s peptonem tak, aby konečná koncentrace peptonu byla 5%, a takto získaná vakcína proti chřipce byla rozdělena do skleněných ampulek o obsahu 3 ml tak, aby každá ampulka obsahovala jednu očkovací dávku viru f (tj. alespoň W EID50). Vakcína byla lyofiiízována a ampulky zataveny nebo neprodyšně uzátkovány.
Takto připravená očkovací látka proti chřipce se aplikuje tak, že se obsah ampulky rekonstituuje f přidáním 0,5 ml vody nebo fyziologického roztoku soli nebo 5% roztoku sacharózy a roztok se aplikuje do nosních dírek ve formě kapek.
Alternativně se může shora uvedená směs alantoidní tekutiny s peptonem rozdělit do větších skleněných lahviček f tak, aby v každé lahvičce bylo' několik očkovacích dávek viru, čímž se získá očkovací látka proti chřipce pro více dávek.
Příklad 3
Očkování proti chřipce s očkovací látkou, obsahující živé oslabené chřipkové viry kmene Alice
Materiál a metoda
Pro klinický pokus bylo vybránof deset dobrovolníků ve stáří od 18 do 44 let (průměrný věk 28 let) majících titr protilátek, zjištěný na základě inhibice hemaglutinace, <32· Zmíněných 10 osob dostalo v totervalu 14 dnů [ dvě dávky vakcíny chřipkového viru kmene Alice; očkovací látka z byla rekonstituována z lyofilizovanrho materiálu těsně před aplikací. Při každé aplikaci· dostala každá osoba očkovací látku proti chřipce, připravenou způsobem podle příkladu 2, v dávce pěti kapek na noisní dírku. Za 14 dnů po1 prvním podání očkovací látky i (tj. v den druhé aplikace očkovací látky], a za 3 až 4 týdny po- druhém podání byly odebírány vzorky výplachu nosu a vzorky krve ke stanovení hladiny protilátek (vůči kmenu A/England/42/72].
Výsledky
I. Klinika
Teplota osob byla zaznamenávána po dobu pěti dnů po: každém podání očkovací látky. Jak je uvedeno v tabulce II, pouze jedna osoba (čís. 3] vykázala slabé zvýšení teploty (nalezeno 37,2 % v prvém d.nu].
Sedm osob mělo některé slabé klinické příznaky chřipkového1 onemocnění: Šest z nich mělo sérovou rinitidu (rýmu] nebo nosní kongesci po dobu jednoho až dvou dnů, a jedna osoba si stěžovala na slabé bolesti hlavy s hypersekrecí hltanu.
II. Izolace viru
U osmi osob (č. 3, 5, 6, 9, 12, 14, 22 a 27] byly druhý den po1 očkování provedeny výtěry nosu a krku; všechny vzorky byly po dvou slepých pasážích na kuřecích embryích negativní. .
III. Sérologické výsledky
a] Titr protilátek na základě inhibice hemaglutinace (IH]
Za 14 dnů po prvním, podání očkovací látky byla pozorována změna: -titru protilátek v séru u šesti osob z deseti.
Po druhé aplikaci očkovací látky mělo 7 o,sob z - 10 zvýšený titr protilátek v séru.
b] Titr protilátek na základě neutralizace séra (SN]
Za 14 dnů po prvé aplikaci -očkovací látky bylo zaznamenáno· signifikantní zvýšení titru protilátek u šesti osob z deseti, a podruhem podání u devíti osob z deseti.
Z hodnocení IH -a SN titrů protilátek v séru vyplývá, že z deseti dobrovolníků pouze jeden (čís. 6] neměl po- dvou -aplikacích očkovací látky proti -chřipce zvýšený titr protilátek v -séru.
IV. Lokální protilátky
Titry lokálních N- protilátek všech deseti očkovaných osob jsou uvedeny v tabulce
III.
Signifikantní - stoupnutí uvedeného titru protilátek bylo pozorováno u sedmi osob z devíti za -čtrnáct dnů po první aplikaci očkovací - látky, a u osmi z deseti za 31 až 28 dnů po druhém očkování.
Hladiny protilátek v séru a klinické projevy
Osoba pohlaví HI titr protilátek SN titr protilátek Zvýšení Klinické symptomy čís. M 14 dnů 3 až 4 týd- před 14 dnů 3 až 4 teploty
I. xj «
ОЙ
Л'ОЗ cx >> Cd β
>cd
| □ | CD | χφ | ΧΦ | \φ | \φ \φ | 'Φ | \φ \φ |
| 0 | TO | tj | ΰ -d | β -d | 3 Ť | тЗ | |
| c>? | 'к*'· | 'tů | 'cd | 'CO | '03 '03 | 'Cd | vcd icd |
| co | Ph | >>N | >N | >N >N | >N | >N >N | |
| Cl. |
| co | 00 ом | |
| Ю | CM | CO |
| CM | rH |
431 см *31 T_i co co
CO CO co If5 in ιή
ЛИ см CM
CO CM cp in CO r-l
CM
43< co cp cp Xjl Í-J CQ CO Η tH CO IP ю Ю CD
ΛΙΙ N 04 со ем CD CO 00 °O CM CO CO co r-1 CO r-l r-l v СП H rl H
X3< CO CM co CO 431 00 0Q 00 CM
СО rH 00 r-l гЧ CO CM CM CM 00
Η H rl
OO ср V r-i
CO CM 00 00 00 CM r-1 on CM CM CM 00 t—I т-l t—I
00 OO & CO CO 00 >n s«si nSSSSSS oo ιη φ
O) CM CM 00 co ts rH rH CM CM CM CM
Tabulka III
Lokální N protilátky
Osoba číslo Nosní výplachy*) před očkováním 3 až 4 týdny po dnů po 1. aplikaci 2. aplikaci
| 3 | <2 | 16 | 32 |
| 55 | <2 | 2 | 4 |
| 6 | <2 | 4 | 4 |
| 9 | <2 | 16 | <2 |
| 12 | <2 | <2 | 2 |
| 14 | <2 | 16 | 16 |
| 22 | <2 | 16 | >64 |
| 23 | <2 | netestováno | 8 |
| 26 | <2 | 64 | 128 |
| 27 | <2 | 8 | 4 |
*) Nosní výplachy po standardizaci na imunoglobulin A (IgA) = asi 200 ^g/ml
Claims (2)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob výroby očkovací látky proti chřipce oibsaJiujicí zeslabený H3N2 kmen, chřipkového viru .resistentní proti inhibitorům přítomným v séru, vyznačující se tím, že se rekombinovaný H3N2 kmen chřipkového viru MRC-2 (ATCC VR 777) pasážuje alespoň jednou v alantoidním vaku zárodků slepicích vajec v přítomnosti séra morčat, přičemž se pasážování provádí za použití různých zředění viru pohybujících se od 10i až 10“7 v normálním· fyziologickém roztoku soli v přítoimosti různých zředění sé ra morčat· pohybujících se od 1/4 do 1/1000 v normálním· fyziologickém roztoku solí, takto získaný kmen resistentní proti inhibitorům přítomným v séru se izoluje, pomnoží v alantaoidními vaku zárodku slepičích vajec, výsledný virový materiál se izoluje a popřípadě se vysuší vymrazováním.
- 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako H3N2 kmene chřipkového viru resistentního proti inhibitorům přítomným v séru používá kmene Alice (ATCC VR 776).
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/401,335 US3953592A (en) | 1973-09-27 | 1973-09-27 | Live influenza virus vaccines and preparation thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS203080B2 true CS203080B2 (en) | 1981-02-27 |
Family
ID=23587327
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS746552A CS203080B2 (en) | 1973-09-27 | 1974-09-24 | Method of preparing the imping agent against the influenza,containing the weakened h3 n2 strain of inflenza virus |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3953592A (cs) |
| JP (1) | JPS5058223A (cs) |
| AT (1) | AT331978B (cs) |
| BE (1) | BE819865A (cs) |
| CA (1) | CA1030450A (cs) |
| CH (1) | CH595447A5 (cs) |
| CS (1) | CS203080B2 (cs) |
| DD (1) | DD114966A5 (cs) |
| DE (1) | DE2445819A1 (cs) |
| DK (1) | DK508274A (cs) |
| ES (1) | ES430415A1 (cs) |
| FI (1) | FI278774A (cs) |
| FR (1) | FR2245376B1 (cs) |
| GB (1) | GB1461188A (cs) |
| HU (1) | HU169383B (cs) |
| IE (1) | IE40180B1 (cs) |
| IL (1) | IL45589A (cs) |
| LU (1) | LU70998A1 (cs) |
| NL (1) | NL7411746A (cs) |
| NO (1) | NO743433L (cs) |
| SE (1) | SE429405B (cs) |
| ZA (1) | ZA745571B (cs) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6042209B2 (ja) * | 1974-05-31 | 1985-09-20 | 北里研究所（社団法人） | インフルエンザウイルスの新鮮分離株を発育鶏卵へ短期間で順化させる方法 |
| US4318903A (en) * | 1978-07-12 | 1982-03-09 | Smithkline-Rit | Live influenza virus vaccine and the preparation thereof |
| US4278662A (en) * | 1979-10-16 | 1981-07-14 | Smith Kline - Rit | Attenuated influenza type A virus vaccine |
| JPS59163313A (ja) * | 1983-03-09 | 1984-09-14 | Teijin Ltd | 経鼻投与用ペプチドホルモン類組成物 |
| US4783411A (en) * | 1984-10-22 | 1988-11-08 | Janis Gabliks | Influenza-A virus vaccine from fish cell cultures |
| NZ224422A (en) * | 1987-05-05 | 1990-11-27 | Molecular Eng Ass | Composition adapted for intranasal immunisation against viral infection comprising a glycoprotein complexed with a lipid |
| US7678087B2 (en) * | 1999-09-29 | 2010-03-16 | Heska Corporation | Equine intranasal delivery system |
| US6398774B1 (en) | 1999-09-29 | 2002-06-04 | Heska Corporation | Intranasal delivery system |
| EP2411049B1 (en) | 2009-03-27 | 2020-01-15 | Academia Sinica | Methods and compositions for immunization against virus |
| TWI537385B (zh) | 2010-11-04 | 2016-06-11 | 中央研究院 | 產生具簡單醣基化之表面蛋白質之病毒顆粒的方法 |
-
1973
- 1973-09-27 US US05/401,335 patent/US3953592A/en not_active Expired - Lifetime
-
1974
- 1974-08-28 CH CH1173374A patent/CH595447A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-08-29 CA CA208,125A patent/CA1030450A/en not_active Expired
- 1974-08-30 ZA ZA00745571A patent/ZA745571B/xx unknown
- 1974-09-04 IL IL45589A patent/IL45589A/en unknown
- 1974-09-04 NL NL7411746A patent/NL7411746A/xx not_active Application Discontinuation
- 1974-09-13 FR FR7431029A patent/FR2245376B1/fr not_active Expired
- 1974-09-13 BE BE148474A patent/BE819865A/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-09-21 JP JP49109440A patent/JPS5058223A/ja active Pending
- 1974-09-24 CS CS746552A patent/CS203080B2/cs unknown
- 1974-09-24 NO NO743433A patent/NO743433L/no unknown
- 1974-09-25 DE DE19742445819 patent/DE2445819A1/de not_active Ceased
- 1974-09-25 FI FI2787/74A patent/FI278774A/fi unknown
- 1974-09-25 LU LU70998A patent/LU70998A1/xx unknown
- 1974-09-26 SE SE7412113A patent/SE429405B/sv unknown
- 1974-09-26 HU HURE565A patent/HU169383B/hu unknown
- 1974-09-26 IE IE1994/74A patent/IE40180B1/xx unknown
- 1974-09-26 AT AT776074A patent/AT331978B/de active
- 1974-09-26 GB GB4184974A patent/GB1461188A/en not_active Expired
- 1974-09-26 ES ES430415A patent/ES430415A1/es not_active Expired
- 1974-09-26 DK DK508274A patent/DK508274A/da unknown
- 1974-09-26 DD DD181344A patent/DD114966A5/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO743433L (cs) | 1975-04-28 |
| LU70998A1 (cs) | 1975-03-06 |
| SE7412113L (cs) | 1975-04-01 |
| SE429405B (sv) | 1983-09-05 |
| ATA776074A (de) | 1975-12-15 |
| IE40180L (en) | 1975-03-27 |
| FR2245376B1 (cs) | 1978-07-28 |
| DD114966A5 (cs) | 1975-09-05 |
| ES430415A1 (es) | 1977-02-01 |
| CA1030450A (en) | 1978-05-02 |
| US3953592A (en) | 1976-04-27 |
| GB1461188A (en) | 1977-01-13 |
| HU169383B (cs) | 1976-11-28 |
| DE2445819A1 (de) | 1975-04-10 |
| DK508274A (cs) | 1975-06-02 |
| AU7330674A (en) | 1976-03-18 |
| IL45589A (en) | 1977-05-31 |
| ZA745571B (en) | 1975-09-24 |
| IE40180B1 (en) | 1979-03-28 |
| BE819865A (fr) | 1975-03-13 |
| AT331978B (de) | 1976-09-10 |
| FI278774A (cs) | 1975-03-28 |
| FR2245376A1 (cs) | 1975-04-25 |
| CH595447A5 (cs) | 1978-02-15 |
| NL7411746A (nl) | 1975-04-02 |
| IL45589A0 (en) | 1974-11-29 |
| JPS5058223A (cs) | 1975-05-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6635246B1 (en) | Inactivated influenza virus vaccine for nasal or oral application | |
| Reynolds et al. | Protective immunity against Newcastle disease: the role of antibodies specific to Newcastle disease virus polypeptides | |
| JP2849632B2 (ja) | ワクチン製剤 | |
| US10905756B2 (en) | Bivalent swine influenza virus vaccine | |
| US4693893A (en) | Vaccines for equine influenza | |
| Webster et al. | Immunity to Mexican H5N2 avian influenza viruses induced by a fowl pox-H5 recombinant | |
| Pensaert et al. | Vaccination of chickens against a Belgian nephropathogenic strain of infectious bronchitis virus B1648 using attenuated homologous and heterologous strains | |
| Patnayak et al. | Experimental and field evaluation of a live vaccine against avian pneumovirus | |
| Wareing et al. | Immunogenic and isotype‐specific responses to russian and US cold‐adapted influenza a vaccine donor strains A/Leningrad/134/17/57, A/Leningrad/134/47/57, and A/Ann Arbor/6/60 (H2N2) in mice | |
| CS203080B2 (en) | Method of preparing the imping agent against the influenza,containing the weakened h3 n2 strain of inflenza virus | |
| Greenbaum et al. | Mucosal [SIgA] and serum [IgG] immunologic responses in the community after a single intra-nasal immunization with a new inactivated trivalent influenza vaccine | |
| Cursiefen et al. | Evaluation of a vaccine against infectious bursal disease in field trials | |
| Hofstad | Immunity following aerosol exposure to high-embryo-passage avian infectious bronchitis virus | |
| Webster et al. | Vaccination as a strategy to reduce the emergence of amantadine-and rimantadine-resistant strains of A/Chick/Pennsylvania/83 (H5N2) influenza virus | |
| Isaka et al. | Protective effect of nasal immunization of influenza virus hemagglutinin with recombinant cholera toxin B subunit as a mucosal adjuvant in mice | |
| Daly et al. | Equine influenza vaccine containing older H3N8 strains offers protection against A/eq/South Africa/4/03 (H3N8) strain in a short‐term vaccine efficacy study | |
| CA1152895A (en) | Process for the preparation of novel influenza virus strains and influenza virus vaccines containing them | |
| CN101524537A (zh) | 流感口服含片疫苗、流感口服缓释疫苗以及二者制备方法 | |
| TW200927928A (en) | Inactivated influenza vaccine | |
| Avtushenko et al. | Clinical and immunological characteristics of the emulsion form of inactivated influenza vaccine delivered by oral immunization | |
| US3962423A (en) | Live influenza type B virus vaccines and preparation thereof | |
| Webster et al. | Efficacy of equine influenza vaccines for protection against A/Equine/Jilin/89 (H3N8)—a new equine influenza virus | |
| KR101669142B1 (ko) | 안약형 백신의 신규 아쥬반트 | |
| KR101626798B1 (ko) | 신규한 h3n2 혈청형의 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 백신 조성물 | |
| JP4785531B2 (ja) | マーカーワクチンとしてのニューカッスル病ウイルスのエスケープミュータント |