CN1960738A - 抗菌性组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于利用食物预防感染。作为候补食物，本发明人等着眼于酸性流质饮食，该酸性流质饮食由于在具有抗菌活性的流质饮食中含有发酵乳制品作为蛋白质来源而呈酸性。对于该酸性流质饮食的抗菌性，比较研究了原料发酵乳制品和中性流质饮食的抗菌性。虽然已知酸乳酪等发酵乳具有抗菌作用，但令人预想不到的是，对于MRSA等公共卫生上重要的革兰氏阳性菌，该酸性流质饮食显示了比原料发酵乳制品更强的抗菌作用。

Description

抗菌性组合物
技术领域
本发明涉及具有抗菌活性的组合物。
背景技术
流质饮食在医院或养老机构等中被广泛使用，用于经口营养摄取困难的情况或者有吞咽障碍的情况等。流质饮食经由从鼻腔、PEG(经皮内窥镜下胃造口术)等***的导管、管被注入到体内，但一般来说，流质饮食利用者是高龄者或具有某种疾病的患者，免疫力多低下，容易感染病原菌。
在这种易感染者多的机构中，一旦感染发生，有时往往通过医务人员等发展为院内感染·机构内感染。虽然对防止院内感染对策的认识有所提高，但由于高龄者的增加、耐性菌的出现等院内感染的问题越来越多。国内的院内感染菌在1970年代以前以绿脓杆菌为主，但从1980年以后MRSA开始占据院内感染菌的首位。由于MSRA对抗生素显示抵抗性，因此是特别需要对策的病原菌。
如果流质饮食具有抗菌作用，则可成为易感染者的防感染手段之一，但到目前为止，还没有关于流质饮食的抗菌作用的报告。
非专利文献1：Goepfert，J.M.，Chung，K.C.，Behavior of salmonellae insliced luncheon meats，Appl Microbiol，19，190-192，1970
非专利文献2：中江悦郎著、乳·肉·蛋的科学、弘学出版、p132-137、1996
非专利文献3：Kawai Y.，Saito，T.，Kitazawa，H.，and Itoh T.，Biosci.Biotech.Biochem.62，22438-40，1998
非专利文献4：Shah，N.P.：Some beneficial effects ofprobiotic bacteria，Bioscience Microflora，19，2，99-106，2000
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的课题在于提供可成为防感染手段的具有抗菌活性的组合物。
用于解决课题的方法
为了解决上述课题，本发明人等着眼于酸性流质饮食。通常来说流质饮食被调制为中性，但本发明人等所着眼的酸性流质饮食由于含有乳发酵制品作为蛋白质来源，因此呈酸性。本发明人等在研究酸性流质饮食的抗菌作用时，对大肠杆菌和绿脓杆菌等革兰氏阴性菌显示了优异的抗菌性。进而，在研究对革兰氏阳性菌的效果时，惊异地发现：该酸性流质饮食对革兰氏阳性菌显示了较作为原料的乳发酵制品更强的抗菌作用。
众所周知微生物不耐酸性环境。酸对于微生物繁殖的阻碍作用依赖于氢离子浓度，在相同pH的情况下，乳酸或乙酸等有机酸较盐酸或硫酸等无机酸显示了更强的抗菌作用。据报告，为沙门氏杆菌时，在乙酸或丙酸中可繁殖的最低pH为pH5.4，在乳酸中为pH4.4(非专利文献1)。
还已知酸乳酪等发酵乳具有抗菌作用。作为乳酸菌产生的抗菌性物质，除了乳酸之外，还可以举出复制的少量挥发性脂肪酸(乙酸、甲酸)、过氧化氢、β-羟基丙醛(ロイテリン)、2-吡咯烷酮-5-羧酸等一组低分子量化合物(非专利文献2)。已知通过乳酸菌产生的菌素包括乳酸乳球菌乳亚种产生的乳酸链球菌素、加氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)LA-39产生的加氏菌素A等(非专利文献3)。已知乳酸菌所具有的益生菌效果如下：对病原菌附着到肠上皮具有抑制效果、通过产生抗菌物质对感染症具有治疗·预防效果、通过调整肠内环境或活化巨噬细胞对宿主免疫机能具有刺激效果、对腹泻·便秘具有预防效果(非专利文献4)。
但是即便具有上述公知的知识，使用发酵乳制品调制的组合物较原料具有更显著抗菌活性还是完全出乎人意料之外。即，本发明涉及具有抗菌作用的组合物，具体如下所述。
(1)一种抗菌性组合物，该组合物是使用发酵乳制品调制的组合物；含有糖质、蛋白质和脂质，其中能量比为糖质50-70％、蛋白质4-25％、脂质20-30％；且pH值为4.6以下。
(2)上述(1)的抗菌性组合物，其中该发酵乳制品为发酵乳和/或天然乳酪。
(3)上述(1)或(2)的抗菌性组合物，其中100ml该组合物中的乳酸量为200mg以上。
(4)上述(1)或(2)的抗菌性组合物，其中100ml该组合物中的乳酸量为300mg以上。
(5)上述(1)-(4)中任一项的抗菌性组合物，该组合物包含表1、表3或表5中任一表的混合组成。
(6)一种抗菌性组合物的制造方法，其特征在于：使用发酵乳制品作为原料，在含有糖质、蛋白质、脂质、维生素类和矿物类的组合物中，预先溶解该发酵制品，添加稳定剂后，与其他原料混合，均匀化，灭菌。
(7)上述(6)的抗菌性组合物的制造方法，其中该发酵乳制品为发酵乳和/或天然乳酪。
(8)上述(6)或(7)的抗菌性组合物的制造方法，其特征在于：按照来自于该发酵乳制品的蛋白质为该组合物中蛋白质的30％重量以上的比例进行调制。
(9)上述(6)或(7)的抗菌性组合物的制造方法，其特征在于：按照来自于该发酵乳制品的蛋白质为该组合物中蛋白质的70％重量以上的比例进行调制。
附图简述
[图1]为显示在酸性流质饮食、中性流质饮食和发酵乳调制液中添加大肠杆菌、绿脓杆菌，从开始培养3、6、24小时后，采取的每1ml样品中的活菌数的图。
[图2]为显示在酸性流质饮食、中性流质饮食和发酵乳调制液中添加虫牙菌、金黄色葡萄球菌、MRSA，从开始培养3、6、24小时后，采取的每1ml样品中的活菌数的图。
[图3]为显示在中性流质饮食中添加乳酸、乙酸、柠檬酸将pH值调节到4后的样品中添加大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、MRSA，从开始培养3、6、24小时后，采取的每1ml样品中的活菌数的图。
[图4]为显示在中性流质饮食中添加0.125、0.25、0.5、1ml乳酸将pH值调节到4-6.1后的样品中添加大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、MRSA，从开始培养3、6、24小时后，采取的每1ml样品中的活菌数的图。
[图5]为显示在酸性流质饮食、中性流质饮食和发酵乳调制液中添加幽门螺杆菌或艰难梭菌，从开始培养3、6、24小时后，采取的每1ml样品中的活菌数的图。
[图6]为显示在中性流质饮食中添加0.125、1ml乳酸分别将pH值调节到4或6.1后的样品中添加艰难梭菌，从开始培养3、6、24小时后，采取的每1ml样品中的活菌数的图。
[图7]为显示在酸性流质饮食、酸性流质饮食2、中性流质饮食和发酵乳调制液中添加MRSA或艰难梭菌，从开始培养3、6、24小时后，采取的每1ml样品中的活菌数的图。
实施发明的最佳方式
本发明提供抗菌性组合物(以下，本发明的组合物)。本发明人等确认了酸性流质饮食的抗菌作用，特别是发现了对革兰氏阳性菌优异的抗菌作用，并以此为基础。本发明的组合物显示酸性。优选pH值为4.6以下。更优选pH值小于4.2，最优选pH值小于4.0。
本发明的组合物含有糖质、蛋白质、脂质、维生素类和矿物类。在本发明的组合物中可使用的糖质只要是可食用则没有限制，例如可以举出：蜂蜜、糊精、蔗糖、巴糖、葡萄糖、砂糖、果糖、水糖蜜、糖醇(山梨糖醇、木糖醇、麦芽糖醇等)等。在本发明的组合物中可使用的蛋白质只要是可食用则没有限制，例如可以举出：酪蛋白、乳清蛋白质等来自奶的蛋白质；大豆蛋白质；这些蛋白质通过来自动物的胰蛋白酶、胃蛋白酶等酶和中性酶、碱性酶的水解产物。在本发明的组合物中可包含的脂质只要是可食用则没有限制。例如除了含有单价饱和脂肪酸、多价不饱和脂肪酸的向日葵油、菜籽油、橄榄油、红花油之外，还可以举出玉米油、大豆油、棕榈油、紫苏子油、亚麻子油、苏紫油、月见草油、棕榈核油、椰子油等各种来自植物的油脂，中链脂肪酸，EPA，DHA，来自大豆的磷脂质，来自奶的磷脂质等，但优选含有1种以上来自植物的油脂。另外，在本发明中，在油脂的脂肪酸组成中以10％以上、优选20％以上、更优选25％以上的比例含有具有2个以上双键的多价不饱和脂肪酸。对在本发明的组合物中可含有的维生素类没有特别限定，可以是公知的维生素类中的任一种。在本发明的组合物中可含有的矿物类，只要是通常添加在食品中的物质即可，可以是任一种，例如可以含有磷酸钾、碳酸钾、氯化钾、氯化钠、乳酸钙、葡萄糖酸钙、泛酸钙、酪蛋白酸钙、氯化镁、柠檬酸、硫酸亚铁、碳酸氢钠、焦磷酸钠、抗坏血酸钠。在糖质、蛋白质、脂质、维生素类和矿物类中均可以含有其他成分，只要是维持组合物的抗菌性，则不限定于上述具体例。
本发明的组合物按照能量比为糖质50-70％、蛋白质4-25％、脂质20-30％含有上述糖质、蛋白质、脂质。计算能量比时，食物纤维不包括在糖质中。能量比可如下求得。
蛋白质能量比＝蛋白质(g)×4(kcal/g)÷总能量(kcal)×100
脂质能量比＝脂质量(g)×9(kcal/g)÷总能量(kcal)×100
糖质能量比＝糖质(g)×4(kcal/g)÷总能量(kcal)×100
或者糖质能量比＝{总能量(kcal)-(蛋白质能量(kcal)+脂质能量(kcal)+食物纤维能量(kcal))÷总能量(kcal)×100
食物纤维的能量可以根据日本食品标准成分表(日本国大藏省印刷局发行)或能量换算系数(平成13年厚生劳动省告示第98号)进行计算。另外，糖质量、蛋白质量、脂质量的测定可以利用本领域技术人员所公知的方法进行。优选按照日本食品标准成分表的记载进行。食物纤维量的测定可以通过将上述日本食品标准成分表所记载的プロスキ-变法(酶-重量法)或HPLC法组合的方法(AOAC OfficialMethods of Analysis(2002))进行。
本发明组合物的优选方式为100ml该组合物中的乳酸量为200mg以上，更优选的方式为100ml该组合物中的乳酸量为300mg以上。乳酸的定量可以利用酶法、HPLC法等本领域技术人员所公知的方法进行。另外，可以根据记载了有机酸定量法的文献进行：J Nutr.，Jan，124(1)，52-60，1994年“半乳糖苷蔗糖和木糖基果糖苷改变消化量度和盲肠有机酸的浓度在含有胆固醇和胆酸的大鼠饲料中(Galactosylsucrose and xylosylfructoside alter digestive tract size andconcentrations of cecal organic acids in rats fed diets containingcholesterol and cholic acid)”。
本发明的组合物使用发酵乳制品进行调制。本发明中的发酵乳制品是指使用乳酸菌等促酵物使1种或2种以上乳原料组合而调制的液状乳进行发酵的所有制品，所述乳原料包括：牛奶、水牛奶、山羊奶、羊奶、马奶等家畜奶和/或它们的部分脱脂乳、脱脂乳、还原全乳、还原脱脂乳、还原部分脱脂乳、黄油、奶油等。例如，天然乳酪、酸乳酪、发酵乳、乳清、乳清酪包含在本发明的发酵乳制品中。另外，本发明的乳酪是指利用乳酸菌使奶、脱奶油乳或奶油发酵，或者从在奶、脱奶油乳或奶油中加入酶所得的凝乳中除去乳清后的物质，无论是否进行了固体化或熟成。用于制造发酵乳制品的促酵物，主要可以使用保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌，但并不限定于此，例如可以使用乳链球菌、乳酪链球菌、醋酸乳酸双重链球菌、屎肠球菌、粪肠杆菌(Enterococcus fecalis)、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、鼠乳杆菌、路氏乳杆菌、短乳杆菌、加氏乳杆菌、长双歧杆菌、双岐双岐杆菌、短双歧杆菌等乳酸菌或双岐菌。另外，还可以并用丙酸杆属菌等其他的菌用于制造发酵乳制品。本发明的组合物只要是发酵乳制品即可，可使用任何一种进行调制。优选使用非熟成乳酪或酸乳酪进行调制，更优选使用クワルク(quark)或酸乳酪进行调制。
クワルク为非熟成型(新鲜)乳酪的一种，脂肪含量低，其特征是有爽口的鲜味和酸味。以下说明クワルク的一般制造方法。对脱脂乳进行灭菌。接种0.5-5％的乳酸菌促酵物(主要为保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌)使其发酵。当pH值达到4.6时，形成凝乳。利用クワルク分离器分离乳清，将所得凝乳冷却。クワルク组成的一例为：总固体成份17-19％、蛋白质11-13％、脂肪小于1％、碳水化物2-8％、乳糖小于2％。另外，使用粗制凝乳酶使其凝固也包含在本发明的クワルク中。将属于乳球菌的乳酸乳球菌·酪链球菌和明串珠菌属的菌种的混合培养添加到脱脂乳中，培养，除去乳清，可以得到クワルク。使用刀片将与上述方法同样得到的凝乳切断，一边加热一边分离乳清，得到非熟成乳酪，该非熟成乳酪也可在本发明中使用。
本发明的组合物是通过将上述发酵乳制品和上述糖质、蛋白质、脂质混合，均匀混合来调制。优选按照来自该发酵乳制品的蛋白质占该组合物中的蛋白质的30％重量以上、更优选按照占该组合物中的蛋白质的70％重量以上的比例进行调制。当将本发明的组合物作为流质饮食进行调制时，优选按照每1ml为0.7-2kcal进行调制。另外，在混合时还可以添加维生素类或矿物类、和/或食物纤维。食物纤维分为水溶性食物纤维和不溶性食物纤维，可以使用两者中的任一种。水溶性食物纤维可以包含：果胶(原果胶、果胶酯酸、果胶酸)、瓜尔胶水解物、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖、サイリウム、玉米纤维、藻酸、藻酸分解物、角叉菜胶、难消化性糊精等。不溶性食物纤维可以举出：结晶纤维素、甜菜纤维、小麦麦糠等。可优选使用果胶、瓜尔胶水解物、难消化性糊精。根据情况还可以添加香料或其他混合物。
混合后填充到容器中，根据需要实施加热灭菌处理，可以制成流质饮食或经肠营养剂。由于本发明的抗革兰氏阳性菌组合物为酸性，因此加热处理可在较通常更为缓和的条件下进行。例如，中性流质饮食的加热灭菌处理为高压灭菌条件120-130℃、20-40分钟，间接灭菌条件140-145℃、4-10秒时，本发明组合物可在80-90℃下进行15-30分钟的高压灭菌或者在95-110℃下进行20-60秒的间接灭菌。由于缓和的灭菌条件，可优化口味或还可混合不耐热的成分。另外，还可以利用琼脂或明胶将本发明的组合物制成凝胶状、或通过喷雾干燥等将本发明的组合物制成颗粒状食品·药品、或还可制成固体的食品·药品。
本发明的组合物对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌的双方都具有抗菌效果。特别是对革兰氏阳性菌发挥了优异的效果。乳酸菌发酵物的抗菌活性为通常所知，但本发明的组合物对于革兰氏阳性菌显示了较作为原料的发酵乳制品更为优异的抗菌效果。对于革兰氏阳性菌的优异抗菌效果是通过将发酵乳制品与糖质、蛋白质、脂质等组合，制成本发明组合物而得到的效果。本发明人等首次发现了通过将发酵乳制品加工成本发明的组合物可得到所述的效果。如实施例所示，本发明人等确认了金黄色葡萄球菌、MRSA、虫牙菌、艰难梭菌的上述效果。对其他的革兰氏阳性菌，例如链球菌(链球菌属)、肠球菌(肠球菌属)、棒状杆菌属、杆菌、肉毒杆菌等，也可期待其抗菌性。本发明组合物的特征在于具有上述的抗菌活性，在用实施例的方法对金黄色葡萄球菌、MRSA、虫牙菌、艰难梭菌的抗菌活性进行测定时，优选具有培养24小时后的活菌数为2.3×102CFU(菌落形成单位)/ml以下的抗菌活性，最优选具有培养24小时后的菌落数为小于10的抗菌活性。
本发明的组合物可作为具有抗菌效果、特别是具有抗革兰氏阳性菌效果的流质饮食或经肠营养剂利用。由于流质饮食或经肠营养剂本身具有抗菌效果，因此可以不仅用作单纯的食品，还可以预防感染为目的进行使用。作为附加可预防感染、具有抗菌活性、或对革兰氏阳性菌具有优异的抗菌活性等的食品，可用作例如特定保健用食品、营养功能食品等保健功能食品。在高龄者或医院入院患者等多的机构中，这样的食品可成为院内感染·机构内感染的有效且安全的预防措施。还可用作针对婴儿的抗菌性婴儿食品、针对普通人的抗菌性营养食品，进而还可考虑用作具有控制肠道功能的营养辅助药品或用于预防虫牙的食品。
应说明的是，本说明书中所引用的全部在先技术文献都作为参考纳入在本说明书中。
实施例
以下，根据实施例更具体地说明本发明。但本发明并不限定于下述实施例。
[实施例1]酸性流质饮食抗菌作用的研究(1)
研究了酸性流质饮食对病原菌的抗菌作用。使用大肠杆菌IFO3972(大肠菌)、金黄色葡萄球菌金黄亚种IFO 12732(金黄色葡萄球菌)、绿脓杆菌NBRC 13275(绿脓杆菌)、金黄色葡萄球菌11D 1677(MRSA)、变异链球菌IFO13955(虫牙菌)作为试验菌。菌液如下调制：即虫牙菌使用Trypto Soy(トリプトソイ)琼脂培养基(荣研化学公司生产)、其他的试验菌使用普通琼脂培养基(荣研化学公司生产)进行培养，然后将所得菌体悬浮在灭菌生理盐水中，按照每1ml的菌数达到约108-109。酸性流质饮食使用了按照表1所示混合而调制的酸性流质饮食，对照使用了表2所示组成的中性流质饮食(メイバランス、明治乳业(株))和发酵乳调制液。发酵乳调制液如下调制：即在クワルク(发酵乳制品)中添加无菌蒸馏水，调制成与按照表1所示混合而调制的上述酸性流质饮食中的クワルク浓度(33g/100ml)相同的浓度。在100℃下进行10分钟的热处理，将乳酸菌杀死后使用。应说明的是，クワルク制造方法如下：首先，相对于脱脂乳接种1％的乳酸菌促酵物(保加利亚乳酸杆菌和嗜热链球菌的混合促酵物)，在35℃下发酵16小时。通过将所得凝乳放在クワルク分离器中，分离乳清，得到蛋白质约13％、脂质0.3％、糖质约5％、总固体成份约19％的クワルク。另外，调节油脂含有棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸等脂肪酸，脂肪酸组成中，具有双键的脂肪酸的比例为25％，n-6/n-3为7.4％。
表1
  原料   混合量(100ml)
  发酵乳制品   33.4g
  蜂蜜   8g
  糊精   6.1g
  蔗糖   1g
  难消化性糊精   0.61g
  果胶   0.75g
  调节油脂   2.6g
  大豆卵磷脂   0.13g
在100ml酸性流质饮食或对照中，添加1ml大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、MRSA或虫牙菌，在37℃下进行培养。培养开始3、6、24小时后采样，用琼脂培养基培养，测定活菌数。活菌数的测定如下进行：利用SCDLP培养基(日本制药公司生产)适当稀释样品，通过使用有SCDLPA培养基(日本制药公司生产)的倾注平皿培养法，在35℃下培养2天，计测发育的菌落数。对照使用了灭菌生理盐水。
结果如图1、2所示。酸性流质饮食对每一菌种的增殖都显示抑制效果，但对各菌种的抗菌效果是出乎意外的有趣的效果。在发酵乳调制液中培养的大肠杆菌的活菌数(菌落数)在开始培养时为20,000,000、培养3小时后为8,000,000、培养6小时后为2,500,000、培养24小时后为检测限以下，与此相对，而在酸性流质饮食中培养的大肠杆菌的活菌数在开始培养时为20,000,000、培养3小时后为3,400,000、培养6小时后为83,000、培养24小时后为检测限以下(在本实施例中，检测限以下是指活菌数小于10。以下相同)。在发酵乳调制液中培养的绿脓杆菌的活菌数(菌落数)在开始培养时为2,000,000、培养3小时后和6小时后为检测限以下，与此相对，而在酸性流质饮食中培养的绿脓杆菌的活菌数在开始培养时为2,000,000、培养3小时后和6小时后为检测限以下。即，酸性流质饮食对于革兰氏阴性菌的大肠杆菌、绿脓杆菌的增殖抑制作用与发酵乳调制液为同等水平。由此认为酸性流质饮食对上述各菌的抗菌作用主要是来自发酵乳制品成份的作用。在中性流质饮食中，各菌的增殖随着培养时间被促进(图1)。另外，还研究了市售的其他中性流质饮食的抗菌作用，但未发现与メイバランス(Meibalance)同样的抗菌作用(数据未显示)。另一方面，革兰氏阳性菌的金黄色葡萄球菌、MRSA、虫牙菌的结果，显示出酸性流质饮食的增殖抑制效果显著强于发酵乳调制液的效果(图2)。在发酵乳调制液中培养的金黄色葡萄球菌(菌落数)的活菌数在开始培养时为18,000,000、培养3小时后为7,500,000、培养6小时后为1,000,000，与此相对，而在酸性流质饮食中培养的金黄色葡萄球菌的活菌数在开始培养时为18,000,000、培养3小时后为12,000,000、培养6小时后为2,100,000、培养24小时后在检测限以下。在发酵乳调制液中培养的虫牙菌(菌落数)在开始培养时为9,000,000、培养3小时后为2,900,000、培养6小时后为400,000、培养24小时后为1,300，与此相对，在酸性流质饮食中培养的虫牙菌在开始培养时为9,000,000、培养3小时后为430,000、早在培养6小时后即达到检测限以下。这表明：酸性流质饮食不仅对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌均具有抗菌作用，而且特别是对革兰氏阳性菌具有大大强于原料发酵乳制品的抗菌作用。
[实施例2]有机酸抗菌作用的研究
由于确认了酸性流质饮食的抗菌作用，因此对酸性流质饮食的成分组成进行研究。中性流质饮食、酸性流质饮食、发酵乳调制液的组成如表2所示。中性流质饮食中含有用于调节pH值的柠檬酸，但几乎不含其他有机酸。发酵乳调制液中含有405.1mg/100ml由乳酸发酵产生的乳酸。酸性流质饮食中含有的乳酸约为发酵乳调制液的2倍，这是由于为了确保流质饮食中所必需的钙量而添加了乳酸钙。在酸性流质饮食和发酵乳调制液中，含有多量柠檬酸、乙酸作为乳酸以外的主要有机酸(表2)。
表2
  成分   中性流质饮食   酸性流质饮食   发酵乳调制液   单位(100ml中)
  蛋白质   4.0   4.0   4.0   g
  般组成   脂质   2.8   2.8   0.0   g
  碳水化合物   15.7   16.1   1.6   g
  灰分   0.8   0.7   0.3   g
  卡路里   100.0   100.0   22.4   Kcal
  有机酸   乳酸   0.0   838.8   405.1   mg
  乙酸   13   8.5   53   mg
  柠檬酸   126.2   172.9   64.0   mg
  甲酸   1.9   1.9   0.4   mg
研究了酸性流质饮食和发酵乳制品中所含的主要有机酸的抗菌作用。试验菌、菌液的调制与上述的研究酸性流质饮食的抗菌作用时相同。作为被测样品，将1ml乳酸、2.3ml乙酸或1g柠檬酸中的任一种(和光纯药工业(株))添加在中性流质饮食中，且将pH值调节到4。通过改变添加到中性流质饮食中的乳酸的量调制样品，使用该样品对酸性流质饮食的主要有机酸—乳酸的抗菌作用进行了研究。
在中性流质饮食中添加了与表2等量的发酵乳调制液所含有机酸(乳酸：405.1mg、乙酸：5.3mg、柠檬酸：34mg、甲酸：0.4mg)的被测样品的pH值为5.1，对任何菌种几乎都不显示抗菌作用。在将乳酸、乙酸分别单独添加到中性流质饮食且将pH值调节到4的样品中，可观察到对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、MRSA的抗菌作用(图3)。添加柠檬酸的样品对上述4种菌的抗菌作用，弱于相同pH值的添加乳酸或乙酸的样品(图3)。另一方面，在中性流质饮食中单独添加作为酸性流质饮食和发酵乳调制液主要有机酸的乳酸的样品中，添加0.5ml(pH4.8)时几乎未见抗菌作用，但将pH值调节到4时，对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌显示了显著的抗菌作用(图4)。
对MRSA的抗菌作用具有独特的倾向。即，各有机酸对于MRSA的抗菌作用，乙酸最强，其次为柠檬酸、乳酸的顺序，作为发酵乳制品主要有机酸的乳酸的抗菌作用，在所研究的有机酸中效果最弱。由于酸性流质饮食对MRSA的抗菌作用比发酵乳调制液显著，因此认为酸性流质饮食对MRSA的抗菌作用与发酵乳制品成份以外的成分有关。
[实施例3]酸性流质饮食抗菌作用的研究(2)
如上所述，确认了酸性流质饮食对各种细菌的抗菌作用，进而研究了对幽门螺杆菌ATCC43504(幽门螺杆菌)和艰难梭菌JCM1296(艰难梭菌)的抗菌作用。幽门螺杆菌为革兰氏阴性菌，艰难梭菌为革兰氏阳性菌。对幽门螺杆菌抗菌作用的研究如下进行：首先，使用羊血液琼脂培养基(荣研化学公司生产)，在35℃下微需氧培养3天，然后悬浮在灭菌生理盐水中，按照每1ml的菌数达到约107-108进行调制，制成菌液。在4.5ml酸性流质饮食和作为对照的灭菌生理盐水、4.5ml添加有5％马血清的布鲁氏杆菌肉汤中，添加0.5ml幽门螺杆菌，在35℃下微需氧条件下进行培养。培养开始后的3，6，24小时后采样，测定活菌数。活菌数的测定如下进行：用灭菌生理盐水适当稀释样品，涂抹在羊血液琼脂培养基(荣研化学公司生产)上。在35℃下微需氧条件下培养5天，然后计测发育的菌落数。另外，对艰难梭菌抗菌作用的研究如下进行：使用GAM琼脂培养基(日本制药公司生产)，在37℃下厌氧条件下培养艰难梭菌15天，然后悬浮在灭菌生理盐水中，按照每1ml的菌数达到约108-109进行调制，制成菌液。在100ml的酸性流质饮食和对照中添加1ml菌液，在37℃下厌氧条件下进行培养。培养开始后的3，6，24小时后采样，测定活菌数(厌氧性细菌数)。艰难梭菌活菌数的测定如下进行：用SCDLP培养基(日本制药公司生产)适当稀释样品，通过使用有GAM琼脂培养基(日本制药公司生产)的倾注平皿培养法，在35℃下厌氧条件下培养5-6天，然后计测发育的菌落数，得到厌氧性细菌数。
结果如图5所示。酸性流质饮食对革兰氏阴性菌的幽门螺杆菌显示了优异的抗菌活性，其抗菌活性的程度与发酵乳调制液一致。另一方面，酸性流质饮食对革兰氏阳性菌的艰难梭菌显示了大大高于发酵乳调制液的抗菌活性。这些结果与在上述实施例中所得结果的倾向相同。
进而，与上述实施例2同样，在中性流质饮食中添加乳酸研究对艰难梭菌的抗菌活性时，添加0.125ml乳酸(pH6.1)时几乎未见抗菌活性，但添加1ml乳酸时确认了抗菌作用(图6)。
[实施例4]组成不同的酸性流质饮食抗菌活性的研究
根据表3的混合，调制与上述酸性流质饮食组成不同的酸性流质饮食(以下，称为“酸性流质饮食2”)，研究该酸性流质饮食2对革兰氏阳性菌的抗菌活性。酸性流质饮食2的组成如表4所示。
表3
  原料   混合量(100ml)
  发酵乳制品   22.7g
  乳清蛋白质水解物   1.42g
  巴糖   5.6g
  糊精   5.2g
  麦芽糖糊精   1.9g
  难消化性糊精   1.04g
  果胶   0.45g
  调节油脂   3.0g
  磷脂质   0.1g
  大豆卵磷脂   0.16g
表4
  成分  酸性流质饮食2   单位(100ml中)
  一般组成   蛋白质  4.2   g
  脂质  3.1   g
  碳水化合物  14.1   g
  灰分  0.8   g
  卡路里  100.0   Kcal
有机酸   乳酸  405.1   mg
  乙酸  5.3   mg
  柠檬酸  388.0   mg
  甲酸  1.9   mg
通过与上述酸性流质饮食同样的方法实施试验时，在发酵乳调制液中培养的MRSA的活菌数在开始培养时为7,700,000、培养3小时后为4,900,000、培养6小时后为4,600,000、培养24小时后为920,000，与此相对，在酸性流质饮食2中培养的MRSA的活菌数在开始培养时为7,700,000、但早在培养3小时后即变为5,600、培养6小时后为70、培养24小时后为检测限以下。在发酵乳调制液中培养的艰难梭菌的活菌数在开始培养时为9,100,000、培养3小时后为10,000,000、培养6小时后为7,000,000、培养24小时后为220,000，与此相对，在酸性流质饮食2中培养的艰难梭菌的活菌数在开始培养时为12,000,000、培养3小时后为9,300,000、培养6小时后剧减为1,400,000、培养24小时后变为检测限以下。在实施例1的酸性流质饮食中培养艰难梭菌时，也显示了如下的剧减倾向：即培养开始时为9,100,000、培养3小时后为2,400,000、培养6小时后为44,000，在培养24小时后变为检测限以下。如上所述，酸性流质饮食2对MRSA和艰难梭菌的抗菌活性的倾向和程度与在实施例1，2中研究的上述酸性流质饮食大致一致(图7)。
作为其他的酸性流质饮食，按照表5所示的混合调制酸性流质饮食3。本实施例的酸性流质饮食、酸性流质饮食2、酸性流质饮食3的能量比如表6所示。
表5
  原料   混合量(100ml)
  发酵乳制品   15.3g
  蜂蜜   7.5g
  糊精   16g
  蔗糖   1.5g
  难消化性糊精   0.61g
  果胶   0.75g
  调节油脂   2.6g
  大豆卵磷脂   0.13g
表6
  成分  酸性流质饮食1 酸性流质饮食2  酸性流质饮食3  单位
  一般组成   蛋白质  16 17  7  ％
  脂质  24 27  24  ％
  糖质  58 55  67  ％
有机酸   乳酸  838.8 405.1  188.4  mg
  乙酸  8.5 5.3  2.5  mg
  柠檬酸  172.9 388.0  380  mg
  甲酸  1.9 1.9  0.2  mg
产业实用性
本发明提供新型的抗菌组合物。本发明的组合物特别对革兰氏阳性菌的效果高。本发明的组合物通过作为流质饮食或经肠营养剂利用，对于高龄者等易感染者可成为抗生素以外的防感染的手段。由于流质饮食本身具有抗菌作用，因此可以认为是防止经由导管等的院内感染的简便而有效的方法。特别是，如果考虑作为机会感染的代表的原因菌-MRSA等卫生上重要的菌种为革兰氏阳性菌，则作为抗革兰氏阳性菌组合物的本发明组合物的实用性高。另外，由于本发明组合物含有发酵乳制品，因此还可以期待以下乳酸菌所具有的益生菌效果，即对病原菌附着到肠管上皮具有抑制效果、通过产生抗菌物质对感染症具有治疗·预防效果、通过调整肠内环境或活化巨噬细胞对宿主免疫机能具有刺激效果、对腹泻·便秘具有预防效果等。本发明的组合物可以制成口服的抗菌性食品或药品，在营养上和保健卫生上是极为有效的。

Claims (10)

1.一种抗菌性组合物，该组合物是使用发酵乳制品调制的组合物；含有糖质、蛋白质和脂质，其中能量比为糖质50-70％、蛋白质4-25％、脂质20-30％；且pH值为4.6以下。
2.权利要求1的抗菌性组合物，其中该发酵乳制品为发酵乳和/或天然乳酪。
3.权利要求1或2的抗菌性组合物，其中100ml该组合物中的乳酸量为200mg以上。
4.权利要求1或2的抗菌性组合物，其中100ml该组合物中的乳酸量为300mg以上。
5.权利要求1-4中任一项的抗菌性组合物，该组合物含有来自植物的油脂作为脂质。
6.权利要求1-5中任一项的抗菌性组合物，该组合物包含表1、表3或表5中任一表的混合组成。
7.一种抗菌性组合物的制造方法，其特征在于：使用发酵乳制品作为原料，在含有糖质、蛋白质和脂质的组合物中，将该发酵制品与其他原料混合，均匀化，灭菌。
8.权利要求7的抗菌性组合物的制造方法，其中该发酵乳制品为发酵乳和/或天然乳酪。
9.权利要求7或8的抗菌性组合物的制造方法，其特征在于：按照来自于该发酵乳制品的蛋白质为该组合物中蛋白质的30％重量以上的比例进行调制。
10.权利要求7或8的抗菌性组合物的制造方法，其特征在于：按照来自于该发酵乳制品的蛋白质为该组合物中蛋白质的70％重量以上的比例进行调制。
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