CN1914505A - 利用超临界流体色谱分离旋光异构体的方法 - Google Patents

Abstract

利用填充了旋光异构体分离剂的色谱柱进行超临界流体色谱能完成旋光异构体的分离，其中旋光异构体分离剂含有能分离旋光异构体的多糖衍生物，其中使用包含超临界流体的流动相，其中作为填充在色谱柱中用来分离旋光异构体的旋光异构体分离剂，使用含有占旋光异构体分离剂总量的50质量％或50质量％以上的能分离旋光异构体的多糖衍生物的旋光异构体分离剂，从而即使在使用具有多个识别位点的旋光异构体分离剂时，仍能够完成对旋光异构体的优良分离。

Description

利用超临界流体色谱分离旋光异构体的方法

技术领域

本发明涉及利用具有旋光异构体分离剂的色谱柱，通过超临界流体色谱分离旋光异构体的方法，更具体地，涉及利用填充了含有高比例的能分离旋光异构体的多糖衍生物的旋光异构体分离剂的色谱柱，通过超临界流体色谱分离旋光异构体的方法。

背景技术

已经使用多种色谱技术作为从样品中分离想得到的物质的方法。这类色谱技术的一个公知实例就是利用超临界流体作为流动相的超临界流体色谱。超临界流体色谱使用了比一般溶剂具有更大特性变化的被称为超临界流体的液体作为流动相，因此，已经对利用超临界流体色谱来分离、分析、纯化多种被认为难以分离的物质，例如旋光异构体进行了研究。

同时，为了分离旋光异构体，已知一种通过利用填充了旋光异构体分离剂的色谱柱来进行分离的技术，其中旋光异构体分离剂含有能分离旋光异构体的多糖衍生物，例如负载在颗粒载体，例如液相色谱的二氧化硅上的多糖酯衍生物或多糖氨基甲酸酯衍生物(例如，参见WO95/23125)。

在工业应用中，当从旋光异构体混合物，例如外消旋体中分离旋光异构体时，优选具有高含量旋光异构体识别位点(例如用于间歇式多糖衍生物)，能提高待分离的旋光异构体的生产率的旋光异构体分离剂。基于这一思想，将最优选使用识别位点含量尽可能高的旋光异构体分离剂。

利用具有高含量识别位点的旋光异构体分离剂进行一般的高速液相色谱时，旋光异构体从识别位点上的解吸是在流动相，例如有机溶剂或有机溶剂和水的混合物中重复进行的。因此，旋光异构体不能以足够的适合高含量识别位点的速度在识别位点间转移。这样，因为检测到的峰变宽等原因，很难完成有利的分离过程。

发明内容

本发明解决的技术问题

本发明的一个目的是提供一种利用填充了含有能分离旋光异构体的多糖衍生物的旋光异构体分离剂的色谱柱，通过超临界流体色谱分离旋光异构体的方法，即使使用具有高含量识别位点的旋光异构体分离剂，该方法仍能完成良好的分离。

解决问题的方式

本发明是通过超临界流体色谱来分离旋光异构体，其中在超临界流体色谱中利用超临界流体作为流动相，并且使用填充含有多糖衍生物，并且具有足够高含量的多糖衍生物作为识别位点的旋光异构体分离剂的色谱柱。

换句话说，本发明涉及一种从含有旋光异构体混合物的样品中分离旋光异构体的方法(下文有时简称为“分离方法”)，包括：将含有旋光异构体混合物的样品注入流动相中；使含有已注射样品的流动相通过填充了能分离旋光异构体的旋光异构体分离剂的色谱柱，其中，流动相含有作为上述流动相的超临界流体，上述的旋光异构体分离剂包含占旋光异构体分离剂总量的50质量％或50质量％以上的能分离旋光异构体的多糖衍生物。

附图简述

[图1]是显示在本发明中使用的制备性的超临界流体色谱的装置的实例的示意图。

[图2]是在实施例1中，通过利用填充了用于超临界流体色谱的OB珠的色谱柱1，通过对反式茋氧化物的旋光拆分获得的色谱图。

[图3]是在对比实施例1中，通过利用填充了用于超临界流体色谱的负载在OB聚合物上的二氧化硅颗粒的对比色谱柱，通过对反式茋氧化物的旋光拆分获得的色谱图。

[图4]是在实施例2中，通过利用填充了用于超临界流体色谱的OB珠的色谱柱1并且注射了400μg反式茋氧化物，通过旋光拆分获得的色谱图。

[图5]是在实施例2中，通过利用填充了用于超临界流体色谱的OB珠的色谱柱1并且注射了500μg反式茋氧化物，通过旋光拆分获得的色谱图。

[图6]是在实施例2中，利用填充了用于超临界流体色谱的OB珠的色谱柱1并且注射了700μg反式茋氧化物，通过旋光拆分获得的色谱图。

[图7]是在对比实施例2中，利用填充了用于超临界流体色谱的负载在OB聚合物上的二氧化硅颗粒的对比色谱柱并且注射了400μg反式茋氧化物，通过旋光拆分获得的色谱图。

[图8]是在对比实施例2中，利用填充了用于超临界流体色谱的负载在OB聚合物上的二氧化硅颗粒的对比色谱柱并且注射了500μg反式茋氧化物，通过旋光拆分获得的色谱图。

[图9]是在对比实施例2中，利用填充了用于超临界流体色谱的负载在OB聚合物上的二氧化硅颗粒的对比色谱柱并且注射了700μg反式茋氧化物，通过旋光拆分获得的色谱图。

实施本发明的最佳模式

依据本发明，从含有旋光异构体混合物的样品中分离旋光异构体的方法包括：将含有旋光异构体混合物的样品注入流动相中，使含有已注射样品的流动相通过填充了能分离旋光异构体的旋光异构体分离剂的色谱柱，其中，利用含有超临界流体的流动相作为流动相。

流动相并不受特别限制，只要包含超临界流体就可以。在本发明中，超临界流体是指在压力超过临界压力至少一个或两个大气压，温度超过临界温度条件下的气体。可使用的气体的实例包括二氧化碳、氨、二氧化硫、卤化氢、氧化亚氮、硫化氢、甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、乙烯、丙烯、卤代烃和水。从可燃性、可***性、对人体的毒性、易于处理、经济效益等方面考虑，优选二氧化碳。

在本发明中，流动相的实例包括超临界流体，以及含有超临界流体和溶剂的混合溶剂。有机溶剂是与超临界流体混合的溶剂的一个例子。可使用依据作为分离目标物的旋光异构体的种类、旋光异构体分离剂的种类等选择出的已知的有机溶剂。有机溶剂的实例包括低分子醇，例如乙醇和2-丙醇。

在本发明中，利用含有占旋光异构体分离剂总量的50质量％或50质量％以上的多糖衍生物的旋光异构体分离剂作为旋光异构体分离剂。旋光异构体分离剂可单独由多糖衍生物形成，或者由载体和负载在载体上的多糖衍生物形成。

多糖衍生物并不受特别限制，只要能用于分离旋光异构体就可以。这种多糖衍生物的一个例子是含有旋光活性多糖作为骨架的多糖衍生物，其中多糖的至少部分羟基和氨基被作用于样品中的旋光异构体的功能基团所取代。

多糖可以是合成多糖，天然多糖，或天然产物修饰的多糖，也可以是任何旋光活性多糖。但是，优选具有高度规则的连接模式和侧链结构的多糖。

具体的例子包括：β-1，4-葡聚糖(纤维素)；α-1，4-葡聚糖(直链淀粉、支链淀粉)；α-1，6-葡聚糖(右旋糖酐)；β-1，6-葡聚糖(busturan)；β-1，3-葡聚糖(凝乳聚糖、裂裥菌素等)；α-1，3-葡聚糖；β-1，2-葡聚糖(冠瘿多糖)；β-1，4-半乳聚糖；β-1，4-甘露聚糖；α-1，6-甘露聚糖；β-1，2-果聚糖(菊淀粉)；β-2，6-果聚糖(果聚糖)；β-1，4-木聚糖；β-1，3-木聚糖；β-1，4-壳聚糖；α-1，4-N-乙酰壳聚糖(甲壳素)；芽霉菌糖；琼脂糖和海藻酸。也包括含有直链淀粉的淀粉。

在这些多糖中，优选容易获得高纯度多糖的纤维素、直链淀粉、β-1，4-木聚糖、β-1，4-壳聚糖、甲壳素，β-1，4-甘露聚糖、菊淀粉、凝胶多糖，特别优选纤维素和直链淀粉。

多糖聚合程度的平均数(一个分子中吡喃糖环或呋喃糖环的平均数量)为5或5以上，优选为10或10以上。并没有特别确定多糖聚合程度的平均数的上限，但为了生产分离剂时容易处理，多糖聚合程度的平均数的上限优选为1,000或1,000以下。

功能基团是指作用于样品中作为分离目标物的旋光异构体的功能基团。功能基团对旋光异构体的作用并不受特别限制，虽然功能基团的种类会随着作为分离目标物的旋光异构体的种类而变化，但只要是水平足以允许用多糖对旋光异构体进行旋光拆分的作用就可以。作用的例子包括：亲和力相互作用，例如旋光异构体和功能基团之间的氢键、π-π相互作用以及偶极子-偶极子相互作用和抗亲和力相互作用，例如空间位阻。认为当一对旋光异构体靠近多糖衍生物时，通过这种相互作用会调整旋光异构体的方向，而不抑制至少一个旋光异构体靠近多糖衍生物。或者认为这种相互作用会将多糖衍生物本身高度有序的结构调整为有利于不对称识别的形状。

依据作为分离目标物的旋光异构体的种类来选择功能基团。功能基团的例子是具有通过酯键、氨基甲酸乙酯键或醚键连接到多糖上的芳香族基团的基团，其中该芳香族基团可能具有取代基。芳香族基团包括杂环和稠环。芳香族基团可能具有的取代基的例子包括具有大约8个或8个以下碳原子的烷基、卤素基团、氨基和烷氧基。多糖衍生物中功能基团的替换程度和功能基团的位置并不受特别限制，可根据功能基团的种类、多糖的种类等因素进行任意选择。

可以通过已知的方法来制备多糖衍生物。例如，可以通过下列物质的脱水反应来制备多糖衍生物：能与多糖的羟基或氨基反应并且具有功能基团或通过与羟基或氨基反应而形成功能基团的化合物；和多糖。

从实现对各种旋光异构体分离的角度来说，特别优选的多糖衍生物是如WO95/23125中描述的多糖氨基甲酸酯衍生物或多糖氨基甲酸酯衍生物。具体来说，多糖衍生物的例子包括具有直链淀粉作为骨架的多糖衍生物、纤维素三苯甲酸酯、纤维素三(苯氨基甲酸酯)和纤维素三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)。

只由多糖衍生物形成的旋光异构体分离剂，也就是说，含有100质量％多糖衍生物的旋光异构体分离剂由作为结构单元的多糖衍生物形成。只由多糖衍生物形成的旋光异构体分离剂是由化合物，例如通过化学上直接连接多糖衍生物或通过另一种合适的物质制备的聚合物形成。可以通过已知的酯化反应等来形成该化合物。只由多糖衍生物形成的旋光异构体分离剂可以是任何形式，只要色谱柱能接收就可以。本发明中使用的形式包括：颗粒；当接收到色谱管中时整体形成固定相的整体形成的多孔产品。

应注意，当本发明中使用的旋光异构体分离剂是颗粒形式时，颗粒大小优选是1-100μm，更优选是1-75μm，更进一步优选是1-30μm。

可以通过已知的方法来制备只由多糖衍生物形成的旋光异构体分离剂。例如，如日本国家专利公报2783819的说明书所述，可以通过将化合物溶解在溶剂中，然后将如此获得的化合物的溶液滴到化合物不会溶解在其中的正被搅拌的不溶性溶剂中，例如水中，优选含有分散剂，例如阴离子表面活性剂的不溶溶剂中来形成颗粒。可以通过使化合物形成预定形状的多孔体来制备整体形成的产品。这种制备方法的实例涉及将不溶溶剂分散到化合物溶液中，以及蒸馏和替换溶剂，或者当气泡被分散时蒸馏和替换溶剂。

在由载体和负载在载体上的多糖衍生物形成的旋光异构体分离剂(下文也称为“载体型分离剂”)中，载体并不受特别限制，只要能负载多糖衍生物并能在色谱柱中形成固定相就可以。可在色谱中使用的已知的无机和有机载体都可以用作这种载体。从增强旋光异构体分离效率的角度来说，优选的载体是多孔体。

上述载体的实例包括：多孔有机载体，例如聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸盐和他们的衍生物；以及多孔无机载体，例如硅石、矾土、氧化镁、玻璃、高岭土、氧化钛、硅酸盐和羟基磷灰石。

一般利用上述多糖衍生物作为载体型分离剂中的多糖衍生物。通过多糖衍生物和载体之间的化学或物理吸附，以及多糖衍生物和载体之间直接形成或通过其他化合物形成的化学键等作用将多糖衍生物负载到载体上。可以通过已知的方法将多糖衍生物负载到载体上，该方法涉及将载体浸入含有多糖衍生物和另一种需要的化合物的溶液中，使另一种需要的化合物发生反应，蒸馏除去溶液中的溶剂或用其他溶剂替换溶液中的溶剂等。

对于载体型分离剂，一般使用多糖衍生物的负载量占载体型分离剂总量50质量％或50质量％以上的载体型分离剂。负载量小于50质量％可能不能提供足够的旋光异构体生产率。从进一步提高旋光异构体生产率的角度来讲，负载量更优选为60质量％或60质量％以上，更进一步优选为80质量％或80质量％以上。

通过化学吸附，或直接的或通过另一种化合物形成的化学键进一步将多糖衍生物连接到负载在载体上的多糖衍生物上可以调节多糖衍生物的负载量。可以通过例如质量分析；通过观察载体型分离剂的横切面对负载在载体上的多糖衍生物的厚度进行测量；对多糖衍生物或载体的特异性元素进行元素分析等方法来确定多糖衍生物的负载量。

除所使用的色谱柱具有上述的旋光异构体分离剂这一点外，可以按照与通常的超临界流体色谱相同的方式来实施本发明的分离方法。依据旋光异构体分离剂的形式，可以实施与使用已知分离剂相同的方式将旋光异构体分离剂装载或接收到色谱管中。

在下文中描述了本发明的实施例。首先对用于本发明分离方法的制备性的超临界流体色谱装置进行了解释。

如图1所示，制备性的超临界流体色谱的装置包括：充满了高压二氧化碳的作为给气设备的高压气罐1；用于冷却和液化高压二氧化碳的热交换器2；用于递送在热交换器2中产生的二氧化碳的液化气体的泵3；泵5，用于将从溶剂罐4供给的溶剂供给到由泵3递送的液化气体中热交换器6；用于加热液化气体和溶剂的混合溶剂，从而将液化气体变成超临界流体；注射装置7，用于将含有旋光异构体混合物的样品注入作为所制备的超临界流体和溶剂的混合物的流动相中；用于分离注射样品中的旋光异构体的色谱柱8；用于检测通过色谱柱8的流动相中的旋光异构体的检测器9；作为压力调节装置，将从泵3到检测器9之间的***内的压力保持在预定压力的回压调节阀10；多个蒸汽液体分离器11，每一个蒸汽液体分离器的目的是用于使通过回压调节阀10的流动相经受蒸汽液体分离；各自用于储存经受了蒸汽液体分离的液体的罐12；用于另外从经受了蒸汽液体分离的气体中除去液体的纯化装置13；以及用于储存通过纯化装置13从气体中除去的液体的罐14。

高压气罐1、热交换器2、泵3、热交换器6、注射装置7、色谱柱8、检测器9和回压调节阀10被用导管串联起来。通过利用导管将蒸汽液体分离器11与回压调节阀10和纯化装置13平行地连接起来。同时，利用导管将溶剂罐4与泵5连接。泵5被连接导管上，以与泵3连接，并且通过导管将泵与交换器6相连。用导管将每一个蒸汽液体分离器11和每一个罐12连接起来。纯化装置13和罐14也用导管连接起来。

在高压气罐1和热交换器2之间安装用于以预定压力从高压气罐1释放二氧化碳的压力调节阀16。在热交换器2和泵3之间安装用于接收在热交换器2中产生的液化气体的缓冲罐18。另外，色谱柱8位于将色谱柱8温度调节为预定温度的柱恒温箱19中。

在回压调节阀10和每一个蒸汽液体分离器11之间安装了与每一个蒸汽液体分离器11相对应的阀20，这样就可以选择从回压调节阀10供给的流动相的目的地。在每一个蒸汽液体分离器11和纯化装置13之间提供了与每一个蒸汽液体分离器11相对应的单向阀21，以防止气体从纯化装置13那一边回流到每一个蒸汽液体分离器11中。

每个泵3和泵5都是能够递送恒定量的液体的泵。色谱柱8是填充了由多糖衍生物组成的旋光异构体分离剂或载体型分离剂的柱子。回压调节阀10是保持靠近色谱柱8那一侧的压力，即从泵3和泵5到回压调节阀10之间(回压调节阀10的主要一侧)的***压力到预定压力(例如，20MPa)的阀。

制备性的超临界流体色谱的装置进一步包括没有显示出来的控制装置，该装置用于依据来自检测器9的检测结果控制阀20的开放和关闭。除了上述的组成部件外，在制备性的超临界流体色谱装置的合适位点安装了没有显示的阀，例如阀、单向阀、安全阀，各种检测装置，例如压力计、温度计和流量计，外周设备，例如加热器、盐水冷却器和蓄电池。

在制备性的超临界流体色谱装置中，调节压力调节阀16可以将二氧化碳以预定压力(例如4MPa)从高压气罐1供给到热交换器2中。二氧化碳在热交换器2中被冷却和液化。

在热交换器2中产生的二氧化碳液化气体被储存在缓冲罐18中，并由泵3供给到热交换器6中。向供给到热交换器6的液化气体中加入通过泵5从有机溶剂罐4递送的有机溶剂，例如低分子醇，这样液化气体就和有机溶剂混合在一起了。将这种混合溶剂供给到热交换器6中。

热交换器6加热这种混合溶剂，这样混合溶剂中的液化气体就变成了超临界流体。另外，将通过混合超临界流体和溶剂获得的流动相的温度调节为色谱柱8的温度(例如40℃)，其中色谱柱8的温度由柱恒温箱19设定。从注射装置7将作为样品的旋光异构体混合溶液注入到温度已经经过调节的流动相中。

从注射装置7注入的样品被送到色谱柱8中，通过色谱柱8时，样品中的旋光异构体混合物就被分开。

通过检测器9检测通过柱8的流动相中的旋光异构体。通过了检测器9的流动相被送到回压调节阀10。流动相通过回压调节阀10可降低流动相的压力。另一方面，控制装置会依据检测器9的检测结果打开预定的阀20，并关闭其他的阀20。通过了回压调节阀10的流动相被供给到预定的蒸汽液体分离器11中。

在蒸汽液体分离器11中，对供给到分离器的流动相进行蒸汽液体分离。因此，组成超临界流体的大部分二氧化碳以蒸汽相的形式从流动相中被释放出来，含有旋光异构体的有机溶剂以液相被存储在罐12中。当取出旋光异构体时，存储在罐12中的有机溶剂的压力被释放，或者有机溶剂在降低的压力下被另外浓缩，从而将旋光异构体取出。

从流动相释放出来的二氧化碳气体被送到纯化装置13。递送到纯化装置13中的二氧化碳气体在该装置中经受蒸汽液体分离，就象在每一个蒸汽液体分离器11中一样。结果二氧化碳气体和少量处于二氧化碳气体中的有机溶剂被分离开。二氧化碳气体被释放到外界空气中，分离的有机溶剂被储存在罐14中。

然后，依据来自检测器9的检测结果适当开放或关闭每一个阀20，从而将样品中的旋光异构体被分级。应注意利用止回阀21来防止来自纯化装置13的气体回流到每一个蒸汽液体分离器11中或防止来自一个蒸汽液体分离器11的气体流入其他任何一个蒸汽液体分离器11中。

上述的超临界流体色谱利用了装载有包含50质量％或50质量％以上的多糖的旋光异构体分离剂的色谱柱。在通过利用了二氧化碳超临界流体和有机溶剂的混合溶剂作为流动相的超临界流体色谱分离旋光异构体时，旋光异构体分离剂识别位点的含量较高，这样旋光异构体就可以在识别位点之间快速转移。因此使色谱柱每单位体积的分离能力非常高，在短时间内就能清楚地分离大量旋光异构体。在通过从样品中分离旋光异构体来制备旋光异构体的工业生产中，就能够以高生产率制备旋光异构体。

实施例

下面将描述单独由多糖衍生物形成的旋光异构体分离剂的实例，以及装载了这种分离剂的在本发明中用作色谱柱的柱子的实例。

<旋光异构体分离剂的实例1>

将10g纤维素三苯甲酸酯聚合物(下文也称为“OB聚合物”)溶解在含有500ml二氯甲烷和50ml正己醇的混合溶剂中，得到OB聚合物溶液。

同时，将2.5g十二烷基苯磺酸钠(Tokyo Chemical Industry Co.，Ltd.)溶解在1,000ml纯净水中而制备出水溶液。在4.6小时的时间内将OB聚合物溶液滴加到水溶液中(滴加速度：2ml/min)，在滴加过程中保持水溶液在15℃，并以500rpm的速率搅拌溶液。

在滴加过程完成后，继续以相同的速率维持搅拌，并将水溶液的温度调节为40℃，使氮气流动以蒸馏除去二氯甲烷。然后，静置所得到的产物，最后从水溶液中获取OB聚合物颗粒。

将获得的OB聚合物颗粒放入200ml甲醇中，静置。然后，通过倾析除去上清液。重复这一操作数次。

用G4玻璃过滤器过滤收集沉淀在甲醇中的OB聚合物颗粒，然后依次用300ml的水、甲醇以及正己烷和2-丙醇的混合溶剂(下文也简称为“H/I溶剂”，体积比是正己烷(H)/2-丙醇(I)＝9/1)洗涤颗粒，用吸滤器充分抽吸，最终得到OB聚合物颗粒(产率：9.07g，产率百分比：91％)。

将获得的OB聚合物颗粒放入H/I溶剂(体积比：H/I＝9/1)中，然后超声处理30分钟。接下来，让得到的产物先过75μm的筛，然后过30μm的筛，对OB聚合物颗粒进行分级。分级结果显示如下：

分级产物1：＞75μm产率：0.03g(产率百分比：0.3％)

分级产物2：75-30μm产率：＜0.01g(产率百分比：-)

分级产物3：＜30μm产率：9.04g(产率百分比：90％)

将分级产物3放入乙醇中。搅拌得到的全部产物，然后静置30分钟。通过倾析除去上清液，重复这一操作数次，然后利用G4玻璃过滤器过滤就可获得旋光异构体分离剂1。

<色谱柱1的实旋例>

将4.0g旋光异构体分离剂1分散到正己烷中。让获得的分散液过筛(#400)，通过淤浆方法，在100kgf/cm²(9.8MPa)下对不锈钢柱管(管直径：0.46mn，长度：25cm)实施恒定压力填充，最后得到色谱柱1。

<旋光异构体分离剂的实旋例2>

将10g纤维素三(苯基氨基甲酸酯)聚合物(下文也称为“OC聚合物”)溶解在含有500ml二氯甲烷和60ml丙酮的混合溶剂中，得到OC聚合物溶液。

同时，将5.0g十二烷基苯磺酸钠(Tokyo Chemical Industry Co.，Ltd.)溶解在1,000ml纯净水中而制备出水溶液。在4.7小时的时间内将OC聚合物溶液滴加到水溶液中(滴加速度：2ml/min)，滴加过程中保持水溶液在15℃，并以500rpm的速率搅拌溶液。

在滴加过程完成后，继续以相同的速率维持搅拌，并将水溶液的温度调节为40℃，使氮气流动，蒸馏除去二氯甲烷。然后，静置得到的产物，最终从水溶液中获取OC聚合物颗粒。

将获得的OB聚合物颗粒放入100ml纯净水中，静置。然后，通过倾析除去上清液。重复这一操作数次。

用G4玻璃过滤器过滤收集沉淀在纯净水中的OC聚合物颗粒，然后依次用200ml的水、甲醇以及H/I溶剂(体积比：H/I＝9/1)洗涤颗粒，用吸滤器充分抽吸，真空干燥(80℃，3h)，最终得到OC聚合物颗粒(产率：7.46g，产率百分比：75％)。

将获得的OC聚合物颗粒放入H/I溶剂(体积比：H/I＝9/1)中，然后超声处理30分钟。接下来，让得到的产物先过75μm的筛，然后过30μm的筛，对OC聚合物颗粒进行分级，并获得了旋光异构体分离剂2(分级产物3)。分级结果显示如下：

分级产物1：＞75μm产率：0.08g(产率百分比：0.8％)

分级产物2：75-30μm产率：＜0.7g(产率百分比：7％)

分级产物3：＜30μm产率：6.68g(产率百分比：67％)

<柱2的实旋例>

将4.0g旋光异构体分离剂2分散到H/I溶剂(体积比：H/I＝1/1)中。让获得的分散液过筛(#400)，通过淤浆方法，在150kgf/cm²(14.7MPa)下对不锈钢柱管(管直径：0.46mn，长度：25cm)实施恒定压力填充，最后得到柱2。

<旋光异构体分离剂的实旋例3>

将10g纤维素三(3，5-苯基氨基甲酸酯)聚合物(下文也称为“OD聚合物”)溶解在含有500ml二氯甲烷和60ml丙酮的混合溶剂中，得到OD聚合物溶液。

同时，将1.0g十二烷基苯磺酸钠(Tokyo Chemical Industry Co.，Ltd.)溶解在1,000ml纯净水中而制备出水溶液。在5.0小时的时间内将OD聚合物溶液滴加到水溶液中(滴加速度：2ml/min)，在滴加过程中保持水溶液在15℃，并以500rpm的速率搅拌溶液。

在滴加过程完成后，继续以相同的速率维持搅拌，并将水溶液的温度调节为40℃，使氮气流动，蒸馏除去二氯甲烷。然后，静置得到的产物，通过倾析去除上清液。将大约50ml纯净水加入到得到的产物中，静置。然后通过倾析去除上清液。重复这一操作数次。

用G4玻璃过滤器过滤收集沉淀在纯净水中的OD聚合物颗粒，然后依次用300ml的水、乙醇洗涤颗粒，用抽吸器充分抽吸，真空干燥(80℃，＞3h)，最终得到OD聚合物颗粒(产率：4.38g，产率百分比：44％)。

将获得的OD聚合物颗粒放入H/I溶剂(体积比：H/I＝9/1)中，然后超声处理30分钟。接下来，让得到的产物先过75μm的筛，然后过30μm的筛，对OD聚合物颗粒进行分级，并获得了旋光异构体分离剂3(分级产物2)。分级结果显示如下：

分级产物1：＞75μm产率：1.05g(产率百分比：11％)

分级产物2：75-30μm产率：＜3.33g(产率百分比：33％)

分级产物3：＜30μm产率：-

<柱3的实旋例>

将4.5g旋光异构体分离剂3分散到H/I溶剂(体积比：H/I＝9/1)中。让获得的分散液过筛(#400)，通过淤浆方法，在100kgf/cm²(9.8MPa)下对不锈钢柱管(管直径：0.46mn，长度：25cm)实施恒定压力填充，从而得到柱3。

<实施例1>

在每一个都填充了如此获得的由聚合物颗粒形成的旋光异构体分离剂的色谱柱1-色谱柱3中，填充了由OB聚合物颗粒形成的旋光异构体分离剂1的色谱柱1被用在超临界流体色谱中分离旋光异构体。用反式茋氧化物的甲醇溶液作为分离样品，在下列条件下进行反式茋氧化物的旋光拆分。图2显示了在旋光拆分中获得的色谱图。

(分离条件)

流动相：CO₂/甲醇＝90/10(v/v)

流速：3.0mL/min

压力：15MPa

柱温度：25℃

检测：UV230nm

柱尺寸：0.46mm I.D.×250mmL

注入量：10μg

(注意，注入量是指分离样品中反式茋氧化物的旋光异构体混合物的质量。)

图2显示了利用填充了OB珠的色谱柱1进行超临界流体色谱能够在短时间内清楚地分离反式茋氧化物的旋光异构体。

<对比实施例1>

用与实施例1相同的方式来实施反式茋氧化物的旋光拆分，除了使用填充了含有作为载体的硅石颗粒和负载在硅石颗粒上的OB聚合物的旋光异构体分离剂的对比柱这一点之外。基于已知的方法来制备载体型旋光异构体分离剂，该方法涉及在干燥之前将硅石颗粒浸入OB聚合物溶液。在载体型旋光异构体分离剂中OB聚合物的含量为20质量％。图3显示了在旋光拆分中获得的色谱图。

图3显示利用对比柱，在与实施例1相同的条件下进行的超临界流体色谱能够在短时间内清楚地分离反式茋氧化物的旋光异构体。

<实施例2>

用与实施例1相同的方式来实施反式茋氧化物的旋光拆分，除了将检测波长改变为254nm，将注入量改变为400μg、500μg和700μg外。图4-6显示了在旋光拆分中获得的色谱图。

图4-6显示在利用填充了OB珠的色谱柱1进行超临界流体色谱对反式茋氧化物进行旋光拆分的过程中，即使注入量增加，在短时间内仍能清楚地检测到反式茋氧化物的各个旋光异构体的峰。

<对比实施例2>

用与实施例2相同的方式来实施反式茋氧化物的旋光拆分，除了使用对比柱这一点外。图7-9显示了在旋光拆分中获得的色谱图。

图7显示在利用填充了含有负载在硅石颗粒上的OB聚合物的载体型旋光异构体分离剂的对比柱进行超临界流体色谱对反式茋氧化物进行旋光拆分的过程中，当注入500μg的混合物时，检测峰不规则，注入700μg的混合物时，检测峰变得显著不规则。

这些实施例揭示，与那些利用填充了通常的载体型旋光异构体分离剂的色谱柱的超临界流体色谱进行的旋光拆分相比，利用填充了多糖衍生物珠的色谱柱的超临界流体色谱进行的旋光拆分能同时分离大量的旋光异构体。在通过分离旋光异构体制备旋光异构体时，可以提高每次操作中作为原材料的旋光异构体混合物的注入量(装载量)，因此能够以更高的生产率生产旋光异构体。

工业应用

在本发明中，流动相包含超临界流体。超临界流体的密度与液体相似，扩散系数与气体相似，是液体的大约100倍。因此，与常规的高效液相色谱相比，包含超临界流体的流动相能够充分地增加旋光异构体在旋光异构体分离剂之间转移的速率。因此，即使使用具有高含量识别位点的旋光异构体分离剂，即含有50质量％或50质量％以上的多糖衍生物的旋光异构体分离剂，仍能很好地分离旋光异构体。

Claims (5)

1.一种从含有旋光异构体混合物的样品中分离旋光异构体的方法，包括：

将含有旋光异构体混合物的样品注入流动相；和

使含有已注射样品的流动相通过填充了能分离旋光异构体的旋光异构体分离剂的色谱柱，其中：

使用的流动相是含有超临界流体的流动相；和

使用的旋光异构体分离剂是含有占旋光异构体分离剂总量的50质量％或50质量％以上的能分离旋光异构体的多糖衍生物的旋光异构体分离剂。

2.权利要求1所述的方法，其中旋光异构体分离剂含有占旋光异构体分离剂总量的60质量％或60质量％以上的多糖衍生物。

3.权利要求1所述的方法，其中旋光异构体分离剂含有占旋光异构体分离剂总量的80质量％或80质量％以上的多糖衍生物。

4.利要求1所述的方法，其中多糖衍生物是选自纤维素三苯甲酸酯、纤维素三(苯基氨基甲酸酯)和纤维素三(3，5-二甲基苯氨基甲酸酯)。

5.权利要求1所述的方法，其中多糖衍生物是含有直链淀粉作为骨架的多糖衍生物。

Images