CN1858040B - 5,8-二取代喹唑啉及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了5，8-二取代喹唑啉及其制备方法和用途，如下具有通式1的化合物。
其中R 1代表芳基胺、烷基胺或烷氧基，R 2代表硝基或氨基或磺酰氨基或烷氧基，这类具有5，8-二取代-4-羟基喹唑啉结构的新化合物展示非常高的抑制肿瘤细胞生长的活性，尤其对于EGFR或ErbB-2高表达的乳腺癌细胞和卵巢癌细胞的生长具有显著的抑制效果，半抑制浓度IC 50能达到0.01μM。本发明也揭示了这类化合物的制备过程。
Description
技术领域
本发明涉及多取代喹唑啉新化合物、合成及其抑制肿瘤细胞生长活性，更具体地说为含5，8-二取代-4-羟基喹唑啉化合物作为高效的靶向表皮生长因子受体EGFR和HER2的抗肿瘤药的合成及用途。
背景技术
细胞表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)家族属于I型受体酪氨酸激酶超家族，是细胞生长，分化和存活的重要调节因子，其成员有：erbB-1(EGFR，HER1)，erbB-2(HER2)，erbB-3(HER3)及erbB-4(HER4)，它们结构相似，均由胞外配体结合区、单链跨膜区及高度保守的蛋白酪氨酸激酶区组成。这一结构既具受体的功能，又具有胞外信号直接转化为胞内效应的能力，是一种新颖的跨膜传递方式。一旦特异性配体如EGF或TGF-α结合上去，就能够通过相应的酪氨酸激酶的自身磷酸化作用(autophosphorylation)而激活受体，从而激发了细胞内信号传导连锁反应。这些信号传递包括：Ras激酶蛋白和促细胞***激酶蛋白MAPK的活化，此二者的活化又激活细胞核内的多种蛋白，包括细胞周期增殖的关键循环蛋白D1，从而导致DNA合成、细胞生长、分化和存活等一系列重要的细胞事件发生(Jorissen，R.N.；Walker，F.W.；Pouliot，N.；Garrett，T.P.J.；Ward，C.W.；Burgess，A.W.Epidermal growth factor receptor：mechanism of activation and signaling.Exp.Cell Res.2003，284，31-53)。生长因子受体的过度活化导致细胞不受控制的增殖，从而产生各种类型的过度增生疾病，如非小细胞肺癌、白血病、乳腺癌、脑癌、动脉粥样硬化和血管形成术后的再狭窄。生长因子受体酪氨酸激酶的抑制被证实具有调节不受控制的细胞复制的效用，因此成为新型的抗肿瘤药治疗的靶标(Ritter，C.A.and Arteaga，C.L.The epidermal growth factorreceptor-tyrosine kinase：a promising therapeutic target in solid tumors.Semin.Oncol.2003，30，3-11)。
目前许多合成的化合物具有抑制细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGFR-PTK)的活性，尤其以喹唑啉类化合物研究得最深入，其中ZD1839于2003年被FDA批准上市用于治疗非小细胞肺癌(Ranson，M.Epideraml growth factor receptor tyrosine kinase inhibitors.British J.Cancer2004，90，2250-2255.)。但文献报道的作为酪氨酸激酶抑制剂的喹唑啉化合物主要集中在4-取代苯胺基-6，7-二取代喹唑啉结构类型(Bridges，A.J.Chemical inhibitors of proteinkinases.Chem.Rev.2001，101，2541-2571.)，我们通过分子模型计算，设计合成了4-羟基-5，8-二取代喹唑啉的新系列化合物，通过优化取代基的结构，发现具有抗肿瘤活性的小分子药物。
发明内容
本发明的目的是寻找一类具有抗肿瘤活性的抑制细胞表皮生长因子受体信号传导的喹唑啉类新化合物。
本发明的另一目的是提供一类5，8-二取代-4-羟基喹唑啉化合物的制备方法。
本发明的再一目的是提供5，8-二取代-4-羟基喹唑啉化合物在医学上的用途。
本发明设计是基于EGFR酪氨酸激酶蛋白质与小分子抑制剂相互作用的晶体结构(Wood，E.R.；Truesdale，A.T.；McDonald，O.B.；Yuan，D.；Hassell，A.；Dickerson，S.H.；Ellis，B.；Pennisi，C.；Horne，E.；Lackey，K.；Alligood，K.J.；Rusnak，D.W.；Gilmer，T.M.and Shewchuk，L.Aunique structure for epidermal growth factor receptor bound to GW572016(Lapatinib)：relationships among protein conformation，inhibitor off-rate，and receptor activity in tumor cells.Cancer Res.2004，64，6652-6659)，通过聚焦型化合物库的合成方法，即以药效团喹唑啉环为核心结构，通过芳基亲核取代反应在喹唑啉环的5-位引进不同的取代基，配合硝化反应和还原反应和磺酰化反应引进不同的8-位取代基，合成出一系列5，8-二取代-4-羟基喹唑啉新化合物，同时在细胞水平测定了各化合物对细胞表皮生长因子过度表达的肿瘤细胞生长的抑制活性。
本发明的一类5，8-二取代喹唑啉化合物，具有如下结构1
其中，R1：
RO-，RNH-，RR’N-
R2：-NO2，-NHSO2R，-NRSO2R，-NHR，-OR
R3、R4：F、Cl、Br、I等卤素，或CF3，RO-，RNH-，R2N-
R、R’各自独立的为C1-C12直链或支链或环状烷基含饱和和不饱和碳氢链，C6-C12芳基或杂环芳基，羧基或羟基或芳基或卤素等官能团取代的烷基，羧基或羟基或芳基或卤素等官能团取代的芳基
该类化合物的合成如下反应式所示：
具体的说，5，8-二取代-4-羟基喹唑啉是从3-氯-2-甲基苯胺出发，经氨基保护、氧化、脱N-保护基、环化成喹唑啉环、硝化和芳环亲核取代反应6步反应合成得到。首先，商业可售的原料3-氯-2-甲基苯胺在惰性溶剂如卤代烷烃、甲苯、苯、四氢呋喃、二氧六环或***、醋酸或N，N-二甲基甲酰胺等溶剂中上N-保护基，保护基是常用的保护氨基的甲酰基、乙酰基或取代乙酰基、CBZ、BOC、苄基或取代苄基、FMOC，温度为0℃～室温，或加热至溶剂回流；然后苯甲基在高锰酸钾水溶液中加热回流氧化成苯甲酸(氧化试剂还可以是重铬酸酸钾、三氧化铬、高碘酸钠、IBX，Dess-Martin试剂，新制二氧化锰、双氧水，反应温度控制在50℃～120℃，溶剂为卤代烃、甲苯、乙腈、乙酸和水)。在一定条件下脱去N-保护基(对N-保护的甲酰基、乙酰基或取代乙酰基、CBZ、BOC在酸性条件下脱去保护基，对N-保护的甲酰基、苄基或取代苄基用催化氢化脱去保护基，对N-保护的FMOC在碱性条件下脱去保护基，溶剂用卤代烃、四氢呋喃、1，4-二氧六环，甲醇、乙醇，温度为室温到溶剂回流温度)，得到的2-氨基-6-氯苯甲酸与甲酰胺在室温-175℃下环化为喹唑啉，再进一步硝化(硝化试剂可以是发烟硝酸和浓硫酸在0℃～室温，或次硝酸铋和二氯亚砜，或硝酸钾、硝酸镧和浓硝酸，或硝酸钠、硝酸镧和浓盐酸，溶剂用水、卤代烃或四氢呋喃，温度在0℃～室温)得到8-硝基-5-氯喹唑啉，胺或醇作为亲核试剂对喹唑啉的5-氯进行芳基亲核取代反应得到不同5-取代基-8-硝基-喹唑啉化合物(反应溶剂用惰性溶剂如四氢呋喃、***、甲苯、乙腈、1，4-二氧六环或N，N-二甲基甲酰胺在40℃～100℃加热发生亲核取代反应)，8-位硝基可进一步还原为氨基(还原剂为Pd/C氢化、铁粉和醋酸、铁粉和氯化铵、锌粉和氯化铵、水合肼、甲酸铵，溶剂用水、乙醇、甲醇或乙腈，温度在40℃～100℃)并进一步转化为磺酰胺。
表皮生长因子受体(EGFR和HER-2)酪氨酸激酶抑制活性测试
EGFR和HER-2酶的提取：应用Bab～to-Bac昆虫杆状病毒表达***表达有活性的酪氨酸激酶蛋白，用Ni-NTA柱亲和纯化蛋白。分装，-70℃保存。将酶反应底物Poly(Glu，Tyr)4:1用无钾PBS稀释成最佳浓度，包被酶标板，置37℃反应12-16小时。弃去孔中液体。洗板三次，于37℃烘箱中干燥酶标板1-2小时。每孔加入一定浓度的蛋白酪氨酸激酶10μL，设好相应的无酶对照，然后加入用反应缓冲液稀释的一定浓度的ATP溶液80μL启动反应。同时加入不同浓度的待测化合物10μL，并以一定浓度的DMSO溶液10μL作为相应的阴性对照，置37℃摇床反应1小时。T-PBS洗板三次，每次15分钟。加入抗体PY99(1：1000)100μl/孔，37℃摇床反应0.5小时。T-PBS洗板三次，加入辣根过氧化物酶标记羊抗鼠的IgG(1：2000)100μl/孔，37℃摇床反应0.5小时。T-PBS洗板三次，加入2mg/ml的OPD显色液100μl/孔，25℃避光反应1-10分钟。加入2M H2SO450μl/孔中止反应，用可调波长式微孔板酶标仪VERSAmax读数，波长为490nm。
测定药物对酪氨酸激酶蛋白的相对抑制率。
根据各浓度抑制率，采用Logit法计算半数抑制浓度IC50。以上每个实验重复2次，求出2次实验的平均IC50值作为抑制能力的最终指标。
表皮生长因子受体(EGFR和HER-2)酪氨酸激酶高表达的肿瘤细胞生长抑制活性：
根据细胞生长速率，将处于对数生长期的肿瘤细胞以90μl/孔种于96孔培养板，贴壁生长24小时再加药10μl/孔。每个浓度设三复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞凋零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO2条件下培养72小时，然后倾去培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1小时后用蒸馏水洗涤5次，空气中自然干燥。然后加入由1％冰醋酸配制的SRB(Sigma)4mg/ml溶液100μl/孔，室温中染色15分钟，去上清液，用1％醋酸洗涤5次，空气干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶标仪(VERSAmax)515nm波长下测定OD值。按下列公式计算被测物对癌细胞生长的抑制率，半数抑制量IC50值采用Logit法计算。以上每个实验重复2次，求出2次实验的平均IC50值作为抑制能力的最终指标。
抑制率＝(对照组OD值—给药组OD值)/对照组OD值×100％
两种过度表达表皮生长因子受体酪氨酸激酶的人乳腺癌细胞系被用来测试化合物对肿瘤细胞生长的抑制效果。乳腺癌细胞系SK-BR-3过度表达ErbB2(HER2)，乳腺癌细胞系MDA-MB-468过度表达EGFR。
表1.化合物1a-n对肿瘤细胞生长的抑制效果
a细胞系SK-BR-3(乳腺癌)过度表达erbB2；细胞系MDA-MB-468(乳腺癌)过度表达EGFR.
b剂量依赖曲线在5个浓度值测得；抑制细胞生长50％时的药物浓度值IC50(μM)从这些曲线中获得.
cB17作为阳性对照(Wang，S.；Yang，D.；Enyedy，I.US Patent US2004023957-A1，2004.).
表2.化合物1a-n对EGFR和ErbB-2酪氨酸激酶蛋白的抑制效果
细胞水平的药理结果显示，这类5，8-二取代4-羟基喹唑啉化合物是一类高活性的肿瘤生长抑制剂，对于细胞表皮生长因子受体EGFR和ErbB-2过度表达的肿瘤细胞系显示非常高的抑制活性，尤其是5-位是苯胺取代的衍生物活性最好，而5-苯胺的3-位和4-位取代基是卤素和供电子基团可大大促进这类化合物的5，8-二取代4-羟基喹唑啉化合物的肿瘤生长抑制活性。最好的化合物对EGFR高表达的肿瘤细胞系MDA-MB-468生长的半抑制浓度IC50小于0.01μM，抑制活性高于阳性对照化合物B-17；对ErbB-2高表达的肿瘤细胞SK-BR-3的生长的半抑制浓度IC50为7.0μM。
药理结果显示，这类5，8-二取代4-羟基喹唑啉化合物是一类高活性的肿瘤生长抑制剂，具有很强的抑制人类乳腺癌细胞和卵巢癌细胞生长的活性，尤其对于细胞表皮生长因子受体EGFR和ErbB-2过度表达的肿瘤细胞系显示非常高的选择性，最好的化合物对EGFR高表达的肿瘤细胞系MDA-MB-468生长的半抑制浓度IC50小于0.01μM，抑制活性高于阳性对照化合物B-17；对ErbB-2高表达的肿瘤细胞SK-BR-3的生长的半抑制浓度IC50为7.0μM。在分子水平的酶活性测试表明，我们的化合物对EGFR酪氨酸激酶和ErbB-2酪氨酸激酶有一定的抑制作用。
分子水平的酶活性测试显示，这些化合物对EGFR和ErbB-2酪氨酸激酶有一定的抑制效果，这类5，8-二取代4-羟基喹唑啉化合物对人类乳腺癌细胞和卵巢癌细胞的生长具有非常显著的抑制作用，是一类高活性的新结构的肿瘤生长抑制剂。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述，但不限制本发明。
实例15-苯胺-8-硝基-4羟基喹唑啉1a
步骤1：3-氯-2-甲基-N-乙酰苯胺(化合物2)
3-氯-2-甲基苯胺(2.34克，16.50毫摩尔)溶解6毫升二氯甲烷，强烈搅拌下缓慢滴加醋酸酐(2.53克，24.75毫摩尔)。产生的大量灰色乙酰化产物沉淀用布氏漏斗过滤，用水洗。粗产物用乙酸乙酯：甲醇＝10：1重结晶得到白色结晶产物(2.73克，90.2％)。1HNMR(DMOS-d6，400MHz)9.70(s，1H)，7.40(d，J＝8.40，1H)，7.37(t，J＝8.01，1H)，1.99(s，3H)；MS(EI)m/z183(M+)；Anal.(C9H10ClNO)C，H，N：calcd：58.86，5.49，7.63.
步骤2：2-(乙酰胺)-6-氯苯甲酸(化合物3)
化合物2(3.3克，18.0毫摩尔)，六水合硫酸镁(4.3克，38.8毫摩尔)和水混合加热到135℃回流。高锰酸钾(11.4克，72.2毫摩尔)的水溶液(100毫升)缓慢滴加到上述溶液中(约3小时)。加料完毕后，升温到160℃回流2小时，停止加热，待冷却后用布氏漏斗过滤，滤液用6M的盐酸水溶液调PH＝1.0，大量白色固体产物析出，过滤收集固体产物，真空干燥后用甲醇重结晶得白色结晶纯品产物(2.5克，65.7％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)，δ9.70(s，1H)，7.40(d，J＝8.04，1H)，7.37(t，J＝8.01，1H)，7.31(d，J＝8.06，1H)，1.99(s，3H)；MS(EI)m/z213(M+)；Anal.(C9H8ClNO3)C，H，N，calcd：50.60，3.77，6.56，found：50.42，3.54，6.45.
步骤3：5-氯-4-羟基喹唑啉(化合物5)
化合物3(250毫克，1.17毫摩尔)加入4毫升浓盐酸，加热到80-90℃搅拌1.5小时，温度不宜高于90℃。停止加热，待冷却后有白色结晶体析出，过滤收集固体产物，用甲醇重结晶后得2-胺基-6氯苯甲酸(4)，直接用于下一步反应。往化合物4(1.2克，5.8毫摩尔)中加入1.5毫升甲酰胺，加热，在130℃下搅拌45分钟，在175℃下搅拌75分钟。停止加热，待冷却后得到的半透明固体用1.5毫升甲基纤维素溶解搅拌，所得到浆状物倾倒入5毫升冰水中，过滤收集固体粗产物，用柱层析法分离提纯产物得0.75克白色固体产物5，展开剂用乙酸乙酯：石油醚＝1：1，收率67.6％。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)，δ12.09(br，1H)，8.07(s，1H)，7.71(t，J＝8.25，7.7，1H)，7.59(d，J＝8.0，1H)，7.51(d，J＝7.43，1H)；MS(EI)m/z180(M+)；Anal.(C8H5ClN2O)C，H，N，calcd：53.21，2.79，15.51，found：53.14，2.72，15，36.
步骤4：5-氯-8-硝基-4-羟基喹唑啉(化合物6)
往化合物5(155毫克，0.86毫摩尔)中加入3毫升浓硫酸，并用冰浴冷却，缓慢滴加发烟硝酸(3毫升)约10分钟。滴加完毕后保持0℃继续搅拌10分钟，停止反应，将反应溶液倾倒入碎冰中，用20％的氢氧化钠水溶液中和调pH＝7，过滤收集固体产物，用少量水洗两次。用乙醇-水体系重结晶得淡黄色固体产物(193.5毫克)。1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.68(br，1H)，8.27(d，J＝8.86，1H)，8.22(s，1H)，7.75(d，J＝8.85，1H)；MS(EI)m/z225(M+)；Anal(C8H4ClN3O3)C，H，N，calcd：42.59，1.79，18.63，found：42.47，1.68，18.60.
步骤5：5-苯胺-8-硝基-4-羟基喹唑啉(化合物1a)
化合物6(100毫克，0.44毫摩尔)溶解于18毫升四氢呋喃中，加入82毫克苯胺(0.88 毫摩尔)。混合体系加热回流24小时(80-90℃)，停止反应，减压蒸除大部分四氢呋喃，加入水稀释(15毫升)，用20％的盐酸溶解调pH＝7，用乙酸乙酯萃取两次(2×20毫升)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，用硅胶柱层析分离得棕色固体纯品(90毫克，72.5％)，展开剂体系为乙酸乙酯：石油醚＝1：1。Mp：233-235℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.88(br，1H)，8.81(s，1H)，8.80(d，J＝9.08，1H)，7.34(d，J＝8.9，1H)，7.0-7.2(m，5H)；MS(EI)m/z282(M+)；Anal.(C14H10N4O3)C，H，N，calcd：59.57，3.57，19.85，found：59.45，3.44，19.98.
目标化合物1b-1t用类似方法制得。
实施例2：5-苄胺-8-硝基-4羟基喹唑啉1b
起始原料用苄胺(94毫克，0.88毫摩尔)，得到桔红色固体产物(100毫克，76.9％)。Mp：182-184℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz).10.00(br，1H)，8.68(d，J＝9.1，1H)，7.2-7.3(m，5H)，6.77(d，J＝8.99，1H)，4.25(s，2H)；MS(EI)m/z296(M+)；Anal.(C15H12N4O3)，C，H，N，calcd：60.81，4.08，18.91，found：60.72，4.11，18.87.
实施例3：5-(3-氯苯胺)-8-硝基-4羟基喹唑啉1c
起始原料用3-氯苯胺(211毫克，0.88毫摩尔)，得到黄色固体(110毫克，79.5％)。Mp：235-237℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ12.90(br，1H)，11.45(s，1H)，8.27(s，1H)，8.23(d，J＝9.07，1H)，7.32(t，J＝7.93，1H)，7.16(d，J＝9.07，1H)，7.16-7.07(m，2H)，6.95(d，J＝7.96，1H)；MS(EI)m/e316(M+)；Anal.(C14H9ClN4O3)C，H，N，Calcd：53.09，2.86，17.69.Found：53.24，2.97，17.57.
实施例3：5-(4-氯苯胺)-8-硝基-4羟基喹唑啉1d
起始原料用4-氯苯胺(112毫克，0.88毫摩尔)，得到黄色固体(106毫克，76.8％)。Mp：241-243℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ11.48(br，1H)，8.28(s，1H)，8.20(d，J＝9.08，1H)，7.32(d，J＝8.51，2H)，7.10(d，J＝9.06，1H)，6.99(d，J＝8.52，2H)；MS(EI)：317(M++1)；Anal.(C14H9ClN4O3)，C，H，N，Calcd：53.09，2.86，17.69，Found：52.86，3.21，17.35.
实施例5：5-(3-甲基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1e
起始原料用4-甲基苯胺(95毫克，0.88毫摩尔)，得到棕黑色固体(185毫克，71.2％)。Mp：215-217℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ12.85(br，1H)，11.42(s，1H)，8.26(s，1H)，8.18(d，J＝9.89，1H)，7.15(t，J＝7.69，1H)，7.08(d，J＝8.79，1H)，6.93(d，J＝9.89，1H)，6.78(s，1H)，6.76(d，J＝8.79，1H)，2.23(s，3H)；MS(EI)m/e＝296(M+)；Anal.(C15H12N4O3)C，H，NCalcd：60.81，4.08，18.91；Found：60.92，4.11，18.76.
实施例6：5-甲氧基-8-硝基-4-羟基喹唑啉1f
往化合物6(100毫克，0.44毫摩尔)中加入10毫升甲醇和100毫克甲醇钠(1.85毫摩尔)固体。混合体系在70℃下加热回流24小时。停止反应，蒸除大部分甲醇溶剂，加入水稀释(15毫升)，用20％的盐酸溶液调pH＝7，用乙酸乙酯萃取两次(2*20毫升)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂，用硅胶柱层析分离得到白色固体产物(65毫克，66.8％)，展开剂为乙酸乙酯：石油醚＝1：1。MP：209-210℃，1H MNR(DMSO-d6，300MHz)δ11.28(br，1H)，9.13(s，1H)，8.67(d，J＝8.79，1H)，6.83(d，J＝8.66，1H)，3.90(s，3H)；MS(EI)m/z221(M+)；Anal.(C9H7N3O4)C，H，N，calcd：48.87，3.19，19.00，found：48.77，3.23，18.89.
实施例7：5-乙氧基-8-硝基-4羟基喹唑啉1g
化合物1g的制备方法与化合物1f的制备方法相同。起始原料用乙醇钠(125毫克，1.85毫摩尔)，10毫升乙醇做溶剂，得到白色固体80毫克，产率77.6％。Mp：195-198℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ11.28(br，1H)，9.14(s，1H)，8.63(d，J＝8.20，1H)，6.81(d，J＝8.40，1H)，4.12(m，J＝6.9，2H)，1.48(t，J＝6.9，3H)；MS(EI)m/z235(M+)；Anal.(C10H9N3O4)C，H，N，calcd：51.07，3.86，17.87，found：51.13，3.68，17.74.
实施例8：5-(4-甲氧基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1h：
化合物1h的制备方法同化合物1a的制备方法。起始原料用4-甲氧基苯胺(108毫克，0.88毫摩尔)，得到墨绿色固体(81毫克，58.9％)。Mp：200-203℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ12.65(br，1H)，δ11.40(s，1H)，8.24(s，1H)，8.14(d，J＝9.07，1H)，7.02(d，J＝9.07，1H)，6.95(d，J＝9.06，2H)，6.85(d，J＝9.06，2H)，3.73(s，3H)；MS(EI)m/e312(M+)；Anal.(C15H12N4O4)C，H，N，Calcd：57.69，3.87，17.94；Found：57.79，3.98，17.67.
实施例9：5-(4-胺基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1i
化合物1i的制备方法同化合物1a的制备方法。起始原料用4-胺基苯胺(48毫克，0.44毫摩尔)，得到棕黑色固体(68毫克，51.4％)。Mp：223-226℃；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)：δ11.28(br，1H)，8.21(s，1H)，8.08(d，J＝9.06，1H)，6.90(d，J＝9.07，1H)，6.68(d，J＝8.52，2H)，6.47(d，J＝8.79，2H)；MS(EI)m/z M+＝297；Anal.(C14H11N5O3)C，H，N，Calcd：56.56，3.73，23.56，Found：56.70，3.46，23.44.
实施例10：5-(4-苄氧基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1j
化合物1j的制备方法同化合物1a的制备方法。起始原料用4-苄氧基苯胺(175毫克，0.88毫摩尔)，得到棕黄色固体(110毫克，64.7％)。Mp：220-222℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ11.40(br，1H)，8.25(s，1H)，8.15(d，J＝9.07，1H)，7.46-7.35(m，5H)，7.02(d，J＝9.07，1H)，6.94(s，4H)，5.05(s，1H)；MS(EI)m/e388(M+).Anal.(C21H16N4O4)C，H，N，Calcd.：64.94，4.15，14.43，Found：64.82，4.45，14.56.
实施例11：5-吡咯啉-8-硝基-4-羟基喹唑啉1k
化合物1k的制备方法同化合物1a的制备方法。起始原料用吡咯啉(63毫克，0.88毫摩尔)，得到棕色固体(90毫克，78.5％)。Mp：208-210℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ12.30(br，1H)，8.12(s，1H)，8.09(d，J＝9.07，1H)，6.72(d，J＝9.07，1H)，3.29(dt，4H)，1.89(dt，4H)；MS(EI)m/e260(M+)；Anal.(C12H12N4O3)C，H，N，Calcd：55.38，4.65，21.53，Found：55.41，4.35，21.78.
实施例12：5-(2H-吡咯)-8-硝基-4-羟基喹唑啉11
化合物11的制备方法同化合物1a的制备方法。起始原料用2H-吡咯(61毫克，0.88毫摩尔)，得到棕黑色固体(79毫克，69.8％)。Mp：154-160℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ12.41(br，1H)，8.11(s，1H)，7.99(d，J＝8.99，1H)，6.79(d，J＝8.99，1H)，6.79(d，J＝9.06，1H)，5.91(s，2H)，3.98(s，4H)；MS(EI)m/e257(M+-1)；Anal.(C12H10N4O3)C，H，N，Calcd：55.81，3.90，21.70，Found：55.79，3.86，21.92.
实施例13：5-N-(甲硫氨酸)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1m
化合物1m的制备方法同化合物1a的制备方法。起始原料用甲硫氨酸(131毫克，0.88毫摩尔)，得到棕色固体(76毫克，51.2％)，展开剂体系为氯仿：甲醇＝2：1。Mp：214-217℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ12.78(br，1H)，10.34(br，1H)，8.23(s，1H)，8.11(d，1H，J＝9.07)，6.91(d，1H，J＝9.06)，4.01(s，1H)，2.37(s，2H)，2.2-1.8(m，5H)；MS(EI)m/e338(M+)；Anal.(C13H14N4O5S)C，H，N，Calcd：46.15，4.17，16.56.Found：46.23，4.25，16.43.
实施例14：5-N-(苯丙氨酸)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1n
化合物1n的制备方法同化合物1a的制备方法。起始原料用苯丙氨酸(133毫克，0.88毫摩尔)，得到棕色固体(74毫克，49.7％)，展开剂体系为氯仿：甲醇＝2：1。Mp：>250℃；1HNMR(DMSO-d6，300MHz)：δ12.80(br，1H)，11.25(br，1H)，8.22(s，1H)，7.91(d，J＝9.34，1H)，7.25-7.12(d，5H)，5.12(s，1H)；MS(EI)m/e340(M+)；Anal.(C16H12N4O5)C，H，N Calcd：56.47，3.55，16.46，Found：56.22，3.31，16.28.
实施例15：5-(4-(4-羟基-8-硝基喹唑啉-5-氨基)苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1o
化合物1o的制备方法同化合物1a。起始原料用1，4-二胺基苯胺(24毫克，0.22毫摩尔)，得到棕黄色固体(67毫克62.6％)。Mp：>250℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ14.06(br，2H)，8.17(s，2H)，7.94(d，J＝9.3，2H)，6.74(d，J＝9.3，2H)，6.71(s，4H)；MS(EI)m/e486(M+)；Anal.(C22H14N8O6)C，H，N Calcd：54.33，2.90，23.04.
实施例16：5-(3-氯-4-甲氧基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1p
同化合物1a的制备方法。起始原料用3-氯4-甲氧基苯胺(100毫克，0.68毫摩尔)，得到桔红色固体(62毫克，81.0％)。Mp：＝216℃；1H NMR(CD3OD，300MHz)：δ8.14(s，1H)，7.03(d，J＝5.4，2H)，7.01(s，1H)，6.98(d，J＝9.1，2H)，6.91(d，J＝9.1，2H)，3.84(s，3H)；MS(EI)m/e346(M+)；Anal.(C15H11ClN4O4)C，H，N Calcd：51.96，3.20，16.16.
实施例17：5-(4-羧基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1q
同化合物1a的制备方法。起始原料用4-羧基苯胺(301毫克，2.2毫摩尔)，得到亮黄色固体(63毫克，44.0％)。Mp：>250℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ13.8(br，1H)，8.22(s，1H)，8.03(d，J＝9.3，2H)，7.80(d，J＝8.2，2H)，6.90(d，J＝9.1，2H)，6.84(d，J＝8.2，2H)；Anal.(C15H10N4O5)C，H，N Calcd：55.22，3.09，17.17.
实施例18：5-吡咯-8-硝基-4-羟基喹唑啉1r
同化合物1a的制备方法。起始原料用吡咯(147毫克，2.2毫摩尔)，得到棕黑色固体(75毫克，66.9％)。Mp：>250℃；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ10.8(br，1H)，8.00(s，1H)，7.88(d，J＝9.6，2H)，6.68(s，2H)，6.08(d，J＝9.6，2H)，5.99(s，2H)；Anal.(C12H8N4O3)C，H，NCalcd：56.25，3.15，21.87.
实施例19：5-(3-氯-4-环已氧基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1s
同化合物1a的制备方法。起始原料用3-氯4-环已氧基苯胺(100毫克，0.45毫摩尔)，得到土黄色固体(72毫克，79.1％)。Mp：＝190℃；1H NMR(CD3OD，300MHz)：δ8.17(s，1H)，8.13(d，J＝9.0，1H)，7.42(d，J＝2.7，1H)，7.27(dd，J＝2.7，9.0，1H)，7.22(d，J＝8.9，1H)，6.98(d，J＝9.0，1H)，4.47(m，1H)，1.93-1.23(m，10H)；；MS(EI)m/e414(M+)；Anal.(C20H19ClN4O4)C，H，N Calcd：57.90，4.62，13.51.
实施例20：5-(3-氯-4-羟基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉1t
同化合物1a的制备方法。起始原料用3-氯-4-羟基苯胺(100毫克，0.53毫摩尔)，得到土黄色固体(185毫克，99.4％)。Mp：>250℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ11.34(br，1H)，10.13(br，1H)，8.27(s，1H)，8.13(d，J＝8.9，1H)，7.03(m，2H)，6.85(m，2H)；MS(EI)m/e332(M+)；Anal.(C14H9ClN4O4)C，H，N Calcd：50.54，2.73，16.84.
实施例21：5-(4-甲氧基苯胺)-8-氨基-4-羟基喹唑啉1u
5-(4-甲氧基苯胺)-8-硝基-4羟基喹唑啉(10毫克，0.032毫摩尔)溶解于5毫升甲醇中，加入1毫克5％的钯碳催化剂，常压常温氢化，12小时后停止反应，过滤，抽干滤液后得固体粗产物，甲醇重结晶得8毫克墨绿色固体产物(产率为92％)。Mp：>250℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ7.76(s，1H)，7.18(s，2H)，6.76(d，J＝9.0，2H)，6.59(d，J＝9.0，2H)， 3.65(s，3H)；MS(EI)m/e282(M+)；Anal.(C15H14N4O2)C，H，N Calcd：63.82，5.00，19.85.
实施例22：5-(3-氯苯胺)-8-氨基-4-羟基喹唑啉1v
5-(3-氯苯胺)-8-硝基-4羟基喹唑啉(10毫克，0.032毫摩尔)溶解于5毫升甲醇中，加入1毫克5％的钯碳催化剂，常压常温氢化，12小时后停止反应，过滤，抽干滤液后得固体粗产物，甲醇重结晶得9毫克墨绿色固体产物(产率为98％)。Mp：>250℃；1H NMR(CD3OD，300MHz)：δ8.01(s，1H)，7.34(d，J＝9.6，2H)，7.16(d，J＝9.0，1H)，6.86(m，1H)，6.74(d，J＝9.0，1H)，6.62(s，1H)；MS(EI)m/e286(M+)；Anal.(C14H11ClN4O)C，H，N Calcd：58.65，3.87，19.54.
实施例23：5-(3-氯-4-苄氧基苯胺)-8-氨基-4-羟基喹唑啉1w
同化合物1a的制备方法。起始原料用3-氯-4-苄氧基苯胺(40毫克，0.207毫摩尔)，得到橘红色固体(47毫克，60.0％)。Mp：＝247℃；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)：δ8.24(s，1H)，8.17(d，J＝9.0，1H)，7.68(d，J＝9.0，1H)，7.45(m，5H)；7.16(s，1H)，7.05(d，J＝9.1，1H)，6.95(d，J＝9.1，1H)，5.16(s，2H)；Anal.(C21H16N4O4)C，H，N Calcd：64.94，4.15，14.43.
Claims (11)
1.一类具有如下通式的5，8-二取代喹唑啉化合物，
其中，R1：
RO-，RNH；
R2：-NO2；
R3、R4：独立地为卤素，或RO-；
R独立地选自C1-C12直链或支链或环状烷基，C6-C12芳基，其中环状烷基不包括C1-C2环状烷基。
2.根据权利要求1所述的5，8-二取代喹唑啉化合物，其特征在于：
当R1为RO-时，
R2为-NO2，
R选自甲基、乙基。
3.一类5，8-二取代喹唑啉化合物，其特征在于：
所述化合物选自5-苯胺-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-苄胺-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(3-氯苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(4-氯苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(3-甲基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-甲氧基-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-乙氧基-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(4-甲氧基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(4-胺基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(4-苄氧基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-吡咯啉-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(2H-吡咯)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-N-(甲硫氨酸)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-N-(苯丙氨酸)-8-硝基-4-羟基喹唑啉、5-(4-(4-羟基-8-硝基喹唑啉-5-氨基)苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(3-氯-4-甲氧基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(4-羧基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-吡咯-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(3-氯-4-环己氧基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(3-氯-4-羟基苯胺)-8-硝基-4-羟基喹唑啉，5-(4-甲氧基苯胺)-8-氨基-4-羟基喹唑啉，5-(3-氯苯胺)-8-氨基-4-羟基喹唑啉，或5-(3-氯-4-苄氧基苯胺)-8-氨基-4-羟基喹唑啉。
4.如权利要求1所述的5，8-二取代喹唑啉化合物的制备方法，包括如下步骤：
3-氯-2-甲基苯胺出发，经氨基保护、氧化、脱N-保护基、成喹唑啉环、硝化和芳环亲核取代反应得目标化合物，反应式如下：
5.根据权利要求4所述的5，8-二取代喹唑啉化合物的制备方法，其特征在于N-保护基为甲酰基、乙酰基、CBZ、BOC、苄基、FMOC；隋性溶剂为卤代烷烃、甲苯、苯、四氢呋喃、二氧六环或***、醋酸或N，N-二甲基甲酰胺，反应温度为0℃～室温，或加热至溶剂回流。
6.根据权利要求4所述的5，8-二取代喹唑啉化合物的制备方法，其特征在于：
氧化剂为重铬酸酸钾、三氧化铬、高碘酸钠、高锰酸钾水溶液、IBX，Dess-Martin试剂，新制二氧化锰、双氧水，反应温度控制在50℃～120℃，溶剂为卤代烃、甲苯、乙腈、乙酸和水。
7.根据权利要求4所述的5，8-二取代喹唑啉化合物的制备方法，其特征在于N-保护基为FMOC在碱性条件下脱去保护基，溶剂用卤代烃、四氢呋喃、1，4-二氧六环，甲醇、乙醇，温度为室温到溶剂回流温度。
8.根据权利要求4所述的5，8-二取代喹唑啉化合物的制备方法，其特征在于：
环化反应在2-氨基-6-氯苯甲酸与甲酰胺环化为喹唑啉，环化温度为室温到175℃，梯度加热。
9.根据权利要求4所述的5，8-二取代喹唑啉化合物的制备方法，其特征在于：
硝化试剂为发烟硝酸和浓硫酸在0℃～室温，或次硝酸铋和二氯亚砜，或硝酸钾、硝酸镧和浓硝酸，或硝酸钠、硝酸镧和浓盐酸，溶剂用水、卤代烃或四氢呋喃，温度在0℃～室温。
10.根据权利要求4所述的5，8-二取代喹唑啉化合物的制备方法，其特征在于：
胺或醇作为亲核试剂对喹唑啉的5-氯进行芳基亲核取代反应得到不同5-取代基-8-位硝基-喹唑啉化合物，反应溶剂为惰性溶剂四氢呋喃、***、甲苯、乙腈、1，4-二氧六环或N，N-二甲基甲酰胺，在40℃～100℃加热发生亲核取代反应。
11.权利要求1或3所述的5，8-二取代喹唑啉化合物在制备治疗人类乳腺癌和卵巢癌肿瘤药物中的应用。
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110406 Termination date: 20150508 |
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| EXPY | Termination of patent right or utility model |