CN1850972A - 唾液酸寡糖－壳聚糖复合体及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种制备工序简便、无需使用有害化学试剂、并且对多种流感病毒具有吸附效果的唾液酸寡糖－壳聚糖复合体，其特征在于：唾液酸寡糖以离子结合的形式结合于壳聚糖形成复合体。所述唾液酸寡糖为以下物质的一种或多种：唾液酸，唾液酸衍生物，含有唾液酸的糖链，含有唾液酸衍生物的糖链，以唾液酸或唾液酸衍生物作为官能团与分子内含有的化合物。本发明还提供其制造方法及含有该复合体的病毒吸附剂，以及以本发明的病毒吸附剂为有效成分的抗病毒药、卫生用品及工业制品。

Description

唾液酸寡糖-壳聚糖复合体及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及唾液酸、唾液酸衍生物或含有上述物质的化合物(以下，将其总称为唾液酸寡糖)，与壳聚糖经离子结合形成的复合体、其制造方法及含有该复合体的病毒吸附剂。同时，本发明还涉及以本发明的病毒吸附剂为有效成分的抗病毒药、卫生用品及工业制品。

背景技术

现有技术中有通过有机合成和酶促合成的方法将唾液酸寡糖结合于壳聚糖而形成复合体的报道，但该复合体不仅需要精制的唾液酸寡糖，而且都是通过共价键方式使唾液酸寡糖结合于高分子载体上，存在着合成工序繁杂、造价高和使用有毒有害试剂的缺陷或不足。下面就相关概念和资料检索进行说明。

唾液酸狭义地说是N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)、N-羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc)等神经氨酸的酰基衍生物的酸性糖的总称。特别是唾液酸的脱氨化物、乙酰化物、硫酸化物、甲基化物、乳酰基化物或内酯形成体等唾液酸的衍生物也在自然界多种存在，且还有人工合成的多种唾液酸衍生物，广义地说，唾液酸也包含上述唾液酸衍生物。因此，在本发明说明书中，唾液酸寡糖不是狭义的唾液酸，也包含唾液酸的衍生物，一般还包括含有唾液酸或唾液酸衍生物的化合物。

上述唾液酸寡糖结合于糖蛋白、葡糖胺、糖脂质的糖链非还原末端，用于阴性电荷的表达的同时，分布于生物体的细胞表面，作为构成糖蛋白、糖脂质的糖链的糖担当着重要的生物学功能。例如，在与癌细胞的转移、炎症作用、神经细胞的伸展等有关的糖链的先端多数场合存在着唾液酸。

并且，代表流感病毒的几种病毒的感染，是通过病毒侧的特定分子(配合基)识别存在靶细胞表面的含有唾液酸的复合糖质糖链(受体)后，引起特异性的吸附而进行的。例如，某种流感病毒因在外膜有唾液酸酶和红血球凝集素(血球凝集素)，所以识别由(N-乙酰神经氨酸α2→3-D-半乳糖β1→4-N-乙酰基-D-グ葡糖胺)构成的3糖结构，进行感染。

同时，壳聚糖是存在于螃蟹、虾、磷虾及昆虫类的甲皮中的N-脱乙酰基化N-乙酰基-D-葡糖胺以β-1，4结合后得到的甲壳素经脱乙酰基得到的聚葡糖胺。壳聚糖是直链状高分子物质，多数的氨基在其直链上等间隔存在，作为天然物质是具有优良的特性的唯一的阳离子性高分子。

壳聚糖因其氨基多糖的特殊的结构，具有各种物理/化学特性及在生物体内的生理活性而应用于各种的用途。例如，固定化酶用载体、金属离子吸附剂、免疫强化剂、创伤治疗促进剂、人工脏器、抗菌剂等在各领域的应用均有进展。同时，只要化学地或生物地修饰壳聚糖分子，即如通过在壳聚糖分子上导入其它的功能性分子或功能基，可赋予壳聚糖以新型功能(物理/化学特性或生物体内的生理活性)，并可巨大地扩大用途。

近年来，利用病毒对唾液酸寡糖有识别能力这一特性，将含有唾液酸寡糖固定于壳聚糖等适当的高分子而构成的抗病毒材料的开发正在逐步发展。例如，有关于使唾液酸与聚苯乙烯或聚丙烯酰胺结合的病毒吸附体(文献1、文献2、专利文献1)，或通过连接分子将唾液酸寡糖结合于壳聚糖的复合体(专利文献2、专利文献3)等的报道。另外还有关于使含有带甲酰基的糖苷配基部分的天冬酰胺结合型糖蛋白质糖链结合于壳聚糖的氨基上的含有天冬酰胺结合型糖蛋白质糖链的壳聚糖的报道(参照专利文献2)。

但是，这些均是使用实质上精制过的唾液酸寡糖来进行配制，具有制造成本上的不利因素以外，还有可吸附病毒的范围窄，只能有效捕捉特定病毒的现状。并且，这些传统技术均是通过共价键使唾液酸寡糖结合于高分子载体上的，不仅需大量繁琐的合成工序，还必须使用有毒或对环境有害的化学试剂、有机溶剂。因此，除在操作性及制造成本方面上有不利的一画外，在药品、卫生用品等医药领域的应用上也受到很大限制。

【文献1】A.Tsuchida，K.Kobayasi，N.Matsubara，T.Muramatu，T.Suzuki，and Y.Suzuki；Glycoconjugate Journal 15，1047-1054(1998).

【文献2】T.Furuike，S.Aiba，T.Suzuki，T.Takehashi，Y.Suzuki，K.Yamada，S-I.Nishimura；J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2000，3000-3005.

【专利文献1】日本国特许厅、日本特开平9-234317号公报。发明人：川濑三雄、川濑优治、山田和成。申请人：日本碍子株式会社。公开日：1997年9月9日。

【专利文献2】日本国特许厅、日本特开2003-301002号公报。发明人：牧村裕、熊谷英颜、山本宪二。申请人：财团法人野口研究所。公开日：2003年10月21日。

【专利文献3】日本国特许厅、日本特开2005-247907号公报。发明人：李学兵、西村绅一郎。申请人：西村绅一郎、北海道电力株式会社、株式会社生物有机化学研究所。公开日：2005年9月15日

发明内容

本发明针对现有技术中存在的缺陷或不足，提供一种制备工序简便、无需使用有害化学试剂、并且对多种病毒具有吸附能力的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体。

本发明还提供上述唾液酸寡糖-壳聚糖复合体的制备方法。

本发明还提供含有上述唾液酸寡糖-壳聚糖复合体的病毒吸附剂。

本发明还提供以上述病毒吸附剂为有效成分的抗病毒药、卫生用品或工业制品。

本发明的技术构思为，通过利用唾液酸寡糖的阴离子性和壳聚糖的阳离子性，使两者以离子结合的形式结合为唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，从而提供一种新的、有效的、且用途广泛的产品。

本发明技术方案如下：

唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其特征在于：唾液酸寡糖以离子结合的形式结合于壳聚糖形成复合体。

所述唾液酸寡糖为以下物质的一种或多种：唾液酸，唾液酸衍生物，含有唾液酸的糖链，含有唾液酸衍生物的糖链，以唾液酸或唾液酸衍生物作为官能团与分子内含有的化合物。

所述唾液酸寡糖来源于哺乳类动物的初乳。

所述唾液酸寡糖为以唾液酸乳糖为代表的唾液酸寡糖。

上述唾液酸寡糖-壳聚糖复合体的制备方法，其特征在于：利用唾液酸寡糖的阴离子性和壳聚糖的阳离子性，使唾液酸寡糖与壳聚糖进行离子结合。

所述唾液酸寡糖为从天然物分离的作为浓缩物的混合物。

所述混合物为牛乳中得到的唾液酸乳糖为代表的唾液酸寡糖的混合物。

病毒吸附剂，其特征在于，包括上述唾液酸寡糖-壳聚糖复合体。

抗病毒用的药品、卫生用品或工业制品，其特征在于，以上述病毒吸附剂为有效成分。

本发明为解决上述以往的问题，提供可吸附更多种类的病毒，且无繁杂工序及有害的化学试剂，可容易制备且可作为药品使用的病毒吸附体。

本发明通过使唾液酸寡糖、特别是来源于天然材料的乳、特别是牛乳、更优选牛初乳的含有唾液酸乳糖且具有种种结构的唾液酸寡糖以离子结合形式直接结合于壳聚糖，从而解决上述的课题。

即本发明涉及一种唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其着眼于唾液酸或含有唾液酸的糖链(唾液酸寡糖)的阴离子性，使唾液酸寡糖以离子结合形式吸附于阳离子性的壳聚糖分子链上。特别是涉及唾液酸寡糖，优选唾液酸乳糖，更具体地说是来源于乳或其加工产物的唾液酸寡糖、特别是来源于牛乳的唾液酸寡糖与壳聚糖的离子复合体。同时本发明提供作为以上述壳聚糖复合体为有效成分的病毒吸附体，其有效的抗病毒试剂或滤膜、口罩等的病毒吸附工业制品。

另外，本发明还涉及唾液酸寡糖-壳聚糖复合体的制造方法，其为使含有唾液酸或含有唾液酸糖链与壳聚糖进行离子结合。特别是本发明涉及以含有上述本发明的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体的病毒吸附剂为有效成分的药或工业产品(例如纤维等)。

更详细地说，本发明如下(1)～(17)所述。

(1)唾液酸或含有唾液酸的糖链与壳聚糖进行离子结合的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体。

(2)上述(1)中所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其唾液酸或含有唾液酸的糖链是唾液酸寡糖。

(3)上述(1)～(2)中任一项所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其唾液酸或含有唾液酸的糖链来源于乳或其加工物。

(4)上述(3)中所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其乳为牛乳。

(5)上述(4)中所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其牛乳为初乳。

(6)上述(1)～(5)中所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其壳聚糖的分子量在200～200万的范围内。

(7)上述(1)～(5)中所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其壳聚糖的脱乙酰化度在100％～10％的范围内。

(8)制造唾液酸寡糖-壳聚糖复合体的方法，其为使含有唾液酸或含有唾液酸的糖链与壳聚糖进行离子结合。

(9)上述(8)中所述的方法，其唾液酸或含有唾液酸的糖链是唾液酸寡糖或其混合物。

(10)上述(9)中所述的方法，其唾液酸寡糖或其混合物来源于乳。

(11)上述(10)中所述的方法，其乳为牛乳或其加工产品。

(12)病毒吸附剂，其含有上述(1)～(7)中任一项所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体。

(13)上述(12)中所述的病毒吸附剂，其唾液酸寡糖-壳聚糖复合体含有唾液酸或含有唾液酸的糖链的混合物。

(14)医药卫生用品或工业纤维制品，其含有上述(12)或(13)中所述的病毒吸附剂。

(15)上述(14)中所述的医药卫生用品，其医药卫生用品是指口服药、外用药、漱口药、或喷剂或这些药的制造原料。

(16)上述(14)中所述的纤维制品，其纤维制品是指滤膜或口罩或这些药的加工原料。

(17)病毒捕捉用组合物，其含有上述(1)～(16)中任一项所述的壳聚糖复合体或病毒吸附用载体。

本发明的特征为使用唾液酸、唾液酸衍生物或将其作为官能团与分子内含有的化合物，并使这些化合物以离子结合的形式吸附于壳聚糖形成复合体。

本发明中的“唾液酸”不仅包含作为神经氨酸的酰基衍生物的唾液酸，还包含这些物质的各种衍生物，例如，包含脱氨化物、乙酰化物、硫酸化物、甲基化物、乳酰基化物等的神经氨酸衍生物。另外，本发明的唾液酸寡糖是指含有唾液酸的1种或2种以上的糖类，可例举为上述的羧酸基或含有单糖类、二糖类或低聚糖类、或这些糖的衍生物等。优选的唾液酸寡糖是指具有羧酸基的糖类，例如唾液酸寡糖。唾液酸寡糖中，自然界中大量分布的唾液酸乳糖不仅在病毒的捕捉性及反应性上，从易获得上也为特别优选，但并不限于此。本发明的唾液酸寡糖虽可使用化学上提纯的单一的物质，但从易获得及价格上考虑，也可使用从天然物分离的作为浓缩物的混合物。通过使用这样的唾液酸寡糖混合物，从可同时吸附多种病毒上，作为本发明的病毒吸附体的有效的病毒吸附剂，在不以特定的病毒为目标时，作为本发明的唾液酸寡糖，优选使用以从自然界特别是乳、更优选为牛乳中得到的唾液酸乳糖为代表的唾液酸寡糖的混合物。

本发明的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，是唾液酸寡糖的羧基和壳聚糖分子的氨基以离子结合吸附生成的。具体地说，是在用醋酸等可溶解壳聚糖的适当的溶剂中溶解壳聚糖，加入唾液酸寡糖，使壳聚糖的氨基和糖链中的羧基吸附后，经透析等众所周知的精制过程，通过进行冷冻干燥，得到所需的复合体。

在此，壳聚糖与唾液酸寡糖的复合体可由壳聚糖和唾液酸，或含有壳聚糖和唾液酸的糖链分别配制，但希望使唾液酸寡糖的混合物和壳聚糖反应后配制。有关的混合物希望使用乳，或来自动物、例如牛、山羊、绵羊的乳，特别是牛初乳的以唾液酸乳糖为代表的唾液酸寡糖。

乳中除具有乳糖等的中性糖链以外，还具有含有游离唾液酸或唾液酸结合后的唾液酸乳糖等唾液酸的糖链，特别是含有牛初乳中糖含量相当于5％～20％的唾液酸寡糖，且关于这些的多种多样的结构(Robert G.JensenとMarvin P.Thompson编、Handbook of MilkComposition、1995年、Academic Press刊、ISBN：0123844304。浦岛  匡、乳业技术53卷56-68页、2003年。Paul MacJarrow和Janneke van Amelsfort-Schoonbeek、International Dairy Journal、14卷571-579页、2004年)。

一般地，众所周知，病毒因其种类不同所识别结合的唾液酸的糖链结构也不同，所以通过使用来自具有多种多样结构的乳、优选牛乳的唾液酸寡糖制备病毒的捕捉体，可捕捉更多种类的病毒。除来自牛乳的唾液酸寡糖以外，使用从含有人的初乳的种种起源精制的具有各种不同结构的多种唾液酸寡糖，也可配制本发明的壳聚糖复合体，但从容易获得或精制操作等考虑，使用牛乳、优选使用牛初乳中的唾液酸寡糖。牛常乳(牛乳)中含有比牛初乳含量少的唾液酸寡糖，所以优选利用比牛初乳容易获得的牛初乳中的唾液酸寡糖。牛初乳及牛乳除作为生乳外，还作为黄油、奶酪、配方奶、加工乳、奶粉、脱脂奶粉、牛初乳蛋白质等加工食品、健康食品、动物医药品等利用。在这些已有的商品的加工制造过程中生成的、包含市场销售的奶酪等的加工物中，有唾液酸寡糖被精制或被浓缩的状态的物质，其也优选作为本发明的唾液酸寡糖的原料。

如此制备的本发明的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，可将其单独作为吸附病毒用病毒捕捉体制成有效的病毒吸附剂，也可与各种载体混合作为病毒吸附体制备成有效的病毒吸附用组合物。本发明的病毒吸附剂包含单独含有本发明的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，以及如上述的与水等溶剂状载体混合后或溶解后的病毒吸附用组合物。

与发明的病毒吸附剂形成复合物用的载体，只要是不对病毒的灭活化或病毒的吸附产生不利，均无限制。例如可例举为水等的溶剂、纤维材料、纤维素等的制剂材料等。在此类唾液酸寡糖-壳聚糖复合体与载体形成的混合物的用途中，例如，可将唾液酸寡糖-壳聚糖复合体溶解于水中形成的溶液作为病毒感染预防用的漱口药等使用。

而且，本发明提供含有本发明的病毒捕捉剂的工业纤维制品。本发明的纤维制品，可通过物理的或化学的方法使纤维材料含有本发明的病毒吸附剂，例如，可通过将本发明的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体在织布等上喷雾或侵浸、揉入纤维中等方法制造。本发明的纤维制品例如可例举为滤膜、口罩、毛巾、手绢或作为其物的加工原料的纤维制品等。本发明的病毒吸附剂，将其混入纤维材料等的各种材料中，可制备各种制品的病毒吸附体产品。

而且，本发明的壳聚糖复合体，与水或适当的溶剂混合或溶解，作为本发明的病毒吸附剂以捕捉病毒用组合物的形态，不仅可制成空气清洁用滤膜、口罩等各种纤维制品，还可通过在医疗设施、医疗设备用品、用具、等或被病毒污染的家畜类、其畜舍等涂复、喷雾或混入等，作为病毒感染的预防材料使用。

特别是本发明的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，构成其的成分均来自天然物，且对人或家畜等无毒性，所以本发明的病毒捕捉剂对环境无害，可作为家庭用或家畜舍、特别是养鸡场用的洗涤剂或病毒防除剂使用。

本发明的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体可简便、廉价地制造的同时，还可有效地捕捉多种类的病毒。而且，含有来自天然物的原料的本发明的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体对环境及人体等均很安全，所以具有广泛的适用范围。

具体实施方式

本发明中可使用的壳聚糖，包括作为食品材料、试剂等贩卖的壳聚糖，或用以往已知的种种方法从天然资源中制备的壳聚糖等直接使用，对其来源无特别限制。

本发明中可使用的唾液酸寡糖可例举为唾液酸乳糖、N-乙酰神经氨酸、N-羟乙酰神经氨酸、脱氨氨酸、上述物质的乙酰化物、硫酸化物、甲基化物、脱氧体、脱氢体或乳糖化物等，包含唾液酸、羧基的糖化合物。可单独使用上述物质，但希望使用2种以上唾液酸寡糖的混合物，还希望使用来自乳例如牛乳、特别是牛初乳或牛乳的唾液酸寡糖。而且，优选使用唾液酸寡糖与其他中性糖的混合物，例如，来自乳或初乳，特别是牛初乳或牛乳的乳糖与唾液酸寡糖的混合物。此时，只有酸性糖的唾液酸寡糖结合于壳聚糖，进行吸附反应后，可通过透析、过滤等过程除去中性糖，可从天然物(例如牛乳或初乳)省略唾液酸寡糖的精制过程，所以在操作性及制造成本上具有有利的一面。

壳聚糖与唾液酸寡糖的结合反应可在pH3～10，优选pH4～7的范围的溶液或悬浮液中进行。详细地说，使壳聚糖溶解或悬浮于适当的溶剂中，加入唾液酸寡糖使其结合后，经过透析、过滤、沉淀等已知的精制过程，进行减压干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等，获得唾液酸寡糖-壳聚糖复合体。作为结合反应的溶剂，可使用醋酸、柠檬酸、乳酸、蚁酸、磷酸、盐酸、硝酸、硫酸或含有上述1种或2种以上的缓冲溶液、水溶液或有机溶液等。

以下，以实施例进一步说明本发明。

实施例

实施例1

将壳聚糖(PSH-80、烧津水产化学工业株式会社)6mg溶解于1ml的0.5％醋酸中。在唾液酸乳糖(Sigma公司)中加入预先溶解的25mg水溶液0.5ml，25℃搅拌12小时。将反应液移入透析管(透过分子量约14,000)，用蒸馏水进行5日的透析(2次交换/日)，冷冻干燥最终液，获得11mg乳糖-壳聚糖复合体。通过¹H-NMR(D₂O、Bruker公司、500MHz)鉴定结构。

¹H-NMR(D₂O、500MHz)δ：

5.121(0.45H，d，J＝3.6Hz，H-1 ofαGlc in SiaLac)，

4.58-4.40(4.5H，m，H-1 of Gal，H-1 ofβGlc in SiaLac，H-1 of GlcN and GlcNAc)，

4.01-3.07(32.9H，m，protons from sugar rings)，

2.80(2.78H，br，H-2 of GlcN)，

2.63(1H，dd，H-3eq of Sia)，

1.97-1.94(4.63H，m，COCH₃)，

1.66(1H，t，H-3ax of Sia)。

已证明从来自¹H-NMR光谱的1.66附近的唾液酸3位的峰值与来自2.80附近的壳聚糖葡糖胺的峰值的积分值，对于壳聚糖的葡糖胺残基，唾液酸乳糖以35％的比例吸附于壳聚糖的主链上(即在复合体中的葡糖胺残基与唾液酸乳糖的存在摩尔比为1∶0.35)。

实施例2

从北海道上川郡清水町的牧场回收的牛初乳800ml中加入800ml氯仿进行搅拌脱脂。重复2次回收水相组分后，加入乙醇配成80％乙醇溶液，用离心分离除去沉淀蛋白质以回收上清，进一步将其冷冻干燥后，得到初乳的糖链组分16.4g。将所得初乳的糖链组分通过质量分析仪(MALDI-TOF MS，UltraFLEX，Brruker Daltonics社)分析时，鉴定了相当于乳糖(Lac，Galβ1→4Glc)、6’SLN(Siaα2→6Galβ1→4GlcNac)、6’SL(Siaα2→6Galβ1→4Glc)又は3’SL(Siaα2→3Galβ1→4Glc)、及びDSL(Siaα2→8Siaα2→3Galβ1→4Glc)的光谱。MALDI-TOF MS[M+Na]⁺：

Lac(C12H22011)          计算值：365.1、

                          实测值：364.8；

6’SL或3’SL(C23H39NO19)计算值：656.2、

                          实测值：656.0；

6’SLN(C25H42N2O19)     计算值：697.2、

                          实测值：698.0：

DSL(C34H56N2O28         计算值：963.8、

                          实测值：963.1。

接下来，将壳聚糖(PSH-80、烧津水产化学工业株式会社)6mg溶解于1ml的0.5％醋酸中。在其中加入预先将上述所得100mg初乳溶解的水溶液1ml，25℃搅拌48小时。将反应液移入透析管(透过分子量约14,000)，用蒸馏水进行5日透析(2次交换/日)，冷冻干燥最终液，获得9mg唾液酸寡糖-壳聚糖复合体。通过¹H-NMR(D₂O、Bruker公司、500MHz)鉴定结构。

¹H-NMR(D₂O、Bruker社、500MHz)δ：

5.12(0.29H，m，H-1 of αGlc in Sialooligosaccharide)，

4.58-4.40(5.6H，m，H-1 of Gal，H-1 of βGlc in Sialooligosaccharide，H-1 of GlcN andGlcNAc)，

4.01-3.07(35.9H，m，protons from sugar rings)，

2.80(4.38H，br，H-2 of GlcN)，

2.63(1H，m，H-3eq of Sia)，

1.97-1.94(5.45H，m，COCH₃)，

1.66(1H，m，H-3ax of Sia)。

已证明从来自¹H-NMR光谱的1.66附近的唾液酸3位峰值与来自2.80附近的壳聚糖葡糖胺的峰值的积分值，对于唾液酸寡糖以23％的比例吸附于壳聚糖的主链上(即在复合体中的葡糖胺残基与唾液酸残基存在摩尔比为1∶0.23)。

实施例3

唾液酸寡糖-壳聚糖复合体对禽流感病毒的血凝抑制试验(HI)

1.实验材料：

样品1：实施例1的唾液酸乳糖-壳聚糖复合体

样品2：实施例2的唾液酸寡糖糖链-壳聚糖复合体

样品3：壳聚糖(PSH-80、日本烧津水产化学工业株式会社)

H5、H9、H7禽流感三种亚型血凝抗原

1％鸡红血球

96孔V型板

2.实验方法：

在孔96孔V型板不同孔中分别加入事先配制好的不同浓度的25ul被检样品，然后每孔分别加入25ul 4HA抗原，在微量振荡器上混匀，室温放置60分钟。60分钟后，每孔再加入25ul 1％鸡血球，在微量振荡器上混匀，室温放置30分钟。观察红细胞凝集情况，无凝集判断为(-)，凝集程度由轻到重分别判断为(+～++++)

3.试验结果：

血凝抑制试验(4℃条件)

H5亚型	样品浓度(ug/ml)
								样品编号	125	62.5	31.5	25	20	15.75	10
1	+	-	-	-	-	-	+
								2	++++	-	-	-	-	-	+
3	++++	++++	++++	++++	++++	++++	++++
								H7亚型
样品编号	125	62.5	31.5	25	20	15.75	10
								1	+	-	-	-	-	+	+
2	++	++	-	-	-	+	+
								3	++++	++++	++++	++++	++++	++++	++++
H9亚型
								样品编号	125	62.5	31.5	25	20	15.75	10
1	+	+	-	-	-	-	+
								2	++	-	-	-	-	+	+
3	++++	++++	++++	++++	++++	++++	++++

结果表明，唾液酸寡糖-壳聚糖复合体对禽流感病毒有明显的血凝抑制作用

本发明用简便的方法及使用来自对环境无害的天然物的原料，提供唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，本发明的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，对各种病毒具有抗病毒活性、病毒捕捉活性，并作为病毒的钝化及捕捉的材料有效。

发明的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，因对人体及动物安全，对环境无害，且成本低，对病毒具有强活性，所以可作为防御、预防、诊断由各种病毒引起的污染和疾病用的新型材料里用于工业上。

Claims (9)

1.唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其特征在于：唾液酸寡糖以离子结合的形式结合于壳聚糖形成复合体。

2.根据权利要求1所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其特征在于：所述唾液酸寡糖为以下物质的一种或多种：唾液酸，唾液酸衍生物，含有唾液酸的糖链，含有唾液酸衍生物的糖链，以唾液酸或唾液酸衍生物作为官能团与分子内含有的化合物。

3.根据权利要求1所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其特征在于：所述唾液酸寡糖来源于哺乳类动物的初乳。

4.根据权利要求1所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体，其特征在于：所述唾液酸寡糖为以唾液酸乳糖为代表的唾液酸寡糖。

5.如权利要求1-4之一所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体的制备方法，其特征在于：利用唾液酸寡糖的阴离子性和壳聚糖的阳离子性，使唾液酸寡糖与壳聚糖进行离子结合。

6.根据权利要求5所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体的制备方法，其特征在于：所述唾液酸寡糖为从天然物分离的作为浓缩物的混合物。

7.根据权利要求5所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体的制备方法，其特征在于：所述混合物为牛乳中得到的唾液酸乳糖为代表的唾液酸寡糖的混合物。

8.病毒吸附剂，其特征在于，包括如权利要求1-4之一所述的唾液酸寡糖-壳聚糖复合体。

9.抗病毒用的药品、卫生用品或工业制品，其特征在于，以权利要求8所述的病毒吸附剂为有效成分。