CN1796400B

CN1796400B - 从竹笋中提取的植物甾醇类提取物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN1796400B
Application number: CN2004100992198A
Authority: CN
Inventors: 张英; 陆柏益; 吴晓琴; 梁艳
Original assignee: Fujian Jian'ou Ying Food Production Co Ltd; Hangzhou Zhejiang University Lifu Biology Technology Ltd Co
Current assignee: Fujian Jian'ou Ying Food Production Co Ltd; Hangzhou Zhejiang University Lifu Biology Technology Ltd Co
Priority date: 2004-12-29
Filing date: 2004-12-29
Publication date: 2010-06-23
Anticipated expiration: 2024-12-29
Also published as: CN1796400A

Abstract

本发明公开了一种从竹笋中提取的竹笋甾醇提取物及其制法和用途。本发明竹笋甾醇提取物含有5-50％总甾醇，并且在总甾醇中的β-谷甾醇含量为10-40％，β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为10～40∶1～3∶2～5。本发明的竹笋甾醇提取物具有良好的消炎、抑制白血病细胞增生等功效，可用于化妆品、食品、保健品、药品领域。

Description

从竹笋中提取的植物甾醇类提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及农副产品深加工及综合利用领域。更具体地涉及一种从竹笋中提取的植物甾醇类提取物及其制法和用途。

背景技术

竹子是禾本科(Gramineae)多年生常绿植物，全世界约有70多属、1200多种，竹林面积约2000万公顷(3亿亩)，东南亚地区及其附近岛屿是世界竹子分布的中心。我国位于世界竹子分布的中心地区，是世界上主要产竹国，素有“竹子王国”之称，拥有十分丰富的竹类资源，拥有竹林面积约400万公顷，竹笋年产量为250万吨，其中经济利用价值较高的毛竹(phyllostachys pubescens)林的面积约为250万公顷，约占世界毛竹总量的90％以上。

关于竹子有效成份及其生物活性的研究，日本的研究工作起步较早，主要集中在对赤竹属(Sasa Makino et shbata)的赤竹亚属(Subgen.Sasa)中华箬竹亚科(Subgen.Sasamorpha)中的一类草本型竹子[(中)竹草，(英)Bamboo grass，即Sasa albomarginta Makino&Shibata等品种]的研究。中国、印度、巴西、美国和韩国等也有对竹子有效成分的研究，基本局限在具有本国资源特色的竹子品种上。

中国是竹笋生产、利用和研究的古国。然而国内外科研工作者在对竹笋资源的深入开发和综合利用上仅仅作了初步的探索，如利用笋壳、笋头制备膳食纤维、提取过氧化物酶、分离活性蛋白、多糖，开发高营养的饲料等。

Sakai koji等(1999)首次从笋壳中分离出2种抗氧化成份：苜蓿素(Tricin)和紫杉叶素(Taxifolin)，并用POV方法测得其抗氧化活性分别为α-生育酚的10％和1％。Ishii-T等人对竹笋细胞壁化学成分进行了***的研究，从中分离得到果胶多糖、半纤维多糖、rhamnogalacturonan、硼多糖复合物、p-coumaroyl-或feruloylated-阿(拉伯)糖基木聚四糖等组分，并发现竹笋的多糖组成与大槭树等双子叶植物相似。

然而，迄今为止人们对竹笋中的许多构成成分和功能还了解甚少。为了更有效地开发和利用竹笋资源，本领域迫切需要发现和开发竹笋中具有有益功能的各种成分。

发明内容

本发明的目的是提供一种从竹笋中提取有益成分-即竹笋的植物甾醇类提取物，及其制备方法和用途。

在本发明的第一方面，提供了一种竹笋甾醇提取物，该提取物中总甾醇含量为5-50％，并且所述的甾醇包括β-谷甾醇、豆甾醇和芸苔甾醇。

在另一优选例中，所述的甾醇中至少30％由β-谷甾醇、豆甾醇和芸苔甾醇构成。

在另一优选例中，所述的提取物的总甾醇中的β-谷甾醇含量为10-40％，并且β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为10～40∶1～3∶2～5。

在另一优选例中，所述的提取物中总甾醇含量为20-40％，并且总甾醇中的β-谷甾醇含量为15-30％。

在另一优选例中，β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为15～30∶2～3∶3～4。

在另一优选例中，所述的提取物外观为淡黄或金黄的膏状物，经溴化钾压片后的红外图谱显示该提取物在3440、2925、2850、1710、1465和720cm^-1左右处有特征性吸收峰；将提取物溶于光谱纯的二氯甲烷后，在190～700nm的波长范围内进行扫描，显示在240nm左右处有最强吸收，在275nm左右处有次强吸收。

在本发明的第二方面，提供了一种组合物，它含有0.01-99.9wt％(更佳地0.1-90wt％)本发明的竹笋甾醇提取物和可接受的载体(包括药学上、食品学上或化学品上可接受的载体)。

在另一优选例中，所述的组合物是药物组合物、保健品组合物、食品组合物或化妆品组合物。

在本发明的第三方面，提供了一种本发明竹笋甾醇提取物的制备方法，它包括步骤：

(a)在分离釜中，于以下条件下，对竹笋原料进行超临界流体萃取：萃取剂为CO₂，萃取压力为15～35MPa，萃取温度为40～70℃，分离温度为30～50℃，分离压力为4～8MPa，循环动态萃取1～5h，

(b)从分离釜中取出萃取物，从而获得竹笋甾醇提取物。

在另一优选例中，步骤(a)中的萃取压力为20～30MP，萃取温度为45～65℃，并且可使用选自下组的夹带剂：C1～C4的醇或酮类有机溶剂，其用量按照重量计算为竹笋原料量的5～15％。

在本发明的第四方面，提供了一种本发明竹笋甾醇提取物的用途，它被用于制备消炎的药物、日用化妆品、或保健品，或者用于制备防治白血病的药物或保健品。

附图说明

图1是毛竹笋甾醇提取物的红外光谱图。经溴化钾压片后的红外图谱显示：该提取物在3440、2925、2850、1710、1465和720cm^-1左右有特征性吸收峰。

图2是毛竹笋甾醇提取物的紫外光谱图。提取物溶于光谱纯的二氯甲烷后，在190～700nm的波长范围内进行扫描，结果显示：在240nm处有最强吸收，在275nm处有次强吸收。

图3是竹笋甾醇提取物的GC-MS谱图。竹笋甾醇提取物的GC-MS图谱显示：20min前都是不饱和脂肪酸，26min左右为β-谷甾醇，23.5min左右为芸苔甾醇，24.5min左右为豆甾醇。

图4是β-谷甾醇(β-sitosterol)的结构及MS谱图。

图5是豆甾醇(stigmasterol)的结构及MS图谱。

图6是芸苔甾醇(campesterol)的结构及MS图谱。

具体实施方式

本发明人经过多年深入研究，对竹笋的各种成分进行了提取分离，获得了一种可有效消炎、防治心脑血管和白血病的提取物，对该提取物的研究表明，该提取物主要含β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇等成分。在此基础上完成了本发明。

如本文所用，竹笋指竹子膨大的芽和幼嫩的茎。可用于本发明竹笋可以是笋肉，也可以是竹笋全株，也可以是竹笋加工过程中产生的废弃物，如笋壳、笋头和笋衣等。优选原料是笋壳和笋头。

本发明采用的原料可以进行预处理，也可以不经过预处理。一种优选原料是粉末形式的竹笋。例如，收集竹笋、笋肉笋壳、笋头或笋衣，切成片后，打成浆压榨或直接晾晒到一定程度，再干燥到含水量约5～10％，将其粉碎到约20～40目的粉末。

可用于本发明的竹子品种没有特别限制，可以是不同属的竹子，优选刚竹属品种的竹笋为主，如毛竹。

如本文所用，“本发明的活性物质”指竹笋甾醇提取物。较佳地，该竹笋甾醇提取物的总甾醇含量为5-50％，其中β-谷甾醇含量为10-40％，β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为10～40∶1～3∶2～5。

如本文所用，“本发明的活性物质制剂”或“本发明的活性组合物”指含有竹笋甾醇提取物的组合物，包括药物组合物和保健品组合物。

本发明的竹笋甾醇提取物宜用超临界流体萃取技术提取，虽然也可其他方法提取。

一种优选的方法是采用超临界流体萃取技术从竹笋及其笋加工废弃物(笋壳、笋头、笋衣)中提取甾醇类化合物。在一优选例中，萃取剂为CO₂，萃取压力为15～35MPa，萃取温度为40～70℃，分离温度为30～50℃，分离压力为4～8MPa，并可在萃取过程中加入醇或酮作为夹带剂，起到增效作用。

在更优选例中，将约20-40目竹笋粉末放入超临界萃取釜中，萃取剂选CO₂，CO₂经压缩机升压同时对萃取釜加温，当萃取压力达到15～35MPa，萃取温度达到40～70℃时，开始循环；在循环过程中，CO₂和萃取物在分离器中经减压，将萃取物在分离器中析出，CO₂循环使用，分离釜1设定分离压力为6～8MPa、温度为35～45℃，分离釜2设定分离压力为4～7MPa、温度为30～35℃；在萃取过程中使用或不使用夹带剂的状态下，循环动态萃取1～5h，使用的夹带剂可以是C1～C4的醇或酮类有机溶剂(如甲醇、乙醇、丙酮、丁醇或其混合物等)，用量一般为原料重量的5～15％。萃取完成后，从分离釜中取出萃取物，经低温干燥、粉碎后，就得到竹笋甾醇提取物，并从分离釜中回收夹带剂，停机从萃取釜中取出萃余物。

本发明的竹笋甾醇提取物是一种以β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇为主的混合物。用Liebermann Burchard分光光度法检测，以β-谷甾醇为标准品，测得提取物中总甾醇的含量为5～50％(较佳地为20-40％)；用GC及GC-MS技术分析，其中β-谷甾醇含量为10～40％(较佳地为15-30％)，β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为10～40∶1～3∶2～5，更佳地为15～30∶2～3∶3～4。

本发明的竹笋甾醇提取物具有消炎、抑制白血病细胞增生等有益作用，因此可用于制备消炎、防治白血病的药物、日用化妆品、保健品。因此，本发明还提供了一种含有本发明的竹笋甾醇提取物作为有效成份的组合物(包括药物组合物、保健品组合物、食品组合物和化妆品组合物等)。这些组合物可用于预防、治疗或辅助治疗炎症。此外，本发明的竹笋甾醇提取物还可用于制备降胆固醇等防治心脑血管疾病的药物、保健品和食品。

在获得竹笋甾醇提取物后，可用常规方法将其与药学上、食品学上或保健品或化妆品上可接受的载体、赋形剂或稀释剂相混合，形成本发明的药物组合物、食品组合物、保健品组合物或化妆品组合物。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。

以药物组合物或保健品组合物为例，它们可以为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液)或其他合适的形状。本发明的活性成分(竹笋甾醇提取物或其提取物)的含量通常为组合物重量的1-99％，较佳地为2-95％，更佳地为5-90％，最佳地10-80％。

药物组合物可以为单剂或多剂形式。按施用剂量计，通常含有10-2000mg/剂，较佳地约20-1000mg/剂，更佳地50-500mg/剂。

本发明的药物组合物可以通过常规途径进行给药，优选方式是口服。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明药物的施用量，按活性物质计算，通常为每天约0.1-500mg/kg体重，较佳地约0.5-50mg/kg体重。此外，本发明的制剂还可与其他治疗剂一起使用，例如，其他治疗剂包括各种现有的消炎药。

本发明的主要优点是：

(a)提供了一种来源广阔、组成明晰、品质优良、质量可控、用途广泛并具有多种生理和药理活性的竹笋甾醇提取物。

(b)通过超临界CO₂流体萃取技术实现了竹笋及其加工废弃物中植物甾醇的高效提取，并且工艺操作简便，得到的竹笋甾醇提取物质量好，品质稳定。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

通用方法

1)、竹笋甾醇提取物中植物甾醇含量测定——Liebermann Burchard比色法

将样品用三氯甲烷萃取溶解后取下层三氯甲烷层。准确移取1ml三氯甲烷样品溶液，加入醋酐2ml和浓硫酸1滴，振荡摇匀后用1cm的比色杯在625nm波长处测定吸光值。每一个样品平行测定2次，根据标准曲线换算成相应的总甾醇含量，取平均值得到样品中植物总甾醇的含量。

2)、竹笋甾醇提取物的有效成分分析——气相及气质联用(GC-MS)

通过使用气质联用(GC-MS)和气相色谱分析萃取物中存在的主要成分和含量。

GC条件：Agilent公司的GC6890；FID检测器温度为280℃；HP5毛细管柱；载气为氮气，氢气流速30ml/min，空气流速200ml/min，尾冲气流50ml/min；程序升温为在100℃下保持3min后，以20℃/min的速度上升到280℃，保持20min，进样(不分流)量1μl。

GC-MS的条件：Agilent公司的GC6890-MS5973；HP5-MS毛细管柱；载气为氦气，柱流速1ml/min；程序升温为在100℃下保持3min后，以20℃/min的速度上升到280℃，保持20min，检测为扫描质量范围50-600m/z，倍增管电压1600ev，数据库为NIST98。

实施例1

将毛竹笋剥壳后，将笋肉打成浆，经压榨除水后，晒干到一定程度，再用微波干燥到水分含量为5％，粉碎成20目的笋壳粉末5kg，并将其放入超临界萃取釜中，升温到50℃，开动柱塞泵泵入CO₂，通过预热器进入萃取釜中，当压力达到25MPa，开始循环；开启夹带剂泵，使10％原料重量的乙醇通过预热器后同时进入萃取釜；在循环过程中，CO₂和萃取物在分离器中经减压，将萃取物在分离器中析出，CO₂循环使用，分离釜1设定分离压力为8MPa、温度为40℃，分离釜2设定分离压力为5MPa、温度为30℃；萃取4h后，从分离釜1、2中取出萃取物50g，得率为1.0％，经低温干燥后，得到竹笋甾醇提取物，并从分离釜1、2中回收夹带剂；停机从萃取釜中取出萃余物。

对提取物进行成分分析，结果如图1-6所示。

图1表明，该提取物在3440、2925、2850、1710、1465和720cm^-1左右有特征性吸收峰。

图2表明，该提取物在240nm处有最强吸收，在275nm处有次强吸收。

图3表明竹笋甾醇提取物成分包括：20min前都是不饱和脂肪酸，26min左右为β-谷甾醇，23.5min左右为芸苔甾醇，24.5min左右为豆甾醇。

图4-6证实了提取物中含β-谷甾醇(β-sitosterol)、豆甾醇(stigmasterol)、芸苔甾醇(campesterol)。

比色法与GC法分析竹笋甾醇提取物的成分含量，其总甾醇含量为25±5％，β-谷甾醇含量为20±5％，β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为20～25∶2～3∶3～4。

实施例2

将毛竹笋笋壳晒干到一定程度后用热风干燥到水分含量为5％，粉碎成20目的笋壳粉末5kg，并将其放入超临界萃取釜中，升温到60℃，开动柱塞泵泵入CO₂，通过预热器进入萃取釜中，当压力达到30MPa，开始循环；开启夹带剂泵，使10％体积比的丙酮通过预热器后同时进入萃取釜；在循环过程中，CO₂和萃取物在分离器中经减压，将萃取物在分离器中析出，CO₂循环使用，分离釜1设定分离压力为8MPa、温度为45℃，分离釜2设定分离压力为5MPa、温度为30℃；萃取2.5h后，从分离釜1、2中取出萃取物40g，得率为0.8％，经低温干燥后，得到竹笋甾醇提取物，并从分离釜1、2中回收夹带剂；停机从萃取釜中取出萃余物。

对提取物进行成分分析，结果同实施例1。比色法与GC法分析提取物的成分含量，其总甾醇含量为25±5％，β-谷甾醇含量为20±5％，β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为20～25∶2～3∶3～4。

实施例3

将毛竹笋笋头切片后打成浆，经压榨除水后晒干到一定程度，用微波干燥到水分含量为5％，粉碎成20目的笋头粉末6kg，并将其放入超临界萃取釜中，升温到45℃，开动柱塞泵入CO₂，通过预热器进入萃取釜中，当压力达到20MPa，开始循环；在循环过程中，CO₂和萃取物在分离器中经减压，将萃取物在分离器中析出，CO₂循环使用，分离釜1设定分离压力为6MPa、温度为35℃，分离釜2设定分离压力为5MPa、温度为30℃；萃取1h后，从分离釜1、2中取出萃取物60g，得率为1.0％，经低温干燥后，得到竹笋甾醇提取物；停机并从萃取釜中取出萃余物。

对提取物进行成分分析，结果同实施例1。比色法与GC法分析提取物的成分含量，其总甾醇含量为30±5％，β-谷甾醇含量为25±5％，β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为25～28∶2～3∶3～4。

实施例4

将麻竹笋全笋切碎后打成浆，经压榨除水后晒干到一定程度，用微波干燥到水分含量为5％，粉碎成20目的竹笋粉末6kg，并将其放入超临界萃取釜中，升温到50℃，开动柱塞泵泵入CO₂，通过预热器进入萃取釜中，当压力达到到15MPa，开始循环；开启夹带剂泵，使10％体积比的乙醇通过预热器后同时进入萃取釜；在循环过程中，CO₂和萃取物在分离器中经减压，将萃取物在分离器中析出，CO₂循环使用，分离釜1设定分离压力为7MPa、温度为40℃，分离釜2设定分离压力为5MPa、温度为30℃；萃取2.5h后，从分离釜1、2中取出萃取物65g，得率为1.1％，经低温干燥后，得到竹笋甾醇提取物，从分离釜1、2中回收夹带剂，停机从萃取釜中取出萃余物。

对提取物进行成分分析，结果同实施例1。比色法与GC法分析提取物的成分含量，其总甾醇含量为25±5％，β-谷甾醇含量为20±5％，β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为18～22∶2～3∶3～4。

实施例5

将绿竹笋笋衣切碎后晒干到一定程度，用微波干燥到水分含量为5％，粉碎成20目的笋衣粉末5kg，并将其放入超临界萃取釜中，升温到50℃，开动柱塞泵泵入CO₂，通过预热器进入萃取釜中，当压力达到到25MPa，开始循环；在循环过程中，CO₂和萃取物在分离器中经减压，将萃取物在分离器中析出，CO₂循环使用，分离釜1设定分离压力为8MPa、温度为45℃，分离釜2设定分离压力为5MPa、温度为30℃；萃取4h后，从分离釜1、2中取出萃取物45g，得率为0.9％，经低温干燥后，得到竹笋甾醇提取物，停机并从萃取釜中取出萃余物。

对提取物进行成分分析，结果同实施例1。比色法与GC法分析提取物的成分含量，其总甾醇含量为20±5％，β-谷甾醇含量为15±5％，β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为12～16∶2～3∶3～4。

活性测试例

在以下测试例中测试实施例1的竹笋甾醇提取物抗炎作用、抑制白血病细胞增生的作用。

实施例6竹笋甾醇提取物的抗炎作用

1)对巴豆油所致小鼠耳廓肿胀的影响

小鼠按体重随机分成5组，每组12只，设置如下：①空白对照组：等体积生理盐水，0.8mL/20g；②阳性对照组：消炎痛10mg/kg；③高剂量组：200mg/kg的竹笋甾醇提取物；④中剂量组：100mg/kg的竹笋甾醇提取物，剂量；⑤低剂量组：50mg/kg的竹笋甾醇提取物。动物每天ip给药1次，连续7d(消炎痛仅给药1次)，末次给药后1h，小鼠右耳涂2％巴豆油0.02mL/只、致炎，4h后处死，沿耳廓剪下左右耳，以9mm环钻冲下左右耳片，称重，以左右耳片重量之差值作为肿胀率。

实验结果表明，小鼠灌胃给予100mg/kg和200mg/kg剂量的竹笋甾醇提取物连续7d后，对巴豆油所致的耳廓肿胀具有显著(p＜0.05)和极显著(p＜0.01)的抑制作用，并呈明显的剂量依赖关系。

表1竹笋甾醇提取物对小鼠巴豆油所致耳廓肿胀的影响

^*p＜0.05，^**p＜0.01，与对照组相比。

2)对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

小鼠按体重随机分成5组，每组10只，设置同上1。动物每天ig给药1次，连续7d(消炎痛仅给药1次)，末次给药后30min，小鼠右耳涂二甲苯0.05mL/只、致炎，15min后处死，沿耳廓剪下左右耳，以9mm环钻冲下左右耳片，称重，以左右耳片重量之差值作为肿胀率。并与对照组比较，判断疗效。

表3显示，小鼠灌胃给予2mg/kg剂量的竹笋甾醇提取物连续7天后，对二甲苯所致耳廓肿胀具有显著(p＜0.05)的抑制作用，中、低剂量时作用不明显。

表2竹笋甾醇提取物对小鼠二甲苯所致耳廓肿胀的影响

^*p＜0.05，^**p＜0.01，与对照组相比。

实施例7竹笋甾醇提取物抑制白血病细胞生长的作用

1.细胞株及培养条件

常用的人早幼粒白血病细胞株(HL-60)，培养基为RPMI-1640，含20％灭活小牛血清和青霉素100u/ml、链霉素50μg/ml，5％二氧化碳孵箱中培养传代。

2.MTT比色法检测细胞增殖

取对数生长期的HL-60细胞，调整细胞浓度为1.0×10⁵～2.0×10⁵/ml，分装于96孔板中，每孔90μl，用药组加入10μl不同浓度的提取物，每组设3个平行孔，并设对照孔。细胞加药后37℃、5％CO₂培养至相应时间，然后按10μl/孔加入5mg/ml的MTT，振荡器振荡1～2min，孵箱中反应5h。接着加入20％SDS+50％DMF200μl，振荡器振荡5～10min，保温2h，使结晶物充分溶解。反应完成后，振荡器振荡2～3min。选择570nm作为测定波长，450nm作为参比波长，以空白孔调零，在酶标免疫测定仪上测定各孔的光吸收值(A)。按下式计算药物对细胞增殖的抑制率(IR)。IR＝[1-(用药组测定的平均A值/对照孔测定的平均A值)]×100％。

表3竹笋甾醇提取物抑制白血病细胞HL-60细胞生长(2h)的数据

n＝3(孔数)；各组与对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

结果表明，竹笋甾醇提取物有抑制白血病细胞生长的作用。

讨论

植物甾醇是3位为羟基的甾体化合物，以环戊烷全氢菲为主体骨架，天然植物甾醇种类繁多，主要包括β-谷甾醇、豆甾醇、菜籽甾醇和菜油甾醇四种无甲基甾醇。一般认为，植物油及其加工产品是植物甾醇最丰富的天然来源，其次是谷物副产品和坚果。玉米油、菜籽油、米糠油、小麦胚芽油、黑麦、小麦、大麦和燕麦都含有丰富的甾醇。关于植物甾醇的应用，迄今已发表了大量的著作，领域涉及医药、化妆品、食品、饲料、光学产品、油漆、颜料、树脂、造纸、纺织、杀虫剂及除草剂等。以植物甾醇为原料，可合成几乎所有的甾体药物，其在世界范围内是一个有着40亿美元的产业。因此，植物甾醇的分离和纯化得到了人们的高度重视。

植物油精炼副产物，制糖副产物以及造纸废液中都具有丰富的甾醇。其中，植物油精炼副产物是甾醇的主要来源。从原料中提取甾醇通常分两步进行。先从原料中提取粗甾醇，然后再进一步精制。常用方法包括溶剂结晶法、分子蒸馏法、酶法、干式皂化法和络合法。但这些工艺均还不够理想，或是耗费大量易燃有机溶剂，或是产品纯度不高，或是高温易使甾醇分解。

本发明采用超临界CO₂流体萃取技术从竹笋及其加工废弃物中提取植物甾醇类提取物。不仅工艺操作简便，而且得到的竹笋甾醇提取物质量好，品质稳定。而且该提取物具有良好的消炎、抑制白血病细胞生长、降血脂和血胆固醇等功效，在化妆品、食品、保健品、药品中有广泛的应用前景。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种竹笋甾醇提取物的制备方法，所述提取物中总甾醇含量为5-50％，并且所述的甾醇包括β-谷甾醇、豆甾醇和芸苔甾醇，其特征在于，包括步骤：

(a)在分离釜中，于以下条件下，对竹笋原料进行超临界流体萃取：萃取剂为CO₂，萃取压力为15～35MPa，萃取温度为40～70℃，分离温度为30～50℃，分离压力为4～8MPa，循环动态萃取1～5小时，

(b)从分离釜中取出萃取物，从而获得竹笋甾醇提取物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(a)中的萃取压力为20～30MP，萃取温度为45～65℃，并且可使用选自下组的夹带剂：C1～C4的醇或酮类有机溶剂，其用量按照重量计算为竹笋原料量的5～15％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)中制备的所述提取物中总甾醇含量为20-40％，并且总甾醇中的β-谷甾醇含量为15-30％。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(b)中制备的所述提取物中β-谷甾醇、豆甾醇、芸苔甾醇之间比例为15～30∶2～3∶3～4。

5.一种竹笋甾醇提取物的用途，所述提取物中总甾醇含量为5-50％，并且所述的甾醇包括β-谷甾醇、豆甾醇和芸苔甾醇，其特征在于，用于制备消炎的药物、日用化妆品、或保健品，或者用于制备防治白血病的药物或保健品。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述提取物外观为淡黄或金黄的膏状物，经溴化钾压片后的红外图谱显示该提取物在3440、2925、2850、1710、1465和720cm^-1左右处有特征性吸收峰；将提取物溶于光谱纯的二氯甲烷后，在190～700nm的波长范围内进行扫描，显示在240nm左右处有最强吸收，在275nm左右处有次强吸收。