CN1724036A - 促进体内分泌褪黑激素的药物以及相关中药组合物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明的当归芍药散为一种复方中药，由白芍、当归、川芎、白术、泽泻、茯苓配制而成。将生药研成粉狀制备成口服剂型，与西药及其它中药制成复方制剂，或添加至食品中制成保健食品，具有提高血液褪黑激素含量及改善松果体功能的作用。因此本发明是提高内源性MT分泌、维持老年机体松果体的节律性分泌MT理想药物。
Description
[技术领域]
本发明涉及一种促进体内分泌褪黑激素的药物，以及当归芍药散在制备促进体内分泌褪黑激素药物中的应用。
[背景技术]
褪黑激素(MT)由Lerner等人1958年分离提取，它主要是由松果体分泌的一种物质。近年来的研究表明MT对机体有广泛的作用。①抗自由基损害作用；②免疫调节作用；③调整生物钟的功能；④调节生殖反应；⑤睡眠的调节作用；⑥痛觉过程的调节作用；⑦应激、辅助抗癌等方面的调节等作用。随着年龄的增加，松果体分泌MT减少，分泌节律消失，这自然会影响到MT的上述作用，这可能是造成机体衰老的机制之一，因此，研究者把MT用于抗衰老的作用研究，发现外源性MT有明显拮抗衰老的自由基损害，提高衰老机体的免疫功能，改善老年鼠的学习、记忆能力及运动能力等。也有人用于治疗老年性痴呆，发现可延缓有关症状的进一步恶化。因此被认为是理想的抗衰老物质。由于松果体的节律性分泌MT，血液中MT“日低夜高”的昼夜节律是维持其生理作用的基础。虽然外源性MT可使血液中的MT含量增加，但难以模拟机体血液中MT日夜节律的逐渐增减变化，使得外源性MT难于更好的发挥作用。因此能提高内源性MT分泌，维持老年机体松果体的节律性分泌MT的药物，将可能是防治衰老好药。
当归芍药散(DSS)出自《金匮要略》，主治妇科疾病的常用古方，有养血活血、化湿、利水之功能，过去已有大量临床和实验资料表明，DSS是治疗多种妇科疾病的有效方剂。研究表明DSS有广泛药理作用。①抗自由基损害作用；②增强机体免疫功能；③促进下丘脑-垂体-卵巢轴的功能；④改善老年人睡眠；⑤辅助抗癌作用等。80年代末日本学者水岛宣昭首次将其用于治疗老年性痴呆，取得初步疗效，随后有人分别发现该方可以刺激中枢乙酰胆碱及受体的合成，改善大鼠学习记忆能力，之后国内外相续出现了DSS抗衰老作用的许多资料。研究表明该药可改善老年性学习记忆减退鼠学习记忆能力，提高老年鼠的运动能力，促进老年鼠中枢胆碱能***的功能，抗衰老自由基损害等作用，被认为是一种广谱抗衰老方剂，而且DSS对机体的作用与MT的作用极相似，如抗自由基作用、免疫调节作用、生殖调节作用等；然而是否DSS有提高内源性MT分泌，达到抗衰老作用，到目前为止未见有关DSS调节内源性MT分泌的报导。
[发明内容]
本发明的目的是为了克服外源性MT难于更好的发挥作用的缺点，寻找到提高内源性MT分泌、维持老年机体松果体的节律性分泌MT的药物。提供当归芍药散在制备提高内源性MT分泌的药物上的应用。
本发明是这样实现的：DSS原方出于《金匮要略》(妇人怀娠，腹中痛，当归芍散散主之)。当归三两，芍药一斤(一作六两)，茯苓四两，白术四两，泽泻半斤，川芎半斤(作三两)，上六味杵为散，取方寸匕，酒和，日三服。95版药典所载DSS配方为：白芍、当归各9克，川芎6克，白术、泽泻、茯苓各12克。根据95版药典配方配药加900ml自来水，慢火2小时，浓缩为300ml即为DSS水煎液。与传统中药水煎液相同制备过程。
本发明的药物包括：白芍9-30份重，当归9-20份重，川芎6-10份重，白术8-15份重，泽泻8-15份重，茯苓8-15份重。
其中以如下配比为佳：白芍9份重、当归9份重、川芎6份重、白术12份重、泽泻12份重、茯苓12份重。
经过对老年鼠的松果体功能和血液褪黑激素含量实验表明，当归芍药散对老年鼠作用包括以下方面：1.提高血液褪黑激素含量。2.提高松果体功能。因此当归芍药散是提高内源性MT分泌，维持老年机体松果体的节律性分泌MT理想药物。
本发明的当归芍药散制备成提高内源性MT分泌的药物，由于当归芍药散为中药方剂，传统通过口服达到治疗作用，可以制成口服剂型、包括片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液等；也可以制成中药复方制剂或西药复方制剂；还可加入食物中食用，或添加至食品中作为保健食品食用。
本发明的当归芍药散也可以与目前抗衰老的药物制成中药复方制剂或西药复方制剂，使得在抗衰老作用更理想。
[附图说明]
图1：DSS及拆方对老年大鼠松果体β-AR含量的影响。
图2：服sDSS及拆方老年大鼠PC液对T淋巴细胞增殖的影响。
[具体实施方式]
下列实施例只用于说明本发明，而对本发明的保护范围无任何限制作用。
实施例1.
当归芍药散水煎液制备：按配方取白芍、当归各9克，川芎6克，白术、泽泻、茯苓各12克，加900ml自来水，慢火2小时，浓缩为300ml即可。即与传统中药水煎液相同制备过程。
实施例2.
当归芍药散水煎液制备：按配方取白芍30克、当归20克，川芎10克，白术、泽泻、茯苓各15克，加900ml自来水，慢火2小时，浓缩为300ml即可。即与传统中药水煎液相同制备过程。
实施例3.
当归芍药散水煎液制备：按配方取白芍20克、当归15克，川芎8克，白术、泽泻、茯苓各8克，加900ml自来水，慢火2小时，浓缩为300ml即可。即与传统中药水煎液相同制备过程。
实施例4
当归芍药散加味方散剂：按配方取白芍、当归各9克，川芎6克，白术、泽泻、茯苓各12克，把所有生药混合后研成粉狀細末即为当归芍药散加味方散剂。
实施例5
当归芍药散胶囊剂：取当归芍药散散剂，在装胶囊机中分装，即得胶囊剂。
实施例6
当归芍药散改善老年鼠的学习记忆能力的松果体机制
一.材料和方法
1、动物和分组
选用18-20月龄SD大鼠32只，动物随机分为四组：去松果体给水组，去松果体给药组，假手术给水组，假手术给药组，每组8只。
2、动物模型
去松果体组摘除松果体，假手术组不摘除松果体。手术后，给水组每天灌胃凉开水3ml，给药组每天灌胃当归芍药散水煎剂3ml(1g生药/1ml)，共灌胃21天。
3、水迷宫测试
术后第17天行Morris水迷宫测试。共测试5天，每天分上、下午两次，每次分别记录由四个象限入水到找到平台的时间，即逃避潜伏期。如果120秒内找不到平台，将大鼠引上平台，逃避潜伏期记为120秒。第5天下午，撤去平台，记录大鼠由某一象限入水后的游泳轨迹，记数穿环次数，计算T象限游泳距离百分比。
二.结果
各组平均逃避潜伏期分别为：去松果体给水组60.65±18.91秒，去松果体给药组47.26土20.12秒，假手术给水组48.43±22.20秒，假手术给药组49.33±22.13秒。与去松果体给水组相比，去松果体给药组、假手术给水组、假手术给药组平均逃避潜伏期均显著性减少(P＜0.05)，而后三组间无显著性差异。
各组穿环次数及T象限游泳距离百分比见表1。
表1各组平均穿环次数及T象限游泳距离百分比
| 平均穿环次数 | T象限游泳距离百分比(％) | |
| 去松果体给水组去松果体给药组假手术给水组假手术给药组 | 1.7±0.332.5±0.342.8±0.393.5±0.43 | 30.52±7.1335.10±10.5330.83±7.1241.01±5.55 |
由表可见：与去松果体给水组相比，其余三组穿环次数显著性增多(P＜0.05)；与假手术给药组相比，其余三组穿环次数显著性减少(P＜0.05)。与去松果体给水组相比，仅假手术给药组T象限游泳距离百分比显著性增加(P＜0.05)。
实施例7
当归芍药散及拆方对松果体β-AR含量及功能的影响
一、材料和方法
1.实验动物和分组
实验动物选用一级SD大鼠，雌雄兼有，月龄18～20月，动物笼养，昼夜交替环境(由中山医科大学实验动物中心提供)。动物分别用于药效和量效关系的研究，药效研究的大鼠分为是青年组、老年对照组、DSS全方组、君臣组、佐药组5个小组，每小组24只老年大鼠，其中每小组用于测定松果体β-AR密度实验16只，用于测定松果体培养液对脾细胞ConA诱导淋巴细胞增殖能力实验8只。量效关系研究的根据药效研究分组，又分为0.625ml组、1.25ml组、2.5ml组、5ml组和10ml组，每小组分别5只老年大鼠。
2.DSS水煎液制备及给药方法
按DSS的全方、君、臣药、佐药用8倍水，6倍水分煎，第一次2h，第二次1.5h，浓缩至含1g生药/ML，根据分组分别灌服相应的中药水煎液5ml，老年对照组灌服蒸馏水5ml，青年组不作任何处理，连续3周。量效关系研究的大鼠实验分别给予10ml、5ml、2.5ml、1.25ml、0.625ML相应的DSS全方和君臣药水煎液，用蒸馏水稀释为10ML分二次灌服，连续3周。
3.取材
动物在1％戊巴比妥钠(40mg/kg体重，腹腔注射)麻醉下，开颅分离松果体。
取材时间：各小组分为黑夜取材鼠，在深夜0时～1时取材(16只)；白天取材鼠在下午5～6时取材(8只)，量效关系研究的各小组大鼠均在深夜0时～1时取材。
4.测定各组松果体β-AR含量
每组大鼠(黑夜取材鼠和白天取材鼠各8只及量效关系研究的各小组大鼠)松果体加入PBS缓冲液，匀浆，直接测定整个松果体的β-AR含量，用放射配基受体结合分析法测定松果体β-AR含量。
5.测定各组大鼠松果体培养液对脾细胞ConA诱导淋巴细胞增殖能力的影响
5.1松果体培养上清液(PC液)制备
将各组黑夜取材鼠(8只/组)松果体放入含有1mmol色氨酸的10％小牛血清的RPMI1640培养液(0.5ml/管)置37℃5％CO2培养箱中培养20min后每管加入0.25ml异丙肾上腺素(终浓度10μmol/L)，继续培养60分钟，培养结束后收集上清液，即PC液。
5.2脾细胞分离和培养
用青年鼠(二个月龄)脾脏分离脾细胞，用含10％小牛血清RPMI1640培养液稀释备用，将脾细胞移入96孔的培养板中，每孔加入1×106脾细胞，同时每孔加入终浓度为1.25μg ConA，根据不同的实验加入松果体培养液，加入含10％小牛血清的RPMI1640培养液至100μl，CO2培养箱培养三天(37℃5％CO2)。
5.3服DSS及拆方大鼠PC液对培养T淋巴细胞的影响的实验加样
将青年组、老年对照组、全方组、君臣组、佐药组PC液及MT分别加入各孔，终浓度为5％(MT终浓度为5μg)。同时每孔加入心得安(终浓度为10μmoL)。
5.4不同浓度服中药老年大鼠PC液对T淋巴细胞增殖的影响的实验加样
将不同浓度的全方组、君臣组PC液加入96孔的培养板各孔，松果体培养液浓度分别是10％、5％、2.5％、1.25％、0.625％，同时每孔加入心得安10μmol。
5.5四唑盐比色法(MTT法)
脾细胞培养72h后每孔加入50μg MTT反应h，形成紫色结晶，吸出孔内液体，加入100ml(0.8mol/L)盐酸异丙醇溶液，用八通道可调移液器反复吹打至结晶完全溶解，在酶标仪上(波长570nm)测定光密度(OD)值。
二、结果
1、DSS及拆方对老年大鼠松果体β-AR含量的影响
5组老年大鼠和青年组分别在下午6时处死(白天鼠)取材和深夜1时处死(黑夜鼠)取材时的松果体β-AR含量(fmol/松果体)变化如图1。
结果显示，青年组大鼠松果体β-AR含量，黑夜明显低于白天，差别有高度显著性意义(P＜0.01)，老年对照组白天和黑夜之间的差异消失。服药后全方组白天和黑夜的松果体β-AR含量均较老年对照组明显升高，差别有高度显著性意义(P＜0.01)，白天和黑夜之间差别不明显(P＞0.05)。君臣组和佐药组的β-AR含量与老年对照组间差别不明显(P＞0.05)。
2、同剂量DSS对老年大鼠松果体β-AR含量的影响
分别用0.625、1.25、2.5、5、10ml中药水煎液灌服老年大鼠3周后，全方组、君臣组和佐药组老年大鼠松果体β-AR含量(fmol/松果体)变化如表2。
表2不同剂量DSS对老年大鼠松果体β-AR含量的影响
| DSS0.625ml全方组23.1±2.11君臣组18.9±1.77佐药组22.6±2.45 | DSS1.25ml23.1±1.9821.4±2.3520.7±1.65 | DSS2.5ml28.2±2.45※22.7±1.9921.5±3.88 | DSS 5ml30.8±3.16※19.1±2.8522.3±2.15 | DSS10ml22.1±2.5819.9±1.7720.5±3.07 |
※与DSS0.625ml组比较，P＜0.01
结果显示，全方组剂量为2.5ml和5ml时大鼠松果体β-AR含量明显多于其它各剂量组，显示随着灌服DSS剂量的增加，全方组大鼠松果体β-AR含量明显增加，但至10ml组β-AR含量却下降，君臣组和佐药组松果体β-AR含量在各剂量组间变化不明显。
3、服药大鼠PC液对培养T淋巴细胞增殖(OD值)的影响
服DSS及拆方老年大鼠PC液对脾细胞ConA诱导增殖的培养的OD值如图2。
结果显示DSS全方组、君臣组和MT组的OD值明显高于对照组，差别有高度显著性意义(P＜0.01)。全方组的升高作用较君臣组更大，差别有显著性意义(P＜0.05)。
4、不同浓度服DSS及拆方老年大鼠PC液对培养T淋巴细胞增殖的影响(OD值)
不同浓度服DSS全方和DSS君臣、佐药的老年大鼠PC液对脾细胞ConA诱导增殖培养的MTTOD值如表3。
表3不同浓度PC液对培养T淋巴细胞增殖的影响
| 全方组君臣组佐药组 | 0.625％0.399±0.0350.366±0.0210.361±0.031 | 1.25ml％0.451±0.0430.451±0.0290.371±0.027 | 2.5％0.545±0.033※0.478±0.0110.375±0.044 | 5％0.603±0.061※0.511±0.037※0.377±0.025 | 10％0.553±0.028※0.583±0.037※0.365±0.026 |
※与0.625％组比较，P＜0.01
结果显示，随着PC液增加DSS全方和DSS君臣组的培养T淋巴细胞增殖OD值明显增加，全方组PC液浓度为2.5％、5％、10％和君臣组为5％、10％大鼠松果体β-AR含量明显多于0.625％剂量组(P＜0.01)。佐药组的培养T淋巴细胞增殖OD值各PC液浓度组差别不明显。
实施例8
当归芍药散提高老年鼠的血液褪黑激素含量
一.材料和方法
1.动物和分组
选用18-20月龄SD大鼠32只，雌雄不拘。动物随机分为四组：去松果体给水组，去松果体给药组，假手术给水组，假手术给药组，每组8只。
2.动物模型
施行去松果体术。大鼠麻醉后固定于定位仪，分离组织，暴露人字缝；在该缝交汇处打开颅骨(约5mm*5mm)，移开骨瓣；于前后两点分别结扎上矢状窦，从两点间剪断上矢状窦；游离并向尾侧翻开上矢状窦，暴露窦汇下面的松果体并摘除。假手术组不摘除松果体。手术后，给水组每天灌胃凉开水3ml，给药组每天灌胃当归芍药散水煎剂3ml(1g生药/1ml)，共灌胃21天。
3.血液褪黑激素测定
灌胃21天后，在最后一次灌胃1小时后各组大鼠在晚上11时取血，用放射免疫的方法测定血液褪黑激素
二、结果
各组平均血液褪黑激素分别为：去松果体给水组8.41±6.2pg/ml，去松果体给药组16.73±12.1pg/ml，假手术给水组9.68±9.21pg/ml，假手术给药组32.02±21.15pg/ml。与去松果体给水组、去松果体给药组、假手术给水组相比、假手术给药组平均血液褪黑激素含量显著性增加(P＜0.01)，而前三组间无显著性差异。
Claims (7)
1、一种促进体内分泌褪黑激素的药物，包括：白芍9-30份重，当归9-20份重，川芎6-10份重，白术8-15份重，泽泻8-15份重，茯苓8-15份重。
2、根据权利要求1所述药物，其特征在于白芍9份重、当归9份重、川芎6份重、白术12份重、泽泻12份重、茯苓12份重。
3、根据权利要求1所述药物，其特征在于采用口服剂型。
4、根据权利要求1所述药物，其特征在于与西药制成复方制剂。
5、根据权利要求1所述药物，其特征在于与中药提取物制成复方制剂。
6、根据权利要求1所述药物，其特征在于添加至食品中制成保健食品。
7、白芍、当归、川芎、白术、泽泻、茯苓在制备促进体内分泌褪黑激素的药物中的应用。
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Cited By (4)
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|---|---|---|---|---|
| CN101574409B (zh) * | 2009-06-11 | 2011-04-20 | 成都中医药大学 | 使用苦寒中药构建血清褪黑素水平低下动物模型的方法 |
| CN101167901B (zh) * | 2006-10-26 | 2012-11-07 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 当归芍药方提取物、其制备方法及医药用途 |
| CN104547553A (zh) * | 2015-01-23 | 2015-04-29 | 葛汝丽 | 一种治疗神经性内分泌紊乱的中药 |
| CN116920030A (zh) * | 2023-05-16 | 2023-10-24 | 海南医学院第二附属医院 | 一种治疗糖尿病周围神经病变气虚血瘀证的中药组合物 |
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- 2004-07-20 CN CN 200410028154 patent/CN1724036A/zh active Pending
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