CN101574409B - 使用苦寒中药构建血清褪黑素水平低下动物模型的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于实验动物技术领域，要解决的技术问题是提供血清褪黑素水平低下动物模型的构建方法。本发明技术方案主要为用大黄等苦寒中药的浸煎液，每日口服灌胃动物，剂量每10g体重0.2～2.0ml，连续5～15天。本发明方法步骤简便，能成功且可重复的建立血清褪黑素水平持续低下动物模型，具有很好的应用前景。

Description

使用苦寒中药构建血清褪黑素水平低下动物模型的方法

技术领域

本发明属于动物模型领域，具体涉及使用苦寒中药血清褪黑素水平低下动物模型的构建方法。

背景技术

褪黑素(melatonin，简称MT)是1958年耶鲁大学皮肤病学专家Lerner首次从牛的松果体分离出的一种吲哚类激素，通常在凌晨机体内含量最高，有以下三个显著特点：(1)MT在血液浓度中呈昼夜节律、季节性节律的变化，并伴随年龄的增长，其各种生理功能的昼夜节律振幅变小，周期性活动的位相偏移和非同步化现象增加；(2)人类婴幼儿期夜间MT水平最高，从儿童到***平均MT水平下降80％，以后维持在这一水平，到50岁前后MT水平进一步下降；(3)机体所处的内、外环境变化能明显地影响机体本身MT血液浓度，而机体MT受体mRNA水平则受光照和机体MT浓度的影响。人体的MT主要来源于松果体的分泌，作为一种调节性激素，MT几乎直接或间接影响其他所有激素的分泌，因而具有广泛的生理和药理活性，其昼夜、季节性节律与机体免疫、神经、内分泌和生殖***等有密切联系。

随着现代分析仪器技术的提高，尤其是现代生物技术的运用，如利用酶联反应检测MT含量，使得血清MT的检测和动态监测成为可能，也使人们对MT与人类疾病之间的关系有了更多的了解。临床研究显示：机体褪黑素水平降低不仅与老年病人失眠症、高的癌症发病率相关，而且具体涉及诸多人类重大疾病，如恶性肿瘤、早老性痴呆(Alzheimer Disease，AD)、心血管疾病等。随着现代医学和分子生物技术的发展，更多有关MT及其MT受体在疾病或相关病理生理条件下的信息为临床预防和治疗提供了新的契机，其中最瞩目的成果就是MT受体激动剂agomelatine即一个拥有全新作用机制的抗抑郁药的诞生。

目前作为机体褪黑素水平降低的主要动物模型有：1、去松果体动物模型，即依据松果体是MT主要分泌器官，在动物幼年时期除去松果体即会影响动物机体体内MT的水平。2、MT受体基因敲出的动物模型；3、持续光照模型，即依据哺乳动物松果体细胞合成和分泌MT的过程具有明显的昼夜节律，主要表现为暗相时MT合成和分泌增加，光照相时MT的合成和分泌减少。在上述模型中虽然都是着重于对机体内MT水平的影响，但是在第一类模型中，鉴于松果体内含有包括MT、五羟色胺(5-HT，MT在体内合成的前体物质)、肾上腺素、去甲肾上腺素、促生长激素、促性腺释放激素等近二十种激素，加上开颅手术的创伤性，使得该模型实际操作的可行性受到质疑，毕竟该模型并不能仅仅只反映出机体MT水平降低对机体的影响；尽管近十年来，应用转基因动物、基因打靶和基因敲除技术，将研究手段精细到了具体的激素或激素受体基因，从而准确复制出单个激素或激素受体基因过表达(亢进)或无表达(低下)的动物模型，从腺体切除到基因敲除的确是一种质的飞跃，但是同样的问题也出现在第二类动物模型中，因为MT受体存在着不同亚型，在哺乳动物机体内分布十分广泛，其相应的作用机能的研究并不完善，而且机体MT浓度影响MT受体mRNA水平，也因此给实际运用带来一定的困扰；持续光照模型制备周期很长，必须考虑季节性影响和年龄因素，即随动物年龄增长其体内MT会逐步降低这一事实，因而尚须进一步完善。所以构建一个血清MT持续低下的动物模型，尤其是与临床症状相对应的动物模型是当务之急，也是研究与之相关联疾病预防和治疗的重要方法和手段。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是本领域难以建立血清MT低下的动物模型。解决该技术问题的技术方案是提供一种血清褪黑素水平持续低下动物模型的构建方法。该方法是使用的苦寒中药饲喂动物，连续5～15天。

其中，上述的苦寒中药为大黄、芒硝、番泻叶或大承气汤中的至少一种。

其中，上述的苦寒中药的用量为每日每10g体重0.2～2.0ml浸煎液，每ml浸煎液含每种生药1g。

其中，在使用上述苦寒中药的同时还使用破气中药饲喂动物。

其中，上述破气中药为枳实、厚朴或槟榔中的至少一种。

其中，在使用上述苦寒中药的同时还使用杏仁或黄连饲喂动物。

其中，上述饲喂的中药的pH值调整至2≤pH＜7。

其中，上述饲喂的中药的温度调整为4℃。

其中，在使用上述中药饲喂的的同时还给动物皮下注射利血平，用量为0.08～8mg/Kg·d，连续5～15天。

上述方法中所述的动物为常见的实验动物，如小鼠、大鼠、驴、兔、猪、犬或豚鼠等。

本发明还提供了苦寒中药在制备致血清褪黑素水平低下的药物中的用途。上述苦寒中药主要指大黄、芒硝、番泻叶或大承气汤。

本发明方法有益效果为步骤简便，能成功且可重复的建立血清褪黑素水平低下动物模型，具有很好的应用前景。

附图说明

图1为第1批(n＝15)建模的大黄模型小鼠血清褪黑素的水平参照正常对照组褪黑素值的百分率。^*：与正常对照组相比较，P＜0.05。

图2为第2批(n＝15)建模的大黄模型小鼠血清褪黑素的水平参照正常对照组褪黑素值的百分率。^*：与正常对照组相比较，P＜0.05。

图3为第3批(n＝15)建模的大黄模型小鼠血清褪黑素的水平参照正常对照组褪黑素值的百分率。^*：与正常对照组相比较，P＜0.05。

具体实施方式

以下通过对本发明具体实施方式的描述说明但不限制本发明。

本发明方法的基础是大黄，番泻叶等苦寒中药饲喂苦寒泻下法。最常用的药物为大黄、芒硝、番泻叶、大承气汤等。具体实施的时候取生药，用水浸泡，切片后水煎，80℃浓缩成每ml含每种生药1g，每日口服灌胃大黄浸煎液，剂量每10g体重0.4ml，连续8～15天。

在上面的基础上还可以添加使用采用破气、降气的枳实、厚朴、槟榔等，也可以使用复方的厚朴三物汤(厚朴、枳实、大黄)，制成煎剂灌胃，或制成药化饲料喂养，用量参考苦寒中药。

在上述的基础上，还可以添加使用广豆根、旋覆花、槟榔等降气药增大伤胃的力度。或者加用黄连、苦温药杏仁。

为增加药物的寒性，可以将饲喂的药处理至4℃再使用。或者将其处理成2≤pH＜7的酸性。此方法有直接的苦寒泻下、耗气破气作用，同时造模给药量的加大，对小肠吸收功能的影响和泻下作用使动物的营养摄入量、吸收减少，排出增加，而有限量营养作用。降低血清MT浓度的作用。

为了进一步提高效果，可以再添用注射利血平。

实施例

1、造模方法和分组

实验动物昆明种小鼠，体重20±2g，由成都中医药大学动物室提供。将动物随机分为模型组和正常对照组，每组15只。

取生大黄100g，用500ml去离子水浸泡，切片后80℃水浴加热，浓缩成每ml含1g生药，每日口服灌胃大黄浸煎液1次，剂量每10g体重1.0ml，连续8天；造模后检测凌晨1～2时小鼠血清MT浓度。

2、观察指标

末次给药后第2天凌晨1～2点去眼球采血，4℃冰箱静置，4℃离心10min(2500r/min)，分离血清于-80℃保存待测。此次实验于2008年11～12月成都温江进行。采用ELISA法，Bio-Rad 680型酶标仪检测MT(小鼠褪黑素ELISA Kit，武汉中美科技有限公司)，每一份样本进行双点测定检测MT含量，按说明书进行操作。

3、统计学处理方法

数据的处理使用SPSS11.0统计软件进行处理。

4、结果

图1为大黄脾虚模型小鼠血清MT的含量参照正常对照组值的百分率，结果显示了在凌晨1～2点，大黄模型组小鼠血清MT浓度与正常对照组相比，P＜0.05。建模成功。

为研究本发明方法的可重复性，按上述方法再进行了两次造模，造模后检测的小鼠凌晨血清MT浓度见图2和图3，结果表明均造模成功。

Claims (1)

1.苦寒中药在制备血清褪黑素水平低下的动物模型中的用途，所述苦寒中药为大黄，用量为每日每10g体重0.2～2.0ml浸煎液，每ml浸煎液含生药1g，连续饲喂动物5～15天。

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