CN1686441A - 一种用于调节免疫力的中药胶囊、制备方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于调节免疫力的中药胶囊、制备方法及其用途。该胶囊是由下列重量比的原料制成:提取后的云芝粉4-16、提取后的香菇粉3-12份、提取后的黄芪粉3-12份;制备方法是分别称取提取后云芝粉、香菇粉、黄芪粉,过60目,外观检测,混合,用双层聚乙烯胶袋包装,于充填机进行胶囊充填,胶囊经抛光、检查,入瓶、入盒包装,即得产品;本发明优点:中药胶囊安全性好,无毒副作用,适用于身体虚弱、久病痊愈者;本发明产品用于提高免疫功能、补血生津,抗氧化、抗衰老,抗辐射,养肝护肝,增强体质抗病能力,促进身体康复。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于治疗疾病的中药组合物,具体的说是涉及调节免疫力的中药胶囊、制备方法及其用途。
背景技术
社会人群中,一些长期病患、身体虚弱、患消耗性疾病(如肺病、肠胃病、肿瘤、贫血、甲状腺亢进、糖尿病),以及进行手术治疗后的病患者,均需求滋养营养,改善机体抗病能力,提高身体生活适应能力及生存素养:许多肿瘤、癌症病患者经化学药物治疗、放射治疗后,出现白细胞减少,食欲差,呕吐,脱发,体质差,抵抗力下降情况,严重影响治疗效果及生存质量,他们需要能补充身体免疫力,减少化疗、放疗的副作用,改善食欲,抗氧化、抗辐射等;肝炎、肝癌、肝病后患者存在身体虚弱,食欲差,需求增强身体免疫抗病能力,改善体质,提高身体消化、造血新陈代谢功能;随着社会人员年龄老化,越来越多的身体衰老、体弱免疫力低下,常易患病的人群,需求增强体质,抗衰老,抗氧化,改善免疫功能,提高抗病能力。
市面上滋补产品的品种虽多,但功能单一,其中一些为壮阳燥热药物,非长期病患者所适宜。因此,急需研究开发一种以提高免疫功能、补血生津,抗氧化、抗衰老,抗辐射,养肝护肝,增强体质抗病能力,促进身体康复的多功能、作用平和的纯天然制剂,是广大病患者的需要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足之处,而提供利用现有医学新进展,按中医药理论及现代医学研究,采用适宜的配伍组合,协同发挥作用,提供一个能全方位,针对多个环节的一种具有增强免疫能力、抗衰老、保肝、补需益气等作用,以天然药物组分及药物同源的中草药配制成的组合物胶囊(商品名:生科补宝(RVF))、制备方法及其用途。
本发明的目的可以通过如下措施来实现:该胶囊是由下列重量比的原料制成:
提取后的云芝粉 4-16份
提取后的香菇粉 3-12份
提取后的黄芪粉 3-12份。
优选的原料配比为:
提取后的云芝粉 12份
提取后的香菇粉 9份
提取后的黄芪粉 9份。
本发明还提供了该生科补宝组合物胶囊的制备方法:
提取后的云芝粉的制备方法:取合格的云芝,净选,除杂质,清水洗净,切碎,置多功能提取罐内,加8-12倍量水,优选为10倍,煮沸,提取2-4次,优选为3次,每次煮沸提取时间均为1.5-2.5小时,优选为2小时,提取液200目过筛网,取滤液,在-80--95kpa,65-80℃减压,浓缩,60℃下相对密度为1.08-1.10,过120目,合并浓缩液,冷至室温,搅拌下缓慢加入95%的乙醇,使浓缩液清膏的含醇量达85%,搅拌,静置24小时,过滤,取沉淀减压干燥,粉碎成细末,即制得提取后的云芝粉。
提取后的香菇、黄芪的制备方法:分别取合格的香菇、黄芪,净选,除杂质,清水洗净,切碎,置多功能提取罐内,加8-12倍量水,优选为10倍,煮沸,提取2-4次,优选为3次,每次煮沸提取时间均为0.5-1.5小时,优选为1小时,提取液200目过筛网,取滤液,在-80--95kpa,65-80℃减压,浓缩,60℃下相对密度为1.05-1.08,过120目,合并浓缩液,喷雾干燥,分别制得提取后的香菇粉、提取后的黄芪粉。
按本发明的原料配比,分别称取提取后云芝粉,提取后香菇粉,提取后黄芪粉,过60目筛待用;所有原料进行外观检测,并置于混合机内进行混粉,收集经混合均匀的混合粉,用双层聚乙烯(PE)胶袋包装待用;将混合均匀的混合粉于自动或半自动胶囊充填机进行胶囊充填、胶囊抛光、检查,入瓶、入盒包装,即得产品。
本发明相比现有技术具有如下优点:本发明中药胶囊安全性好,无毒副作用,适用于身体虚弱、久病痊愈及用于慢性乙型肝炎、癌病康复及老年免疫功能降低人群的食疗和预防保健。
具体实施方式
下面列举的实施例,对本发明加以进一步说明,但不以任何方式限制本发明。
原料的准备:
取合格的云芝,净选,除杂质,清水洗净,切碎,置多功能提取罐内,加10倍量水,煮沸,提取3次,每次煮沸提取时间均为2小时,提取液200目过筛网,取滤液,在-80--95kpa,65-80℃减压,浓缩,60℃下相对密度为1.08-1.10,过120目,合并浓缩液,冷至室温,搅拌下缓慢加入95%的乙醇,使浓缩液清膏的含醇量85%,搅拌,静置24小时,过滤,取沉淀减压干燥,粉碎成细末,即制得提取后的云芝粉。
分别取合格的香菇、黄芪,净选,除杂质,清水洗净,切碎,置多功能提取罐内,加10倍量水,煮沸,提取3次,每次煮沸提取时间均为1小时,提取液200目筛网过滤,取滤液,在-80--95kpa,65-80℃减压,浓缩,60℃相对密度为1.05-1.08过120目,合并浓缩液,喷雾干燥,分别制得提取后的香菇粉、提取后的黄芪粉。
实施例1
本实施例按以下组分:分别称取各组分原料提取后的云芝粉1.2kg,提取后的香菇粉0.9kg,提取后的黄芪粉0.9kg,,将各原料经60目筛网过筛,取过筛合格的各原料组分,置混合机内进行混粉,收集经混合均匀的混合粉,用双层聚乙烯(PE)胶袋包装待用,将混合均匀的混合粉于自动或半自动胶囊充填机进行胶囊充填、胶囊抛光、检查,入瓶、入盒包装即得产品。
实施例2
按实施例1的方法,其中,以提取后的云芝粉0.4kg,提取后的香菇粉0.3kg,提取后的黄芪粉0.3kg,分别代替实施例1中相应的原料制得。
实施例3
按实施例1的方法,其中,以提取后的云芝粉1.6kg,提取后的香菇粉1.2kg,提取后的黄芪粉1.2kg,分别代替实施例1中相应的原料制得。
本发明中药胶囊的免疫力效果和无毒害作用。经广州中山大学药学系药物药理研究室实验研究证明:生科补宝(RVF)组合物胶囊有很好的药理活性,具有提升人体免疫力之功效,显著提高小鼠巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数,提高小鼠免疫器官指数,具有一定的提高小鼠的学习记忆的能力;亦对D-半乳糖所至亚急性衰老大鼠和小鼠均具有显著的改善记忆能力、较好地清除体内的过氧化物自由基(MDA、MAO)的产生,提高体内抗氧化活性物质(SOD、GSH-Px)的含量,有利于细胞膜的稳定性。
1、实验材料
1.1试验药物
生科补宝(RVF),土黄色粉末,易吸潮,批号:03001,生产日期:20031203;由香港生物科技研究院有限公司提供。
1.2阳性对照药:
青春宝片,浙卫药健字(1996)第0371号,正大青春宝药业有限公司生产,批号0211016;
神奇精乌胶囊,国药准字Z52020322号,贵州金桥药业有限公司生产,批号:20030902。
1.3试验动物
SD大鼠,由广东省实验动物中心提供,动物合格证号:2002A024;
NIH小鼠,由广东省实验动物中心提供,动物合格证号:2002A022;
实验环境合格证:粤检字2001C020号。
1.4试剂及药品
环磷酰胺注射粉针,沪卫药准字(1995)第012034号,批号:030510,200mg/支;上海华联制药有限公司生产;
D-半乳糖,上海恒信化学试剂有限公司生产,批号:20031030。
枸橼酸三钠、枸橼酸、葡萄糖、氯化钠、甲醇、丙酮等,AR级,购于广州市化玻。
鸡红细胞(CRBC),自市场购活鸡,无菌采血用Alsever’s溶液配制,高压灭菌。
1.5实验仪器
LBY-N6A型自清洗旋转式全血粘度计,北京普利生集团生产;
LBY-NM1型自清洗血浆、血清粘度计,北京普利生集团生产;
UV-2102型可见紫外光分光光度计,上海尤尼卡有限公司生产;
LBY-NJ2型血小板聚集仪,北京普利生集团生产;
YLS-2T型小鼠跳台记录仪,山东省医学科学院设备站生产;
YLS-1A型多功能小鼠自动活动记录仪,山东省医学科学院设备站生产;
1.6剂量设置
生科补宝及阳性对照药的给药剂量如下表1所示。
表1 按体表面积等效系数换算给药剂量
组别 | 成人剂量(g/日/70kg) | 相当于成人倍数 | 大鼠给药剂量(g/kg) | 小鼠给药剂量(g/kg) | |
生科补宝 | 低剂量 | 1.0 | 1 | 0.089 | 0.129 |
中剂量 | 3.0 | 3 | 0.267 | 0.387 | |
高剂量 | 9.0 | 9 | 0.804 | 1.161 | |
青春宝片 | 5.0 | 3 | 1.338 | 1.932 | |
神奇精乌胶囊 | 8.1 | 3 | 2.170 | 3.132 |
剂量设计依据:
生科补宝临床拟给予70kg成人每日服用的剂量为1g,按体表面积换算成大鼠的等效剂量为0.089g/kg,换算成小鼠的等效剂量为0.129g/kg。阳性对照药均采用相当于70kg成人服用剂量的3倍作为对照剂量,因此,青春宝片成人日服用剂量为5g,按体表面积换算成大鼠的等效剂量为0.446g/kg,3倍剂量为1.338g/kg;换算成小鼠的等效剂量为0.644g/kg,3倍剂量为1.932g/kg。神奇精乌胶囊成人日服用剂量8.1g,按体表面积换算成大鼠的等效剂量为0.723g/kg,3倍剂量为2.170g/kg;换算成小鼠的等效剂量为1.044g/kg,3倍剂量为3.132g/kg。
2、实验方法
2.1生科补宝急性毒性实验
2.1.1生科补宝的一次经口给予受试样品的最大耐受量实验
选用体重18-22g健康NIH小鼠40只,雌雄各半,实验前禁食不禁水12小时以上,每支小鼠均一次大剂量给予生科补宝混悬液和最大体积0.8ml;给药后连续观察7天,判断毒性反应。注意小鼠在7天观察期内是否出现精神,活动,饮食异常情况及死亡情况。对于死亡的小鼠应立即解剖,肉眼观察重要脏器心,肝,脾,肺,肾等是否有明显病变。
2.1.2生科补宝的多次给予受试样品的最大耐受量实验
选用体重18-22g健康NIH小鼠40只,雌雄各半,实验前禁食不禁水12小时以上,然后每隔2小时给药一次,给予生科补宝混悬液最大浓度进行灌胃0.5ml/只;全天共给药4次。给药后连续观察7天,判断毒性反应,记录小鼠给予受试样品期间及观察期内是否出现精神,活动,饮食异常情况及死亡情况。对于死亡的小鼠应立即解剖观察心,肝,脾,肺,肾等。计算受试样品的最大耐受量。
2.2生科补宝对环磷酰胺致小鼠免疫功能低下的作用
选用体重18-22g健康NIH小鼠60只,随机分成六组,即正常对照组,生科补宝低、中、高剂量组,阳性对照组及环磷酰胺模型对照组,每组10只,全为雄性。实验开始时,除正常对照组,其余各组小鼠分别每3d腹腔注射环磷酰胺30mg/kg,共3次。同时开始给药,生科补宝低、中、高剂量组小鼠每日灌胃给药剂量分别为0.129g/kg、0.387g/kg、1.160g/kg,相当于70kg成人临床日服用剂量1g的1倍、3倍、9倍;正常对照组及环磷酰胺模型对照组每日灌胃给予同体积的生理盐水;阳性对照药神奇精乌胶囊每日灌胃剂量为3.132g/kg,相当于70kg成人临床日服用剂量8.1g的3倍。
给药两周时,于末次给药30min后,用跳台法训练小鼠的学***台的潜伏期以及3min内的错误总次数(n);计算跳台错误减少率(%)。
跳台错误减少率(%)=(模型组错误次数-给药组错误次数)×100%
给药四周时,每鼠腹腔(即体积比5%)的鸡红细胞(CRBC)悬液1ml,于4h后脱颈椎处死,先记录体重;然后将其固定在鼠板上,正中剪开腹壁皮肤,经腹腔注入肝素钠生理盐水2ml,轻柔小鼠腹部后,吸出腹腔冲洗液滴片推片,晾干后采用甲醇∶丙酮(1∶1)固定5min后,Giemsa-Wright染色,油镜观察计数。最后取脾和胸腺称重,计算脾脏指数和胸腺指数。
吞噬率%=吞噬CRBC的巨噬细胞/100个巨噬细胞(吞及未吞的)×100%
脏器指数=器官重量/体重
CRBC的制备:于无菌操作下,自鸡静脉采血,置于100ml疫苗瓶中,加入相当于鸡血体积五倍的Alsever’s溶液混匀,4℃保存备用。
Alsever’s溶液:枸橼酸三钠8.0g,枸橼酸0.5g,无水葡萄糖18.7g,氯化钠4.2g,定容至1000ml,分装,高压灭菌后4℃保存备用。
2.3生科补宝对D-半乳糖所致大鼠亚急性衰老模型的作用
选取体重300-400g的雄性SD大鼠60只,随机分成六组,即正常对照组,生科补宝低、中、高剂量组,阳性对照组及D-半乳糖模型对照组,每组10只大鼠。除正常对照组,其它各组大鼠每日腹腔注射D-半乳糖100mg/kg,连续注射六周,正常对照组腹腔注射等量的无菌生理盐水。同时开始给药,生科补宝低、中、高剂量组大鼠每日灌胃给药剂量分别为0.089g/kg、0.267g/kg、0.804g/kg,相当于70kg成人临床日服用剂量1g的1倍、3倍、9倍;正常对照组及模型对照组每日灌胃给予同体积的生理盐水;阳性对照药青春宝片每日灌胃剂量为1.328g/kg,相当于70kg成人临床日服用剂量5g的3倍。
连续给药六周后,进行水迷宫实验,测定大鼠的学习记忆能力;然后取血测定血液流变学指标,包括全血粘度、血浆粘度、血清粘度、纤维蛋白原粘度、血小板聚集率和红细胞亚积(HCT)等等;取外周血测定MDA、GSH-Px、SOD及MAO的含量;处死大鼠,称体重,取脾脏、胸腺和全脑称重,计算脾脏指数、胸腺指数、和脑指数;另取大脑匀浆测定MDA、GSH-Px、SOD及MAO的含量。进行统计学处理并比较组间差异。
水迷宫设计:由直径150cm,高60cm的圆形、黑色水池组成,池内水深40cm,水温保持26℃;池壁上漆有白色或红色的符号,如三角形、圆形、波浪形和长方形,并标有东、西、南、北四个入水点;将池分成四个相等的象限,分别为SW、NW、SE、NE象限,在SW象限正中放有一直径为10cm,高39cm的圆形活动黑色平台,平台低于水平面1cm左右。训练期间迷宫外参照物的位置保持不变。
空间学***台所需时间,即为找寻平台潜伏期(Searching platform latency,SPL)作为学***台,可将大鼠诱到台上,此时SPL按120s计算,每次间隔60s.如此训练2-4天,开始测定SPL值(即为定位航行实验)。于第五天撤除水下平台,任选一个水点将大鼠面向池壁放入水中,记录大鼠在撤除水下平台后,120s内跨越原来水下平台相应位置次数,跨越平台次数(Crossing platform times,CPT)以及其跨越各象限平台相应位置总次数的百分数,跨台百分率(Crossingplatform percentages,CPP),检测大鼠空间学习记忆能力(即为空间探索实验)。
2.4生科补宝对d-半乳糖所致小鼠亚急性衰老模型的作用
选用体重18-22g雄性NIH小鼠60只,随机分成六组,即正常对照组,生科补宝低、中、高剂量组,阳性对照组及d-半乳糖模型对照组,每组10只小鼠。除正常对照组,其余各组小鼠每日颈背部皮下注射0.5%D-半乳糖,0.1ml/10g,连续注射六周,正常对照组皮下注射等量的无菌生理盐水。。同时开始给药,生科补宝低、中、高剂量组小鼠每日灌胃给药剂量分别为0.129g/kg、0.387g/kg、1.160g/kg,相当于70kg成人临床日服用剂量1g的1倍、3倍、9倍;正常对照组及模型对照组每日灌胃给予同体积的生理盐水;阳性对照药青春宝片每日灌胃剂量为1.932g/kg,相当于70kg成人临床日服用剂量5g的3倍。
连续给药六周后,测定各组小鼠的自主活动情况,记录小鼠5min内的自主活动次数,实验后计算自主活动的改善率(%),然后采用跳台法训练小鼠的学***台的潜伏期以及3内的错误总次数(n);计算跳台错误减少率(%);比较组间差异并进行统计学处理。
实验最后,脱颈椎处死小鼠,记录小鼠的体重,取胸腺、脾脏称重,计算胸腺指数及脾脏指数。
自主活动改善率(%)=(给药组自主活动次数-模型组自主活动次数)×100%
跳台错误减少率(%)=(模型组错误次数-给药错误次数)×100%
3、实验结果
3.1生科补宝急性毒性实验结果
3.1.1生科补宝的一次经口给予受试样品最大剂量的实验结果
小鼠灌胃给予生科补宝混悬液最大浓度(该样品的最大溶解度为27.8%;为褐色均一的溶液)和最大体积0.8ml后,当天无出现动物死亡;连续观察7天,小鼠毛色,活动,饮食均正常,无死亡发生。给药后的第8天处死动物,解剖肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等均无异常发现。由于给药体积及浓度不能再增大,小鼠一次经口给予生科补宝的最大剂量为0.222g,按体表面积折算成70kg的成年人一次性口服生科补宝的总量不少于86.3g,相当于70kg的成年人每日服用剂量(1g/日)的86倍。
3.1.2生科补宝的多次给予受试样品的最大耐受量实验结果
小鼠当天给予生科补宝混悬液最大浓度(该样品的最大溶解度为27.8%;为褐色均一的溶液)的0.5ml/次,共给药四次后无一例小鼠死亡,连续观察7天见小鼠毛色光滑,活动良好,饮食正常,无死亡发生。给药后的第8天处死动物,解剖肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等均无异常发现。提示小鼠给予生科补宝的总量为0.556g,即生科补宝对小鼠的多次给药的最大耐受量不少于0.556g,按体表面积折算成70kg的成年人服用剂量不少于215.7g,相当于70kg的成年人每日服用剂量(1g/日)约216倍。由此提示生科补宝为低毒性样品。
3.2生科补宝对环磷酰胺致小鼠免疫功能低下的实验结果
生科补宝对环磷酰胺小鼠给药2周时跳台实验结果如下表2所示,生科补宝对单核吞噬细胞吞噬鸡红细胞的实验结果见表3所示:生科补宝给药4周对免疫器官指数的实验结果见表4所示。
表2 生科补宝对环磷酰胺小鼠的跳台模型的实验结果(
x±SD,n=10)
组别 | 给药剂量(g/kg) | 5min内错误次数(n) | 减少率(%) | 24h后 | |
第一次跳下平台的潜伏期(s) | 3min内错误总次数(n) | ||||
正常对照组 | NS | 3.2±1.2** | --- | 129.5±49.5*** | 7 |
环磷酰胺模型对照组 | NS | 5.8±1.8 | --- | 49.1±13.9 | 18 |
生科补宝低剂量组 | 0.129 | 5.6±2.1△ | 5.2 | 78.5±41.5* | 14 |
生科补宝中剂量组 | 0.387 | 5.3±1.7△ | 8.6 | 98.5±47.1** | 11 |
生科补宝高剂量组 | 1.161 | 4.1±1.1* | 29.3 | 164.8±27.7*** | 7 |
青春宝片对照组 | 1.932 | 4.1±1.5* | 29.3 | 132.4±57.3*** | 8 |
与环磷酰胺模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,△P>0.05。
由以上的实验结果可得,环磷酰胺模型对照组小鼠学***台的潜伏期和3min内错误次数)与正常对照组小鼠相比具有显著性差异(P<0.001),说明小鼠的学习记忆能力明显下降。
生科补宝各剂量组均不同程度地提高小鼠的跳台学***台的潜伏期与模型对照组相比,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01 P<0.001),各剂量组之间具有较好的量效关系。
由此提示,生科补宝具有促进小鼠的学习记忆的作用。
表3 生科补宝对小鼠巨噬细胞吞噬功能的作用(
x±SD,n=10)
组别 | 给药剂量(g/kg) | 吞噬率(%) | 吞噬指数(CRBC数/100个吞噬细胞) |
正常对照组 | NS | 47.4±14.1* | 0.569±0.135* |
环磷酰胺模型对照组 | NS | 34.7±11.7 | 0.406±0.149 |
生科补宝低剂量组 | 0.129 | 37.9±13.1△ | 0.433±0.118△ |
生科补宝中剂量组 | 0.387 | 40.3±13.7△ | 0.449±0.126△ |
生科补宝高剂量组 | 1.160 | 53.1±9.2*** | 0.574±0.092** |
青春宝片对照组 | 1.932 | 55.4±10.1*** | 0.681±0.103*** |
与模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,△P>0.05。
由以上的实验结果可得,各组小鼠的腹腔液涂片油镜下可见清晰的鸡红细胞被巨噬细胞吞噬的现象。其中模型对照组由于注射环磷酰胺免疫抑制剂,因此其吞噬率和吞噬指数与正常对照组相比明显下降,并具有显著性差异(P<0.05)。生科补宝的低、中、高剂量组均不同程度地提高吞噬率和吞噬指数,其中高剂量组与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.01,P<0.001);阳性对照组能显著地提高吞噬率和吞噬百分率,与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.001)。因此生科补宝高剂量能够提高巨噬细胞的活性,具有较好的免疫增强作用。
表4 生科补宝对小鼠免疫器官指数的实验结果(
x±SD,n=10)
组别 | 给药剂量(g/kg) | 体重(g) | 胸腺指数 | 脾脏指数 |
正常对照组 | NS | 26.54±2.74*** | 0.227±0.044*** | 0.536±0.72△ |
环磷酰胺模型对照组 | NS | 21.39±2.72 | 0.135±0.029 | 0.451±0.068 |
生科补宝低剂量组 | 0.129 | 22.66±2.44△ | 0.144±0.040* | 0.463±0.054△ |
生科补宝中剂量组 | 0.387 | 23.65±2.32△ | 0.174±0.040* | 0.482±0.077△ |
生科补宝高剂量组 | 1.160 | 24.51±2.45* | 0.189±0.062* | 0.625±0.143** |
青春宝片对照组 | 1.932 | 24.21±2.96* | 0.203±0.043*** | 0.511±0.070△ |
与模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,△P>0.05。
由以上的实验结果可得,环磷酰胺模型组小鼠体重明显降低,胸腺及脾脏均发生萎缩,其中体重、胸腺指数与正常对照组相比具有显著性差异(P<0.001)。生科补宝的低、中、高剂量组能够不同程度地增加小鼠的体重、胸腺指数和脾脏指数,其中高剂量组上述指标与模型对照组相比,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01);阳性对照组能显著地提高小鼠的体重和胸腺指数,与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.05,P<0.001)。因此生科补宝具有一定的增强免疫力作用。
3.3生科补宝对D-半乳糖所致大鼠亚急性衰老模型实验结果
注射D-半乳糖一周后,模型组及给药组大鼠均不同程度地出现毛发稀疏、无光泽、日常活动减少的现象。随着注射D-半乳糖时间的延长,大鼠的精神状况较差,行动较迟缓;浑身毛发更加稀疏,基本失去光泽,饮食及摄水虽未见明显变化,但经常全身湿透。给药六周时测定大鼠学习记忆能力的水迷宫实验结果见表5所示;生科补宝对大鼠血液流变学影响见表6所示;外周血及脑组织的生化指标变化分别见7、表8所示;器官指数见表9所示。
表5 生科补宝对D-半乳糖致亚急性衰老大鼠水迷宫实验结果(
x±SD,n=10)
组别 | 给药剂量(g/kg) | 寻找平台潜伏期SPL值(s) | |||
N方向 | S方向 | W方向 | E方向 | ||
正常对照组 | NS | 13.56±3.39*** | 7.02±1.53*** | 7.76±1.81*** | 9.88±2.77** |
D-半乳糖模型对照组 | NS | 33.61±8.94 | 29.62±7.39 | 30.47±8.44 | 19.08±3.97 |
生科补宝低剂量组 | 0.089 | 28.46±7.80△ | 25.67±8.70△ | 23.85±9.74△ | 13.29±4.40△ |
生科补宝中剂量组 | 0.267 | 22.88±6.09** | 21.81±6.07* | 18.54±6.73** | 14.38±2.85* |
生科补宝高剂量组 | 0.804 | 16.42±5.30*** | 12.56±6.61*** | 12.53±2.70*** | 10.04±2.82*** |
青春宝片对照组 | 1.338 | 24.23±6.68** | 17.85±4.59*** | 11.46±3.30*** | 15.17±4.65*** |
组别 | 给药剂量(g/kg) | 跨越原平台次数CPT(n) | 跨越其他平台次数(n) | 跨越平台百分数CPP值(%) | |
正常对照组 | NS | 4.7±1.2*** | 8.5±2.1*** | 36.0±7.9*** | |
D-半乳糖模型对照组 | NS | 2.5±1.0 | 16.4±4.8 | 13.4±4.8 |
生科补宝低剂量组 | 0.089 | 5.5±1.6*** | 12.3±1.6* | 30.7±6.9** | |
生科补宝中剂量组 | 0.267 | 6.2±2.8*** | 8.8±3.4*** | 41.7±9.5** | |
生科补宝高剂量组 | 0.804 | 4.3±1.3** | 7.4±1.3*** | 36.3±7.7** | |
青春宝片对照组 | 1.338 | 7.3±2.6*** | 9.9±2.3*** | 41.4±10.8△ |
与D-半乳糖模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,△P>0.05。
由实验结果可得,模型对照组大鼠的寻找平台潜伏期延长,其跨越原平台次数以及跨越平台百分数较正常对照组均明显降低,与正常对照组相比具有显著性差异(P<0.001),说明D-半乳糖能够导致大鼠的学***台潜伏期均不同程度的缩短,其中生科补宝的中、高剂量表现出较好的改善大鼠学***台潜伏期也明显缩短,与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。
表6 生科补宝对大鼠的血液流变学影响(
x±SD,n=10)
组别 | 全血粘度(mPa·s) | ||
低切变(l/s) | 中切变(l/s) | 高切变(l/s) | |
10.00 | 60.00 | 150.00 | |
正常对照组 | 10.514±1.166*** | 5.442±0.756*** | 4.059±0.487*** |
D-半乳糖模型对照组 | 16.195±3.522 | 7.395±1.456 | 6.079±0.988 |
生科补宝低剂量组 | 15.639±3.140△ | 6.952±0.884△ | 5.719±0.560△ |
生科补宝中剂量组 | 14.790±2.413△ | 6.517±1.186△ | 4.955±0.756** |
生科补宝高剂量组 | 13.844±1.516△ | 6.109±0.672* | 4.261±1.103*** |
青春宝片对照组 | 15.493±2.459△ | 6.570±0.972△ | 4.491±0.691*** |
组别 | 血浆粘度(mPa·s) | 血清粘度 | 红细胞压积HCT(%) |
正常对照组 | 1.48±0.10 | 1.14±0.05* | 45.58±6.11** |
D-半乳糖模型对照组 | 1.64±0.13 | 1.19±0.05 | 56.09±7.63 |
生科补宝低剂量组 | 1.59±0.08△ | 1.16±0.06△ | 52.66±3.74△ |
生科补宝中剂量组 | 1.55±0.08△ | 1.15±0.07△ | 51.36±4.05△ |
生科补宝高剂量组 | 1.54±0.08△ | 1.15±0.06△ | 49.23±5.78* |
青春宝片对照组 | 1.56±0.06△ | 1.16±0.04 | 50.14±5.64△ |
组别 | 纤维蛋白(mPa·s)粘度 | 血小板聚集率(%) | |
正常对照组 | 0.34±0.12△ | 42.86±3.01*** | |
D-半乳糖模型对照组 | 0.45±0.15 | 57.04±6.83 | |
生科补宝低剂量组 | 0.43±0.11 | 54.14±4.76△ | |
生科补宝中剂量组 | 0.40±0.13△ | 53.06±3.80△ | |
生科补宝高剂量组 | 0.39±0.10△ | 50.58±3.60* | |
青春宝片对照组 | 0.40±0.09△ | 52.08±3.40△ |
与模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,△P>0.05。
由以上实验结果可得,模型对照组大鼠全血粘度低、中、高切变,血清粘度血浆粘度,红细胞压积和血小板聚集率均明显升高,与正常对照组相比,具有显著性差异(P<0.05,P<0.01,P<0.001=,提示D-半乳糖引起大鼠的机体糖代谢紊乱所致的亚急性衰老病症对血液流边学产生影响,它使大鼠的血液变粘,易凝。生科补宝的各剂量组对大鼠的血液粘度具有不同程度的降低,但只有高剂量组的全血粘度中、高切变值,红细胞压积和血小板聚集率与模型对照组相比,具有显著性差异(P<0.05,P<0.001),初步提示其具有一定的活血化淤作用。阳性对照组大鼠的全血粘度高切变值与同期模型对照组相比,具有显著性差异(P<0.001=,其对亚急性衰老大鼠改善血液流变的作用较弱。
表7 生科补宝对D-半乳糖致亚急性衰老大鼠的血清生化指标的影响(
x±SD,n=10)
组别 | 给药剂量(g/kg) | MDA(nmol/ml) | SOD(NU/ml) | MAO(U/h/ml) | GSH-Px(U) |
正常对照组 | NS | 3.21±0.90*** | 298.98±40.09*** | 11.37±2.50*** | 228.30±49.16*** |
D-半乳糖模型对照组 | NS | 7.07±1.74 | 165.35±56.71△ | 22.83±4.06 | 138.43±26.08 |
生科补宝低剂量组 | 0.089 | 5.55±1.38* | 183.44±58.71△ | 18.18±3.97* | 159.54±57.31△ |
生科补宝中剂量组 | 0.268 | 4.90±1.41** | 202.31±71.21△ | 16.47±3.75** | 183.97±56.26* |
生科补宝高剂量组 | 0.804 | 4.31±1.04*** | 240.36±56.88** | 15.42±5.03** | 194.67±53.58** |
青春宝片对照组 | 1.338 | 4.66±0.70*** | 228.45±54.94 | 16.18±3.33*** | 176.13±47.65* |
与模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,△P>0.05.
由表7的实验结果可得,模型对照组大鼠血清中MDA、MAO的含量增加,而SOD及GSH-Px的含量则降低,提示注射D-半乳糖的大鼠体内自由基的含量提高,机体的抗氧化能力降低。生科补宝的各剂量组均能够不同程度地降大鼠血清中MDA、MAO的含量,升高血清中SOD及GSH-Px的含量:其中生科补宝低、中、高剂量组大鼠血清中MDA的含量与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.05,P<0.01),三个剂量组之间具有较好的量效关系;生科补宝的高剂量组大鼠血清中的SOD值与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.01);生科补宝低、中、高剂量组大鼠血清中MAO的含量与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.05,P<0.01);生科补宝中、高剂量组大鼠血清中GSH-Px的含量与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。阳性对照组的作用效果与生科补宝中剂量组的效果相近。由此提示,生科补宝能够较好的清除机体的过氧化物自由基的产生,保护细胞减少自由基的损伤,提高其具有对抗机体的老化作用。
表8 生科补宝亚急性衰老大鼠的脑组织中生化指标的影响(
x±SD,n=10)
组别 | 给药剂量(g/kg) | MDA(nmol/mgprot) | SOD(NU/mgprot) | MAO(U/h/mgprot) | GSH-Px(U) |
正常对照组 | NS | 4.40±0.56*** | 73.25±19.83*** | 6.99±0.73*** | 27.80±1.20*** |
D-半乳糖模型对照组 | NS | 8.44±2.66 | 39.65±18.13 | 13.71±1.67 | 13.90±3.06 |
生科补宝低剂量组 | 0.129 | 7.23±1.51△ | 46.26±17.15△ | 11.23±1.78** | 16.03±5.44△ |
生科补宝中剂量组 | 0.387 | 6.44±1.43△ | 50.51±17.51△ | 9.01±1.26*** | 19.53±4.53*** |
生科补宝高剂量组 | 1.160 | 5.77±0.94** | 53.66±18.29△ | 8.50±2.85*** | 22.28±2.77*** |
青春宝片对照组 | 1.932 | 6.26±1.30** | 47.11±16.33△ | 9.88±1.42*** | 20.75±1.43*** |
与模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,△P>0.05.
由以上的实验结果可得,模型对照组大鼠大脑组织中的MDA和MAO的含量增多,SOD及GSH-Px的含量下降,与正常对照组相比具有显著性差异(P<0.01,P<0.001),与由于长期注射D-半乳糖导致全身代谢紊乱,以致各器官、***功能衰退引起自由基堆积、细胞膜质受损致衰老的理论相符合。生科补宝高剂量能够降低亚急性衰老大鼠脑组织中MDA含量,与模型对照组相比具有显著性差(P<0.05);生科补宝的低、中、高剂量组能够降低亚急性衰老大鼠脑组织中的SOD酶的含量并具有量效,但与模型对照组相比不具有显著性差异(P<0.05);生科补宝的低、中、高剂量组能够升高亚急性衰老大鼠脑组织中的SOD酶的含量,与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.01、P<0.001);生科补宝的中、高剂量组能够亚急性衰老大鼠脑组织中的GSH-Px含量,与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.01、P<0.001)。以上说明,生科补宝能够清除体内过多的自由基,有利于保护细胞膜的稳定性从而达到抗衰老的药理作用。阳性药青春宝片能够升高亚急性衰老大鼠脑组织中的GSH-Px的含量,降低MDA和MAO的含量,与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.05,P<0.001);阳性对照组虽升高大鼠脑组织中的SOD活性,但与模型对照组相比不具有显著性差异。生科补宝给药组与阳性对照组大鼠脑组织SOD值个体差异较大,因此影响t检验结果
表9 生科补宝对大鼠体重及脏器指数的影响(
x±SD,n=10)
组别 | 给药剂量(g/kg) | 体重(g) | 胸腺指数(/100g | 脾脏指数(/100g) | 脑指数(/100g) |
正常对照组 | NS | 361.5±25.5△△ | 0.085±0.023*** | 0.328±0.051 | 0.578±0.056 |
D-半乳糖模型对照组 | NS | 355.5±44.6 | 0.041±0.009 | 0.267±0.054 | 0.533±0.080 |
生科补宝低剂量组 | 0.129 | 367.5±18.9△ | 0.050±0.010* | 0.278±0.063 | 0.534±0.042 |
生科补宝中剂量组 | 0.387 | 370.5±35.4△ | 0.054±0.007** | 0.282±0.054 | 0.544±0.064 |
生科补宝高剂量组 | 1.160 | 402.8±40.5* | 0.081±0.025*** | 0.302±0.059 | 0.539±0.064 |
青春宝片对照组 | 1.932 | 388.6±45.0△ | 0.061±0.016** | 0.292±0.067 | 0.509±0.058 |
与模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,△P>0.05。
由以上实验结果可得,模型对照组大鼠的体重虽略有下降,但与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05);其胸腺、脾脏均发生萎缩,胸腺指数与脾脏指数与模型对照组相比,具有显著性差异(P<0.05,P<0.001);另外模型对照组的全脑未见明显萎缩,与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05)。生科补宝的三个剂量组的体重均略增加,其中高剂量组大鼠体重与模型对照组相比,具有显著性差异(P<0.05);生科补宝的中、高剂量组大鼠的胸腺指数与模型对照组相比,具有显著差异(P<0.01,P<0.001);生科补宝的脾脏指数虽增加,但与模型对照组相比无显著性差异(P>0.05);生科补宝的各剂量组大鼠全脑指数与模型对照组相比,均无显著性差异(P>0.05)。阳性对照组大鼠的胸腺指数与模型对照组相比,具有显著性差异(P>0.05)。其余体重、脾脏指数和脑指数与模型对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。由此提示,生科补宝具有一定的缓解衰老引起的免疫器官萎缩的作用。
3.4生科补宝对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老的实验结果
连续皮下注射D-半乳糖4周后,除正常对照组外,各组小鼠肉眼可见毛发无光泽且稀疏、行动较为迟缓、精神萎缩不振等现象。对小鼠的自主活动的影响见表10所示;对小鼠跳台实验的影响见表11所示;对小鼠体重及免疫器官的影响见表12所示。
表10 生科补宝对亚急性衰老模型小鼠的自主活动的影响(
x±SD,n=10)
组别 | 给药剂量(g/kg) | 5min自主活动次数(n) | 改善率(%) |
正常对照组 | NS | 226±26*** | --- |
D-半乳糖模型对照组 | NS | 142±42 | --- |
生科补宝低剂量组 | 0.129 | 152±28△ | 5.3 |
生科补宝中剂量组 | 0.387 | 164±30△ | 13.9 |
生科补宝高剂量组 | 1.160 | 165±22△ | 14.6 |
青春宝片对照组 | 1.932 | 172±28△ | 19.4 |
与模型对照组相比,***P<0.001,△P>0.05。
由实验结果可得,模型对照组小鼠的自主活动量与正常对照组相比显著降低(P<0.001),提示采用D-半乳糖致小鼠亚急性衰老特征已表现出来;生科补宝低、中、高各剂量组小鼠的自主活动改善率分别为5.3%、13.9%、14.6%,5min内小鼠自主活动次数与模型对照组相比显著性差异(P>0.05);阳性药青春宝片对照组小鼠自主活动改善率为19.4%,自主活动次数与模型对照组相比无显著性差异(P>0.05);由此可见生科补宝虽具有一定的改善作用,但其改善作用并不显著。
表11 生科补宝对亚急性衰老模型小鼠的跳台模型的作用(
x±SD,n=10)
组别 | 给药剂量(g/kg) | 5min内错误次数(n) | 减少率(%) | 24h后 | |
第一次跳下平台的潜伏期(s) | 3min内错误总次数(n) | ||||
正常对照组 | NS | 4.4±1.6*** | --- | 116.4±37.7*** | 6 |
D-半乳糖模型对照组 | NS | 11.6±3.9 | --- | 50.2±15.0 | 24 |
生科补宝低剂量组 | 0.129 | 8.9±2.5△ | 23.3 | 65.7±17.6* | 20 |
生科补宝中剂量组 | 0.387 | 5.8±2.7*** | 50.0 | 78.6±33.6* | 13 |
生科补宝高剂量组 | 1.160 | 5.3±2.8*** | 54.3 | 92.8±35.5** | 9 |
青春宝片对照组 | 1.932 | 7.1±2.4** | 38.8 | 83.7±38.6* | 12 |
与模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,△P>0.05。
由以上的实验结果可得,D-半乳糖模型对照组小鼠学***台的潜伏期和3min内错误次数)与正常对照组小鼠相比具有显著性差异(P<0.001),说明亚急性衰老小鼠的学习能力明显下降。生科补宝各剂量组均不同程度地提高小鼠的跳台学习成绩,其5min内跳台错误减少率分别23.3%、50.0%、54.3%,其中生科补宝中、高剂量组小鼠学习成绩和记忆成绩与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.05,P<0.01,P<0.001);阳性对照组小鼠的学习成绩与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.05,P<0.01=。由此提示,生科补宝高剂量具有显著地促进小鼠的学习记忆能力。
表12 生科补宝对亚急性衰老模型小鼠的体重及免疫器官指数的影响(
x±SD,n=10)
组别 | 给药剂量(g/kg) | 体重(g) | 胸腺指数(%) | 脾脏指数(%) |
正常对照组 | NS | 28.24±2.51*** | 0.166±0.034*** | 0.992±0.112*** |
D-半乳糖模型对照组 | NS | 23.45±2.08 | 0.094±0.020 | 0.639±0.124 |
生科补宝低剂量组 | 0.129 | 25.95±1.90* | 0.104±0.031** | 0.709±0.195** |
生科补宝中剂量组 | 0.387 | 25.96±2.15* | 0.114±0.033△ | 0.831±0.227△ |
生科补宝高剂量组 | 1.160 | 25.29±2.08* | 0.142±0.032△ | 0.881±0.179* |
青春宝片对照组 | 1.932 | 25.54±1.96△ | 0.139±0.043*** | 0.820±0.153** |
与模型对照组相比,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,△P>0.05。
由实验结果可得,长期注射D-半乳糖使各组小鼠的体重增长缓慢,模型对照组小鼠体重与正常对照组相比具有显著性差异(P<0.001),其胸腺及脾脏均发生萎缩,与正常对照组相比具有显著性差异(P<0.001),提示亚急性衰老模型制备成功。生科补宝随着给药量的增加,小鼠的体重增加越缓慢,与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.01);生科补宝各剂量组小鼠的胸腺及脾脏的均发生萎缩,但随着给药浓度的增加,其程度得到缓解,其中生科补宝的高剂量组小鼠的胸腺指数和脾脏指数与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.01,P<0.001);其余各指数与模型对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。阳性对照组能增加亚急性衰老小鼠的体重,但与模型对照组相比无显著性差异(P>0.05),青春宝片能较好的改善胸腺和脾脏的萎缩,与模型对照组相比具有显著性差异(P<0.01)。
4.实验结论
综合上述实验结果可得,生科补宝经小鼠一次及一日多次口服给药,其最大耐受量相当于70kg的成年人每日服用剂量(1g/日)的86倍和216倍,且均未出现毒性反应;生科补宝的高剂量组表现出较好的免疫增强作用,显著提高小鼠巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数,提高小鼠免疫器官指数,具有一定的提高小鼠的学习记忆能力;生科补宝的中、高剂量对D-半乳糖所致亚急性衰老大鼠和小鼠,均具有显著的改善记忆能力、较好地清除体内的过氧化物自由基(MDA、MAO)的产生,提高体内抗氧化活性物质(SOD、GSH-Px)的含量,有利于保护细胞膜的稳定性。在以上实验中,生科补宝高剂量组的给药剂量(1.161g/kg)低于阳性对照组青春宝片的给药剂量(1.932g/kg)及阳性对照药神奇精乌胶囊的给药剂量(3.132g/kg),显示生科补宝有较好的药理活性。
Claims (8)
1、一种用于调节免疫力的中药胶囊,其特征在于该胶囊是由下列重量比的原料制成:
提取后的云芝粉 4-16份
提取后的香菇粉 3-12份
提取后的黄芪粉 3-12份。
2、根据权利要求1的中药胶囊,其特征在于该胶囊是由下列重量比的原料制成:
提取后的云芝粉 12份
提取后的香菇粉 9份
提取后的黄芪粉 9份。
3、一种如权利要求1所述的中药胶囊的制备方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
a.分别称取提取后云芝粉,提取后香菇粉,提取后黄芪粉过60目筛待用;所有原料进行外观检测,并置于混合机内进行混粉;
b.收集步骤a经混合均匀的混合粉,用双层聚乙烯胶袋包装待用;
c.将步骤b收集的混合粉于自动或半自动胶囊充填机进行胶囊充填;
d.胶囊经抛光、检查,入瓶、入盒包装即得产品。
4、根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于提取后的云芝粉的制备方法是:取合格的云芝,净选,除杂质,清水洗净,切碎,置多功能提取罐内,加8-12倍量水,煮沸,提取2-4次,每次煮沸提取时间均为1.5-2.5小时,提取液200目过筛网,取滤液,在-80--95kpa,65-80℃减压,浓缩,60℃相对密度为1.08-1.10过120目,合并浓缩液,冷至室温,搅拌下缓慢加入95%的乙醇,使浓缩液清膏的含醇量85%,搅拌静置24小时,滤过,取沉淀减压干燥,粉碎成细末,即制得提取后的云芝粉。
5、根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于提取后的云芝粉的制备方法是:取合格的云芝,净选,除杂质,清水洗净,切碎,置多功能提取罐内,加10倍量水,煮沸,提取3次,每次煮沸提取时间均为2小时,提取液200目过筛网,取滤液,在-90kpa,75℃减压,浓缩,在60℃下相对密度为1.08-1.10过120目,合并浓缩液,冷至室温,搅拌下缓慢加入95%的乙醇,使浓缩液清膏的含醇量85%,搅拌静置24小时,滤过,取沉淀减压干燥,粉碎成细末,即制得提取后的云芝粉。
6、根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于提取后的香菇粉和黄芪粉的制备方法是:分别取合格的香菇、黄芪,净选,除杂质,清水洗净,切碎,置多功能提取罐内,加8-12倍量水,煮沸,提取2-4次,每次煮沸提取时间均为0.5-1.5小时,提取液200目过筛网,取滤液,在-80--95kpa,65-80℃减压,浓缩,60℃相对密度为1.05-1.08过120目,合并浓缩液,喷雾干燥,分别制得提取后的香菇粉、提取后的黄芪粉。
7、根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于提取后的香菇粉和黄芪粉的制备方法是:分别取合格的香菇、黄芪,净选,除杂质,清水洗净,切碎,置多功能提取罐内,加10倍量水,煮沸,提取3次,每次煮沸提取时间均为1小时,提取液200目过筛网,取滤液,在-90kpa,75℃减压,浓缩,在60℃下相对密度为1.05-1.08过120目,合并浓缩液,喷雾干燥,分别制得提取后的香菇粉、提取后的黄芪粉。
8、权利要求1所述的中药胶囊的用途,用于提高免疫功能、补血生津,抗氧化、抗衰老,抗辐射,养肝护肝,增强体质抗病能力,促进身体康复。
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