CN1637133A - 一种香蕉内生菌及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种香蕉内生链霉菌及其分离培养方法和用于香蕉促长与香蕉镰孢菌枯萎病防治的用途。本发明的香蕉内生菌为链霉菌CCTCC M203070。该链霉菌CCTCC M203070可从香蕉枯萎病疫区的香蕉植株分离培养得到。试验结果表明，该链霉菌CCTCC M203070具有促进香蕉苗生长和提高对镰孢菌枯萎病抗性的作用，可用于促进香蕉生长和防治香蕉镰孢菌枯萎病。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物内生放线菌——香蕉内生链霉菌及其分离培养方法和用于香蕉促长与香蕉镰孢菌(尖孢镰孢菌Fusarium oxysporum)枯萎病防治的用途。
背景技术
植物内生菌是能从经过表面消毒的植物组织中分离或者从植物内部的汁液中获得，并且对植物表观上无危害即不导致明显病症的微生物。植物内生菌包括互惠共利的(mutualistic)和中性的(neutral)内共生微生物。目前已经从很多植物的各种器官(根、茎、叶、花、果实、种子)中分离到内生菌。它们在植物体内的普遍性、丰富的生物多样性及功能多样性已有不少文献报导。内生菌经过长期的与植物发生相互作用，它们之间形成较复杂的关系。现已发现内生菌对宿主植物有以下几个方面的作用：
1)促进宿主植物生长，提高宿主的生产力，可增强宿主对病、虫的抗性，因而在农业生物控制、生物防治方面显示了重要意义；
2)增强宿主植物对环境胁迫的抗性。如对干旱、全球气温上升、盐碱、重金属及其它有毒物质污染等的抗性；
3)内生菌产生新的生物活性物质。植物内生菌作为一种特殊生境的微生物，在植物体内产生丰富多样、具有多种生物活性的次生代谢产物，目前人们已从内生菌中找到许多具有各种生物活性的新物质在医药业、农业方面显示出重要的应用价值。
目前，国际上关于内生放线菌的研究不多，更没有开展香蕉内生链霉菌用于抗香蕉枯萎病的试验报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能防治香蕉镰孢菌枯萎病的香蕉内生菌及其分离培养方法和用于香蕉促长与香蕉镰孢菌枯萎病防治的用途。
本发明的香蕉内生菌是发明人从香蕉植株中分离到的一株放线菌，经传统方法鉴定和分子鉴定表明它属于链霉菌，将其命名为链霉菌S96(Streptomyces roseogriseolus S96)。
本发明的香蕉内生菌——链霉菌S96(Streptomyces roseogriseolus S96)已于2003年9月22日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO.M203070。
本发明的香蕉内生菌——链霉菌S96(以下简称为链霉菌CCTCC M203070)具有如下的生物学特征：
1.菌落形态特征：在S培养基上生长良好，放线菌菌落特征：菌丝紧密，正面灰色，背面为瓜瓤粉色，产生落英淡粉色可溶性色素，孢子连接成直链状，孢子数大于15个。
2.菌体形态特征：细胞丝状，菌丝直径约为0.3-0.7μM，革兰氏阳性。
3.主要生理生化特征：可在放线菌培养基S上良好生长，生长温度10-38℃，生长pH5-9；对尖孢镰孢菌有明显抑制活性，产生淀粉酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和纤维素酶。
4.遗传学特征：该链霉菌CCTCC M203070的16S rDNA部分基因序列(709bp)已向美国国家生物技术信息中心(NCBI)的Genbank基因序列数据库提交，登录号为AJ519793。根据《放线菌分类与鉴定》(阎逊初，科学出版社，1992)，本发明的链霉菌CCTCC M203070在形态特征上，与国内命名的玫瑰浅灰链霉菌(Streptomycesroseogriseolus)最接近；该链霉菌CCTCC M203070的16S rDNA序列分析表明，与Genbank国际数据库中记录的最相似的菌株Streptomyces griseorubiginosus(AJ399488)的相似性为99％。因此，链霉菌CCTCC M203070应属于链霉菌属。
本发明的链霉菌CCTCC M203070可通过如下方法从香蕉植株分离培养得到：
(1)将在香蕉枯萎病疫区采集的香蕉植株的根、茎或/和叶经表面消毒处理后，剪为小块，接种于S或改良的S培养基平板，于24～30℃下培养5～7天；
(2)挑取小型菌丝紧密的放线菌特征菌落，于相同培养基平板划线纯化分离，置于24～30℃培养5～7天；
(3)将所得纯菌株与病原菌尖孢镰孢菌作平板对峙试验，从中选择对病原菌具抗性的菌株，通过香蕉苗接种试验进一步验证其促长和抗病活性后，鉴定并保存菌种。
发明人已针对该链霉菌CCTCC M203070发展了一套培养技术，并能把该菌重新回接到香蕉组培苗，促进了香蕉苗的生长、增强了香蕉对镰刀菌枯萎病的抗性。
本发明的链霉菌CCTCC M203070的制种方法，其步骤包括：
(1)将链霉菌CCTCC M203070纯菌种接种于S或改良S培养基斜面，在28℃培养至孢子丰满，作为斜面种子；
(2)将斜面种子接于种子培养基中，于25～29℃下以150～200r/m转速振荡培养30-50小时，作为二级种子液；所述种子培养基为S或改良的S培养基，pH7.3；
(3)在固态制种培养基按2～4％(体积/重量)接入二级种子液，28℃保温培养至孢子丰满；收获孢子作为菌种；所述制种培养基成分组成为：玉米粉150g，葡萄糖或蔗糖100g，黄豆饼粕粉150g，蛋白胨10g，酵母膏或酵母粉10g，碳酸钙50g和水300ml。
本发明所述的S培养基成分组成通常为：葡萄糖1.0g，蛋白胨4.0g，磷酸氢二甲钾0.5g，硫酸镁0.1g，氯化钙0.1g，微量的柠檬酸铁等(微量元素)，琼脂2.0g，海水100ml，pH7.0～7.3；所述改良的S培养基通常是在S培养基基础上以硝酸钾1.0g代替蛋白胨。
本发明的香蕉内生菌——链霉菌CCTCC M203070不仅能促进香蕉生长，并可用于防治香蕉镰孢菌(尖孢镰孢菌Fusarium oxysporum)枯萎病。该链霉菌CCTCC M203070经体内外试验，均显示了拮抗病原菌尖孢镰孢菌古巴专化型的活性。在香蕉组织提取物培养基上的试验表明该菌的抗真菌活性可能与争夺香蕉组织中的有效铁有关。试验证明，应用该香蕉内生菌接种香蕉苗后，植株生长状况改善，抗病性提高。
本发明的香蕉内生菌用于促进香蕉生长和防治香蕉镰孢菌枯萎病时，只需将该香蕉内生菌——链霉菌CCTCC M20307接种于香蕉苗，即可获得促进香蕉苗生长和提高其对香蕉镰孢菌枯萎病抗病力的效果。
具体实施方式
实施例1：
链霉菌CCTCC M203070的分离培养方法之一：
1.采集香蕉枯萎病疫区健康香蕉植株的根样品，充分冲洗，70％乙醇处理5分钟，次氯酸钠(0.9％有效氯)溶液处理20分钟，无菌水充分冲洗；
2.将处理好的样品剪碎，接入S平板中；
3.该平板置于26℃培养5天；
4.挑取小型菌丝紧密的放线菌特征菌落，于相同培养基平板划线纯化分离，置于24～30℃培养5天，挑取单菌落，接于相同培养基斜面保存。
5.将所得纯菌株与病原菌尖孢镰孢菌作平板对峙试验，从中选择对病原菌具抗性的菌株，通过香蕉苗接种试验进一步验证其促长和抗病活性后，鉴定并保存菌种。
实施例2：
链霉菌CCTCC M203070的分离培养方法之二：
1、采集香蕉枯萎病疫区健康香蕉植株的叶样品，充分冲洗，36％甲醛处理30秒，次氯酸钠(0.9％有效氯)溶液处理20分钟，无菌水充分冲洗；
2、将处理好的样品剪碎，接入改良的S平板中；
3、该平板置于26℃培养7天；
4、挑取小型菌丝紧密的放线菌特征菌落，于相同培养基平板划线纯化分离，置于24～30℃培养5天，挑取单菌落，接于相同培养基斜面保存。
5、将所得纯菌株与病原菌尖孢镰孢菌作平板对峙试验，从中选择对病原菌具抗性的菌株，通过香蕉苗接种试验进一步验证其促长和抗病活性后，鉴定并保存菌种。
实施例3：
链霉菌CCTCC M203070的培养制种方法之一：
1.将实施例1或2得到的链霉菌CCTCC M203070纯种接S培养基斜面；
2.28℃培养至孢子长满；
3.转接相同培养基平板，于28℃培养至孢子长满；孢子可直接应用于接种香蕉或扩大培养。
实施例4：
链霉菌CCTCC M203070的培养制种方法之二：
1.将实施例1或2得到的链霉菌CCTCC M203070纯种接S培养基斜面，28℃培养至孢子长满；
2.将斜面种子接于盛于500ml三角瓶的200ml种子培养基中，于28℃以200r/m转速振荡培养30小时，即为二级种子液；
3.三角瓶内装约五分之一灭菌的固态制种培养基，按2～4％(V/W)接入二级种子液，混均，28℃保温培养至孢子长满，获得的孢子可用于接种香蕉。
所述制种培养基为：玉米粉150g，葡萄糖(或蔗糖)100g，黄豆饼粕粉150g，蛋白胨10g，酵母膏或酵母粉10g，碳酸钙50g，水约300ml。
实施例5：
按照实施例4的方法，其步骤3中的“三角瓶内装约五分之一灭菌的固态制种培养基”改为“瓷盘内装一层约三厘米厚的灭菌固态制种培养基”，其它步骤和条件与实施例4相同。
实施例6：
链霉菌CCTCC M203070应用于抗香蕉枯萎病病原菌的试验：
1.链霉菌CCTCC M203070纯种接S培养基斜面，28℃培养至孢子长满；
2..用无菌水洗下斜面内生菌孢子，接种于香蕉假茎条块(约3厘米)A的一端，并培养至孢子在假茎上生长形成可见菌落；
3..紧接着把病原真菌尖孢镰孢菌接种于香蕉假茎条块B的一端和假茎块A的无接种链霉菌CCTCC M203070的一端，28℃培养5天；
4..用肉眼直接观察和采用乳酸酚蓝染色后用显微镜观察香蕉假茎条块上病原真菌的生长，判断内生菌对致病真菌生长的影响；
5..结果：不接链霉菌CCTCC M203070的假茎块B很快长满致病真菌菌丝，而假茎块A仅有二分一受致病真菌菌丝侵犯，接了链霉菌CCTCC M203070的一端看不到致病真菌菌丝；以乳酸酚兰染色后，显微观察也发现接近链霉菌CCTCC M203070的茎组织很少致病真菌菌丝生长。
实施例7：
链霉菌CCTCC M203070应用于抗香蕉枯萎病的试验：
1.链霉菌CCTCC M203070纯种接S培养基斜面，28℃培养至孢子长满；
2.将斜面种子接于盛于500ml三角瓶的200ml种子培养基中，于28℃以200r/m转速振荡培养约30小时，即为二级种子液；
3.三角瓶内装约五分之一灭菌的固态制种培养基，按2～4％接入二级种子液，混均，28℃保温培养至孢子长满；
4.以上述链霉菌CCTCC M203070种子培养物接种香蕉组培苗20株，组培苗转移至花盆后移至温室，一个月后可见接了链霉菌CCTCC M203070的香蕉苗生长状况、植株高度和叶面面积都明显优于对照组；
5.香蕉苗移植后45天，进行人工感染致病性尖孢镰刀菌，两个月后，不接链霉菌CCTCC M203070的对照组100％香蕉苗出现黄叶和渐渐枯萎，接种了链霉菌CCTCC M203070的试验组香蕉苗长势良好，100％无枯萎病症状出现；
实施例8：
链霉菌CCTCC M203070对香蕉生长影响的扩大试验：
1.链霉菌CCTCC M203070纯种接S培养基斜面，28℃培养至孢子长满；
1.将斜面种子接于盛于500ml三角瓶的200ml种子培养基中，于28℃以200r/m转速振荡培养30小时，即为二级种子液；
2.三角瓶内装约五分之一灭菌的固态制种培养基，按2～4％接入二级种子液，混均，28℃保温培养至孢子长满；
3.以上述链霉菌CCTCC M203070种子培养物接种香蕉组培苗100株，组培苗然后移植至苗圃，两个月后可见接种链霉菌CCTCC M203070的香蕉苗生长状况明显优于对照组，植株高度和叶面面积比对照组增加约三分之一。
Claims (9)
1.一种香蕉内生菌，其特征在于：该菌是链霉菌CCTCC M203070。
2.按照权利要求1所述的香蕉内生菌，其特征是该菌是从香蕉植株分离培养得到的。
3.按照权利要求2所述的香蕉内生菌，其特征在于该菌是通过如下方法从香蕉植株分离培养得到的：
(1)将在香蕉枯萎病疫区采集的香蕉植株的根、茎或/和叶经表面消毒处理后，剪为小块，接种于S或改良的S培养基平板，于24～30℃下培养5～7天；
(2)挑取小型菌丝紧密的放线菌特征菌落，于相同培养基平板划线纯化分离，置于24～30℃培养5～7天；
(3)将所得纯菌株与病原菌尖孢镰孢菌作平板对峙试验，从中选择对病原菌具抗性的菌株，通过香蕉苗接种试验进一步验证其促长和抗病活性后，鉴定并保存菌种。
4.按照权利要求3所述的香蕉内生菌，其特征在于：所述的改良的S培养基是在S培养基基础上以1.0g硝酸钾代替蛋白胨。
5.权利要求1所述的香蕉内生菌的制种方法，其步骤包括：
(1)将链霉菌CCTCC M203070纯菌种接种于S或改良S培养基斜面，在28℃培养至孢子丰满，作为斜面种子；所述改良的S培养基是在S培养基基础上以硝酸钾1.0g代替蛋白胨；
(2)将斜面种子接于种子培养基中，于25～29℃下以150～200r/m转速振荡培养30-50小时，作为二级种子液；所述种子培养基为S或改良的S培养基，pH7.3；
(3)在固态制种培养基按2～4％的体积/重量比接入二级种子液，28℃保温培养至孢子丰满；收获孢子作为菌种；所述制种培养基成分组成为：玉米粉150g，葡萄糖或蔗糖100g，黄豆饼粕粉150g，蛋白胨10g，酵母膏或酵母粉10g，碳酸钙50g和水300ml。
6.权利要求1所述的香蕉内生菌用于防治香蕉镰孢菌枯萎病的用途。
7.按照权利要求6所述的用途，其特征是：利用链霉菌CCTCC M203070接种于香蕉苗，获得对镰孢菌枯萎病具有抗病力的香蕉植株。
8.权利要求1所述的香蕉内生菌用于香蕉促长的用途。
9.按照权利要求8所述的用途，其特征是：利用链霉菌CCTCC M203070接种于香蕉苗，促进香蕉苗生长。
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Cited By (9)
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|---|---|---|---|---|
| CN100363058C (zh) * | 2006-03-21 | 2008-01-23 | 浙江理工大学 | 用于分离植物内生菌的消毒方法 |
| CN102206593A (zh) * | 2011-03-15 | 2011-10-05 | 海南大学 | 一株金黄垂直链霉菌及其应用 |
| CN102329755A (zh) * | 2011-09-28 | 2012-01-25 | 中国热带农业科学院海口实验站 | 一种防治香蕉枯萎病的不吸水链霉菌株bwl58及其应用 |
| CN103392414A (zh) * | 2013-07-01 | 2013-11-20 | 句容根生药材有限公司 | 一种丹参种子抗病处理方法 |
| CN104894018A (zh) * | 2015-05-27 | 2015-09-09 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种卢娜林瑞链霉菌及其应用 |
| CN106244491A (zh) * | 2016-08-29 | 2016-12-21 | 佛山市艳晖生物科技有限公司 | 一种抑制枯萎病的香蕉茎叶残体腐熟菌剂及其制备方法 |
| CN107904196A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-04-13 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种阎氏链霉菌及其应用 |
| CN108977381A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-12-11 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种香蕉内生解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
| CN110066755A (zh) * | 2019-05-20 | 2019-07-30 | 江苏师范大学 | 一株牛蒡内生链霉菌、含有该内生菌的微生物菌剂及应用 |
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Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100363058C (zh) * | 2006-03-21 | 2008-01-23 | 浙江理工大学 | 用于分离植物内生菌的消毒方法 |
| CN102206593A (zh) * | 2011-03-15 | 2011-10-05 | 海南大学 | 一株金黄垂直链霉菌及其应用 |
| CN102206593B (zh) * | 2011-03-15 | 2012-11-28 | 海南大学 | 一株金黄垂直链霉菌及其应用 |
| CN102329755A (zh) * | 2011-09-28 | 2012-01-25 | 中国热带农业科学院海口实验站 | 一种防治香蕉枯萎病的不吸水链霉菌株bwl58及其应用 |
| CN102329755B (zh) * | 2011-09-28 | 2013-07-10 | 中国热带农业科学院海口实验站 | 一种防治香蕉枯萎病的不吸水链霉菌株bwl58及其应用 |
| CN103392414A (zh) * | 2013-07-01 | 2013-11-20 | 句容根生药材有限公司 | 一种丹参种子抗病处理方法 |
| CN104894018A (zh) * | 2015-05-27 | 2015-09-09 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种卢娜林瑞链霉菌及其应用 |
| CN104894018B (zh) * | 2015-05-27 | 2018-09-25 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种卢娜林瑞链霉菌及其应用 |
| CN106244491A (zh) * | 2016-08-29 | 2016-12-21 | 佛山市艳晖生物科技有限公司 | 一种抑制枯萎病的香蕉茎叶残体腐熟菌剂及其制备方法 |
| CN107904196A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-04-13 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种阎氏链霉菌及其应用 |
| CN107904196B (zh) * | 2017-12-26 | 2020-04-07 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种阎氏链霉菌及其应用 |
| CN108977381A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-12-11 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种香蕉内生解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
| CN110066755A (zh) * | 2019-05-20 | 2019-07-30 | 江苏师范大学 | 一株牛蒡内生链霉菌、含有该内生菌的微生物菌剂及应用 |
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