发明内容
基于上述原因,本发明采用水提取人参的方法,在有效成分有一定提高的基础上,很好控制了生产成本;本发明采用分别提取麦冬和五味子的工艺,在提取过程中严格控制提取液的PH值,减少5-羟甲基糠醛的含量;得到的有效部位与药用辅料混合,制备成注射制剂,药理实验表明本发明各组制剂具有安全性高、药理作用更好的特点。
本发明通过以下技术方案实现的。
一.工艺制法
(1)本发明原料药材配比重量份为:
人参4-6,麦冬14-16,五味子7-8;
(2)人参用75-95%提取三次,第一、第二次分别为3小时,第三次2小时,合并提取液,减压浓缩回收乙醇至尽,加水至与药材比为1∶1(V/W),静置,分离除去上层油,过滤,滤液浓缩到50℃相对密度1.15-1.20,70℃下真空干燥,得人参有效部位;麦冬、五味子分别加水煎煮三次,第一次1小时,第二、三次分别为45分钟、30分钟,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.05-1.10(50℃热测),加乙醇至含醇量为75%,放置,滤过,滤液减压浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃热测),再加乙醇至含醇量为85%,放置,滤过,加40%氢氧化钠溶液调节pH值分别为7、9左右,放置,滤过,麦冬滤液加稀盐酸调PH至7左右,分别减压回收乙醇至膏状,相对密度分别为1.15-1.20、1.25-1.35(50℃热测),70℃下真空干燥,分别得麦冬、五味子有效部位;
(3)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成水针制剂;
(4)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,加入葡萄糖,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成输液制剂;
(5)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水溶解完全,加入药用辅料赋形剂,干燥。制成粉针制剂;
粉针剂的赋形剂为甘露醇、蔗糖、乳糖中的一种或几种混合物。
二.检测分析
(1)人参皂苷的检测分析
按照标准号为WS3-B-2865-98的含量测定项进行检测分析,结果见表1。
(2)5-羟甲基糠醛的检测分析
按照《中华人民共和国药典》(2000年版,一部)中葡萄糖注射液中的5-羟甲基糠醛的检测方法,进行检测分析,得到的吸收度值,进行计算,换算成含量值,结果见表1。(将本发明的输液剂进行浓缩,浓缩到与水针剂相同体积,同样将本发明粉针剂完全溶解体积数与水针剂相同,以下含量比较均在此相同情况下进行。)
表1各组制剂成分含量比较
人参皂苷(以人参皂苷Rg1、Re计) 5-羟甲基糠醛含量
组别
mg/ml mg/ml
专利申请号97107191.8制备的生脉
0.13 152.3
注射液
市售生脉注射液 0.14 143.6
本发明生脉水针剂 0.17 3.9
本发明输液剂 0.16 3.3
本发明粉针剂 0.17 3.6
结论:本发明的各组制剂的有效成分含量均有所提高,而5-羟甲基糠醛的含量大大降低,充分说明本发明的工艺具有实际意义。
二.药理实施例
实施例1
5-羟甲基糠醛的长期药理实验
5-羟甲基糠醛的有效有效药理实验专利97107191.8中已经进行,本发明只是通过对大鼠进行长期药理实验,观察大鼠的各种情况,以认证5-羟甲基糠醛对横纹肌和内脏的损害。
实验药物:5-羟甲基糠醛(北京乾露春科技有限公司实验室提供,沈阳药科大学天然药化实验室进行分析其纯度为95%以上)。
生理盐水
实验动物:wistar大鼠60只,体重(200±20)g,随机分成2组,每组30只,♀♂各半。
实验方法:取大鼠,每日尾静脉给药和生理盐水,每日一次,(5-羟甲基糠醛组给药量150mg/ml,给药1ml,生理盐水给药量1ml),连续给药180天,观察大鼠的死亡率,对死亡大鼠进行生理解剖,观察死亡大鼠的横纹肌和内脏,180天后,解剖没有死亡的大鼠,观察大鼠的横纹肌和内脏的情况。
实验结果:见表2。
表2大鼠的死亡情况
组别 大鼠数 死亡数 死亡率
(只) (只) (%)
生理盐水 30 1 3.3
5-羟甲基糠醛 30 7 23.3
对生理盐水死亡大鼠进行生理解剖,未发现其横纹肌和内脏损害,属于大鼠生活过程中意外死亡,而对5-羟甲基糠醛组死亡大鼠进行解剖,发现大鼠的横纹肌和内脏均有损伤,已经影响大鼠的生命活动,是造成大鼠死亡的直接原因;对180天仍然存活的大鼠进行解剖,发现生理盐水组大鼠横纹肌和内脏完好无损,在处死大鼠之前大鼠生命指症非常好,而对5-羟甲基糠醛组存活大鼠进行解剖,发现存活大鼠的横纹肌和内脏也都有不同程度的损伤,在处死大鼠之前,发现大鼠已经奄奄一息。
结论:通过上述实验,我们应该充分认识到,一个有效成分在有效的情况下,一定要观察其生理毒性,因此,5-羟甲基糠醛虽然有一定的生物活性,但其也有很大的毒性,因此,不能把5-羟甲基糠醛作为生脉制剂的有效成分,相反,应该在生脉制剂中严格控制其含量;通过实验,每次用量低于5mg/ml,连续给大鼠应用240天,未发现大鼠死亡情况,进行生理解剖,未发现大鼠横纹肌和内脏出现任何异常。
实施例2
对大鼠急性心肌缺血保护作用
实验药物:生脉注射液(吉林省集安益盛药业股份有限公司);
本发明生脉注射制剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)
实验动物:动物Wister大白鼠50只,雄性,体重(300±20)g,,分为5组,每组10只。
实验方法:结扎大鼠的左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型。各组进行尾静脉给药(5.5g/kg给药),20%乌拉坦(1g/kg,ip)麻醉,分离颈总动脉,并行气管插术,连接动物呼吸机。左侧第四肋间开胸,剪开心包,分离左冠状动脉前降支,平右心耳作结扎部位。取出心脏称重,-10℃冰冻30~50min,在心脏结扎线下,平行***将心室横切成5片,生理盐水冲洗后,置于pH值8.0磷酸缓冲液配制的浓度为1%的氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液中,在38℃恒温水浴中染色10min,正常心肌染色成暗红色,梗死心肌染成灰黄色,剪去心肌片被染色的部分,把未被染色的缺血梗死区心肌称重,计算缺血范围(缺血梗死面积占全心重的百分比,结果见表3。
表3各组制剂对大鼠急性心肌缺血保护作用
组别 心脏重(g) 心脏梗死重(g) 心脏梗死百分率(%)
生理盐水 0.985 0.189 19.19
生脉注射液 0.843 0.098 11.63**
本发明生脉水针剂 0.865 0.064 7.40**[*]
本发明输液剂 0.878 0.066 7.50**[*]
本发明水针剂 0.891 0.066 7.40**[*]
**P<0.01;[*]P<0.05,处理组与阳性对照组比较。
结论:通过药理实验表明,本发明生脉注射制剂具有更好的药理作用。
三.制备实施例
实施例1
(1)本发明原料药材配比重量份为:
人参400克,麦冬1400克,五味子700克;
(2)人参用75%提取三次,第一、第二次分别为3小时,第三次2小时,合并提取液,减压浓缩回收乙醇至尽,加水至与药材比为1∶1(V/W),静置,分离除去上层油,过滤,滤液浓缩到50℃相对密度1.05-1.10,70℃下真空干燥,得人参有效部位16克;麦冬、五味子分别加水煎煮三次,第一次1小时,第二、三次分别为45分钟、30分钟,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.05-1.10(50℃热测),加乙醇至含醇量为75%,放置,滤过,滤液减压浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃热测),再加乙醇至含醇量为85%,放置,滤过,加40%氢氧化钠溶液调节pH值分别为7、9左右,放置,滤过,麦冬滤液加稀盐酸调PH至7左右,分别减压回收乙醇至膏状,相对密度分别为1.15-1.20、1.25-1.35(50℃热测),70℃下真空干燥,分别得麦冬、五味子有效部位分别为420克、12克;
(3)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成水针制剂1000支;
(4)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,加入葡萄糖,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成输液制剂1000瓶;
(5)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水溶解完全,加入药用辅料赋形剂甘露醇152克,干燥。制成粉针制剂1000瓶;
实施例2
(1)本发明原料药材配比重量份为:
人参600克,麦冬1600克,五味子800克;
(2)人参用95%提取三次,第一、第二次分别为3小时,第三次2小时,合并提取液,减压浓缩回收乙醇至尽,加水至与药材比为1∶1(V/W),静置,分离除去上层油,过滤,滤液浓缩到50℃相对密度1.05-1.10,70℃下真空干燥,得人参有效部位24克;麦冬、五味子分别加水煎煮三次,第一次1小时,第二、三次分别为45分钟、30分钟,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.05-1.10(50℃热测),加乙醇至含醇量为75%,放置,滤过,滤液减压浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃热测),再加乙醇至含醇量为85%,放置,滤过,加40%氢氧化钠溶液调节pH值分别为7、9左右,放置,滤过,麦冬滤液加稀盐酸调PH至7左右,分别减压回收乙醇至膏状,相对密度分别为1.15-1.20、1.25-1.35(50℃热测),70℃下真空干燥,分别得麦冬、五味子有效部位分别为480克、15克;
(3)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成水针制剂1000支;
(4)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,加入葡萄糖,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成输液制剂1000瓶;
(5)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水溶解完全,加入药用辅料赋形剂蔗糖81克,干燥。制成粉针制剂1000瓶;
实施例3
(1)本发明原料药材配比重量份为:
人参500克,麦冬1500克,五味子750克;
(2)人参用85%提取三次,第一、二次分别为3小时,第三次2小时,合并提取液,减压浓缩回收乙醇至尽,加水至与药材比为1∶1(V/W),静置,分离除去上层油,过滤,滤液浓缩到50℃相对密度1.15-1.20,70℃下真空干燥,得人参有效部位20克;麦冬、五味子分别加水煎煮三次,第一次1小时,第二、三次分别为45分钟、30分钟,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.05-1.10(50℃热测),加乙醇至含醇量为75%,放置,滤过,滤液减压浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃热测),再加乙醇至含醇量为85%,放置,滤过,加40%氢氧化钠溶液调节pH值分别为7、9左右,放置,滤过,麦冬滤液加稀盐酸调PH至7左右,分别减压回收乙醇至膏状,相对密度分别为1.15-1.20、1.25-1.35(50℃热测),70℃下真空干燥,分别得麦冬、五味子有效部位分别为456克、13克;
(3)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成水针制剂1000支;
(4)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,加入葡萄糖,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成输液制剂1000瓶;
(5)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水溶解完全,加入药用辅料赋形剂乳糖111克,干燥。制成粉针制剂1000瓶;
实施例4
(1)本发明原料药材配比重量份为:
人参450克,麦冬1450克,五味子730克;
(2)人参用80%提取三次,第一、二次分别为3小时,第三次2小时,合并提取液,减压浓缩回收乙醇至尽,加水至与药材比为1∶1(V/W),静置,分离除去上层油,过滤,滤液浓缩到50℃相对密度1.15-1.20,70℃下真空干燥,得人参有效部位18克;麦冬、五味子分别加水煎煮三次,第一次1小时,第二、三次分别为45分钟、30分钟,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.05-1.10(50℃热测),加乙醇至含醇量为75%,放置,滤过,滤液减压浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃热测),再加乙醇至含醇量为85%,放置,滤过,加40%氢氧化钠溶液调节pH值分别为7、9左右,放置,滤过,麦冬滤液加稀盐酸调PH至7左右,分别减压回收乙醇至膏状,相对密度分别为1.15-1.20、1.25-1.35(50℃热测),70℃下真空干燥,分别得麦冬、五味子有效部位分别为435克、13.8克;
(3)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成水针制剂1000支;
(4)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,加入葡萄糖,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成输液制剂1000瓶;
(5)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水溶解完全,加入药用辅料赋形剂甘露醇和蔗糖133.2克,干燥。制成粉针制剂1000瓶;
实施例5
(1)本发明原料药材配比重量份为:
人参550克,麦冬1550克,五味子780克;
(2)人参用80%提取三次,第一、二次分别为3小时,第三次2小时,合并提取液,减压浓缩回收乙醇至尽,加水至与药材比为1∶1(V/W),静置,分离除去上层油,过滤,滤液浓缩到50℃相对密度1.15-1.20,70℃下真空干燥,得人参有效部位22克;麦冬、五味子分别加水煎煮三次,第一次1小时,第二、三次分别为45分钟、30分钟,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.05-1.10(50℃热测),加乙醇至含醇量为75%,放置,滤过,滤液减压浓缩至相对密度为1.15-1.20(50℃热测),再加乙醇至含醇量为85%,放置,滤过,加40%氢氧化钠溶液调节pH值分别为7、9左右,放置,滤过,麦冬滤液加稀盐酸调PH至7左右,分别减压回收乙醇至膏状,相对密度分别为1.15-1.20、1.25-1.35(50℃热测),70℃下真空干燥,分别得麦冬、五味子有效部位分别为465克、14.1克;
(3)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成水针制剂1000支;
(4)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水,加入葡萄糖,溶解完全,用葡甲胺调PH值,过滤,灭菌,检验,制成输液制剂1000瓶;
(5)取人参、麦冬有效部位与五味子有效部位混合,加入注射用水溶解完全,加入药用辅料赋形剂甘露醇和乳糖、蔗糖共98.9克,干燥。制成粉针制剂1000瓶;