CN1472333A - 一种用鲎试剂法检测胶原酶细菌内毒素的方法 - Google Patents
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Abstract
一种用鲎试剂法检测胶原酶细菌内毒素的方法，属于生物制药领域。它是将制备过程中制得的胶原酶以注射用水或氯化钠注射液稀释至一定浓度后，使用鲎试剂检测其细菌内毒素。其优点是由于采用了上述检测方法，只要对制备过程中的胶原酶进行稀释后，按细菌内毒素检查法检测，就能简单、方便地判断出胶原酶中间产品及成品细菌内毒素的含量是否符合要求，合格方能进入下一道工序，从而保证了最终成品的热原指标合格。
Description
技术领域
本发明属于生物制药领域，具体地说，是一种用鲎试剂法检测胶原酶细菌内毒素的方法。
背景技术
胶原酶制备过程的国家质量标准是采用家兔升温法检测其成品热原。由于此法要求有符合条件的动物室，需用费用大，操作复杂，供试用的家兔要于测试前7日严格挑选，正式测试前按要求准备1-2日，注射药液开始至检测完成，需时长达4个小时以上，如需复检则需达8个小时以上才能测出结果，因此，很难对胶原酶制备中间产品进行质量监控，仅用于成品检测。胶原酶制备过程从发酵到成品，需半个月时间，才做热原检测，如果不合格，则造成整批报废的经济损失。由于热原的本质即内毒素，检测胶原酶制备过程中胶原酶中间产品的细菌内毒素就相当于检测了热原，但目前还没有简单合适的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种操作简单，费用低，检测时间短，大约需1个多小时出结果的用鲎试剂法检测胶原酶制备过程中胶原酶细菌内毒素的方法。
本发明是这样实现的，它是将制备过程中制得的胶原酶以注射用水或氯化钠注射液稀释至一定浓度后，使用鲎试剂检测其细菌内毒素。
本发明的要点还在于取效价大于300u/mg的胶原酶粗品适量，以注射用水或氯化钠注射液稀释至1.2-1.6μg/ml，用细菌内毒素检查法检查，每1ml中含内毒素量应小于0.5EU。
本发明的另一个要点是，取精制胶原酶溶液，先以注射用水稀释至1200-1600u，再以注射用水或氯化钠注射液稀释至3.0-4.0u/ml，用细菌内毒素检查法检查，每1ml中含内毒素量应小于0.5EU。
本发明的再一个要点是，取注射用胶原酶适量，每1020-1440u以注射用水或氯化钠注射液稀释至2.55-3.6u/ml，用细菌内毒素检查法检查，每1ml中含内毒素量应小于0.5EU。发明效果
由于采用了上述检测方法，只要对制备过程中的胶原酶进行稀释后，按《中华人民共和国药典》(2000年版)附录XI E细菌内毒素检查法检测，就能简单、方便地判断出胶原酶中间产品及成品细菌内毒素的含量是否符合要求，合格方能进入下一道工序，从而保证了最终成品的热原指标合格。
具体实施方式
实施例1
将菌种经发酵培养基在温度为37℃-41℃，周期40-45个小时静止发酵后，除菌过滤，加硫酸铵沉淀，溶于Tris-Ca2+缓冲液，离心，超滤，冷冻干燥，得胶原酶粗品，称取效价为400u/mg的粗品25.7mg，以注射用水稀释至1.5μg/ml，按《中华人民共和国药典》(2000年版)附录XI E细菌内毒素检查法检查，每1ml中含内毒素量应小于0.5EU。
实施例2
胶原酶粗品经DEAE纤维素柱和Sephadex G-25柱层析，得到精制胶原酶溶液，取效价为4500u/ml的胶原酶溶液先以注射用水稀释至1500u/ml，再以注射用水稀释至4.0u/ml，按《中华人民共和国药典》(2000年版)附录XI E细菌内毒素检查法检查，每1ml中含内毒素量应小于0.5EU。
实施例3
精制胶原酶溶液，加入辅料，无菌过滤，灌装，冷冻干燥，得注射用胶原酶。取效价为1350u的注射用胶原酶1支，以注射用水稀释至3.6u/ml，按《中华人民共和国药典》(2000年版)附录XI E细菌内毒素检查法检查，每1ml中含内毒素量应小于0.5EU。
Claims (4)
1.一种用鲎试剂法检测胶原酶细菌内毒素的方法，其特征在于：将制备过程中制得的胶原酶以注射用水或氯化钠注射液稀释至一定浓度后，使用鲎试剂检测其细菌内毒素。
2.根据权利要求1所述的用鲎试剂法检测胶原酶细菌内毒素的方法，其特征在于：取效价大于300u/mg的胶原酶粗品适量，以注射用水或氯化钠注射液稀释至1.2-1.6μg/ml，用细菌内毒素检查法检查，每1ml中含内毒素量应小于0.5EU。
3.根据权利要求1所述的用鲎试剂法检测胶原酶细菌内毒素的方法，其特征在于：取精制胶原酶溶液，先以注射用水稀释至1200-1600u/ml，再以注射用水或氯化钠注射液稀释至3.0-4.0u/ml，用细菌内毒素检查法检查，每1ml中含内毒素量应小于0.5EU。
4.根据权利要求1所述的用鲎试剂法检测胶原酶细菌内毒素的方法，其特征在于：取注射用胶原酶适量，每1020-1440u以注射用水或氯化钠注射液稀释至2.55-3.6u/ml，用细菌内毒素检查法检查，每1ml中含内毒素量应小于0.5EU。
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| CN (1) | CN1472333A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1721853B (zh) * | 2004-07-12 | 2011-04-20 | 湛江安度斯生物有限公司 | 细菌内毒素快速检测试剂盒的制备方法 |
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2002
- 2002-08-01 CN CNA021258791A patent/CN1472333A/zh active Pending
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