CN1451369A - 环糊精衍生物在化妆品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及将环糊精衍生物在化妆品领域的应用，该类环糊精衍生物是一种具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的人工模拟酶，其在化妆品中的一般用量范围是0.5～10.0％，它能够有效地保护细胞、抗脂质过氧化、清除人体皮肤细胞内的自由基，起到减少和消除皮肤皱纹、细纹，延缓衰老，预防和治疗色素沉着、黄褐斑、蝴蝶斑，皮肤角质化、皮肤粗糙等作用。本品物化性质稳定、无毒、分子量小、透膜性好、水溶性强等特点，可以制成乳液、膏霜、水剂等化妆品剂型。本发明原料来源简易、生产工艺简便，可产生良好的经济效益。
Description
本发明涉及化妆品领域，具体而言，本发明涉及具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的环糊精衍生物在化妆品领域中的应用。
在分子水平上模拟酶活性部位的微环境，引入在天然酶中对催化反应起主导作用的因素，设计和合成结构简单、活力稳定的有机分子作为人工模拟酶，是当今自然科学领域中的前沿课题之一。鉴于人工酶分子可能具有与天然酶相同的专一性和催化功能，而本身具有物化性质稳定、原料广泛易得、制备工艺简便等优点，预示着它在化工、酶学、医药学等领域具有广阔的应用前景。为此，美国和许多欧洲国家都把对酶的人工模拟列入未来研究的发展规划。近年来，人们已建立起许多小分子仿酶体系，如环糊精、冠醚、环番，环芳烃和卟啉等。
衰老是生物生命过程中的必然过程，人体受到内外源因素的影响，皮肤细胞内形成一些活性氧自由基，对皮肤细胞中的核酸、蛋白质、多糖类、生物膜造成损害；导致皮肤支撑组织——真皮层的变化，使皮肤表皮保水能力降低、胶原弹性纤维排列顺序异常，由此具有的机械力和弹性下降。而紫外线正是促使皮肤细胞生成活性氧自由基的罪魁祸首。
谷胱甘肽过氧化物酶是生物体内重要的含硒酶，GPX利用谷胱甘肽(GSH)催化还原氢过氧化物，因而具有优良的抗氧化性。但由于该酶不稳定，来源有限，分子量大会引起人体免疫反应等缺点，极大限制了此酶在医药、化工、食品等领域的开发和应用。我们选用环糊精来模拟GPX，成功的得到了具有GPX活性的一系列环糊精衍生物。它们分子量小、透膜性好，极易进入皮肤细胞并利用细胞中的GSH清除氧自由基。我们发现，将此类具有GPX活性的环糊精衍生物应用到化妆品领域中，可以有效地保护细胞、抗脂质过氧化、清除人体皮肤细胞内的自由基，起到减少和消除皮肤皱纹、细纹，延缓衰老，预防和治疗色素沉着、黄褐斑、蝴蝶斑，皮肤角质化、皮肤粗糙等作用。
因此，本发明的目的是提供了将本发明涉及的环糊精衍生物用于化妆品中作为添加剂的用途；
本发明的另一目的是提供了一种含有本发明涉及的环糊精衍生物的化妆品。
本发明涉及的环糊精衍生物的结构通式如下：
其中：
其母体环糊精结构式如下所示：
在本发明中母体环糊精可以是α-环糊精(n＝5)、β-环糊精(n＝6)、γ-环糊精(n＝7)，其结构可用
或
来表示；
取代基R1可以是2位或6位，取代基R2也可以是2位或6位，其条件是R1可以是在环糊精不同葡萄糖环的相同取代位上，R2可以是在环糊精不同葡萄糖环的相同取代位上；
R1可以是-Se、-Te、-SeCys、-TeCys，其中，Cys表示半胱氨酸，SeCys表示硒代半胱氨酸，TeCys表示碲代半胱氨酸；
R2可以-OH、-SeO2H、-TeO2H，其中SeO2H表示***，TeO2H表示亚碲酸。
本发明涉及的优选的环糊精衍生物的结构式为：
2-SeCD，即2-硒桥联环糊精
6-SeCD，即6-硒桥联环糊精
2-SeCysCD，即2，2′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联环糊精6-SeCysCD，即6，6′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联环糊精2-diSeCD，即2A，2B-二***-2A′，2B′-硒桥联环糊精
6-diSeCD，即6A，6B-二***-6A′，6B′-硒桥联环糊精
2-TeCD，即2-碲桥联环糊精6-TeCD，即6-碲桥联环糊精2-TeCysCD，即2，2 ′-N，N′-碲代半胱氨酸-碲桥联环糊精
6-TeCysCD，即6，6′-N，N′-碲代半胱氨酸-碲桥联环糊精2-diTeCD，即2A，2B-二亚碲酸-2A′，2B′-碲桥联环糊精6-diTeCD，即6A，6B-二亚碲酸-6A′，6B′-碲桥联环糊精(上面结构式中，n＝5、6、7)其中，CD表示环糊精。
本发明优选使用n＝6的β环糊精；更优选使用，例如，2-Se-β-CD即2-硒桥联-β-环糊精，6-Se-β-CD即6-硒桥联-β-环糊精，2-Te-β-CD即2-碲桥联-β-环糊精，2-diSe-β-CD即2A，2B-二***-2A′，2B′-硒桥联-β-环糊精，2-SeCys-β-CD即2，2′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联-β-环糊精，6-SeCys-β-CD即6，6′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联-β-环糊精，2-diTe-β-CD即2A，2B-二亚碲酸-2A′，2B′-碲桥联-β-环糊精。
我们发现，将本发明涉及的这些具有GPX活性的环糊精衍生物应用到化妆品中作为添加剂，可以有效地保护细胞、抗脂质过氧化、清除人体皮肤细胞内的自由基，起到减少和消除皮肤皱纹、细纹，延缓衰老，预防和治疗色素沉着、黄褐斑、蝴蝶斑，皮肤角质化、皮肤粗糙等作用。
下面通过实例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明实例仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明进行简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的百分数是重量百分数。
一.环糊精衍生物制备实例
本发明涉及的化合物可以通过下列方法制备。实施例1：NaHSe的制备方法
将100mg NaBH4溶解在装有5ml水的小瓶中，再将100mg硒粉缓慢加入到NaBH4的溶液中，盖上一插有针头的胶盖，此时可以看到水中产生大量气体，并伴随有热量放出。由于反应过于剧烈，所以需在冰浴中进行，以控制反应速度，其反应方程式如下： 由于NaBH4与H+反应，还伴有少量H2Se气体产生，为防中毒，必须在通风橱中反应。反应结束后，有大量盐析出。NaHSe极易氧化，故应通入N2保存。实施例2：2-Se-β-CD(即2-硒桥联β环糊精)的合成合成路线如下所示：(1).β-CD 2位磺酰化(产物为β-CD-2-位羟基苯磺酸脂，简称2-OTs-β-CD)：
将2.0g β-CD溶于100ml NaOH(0.3mol/L)溶液中，室温滴加含2.0g的p-TsCl的乙腈溶液5ml，滴加过程中不断加入1mol/L NaOH使溶液pH＞12.5，3小时滴加完毕，再搅拌1小时，加入1mol/L HCl中和至中性，加入100ml甲醇，滤去不溶物，减压蒸去甲醇和大部分水至20ml，放入5℃冰箱一周后有盐析出，过滤后以水为洗脱剂经Bio-gel P-2柱层析，收集第一峰，冻干，得产物。(2).2-OTs-β-CD硒化：
将100mg 2-OTs-β-CD溶于50mM磷酸缓冲液中，通高纯氮去氧，加入100μl1M NaHSe，60℃反应36小时，然后使反应体系充分暴露在空气中氧化，离心除硒，上清液经Bio-gel P-2柱(5.0×50cm)分离纯化，254nm紫外监测收集第一峰，冻干，用丙酮洗三次，真空烘干得淡黄色粉末标题化合物2-Se-β-CD。实施例3：6-Se-β-CD(即6-硒桥联β环糊精)合成方法合成路线如下所示：
(1).6-对甲苯磺酰-β-环糊精(6-OTs-β-CD)的合成
β-CD重结晶后于120℃真空干燥一天，吡啶用KOH回流17小时，再用BaO干燥整夜，用时常压蒸馏。p-TsCl 3.6g，溶解于吡啶10mL，在冰浴条件下缓慢将p-TsCl的吡啶溶液滴加到β-CD的吡啶溶液中27g，160mL，滴加完毕后室温反应24小时。反应完毕用丙酮沉淀，抽滤，固体粉末用水重结晶。最后用***浸泡，产物为棕白色。(2).6-OTs-β-CD硒化及分离纯化
将100mg 6-OTs-β-CD溶于1mL 50mM PBS和1mL DMF混合溶液中，通高纯氮去氧，加入100μL 1M NaHSe，60℃反应36小时，然后使反应体系充分暴露在空气中氧化，离心除硒，上清液经Biogel P-2柱分离纯化，254nm紫外监测，收集第一峰，冻干，用丙酮洗三次得淡黄色粉末。P-2柱分离出现三个吸收峰，第一峰为硒桥联β-CD吸收峰(即目标产物峰)，第二峰为单硒氢化β-CD，第三峰为未反应的6-OTs-β-CD和小分子杂质峰。实施例4：2-Te-β-CD(即2-碲桥联β环糊精)和6-Te-β-CD(即6-碲桥联β环糊精)合成方法(1).6-位-对甲苯磺酰-β-环糊精(6-OTs-β-CD)的合成见实施例3(2).2-位-对甲苯磺酰-β-环糊精(2-OTs-β-CD)的合成见实施例2(3).碲氢化钠(NaTeH)的制备
将3.5g碲粉和2g NaBH4加入到70mL无水乙醇中，有气体产生，并伴随有热量放出。通氮气数分钟使体系保持无氧。小火加热回流约1小时，碲粉和NaBH4全部溶解，溶液呈***。冷却至室温，加入4.5mL无氧冰醋酸，加热至沸腾。有黑色沉淀产生，溶液呈无色透明。冷却后，溶液即可使用。(4).6-位-碲桥联β-CD的合成(6-Te-β-CD)
将100mg 6-OTs-β-CD溶于0.5mL 50mM PBS(pH7)和0.5mL DMF的混合溶液中，通高纯氮除氧25分钟，加入2mL上述NaHTe溶液，60℃反应36小时后，使反应体系充分暴露在空气中氧化，有黑色沉淀产生，溶液为黄色。6000rpm离心10分钟，黄色溶液经Sephadex G-25(Φ5×A50cm)柱分离纯化，用去离子水作洗脱液，254nm紫外监测，收集第一峰溶液，冻干后用丙酮洗三次，干燥后得浅黄色粉末目标化合物。(5).2-位-碲桥联β-CD的合成(2-Te-β-CD)
将100mg 2-OTs-β-CD溶于1mL 50mM PBS(pH7)溶液中，通高纯氮去氧25分钟，加入2mL上述NaHTe溶液，60℃反应36小时。然后使反应体系充分暴露在空气中氧化，有黑色沉淀产生，溶液为黄色。6000rpm离心10分钟，黄色溶液经Sephadex G-25(Φ5×A50cm)柱分离纯化，用去离子水作洗脱液，254nm紫外监测，收集第一峰溶液，冻干后用丙酮洗三次，干燥后得浅黄色粉末目标化合物。实施例5：2-SeCys-β-CD(即2，2′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联-β-环糊精)的合成方法(1).β-CD 2位磺酰化(产物为β-CD-2-位羟基苯磺酸脂，简称2-OTs-β-CD)
将2.0g β-CD溶于100ml NaOH(0.3 mol/L)溶液中，室温滴加含2.0gp-TsCl的乙腈溶液5ml，滴加过程中不断加入1mol/L NaOH使溶液pH＞12.5，3h滴加完毕再搅拌1h，加入1mol/L HCl中和至中性，加入100ml甲醇，滤去不溶物，减压蒸去甲醇和大部分水至20ml，放入5℃冰箱一周后有盐析出，过滤后以水为洗脱剂经Bio-gel P-2柱层析，收集第一峰，冻干，得产物。(2).2-碘-β-环糊精(2-I-β-CD)的合成
DMF用五氧化二磷干燥数天，用时减压蒸馏。2-OTs-β-CD 8.5g溶于DMF(50mL)，然后加入KI(6.8g)，反应液中通入N2以排除O2。在密封条件下，于80-90℃剧烈搅拌反应8个小时。反应完毕加入三氯甲烷沉淀碘代β-CD，抽滤，将固体用水溶解，加入四氯乙烯后沉淀，收集固体。(3).2，2′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联-β-环糊精的合成(2-SeCys-β-CD)
SeCyss(硒代胱氨酸)14mg溶于6mL水，然后加入17mg Na2CO3，再将此溶液加到2-I-β-CD的DMF溶液510mg，于65℃在无氧条件下反应20小时。反应物处理：在空气中氧化，离心，上清液经Sephadex G-25(Φ5×A50cm)柱层析，收集第一峰，冻干，冻干粉为淡黄色目标化合物。实施例6：6-diTe-β-CD(即6A，6B-二亚碲酸-6A′，6B′-碲桥联β环糊精)合成方法(1).6A，6B-帽连-β-CD(即6A，6B-Capped-β-CD)的合成
β-CD 7.0g溶于50mL吡啶。1，3-间苯磺酰氯的吡啶溶液1.28g，缓慢于室温下滴加到β-CD的溶液中，剧烈搅拌下室温反应20小时。反应完毕，减压蒸馏，用丙酮浸泡整夜，抽滤，在真空下干燥。粗产物8g加入到50mLH2O-乙醇(3∶2)，滤掉不溶物，在搅拌下逐滴滴加700mL CH3CN-H2O(6∶1)，滤掉白色沉淀，滤液减压蒸馏。终产物溶于60mL 20％的乙醇水溶液，加入50mL DEAE-52，室温搅拌0.5小时，过滤，滤液减压蒸馏，得到白棕色产品。(2).合成6A，6B-双亚碲酸-6A′，6B′-碲桥联-β-环糊精(6-diTe-β-CD)
6A，6B-Capped-β-CD(100mg)溶于1mL的50mM pH7.0的磷酸缓冲液，加入1mL DMF促溶。反应混合液通氮气20分钟以排除氧气，密闭。然后用注射器加入100μL NaHTe溶液，在氮气保护下，于60℃反应36小时。在空气中氧化，离心，上清液经Sephadex G-25柱纯化，有三个峰出现，收集第一峰，冻干，冻干粉为淡黄色目标化合物。实施例7：6-SeCys-β-CD(6，6′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联环糊精)的合成方法(1).6-对甲苯磺酰-β-环糊精(6-OTs-β-CD)的合成
β-CD重结晶后于120℃真空干燥一天。吡啶用KOH回流17小时，再用BaO干燥整夜，用时常压蒸馏。p-TsCl 3.6g，溶解于吡啶10mL，在冰浴条件下缓慢将p-TsCl的吡啶溶液滴加到β-CD的吡啶溶液中27g，160mL，滴加完毕后室温反应24小时。反应完毕用丙酮沉淀，抽滤，固体粉末用水重结晶。最后用***浸泡，产物为棕白色。(2).6-碘-β-环糊精(6-I-β-CD)的合成
DMF用五氧化二磷干燥数天，用时减压蒸馏。6-OTs-β-CD 8.5g溶于DMF(50mL)，然后加入KI(6.8g)，反应液中通入N2以排除O2。在密封条件下，于80-90℃剧烈搅拌反应4个小时。反应完毕加入三氯甲烷沉淀碘代β-CD，抽滤，将固体用水溶解，加入四氯乙烯后沉淀，收集固体。(3).6，6′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联-β-环糊精的合成(6-SeCys-β-CD)
SeCyss(10mg，0.03mmol)溶于4mL水，然后加入13mg(0.12mmol)Na2CO3，再将此溶液加到6-I-β-CD的DMF溶液(400mg，32mmol)，于65℃在无氧条件下反应20小时。反应物处理：在空气中氧化，离心，上清液经Sephadex G-25(Φ5×A50cm)柱层析，收集第一峰，冻干，冻干粉为淡黄色目标化合物。实施例8：2-diSe-β-CD(2A，2B-***-2A′，2B′-硒桥联β环糊精)合成方法(1).合成2A，2B-***-2A′，2B′-硒桥联-β-环糊精(2-diSe-β-CD)
6A，6B-Capped-β-CD(100mg)溶于1mL的50mM pH7.0的磷酸缓冲液，加入1mL促溶。反应混合液通氮气20分钟以排除氧气，密闭。然后用注射器加入100μL NaHSe溶液，在氮气保护下，于60℃反应36小时。在空气中氧化，离心，上清液经Sephadex G-25柱纯化，有三个峰出现，收集第一峰，冻干，冻干粉为淡黄色目标化合物。二.含有环糊精衍生物的化妆品制剂实例及其稳定性试验
环糊精衍生物应用于化妆品中时，制成乳液、膏霜、水剂等化妆品的一般组成含量范围和具体制剂实例：
1.一般组成含量范围： 0.5～10.0％
2.具体的制剂实例：环糊精衍生物理化性质稳定、无毒、分子量小、透模性好、水溶性强等特点，可制成乳液、膏霜、水剂等化妆品剂型。
①乳液剂：
组分 w％
硬脂酸 1.5～3.5
十六醇 1.0～2.0
凡士林 3.0～6.0
液体石蜡 8.0～12.0
聚氧乙烯(n＝10)油酸酯 1.0～3.0
聚乙二醇(分子量为1500) 1.5～4.5
三乙醇胺 0.5～1.5
香料 0.5～1.0
2-Se-β-CD 0.5～1.5
去离子水 余量
蒸馏水中加聚乙二醇、三乙醇胺、2-Se-β-CD，加热溶解，保持70℃(水相)，其它成分混合，加热溶解，保持70℃(油相)，将油相加入水相，搅匀冷却至30℃。
②雪花膏剂型：
组分 w％
硬脂酸 2.0～4.0
十六醇 1.0～3.0
凡士林 3.0～5.0
液体石蜡 7.0～9.0
甘油 3.0～5.0
6-SeCys-β-CD 0.5～1.5
尿素 0.5～1.0
三乙醇胺 0.5～1.5
香料 0.5～1.0
去离子水 余量
蒸馏水中加入甘油、三乙醇胺、尿素、6-SeCys-β-CD，加热溶解，保持80℃(水相)，其他成分混合，加热溶解，保持80℃(油相)，将油相加入水相，搅匀冷却至30℃。
③水剂剂型：
组分 w％
酒精 10.0～25.0
乙氧基化羊毛脂 1.0～2.0
丙二醇 2.0～5.0
香精 0.2～0.5
2-diTe-β-CD 0.5～1.5
去离子水 余量
3.化妆品的稳定性试验：
3.1方法：
1)耐热试验：各取环糊精衍生物乳液剂、雪花膏剂100克装瓶，每种三瓶，置于40±0.5℃水浴中24小时后取出，观察现象。
2)耐寒试验：各取环糊精衍生物乳液剂、雪花膏剂100克装瓶，每种三瓶，置于-10±0.5℃冰箱中24小时后取出，观察现象。
3)离心试验：各取环糊精衍生物乳液剂、雪花膏剂20克，灌装在50毫升离心管中，每种三管，于4000prm离心30分钟后取出，观察现象。
4)GPX剩余活性(Cr％)的检查：取做过稳定性试验前和试验后的化妆品各10g溶于500ml重蒸水中，离心，上清液为测定液，分别测其试验前的GPX活性(C0)和试验后的GPX活性(C)。然后，分别求出剩余活性(Cr％)，计算分式为Cr％＝C/C0×100％
3.2结果
现象 剩余活性(Cr％)耐热试验(40℃水浴24小时) 均无油水分离现象 92.4耐寒试验(-10℃ 24小时) 均无油水分离现象 94.7离心试验(4000prm 30分钟) 均无油水分离现象 90.5
3.3结论：本品理化性质稳定，适于加入到化妆品基质中而不发生配伍变化。
4.皮肤刺激性试验方法：
4.1方法
1)家兔刺激性试验：采用多次皮肤刺激试验方法进行，即将0.5g本制剂涂于剃去毛的家兔皮肤任一侧约2.5cm×2.5cm的范围，另一侧相同部位涂同样剂量的不含GPX添加剂的软膏基质，每天上午、下午各一次，连续七天，观察涂皮部位的反应，并进行病理学、组织学检查。
2)人体刺激性试验：分别在左手臂内侧皮肤面选择四个刺激点，约2.5cm×2.5cm的范围，分别采用斑点法将高、中、低三个剂量的2-Se-β-CD软膏和安慰剂贴敷24小时，观察敷用部位皮肤的刺激反应。
4.2结果：见下面的表1和表2
表1.家兔刺激性试验结果
| 检查内容 | 试验动物 | 对照侧 | 实验侧 |
| 外观检查 | 4只 | 未见明显的红斑和水肿现象 | 未见明显的红斑和水肿现象 |
| 组织学检查 | 4只 | 皮肤各层清晰可见未发现有角质化过渡，棘层肥厚现象 | 皮肤各层清晰可见未发现有角质化过渡，棘层肥厚现象 |
| 病理学检查 | 4只 | 未见皮肤病理性改变 | 未见皮肤病理性改变 |
表2.人体皮肤刺激性试验结果
| 分组 | 例数(n) | 观察结果 | |
| 对照点 | 试验点 | ||
| 大剂量组 | 5 | 无红斑及水肿形成 | 无红斑及水肿形成 |
| 中剂量组 | 5 | 无红斑及水肿形成 | 无红斑及水肿形成 |
| 小剂量组 | 5 | 无红斑及水肿形成 | 无红斑及水肿形成 |
4.3结论：本品作为化妆品添加剂不会对皮肤产生刺激性。三.环糊精衍生物作为化妆品活性成分，用于清除人体皮肤内自由基，起到防紫外线、预防衰老的作用的试验
1.试验名称：保护细胞的作用(以2-Se-β-CD为例)
1.1实验方法
活细胞中的琥珀酸脱氢酶(SDH)可以还原MTT(甲基四唑蓝)为蓝紫色结晶物，该物质在OD490有特征吸收峰。活细胞中的SDH有活力，因此该数值越大则表示细胞存活数目越多。
(1)UV-B照射表皮细胞 细胞培养板中加细胞300μl(5×105～1×106个/孔)，设定阴性、阳性对照及给药组(6孔/组)，给药后于37℃的CO2孵箱中培养4小时，用紫外线-B(UV-B)(剂量率6J/m2·min)照射细胞17分钟，加RPMI 1640细胞培养液700μl，放于37℃的CO2孵箱培养18小时。(照射所用UV-B剂量为100 J/m2，模拟物为8μmol/L的Ebselen、2-Se-β-CD)
(2)MTT法测定细胞存活率 培养板每孔加入40μl MTT反应液(MTT10mg中加入10mmol/L pH7.4的PBS 2ml，溶后0.22μm膜过滤)，37℃保温4小时，再于1500rpm离心10分钟，弃上清，加入二甲亚砜(DMSO)600μl，振荡10分钟后测OD490。
1.2结果见下表3
表3：100 J/m2 UV-B照射加8μM模拟物对细胞存活率的影响
| 组别 | OD490 |
| 阴性对照 | O.410±0.031 |
| 阳性对照 | 0.293±0.007 |
| PZ51 | 0.359±0.016 |
| 2-Se-β-CD | 0.372±0.010 |
1.3结论：说明加入2-Se-β-CD后具有保护细胞，增加表皮细胞存活率，延长细胞寿命的作用，能够减少和消除皮肤皱纹、细纹，延缓衰老。
2.试验名称：抗脂质过氧化作用(以6-SeCys-β-CD为例)
2.1实验方法
自由基诱生***中脂质过氧化物的测定1ml细胞液中加入625μlMDA反应液(硫代巴比妥酸0.8g加入三氯乙酸16g后再加入8.33ml的浓HCl，定容至1000ml备用)，将细胞于95℃水浴保温30分钟，冷却后，2500rpm离心10分钟，上清测OD532。
2.2结果见下表4
表4：不同模拟物对100J/m2 UV-B照射引起细胞脂质过氧化变化的影响
| 组别 | MDA％ |
| 阴性空白 | 100±1.2 |
| 阳性空白 | 220±4.7 |
| PZ51 | 140±2.2 |
| 6-SeCys-β-CD | 113±2.0 |
2.3结论：以上数据表明，加6-SeCys-β-CD后MDA含量百分比明显降低，达到了良好的抗脂质过氧化的效果。说明6-SeCys-β-CD具有预防和治疗由皮肤细胞内脂质过氧化引起的色素沉着、黄褐斑、蝴蝶斑等作用。3.试验名称：除自由基的作用(以2-diTe-β-CD为例)
3.1实验方法
流式细胞术测定细胞周期、凋亡及活性氧自由基(ROS)：
(1)测定细胞周期和凋亡 细胞用10mmol/L pH7.4的PBS洗2次(1500rpm离心5分钟)，弃上清，加入RNA酶80μl后再加入150μl PI荧光染料染色，避光反应30分钟，于流式细胞仪上测定荧光强度。
(2)测定ROS 培养板每孔加入DCFH/DA荧光染料10μl于37℃保温20分钟，加胰酶60μl置37℃保温15分钟，1500rpm离心5分钟，收细胞，用PBS洗2次(1500rpm离心5分钟)，弃上清，加200μl PBS，于流式细胞仪上测定荧光强度。
3.2结果见下表5
表5.100 J/m2 UV-B照射加0.8μM模拟物对ROS的影响
| 组别 | ROS |
| 阴性对照 | 29.72±3.72 |
| 阳性对照 | 39.29±9.341 |
| 2-diTe-β-CD | 29.29±4.72 |
3.3结论：以上数据表明2-diTe-β-CD对清除自由基确有较好的效果。说明2-diTe-β-CD具有防止紫外线对皮肤的伤害，预防和治疗皮肤角质化、皮肤粗糙等作用。
综上所述，本发明所提及的环糊精衍生物制备工艺简单，产率高，可大量生产，具有较高的GPX活性、稳定性好、分子量小，可克服天然酶跨膜困难、不稳定等缺点，应用于化妆品领域能够有效地保护细胞、抗脂质过氧化、清除人体皮肤细胞内的自由基，起到减少和消除皮肤皱纹、细纹，延缓衰老，预防和治疗色素沉着、黄褐斑、蝴蝶斑，皮肤角质化、皮肤粗糙等作用。
Claims (12)
1.一种环糊精衍生物在化妆品中作为添加剂的应用，所述环糊精衍生物的结构是：其中：母体环糊精结构式如下所示：
母体环糊精可以是α-环糊精(n＝5)、β-环糊精(n＝6)、γ-环糊精(n＝7)，其结构可用
或
来表示；取代基R1可以是在2位或6位，取代基R2也可以是在2位或6位，其条件是R1是在环糊精不同葡萄糖环的相同取代位上，R2是在环糊精不同葡萄糖环的相同取代位上；R1可以是-Se、-Te、-SeCys、-TeCys，其中，Cys表示半胱氨酸，SeCys表示硒代半胱氨酸，TeCys表示碲代半胱氨酸；R2可以-OH、-SeO2H、-TeO2H，其中SeO2H表示***，TeO2H表示亚碲酸。
2.根据权利要求1的应用，其中环糊精衍生物选自：2-硒桥联环糊精
6-硒桥联环糊精2，2′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联环糊精
6，6′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联环糊精
2A，2B-二***-2A′，2B′-硒桥联环糊精6A，6B-二***-6A′，6B′-硒桥联环糊精
2-碲桥联环糊精6-碲桥联环糊精2，2′-N，N′-碲代半胱氨酸-碲桥联环糊精6，6′-N，N′-碲代半胱氨酸-碲桥联环糊精2A，2B-二亚碲酸-2A′，2B′-碲桥联环糊精，或者
6A，6B-二亚碲酸-6A′，6B′-碲桥联环糊精，其中：n＝5、6、7。
3.根据权利要求2的应用，其中选用n＝6的环糊精衍生物。
4.根据权利要求3的应用，其中环糊精衍生物选自2-硒桥联-β-环糊精，6-硒桥联-β-环糊精，2-碲桥联-β-环糊精，6A，6B-二***-6A′，6B′-硒桥联-β-环糊精，2，2′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联-β-环糊精，6，6′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联-β-环糊精，或6A，6B-二亚碲酸-6A′，6B′-碲桥联-β-环糊精。
5.根据权利要求1-4之一的应用，其作用是减少和消除皮肤皱纹、细纹，延缓衰老，预防和治疗色素沉着、黄褐斑、蝴蝶斑，皮肤角质化或皮肤粗糙。
6.一种化妆品组合物，其含有下面的环糊精衍生物和化妆品中常规使用的载体或辅料，该环糊精衍生物的结构是
其中：母体环糊精结构式如下所示：
母体环糊精可以是α-环糊精(n＝5)、β-环糊精(n＝6)、γ-环糊精(n＝7)，其结构用
或
来表示；取代基R1可以是在2位或6位，取代基R2也可以是在2位或6位，其条件是R1是在环糊精不同葡萄糖环的相同取代位上，R2是在环糊精不同葡萄糖环的相同取代位上；R1可以是-Se、-Te、-SeCys、-TeCys，其中，Cys表示半胱氨酸，SeCys表示硒代半胱氨酸，TeCys表示碲代半胱氨酸；R2可以-OH、-SeO2H、-TeO2H，其中SeO2H表示***，TeO2H表示亚碲酸。
7.根据权利要求6的组合物，其中环糊精衍生物选自：
2-硒桥联环糊精6-硒桥联环糊精
2，2′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联环糊精6，6′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联环糊精
2A，2B-二***-2A′，2B′-硒桥联环糊精
6A，6B-二***-6A′，6B′-硒桥联环糊精
2-碲桥联环糊精6-碲桥联环糊精2，2′-N，N′-碲代半胱氨酸-碲桥联环糊精6，6′-N，N′-碲代半胱氨酸-碲桥联环糊精
2A，2B-二亚碲酸-2A′，2B′-碲桥联环糊精，或者6A，6B-二亚碲酸-6A′，6B′-碲桥联环糊精其中：n＝5、6、7。
8.根据权利要求7的组合物，其中选用n＝6的环糊精衍生物。
9.根据权利要求8的组合物，其中环糊精衍生物选自2-硒桥联-β-环糊精，6-硒桥联-β-环糊精，2-碲桥联-β-环糊精，6A，6B-二***-6A′，6B′-硒桥联-β-环糊精，2，2′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联-β-环糊精，6，6′-N，N′-硒代半胱氨酸-硒桥联-β-环糊精，或6A，6B-二亚碲酸-6A′，6B′-碲桥联-β-环糊精。
10.根据权利要求6-9的化妆品组合物，其中所述环糊精衍生物在化妆品中的重量含量范围是0.5～10.0％。
11.根据权利要求6-10之一的化妆品组合物，其可以是膏霜剂、乳液剂或水剂等剂型。
12.根据权利要求6-11之一的化妆品组合物用于保护细胞，抗脂质过氧化，清除人体皮肤细胞内的自由基，减少和消除皮肤皱纹、细纹、延缓衰老，预防和治疗色素沉着、黄褐斑、蝴蝶斑，皮肤角质化或皮肤粗糙的用途。
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2003
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