CN1308492A

CN1308492A - 金丝桃素和金丝桃提取物:特效的t－型钙通道阻断剂,及其作为t－型钙通道的目标疗法的应用

Info

Publication number: CN1308492A
Application number: CN99808429A
Authority: CN
Inventors: 杰奎琳·J·单; 吴喜成; 彼得·K·T·庞; 凌雷
Original assignee: CV Technologies Inc
Current assignee: Afexa Life Sciences Inc
Priority date: 1998-07-09
Filing date: 1999-07-09
Publication date: 2001-08-15
Also published as: KR20010071822A; AU4958199A; WO2000002455A1; CA2336781A1; EP1094712A4; JP2002520260A; EP1094712A1; CA2336781C

Abstract

金丝桃素对T－型钙通道活性有特殊的抑制效果。含金丝桃素的金丝桃提取物也可抑制T－型钙通道活性。此外,金丝桃提取物中的其它化学物质对金丝桃素有协同作用。基于此,金丝桃素或含金丝桃素的金丝桃提取物可用作T－通道的阻断剂。金丝桃提取物,金丝桃属的其它物种的提取物,含金丝桃素的其它植物的提取物,金丝桃素的衍生物,金丝桃素的类似物如假金丝桃素,和其它金丝桃提取物组分可以用于针对T－型钙通道的疗法,用于与T－型通道畸变有关的疾病的治疗。提供了使用金丝桃素和金丝桃提取物的方法。

Description

金丝桃素和金丝桃提取物：特效的T-型钙通道阻断剂，及其作为T-型钙通道的目标疗法的应用

发明领域

本发明涉及贯叶连翘(Hypericum perforatum)，贯叶连翘提取物，贯叶连翘中具有的化合物，如金丝桃素，和金丝桃素的衍生物和类似物。本发明的一方面在于发现贯叶连翘(以下除特别说明之外都称之为金丝桃)，金丝桃提取物，金丝桃中特定的化合物，包括金丝桃素、假金丝桃素、贯叶金丝桃素、无贯叶金丝桃素(ashyperforin)、栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮和海棠苷、金丝桃素的衍生物和类似物，可以用于针对不同生物体系(如心血管***、中枢神经***和内分泌***)中的T-型钙通道的疗法，用于治疗可通过T-型钙阻断剂治疗的疾病。可通过T-型钙阻断剂治疗的疾病包括抑郁症、慢性心力衰竭、充血性心力衰竭、局部缺血症状、心律不齐、心绞痛、高血压、低胰岛素和高胰岛素症、糖尿病、高醛甾酮症、癫痫症、偏头痛、脑老化或神经衰退等相关疾病，例如阿耳茨海默氏病症和早产(preterm labor)。

发明背景

金丝桃素是一种存在于多年生草本植物(贯叶连翘或小连翘属植物)中的化学物质。很早的时候金丝桃已知具有药用价值，并广泛用于植物疗法。金丝桃作为抗抑郁剂及其抗滤过性病原体的性质已被广泛地研究。除这些特性以外，金丝桃还曾经用于与神经有关症状的治疗，包括焦虑、兴奋引起的失眠、暴躁、神经痛、三叉神经痛、神经衰弱、偏头痛、纤维织炎、消化不良，和坐骨神经痛。金丝桃包含一些有生物活性的化合物，包括萘并二蒽酮，如金丝桃素和假金丝桃素，间苯三酚，如贯叶金丝桃素和无贯叶金丝桃素，和广谱类黄酮(其被认为与金丝桃的活性有关)。但是，由于对金丝桃及其化学组分缺少清晰明确的病理学机理的认识，而不能确定与金丝桃活性直接相关的组分。

临床研究发现金丝桃对治疗中等程度的抑郁症有效。动物实验发现金丝桃提取物可以缓解抑郁症状。有研究报导通过较长时间治疗金丝桃提取物对鼠脑皮层前部的肾上腺素的受体有向低调节的作用。一些报导称金丝桃素抑制生物体中的一元胺氧化酶的活性，但另外一些报导不能证实此作用。其它建议的机理涉及对血液中的复合胺的作用。使用很高的剂量，金丝桃提取物抑制血液中的复合胺再次摄入，尽管其中哪种化学物质起作用还不确定。研究说明金丝桃素和假金丝桃素可以抑制多种病毒。据报导金丝桃素抑制生物体中的神经胶质瘤细胞的生长，也能抑制蛋白质激酶C而有效地引发神经胶质瘤细胞的死亡。也有报导称金丝桃素可以抑制表皮生长因子中的受体酪氨酸激酶。这些新的作用与抗病毒和抗肿瘤活性相关。

F.R.Buhler，高血压杂志补编，15(5):s3-7,1997；B.Cremers等，心血管病理学杂志，报导T-型通道涉及起搏器活性，较低的钙的峰值，神经波动和共振，和反弹内火。据称Mibefradil，一种选择性T-通道阻断剂，会引起***和冠状血管舒张。且没有反射交感神经的活动，并对肌肉收缩力没有负面影响。其可以提高冠状血管流量而不加大氧气的消耗，并会引起心跳的轻微减缓，因而引起心脏舒张。后者改善心肌和小血管的灌注。Mibefradil可以减少心室异位的情形。通过T-通道抑制作用可以钝化肾素-血管紧缩素-醛甾酮体系以及内皮作用。可以相信相对传统的非选择性或L-型钙通道阻断剂，Mibefradil对心血管疾病的治疗可以达到更高的治疗效果和更好的满意程度。Mibefradil临床用于高血压和心绞痛的治疗。据报导唑尼沙胺，一种抗癫痫药物，减小T-型钙电流(M.Kito等病的侵袭(Seizure),5(2)卷，115-9页，1996)。T-型钙通道通过加强刺激这些细胞可以促进胰岛素的分泌。因此，T-型钙通道可用于低-或高胰岛素症状的治疗标的(A.Bhattacharjee等，内分泌学，138(9)卷，3735-40页，1997)。M.F.Rossier等于1996年建议T-型钙通道活性与类固醇的生成直接相关。

发明简介

因此，T-型钙通道阻断剂，例如，金丝桃，金丝桃提取物，金丝桃组分，包括金丝桃素、假金丝桃素、贯叶金丝桃素、无贯叶金丝桃素、栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮和海棠苷、本发明中的金丝桃素的衍生物和类似物，对因类固醇荷尔蒙缺乏而引起的紊乱的治疗是有效的。

本发明人发现金丝桃素和含0.3％金丝桃素的金丝桃提取物具有特殊的T-通道抑制作用。本发明人意外地发现金丝桃素和金丝桃提取物可以作为特效的T-钙离子通道阻断剂。基于此观点，金丝桃素，金丝桃提取物，除贯叶连翘之外的金丝桃属植物的提取物，含金丝桃素的其它植物提取物，金丝桃组分，包括金丝桃素，根据本发明的金丝桃素衍生物和类似物，期望可用于因T-钙通道引起疾病如心律不齐、冠状动脉疾病、心绞痛、高血压、偏头痛、糖尿病和早产等的治疗。

本发明范围包括使用金丝桃；金丝桃提取物；金丝桃组分，包括金丝桃素、假金丝桃素、贯叶金丝桃素、无贯叶金丝桃素、栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮和海棠苷；金丝桃素的衍生物或金丝桃素的类似物用于治疗动物与T-型钙通道有关或能用T-钙阻断剂治疗的健康紊乱。这些与T-型钙离子通道有关或能用T-型钙离子阻断剂治疗的健康紊乱包括抑郁症、慢性心力衰竭、充血性心力衰竭、局部缺血症状、心律不齐、心绞痛、高血压、低胰岛素和高胰岛素症、糖尿病、高醛甾酮症、癫痫症、偏头痛、脑老化或神经衰退等相关疾病，例如阿耳茨海默氏病症和早产。

附图的简单描述

图1显示金丝桃素对培养的N1E-115细胞中的L-型钙电流活性的作用。当剂量在0.1,1和10μM时，金丝桃素对L-型钙电流有细微但不显著的提高。

图2显示硝苯地平对培养的N1E-115细胞中的L-型钙电流活性的作用。当细胞对金丝桃素(10μM)没有响应时加入硝苯地平中。1μM的硝苯地平明显抑制电流，意味着L-型钙通道的存在。

图3说明金丝桃素对N1E-115细胞中的T-型钙电流活性的作用。当剂量在0.1-10μM之间，金丝桃素对T-型钙电流的抑制作用与剂量有关。

图4显示金丝桃素对T-型钙通道活性中溶剂对照的效果。当金丝桃素溶于50％的乙醇和50％的二甲亚砜中，该溶剂用于测试其对T-型电流的作用。当用量相当于溶解0.1-10μM金丝桃素时，该对照溶剂对T-型钙电流量没有影响。

图5显示金丝桃提取物对T-型钙电流的作用。金丝桃提取物含0.3％的金丝桃素，并溶于外加的溶剂中。当浓度为50微克/毫升时，金丝桃提取物明显抑制T-型钙通道电流。

图6显示金丝桃素对血管平滑肌细胞中的L-型钙电流的作用。

图7显示金丝桃素对幼鼠心室细胞中的L-型钙电流的作用。

发明的详细说明

本发明人发现市售得到的标准金丝桃提取物和纯的金丝桃素可以抑制培养的神经母细胞瘤细胞中的T-型钙通道活性，金丝桃提取物中的主要化合物有金丝桃素，假金丝桃素，黄酮醇配糖和间苯三酚等。

金丝桃提取物可以从市售来源得到，也可以从最初的完整的新鲜或干燥的金丝桃植物中提取，其中金丝桃植物中以金丝桃素计所含的金丝桃素基团的萘并二蒽酮含量不少于0.04％。金丝桃提取物可以方便地通过有机溶剂提取或二氧化碳的超临界流体提取得到(E.Bombardell和P.Morazzoni,Fitoterapia,66卷，43-68页，1995；S.S.Chatterjeei等，Pharmacopsychiat.,31卷补编，7-15页，1998；W.Dimpfel,Pharmacopsychiat.,31卷补编，30-35页，1998)。例如1千克磨细的干燥贯叶连翘与8升80％乙醇混合在55℃氮气保护下搅拌1小时。混合物在氮气保护下离心并收集上层清液。加入0.1％维生素C并减压干燥提取液得到金丝桃提取物。值得注意的是其它溶剂如除乙醇外的醇，丙酮，甲基丁基酮，正己烷，二甲亚砜和甲苯也可用于提取贯叶连翘得到金丝桃提取物。贯叶连翘这种植物可以在世界范围得到，如英格兰、中国、荷兰、法国、德国、意大利、俄罗斯、西班牙和瑞典。

本发明的另一种具体实施方式包括不同于小连翘属植物或贯叶连翘的金丝桃属物种的提取物，和含金丝桃素的其它植物提取物，也包括用这些提取物治疗与T-型钙通道有关或能用T-型钙阻断剂治疗的健康紊乱的方法。本发明的范围也包括用不同于小连翘属植物(贯叶连翘)的金丝桃属物种，和含金丝桃素的其它植物治疗与T-型钙通道有关或能用T-钙通道阻断剂治疗的健康紊乱的方法。

金丝桃提取物通常含金丝桃素和不同量的其它化学物质，包括假金丝桃素；多种类黄酮，如栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮和海棠苷；间苯三酚，如贯叶金丝桃素和无贯叶金丝桃素；植物芳香油；和氧杂蒽酮。本发明中，金丝桃组分包括金丝桃素，假金丝桃素，类黄酮，如栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮和海棠苷；间苯三酚，如贯叶金丝桃素和无贯叶金丝桃素；来自贯叶连翘的植物芳香油；和氧杂蒽酮。本发明的其它具体实施方式是金丝桃提取物组分包括金丝桃素，假金丝桃素，类黄酮，如栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮和海棠苷；间苯三酚，如贯叶金丝桃素和无贯叶金丝桃素；来自贯叶连翘的植物芳香油；和氧杂蒽酮。本发明的范围也包括使用金丝桃组分和金丝桃提取物组分治疗与T-型钙通道有关或能用T-钙通道阻断剂治疗的健康紊乱的方法。

本发明的一个进一步的具体实施方式包括金丝桃素衍生物和类似物。金丝桃提取物中的除金丝桃素外的化学物质可以加强金丝桃素的生物活性，被证实对抑制T-型钙通道活性有协同作用。本发明的范围也包括使用金丝桃衍生物和类似物治疗与T-型钙通道有关或能用T-钙通道阻断剂治疗的健康紊乱的方法。

术语“金丝桃素类似物”指与金丝桃素化学结构类似的化合物，并与金丝桃素一样能阻断T-型钙通道活性，但“金丝桃素类似物”不包括Mibefradil。金丝桃素类似物的例子包括大黄素和具有下列结构式Ⅰ的化合物。

在本申请中，金丝桃素衍生物是从金丝桃素改性后的化合物。假金丝桃素可以被认为是金丝桃素的衍生物。本发明中的金丝桃素和金丝桃素衍生物包括具有下列结构式Ⅱ的化合物。

其中

R₁为H、OH、OR或OCOR；

R₂为H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₃为H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₄为H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₅为H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₆为H、OH、OR或OCOR；

R₇为H、OH、OR或OCOR；

R₈为H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₉为H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₁₀为H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₁₁为H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H

R₁₂为H、OH、OR或OCOR；和

R为烷基或取代的烷基。

值得注意的当R₁,R₃,R₄,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H，且R₉和R₁₀是甲基时，则结构式Ⅱ的化合物是金丝桃素本身。当R₁,R₃,R₄,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H,且R₉是甲基和R₁₀是羟甲基时，则结构式Ⅱ的化合物是假金丝桃素。

本发明中，“R”指C₁-C₃₀的直链或支链的饱和或不饱和碳氢基团。优选，R是C₁-C₆的直链或支链的饱和或不饱和碳氢基团。

烷基R可以选择性地有一至三个取代基，分别选自OH,OR,酰氧基，COOH，烷氧羰基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，硝基或苯基或F,Cl,Br或I原子。

进一步优选的是结构式Ⅱ的化合物，其中

R₁是H、OH、OR或OCOR；

R₂是H或R；

R₃是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₄是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₅是H或R；

R₆是H、OH、OR或OCOR；

R₇是H、H、OR或OCOR；

R₈是H或R；

R₉是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₁₀是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₁₁是H或R；

R₁₂是H、OH、OR或OCOR；和

所述烷基是选择性取代的C₁-C₆烷基，以及使用这些化合物用于治疗可用T-钙通道阻断剂治疗的健康紊乱方法。

还优选的是，R是选择性取代的甲基或乙基。

通过适当的取代大黄素蒽酮的二聚反应可以合成本发明中的带烷基或取代烷基的金丝桃素衍生物，即在R₂,R₃,R₄,R₅,R₈,R₉,R₁₀和/或R₁₁位带有烷基或取代烷基的具有结构式Ⅱ的化合物(参见Y.Mazur等，CA2,029,993；H.Falk等，Monatsh.Chem.,126卷，993-1000页，1995,H.Falk和T.N.H.Tran,Monatsh.Chem.,127卷，717-723页，1996；R.Altmann等，Monatsh.Chem.,129卷，235-244页，1998；G.A.Kraus和W.Zhang,Bioorg.Med.Chem.,5卷，2633-2636页，1995)。例如，其中R₁,R₃,R₄,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H，且R₉和R₁₀是C₁₉H₃₉的金丝桃素衍生物由具有结构式Ⅰ的蒽酮在N-氧化吡啶，哌啶和吡啶中的硫酸亚铁存在下二聚而合成得到。

O-取代的金丝桃素衍生物或金丝桃素类似物可以通过金丝桃素衍生物和/或金丝桃素类似物上的酚OH的直接醚化或酯化而合成得到(参见H.Falk和T.N.H.Tran,Monatsh.Chem.,127卷，717-723页，1996；G.A.Kraus和W.Zhang,Bioorg.Med.Chem.,5卷，2633-2636页，1995)。例如，金丝桃素在碱性条件下与硫酸二甲酯进行甲基化反应合成金丝桃素衍生物，其中R₁,R₃,R₄,R₆,R₇和R₁₂是甲氧基，R₂,R₅,R₈和R₁₁是H，且R₉和R₁₀是甲基。

通过金丝桃素衍生物和/或金丝桃素类似物上的直接卤化或磺化而合成得到卤代或磺化的金丝桃素衍生物，即其中R₂,R₅,R₈和/或R₁₁为卤素或磺酸基的具有结构式Ⅱ的化合物，或者卤代或磺化的金丝桃素类似物(参见H.Falk和W.Schmitzberger,Monatsh.Chem.,124卷，77-81页，1993；H.Falk等，Monatsh.Chem.,129卷，309-318页，1998)。例如R₂,R₅,R₈和/或R₁₁为Br的金丝桃素衍生物可通过金丝桃素在吡啶中溴化得到。

其它具有结构式Ⅱ的金丝桃素衍生物可以通过已知的方法从金丝桃素，假金丝桃素或金丝桃素的衍生物的衍生而得到。例如，根据T.w.Greene和P.G.M.Wuts在“有机合成中的保护基团”(JohnWiley & Sons,Inc.,1991，引用于此作参考)提供的方法，金丝桃素，假金丝桃素或以上描述的金丝桃素的衍生物中的一个或多个OH可以转化成保护的OH。类似地，使用H.Bundgard在“药物前体的设计”(Elsevier Science Publishers,Amsterdam,1985,引用于此作参考)中描述的方法，将金丝桃素或假金丝桃素转化成金丝桃素或假金丝桃素的药物前体可以得到一些金丝桃素的衍生物。本发明包括以上描述的药剂的前体形式以及使用医药前体治疗与T-型钙通道有关或能用T-钙通道阻断剂治疗的健康紊乱的方法。例如，金丝桃素前体，假金丝桃素前体和使用金丝桃素前体或假金丝桃素前体治疗与T-型钙通道有关或能用T-钙通道阻断剂治疗的健康紊乱的方法。

本发明也提供药物组合物，其包含金丝桃，金丝桃提取物，或金丝桃中的化合物，即金丝桃组分，包括金丝桃素、假金丝桃素、贯叶金丝桃素、无贯叶金丝桃素、栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮和海棠苷、金丝桃素的衍生物和类似物，可以与医药可接受载体相混合。本发明的范围也包括含至少两种金丝桃素组分的药物组合物，其中一种优选为金丝桃素，含或不含医药可接受的载体。进一步优选的是含金丝桃素和假金丝桃素的药物组合物。还优选含金丝桃素和贯叶金丝桃素的药物组合物。本发明的另一方面是含金丝桃组分和金丝桃衍生物或金丝桃类似物的药物组合物。

可使用多种标准提取物，使得每天的剂量在0.4-2.7毫克金丝桃素之间。这些提取物由不同的制造商用不同的方法制备。标准化的提取物总共含0.24-0.32％的金丝桃素。

主要化合物，金丝桃素和假金丝桃素(萘并二蒽酮)，天然地存在金丝桃植物中作为色素和特征标记，可用甲醇或乙醇提取。金丝桃素和假金丝桃素也可以通过已知的技术人工合成。合成的金丝桃素可以由市售得到。类似地，金丝桃素提取物组分，如金丝桃素，假金丝桃素，类黄酮，间苯三酚和氧杂蒽酮，可以用已知的合成方法得到，或由高压液相色谱分离金丝桃提取物，再由相关技术人员采用已知工作流程得到。

本发明也提供使用金丝桃；金丝桃提取物；金丝桃组分，如金丝桃素，假金丝桃素，类黄酮，如栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮和海棠苷；间苯三酚，如贯叶金丝桃素和无贯叶金丝桃素；来自贯叶连翘的植物芳香油；和氧杂蒽酮；金丝桃衍生物；金丝桃类似物；或以上描述的药物组合物治疗与T-型钙通道有关或能用T-钙通道阻断剂治疗的健康紊乱的方法。这些方法中，金丝桃；金丝桃提取物；金丝桃组分，如金丝桃素，假金丝桃素，类黄酮，如栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮和海棠苷；间苯三酚，如贯叶金丝桃素和无贯叶金丝桃素；来自贯叶连翘的植物芳香油；和氧杂蒽酮；金丝桃衍生物；金丝桃类似物；或以上描述的药物组合物可用于动物，例如哺乳动物如人，这些治疗可以根据需要通过注射，眼睛，局部，口服或直肠，或者呼吸进行。注射方法包括静脉、皮下和肌肉注射。

金丝桃提取物，金丝桃素，假金丝桃素，类黄酮如栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮和海棠苷，间苯三酚如贯叶金丝桃素和无贯叶金丝桃素，来自贯叶连翘的植物芳香油，和氧杂蒽酮，金丝桃衍生物，金丝桃类似物等用于注射，眼睛，局部，口服或直肠治疗时，可以使这些药剂与传统的载体、赋形剂、粘接剂、防腐剂、稳定剂、颜料、香料等物质用医药可以接受的方法相混合。

现在描述本发明方法中所使用的活性药剂的剂量。对于金丝桃提取物，除贯叶连翘外金丝桃属的物种的提取物，含金丝桃素的其它植物提取物，其每天摄入的剂量为每千克体重0.05-500毫克，优选每千克体重0.5-50毫克。对于金丝桃素，每天摄入的剂量为每千克体重0.0001-10毫克，优选每千克体重0.0015-0.15毫克。对于金丝桃素衍生物，如假金丝桃素，或金丝桃素类似物，每天摄入的剂量为每千克体重0.001-5毫克。对于除金丝桃素和假金丝桃素之外的金丝桃提取物组分或金丝桃组分，每天摄入的剂量为每千克体重0.01-100毫克，优选每千克体重0.05-50毫克。

新鲜或干燥的贯叶连翘都可用于治疗与T-型钙通道有关或能用T-钙通道阻断剂治疗的健康紊乱。本发明中，“新鲜的贯叶连翘”包括新鲜状态下完整的贯叶连翘植物或贯叶连翘植物的部分。本发明中，“干燥的贯叶连翘”包括干燥状态下完整的贯叶连翘植物或贯叶连翘植物的部分，和由干燥的完整的贯叶连翘植物或贯叶连翘植物的部分研磨得到的粉末。本发明的治疗方法也可以使用新鲜或干燥的贯叶连翘进行。对于新鲜的贯叶连翘，每天摄入的剂量为每千克体重1-5000毫克。对于干燥的贯叶连翘，每天摄入的剂量为每千克体重0.5-2000毫克。

本发明的方法中，治疗特定的患者时使用的活性药剂的确切剂量可以选自以上描述“每日摄入剂量”的范围，其剂量主要取决于活性药剂，即用于治疗的贯叶连翘，金丝桃提取物，金丝桃组分，金丝桃素衍生物或金丝桃素类似物的T-钙通道的活性，以及需要治疗的患者的年龄，种族，性别，种类和健康条件，和需要治疗的健康紊乱症状的类型和严重程度。如果用于急性治疗，以上活性药剂可以按上述每天剂量的使用不超过一天。如果需要，以上活性药剂可以按上述每天剂量对需要治疗的患者一天接一天连续使用。

所述提取物或金丝桃素也可以与能有效治疗上述症状的药物或其它天然物质一起使用。

下列实施例用于说明本发明，但并不打算限制本发明。

实施例1

金丝桃素对培养的神经母细胞瘤细胞中的L-型钙电流活性的作用

用含10％牛胚胎血清的Dulbecco’s改性的Eagle’s介质，在37℃在含5％二氧化碳的湿润的空气中培养鼠神经母细胞瘤细胞(NIE115)。介质每3-4天更换一次。机械搅拌后，将3×104细胞在含4毫升槽液的35毫米的组织培养皿中再植。细胞附着之后，将培养皿置于反转反相显微镜(尼康)的平台上用于记录钙离子通道电流。这些细胞表现为突出的T通道电流。在特别寻找L通道的实验中，在相同的培养条件下加入2％(体积/体积)的硫酸二甲酯中细胞生长并保持汇合。使用前3-5天，细胞用相同的介质再植。这些细胞表示为突出的L通道电流。少量的细胞也表现为T通道电流。因此，选择细胞使得保留电位在-40毫伏，T通道组分很少而内在电流主要由L通道来测定。

使用***码-钳位电路技术的完整细胞模式。移液管有2-15M的阻抗。使用Axonpatch-1C(Axon Instrument)的***码-钳位电路放大器记录膜电流。所有信号在1千赫兹过滤并用计算机记录。由于使用20mM钡离子作为电荷载体测定的峰值电流很小(大约200pA)，通常不使用系列阻抗补偿。如果电容的瞬变现象与内在电流的初始值相掩盖，或如果空间电位控制不充分(即有很长的神经生长周期的NIE-115细胞)，实验数据不被采用。除非从T和L通道电流的原始记录上使用峰值(弥补缺漏)特别绘制的电流-电位图。研究T通道时保留膜电位固定在-80毫伏，而研究L通道时保留膜电位固定在-40毫伏。每间隔5秒去偏极200毫秒得到通过钙离子通道的钡电流。记录每单个细胞，5分钟后得到稳定的记录；随后在槽液中加入药物。实验在室温(21-22℃)进行以延长细胞存活时间和通道记录时间。槽液含110mM三氨基甲烷盐酸缓冲液，5mM氯化钾，5mM氯化铯，20mM Hepes,30mM葡萄糖，20mM氯化钡，和0.5mM河豚毒素。移液管(内部)溶液含70mM天(门)冬氨酰苯丙氨酸甲酯-二铯，EGTA10,5mM三磷酸腺苷二钠盐，5mM丙酮酸钾盐，5mM琥珀酸钾盐，5mM磷酸肌酸二钠盐，15单位/毫升肌氨酸激酶，Hepes,和5mM葡萄糖。使用盐酸或氢氧化铯调节所有溶液的克分渗透压浓度到310-320mOsm和pH为7.4。

图1显示金丝桃素对L-型钙离子电流没有明显的作用。图2显示硝苯地平(已知的L-型钙离子通道阻断剂)明显抑制L-型钙离子电流。

实施例2

金丝桃素对N1E-115细胞中的T-型钙电流的作用

按照以上(实施例1)所描述的方法。图2显示金丝桃素抑制T-型钙电流的作用与剂量有关。

图4说明溶剂对照对T-型钙电流没有影响。

实施例3

小连翘属植物提取物(金丝桃提取物)对N1E-115细胞中的T-型钙电流的作用

按照以上(实施例1)所描述的方法。标准的金丝桃提取物含约0.3％的金丝桃素。如图5所示，含0.15微克/毫升金丝桃素的50微克/毫升的金丝桃提取液可以抑制超过60％的T-型钙电流，而图3所示纯的0.15微克/毫升金丝桃素仅能抑制小于10％的T-型钙电流。这结果说明在金丝桃提取物中除金丝桃素之外的其它化学物质对金丝桃素对T-型钙通道活性的作用产生协同效应。

实施例4

金丝桃素对血管平滑肌细胞VSMC中的L-型钙电流的作用

除使用血管平滑肌细胞(VSMC)之外，采用类似于上述实施例1的方法。如图6所示，金丝桃素对血管平滑肌细胞中的L-型钙电流没有作用。

实施例5

金丝桃素对心室细胞的L-型钙电流的作用

除使用幼鼠心室细胞之外，采用类似于上述实施例1的方法。如图7所示，金丝桃素对心室细胞的L-型钙电流没有作用。

Claims

1．一种在需要治疗的动物中能用T-型钙通道阻断剂治疗的健康紊乱的治疗方法，该方法包括对所说的动物使用有效量的活性药剂，其中所说的活性药剂是贯叶连翘，金丝桃提取物，除贯叶连翘之外的金丝桃属物种的提取物，金丝桃组分，金丝桃素衍生物或金丝桃素类似物，其条件是当活性药剂是贯叶连翘或金丝桃提取物时，所说的健康紊乱不是抑郁症或偏头痛。

2．根据权利要求1的方法，其中所说的金丝桃素衍生物是具有结构式Ⅱ的化合物，

其中

R₁是H、OH、OR或OCOR；

R₂是H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₃是H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₄是H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₅是H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₆是H、OH、OR或OCOR；

R₇是H、OH、OR或OCOR；

R₈是H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₉是H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₁₀是H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₁₁是H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₁₂是H、OH、OR或OCOR；和

R是可选择性取代的C₁-C₃₀烷基；

其前提条件是排除下列化合物：

(A)具有结构式Ⅱ的化合物，其中R₁,R₃,R₄,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H，且R₉和R₁₀是甲基；

(B)具有结构式Ⅱ的化合物，其中R₁,R₉,R₁₀,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H,且R₃和R₄是甲基；

(C)具有结构式Ⅱ的化合物，其中R₁,R₃,R₄,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H,R₉是甲基，和R₁₀是CH₂OH；

(D)具有结构式Ⅱ的化合物，其中R₁,R₃,R₄,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H,R₉是CH₂OH，和R₁₀是甲基；

(E)具有结构式Ⅱ的化合物，其中R₁,R₉,R₁₀,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H,R₃是甲基，和R₄是CH₂OH；

(F)具有结构式Ⅱ的化合物，其中R₁,R₉,R₁₀,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H,R₃是CH₂OH，和R₄是甲基。

3．根据权利要求1的方法，其中可以用T-型钙通道阻断剂治疗的健康紊乱是抑郁症、慢性心力衰竭、充血性心力衰竭、局部缺血症状、心律不齐、心绞痛、高血压、低胰岛素症、高胰岛素症、糖尿病、高醛甾酮症、癫痫症、偏头痛、脑老化、神经衰退疾病或早产。

4．根据权利要求1的方法，其中所说的金丝桃组分是金丝桃素、假金丝桃素、贯叶金丝桃素、无贯叶金丝桃素、栎精、栎素、异栎素、金丝桃苷、芸香苷、柔夷花序黄酮或海棠苷。

5．根据权利要求2的方法，其中R是选择性地由一到三个取代基取代的C₁-C₃₀烷基，所述烷基分别选自羟基、烷氧基、酰氧基、羧基、烷氧羰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基或苯基或F、Cl、Br或I原子。

6．根据权利要求5的方法，其中

R₁是H、OH、OR或OCOR；

R₂是H或R；

R₃是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₄是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₅是H或R；

R₆是H、OH、OR或OCOR；

R₇是H、OH、OR或OCOR；

R₈是H或R；

R₉是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₁₀是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₁₁是H或R；

R₁₂是H、OH、OR或OCOR；和

R是选择性取代的C₁-C₆烷基。

7．根据权利要求6的方法，其中所述R是选择性取代的甲基或乙基。

8．根据权利要求1的方法，其中所说的动物是人。

9．根据权利要求1的方法，其中所说的活性药剂是金丝桃提取物。

10．根据权利要求9的方法，其中所说的有效剂量是每千克动物体重大约0.05-500毫克。

11．根据权利要求1的方法，其中所说的活性药剂是金丝桃素。

12．根据权利要求11的方法，其中所说的有效剂量是每千克动物体重大约0.0015-15毫克。

13．根据权利要求1的方法，该方法进一步包括按照权利要求1的描述对所说的动物使用额外的活性药剂。

14．根据权利要求13的方法，其中使用的活性药剂中的一种是金丝桃素。

15．根据权利要求14的方法，其中使用的活性药剂中的另一种是假金丝桃素。

16．根据权利要求14的方法，其中使用的活性药剂中的另一种是贯叶金丝桃素。

17．根据权利要求15的方法，该方法还包括对所说的动物使用贯叶金丝桃素。

18．具有结构式Ⅱ的化合物，

其中

R₁是H、OH、OR或OCOR；

R₂是H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₃是H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₄是H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₅是H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₆是H、OH、OR或OCOR；

R₇是H、OH、OR或OCOR；

R₈是H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₉是H、R、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR、COOH或COOR；

R₁₁是H、R、F、Cl、Br、I或SO₃H；

R₁₂是H、OH、OR或OCOR；和

R是可选择性取代的C₁-C₃₀烷基；

其条件是排除下列化合物：

(A)具有结构式Ⅱ的化合物，其中R₁,R₃,R₄,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H,且R₉和R₁₀是甲基；

(F)具有结构式Ⅱ的化合物，其中R₁,R₉,R₁₀,R₆,R₇和R₁₂是OH,R₂,R₅,R₈和R₁₁是H,R₃是CH₂OH,和R₄是甲基。

19．根据权利要求18的化合物，其中所述R是C₁-C₃₀烷基，其选择性地带有一至三个取代基，该取代基分别选自羟基、烷氧基、酰氧基、羧基、烷氧羰基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、硝基或苯基或F、Cl、Br或I原子。

20．根据权利要求18的化合物，其中

R₁是H、OH、OR或OCOR；

R₂是H或R；

R₃是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₄是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR、CH₂OCOR；

R₅是H或R；

R₆是H、OH、OR或OCOR；

R₇是H、OH、OR或OCOR；

R₈是H或R；

R₉是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₁₀是H、OH、OR、OCOR、CH₂OH、CH₂OR或CH₂OCOR；

R₁₁是H或R；

R₁₂是H、OH、OR或OCOR；和

R是选择性取代的C₁-C₆烷基。

21．根据权利要求20的化合物，其中所述R是选择性取代的甲基或乙基。