本发明的喜树碱化合物及其衍生物和制备方法用下列的例子加以较详细地说明,但不应解释为是对它们的限制。
实施例1
下式的喜树碱衍生物的制备
[CM.Dextran.Na:羧基甲基葡聚糖钠盐]
(1)3-(t-丁氧羰基氨基)丙醇的制备
3-氨基丙醇(6.0g)溶于二氯甲烷(50ml)在搅拌和冰冷却下向其中滴加二-t-丁基二碳酸酯(18.3g)。混合物在室温下搅拌12小时,浓缩,残渣用硅胶柱层析精制得无色油状标题化合物(13.98g)。
收率:99.9%
IR(净):Vmax cm-1=3380,1790
质谱:m/z=176([M+H]+)
NMR(300 MHz,CDCl3):δTMS=1.45(9H,s),1.62-1.72(2H,m),3.0(1H,brs),3.29(2H,dd,J=12Hz,6Hz),3.66(2H,dd,J=12Hz,6Hz),4.80(1H,brs)
(2)3-(t-丁氧羰基氨基)丙基甲苯磺酸酯的制备
3-(t-丁氧羰基氨基)丙醇(10.0g)溶于二氯甲烷(100ml),在搅拌和冰冷却下向其中加入三乙胺(8.66g)和甲苯磺酰氯(16.3g),反应混合物在室温下搅拌过夜。浓缩反应混合物,残渣溶于水和乙酸乙酯的混合物。分出有机层,以饱和氯化钠溶液洗涤,用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。残渣用硅胶柱层析精制得淡黄色油状标题化合物(15.37g)。
收率:82%
IR(净):Vmax cm-1=3400,3340,1700
质谱:m/z=352([M+Na]+)
NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=1.42(9H,s),1.78-1.90(2H,m),2.45(3H,s),3.11-3.22(2H,m),4.09(2H,t,J=6Hz),4.5-4.65(1H,m),7.36(2H,d,J=8Hz),7.77-7.83(2H,m)
(3)5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-1-羟基-8-硝基-1,2,3,4-四氢萘的制备
1,5-二羟基-8-硝基-1,2,3,4-四氢萘(2.0g)(J.Med.Chem.,1973,16(3),254)溶于干燥的DMF(80ml),向其中加入碳酸钾(2当量),碘化钠(1.4当量)和3-(t-丁氧羰基氨基)丙基甲苯磺酸酯(1.4当量)。反应混合物在50℃搅拌24小时,向其中加入乙酸乙酯。混合物以饱和氯化钠水溶液洗涤,并以硫酸钠干燥。残渣以硅胶柱层析精制得淡黄色无定形粉末状标题化合物(3.05g)。
收率:87%
IR(净):Vmax cm-1=3360,1695
质谱:m/z=384([M+NH4]+)
NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=1.36(9H,s),1.57-1.90(6H,m),2.52-2.71(2H,m),3.11(2H,q,J=6Hz),4.07(2H,t,=6Hz),5.12-5.17(2H,m),6.89(1H,t,J=5.5Hz),6.96(1H,d,J=9Hz),7.68(1H,d,J=9Hz)
(4)5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-8-硝基-1,2,3,4-四氢萘-1-酮的制备:
5-[3’(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-1-羟基-8-硝基-1,2,3,4-四氢萘(2.46g)溶于干燥的二氯甲烷(110ml),向其中加入3A分子筛(6.73g)和吡啶二氯铬酸盐(1.5当量)并回流此混合物。在反应完成以后,混合物以***稀释,不溶性物质通过硅藻土Celite垫层过滤除去。滤液浓缩,残渣用硅胶柱层析精制得无色粉末的标题化合物(1.87g)。
M.p.:76-77℃收率:76%IR(熔融):Vmax cm-1=3550,1700质谱:m/z=382([M+NH4]+)
NMR(300MHz,CDCl3):δTMs=1.44(9H,s),2.02-2.20(4H,m),2.68-2.73(2H,m),2.92(2H,t,J=6Hz),3.36(2H,q,J=6.5Hz),4.12(2H,t,J=6Hz),4.78(1H,brs),6.95(1H,d,J=9Hz),7.39(1H,d,J=9Hz)
(5)8-氨基-5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-1,2,3,4-四氢萘-1-酮的制备:
5-[3’(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-8-硝基-1,2,3,4-四氢萘-1-酮(3.55g)溶于乙醇(160ml),向其中加入10%的钯-炭(420mg)。混合物在氢气下搅拌1.5小时,滤除催化剂。滤液浓缩,残渣用硅胶柱层析精制得黄色油状标题化合物(3.56g)。
M.p.:112-115℃(分解)
收率:83%
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3440,3340,1700,1650
质谱:m/z=335([M+H]+)
NMR(300MHz,CDCl3):δTMs=1.45(9H,s),1.92-2.67(4H,m),2.61(2H,t,J=6Hz),2.87(2H,t,J=6Hz),3.35(2H,q,J=6.5Hz),3.94(2H,t,J=6Hz),4.85(1H,brs),6.10(2H,brs),6.48(1H,d,J=9Hz),6.94(1H,d,J=9Hz)
(6)10-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-7,9-三亚甲基-(20S)-喜树碱的制备
8-氨基-5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-1,2,3,4-四氢萘-1-酮(2.03g)溶于乙醇(85ml),向其中加入(4S)-7,8-二氢-4-乙基-4-羟基-1H-吡喃[3,4-f]并二氢吲哚-3,6,10(4H)-三酮(800mg)和P-甲苯磺酸(58mg),混合物回流17小时。反应完成后,混合物在减压下浓缩除去溶剂,生成的残渣用硅胶柱层析精制得淡黄粉末的标题化合物(850mg)。
M.p.:225-227℃(分解)
收率:50%
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3440,3325,1750,1740,1655,1620
质谱:m/z=562([M+H]+)
NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=-1.03(3H,t,J=7.5Hz),1.45(9H,s),1.82-2.18(6H,m),3.06-3.13(4H,m),3.41(2H,q,J=6Hz),3.79(1H,s),4.24(2H,t,J=6Hz),4.9(1H,br),5.16(2H,s),5.30(1H,d,J=16Hz),5.75(1H,d,J=16Hz),7.51(1H,d,J=9Hz),7.61(1H,s),8.06(1H,d,J=9Hz)
(7)10-(3’-氨基丙氧基)-7,9-三亚甲基-(20S)-喜树碱盐酸盐的制备:
10-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-7,9-三亚甲基-(20S)-喜树碱(836mg)混悬于二噁烷(30ml)之中,在搅拌和冰冷却下向其中中滴加18%的盐酸二噁烷溶液(15ml)。反应混合物在室温搅拌,并在反应完成后向反应混合物中加入异丙醚并搅拌。过滤收集沉淀粉末,用***洗涤并在减压下干燥。将如此得到的黄色粉末溶于水,冷冻干燥得黄色粉末状标题化合物(620mg)。
M.p.:>194℃(分解)
收率:84%
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=1740,1655
质谱:m/z=462([M-Cl]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMs=0.88(3H,t,J=7.5Hz),1.81-1.94(2H,m),1.97-2.15(4H,m),3.01-3.14(6H,m),4.28(2H,t,J=6Hz),5.23(2H,s),5.43(2H,s),7.28(1H,s),7.71(1H,d,J=9.5Hz),7.95-8.08(3H,brs),8.03(1H,d,J=9.5Hz)
(8)10-[3'-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰氨基)丙氧基]-7,9-三亚甲基-(20S)-喜树碱的制备:
10-(3’-氨基丙氧基)-7,9-三亚甲基-(20S)-喜树碱盐酸盐(158mg)和二异丙基乙胺(49mg)在搅拌下溶于DMF(5ml),向其中加入t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酸(278mg)和N-羟基-琥珀酰亚胺(143mg)溶于干燥DMF(8ml)的溶液,在搅拌和冰冷却下再加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚酰胺盐酸盐(183mg)。混合物在室温搅拌16小时。反应完成后,混合物在减压下浓缩以除去溶剂,生成的残渣用硅胶柱层析精制得淡黄色粉末的标题化合物(285mg)。
收率:定量的
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3290,1660质谱:m/z=880([M+H]+)
NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=1.02(3H,t,J=7.5Hz),1.43(9H,s),1.85-1.94(2H,m),2.02-2.10(4H,m),2.97-3.05(5H,m),3.23(1H,dd,J=14Hz,5Hz),3.49(2H,q,J=6.5Hz),3.60-3.80(6H,m),4.20(1H,t,J=6Hz),4.50-4.56(1H,m),5.11(2H,s),5.29(1H,d,J=16.5Hz),5.71(1H,d,J=16.5Hz),5.85(1H,brt),7.08(1H,m),7.18-7.27(5H,m),7.45(1H,d,J=7Hz),7.52(1H,d,J=9.5Hz),7.58(1H,s),7.71(1H,m),7.99(1H,d,J=9.5Hz)
(9)10-[3’-(甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰甘氨酰氨基)丙氧基]-7,9-三亚甲基-(20S)-喜树碱盐酸盐的制备:
10-[3’-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰甘氨酰氨基)-丙氧基]-7,9-三亚甲基-(20S)-喜树碱(273mg)溶于二噁烷(10ml),在搅拌和冰冷却下向其中滴加18%的盐酸二噁烷溶液(15ml),反应混合物在室温下搅拌,并在反应完成后向此混合物加入异丙醚。混合物搅拌,沉淀粉末用过滤收集,以***洗涤并在减压下干燥。如此得到的黄色粉末溶于水中并冷冻干燥得黄色粉末状标题化合物(210mg)。
M.p.:>174℃(分解)
收率:83%
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3190,1745,1650
质谱:m/z=780([M-Cl]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.89(3H,t,J=7Hz),1.26-1.32(2H,m),1.86-2.04(6H,m),2.79(1H,dd,J=14Hz,10Hz),2.98-3.05(5H,m),3.28-3.36(2H,m),3.54-3.88(6H,m),4.20(2H,t,J=6Hz),4.45-4.54(1H,m),5.19(2H,s),5.43(2H,s),7.11-7.27(5H,m),7.35(1H,s),7.71(1H,t,J=9.5Hz),7.97(1H,t,J=5.5Hz),8.03(1H,d,J=9.5Hz),8.19(3H,br),8.35(1H,t,J=6Hz),8.43(1H,d,J=8Hz),8.65(1H,t,J=5.5Hz)
由上述方法得到的具有氨基的喜树碱化合物与带有羧基的水溶性高分子化合物如羧基甲基葡聚糖(以下均称为(M-dextran)缩合得期望的喜树碱衍生物。缩合反应是在缩合剂存在下例如水溶性碳二亚酰胺[1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳二亚酰胺盐酸盐,2-乙氧基-1-乙氧羰基-1,2-二氢喹啉等]在水中或水-有机溶剂混合物中进行的。
(10)喜树碱衍生物的制备
CM-Dextran钠盐(CM-度:0.5)(500mg)溶于水(20ml)中,在搅拌和10℃以下向其中加入10-[3’-(甘氨酰基-甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-甘氨酰氨基)丙氧基]-7,9-三亚甲基-(20S)-喜树碱盐酸盐(50mg)。向混合物中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚酰胺盐酸盐(1.5g),在加入过程中混合物的pH用0.1N盐酸控制在6.5-7.0。混合物在10℃以下搅拌2小时,其pH用0.1N氢氧化钠调节至9。反应混合物用离子交换柱层析(AGMP-50,Na-型,30ml,Bio-Rad Laboratories,Inc.制造)精制。含有期望化合物的组份合并(30ml),向其中加入3M氯化钠水溶液(1.2ml),并将混合物倾于乙醇(150ml)中。离心收集沉淀,水(20ml)加至沉淀中,然后将混合物过滤。滤液中加入3M氯化钠水溶液(0.4ml),混合物在搅拌下加至乙醇(80ml)中。离心收集沉淀,用溶剂洗涤,减压下干燥得期望的喜树碱衍生物(415mg)。10-(3’-氨基丙氧基)-7,9-三亚甲基(20S)-喜树碱盐酸盐(实施例1-(7)的化合物)在期望的喜树碱衍生物中的含量为4.4%,此含量系基于在380nm的吸收度计算的。按凝胶渗透色谱(GPC)分析法测得期望的喜树碱衍生物的平均分子量为160,000,分布度(Mw/Mn)为1.57。
GPC分析的条件:G4000SWXL(Toso,Ltd.制造),0.2M磷酸盐缓冲液(pH7.0)。
实施例2
(1)7-(4’-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰基)哌嗪基)甲基-10,11-亚乙基二氧-(20S)-喜树碱的制备
标题化合物(518mg)系以与实施例1-(8)相同的方式从7-哌嗪基甲基-10,11-亚乙基二氧-(20S)-喜树碱盐酸盐(450mg)和t-丁氧羰基-甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酸(2当量)以黄色粉末得到。
收率:74%
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3280,1750,1655
质谱:m/z=923([M+H]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.89(3H,t,J=7.5Hz),1.37(9H,s),1.85-2.1(2H,m),2.3-2.6(4H,m),2.75(1H,dd,J=14Hz,10Hz),3.05(1H,dd,J=14Hz,4.5Hz),3.3-3.6(6H,m),3.58(1H,dd,J=21Hz,5.5Hz),3.74(1H,dd,J=17Hz,5.5Hz),3.9-4.1(4H,m),4.44(4H,s),4.58(1H,m),5.24(2H,s),5.42(2H,s),6.50(1H,s),6.97(1H,t,J=6Hz),7.1-7.3(6H,m),7.55(1H,s),7.77(1H,s),7.8-7.9(1H,br),8.05-8.2(2H,m)
(2)7-(4’-(甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰基)哌嗪基)-甲基-10,11-亚乙基二氧基-(20S)-喜树碱盐酸盐的制备
标题化合物(409mg)系以与实施例1-(9)的相同方式从7-(4’-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰基)哌嗪基)甲基-10,11-亚乙基二氧基-(20S)-喜树碱(478mg)以黄色粉末得到。
M.p.237-239℃(分解)
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3250,1745,1655
质谱:m/z=823([M-Cl]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.88(3H,t,J=7Hz),1.8-1.99(2H,m),2.79(1H,dd,J=14Hz,10Hz),3.07(1H,dd,J=14Hz,4Hz),3.1-4.3(16H,m),4.47(4H,s),4.55-4.70(1H,m),5.44(2H,s),5.67(2H,s),7.15-7.32(6H,m),7.65(1H,s),8.05(1H,s),8.05-8.20(3H,br),8.29(1H,br),8.39(1H,d,J=8.5Hz),8.57(1H,t,J=5.5Hz)
(3)喜树碱衍生物的制备
CM-Dextran钠盐(CM.度:0.5)(1.2g)和7-(4’-(甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰)哌嗪基)甲基-10,11-亚乙基二氧基-(20S)-喜树碱盐酸盐(168mg)以与实施例1-(10)相同的方式得到期望的喜树碱衍生物(798mg),为淡黄色粉末。
基于在380nm吸收度计算的7-哌嗪基甲基-10,11-亚乙基二氧基-(20S)-喜树碱盐酸盐在期望的喜树碱衍生物中的含量为1.1%。以凝胶渗透色谱(GPC)分析法测得的期望的喜树碱衍生物的平均分子量为169,000,分布度(Mw/Mn)为1.32。
GPC分析的条件:G4000SWXL(Toso Ltd.制造),0.2M磷酸盐缓冲液(pH7.0)。
实施例3
下式喜树碱衍生物的制备:
(1)7-N-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰基)氨基甲基-10,11-亚乙基二氧基-(20S)-喜树碱的制备
标题化合物(232mg)以与实施例1-(8)相同的方式以黄色粉末从7-氨基甲基-10,11-亚乙基二氧基-(20S)-喜树碱盐酸盐(222mg)和t-丁氧羰基-甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酸(2当量)得到。
收率:58%
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3285,1750,1650
质谱:m/z=854([M+H]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.88(3H,t,J=7.5Hz),1.35(9H,S),1.78-1.94(2H,m),2.74(1H,dd,J=14Hz,10Hz),2.99(1H,dd,J=14Hz,4.5Hz),3.4-3.8(4H,m),4.34-4.50(1H,m),4.42(4H,s),4.66-4.82(2H,m),5.42(4H,brs),6.50(1H,s),6.98(1H,t,J=6Hz),7.12-7.28(5H,m),7.26(1H,s),7.56(1H,s),7.80(1H,s),7.91(1H,br),8.14(1H,d,J=7.5Hz),8.32(2H,t,J=7.5Hz),8.58(1H,m)
(2)7-N-(甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰基)氨基甲基-10,11-亚乙基二氧基-(20S)-喜树碱盐酸盐的制备
标题化合物(164mg)以与实施例1-(9)相同的方式从7-N-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰基)氨基甲基-10,11-亚乙基二氧基-(20S)-喜树碱(203mg)得到。
M.p.>211℃(分解)
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3220,1745,1655
质谱:m/z=754([M-Cl]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.88(3H,t,J=7Hz),1.80-1.93(2H,m),2.77(1H,dd,J=14Hz,10Hz),3.00(1H,dd,J=14Hz,4Hz),3.6-4.55(7H,m),4.42(4H,s),4.65-4.85(2H,m),5.42(2H,s),5.45(2H,s),7.13-7.26(5H,m),7.27(1H,s),7.57(1H,s),7.83(1H,s),8.03-8.16(3H,br),8.34-8.40(2H,m),8.54(1H,br),8.73(2H,br)
(3)喜树碱衍生物的制备
CM-Dexttan钠盐(CM度:0.5)(772mg)溶于水(50ml)中,向其中加入DMF(25ml)。混合物在冰冷却下搅拌,并向其中加入7-N-(甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰基)氨基甲基-10,11-亚乙基二氧基-(20S)-喜树碱盐酸盐(106mg)和2-乙氧基-1-乙氧羰基-1,2-二氢喹啉(1.57g)。混合物反应过夜,并加到乙醇中(450ml)得沉淀,进一步按实施例1-(10)相同的方式处理得期望的喜树碱衍生物(545mg),为淡黄色粉末,基于375nm吸收度计算的7-氨基甲基-10,11-亚乙基二氧基-(20S)-喜树碱盐酸盐在期望的喜树碱衍生物中的含量为5.5%。用凝胶渗透色谱(GPC)分析法测得期望的喜树碱衍生物的平均分子量为165,000,分布度(Mw/Mn)为1.40。
GPC分析的条件:G4000SWXL(Toso Ltd.制造),0.2M磷酸盐缓冲液(pH7.0)。
实施例4
10-(3’氨基丙氧基)-(20S)-喜树碱盐酸盐的制备
(1)5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-2-硝基苯甲醛二甲基缩醛的制备
5-羟基-2-硝基苯甲醛二甲基缩醛(3.0g)溶于干燥的二甲基甲酰胺(50ml),向其中加入碘化钠(3.15g),碳酸钾(1.93g)和3-(t-丁氧羰基氨基)丙基甲苯磺酸酯(6.95g)。混合物在50℃搅拌3小时并冷至室温。混合物以乙酸乙酯提取,提取液以饱和氯化钠水溶液洗涤,并用硫酸钠干燥。得到的溶液在减压下浓缩以除去溶剂,残渣以硅胶柱层析精制得标题化合物(5.22g)为淡黄色油状物。
收率:定量的
IR(净):Vmax cm-1=3360,1710
质谱:m/z=393([M+Na]+)
NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=1.44(9H,s),2.02(2H,quint.,J=6Hz),3.33(2H,dd,J=13Hz,6Hz),3.44(6H,s),4.11(2H,t,J=6Hz),4.7(1H,brs),6.01(1H,s),6.90(1H,dd,J=9Hz,3Hz),7.29(1H,d,J=3Hz),7.97(1H,d,J=9Hz)
(2)10-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-(20S)-喜树碱的制备
5-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-2-硝基苯甲醛二甲基缩醛(1270mg)溶于乙醇(20ml)中,向其中加入10%钯一炭(120mg),混合物在氢气下搅拌1.5小时。滤除催化剂,向滤液中加入(4S)-7,8-二氢-4-乙基-4-羟基-1H-吡喃[3,4-f]并二氢吲哚-3,6-1 0(4H)-三酮(300mg)和P-甲苯磺酸(22mg),并将混合物在室温搅拌过夜。混合物在减压下浓缩以除去溶剂,残渣用硅胶柱层析精制得淡黄色粉末状标题化合物(204mg)。
M.p.223-224℃(分解)
收率:34%
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3360,1750,1690
质谱:m/z=522([M+H]+)
NMR(300MHz,CDCl3):δTMS=1.03(3H,t,J=7.5Hz),1.46(9H,s),1.8-2.0(2H,m),2.08(1H,dd,J=12.5Hz,6.5Hz),2.10(1H,dd,J=12.5Hz,6Hz),3.40(2H,q,J=6.5Hz),4.18(2H,t,J=6Hz),4.82(1H,brs),5.24(2H,s),5.29(1H,d,J=16Hz),5.73(1H,d,J=16Hz),7.12(1H,d,J=3Hz),7.43(1H,dd,J=9Hz,3Hz),7.61(1H,s),8.09(1H,d,J=9Hz),8.20(1H,d,J=9Hz)(3)10-(3’-氨基丙氧基)-(20S)-喜树碱盐酸盐的制备10-[3’-(t-丁氧羰基氨基)丙氧基]-(20S)-喜树碱(352mg)溶于干燥的二噁烷-乙醇(7ml-1ml)中,在搅拌和冰冷却下,向混合物中加入19%的二噁烷盐酸(5ml)。反应混合物在室温下搅拌并向其中加入异丙醚(10ml)。过滤收集沉淀粉末并洗涤得黄色粉末状标题化合物(339mg)。
M.p.214-218℃(分解)
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3470,3280,1745
质谱:m/z=422([M-Cl]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.89(3H,t,J=7.5Hz),1.80-1.95(2H,m),2.10-2.22(2H,m),2.96-3.10(2H,m),4.27(2H,t,J=6Hz),5.25(2H,s),5.42(2H,s),7.29(1H,s),7.49-7.55(2H,m),8.08(1H,d,J=10Hz),8.19(3H,brs),8.54(1H,s)
实施例5
10-(3’-(甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰氨基)丙氧基]-(20S)-喜树碱盐酸盐:
(1)10-[3’-(t-丁氧羰基-甘氨酰基)-甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰氨基]丙氧基]-(20S)-喜树碱的制备
10-(3’氨基丙氧基)-(20S)-喜树碱盐酸盐(325mg)溶于干燥的二甲基甲酰胺(10ml),在搅拌及冰冷却下向其中加入N-羟基琥珀酰亚胺(4当量),二异丙基乙胺(2当量),N-t-丁氧羰基-甘氨酰基-甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酸(2当量)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚酰胺盐酸盐(4当量)。反应混合物在室温下搅拌过夜,并在减压下浓缩以除去溶剂。残渣用硅胶柱层析精制定量地得黄色粉末状标题化合物(597mg)。
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3280,1750,1660
质谱:m/z=840([M+H]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.88(3H,t,J=7Hz),1.36(9H,s),1.8-2.04(4H,m),2.72-2.84(1H,m),3.00-3.12(1H,m),3.24-3.36(2H,m),3.50-3.80(6H,m),4.18(2H,t,J=6Hz),4.44-4.54(1H,m),5.24(2H,s),5.42(2H,s),6.50(1H,s),6.99(1H,t,J=6Hz),7.12-7.27(5H,m),7.28(1H,s),7.48-7.55(1H,m),7.50(1H,s),7.88-7.96(1H,m),8.07(1H,d,J=9Hz),8.12-8.36(2H,m),8.51(1H,s)
(2)10-[3’-(甘氨酰基-甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-甘氨酰氨基)丙氧基]-(20S)-喜树碱盐酸盐的制备
10-[3’-(t-丁氧羰基-甘氨酰基-甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-甘氨酰氨基)-丙氧基]-(20S)-喜树碱(580mg)以与实施例4-(3)相同的方式处理得黄色粉末状标题化合物(438mg)。
收率:82%
M.p.194-199℃(分解)
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3190,1745,1650
质谱:m/z=740([M-Cl]+)
NMR(300MHz,d
6-DMSO):δTMS=0.88(3H,t,J=7Hz),1.80-2.03(4H,m),2.79(1H,dd,J=14Hz,10Hz),3.05(1H,dd,J=14Hz,5Hz),3.2-3.5(2H,m),3.52-3.62(2H,m),3.62-3.83(4H,m),4.19(2H,t,J=6Hz),4.48-4.58(1H,m),5.25(2H,s),5.42(2H,s),6.5(1H,brs),7.13-7.26(5H,m),7.28(1H,s),7.49-7.55(1H,m),7.50(1H,s,J=9.5Hz),7.93(1H,t,J=6Hz),8.0-8.14(4H,m),8.32-8.41(2H,m),8.51(1H,s),8.56(1H,t,J=5.5Hz)实施例6下式的喜树碱衍生物的制备:
CM-Dextran钠盐(CM-度:0.5)(513mg)溶于水(50ml)中,在搅拌下向其中加入10-[3’-(甘氨酰基-甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-甘氨酰氨基)丙氧基]-(20S)-喜树碱盐酸盐(77加g)和1-(3-二甲氯基丙基)-3-乙基碳二亚酰胺盐酸盐(1.54g),在加入过程中温度保持在10℃以下。反应混合物在10℃以下搅拌两小时,在此过程中混合物的pH用0.2N盐酸维持在6.0-6.5。反应混合物用离子交换柱层析(AGMP-50,Na型,30ml,Bio-Rad,Laboratories,Inc.制造)精制。将含有期望的化合物的组份合并、过滤,并向滤液中加入乙醇。离心收集沉淀,洗涤,减压下干燥得浅黄色粉末状复合物(492mg)。基于380nm吸收度计算的10-(3’-氨基丙氧基)-(20S)-喜树碱盐酸盐在期望的喜树碱衍生物中的含量为2.8%。用凝胶渗透色谱(GPC)分析法测得期望的喜树碱衍生物的平均分子量为179,000,分布度(Mw/Mn)为1.42。
GPC分析的条件:G4000SWXL(Toso Ltd.制造),0.2M磷酸盐缓冲液(pH7.0)。
实施例7
(1)(9S)-1-(t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基-甘氨酰氨基)-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃[3’,4’:6,7]并二氢吲哚[1,2-b]并喹啉-10,13[9H,15H]-二酮的制备
标题化合物(247mg)以与实施例1-(8)相同的方式,以浅黄色无定形固体从(9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H,12H苯并[de]吡喃[3’,4’:6,7]并二氢吲哚[1,2-b]并喹啉-10,13[9H,15H]-二酮盐酸盐(166mg)和t-丁氧羰基甘氨酰甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酸(2当量)得到。
收率:82%
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3290,1710,1655
质谱:m/z=854([M+H]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.87(3H,t,J=7Hz),1.37(9H,s),1.8-1.95(2H,m),2.05-2.3(1H,m),2.42(3H,s),2.5-2.85(2H,m),2.9-3.1(1H,m),3.15-3.4(2H,m),3.5-3.8(6H,m),4.4-4.55(1H,m),5.26(2H,s),5.42(2H,s),5.55-5.65(1H,m),6.53(1H,s),6.99(1H,t,J=5Hz),7.1-7.3(5H,m),7.32(1H,s),7.81(1H,d,J=11Hz),7.8-7.95(1H,m),8.1-8.2(1H,m),8.3-8.4(1H,m),8.4-8.5(1H,m)
(2)(9S)-1-(甘氨酰基-甘氨酰基-L-苯丙氨酰基甘氨酰氨基)-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃[3’,4’:6,7)二氢吲哚[1,2-b]并喹啉-10,13[9H,15H]-二酮的制备
标题化合物(193mg)以与实施例1-(9)相同的方式从上项(1)的化合物(220mg)得到,为黄色粉末。
M.p.>165℃(分解)
IR(石蜡糊):Vmax cm-1=3350,1745,1660,1615
质谱:m/z=754([M-Cl+H]+)
NMR(300MHz,d6-DMSO):δTMS=0.87(3H,t,J=7Hz),1.80-1.94(2H,m),2.08-2.27(2H,m),2.41(3H,s),2.77(1H,dd,J=13Hz,9Hz),3.01(1H,dd,J=13Hz,5Hz),3.15-3.28(2H,m),3.5-3.91(6H,m),4.45-4.56(1H,m),5.25(2H,s),5.41(1H,d,J=13Hz),5.42(1H,d,J=13Hz),5.57(1H,m),7.12-7.30(5H,m),7.32(1H,s),7.80(1H,d,J=11Hz),8.0-8.2(3H,br),8.32(1H,d,J=7Hz),8.43(1H,t,J=5.5Hz),8.50-8.62(2H,m)
(3)喜树碱衍生物的制备
CM-Dextran钠盐(CM-度:0.65)(2,000mg)和上项(2)得到的化合物(170mg)用与实施例3-(3)相同的方式处理得期望的喜树碱衍生物(1803mg),为浅黄色粉末。基于376nm吸收度计算的(9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃[3’,4’:6,7]并二氢吲哚[1,2-b]并喹啉-10,13[9H,15H]-二酮盐酸盐在期望的喜树碱中的含量为3.0%。用凝胶渗透色谱(GPC)分析测得期望的喜树碱衍生物的平均分子量为187,000,分布度(Mw/Mn)为1.54。
GPC分析的条件:G4000SWXL(Toso Ltd.制造),0.2M磷酸盐缓冲液(pH7.0)。
实施例8-24
表1所列的喜树碱衍生物系以与实施例1-6相同的方式得到的表1
实施例号
|
R
|
实施例号
|
R
|
8
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-
|
16
|
CM.Pullulan.Na-L-Phe-
|
9
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-
|
17
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-
|
10
|
CM.Dextran.Na-L-Leu-Gly-
|
18
|
CM.Pullulan.Na-L-Leu-Gly-
|
11
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-Gly-
|
19
|
CM.Pullulan.Na-L-Phe-Gly-
|
12
|
CM.Dextran.Na-L-Tyr-Gly-
|
20
|
CM.Pullulan.Na-L-Tyr-Gly-
|
|
21
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-L-Phe-Gly-
|
13
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-
|
22
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-
|
14
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
23
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
15
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
24
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
[CM-Pullulan·Na:羧基甲基支链淀粉钠盐][CM-Dextran·Na:羧基甲基葡聚糖钠盐]
实施例25-41表2所列喜树碱衍生物系以与实施例1-6相同的方式得到的。表2
实施例号
|
R
|
实施例号
|
R
|
25
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-
|
33
|
CM.Pullulan.Na-L.Phe-
|
26
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-
|
34
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-
|
27
|
CM.Dextran.Na-L.Leu-Gly-
|
35
|
CM.Pullulan.Na-L.Leu-Gly-
|
28
|
CM.Dextran.Na-L.Phe-Gly-
|
36
|
CM.Pullulan.Na-L.Phe-Gly-
|
29
|
CM.Dextran.Na-L.Tyr-Gly-
|
37
|
CM.Pullulan.Na-L.Tyr-Gly-
|
|
38
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-L.Phe-Gly-
|
30
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-
|
39
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-
|
31
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
40
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
32
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
41
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
实施例42-59表3所列喜树碱衍生物系以与实施例1-6相同的方式得到的。表3
实施例号
|
R
|
实施例号
|
R
|
42
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-
|
51
|
CM.Pullulan.Na-L-Phe-
|
43
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-
|
52
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-
|
44
|
CM.Dextran.Na-L-Leu-Gly-
|
53
|
CM.Pullulan.Na-L-Leu-Gly-
|
45
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-Gly-
|
54
|
CM.Pullulan.Na-L-Phe-Gly-
|
46
|
CM.Dextran.Na-L-Tyr-Gly-
|
55
|
CM.Pullulan.Na-L-Tyr-Gly-
|
47
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-L-Phe-Gly-
|
56
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-L-Phe-Gly-
|
48
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-
|
57
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-
|
49
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
58
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
50
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
59
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
实施例60-76表4所列喜树碱衍生物系以与实施例1-6相同的方式得到的。表4
实施例号
|
R
|
实施例号
|
R
|
60
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-
|
68
|
CM.Pullulan.Na-L-Phe-
|
61
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-
|
69
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-
|
62
|
CM.Dextran.Na-L-Leu-Gly-
|
70
|
CM.Pullulan.Na-L-Leu-Gly-
|
63
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-Gly-
|
71
|
CM.Pullulan.Na-L-Phe-Gly-
|
64
|
CM.Dextran.Na-L-Tyr-Gly-
|
72
|
CM.Pullulan.Na-L-Tyr-Gly-
|
|
73
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-L-Phe-Gly-
|
65
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-
|
74
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-
|
66
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
75
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
67
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
76
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
实施例77-93表5所列喜树碱衍生物系以与实施例1-6相同的方式得到的。表5
实施例号
|
R
|
实施例号
|
R
|
77
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-
|
85
|
CM.Pullulan.Na-L-Phe-
|
78
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-
|
86
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-
|
79
|
CM.Dextran.Na-L-Leu-Gly-
|
87
|
CM.Pullulan.Na-L-Leu-Gly-
|
80
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-Gly-
|
88
|
CM.Pullulan.Na-L-Phe-Gly
|
81
|
CM.Dextran.Na-L-Tyr-Gly-
|
89
|
CM.Pullulan.Na-L-Tyr-Gly-
|
|
90
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-L-Phe-Gly-
|
82
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-
|
91
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-
|
83
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
92
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
84
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
93
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
实施例94-110表6所列喜树碱衍生物系以与实施例1-6相同的方式得到的。表6
实施例号
|
R
|
实施例号
|
R
|
94
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-
|
102
|
CM.Pullulan.Na-L-Phe-
|
95
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-
|
103
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-
|
96
|
CM.Dextran.Na-L-Leu-Gly-
|
104
|
CM.Pullulan.Na-L-Leu-Gly-
|
97
|
CM.Dextran.Na-L-Phe-Gly-
|
105
|
CM.Pullulan.Na-L-Phe-Gly
|
98
|
CM.Dextran.Na-L-Tyr-Gly-
|
106
|
CM.Pullulan.Na-L-Tyr-Gly-
|
|
107
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-L-Phe-Gly-
|
99
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-
|
108
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-
|
100
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
109
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
101
|
CM.Dextran.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
110
|
CM.Pullulan.Na-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-
|
参考例1
(1)葡聚糖(葡聚糖T-110,平均分子量:100,000(用GPC分析),Pharmacia Biotech AB制造)(29g)溶于水(290ml)中。在0-5℃向此溶液中加入硼氢化钠(1.45g),混合物在5℃搅拌过夜。用醋酸将反应混合物的pH调节至5,混合物在室温进一步搅拌3小时。用2N氢氧化钠水溶液调节混合物的pH至7,并在激烈搅拌下向其中加入乙醇(1.2L)。混合物放置,同时不溶性物质沉淀。混合物上清液倾出,剩余物离心。残渣溶于水(0.5L)并将混合物冷冻干燥得白色粉末(26.3g)。
(2)如此得到的白色粉末(50g)溶于水(500ml)中,在冰冷却下向其中加入氢氧化钠(200g)。混合物搅拌30分钟并温热至室温。向此混合物中滴加一氯乙酸(110g)的水(150ml)溶液,混合物在40℃搅拌18小时。反应混合物冷却至10℃以下,并用醋酸调节混合物的pH至8-9。激烈搅拌下向反应混合物中加入甲醇(8L),同时使不溶物沉淀。过滤收集不溶物,并溶于纯水(5L)。溶液用超过滤法除盐,剩余溶液在减压下浓缩、过滤。向滤液中加入乙醇,过滤以收集沉淀物。以醇水溶液和丙酮洗涤,并在减压下室温干燥,然后在50℃减压干燥得羧基甲基葡聚糖(CM-Dextran)钠盐(中和滴定法测得羧基甲基化度:0.5)(50.2g)。
参考例2
具有羧基甲基化度为0.65的CM-Dextran钠盐除改变一氯醋酸的量外余皆以与参考例1相同的方式得到。