CN1297329A - 溶血磷脂酰乙醇胺(18:1)与溶血磷脂酰肌醇对于延缓衰老和促进果实成熟的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种促进果实成熟和提高果实稳定性并延缓果实和其他植物组织衰老的方法。该方法包括给果实和其他植物组织施用有效量的溶血磷脂,比如溶血磷脂酰乙醇胺(18∶1)(以下称为LPE(18∶1))或溶血磷脂酰肌醇(以下称为LPI)。我们发现溶血磷脂,比如LPE(18∶1)和LPI,在延缓衰老和抑制磷脂酶D方面优于其他溶血磷脂,磷脂酶D是一种介导植物衰老过程中膜退化的关键酶。LPE(18∶1)和LPI是天然物质,对环境安全。使用它们可以代替目前用于延迟花、果实和叶子衰老以及促进果实成熟的许多对环境有毒性的化合物。

Description

溶血磷脂酰乙醇胺(18∶1)与溶血磷脂酰肌醇对于延缓 衰老和促进果实成熟的用途
背景技术
目前有多种化学和生物试剂被用于具有商业价值的果实上以控制果实成熟的时间。所述试剂可用于许多目的。一个目的是使果实成熟同步进行以便有助于从果园中有效地采集果实。另一个目的是防止果实落地以便直到适宜的成熟期时,果实都保持在枝头。果实促熟剂的另一目的是提高果实的色泽发育以便果实具有水果零售商所希望的更好和更均匀的色泽。在美国,许多类型的果实都要在栽培过程中用一种或多种所述试剂进行处理,这是一种普遍的作法。
以前用于控制果实成熟的一些试剂是对所关注的果实有预期效果的纯合成试剂。不幸的是,由于潜在的毒性和致癌性,部分所述合成果实促熟剂或被禁用,或因市场或消费者对产品的抵制而使所述化合物的使用剧减。目前促进果实成熟最常用的试剂是乙烯利,这是一种合成的化合物,以Ethrel这一名称销售,这是Rhone-Poulenc Ag.Co.(Research Triangle Park,NC)的商标。尽管这种试剂能刺激成熟,但是也引起了果实的软化。因此,用乙烯利处理的果实的存放期很短。这样,就迫切需要一种对环境安全且不引起果实软化的促熟剂。另外,消费者愿意为在藤成熟果实(vine ripened fruit)付额外的费用。但是,在藤成熟果实因其软化问题而不能被长途运输,而且存放期很短。因此,能提高在藤成熟果实的存放期将是有利的。
种植业(特别是新鲜蔬菜和切花种植业)对于发现一种对环境安全的能延缓衰老和提高存放或插瓶期的产品是非常有兴趣的。目前,是用某些对环境有毒性的化合物比如硫酸银来提高切花的插瓶期。但是,由于对环境方面的顾虑,硫酸银的使用正在减少。因此,希望能开发一种硫酸银的替代品,以便更乐于为商家和消费者接受。
溶血磷酯酰乙醇胺(以下称为“LPE”)包含一族在控制果实成熟、增强果实在储存期的稳定性以及提高被存果实存放期方面很有前景的化合物。美国专利5126155和5100341(此处引作参考文献)中公开了用纯化自鸡蛋的LPE(以下称为“LPEegg”)来促进果实成熟和提高稳定性的方法。LPE来源于通常发现于细胞膜的脂类-磷酯酰乙醇胺。磷酯酰乙醇胺是一种带有两个脂肪酸部分的磷脂,其在蛋黄中含量丰富。用磷脂酶A2去掉磷酯酰乙醇胺的一个脂肪酸产生LPE。
LPE还天然存在于植物和动物组织中,特别是富含于蛋黄和脑组织中。可从Avanti Polar Lipids,Inc.(Alabaster,Alabama)购买LPE。纯化白天然来源的LPE中可见到许多不同的脂肪酸。这些脂肪酸可以是链长和不饱和度各异的。但是,没有研究过各种LPE和不同种类的溶血磷脂在控制果实成熟和提高其稳定性方面的相对效率。
发明概述
本发明涉及一种延缓果实或植物组织衰老的方法。该方法包括在收获之前或之后,给果实或其他植物组织施用含有溶血磷脂和活化剂的组合物。所述组合物含有一定量的溶血磷脂,能有效延缓果实或植物组织的衰老。优选的包含在组合物中的溶血磷脂是溶血磷脂酰肌醇和/或溶血磷酯酰乙醇胺(18∶1)。除了溶血磷脂,所述组合物还可以含有一种活化剂,比如乙醇、润湿剂或者sylgard 309。
另外,本发明还涉及一种促进果实成熟和提高稳定性的方法。该方法包括在收获前,给整株植物施用含有溶血磷脂和活化剂的组合物。所述组合物含有能有效促进果实成熟和提高稳定性的一定量的溶血磷脂。优选的包含在组合物中的溶血磷脂是溶血磷脂酰肌醇和/或溶血磷酯酰乙醇胺(18∶1)。除了溶血磷脂,所述组合物还可以含有一种活化剂,比如乙醇、润湿剂或者sylgard 309。
附图简述
图1的曲线图显示各种浓度的带有不同酰基链的LPE对部分纯化的甘蓝PLD活性的抑制作用。
图2的曲线图显示LPE(18∶1)对部分纯化的甘蓝PLD活性的抑制作用的结构特异性。
图3的示意图显示部分纯化的甘蓝PLD活性的抑制是LPE浓度的函数。
图4的示意图显示底物浓度对LPE(18∶1)抑制部分纯化的甘蓝PLD活性的影响。
图5的曲线图显示不同溶血磷脂对部分纯化的甘蓝PLD活性的效果。
图6的曲线图显示用LPA、LPC、LPEegg或LPI处理的叶子中的叶绿素含量。
发明详述
本发明涉及一种用溶血磷脂来促进果实和其他植物组织的成熟和提高稳定性并能延缓衰老的方法,所述溶血磷脂包括,但不限于,LPE(18∶1)和/或溶血磷脂酰肌醇(以下称为LPI)。本文中,术语“溶血磷脂”是指磷脂的一个脂肪酸链被磷脂酶A2去掉了的衍生物。本文中,术语“植物组织”是指来自活体植物的任何部分或器官。实例包括果实、花、根、茎、胚轴、叶子、叶柄、花瓣等。
本发明所述方法包括在收获之前或之后用含有具以下通式之溶血磷脂的组合物处理果实和其他植物组织:
Figure 9881202100061
其中R1选自C5-C22酰氧基和C5-C22烷氧基;R2选自氢、羟基、C1-C5酰氧基和C1-C5烷氧基;R3选自氢、胆碱、乙醇胺、丙三醇、肌醇和丝氨酸,其中R1和R2可互换。具有以上通式(Ⅰ)的优选化合物是LPE(18∶1)和LPI。
优选地,所述组合物含有溶血磷脂的可接受载体,比如水。但是,也可以使用其他载体,比如有机溶剂。该组合物含有能有效地促进果实和其他植物组织的成熟和提高稳定性并能延缓衰老的一定量的溶血磷脂。更具体地说,组合物中的溶血磷脂的量在大约0.5到1000mg/l组合物之间,优选大约1到500mg/l组合物,更优选大约5到250mg/l组合物,最优选的是大约5到100mg/l组合物。组合物可以以喷雾或单纯的液体形式给果实或植物组织施用。
除了溶血磷脂,所述组合物还含有一或多种活化化合物。在本文中,术语“活化化合物”是指能增强吸湿性和活性成分(即溶血磷脂)效力的试剂。可用于本发明所述方法的活化化合物的实例包括乙醇、润湿剂和sylgard 309(Dow Corning Co.,Midland,MT有售)。活化化合物在组合物中的量为大约0.05到2.0%(v/v)。
优选的溶血磷脂,LPE(18∶1)是一种具有含一个双键的18碳脂肪酸的LPE。已发现LPE(18∶1)在促进果实成熟和延缓果实和植物组织衰老方面优于其他种类的LPE。还发现LPI可与LPE(18∶1)媲美,在促进果实成熟和延缓果实和植物组织衰老方面优于LPE(18∶1)以外的其它LPE。
按照美国专利5126155和5110341中公开的,LPE能有效加强果实成熟和稳定性。目前对于达到这些效果的确切机制只有部分了解。据在美国专利5126155和5110341中的公开,观察到LPE刺激乙烯产生并抑制果实呼吸。据推测,这些效果可能是LPE处理的果实成熟和稳定性提高的原因。发现经LPE处理的果实和植物组织衰老延缓与通过膜渗漏的电解质减少有关(5)。因此,本发明人猜测LPE可能调控植物衰老和老化中的膜退化的关键过程。
植物衰老过程中电解质渗漏增加已被归因于膜磷脂的分解(1,2)。LPE处理的叶子、花和收获后的果实中电解质渗漏减少表明LPE可能通过抑制膜脂类的降解而保护膜的完整性(3)。基于体内和体外各种脂解产物的释放动力学,认为磷脂酶D(以下称为PLD)介导了膜磷脂的选择性降解,该过程是衰老组织中所发生的一个快速和早期事件(4-9)。在衰老叶组织中观察到PLD表达增加,并且PLD表达的特点表现为一个复杂的模式,该模式包括膜关联PLD增加、PLD变体差异表达以及PLD蛋白质和mRNA的量改变(10)。
正如本文描述的,本发明人证明溶血磷脂LPE能在植物中以一种高度特异的方式抑制部分纯化的PLD的活性。正如以下实施例所表明的,溶血磷脂LPE(18∶1)和LPI是特别强的PLD抑制剂。另外,用LPE(18∶1)或LPI处理植物与乙烯产量减少有关。已经发现LPI对延缓叶子衰老尤其有效,用LPI处理的老化叶子中的叶绿素含量高于对照和用LPE或LPC处理的叶子中的叶绿素含量可以证明这一点。因此,溶血磷脂,比如(但不限于),LPE(18∶1)和LPI,是特别有吸引力的能延缓果实和植物组织衰老的试剂。本发明人还证明LPE(18∶1)和LPI对加强果实成熟和稳定性尤其有效。
通过举例而非限定的方式,现在给出本发明的实施例。实施例1:LPE(18∶1)和LPI对PLD的特异性抑制实施例1a:化学品和植物材料
从Avanti Polar Lipids(Alabaster,Alabama)购得纯化自蛋黄、牛肝和大豆的天然溶血磷脂以及带有不同酰基链的合成LPE(14∶0、16∶0、18∶0、18∶1)。所使用的其余磷脂化学品和材料购自Sigma(St.Louis,MO)。将磷脂和脂肪酸溶于氯仿∶甲醇∶KOH(1N)(95∶5∶1,v/v)。加入水后,通过流动氮气除去有机溶剂。在加入到PLD反应体系前,用水将储液浓度调至1mM。通过超声处理悬浮在水中(而不使用有机溶剂)的LPE粉末来大批量制备用于处理果实和植物组织的LPE溶液。
将部分纯化的甘蓝PLD(该物质通常用于研究PLD的生化和生理特点(11,12))溶于50mM Tris(pH8.0)中,并将所得溶液加入反应体系至终浓度0.6μg/ml以便检测LPE对PLD活性的影响。
除了部分纯化的甘蓝PLD,本发明人还考察了LPE对膜关联PLD和可溶性PLD活性的影响,膜关联PLD和可溶性PLD得自两种植物来源,即甘蓝(Brassica oleracea L.Blue Vintage)和蓖麻(Ricinus communisL.cv.Hale)。将蓖麻植物于22℃在含有蛭石和parlayed(1∶1,v/v)的混合物的塑料花盆中,用Hoagland营养液潜灌并在冷-白荧光(150μmolmin-1 m-2)下生长,光照期为14小时(10)。甘蓝购自自由市场。
实施例1b:组织分选
收获两月龄蓖麻植株和甘蓝的完全伸展叶子,在液氮中快速冷冻,并用在冰上冷却的研钵和碾槌匀浆(13)。向粉末样品中加入含有50mM Tris-HCL(pH8.0)、10mM KCl、1mM EDTA、0.5mM PMSF和2mM DTT的提取缓冲液。再研磨5分钟后,将匀浆物在6000g离心10分钟以除去残渣。上清液于100000g离心30分钟以便将提取液分离为可溶性PLD和膜关联的PLD。收集所得上清液作为可溶组份,收集沉淀作为膜组份。用提取缓冲液将膜组份洗1次以除去可溶性杂质。将可溶性PLD和膜关联PLD样品加入反应体系,至终浓度分别为100μg/ml和10μg/ml。实施例1c:PLD活性检测法
通过测量从底物磷脂酰胆碱(以下称为PC)释放出来的磷脂酰乙醇(以下称为PEOH)和磷脂酸(以下称为PA)中的磷含量来检测部分纯化的甘蓝PLD的活性(13)。为了进行该项检测,将溶于氯仿的20μmol PC(从鸡蛋中得到)在氮气流下干燥。于室温通过超声处理使该脂在1ml水中乳化。标准酶检测体系200μl体积内含有100mMMes/NaOH(pH6.5)、50mM CaCl2、0.5mM SDS、20μl底物(0.4μmolPC)、1%乙醇和20μl PLD(14)。然后将检测体系在30℃水浴中保温30分钟。加入750μl氯仿∶甲醇(1∶2)以终止反应。向体系中加入氯仿(200μl)然后再加200μl KCl(2M)。旋转后,于12000g离心5分钟以区分氯仿和水相。收集氯仿相并干燥。将干燥的样品溶于50μl氯仿,然后点在TLC板(硅胶G)上。使用氯仿∶甲醇∶NH4OH(65∶35∶5)溶剂进行展板。将TLC板暴露于气体碘中使板上的脂类显迹。将与脂类标准PEOH、PA和PC对应的斑点挖到小瓶中,并如Rouser等人描述的通过测量磷来将之定量(15)。用PECH,即转磷脂酰反应的产物,作为PLD活性的指示物,而不用PA(水解反应产物),因为前者不容易被代谢。
通过对由底物PC释放的放射性标记的PEOH和PA进行定量来确定与得自甘蓝和蓖麻组织的膜和可溶组份相关的PLD活性(10)。为了这一目的,将0.4μCi L-3-磷脂酰胆碱、1,2-二[1-C14]棕榈酰(Amersham(Arlington Heights,IL))与20μmol来自鸡蛋的PC在氯仿中混合。检测条件和反应产物的分离与以上描述相同。用闪烁分光仪对从TLC挖下的PEOH、PA和PC的放射性进行定量。实施例1d:LPE处理和果实中乙烯的产生
先前发现用LPEegg(纯化自鸡蛋,主要含有LPE16∶0和LPE18∶0)对果实组织进行收获后处理能延迟果实的衰老和延长存放期(3,16)。但是,没有研究LPE中不同酰基链对果实衰老的影响。在本研究中,除了LPE的不同酰基链对PLD活性的影响,本发明人补充研究了LPE不同酰基链对蔓越桔果实中乙烯产生的影响。在秋季收获完全成熟的蔓越桔果实(Vaccinium macrocarpon Ait.“Stevens”)并保存在冷室中。将随机挑选的收获后蔓越桔果实(每个样品包括15个果实)在带有不同酰基链的LPE溶液(100μM)中浸30分钟,然后风干并置室温(26±2℃)。两天后,将蔓越桔在密封玻璃广口瓶中保温24小时以便测量乙烯产量。用配备有火焰离子检测器(Shimadzu 9AM,ShimadzuCorporation,Kyoto,Japan)的气相层析对乙烯进行定量(3)。实施例1e:溶血磷脂对叶子叶绿素含量的影响
为了评价各种溶血磷脂在延迟叶子衰老方面的相对效率,给叶子施加含有溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、LPE、LPI或水的处理液。8天衰老期之后,通过标准方法(10)测量每份样品的叶绿素含量。将相对叶绿素含量表示为对照的百分比(%对照)。
实施例1f:结果和讨论
带有不同酰基链的LPE对PLD活性的抑制
本发明人研究了LPE这种天然磷脂是否是通过以特异方式体外抑制PLD活性来作为生物活性脂类介质。用PC作为底物来检测LPE对部分纯化的甘蓝PLD的抑制作用。PLD活性被带有不同酰基链的浓度为40到200μM的LPE所抑制(图1)。抑制程度随酰基链的长度和不饱和度的增加而升高。具有18∶1酰基链的LPE是在所有受测试种类中最有效的抑制剂,在LPE浓度为40和200μM时,最终的PLD活性是对照的16%和11%。相反,LPE14∶0这种植物组织中少见的物质,其效果很小。带有其他酰基链的LPE的效果也有必要检测,但这些形式的LPE目前没有商品销售。较之其他受测试的LPE分子,LPE(18∶1)对PLD的显著抑制作用提示该抑制作用需要有特殊的LPE构型。
抑制PLD的LPE(18∶1)之结构特异性
测试LPE分子的不同成分对PLD活性的影响从而确定LPE抑制作用是否需要某些结构特异性。其头部(乙醇胺)和酰基链(18∶1脂肪酸)本身对PLD活性没有抑制作用(图2)。这些结果表明只有完整的LPE分子能抑制PLD,并且失去任何结构成分都将导致LPE完全失活;这表明了其结构特异性。事实上,磷脂酰乙醇胺(PE)对PLD活性有某些激活效果。在有200μM PE的情况下,PLD的活性是对照活性的126%(图2)。因为PE自身是PLD的一个优选底物(17),PLD活性升高可能是由于PE直接刺激PLD和/或PLD优先水解PE的结果。
LPE(18∶1)抑制PLD的剂量依赖性和动力学
LPE抑制PLD是剂量依赖性的(图3)。LPE(18∶1)在10μM浓度时显示出显著的抑制效果,导致PLD的活性为对照的50%,并随着浓度增至200μM,抑制作用逐渐增强。LPE浓度为10和200μM分别对应反应体系中的总磷脂为0.5和10mol百分比。
为了确定PLD抑制作用的特点,在有和没有LPE的情况下分析底物浓度对PLD抑制作用的影响(图4)。正常的检测条件使用底物的饱和浓度(2mM PC)。甚至在4mM的底物浓度时,LPE(18∶1)仍能维持其抑制效果(图4)。PLD的表观Km是1.7mM,并且不因LPE的存在而改变。但是,LPE(18∶1)的存在会导致相对对照(Vmax为20.0μmol min-1 mg-1蛋白质)来说,Vmax(2.9μmol min-1 mg-1蛋白质)显著下降。这些结果暗示LPE对PLD的抑制是非竞争性抑制作用。
LPE(18∶1)原位抑制PLD
由于PLD不仅以可溶形式存在于细胞溶质中,还以膜关联形式存在,本发明人测定了LPE对提取自甘蓝和蓖麻叶子的膜关联PLD的原位抑制作用。在有LPE(18∶1)的情况下,膜关联的和可溶性甘蓝PLD的特异活性分别降为对照的59%和51%(表1)。膜关联的和可溶性蓖麻PLD的活性也分别降为对照的31%和30%。这些结果表明膜关联的和可溶性PLD的活性均被LPE所抑制。但是,PLE对与膜组份和可溶性组份相关的PLD的抑制作用没有对部分纯化的甘蓝PLD的抑制明显(图1和表1)。这可能是由于存在某些干扰因素或者有对LPE的敏感性较低的其他形式的PLD存在的缘故。因此,PLD的部分纯化在确定PLD调控机制的特点方面很关键(18)。由于这个原因,在本研究中,发明人使用了部分纯化的甘蓝PLD,它是可商购的。但是,所观察到的LPE对提取自叶组织的与膜关联的和可溶性PLD的抑制作用支持了使用部分纯化的PLD得到的结果。
表1.LPE(18∶1)对可溶性和膜关联PLD的活性(nmol min-1 mg-1蛋白质)的抑制。数据是两份从甘蓝和蓖麻制备到的提取物(每份提取物的重复实验)的均值±SE。
带有不同酰基链的LPE对果实乙烯产量的抑制
以前,已经发现LPEegg(从蛋黄中提取)能延缓果实衰老,与对照相比,乙烯产生速率下降即表明了这一点(3)。因为本发明人发现LPE对PLD的抑制作用取决于LPE酰基链的长度和不饱和度(图1),因此检测了带有不同酰基链的LPE对果实衰老的影响。用链长为14∶0、16∶0、18∶0和18∶1的LPE处理蔓越桔果实,并监测这些果实的乙烯产量。乙烯产生的抑制随LPE酰基链的长度和不饱和度而增强(表2)。LPE(18∶1)造成了处理2天后乙烯产量最剧烈的减少(40%)。有趣的是,各种类型的LPE对乙烯产生的抑制方式类似于各种类型的LPE对PLD的抑制方式(图1)。这些结果表明PLD活性和乙烯产生的被抑制均取决于LPE酰基链的长度和不饱和度。这些结果暗示LPE(18∶1)在抑制PLD和延迟果实衰老方面优于其他LPE种类。
表2.带有不同酰基链的LPE(100μM)对蔓越桔果实中乙烯产生的抑制。数值是三次重复实验的均值±SE。
Figure 9881202100141
溶血磷脂对PLD的结构选择性调节
为了弄清多种溶血磷脂是否都能对PLD产生抑制作用,将LPE对PLD的抑制效果与存在于植物细胞的相关溶血磷脂对PLD的抑制效果进行比较(图5)。溶血磷脂酰胆碱(以下称为LPC)、溶血磷脂酰甘油(以下称为LPG)和溶血磷脂酰丝氨酸(以下称为LPS)并不显著影响PLD的活性。但是,LPI显示出略微类似于LPE的抑制作用。而溶血磷脂酸(以下称为LPA)使PLD活性显著增高(图5)。例如,在LPI和LPA浓度为200μM时,PLD的活性分别是对照的31%和169%。图5中唯一的合成溶血磷脂是LPA。所有其他溶血磷脂均来自于主要含有16∶0或18∶0脂肪酸的天然来源。除了LPA(16∶0)(图5),本发明人还检测了LPA(18∶1)并发现两类LPA得到的结果类似。在本项研究中,LPE而非LPC对PLD有强烈的抑制效果(图5)。这些结果表明各个溶血磷脂对PLD酶的调节作用非常特异并且是结构选择性的。
该结果暗示,在LPE之外,LPI也可能是植物中延缓衰老的一种脂类介质。
LPI延迟叶子衰老
用LPI处理的正在老化的叶子中的叶绿素含量比用LPA、LPC或LPEegg处理的叶子中的高得多(图6)。这个结果表明LPI在延迟叶子衰老方面尤其有效。
总结实施例1,就发明人所知,该研究首次显示了LPE(18∶1)和LPI对PLD的特异性抑制调节,两者直接以PLD酶活性为调节目标。这是一个重要的发现,因为在植物和动物中还没有已知的PLD的特异性抑制剂(19)。研究还显示用LPE(18∶1)处理果实植物比用酰基链更短或饱和度更高的其他LPE种类使乙烯产量下降得更多。因为乙烯和PLD均与植物的衰老有关,有理由认为LPE(18∶1)和LPI在延迟果实和植物组织衰老方面比其他种类的LPE更有效。实施例2:延缓花的衰老和延长其存放期
由种植商采摘并隔天递送金鱼草(Antirrhinum majus L.cv.Potomac White)的穗状花序(20)。收到即将花序的杆末端再在蒸馏水中切下,令其重新水化2小时。重新水化后,将花序剪成40cm长,去除花序18cm以下的叶子。这可以防止叶子在花瓶中成为细菌和真菌污染的来源。然后汇合所有花序,随机挑选进行处理。在蒸馏水中制备LPE(18∶1)、LPI和LPEegg。使用超声处理来协助LPE和其他溶血磷脂在水中的溶解。
为了进行LPE处理,将切下的花序末端在不同浓度的LPE溶液中放24小时。此后,将它们转移到蒸馏水中,并在水中保持3周。观察花序花芽的张开,以及衰老的表征(枯萎和褐变)。如果花颈变枯萎,就认为花再不能出售了。如果它能保持饱满(不枯萎)而且50%以上的小花保持健康,就认为该花序还可出售。在本研究最后,通过测量鲜重相对干重的比率,确定花序叶子的水份含量,作为紧涨度和叶子健康情况的指示。
正如以下表3所示,较之对照,LPEegg(纯化自鸡蛋的LPE)处理能延缓衰老;处理7天后,前一种情况中37-52%的花序枯萎,而对照组中有76%枯萎。LPE(18∶1)和LPI处理对延长金鱼草花朵的插瓶期尤其有效;在这两个处理中分别只有30-39%和15-22%的花序枯萎。LPE(18∶1)和LPI不仅延长了花朵的插瓶期,还提高了花朵对这些脂类的敏感性。例如,5mg/L LPI和LPE(18∶1)使插瓶期的延长多于25mg/LLPEegg,表明LPI和LPE(18∶1)是溶血磷脂中延缓衰老的更有活性的形式。用LPI和LPE(18∶1)处理的花维持可出售状态达13天,而水处理的花和LPEegg处理的花分别维持可出售状态4天和7天。处理后18天,用LPE(18∶1)处理的和用LPI处理的花序的叶子水分含量比用LPEegg和水处理的花序的叶子水分含量高。该数据与用LPI和LPE(18∶1)处理的花存放期延长是一致的。这支持了LPE(18∶1)和LPI优于LPEegg。
                    表3
Figure 9881202100161
*数据是两次独立实验的均值±SE。每次实验中每种处理使用12个花序。
**插瓶期:>50%花序保持可销售的天数。
用各种脂类按照前面用于金鱼草的方法处理购自种植商的康乃馨(Dianthus caryophyllus L.cv.White Sim)花序。与金鱼草一样,25mg/LLPI和LPE(18∶1)在延长康乃馨的插瓶期方面优于LPEegg和对照(表4)。用LPEsoy(纯化自大豆的LPE)也比LPEegg(纯化自鸡蛋)得到更长的插瓶期。LPEsoy含有64%的不饱和LPE,比如LPE(18∶1)、LPE(18∶2)和LPE(18∶3);和30%的饱和LPE,比如LPE(16∶0)和LPE(18∶0);以及2%的LPI(购自Avanti Polar Lipids,Inc.Alabaster,Alabama)。而LPEegg主要含有(>94%)饱和LPE,比如LPE(16∶0)和LPE(18∶0)。该结果支持了发明人的结论即LPE(18∶1)和LPI在延长花的插瓶期方面优于其他LPE种类。
                    表4
*数据是每种处理36枝花的均值±SE。(9枝花/重复)实施例3:延缓果实衰老
从3月龄的植株收获西红柿(Lycopersicon esculentum cv.H9144)的成熟绿果实。将收获的果实在以下表5所示溶血磷脂溶液中浸20分钟,所述溶血磷脂溶液为溶于1%乙醇、浓度为100mg/L的溶液。将对照西红柿浸在含有1%乙醇的蒸馏水中。浸泡后,将果实于室温存放3周。处理7天后测定乙烯气体的产量。随着果实开始成熟,果实的乙烯产生速率逐渐增加。成熟绿果实在0天时不产生乙烯,处理7天后,未处理的对照果实产生乙烯的速率为1.26nl/g.hr-1(表5),用LPEegg处理的果实显示出乙烯产生与对照类似,而用LPE(18∶1)和LPI处理的果实显示出乙烯产生被抑制,其速率仅是对照的大约一半,在LPEegg处理的果实中,乙烯产生的抑制与果实存放期延长存在相关性。与这一预计一致,保温3周后腐烂果实的百分比也表明LPE(18∶1)和LPI在延长西红柿存放期方面,比LPEegg和对照明显有效。就延长果实存放期而言,LPEsoy比LPEegg更好(在LPEegg处理中腐烂果实为24%,在LPEsoy中为15%)。
                    表5
Figure 9881202100181
*所有溶液在1%(v/v)乙醇中制备
**数据是两次独立实验的均值±SE。每次实验中每种处理使用9个果实实施例4:乙烯利所诱导的叶子衰老的延缓
乙烯利,又称为Ethrel,(Ethrel是Rhone-Poulenc Ag.Co.(ResearchTriangle Park,NC)的商标)是一种含水液体配制品,它分解为乙烯并被广泛用于在一次大收获操作(once-over harvesting)中扩大成熟西红柿果实的产量。本发明表明在保护叶子不发生乙烯利诱导的叶子衰老方面,LPE(18∶1)优于LPEegg和其他溶血磷脂。将西红柿植株cv.H9144在温室中培养2个半月作为叶子样品的来源。用1000mg/L乙烯利喷洒植株或者用下表6所示的乙烯利和溶血磷脂的混合物喷洒。在1%(v/v)乙醇中制备50mg/L溶血磷脂溶液,并与乙烯利(1000mg/L)混合。对照植株单独用溶于1%(v/v)乙醇中的乙烯利喷洒。在处理后10到14天时,通过测量叶绿素和蛋白质含量来量度处理叶子的衰老状况。乙烯利喷洒的叶组织呈现出叶绿素和蛋白质含量剧减,如以下表6所示。LPEegg明显地延缓了乙烯利诱导的衰老。LPE(18∶1)显示出对乙烯利导致的衰老有更好的延缓作用。LPI对乙烯利诱导的叶子衰老略有延缓作用。这些结果证明就该目的而言,LPE(18∶1)比其他形式的LPE作用更好。
                    表6
*所有溶液均在1%(v/v)乙醇中配制。
**数据为三次独立实验的均值±SE。处理后10到14天收集数据。实施例5:促进果实成熟
进行本实验以便比较LPEegg、LPE(18∶1)和LPI对果实成熟的影响。西红柿植株cv.H9478在盆中于荧光下培养2个半月。用含有100mg/L不同脂类(比如LPEegg、LPE(18∶1)或LPI)的溶液喷洒那些有10%果实处于成熟期的整个植株。所有溶液均含有1%乙醇和0.05%sylgard 309(Dow Corning Co.,Midland,MI)作为活化剂。只给对照植株喷洒含有1%乙醇和0.05%sylgard 309的蒸馏水。处理10天后收获果实,分成绿色、部分变红和红色(表明完全成熟)等级。与以前在美国专利5126155和5110341中公开的相同,LPEegg与对照相比能显著促进果实成熟(表7)。但是,发现LPI和LPE(18∶1)比LPEegg更有效。与对照和LPEegg相比,LPI和LPE(18∶1)还能通过延长收获后果实的存放期而提高果实的稳定性(见表7)。
                    表7
*所有溶液在1%(v/v)乙醇和0.05%sylgard 309中制备。收获之前10天施行喷洒。
**数据是3次独立实验的平价值。
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Claims (13)

1.一种延缓果实和其他植物组织衰老的方法,该方法包括给果实和其他植物组织施用一种组合物的步骤,所述组合物含有活化剂和具有以下通式的溶血磷脂:
Figure 9881202100021
其中R1选自C5-C22酰氧基和C5-C22烷氧基;R2选自氢、羟基、C1-C5酰氧基和C1-C5烷氧基;R3选自氢、胆碱、乙醇胺、丙三醇、肌醇和丝氨酸,其中R1和R2可互换。
2.权利要求1的方法,其中所述溶血磷脂是溶血磷脂酰肌醇和/或溶血磷脂酰乙醇胺(18∶1)。
3.权利要求1的方法,其中所述组合物是一种水溶液。
4.权利要求1的方法,其中所述组合物在收获之前或之后施用。
5.权利要求1的方法,其中所述组合物含有有效量的溶血磷脂以便延缓果实和其他植物组织的衰老。
6.权利要求5的方法,其中所述组合物含有大约0.5到1000mg/L溶血磷脂。
7.权利要求1的方法,其中所述活化剂是乙醇、润湿剂或sylgard309。
8.一种促进果实成熟和提高果实稳定性的方法,包括在收获前给整株植物组织施用一种组合物的步骤,所述组合物含有活化剂和具有以下通式的溶血磷脂:其中R1选自C5-C22酰氧基和C5-C22烷氧基;R2选自氢、羟基、C1-C5酰氧基和C1-C5烷氧基;R3选自氢、胆碱、乙醇胺、丙三醇、肌醇和丝氨酸,其中R1和R2可互换。
9.权利要求8的方法,其中所述溶血磷脂是溶血磷脂酰肌醇和/或溶血磷脂酰乙醇胺(18∶1)。
10.权利要求8的方法,其中所述组合物是一种水溶液。
11.权利要求8的方法,其中所述组合物含有有效量的溶血磷脂以便促进果实成熟和提高果实稳定性。
12.权利要求11的方法,其中所述组合物含有大约0.5到1000mg/L溶血磷脂。
13.权利要求8的方法,其中所述活化剂是乙醇、润湿剂或sylgard309。
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