CN1295509C - 一种检测血液中磷酸根的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明使用镱离子、以邻苯二酚紫为显色剂在pH6.5-7.5的HEPES缓冲溶液定性、定量地去测定血液磷酸根的含量,测定过程简单,方便,测量结果准确。此方法灵敏度高,而且不受血液中其它成份的干扰,可以应用于临床。
Description
技术领域:
本发明涉及一种磷酸根的检测方法,具体属于一种检测血液中磷酸根的方法。
背景技术:
磷是在人体中含量较多的元素之一,仅次于钙。百分之八十和钙结合并存于骨骼和牙齿中,剩余的百分之二十分布于神经组织等软组织中,血液中的无机磷酸盐只占极少部分,构成血液的缓冲体系。血液中含有过多的无机磷酸盐则可能的情况是:甲状旁腺机能减退、晚期慢性肾炎、维他命D摄取过多、多发性骨髓瘤或处于骨折愈合期。血液中无机磷酸盐过低的话,可能会有甲状旁腺机能亢进、肾小管变性病变、佝偻病或软骨病、继发性甲状旁腺增生、长期腹泻或吸收不良等疾病。因此,在临床上,测定血液中无机磷酸盐的指标作为血样分析的常规方法。
关于测定血液的磷酸根,以往国内外的方法可归纳为以下几种:
1、使用离子色谱检测血液中的磷酸根(L.Opliti,R.Chiaraluce,V.Consalvi,N.Cetulli and R.Scandurra,Clinica Chimica Acta,184(1989)155-166);
2、序列注射固定酶方法测定血液中的无机磷酸根(M.D.Luque de Castro,RafaelQuiles.Juan M.Fernández-Romero,and Ernesto Fernández,Clin.Chem,41/1(1995)99-102);
3、使用合成的受体测定血液中的磷酸根(Suzanne L.Tobey and Eric V.Anslyn,Organic Letter,Vol.5,No.12,(2003)2029-2031);
但以上的这些方法分别存在一些问题:
1、离子色谱在临床上测量血液中的磷酸根由于窄的线性范围,需要稀释血液,才能去测量。
2、序列注射固定酶方法测定血液中的无机磷酸根,受能还原过氧化氢物质的干扰。
3、使用合成的受体测定血液中的磷酸根,由于需要大量的合成工作并且需要筛选受体,同时还会受到受体水溶性的限制,所以给测量工作带来许多的不便。
发明内容:
本发明的目的在于提供一种简单、灵敏、快速的、定量检测血液中磷酸根的方法。
本发明提供一种检测血液中磷酸根的方法,该方法基于镱离子、以邻苯二酚紫为显色剂在pH为6.5-7.5的HEPES缓冲溶液中定量地检测血液中的磷酸根,其具体检测步骤如下:
1、取人血样,在高速台式离心机上离心得上层淡黄清液,放置2小时;
2、取上述上层淡黄清液,转入超滤杯,在室温及5×105Pa的氮气条件下使用截留分子量为10kD的PM-10超滤膜用超滤器超滤,收取滤出的无色清亮液,在-17℃至-20℃保存,以供测量;
3、配制pH6.5-7.5的HEPES缓冲溶液,并配制2×10-3M的Yb3+溶液和2×10-3M的邻苯二酚紫溶液;
4、把2ml的HEPES缓冲溶液加到干净的紫外比色皿中,作为空白,用微量进样器吸取2×10-3M的邻苯二酚紫溶液10-100μl,加到此比色皿中,此时溶液由无色变黄,在紫外可见分光光度仪上检测,443nm有最大吸收;
5、在上述的比色皿中,加入摩尔数2倍于邻苯二酚紫溶液的Yb3+溶液,此时溶液由黄变蓝,在紫外可见分光光度仪上检测,发现最大吸收峰由上述的443nm变为623nm;
6、取上述无色清亮液,逐渐用微量进样器加到此比色皿中,边加样边在紫外可见分光光度仪上检测,随着清亮液的加入,最大吸收峰又由623nm逐渐向443nm变回,溶液的颜色也逐渐由蓝变回黄色,当吸收峰在443nm达到最大,溶液的颜色完全变黄时,停止加清亮液;
7、按[Yb3+]×2/V血液计算出血液中磷酸根的含量。
所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3的溶液。
所述的Yb3+可以用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
本发明具有如下优点:1、不需要合成任何试剂,在紫外可见分光光度仪上检测,检测过程简单,而且可以用肉眼明显观察到此效应;2、我们的检测方法,对磷酸根显示了很好的选择性;3、我们的检测是定量的,有很大的线性范围,而且误差很小;显然,此发明可以应用到临床上检测血液中的磷酸根。
附图说明:
图1至图8是相应实施例1至实施例8的检测血液中磷酸根的紫外可见吸收图。
具体实施方式:
实施例1:
取人血样,在TGL-16B型高速台式离心机上离心得上层淡黄清液放置2小时;取上述上层淡黄清液6ml,转入10ml超滤杯,在室温及5×105Pa的氮气条件下使用截留分子量为10kD的PM-10超滤膜,用Amicon Model 8010超滤器超滤,收取滤出的无色清亮液,在-17℃至-20℃保存,以供测量;配制pH7.0的HEPES(10mM)缓冲溶液,并配制2×10-3M的YbCl3溶液和2×10-3M的邻苯二酚紫溶液;把2ml的HEPES缓冲溶液加到干净的紫外比色皿中,作为空白,用微量进样器吸取2×10-3M的邻苯二酚紫溶液50μl,加到此比色皿中,此时溶液由无色变黄,在紫外可见分光光度仪上检测,443nm有最大吸收;在上述的比色皿中,加入2×10-3M的Yb3+溶液100μl,此时溶液由黄变蓝,在紫外可见分光光度仪上检测,发现最大吸收峰由上述的443nm变为623nm;取上述清亮液,逐渐用微量进样器加到此比色皿中,边加样边在HP8453紫外可见分光光度仪上检测,随着清亮液的加入,最大吸收峰又由623nm逐渐向443nm变回,溶液的颜色也逐渐由蓝变回黄色,当吸收峰在443nm达到最大,溶液的颜色完全变黄时,此时清亮液加入量为90μl;计算:100×2/90,得血液中磷酸根含量为2.22mmol/L,紫外可见吸收图见图1。
按实施例1测10个人血液,得血液中磷酸根含量为1.42-2.22mmol/L与医学上统计的血液中无机磷酸盐含量范围(0.81-2.26mmol/L)吻合。
实施例2:配制pH6.5的HEPES(10mM)缓冲溶液,其余同实施例1,得血液中磷酸根含量为2.22mmol/L,紫外可见吸收图见图2。
实施例3:用Yb(ClO4)3的溶液,取另一人的血液,其余同实施例1,100×2/125,得血液中磷酸根含量为1.60mmol/L,紫外可见吸收图见图3。
实施例4:用ErCl3的溶液,其余其余同实施例1,100×2/90,得血液中磷酸根含量为2.22%,紫外可见吸收图见图4。
实施例5:用Nd(ClO4)3的溶液,其余同实施例1,100×2/90,得血液中磷酸根含量为2.22mmol/L,紫外可见吸收图见图5。
实施例6:用Sm(ClO4)3的溶液,其余同实施例1,100×2/90,得血液中磷酸根含量为2.22mmol/L,紫外可见吸收图见图6。
实施例7:用GdCl3的溶液,其余同实施例1,100×2/90,得血液中磷酸根含量为2.22mmol/L,紫外可见吸收图见图7。
实施例8:用HoCl3的溶液,其余同实施例1,100×2/90,得血液中磷酸根含量为2.22mmol/L,紫外可见吸收图见图8。
Claims (2)
1、一种检测血液中磷酸根的方法,其特征在于,该方法包括如下检测步骤:
(1)取人血样,在高速台式离心机上离心得上层淡黄清液,放置2小时;
(2)取上述上层淡黄清液,转入超滤杯,在室温及5×105Pa的氮气条件下使用截留分子量为10kD的PM-10超滤膜用超滤器超滤,收取滤出的无色清亮液,在-17℃至-20℃保存,以供测量;
(3)、配制pH6.5-7.5的HEPES缓冲溶液,并配制2×10-3M的Yb3+溶液和2×10-3M的邻苯二酚紫溶液;
(4)、把2ml的HEPES缓冲溶液加到干净的紫外比色皿中,作为空白,用微量进样器吸取2×10-3M的邻苯二酚紫溶液10-100μl,加到此比色皿中,此时溶液由无色变黄,在紫外可见分光光度仪上检测,443nm有最大吸收;
(5)、在上述的比色皿中,加入摩尔数2倍于邻苯二酚紫溶液的Yb3+溶液,此时溶液由黄变蓝,在紫外可见分光光度仪上检测,最大吸收峰由上述的443nm变为623nm;
(6)、取无色清亮液,逐渐用微量进样器加到此比色皿中,边加样边在紫外可见分光光度仪上检测,随着清亮液的加入,最大吸收峰又由623nm逐渐向443nm变回,溶液的颜色也逐渐由蓝变回黄色,当吸收峰在443nm达到最大,溶液的颜色完全变黄时,停止加无色清亮液;
(7)、按[Yb3+]×2/V血液计算出血液中磷酸根的含量;
其中,所述的Yb3+溶液是YbCl3溶液或Yb(ClO4)3溶液。
2、按权利要求1或2所述的一种检测血液中磷酸根的方法,其特征在于所述的Yb3+可以用Nd3+、Sm3+、Gd3+、Er3+或Ho3+代替。
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN1221111A (zh) * | 1997-12-23 | 1999-06-30 | 罗瑞彪 | 伊红染色法显现蛋白质印痕的研究 |
EP1215501A1 (en) * | 2000-11-30 | 2002-06-19 | Molecular Devices Corporation | Use of a poly(amino-acid)-metal ion complex to link a label to a species of interest |
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