CN1265808C

CN1265808C - 抗eb病毒药物组合物及其应用

Info

Publication number: CN1265808C
Application number: CN 03126704
Authority: CN
Inventors: 李华忠
Original assignee: NO 177 HOSPITAL GUANGDONG PROV
Current assignee: NO 177 HOSPITAL GUANGDONG PROV
Priority date: 2003-05-29
Filing date: 2003-05-29
Publication date: 2006-07-26
Anticipated expiration: 2023-05-29
Also published as: CN1480178A

Abstract

本发明公开了一种抗EB病毒药物组合物，该药物组合物由斑蝥、黄芪制成，还可以辅以党参、败酱草、女贞子、夏枯草、山豆根，该药物组合物具有提高免疫功能，抑制EB病毒和肿瘤生长，增强放、化疗效果，减轻放、化疗毒副反应等作用，可用于治疗EB病毒抗体阳性、鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、***、胃癌、肝癌等。

Description

抗EB病毒药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于药物组合物领域，更具体地说是涉及一种抗EB病毒药物组合物及其应用。

背景技术

EB病毒是一种普遍存在于人类的疱疹病毒，属DNA肿瘤类。疱疹病毒是由Epstein(爱泼斯坦)与其助手Barr(巴尔)发现，国际上把这种人类疱疹病毒命名为EB病毒。EB病毒与鼻咽癌等癌症和肿瘤的关系非常密切，血清EB病毒抗体滴度升高已成为鼻咽癌筛查的主要指标。从EB病毒追踪和捕捉鼻咽癌，是早期发现鼻咽癌的有效途径之一。据世界卫生组织粗估，80％的鼻咽癌病人发生在中国。有资料表明，中国南方居民EB病毒VCA/IgA阳性率为5.9-6.25％，北方居民为5.78％，按此推算中国人口有EB病毒VCA/IgA阳性的居民约7000万人，至今国内外尚无抑制EB病毒的药物用于临床。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能提高免疫功能，抑制EB病毒和肿瘤生长，增强放、化疗效果，减轻放、化疗毒副反应的抗EB病毒的药物组合物。

本发明的目的还在于提供该药物组合物在制备治疗EB病毒抗体阳性药物中的应用。

本发明的目的还在于提供该药物组合物在制备治疗鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、***、胃癌、肝癌药物中的应用。

本发明的抗EB病毒药物组合物，含有以下重量份数的组分：

斑蝥0.005-1份

黄芪5-89份

优选方案为：

斑蝥0.01-0.5份

黄芪10-60份

本发明的抗EB病毒药物组合物，还可以含有如下重量份数的组分：

党参 2-86份

败酱草 2-86份

女贞子 2-86份

优选方案为：

党参 10-60份

败酱草 10-60份

女贞子 10-60份

本发明的抗EB病毒药物组合物，还可以再含有如下重量份数的组分：

夏枯草 2-86份

山豆根 2-60份

优选方案为：

夏枯草 10-60份

山豆根 5-40份

本发明的抗EB病毒药物组合物可采用常规的制备工艺，制备成不同的药物剂型供患者使用，如制成口服液、胶囊、粉剂等。

本发明的药物组合物的急性毒性、长期毒性均表明安全有效，对Raji细胞EB病毒EA抗原的表达有强烈的抑制作用；对B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达有强烈的抑制作用；对正丁酸激发的B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达也有强烈的抑制作用；对EB病毒转化脐血B淋巴细胞有抑制作用；对小鼠肉瘤S180、小鼠U14***有一定抑制作用，对人鼻咽癌细胞株CNE2的生长有抑制作用；对机体抗肿瘤免疫有较好的促进作用；对放、化疗有一定的增效、减毒作用。

本发明的药物组合物可用于制备治疗EB病毒抗体阳性、鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、***、胃癌、肝癌药物。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1

称取斑蝥3g，黄芪5000g，党参5000g，败酱草5000g，女贞子5000g，夏枯草4000g，山豆根3000g，按如下工艺生产口服液：

将斑蝥用足量碱液提取后，滤过、滤液浓缩成A液，将黄芪、党参、山豆根用水提取后，滤过，浓缩，65％乙醇沉淀，回收乙醇，离心，浓缩为相对密度为1.2的溶液B液；将败酱草、女贞子、夏枯草用50％乙醇提取后，离心、浓缩至相对密度为1.2的溶液，静置，滤过为C液；合并BC两液，静置、滤过后与A液合并，灌装，灭菌，得口服液，每毫升含生药材1.63g。

用法：口服，一次20ml，一日3次，饭后服用，服前摇匀，一个月1疗程。

实施例2毒理测试

取实施例1所得的口服液进行常规毒理测试：

小白鼠的急性毒性试验得出半致死量LD₅₀为236.80g/kg；大白鼠长期毒性试验表明，本发明的口服液以110.0g生药/kg.55.0g生药/kg和27.5g生药/kg连续给药6个月中，除中、高剂量组(55.0g生药/kg、110.0g生药/kg)小板(PLT)计数较空白对照组高(p＜0.05、p＜0.01)外，大鼠的行为体征、外观形态、血液学及血液生化学检测、***尸解、脏器指数、病理组织学检查均未发现异常改变；停药2周恢复后，各剂量组上述各项检测亦未见异常改变，无延迟性不良影响，提示本发明的口服液以110.0g生药/kg，相当于成人每日口服量的67.5倍条件下，对大鼠的一般状态、血液学、血液生化学、***尸解、主要脏器重量指数及组织病理学检查均无不良影响和改变，停药后亦未发现有延迟性毒性，可以认为本发明长期连续使用毒性甚低，推测临床用药的安全性较好，对大鼠经口给药的无毒剂量为110.0g生药/kg；Beagle狗长期毒性试验表明本发明对狗的无毒反应的剂量为8.49g/kg。

实施例3对EB病毒转化能力的抑制作用

方法：

1.单个核细胞的分离：按常规用淋巴细胞分离液脐带血单个核细胞。

2.EB病毒的制备：将含有EB病毒的B95-8猴淋巴母细胞接种在含10％胎牛血清的RPMI1640培养液中，置5％CO₂37℃孵箱中培养48h，使细胞增倍。然后，置33℃孵箱中培养14天，使B95-8绒猴淋巴母细胞缓慢增殖，使EB病毒大量扩增。离心取上清，再用0.45μM滤膜过滤，收集滤液(内含EB病毒)，分装成小管，贮藏在-70℃冰箱备用。

3.对细胞无毒浓度的测定：用台盼蓝拒染法测定受试药物对B淋巴细胞的无毒浓度。

4.药物抑制B淋巴细胞转化的试验方案：

(1)药物预处理EB病毒1小时，再与B淋巴细胞共同孵育2小时，离心去上清(含药物和残存病毒)后，加入含有0.1μg/mlCSA和20％FBS的RPMI1640培养液，调整细胞浓度为2×10⁶个/ml，移入96孔板的小孔中，每孔200μl，设10个复孔。未用药预处理的EB病毒组为空白对照。

(2)取实施例1的口服液与EB病毒一起与B淋巴细胞同时孵育2小时，离心去上清(含药物和残存病毒)后，加入含有0.1％CSA和20％FBS的RPMI1640培养液，调整细胞浓度为2×10⁶个/ml，移入96孔板的小孔中，每孔200μl，设10个复孔。未用药处理组为空白对照。

将上述装有经药物和EB病毒处理的B淋巴细胞的96孔板放入5％CO₂37℃培养，每周换液2次，3-4周后置于倒置显微镜下计算每组的细胞转化团数。标准为大于等于25个细胞/1转化团，计算10个复孔的平均转化团数。按下列公式计算转化抑制率(％)。

5.结果见表1和表2：

表1药物预处理对EB病毒转化力的影响

组别	药物浓度(mg/ml)
	药物浓度(mg/ml)						0	0.625	1.25	2.50	5.00	10.00
	平均转化团数转化抑制率(％)	127.4——	90.129.3	63.849.9	44.265.3	40.568.2	0	0.625	1.25	2.50	5.00	10.00	24.081.2

方差分析：F＝10.42，p＜0.01

表2药物和EB病毒与B淋巴细胞同时孵育对EB病毒转化力的影响

批号与组别	药物浓度(mg/ml)
	药物浓度(mg/ml)						0	0.625	1.25	2.50	5.00	10.00
	一、平均转化团数转化抑制率(％)二、平均转化团数转化抑制率(％)	127.4——135.6——	90.129.3108.729.1	63.849.999.535.1	44.265.383.845.5	40.568.274.751.3	0	0.625	1.25	2.50	5.00	10.00	24.081.252.066.1

方差分析：p＜0.01

结果显示，EB病毒能使脐血B淋巴细胞转化为淋巴母细胞，而本发明药物对EB病毒转化脐血B淋巴细胞有抑制作用。

实施例4体外MTT法测定对人鼻咽癌细胞CNE2生长抑制作用，结果见表3：

表3对人鼻咽癌细胞CNE2的细胞毒作用

组别	药物浓度(mg/ml)
	药物浓度(mg/ml)							3.6	4.8	6.3	8.4	11.3	15.0	20.0
	IR(％)	12.6±4.7	21.8±12.2	40.1±14.7	58.7±16.0	79.9±7.0	85.3±6.0	3.6	4.8	6.3	8.4	11.3	15.0	20.0	88.8±4.0

IR(％)为生长抑制率

实施例5对EB病毒VCA/IgA OD阳性患者的疗效

EB病毒VCA/IgA OD阳性患者70例，其中治疗组、对照组各35例。

治疗组服用实施例1的口服液，每日口服3次，每次20毫升，30天为一个疗程。

对照组服用安慰剂，安慰剂对EB病毒无疗效，颜色、味感、外包装与实施例1的口服液相似，每日口服3次，每次20毫升，30天为一个疗程。

按双盲法给药。

结果：治疗组患者33例降低或转阴，有效率94.3％。对照组7例降低或转阴，有效率20％。治疗组治疗前VCA/IgA OD为0.696±0.101(α±s)，治疗后为0.136±0.029(α±s)，治疗前后有显著差异(P＜0.01)，对照组无显著意义。

结论：本发明药物能使EB病毒VCA/IgA OD阳性患者降低或转阴，增强免疫功能，具有抑制EB病毒作用。

实施例6对鼻咽癌患者的疗效

鼻咽癌患者60例，病理为鼻咽低分化鳞癌。放疗+药物组、放疗组各30例。放疗+药物组：放疗开始，同时服用实施例1的口服液，一日3次，每次20毫升。放疗组：单纯放疗。

结果：放疗4000rad时，放疗+药物组：25例的癌灶明显消退，15例全消退；放疗组：18例癌灶明显消退，8例全消退。

结论：本发明药物对鼻咽癌部癌灶有显著消退作用，具有祛邪、扶正固本、增效减毒作用。

Claims

1、一种抗EB病毒药物组合物，其特征在于由以下重量份数的原料制成：

斑蝥 0.005-1份

黄芪 5-89份。

2、根据权利要求1所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于所述原料的重量份数为：

斑蝥 0.01-0.5份

黄芪 10-60份。

3、根据权利要求1或2所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还可以加入如下重量份数的原料：

党参 2-86份

败酱草 2-86份

女贞子 2-86份。

4、根据权利要求3所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于所述原料重量份数如下：

党参 10-60份

败酱草 10-60份

女贞子 10-60份。

5、根据权利要求3所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还可以加入如下重量份数的原料：

夏枯草 2-86份

山豆根 2-60份。

6、根据权利要求4所述的抗EB病毒药物组合物，其特征在于还可以加入如下重量份数的原料：

夏枯草 10-60份

山豆根 5-40份。

7、权利要求1至6中任一项所述的抗EB病毒药物组合物在制备治疗EB病毒抗体阳性药物中的应用。

8、权利要求1至6中任一项所述的抗EB病毒药物组合物在制备治疗鼻咽癌、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、***、胃癌或肝癌药物中的应用。