CN118258945A - 一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药材鉴别技术领域，具体是一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，包括以下步骤：取待测物料研磨制得0.5g粉末，置于锥形瓶中，加甲醇25mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干；残渣加甲醇2mL使其溶解，作为供试品溶液；取蛇床子素对照品，加入甲醇制成每1mL含各对照品0.5mg的混合对照品溶液；按照中国药典2015年版通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚‑乙酸乙酯‑氯仿为展开剂，展开，取出，晾干；置紫外光灯下检视。本发明能有效、快速、准确的鉴定当归配方颗粒成品及原料中是否掺伪独活。

Description

一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法

技术领域

本发明涉及中药材鉴别技术领域，具体是一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法。

背景技术

当归为伞形科植物当归的干燥根，具有补血活血，调经止痛，润肠通便的功效。独活为伞形科植物重齿毛当归的干燥根，具有祛风除湿，通痹止痛的功效。两者同科同属，来源相近，外观性状差异不大，尤其是炮制为饮片或提取后制备成单味配方颗粒，极难区分。

独活主要含有蛇床子素、二氢欧山芹素、二氢欧山芹醇、欧前胡素、异欧前胡素等成分，当归主要含藁本内酯、阿魏酸、多糖和黄酮等成分。两者在药理药效方面存在较大差异，临床误用、混用对患者风险极大。

当归配方颗粒由当归饮片经水煎煮提取、浓缩、制粒等工艺制备而成，其性味、归经、功效与原饮片基本一致，用于中医临床配方，既满足临床辨证论治，随证加减的需要，又具有免煎易服、作用迅速、安全卫生和携带方便等优点。

产地及市场调研显示，不少药商为了提高利润，在当归药材或者饮片中掺入价格较低的独活。尤其在当归饮片中掺入独活饮片，在性状、气味等方面极难区分。而当归加工为当归中药配方颗粒后，完全丧失了性状鉴别条件的特征，成为进一步的加强对药材的质量控制的难题。对配方颗粒生产企业所生产产品的质量带来极大的隐患，难以保障广大群众用药安全。

现有技术中公开当归及其易混伪品鉴别方法，例如：中国专利授权CN 104911256B中公开了一种当归SCAR分子标记及其鉴定方法和特异性引物对，可以用于区分当归和独活药材。其采用的是分子鉴定技术方法，针对的是当归和独活药材，目前并无公开如何通过薄层色谱技术鉴别当归配方颗粒成品及原料中掺伪独活的方法。

因此，针对这一现状，迫切需要开发一种能有效、快速、准确鉴定当归配方颗粒成品及原料中掺伪独活的快速鉴定技术，以克服当前实际应用中的不足。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，包括以下步骤：

步骤一、供试品溶液制备

取待测物料研磨制得0.5g粉末，置于锥形瓶中，加甲醇25mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干；残渣加甲醇2mL使其溶解，作为供试品溶液；

步骤二、对照品溶液制备

取蛇床子素对照品，加入甲醇制成每1mL含各对照品0.5mg的混合对照品溶液；

步骤三、鉴别

按照中国药典2015年版通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，展开，取出，晾干；置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的荧光斑点。

作为本发明进一步的方案：在步骤一中，待测物料为当归配方颗粒成品、当归药材或当归饮片。

作为本发明进一步的方案：在步骤三中，石油醚的沸程范围为60～90℃。

作为本发明进一步的方案：在步骤三中，紫外光灯的波长为365nm。

与现有技术相比，本发明实施例的有益效果是：

1）该方法具备高度准确性，能有效鉴别出当归原料中掺入不少于5%的独活成分，进而识别出掺伪的当归配方颗粒。同时，它也适用于对当归药材及饮片中的独活掺伪进行鉴定，为当归配方颗粒及其原料的质量控制提供了切实有效的方法，保障了产品质量的安全可靠。

2）该方法操作简便、快捷，不仅克服了配方颗粒在丧失中药材性状、显微特征方面的局限，还摆脱了对大型设备的依赖，降低了企业的检验成本和生产风险。这为企业提供了更为经济、高效的质量控制手段，有助于提升生产效率和市场竞争力。

3）在前处理及检视方法中，所使用的溶剂均为低毒试剂，对环境的污染较小。这体现了该方法在环保方面的优势，符合当前绿色、可持续发展的理念，有助于推动中药材产业的可持续发展。

附图说明

图1为实施例1中当归配方颗粒中混掺独活配方颗粒样品薄层鉴别色谱图；

图2为实施例2中不同提取方法考察薄层色谱图；

图3为实施例2中不同超声时间考察薄层色谱图；

图4为实施例2中展开剂石油醚-乙酸乙酯（7：3）图；

图5为实施例2中展开剂石油醚-乙酸乙酯-氯仿（8：3：0.5）图；

图6为实施例2中展开剂石油醚-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（5：2：1：0.1）图；

图7为实施例2中三氯化铝乙醇溶液显色前图谱（365nm）；

图8为实施例2中三氯化铝乙醇溶液显色后图谱（365nm）；

图9为实施例2中三氯化铝乙醇溶液显色后图谱（白光）；

图10为实施例2中5%香草醛浓硫酸溶液显色前（365nm）图；

图11为实施例2中5%香草醛浓硫酸溶液显色后（365nm）图；

图12为实施例2中5%香草醛浓硫酸溶液显色后（白光）图；

图13为实施例2中亚硝酸钠乙醇溶液显色前（365nm）图

图14为实施例2中亚硝酸钠乙醇溶液显色后（365nm）图；

图15为实施例2中亚硝酸钠乙醇溶液显色后（白光）图；

图16为实施例2中稀硫酸溶液显色前（365nm）图；

图17为实施例2中稀硫酸溶液显色后（365nm）图；

图18为实施例2中稀硫酸溶液显色后（白光）图；

图19为实施例2中不同点样量考察薄层色谱图；

图20为实施例2中不同温度考察薄层色谱图（常温）；

图21为实施例2中不同温度考察薄层色谱图（低温）；

图22为实施例2中不同湿度考察薄层色谱图（低湿）；

图23为实施例2中不同湿度考察薄层色谱图（高湿）；

图24为实施例2中不同厂家薄层板考察薄层色谱图（青岛G板）；

图25为实施例2中不同厂家薄层板考察薄层色谱图（烟台板）；

图26为实施例2中不同厂家薄层板考察薄层色谱图（Merck薄层板）；

图27为实施例3中当归配方颗粒原料的独活掺伪鉴别图。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，包括以下步骤：

1、掺伪样品的制备

取当归配方颗粒、独活配方颗粒各100g，研末，置自封袋中备用。分别取当归配方颗粒粉末9.5g、9g、8g、7g、6g，共5份，分别置烧杯中，放入分析天平称量，分别精密加入0.5g、1g、2g、3g、4g独活配方颗粒粉末，混匀，制成分别含5%、10%、20%、30%、40%独活配方颗粒的掺伪当归配方颗粒粉末，备用。

2、供试品溶液的制备

分别取当归配方颗粒、独活配方颗粒、含5%、10%、20%、30%、40%独活配方颗粒的掺伪当归配方颗粒粉末各约0.5g，置于锥形瓶中，加甲醇25mL，超声15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，分别作为供试品1-7。

3、对照品溶液制备

取蛇床子素，加甲醇制成每1mL含0.5mL的溶液，作为对照品溶液。

4、薄层鉴别条件

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的荧光斑点。

结果如图1所示，其中1-7代表供试品溶液1-7；8代表蛇床子素对照品。结果显示，独活配方颗粒、含5%、10%、20%、30%、40%独活配方颗粒的掺伪当归配方颗粒，均检出在与蛇床子素对照品薄层色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。供试品溶液1（当归配方颗粒），未检出蛇床子素对照品相应荧光斑点。

实施例2

一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，采用不同色谱条件对其进行考察，包括以下步骤：

1、不同提取方法考察研究

取当归配方颗粒、独活配方颗粒各两份，研末，每份取0.5g，置于25mL锥形瓶中，分别加甲醇25mL，一份加热回流15min，一份超声处理15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

结果如图2所示，1代表独活配方颗粒超声；2代表当归配方颗粒超声；3代表独活配方颗粒回流；4代表当归配方颗粒回流；5代表蛇床子素对照品。超声提取和回流提取无明显区别，考虑超声方法安全、方便、快捷，建议采用超声方法提取。

2、不同超声时间考察

取当归配方颗粒、独活配方颗粒各四份，研末，每份0.5g，置于锥形瓶中，分别加甲醇25mL，分别超声5min、15min、30min、45min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

结果如图3所示，1～4代表独活配方颗粒超声提取5min、15min、30min、45min；5～8代表当归配方颗粒超声提取5min、15min、30min、45min；9代表蛇床子素对照品。超声5min、15min、30min、45min各斑点无明显区别，考虑提取充分、节约时间、提高鉴别效率建议选择超声15min。

3、不同展开剂选择考察

取当归配方颗粒、独活配方颗粒各一份，研末，每份0.5g，置于锥形瓶中，分别加甲醇25mL，超声15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。取蛇床子素对照品，加甲醇分别制成每1mL含0.5mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL，分别点于同硅胶G薄层板上，分别以石油醚-乙酸乙酯（7：3）、石油醚-乙酸乙酯-氯仿（8：3：0.5）、石油醚-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（5：2：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

如图4-6所示，1代表独活配方颗粒；2代表当归配方颗粒；3代表蛇床子素对照品。通过以上图谱进行比较得出，展开***为石油醚-乙酸乙酯-氯仿（8：3：0.5）分离效果较好，斑点较清晰，独活和当归配方颗粒区分较明显，建议展开剂采用石油醚-乙酸乙酯-氯仿（8：3：0.5）。

4、观察方法及显色剂考察

取当归配方颗粒、独活配方颗粒各一份，研末，每份0.5g，置于锥形瓶中，分别加甲醇25mL，超声15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL，分别点于同硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，展开，取出，晾干，先置紫外光灯（365nm）下检视，再分别喷三氯化铝乙醇溶液、5%香草醛浓硫酸溶液、亚硝酸钠乙醇溶液及稀硫酸溶液，分别置白光及紫外光灯（365nm）下检视。观察斑点效果。

如图7-18所示，其图中1均代表独活配方颗粒；2均代表当归配方颗粒；3均代表蛇床子素对照品。由以上图谱比较可知，在紫外365nm条件下观察，无需显色剂，斑点已较清晰，分离效果较好。建议观察条件为紫外365nm。

5、不同点样量考察

取含5%独活配方颗粒的掺伪当归配方颗粒粉末约0.5g，置于锥形瓶中，分别加甲醇25mL，超声15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液2、4、6、8、10μL和对照品溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

如图19所示，1代表样品点样量2μL；2代表样品点样量4μL；3代表样品点样量6μL；4代表样品点样量8μL；5代表样品点样量10μL；6代表蛇床子素。由图可知，点样量在8μL是斑点较清晰，分离效果较好。建议供试品点样量为8μL。

6、不同温度考察

取含5%独活配方颗粒的掺伪当归配方颗粒粉末约0.5g，置于锥形瓶中，分别加甲醇25mL，超声15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液8μL和对照品溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，分别在常温和低温下展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

如图20-21所示，1代表含5%独活配方颗粒的当归配方颗粒；2代表蛇床子素对照品。由图可知，在常温和低温条件下斑点均较清晰，分离效果均较好。因此，该展开***对温度适应性较好。

7、不同湿度考察

取含5%独活配方颗粒的掺伪当归配方颗粒粉末约0.5g，置于锥形瓶中，分别加甲醇25mL，超声15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液8μL和对照品溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，分别在低湿和高湿下展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

如图22-23所示，1代表含5%独活配方颗粒的当归配方颗粒；2代表蛇床子素对照品。由图可知，在低湿和高湿条件下斑点均较清晰，分离效果均较好。因此，该展开***对湿度适应性较好。

8.不同厂家薄层板考察

取含5%独活配方颗粒的掺伪当归配方颗粒粉末约0.5g，置于锥形瓶中，分别加甲醇25mL，超声15min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。取蛇床子素对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液8μL和对照品溶液各4μL，分别点于青岛G板、烟台板及Merck薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，分别在常温和低温下展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

如图24-26所示，1代表含5%独活配方颗粒的当归配方颗粒；2代表蛇床子素对照品。由图可知，不同厂家薄层板分离效果均好，斑点均较清晰。因此，该展开***对不同厂家薄层板适应性较好。

实施例3

一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，对当归配方颗粒原料的独活掺伪鉴别进行验证，包括以下步骤：

按照实施例1中供试品溶液、对照品溶液制备方法，制备序号1-7总计7批次当归原料的薄层供试品溶液、序号9的独活原料薄层供试品溶液，以及序号8的蛇床子素对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，分别吸取供试品溶液8μL、对照品溶液4μL，点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

鉴别结果如图27所示，1～7代表当归原料供试品溶液；8代表蛇床子素对照品；9代表独活原料供试品溶液。由图可知，该薄层色谱图中各主成分分离效果均好，斑点均较清晰。表明该方法对当归配方颗粒原料中掺伪独活也具有较好的鉴别作用。

本发明上述实施例中提供了一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，具有以下优点：

1）该方法具备高度准确性，能有效鉴别出当归原料中掺入不少于5%的独活成分，进而识别出掺伪的当归配方颗粒。同时，它也适用于对当归药材及饮片中的独活掺伪进行鉴定，为当归配方颗粒及其原料的质量控制提供了切实有效的方法，保障了产品质量的安全可靠。

2）该方法操作简便、快捷，不仅克服了配方颗粒在丧失中药材性状、显微特征方面的局限，还摆脱了对大型设备的依赖，降低了企业的检验成本和生产风险。这为企业提供了更为经济、高效的质量控制手段，有助于提升生产效率和市场竞争力。

3）在前处理及检视方法中，所使用的溶剂均为低毒试剂，对环境的污染较小。这体现了该方法在环保方面的优势，符合当前绿色、可持续发展的理念，有助于推动中药材产业的可持续发展。

以上的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。

Claims (4)

1.一种当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、供试品溶液制备

取待测物料研磨制得0.5g粉末，置于锥形瓶中，加甲醇25mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干；残渣加甲醇2mL使其溶解，作为供试品溶液；

步骤二、对照品溶液制备

取蛇床子素对照品，加入甲醇制成每1mL含各对照品0.5mg的混合对照品溶液；

步骤三、鉴别

按照中国药典2015年版通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8：3：0.5的石油醚-乙酸乙酯-氯仿为展开剂，展开，取出，晾干；置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的荧光斑点。

2.根据权利要求1所述的当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，其特征在于，在步骤一中，待测物料为当归配方颗粒成品、当归药材或当归饮片。

3.根据权利要求2所述的当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，其特征在于，在步骤三中，石油醚的沸程范围为60～90℃。

4.根据权利要求3所述的当归配方颗粒成品及原料的独活掺伪薄层鉴别方法，其特征在于，在步骤三中，紫外光灯的波长为365nm。