CN104991032B - 鉴别五味子中掺杂南五味子的薄层色谱方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鉴别五味子中掺杂南五味子的薄层色谱方法,属中药药材鉴别技术领域。主要内容如下:以安五脂素为对照品,五味子的乙酸乙酯溶液为供试品溶液,点于同一硅胶薄层板GF254上,以氯仿和丙酮为展开剂,展开后,取出,晾干,直接在254nm紫外光灯下进行检视鉴别,供试品在与安五脂素对照品相同Rf值位置上,在与安五脂素对照品相同Rf值位置上,不得显相同的暗斑;或以5%磷钼酸溶液为显色剂,显色后,在日光下进行检视鉴别,在与安五脂素对照品相同Rf值位置上,不得显相同颜色的斑点。否则,则可判为掺杂有南五味子。
Description
技术领域
本发明属中药药材鉴别技术领域,涉及一种用于鉴别五味子中掺杂南五味子的薄层色谱方法。
背景技术
五味子为常用中药,习称“北五味子”。商品五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。南五味子亦为常用中药,为木兰科植物华中五味子SchisandrasphenantheraRehd.etWils.的干燥成熟果实。虽然南五味子原植物来源与五味子原植物来源同科,但二者化学成分及临床药理作用有比较大的差别,此外,两种药材在市场上的销售价格也有比较大的差异,通常南五味子的价格只有五味子的1/5至1/4,因此,有些不法商贩为获得更大的经济收益,不惜损害消费者利益,用南五味子冒充五味子,或者在五味子中掺入一定量的南五味子,进行销售。虽然南五味子与五味子在外观性状上有一定区别,完全用南五味子冒充五味子比较容易用肉眼进行识别,但在五味子中掺入一定量的南五味子,则不容易用肉眼分别。
目前,虽然有许多关于鉴别五味子和南五味子的报道,但都仅适用于未掺杂的样品的鉴别,对于在五味子中掺杂南五味子的鉴别并不适用。汪平等(汪平、邬芙蓉、成龙,五味子中掺伪品南五味子的鉴别,中国药业,2004,13(2):62-3-63)虽然在其报道的标题中声称“五味子中掺伪品南五味子的鉴别”,并在文章前言中提及发现掺杂量达40%的现象,实际上在其鉴别时,是通过水沉筛选、水洗、干燥等复杂过程,将疑问样品挑选、处理后进行鉴别,而不是直接将可能的混杂物进行鉴别。
因此,为保护广大消费者的利益,打击不法销售现象,研究开发一种用于鉴别五味子中掺杂南五味子的方法例如薄层色谱方法,是具有重要意义的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于鉴别五味子中掺杂南五味子的薄层色谱方法。已经出人意料地发现,通过溶剂展开与显色等简单易行的薄层色谱操作程序,可以容易地实现五味子中掺杂南五味子的鉴别,达到判别掺伪、打击不法行为的目的。本发明基于此发现而得以完成。
为此,本发明的一个方面提供了一种鉴别五味子中掺杂南五味子的薄层色谱方法,其包括以下步骤:
1)精密称取安五脂素对照品,置于适当的容器中,加乙酸乙酯溶解制成适当浓度的对照品溶液;
2)取五味子供试品粗粉适量,置于具塞锥形瓶中,加溶剂适量,超声处理20~60分钟(例如40min),滤过,将滤液在水浴上蒸干,残渣加适量甲醇使溶解,离心,取上清液蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;
3)用定量毛细管分别吸取上述1)制得的对照品溶液和2)制得的供试品溶液适量,依次点样于同一硅胶薄层板GF254的同一水平线不同位置上;
4)取氯仿和丙酮,按照体积比60:1混合均匀,得到展开剂;将适量展开剂置干燥洁净的双槽薄层色谱展开缸的第一个槽中;
5)将步骤3)的硅胶薄层板GF254,置于步骤4)的双槽薄层色谱展开缸第二个槽中,密闭缸盖,预饱和10-30分钟后,将上述双槽薄层色谱展开缸第一个槽中的展开剂转移到放有硅胶薄层板GF254的第二个槽中,进行展开,展距10cm,结束展开,取出薄层板,晾干;
6)结果判断:
61)取步骤5)晾干的硅胶薄层板GF254,置254nm波长紫外灯下检视,如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上无相同的暗斑,且在Rf=0.67~0.71处显示暗斑,则该五味子中未掺杂南五味子;如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上有相同的暗斑,且在Rf=0.67~0.71处显示暗斑,则该供试品是掺杂有南五味子的五味子药材;和/或
62)取5%磷钼酸显色剂,将其均匀喷至步骤5)的硅胶薄层板GF254上,105℃加热至斑点清晰,取出,放凉,日光下检视,如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上无相同颜色的斑点,且在Rf=0.67~0.71处显示斑点,则该五味子中未掺杂南五味子;如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上有相同颜色的斑点,且在Rf=0.67~0.71处显示斑点,则该供试品是掺杂有南五味子的五味子药材。
根据本发明的方法,所述步骤1)中所述适当浓度的对照品溶液,其浓度可以是每1ml含对照品0.5~4mg,例如每1ml含对照品0.5~2mg,例如每1ml含对照品1mg。
根据本发明的方法,所述步骤2)中所述药材粗粉可以是过20~100目筛(例如过50~80目筛,例如过60目筛)的粉末;所述粗粉适量,可以是0.5~2g,例如1g;所述溶剂可以是石油醚(60~90℃)、石油醚(30~60℃)、正己烷、环己烷、氯仿、二氯甲烷;所述溶剂适量可以是5~20ml,例如10ml;
根据本发明的方法,所述步骤3)中所述取对照品溶液或供试品溶液适量,可以是1~10μl(例如2μl);所述硅胶薄层板GF254,可以是国产、进口预制薄层板,也可以是实验室自制薄层板;
根据本发明的方法,所述步骤4)中所述适量展开剂,其体积可以是10~30ml(例如20ml);所述展开缸,其规格可以是10cm(长)×10cm(宽)、10cm(长)×20cm(宽)、20cm(长)×10cm(宽),厚度不限。
根据本发明的方法,其包括以下步骤:
1)对照品溶液的制备:精密称取安五脂素对照品,置于适当的容器中,加乙酸乙酯溶解制成适当浓度的对照品溶液,备用;
2)药材供试品溶液制备:
用高速万能粉碎机对干燥的五味子供试品粉碎,过60目筛得药材粉末;
精密称取供试品粉末适量,置于具塞锥形瓶中,加溶剂适量,超声处理20~60分钟(例如40min),滤过,将滤液在水浴上蒸干,残渣加适量甲醇使溶解,离心,取上清液蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;
3)用定量毛细管分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2~10μl,依次点样于同一硅胶薄层板GF254的同一水平线不同位置上;
4)取氯仿和丙酮,按照体积比60:1混合均匀,得到展开剂。将展开剂置干燥洁净的双槽薄层色谱展开缸的第一个槽中;
5)将步骤3)的硅胶薄层板GF254,置于步骤4)的双槽薄层色谱展开缸第二个槽中,密闭缸盖,预饱和10-30分钟后,将上述双槽薄层色谱展开缸第一个槽中的展开剂转移到放有硅胶薄层板GF254的第二个槽中,进行展开,展距10cm,结束展开,取出薄层板,晾干;
配制显色剂:取磷钼酸5g,置于100ml量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,配制成5%磷钼酸显色剂,置于喷雾器中备用;
6)结果判断:
61)取步骤5)晾干的硅胶薄层板GF254,置254nm波长紫外灯下检视,如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上无相同的暗斑,且在Rf=0.67~0.71处显示暗斑,则该五味子中未掺杂南五味子;如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上有相同的暗斑,且在Rf=0.67~0.71处显示暗斑,则该供试品是掺杂有南五味子的五味子药材;和/或
62)将显色剂均匀喷至步骤5)的硅胶薄层板GF254上,105℃加热至斑点清晰,取出,放凉。日光下检视,如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上无相同颜色的斑点,且在Rf=0.67~0.71处显示斑点,则该五味子中未掺杂南五味子;如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上有相同颜色的斑点,且在Rf=0.67~0.71处显示斑点,则该供试品是掺杂有南五味子的五味子药材。
本发明结合使用安五脂素对照品,以乙酸乙酯为溶剂配制供试品溶液和对照品溶液,点于同一硅胶薄层板GF254上,以氯仿和丙酮为展开剂,展开后,取出,晾干,直接在254nm紫外光灯下进行检视鉴别,或以5%磷钼酸溶液为显色剂,显色后,在日光下进行检视鉴别,检查在Rf约0.44的安五脂素处的斑点以及Rf=0.67~0.71处的斑点,以此判断所检测的五味子中是否掺杂有南五味子。
本发明与汪平报道的最大区别在于:(1)样品不需要进行筛选、单独处理,直接将样品粉碎,即可进行鉴别实验;(2)掺伪最低检出比例可达5%。在本发明下文实施例1中,如果将其中配制对照品溶液和供试品溶液时最终所用的溶剂乙酸乙酯改为等量的环己烷,则安五脂素Rf约在0.76处,且无本发明Rf=0.67~0.71处的特征斑点,因此将配制对照品溶液和供试品溶液所用的溶剂由乙酸乙酯改为环己烷时,无法有效辩别五味子中是否掺参有南五味子,仅此简单修改即不能实现本发明目的。
本发明的优点在于:本发明首次采用薄层色谱法鉴别五味子中掺杂南五味子,方法操作简单,所使用的仪器设备和对照品普及性好,便于药材加工、销售企业和药品检验单位推广应用。
附图说明
图1为本发明实施例1薄层色谱鉴别方法色谱图(254nm紫外灯光下),图中1为安五脂素对照品,2掺杂15%南五味子的供试品,3掺杂5%南五味子的供试品,4五味子对照药材,5南五味子对照药材;安五脂素Rf=0.44,五味子在Rf=0.67~0.71处呈现特征斑点,而南五味子无该特征斑点;日光下检视结果亦与此相同。
图2为本发明实施例1薄层色谱鉴别方法色谱图(日光下),图中1为安五脂素对照品,2掺杂15%南五味子的供试品,3掺杂5%南五味子的供试品,4五味子对照药材,5南五味子对照药材。
具体实施方式
实施例1:薄层色谱法鉴别五味子中掺杂南五味子的方法
为说明本方法的实用性,选用两个五味子中掺杂南五味子的样品作为供试品,其中南五味子掺杂量分别为15%(供试品1)和5%(供试品2)。另选用中国食品药品检定研究院提供的五味子对照药材、南五味子对照药材为对照,选用中国食品药品检定研究院提供的安五脂素为对照品。具体操作方法如下:
1)对照品溶液的制备:
精密称取安五脂素对照品,置于适当的容器中,加乙酸乙酯溶解制成每1ml含1mg的对照品溶液,备用;
2)对照药材溶液制备:
精密称取五味子对照药材、南五味子对照药材粉末各1g,分别置于具塞锥形瓶中,加环己烷10ml,超声处理40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,离心,取上清液蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为对照药材1和2。
3)药材供试品溶液制备:
用高速万能粉碎机对干燥的供试品1和供试品2分别进行粉碎,过60目筛得药材粉末;
精密称取供试品1、供试品2粉末各1g,分别置于具塞锥形瓶中,加环己烷10ml,超声处理40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,离心,取上清液蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液1和2。
4)用定量毛细管分别吸取上述制得的对照品溶液、对照药材溶液和供试品溶液各2μl,依次点样于同一硅胶薄层板GF254同一水平线的不同位置上。
5)取氯仿和丙酮,按照体积比60:1混合均匀,得到展开剂20ml。将展开剂置干燥洁净的双槽薄层色谱展开缸的第一个槽中;
6)将步骤3)的硅胶薄层板GF254,置于步骤5)的双槽薄层色谱展开缸第二个槽中,密闭缸盖,预饱和15分钟后,将上述双槽薄层色谱展开缸第一个槽中的展开剂转移到放有硅胶薄层板GF254的第二个槽中,进行展开,展距10cm,结束展开,取出薄层板,晾干;
7)配制显色剂:取磷钼酸5g,置于100ml量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,配制成5%磷钼酸显色剂,置于喷雾器中备用;
8)取步骤5)晾干的硅胶薄层板GF254置254nm波长紫外灯下检视(如图1所示),在与安五脂素对照品相同Rf值位置上,供试品溶液1和2均显示有相同的暗斑(其中供试品溶液2的暗斑较对照品溶液和供试品溶液1的略小一些);五味子对照药材未显示有与安五脂素相同的暗斑;南五味子对照药材则显示相同的暗斑;另外,五味子对照药材以及掺杂有南五味子的供试品药材在Rf=0.67~0.71处均显示有五味子的特征暗斑。由此:如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上无相同的暗斑,且在Rf=0.67~0.71处显示暗斑,则该五味子中未掺杂南五味子;如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上有相同的暗斑,且在Rf=0.67~0.71处显示暗斑,则该供试品是掺杂有南五味子的五味子药材;和/或
9)将显色剂均匀喷至步骤5)的硅胶薄层板GF254上,105℃加热至斑点清晰,取出,放凉。日光下检视(如图2所示),在与安五脂素对照品相同Rf值位置上,供试品溶液1和2均显示有相同颜色的斑点(其中供试品溶液2的斑点较对照品溶液和供试品溶液1的略小一些);五味子对照药材未显示有与安五脂素相同颜色的斑点;南五味子对照药材则显示相同颜色的斑点;另外,五味子对照药材以及掺杂有南五味子的供试品药材在Rf=0.67~0.71处均显示有五味子的特征斑点。由此:如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上无相同颜色的斑点,且在Rf=0.67~0.71处显示斑点,则该五味子中未掺杂南五味子;如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上有相同颜色的斑点,且在Rf=0.67~0.71处显示斑点,则该供试品是掺杂有南五味子的五味子药材。
Claims (14)
1.鉴别五味子中掺杂南五味子的薄层色谱方法,其包括以下步骤:
1)精密称取安五脂素对照品,置于适当的容器中,加乙酸乙酯溶解制成适当浓度的对照品溶液;
2)取五味子供试品粗粉适量,置于具塞锥形瓶中,加溶剂适量,超声处理20~60分钟,滤过,将滤液在水浴上蒸干,残渣加适量甲醇使溶解,离心,取上清液蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;
3)用定量毛细管分别吸取上述1)制得的对照品溶液和2)制得的供试品溶液适量,依次点样于同一硅胶薄层板GF254的同一水平线不同位置上;
4)取氯仿和丙酮,按照体积比60:1混合均匀,得到展开剂;将适量展开剂置干燥洁净的双槽薄层色谱展开缸的第一个槽中;
5)将步骤3)的硅胶薄层板GF254,置于步骤4)的双槽薄层色谱展开缸第二个槽中,密闭缸盖,预饱和10-30分钟后,将上述双槽薄层色谱展开缸第一个槽中的展开剂转移到放有硅胶薄层板GF254的第二个槽中,进行展开,展距10cm,结束展开,取出薄层板,晾干;
6)结果判断:
61)取步骤5)晾干的硅胶薄层板GF254,置254nm波长紫外灯下检视,如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上无相同的暗斑,且在Rf=0.67~0.71处显示暗斑,则该五味子中未掺杂南五味子;如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上有相同的暗斑,且在Rf=0.67~0.71处显示暗斑,则该供试品是掺杂有南五味子的五味子药材;和/或
62)取5%磷钼酸显色剂,将其均匀喷至步骤5)的硅胶薄层板GF254上,105℃加热至斑点清晰,取出,放凉,日光下检视,如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上无相同颜色的斑点,且在Rf=0.67~0.71处显示斑点,则该五味子中未掺杂南五味子;如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上有相同颜色的斑点,且在Rf=0.67~0.71处显示斑点,则该供试品是掺杂有南五味子的五味子药材。
2.根据权利要求1的方法,步骤2)中超声处理40分钟。
3.根据权利要求1的方法,所述步骤1)中适当浓度的对照品溶液,其浓度是每1ml含对照品0.5~4mg。
4.根据权利要求1的方法,步骤1)中适当浓度的对照品溶液,其浓度是每1ml含对照品0.5~2mg。
5.根据权利要求1的方法,步骤1)中适当浓度的对照品溶液,其浓度是每1ml含对照品1mg。
6.根据权利要求1的方法,步骤2)中粗粉是过20~100目筛的粉末;粗粉量是0.5~2g。
7.根据权利要求6的方法,步骤2)中粗粉是过50~80目筛的粉末。
8.根据权利要求6的方法,步骤2)中粗粉是过60目筛的粉末。
9.根据权利要求1的方法,步骤2)中,所述溶剂选自:沸点60~90℃的石油醚、沸点30~60℃的石油醚、正己烷、环己烷、氯仿、二氯甲烷。
10.根据权利要求1的方法,步骤2)中,所述溶剂量是5~20ml。
11.根据权利要求1的方法,步骤2)中,所述溶剂量是10ml。
12.根据权利要求1的方法,步骤3)中对照品溶液或供试品溶液量是1~10μl。
13.根据权利要求1的方法,步骤3)中对照品溶液或供试品溶液量是2μl。
14.根据权利要求1的方法,其包括以下步骤:
1)对照品溶液的制备:精密称取安五脂素对照品,置于适当的容器中,加乙酸乙酯溶解制成适当浓度的对照品溶液,备用;
2)药材供试品溶液制备:
用高速万能粉碎机对干燥的五味子供试品粉碎,过60目筛得药材粉末;
精密称取供试品粉末适量,置于具塞锥形瓶中,加溶剂适量,超声处理20~60分钟,滤过,将滤液在水浴上蒸干,残渣加适量甲醇使溶解,离心,取上清液蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液;
3)用定量毛细管分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2~10μl,依次点样于同一硅胶薄层板GF254的同一水平线不同位置上;
4)取氯仿和丙酮,按照体积比60:1混合均匀,得到展开剂;将展开剂置干燥洁净的双槽薄层色谱展开缸的第一个槽中;
5)将步骤3)的硅胶薄层板GF254,置于步骤4)的双槽薄层色谱展开缸第二个槽中,密闭缸盖,预饱和10-30分钟后,将上述双槽薄层色谱展开缸第一个槽中的展开剂转移到放有硅胶薄层板GF254的第二个槽中,进行展开,展距10cm,结束展开,取出薄层板,晾干;
配制显色剂:取磷钼酸5g,置于100ml量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,配制成5%磷钼酸显色剂,置于喷雾器中备用;
6)结果判断:
61)取步骤5)晾干的硅胶薄层板GF254,置254nm波长紫外灯下检视,如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上无相同的暗斑,且在Rf=0.67~0.71处显示暗斑,则该五味子中未掺杂南五味子;如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上有相同的暗斑,且在Rf=0.67~0.71处显示暗斑,则该供试品是掺杂有南五味子的五味子药材;和/或
62)将显色剂均匀喷至步骤5)的硅胶薄层板GF254上,105℃加热至斑点清晰,取出,放凉;日光下检视,如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上无相同颜色的斑点,且在Rf=0.67~0.71处显示斑点,则该五味子中未掺杂南五味子;如果在与安五脂素对照品相同Rf值位置上有相同颜色的斑点,且在Rf=0.67~0.71处显示斑点,则该供试品是掺杂有南五味子的五味子药材。
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