CN118086079A - 一种耐受低pH值的酵母菌及其应用 - Google Patents
一种耐受低pH值的酵母菌及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种耐受低pH值的酵母菌及其应用，所述耐受低pH值的酵母菌为酵母菌(accharomyces sp.)JDKJ‑S01‑2309，所述酵母菌JDKJ‑S01‑2309保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.28441，保藏日期为2023年09月12日；本发明耐受低pH值的酵母菌能够耐受较低的pH值，在pH为2.5下生长活性较好，在乳酸发酵工业中，无需添加中和剂即可实现L‑乳酸的发酵生产，更利于工业生产，与传统乳酸菌发酵生产L‑乳酸相比，本发明酵母菌耐受较低pH环境，发酵周期短，产酸率高，发酵过程中无需添加中和剂，减少后提取难度，节约成本，避免了硫酸钙残渣的环境污染问题。
Description
技术领域
本发明涉及L-乳酸生产技术领域，具体涉及一种耐受低pH值的酵母菌及其应用。
背景技术
乳酸及其衍生物既是重要的有机化工原料，又是重要的精细化学品，广泛应用于食品、农业、环保、医药、饲料、日用品、化工等领域。随着石油资源的枯竭和生物可降解塑料—聚乳酸需求量的日益增加，乳酸将展示其更为广泛的应用前景。
目前，L-乳酸可以通过化学合成法和微生物发酵方法获得。化学合成法具有污染坏境、成本昂贵、技术复杂、光学纯度较低等棘手问题，不能满足实际应用需要。相比之下，微生物发酵法的生产成本低，条件温和和产物光学纯度高等优点，因此绝大部分都是通过微生物发酵法进行L-乳酸的工业生产。
目前L-乳酸发酵菌不能耐受低pH值，对培养环境胁迫的抵抗能力低，发酵生产过程需要加入氧化钙中和pH值至6.0左右时才能让发酵顺利进行，但随后会产生大量的硫酸钙废弃物，给环境带来了巨大的污染。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种耐受低pH值的酵母菌，该耐受低pH值的酵母菌能够耐受较低的pH值，在乳酸发酵工业中，无需添加中和剂即可实现L-乳酸的发酵生产，更利于工业生产。
本发明的第二目的在于提供一种耐受低pH值的酵母菌在发酵生产L-乳酸中的应用，该应用无需添加中和剂就能够实现L-乳酸的发酵生产，解决了现有发酵生产L-乳酸中需要添加中和剂的问题。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明第一方面提供了一种耐受低pH值的酵母菌，所述耐受低pH值的酵母菌为酵母菌(accharomyces sp.)JDKJ-S01-2309，所述酵母菌JDKJ-S01-2309保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.28441，保藏日期为2023年09月12日。
优选地，所述耐受低pH值的酵母菌耐受低pH值为2.5。
本发明第二方面提供了一种上述耐受低pH值的酵母菌在发酵生产L-乳酸中的应用。
本发明第三方面提供了一种发酵生产L-乳酸的方法，所述发酵生产L-乳酸的方法包括如下步骤：
将所述耐受低pH值的酵母菌接种于葡萄糖溶液中进行发酵培养，以生产L-乳酸。
优选地，所述方法还包括在接种前，对耐受低pH值的酵母菌进行活化处理。
优选地，所述葡萄糖溶液的浓度为8％～15％。
优选地，所述发酵培养包括先初始发酵0.4～0.8h，再补加葡萄糖溶液进行培养3.5～4.5h，然后继续进行培养20～30h；
补加葡萄糖溶液的浓度为50％～70％,补加葡萄糖溶液的补加量为初始葡萄糖溶液体积的0.4～0.6倍，补加方式为分批次补加。
优选地，所述发酵培养温度为28～35℃。
优选地，所述发酵培养在搅拌条件下进行，搅拌转速为160～250rpm。
与现有技术相比，本发明的有益效果至少包括：
本发明耐受低pH值的酵母菌能够耐受较低的pH值，在pH为2.5下生长活性较好，在乳酸发酵工业中，无需添加中和剂即可实现L-乳酸的发酵生产，更利于工业生产。
此外，与传统乳酸菌发酵生产L-乳酸相比，本发明酵母菌耐受较低pH环境，发酵周期短，产酸率高，发酵过程中无需添加中和剂，减少后提取难度，节约成本，避免了硫酸钙残渣的环境污染问题。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
图1为本发明实施例1中化学合成启动子至终止子的DNA片段排列；
图2为本发明实施例1中构建4种质粒载体的关键基因片段排列。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。
需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。
本发明实施例提供了一种耐受低pH值的酵母菌，所述耐受低pH值的酵母菌为酵母菌(accharomyces sp.)JDKJ-S01-2309，所述酵母菌JDKJ-S01-2309保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.28441，保藏日期为2023年09月12日。
在一实施方式中，所述耐受低pH值的酵母菌耐受低pH值为2.5。
本发明耐受低pH值的酵母菌能够耐受较低的pH值，在pH为2.5下生长活性较好，在乳酸发酵工业中，无需添加中和剂即可实现L-乳酸的发酵生产，更利于工业生产。
本发明又一实施例提供了一种上述耐受低pH值的酵母菌在发酵生产L-乳酸中的应用。
通过将耐受低pH值的酵母菌应用于发酵生产L-乳酸中，与传统乳酸菌发酵生产L-乳酸相比，本发明酵母菌耐受较低pH环境，发酵周期短，产酸率高，发酵过程中无需添加中和剂，减少后提取难度，节约成本，避免了硫酸钙残渣的环境污染问题。
本发明再一实施例提供了一种发酵生产L-乳酸的方法，所述发酵生产L-乳酸的方法包括如下步骤：
将所述耐受低pH值的酵母菌接种于葡萄糖溶液中进行发酵培养，以生产L-乳酸。
在一些实施方式中，所述方法还包括在接种前，对耐受低pH值的酵母菌进行活化处理。
通过对菌种进行活化处理，能够提高菌种活性，进而提高菌种发酵效率。
在一些实施方式中，所述葡萄糖溶液的浓度可以为8％～15％中任一数值，具体可以为8％、10％或15％。
在一些实施方式中，所述发酵培养包括先初始发酵0.4～0.8h，再补加葡萄糖溶液进行培养3.5～4.5h，然后继续进行培养20～30h；
补加葡萄糖溶液的浓度为50％～70％,补加葡萄糖溶液的补加量为初始葡萄糖溶液体积的0.4～0.6倍，补加方式为分批次补加。
在一实施方式中，所述发酵培养温度可以为28～35℃中任一数值，具体可以为28℃，30℃，32℃或35℃。
在一些实施方式中，所述发酵培养在搅拌条件下进行，搅拌转速可以为160～250rpm。
以下通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细说明。
以下各实施例中采用的试剂产品和方法如下：
1、L-乳酸含量及葡萄糖含量使用西尔曼生物科技公司的生物传感仪测定。
2、选定人LDH基因及hCMV启动子及LP1终止子的组合。出发菌株S.pombe FY7652菌株(h-、leu1-32、ura4-D18)、leu1基因片段扩增用菌株：S.pombe FY7790菌株，来自日本国立生物资源中心微生物库。
3、所用的引物如下：
leu1扩增引物
leu1_F GGGACGCGTCCCGGGCGATAATAAATATGCGACACAA，如SEQ ID NO.1所示；
leu1_R GATTGTCGACCTAGAAACAAAGATTCATTAATT，如SEQ ID NO.2所示；
top2扩增引物
top2_F GAGTTGCGGCCGCGTTGACGAGTTGTCTTTAAACC，如SEQ ID NO.3所示；
top2_R GGTTGGATCCTCCTCAAGTACTGCT，如SEQ ID NO.4所示；菌落PCR及测序用引物
hCMVp R GGCCATTTACCGTAAGTTATGT，如SEQ ID NO.5所示；
LP1t_F TGACGTCACAAGACGATCTG，如SEQ ID NO.6所示；
leu1_F2 ATCAATAGAGGCACCTCCAATC，如SEQ ID NO.7所示；
top2_R2 GGATGAACATTGTAAATGGTAGGATACGAG，如SEQ ID NO.8所示；
hCMVp_F TGACGTATGTTCCCATAGTAACGCC，如SEQ ID NO.9所示；
HsLDH_F TCAAAACAAGATTACCGTTGTCGGTG，如SEQ ID NO.10所示；
制备pdc基因敲除用片段所需引物
pdc1
pdc1-UF AGGCAAATCGTGAACTCGG，如SEQ ID NO.11所示；
pdc1-UR GCCAATTCCACTCTCAATAGCCCGAACGTTCCGTCTCG，如SEQ ID NO.12所示；
pdc1-OF GCTATTGAGAGTGGAATTGGC，如SEQ ID NO.13所示；
pdc1-O RAGTGGGATTTGTAGCTAAGCTACTGGTTTCCACATTGTTTGG，如SEQ ID NO.14所示；
pdc1-D FAAGTTTCGTCAATATCACAAGCTCGAGACGGAACGTTCGG，如SEQ ID NO.15所示；
pdc1-DR TTACAATGCTGAGTGTGTATTCC，如SEQ ID NO.16所示；pdc1-FFTGAACTCGGTTGAAAAATGTCG，如SEQ ID NO.17所示；pdc1-FR TGAGTGTGTATTCCTTTTTCGC，如SEQ ID NO.18所示；
Pdc2
pdc2-UF CTCTCCAGCTCCATCCATAAG，如SEQ ID NO.19所示；
pdc2-U RGACACAACTTCCTACCAAAAAGCCTTTCTGCCCATGTTTTCTGTC，如SEQ ID NO.20所示；
pdc2-OF GCTTTTTGGTAGGAAGTTGTGTC，如SEQ ID NO.21所示；
pdc2-O RAGTGGGATTTGTAGCTAAGCTGTATCCATTTCAGCCGTTTGTG，如SEQ ID NO.22所示；
pdc2-D FAAGTTTCGTCAATATCACAAGCTGACAGAAAACATGGGCAGAAAG，如SEQ ID NO.23所示；
pdc2-DR GTTCCTTAGAAAAAGCAACTTTGG，如SEQ ID NO.24所示；pdc2-FFCATAAGCTTGCCACCACTTC，如SEQ ID NO.25所示；
pdc2-FR GAAAAAGCAACTTTGGTATTCTGC，如SEQ ID NO.26所示；pdc3
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pdc3-OF GATTGCACAAACCTTTCCACC，如SEQ ID NO.29所示；
pdc3-O RAGTGGGATTTGTAGCTAAGCTCATCCCACATCTGTAATAATCACG，如SEQ ID NO.30所示；
pdc3-D FAAGTTTCGTCAATATCACAAGCTCCATAAAGAAATATCATGAGTTGACG，如SEQ IDNO.31所示；
pdc3-DR TTTGAGAAGAAAATTTTATGTCCAGC，如SEQ ID NO.32所示；
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pdc3-FR AAGTAAAAATGTGAAAGCAATGTAGG，如SEQ ID NO.34所示；
pdc4
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pdc4-U RCCTAACAAAAGCATCATTTGAGAAGACGAATGAAATGACAGCAAC，如SEQ ID NO.36所示；
pdc4-OF TTCTCAAATGATGCTTTTGTTAGG，如SEQ ID NO.37所示；
pdc4-O RAGTGGGATTTGTAGCTAAGCTCTGGACAAGTCTACCTTGGAG，如SEQ ID NO.38所示；
pdc4-D FAAGTTTCGTCAATATCACAAGCTGTTGCTGTCATTTCATTCGTC，如SEQ ID NO.39所示；
pdc4-DR GATACAGGAGTACAACAAAACAC，如SEQ ID NO.40所示；pdc4-FFTCTCCATCCCTCCTCCC，如SEQ ID NO.41所示；
pdc4-FR ACGCTACTTAAACAAGACAAGC，如SEQ ID NO.42所示；ura4
ura4-F AGCTTAGCTACAAATCCCACT，如SEQ ID NO.43所示；
ura4-R AGCTTGTGATATTGACGAAACTT，如SEQ ID NO.44所示；
pdc1敲除用片段导入确认用引物(target 0.6kbp)
pdc1-FF TGAACTCGGTTGAAAAATGTCG，如SEQ ID NO.45所示；
pdc1-O RAGTGGGATTTGTAGCTAAGCTACTGGTTTCCACATTGTTTGG，如SEQ ID NO.46所示；
pdc2敲除用片段导入确认用引物(target 0.6kbp)
pdc2-FF CATAAGCTTGCCACCACTTC，如SEQ ID NO.47所示；
pdc2-O RAGTGGGATTTGTAGCTAAGCTGTATCCATTTCAGCCGTTTGTG，如SEQ ID NO.48所示；
pdc3敲除用片段导入确认用引物(target 0.6kbp)
pdc3-FF CCATTTAGCAGTATAAGGGTCG，如SEQ ID NO.49所示；
pdc3-O RAGTGGGATTTGTAGCTAAGCTCATCCCACATCTGTAATAATCACG，如SEQ ID NO.50所示；
pdc4敲除用片段导入确认用引物(target 0.6kbp)
pdc4-FF TCTCCATCCCTCCTCCC，如SEQ ID NO.51所示；
pdc4-O RAGTGGGATTTGTAGCTAAGCTCTGGACAAGTCTACCTTGGAG，如SEQ ID NO.52所示；
pdc敲除确认引物
pdc2敲除确认引物(target 0.7kbp)
pdc2-FF CATAAGCTTGCCACCACTTC，如SEQ ID NO.53所示；
pdc2-OutR AATTTTGACAAATAGATTCAGATGCG，如SEQ ID NO.54所示；
pdc3敲除确认引物(target 0.7kbp)
pdc3-FF CCATTTAGCAGTATAAGGGTCG，如SEQ ID NO.55所示；
pdc3-OutR TCTTATTTTTAAGTTCATCCCACATC，如SEQ ID NO.56所示；
pdc4敲除确认引物(target 0.7kbp)
pdc4-FF TCTCCATCCCTCCTCCC，如SEQ ID NO.57所示；
pdc4-OutR GAGTTTATACTAACAGGGAATTATCTGG，如SEQ ID NO.58所示。
本发明利用基因保藏库中购买的耐酸酿酒酵母菌株，进行基因改造，通过导入乳酸脱氢酶基因，使酿酒酵母具备乳酸发酵生产能力，然后敲除丙酮酸脱氢酶基因，阻碍乙醇的合成代谢途径，将代谢流引导向L-乳酸的合成，进而获得L-乳酸生产水平有所提升的菌株，最后通过自然选育和工艺优化，使发酵水平提升至145g/L。
实施例1
本实施例为重组酿酒酵母菌株V1-2的构建；
1、vector1及vector2载体的构建
通过化学合成启动子至终止子的DNA片段hCMVp-HsLDH-LP1 t及hsp16p-BtLDH-hsp16t(DNA片段排列如图1所示)。以S.pombe FY7790菌株(wt)基因组为模板，使用Max DNAPolymerase(TaKaRa)及引物扩增Homology area1序列(leu1)及Homology area2(top2)序列；hCMVp-HsLDH-LP1 t及hsp16p-BtLDH-hsp16t以及Homologyarea 1经限制性内切酶(MulⅠ、SalⅠ)酶切处理后，连接***载体，经转化后涂布于LB+100ug/mL Ampicillin平板。在30℃下培养1天，对长出的单菌落进行菌落PCR并经电泳确认所得片段长度。挑取所得片段符合目标长度的菌落进行培养，提取质粒。对提取到的质粒，用限制性内切酶处理(MulⅠ、SalⅠ)，电泳确认所得片段长度。挑选hCMVp-HsLDH-LP1t正确菌落，hsp16p-BtLDH-hsp16t正确菌落进行下步改造。
采用同种方法将基因组片段Homology area2导入载体。Homology area 1***后的2种载体及Homology area 2经过限制性内切酶(NotⅠ、BamHⅠ)处理，经连接转化后涂布于LB+100ug/mL Ampicillin平板。在30℃下培养1天，所得菌落进行菌落PCR并经电泳进行确认。挑取所得片段符合目标长度的菌落进行培养，并提取质粒，经限制性内切酶处理(NotⅠ、BamHⅠ)，所得片段通过电泳确认构建质粒无误。挑取菌落进行测序确认基因片段上未发生碱基突变，基因载体vector1及vector2构建成功，载体关键基因片段排列如图2所示。
2、vector3及vector4载体的构建
通过限制性内切酶(PvuⅠ、SpeⅠ)酶切处理vector1,2，经电泳后切胶提取LDH area基因片段(1kbp)。剩余区域经过SpeⅠ酶切处理后，经PvuⅠ短时间酶切处理，经电泳确认，切胶获取仅被PvuⅠ切断1处的6kbp片段。切胶提取的2组片段经过纯化后，vector1的hCMVp-LP1t area片段与vector2的BtLDH area片段；vector2的hsp16p-hsp16t area片段与vector1的HsLDH area片段；分别连接，并将所得载体转化，涂布于LB+100ug/mLAmpicillin平板。于30℃，培养1天，所得菌落内含质粒经菌落PCR及电泳确认。所得质粒的PCR片段，再次经过限制性内切酶(HindⅢ)酶切处理，hCMVp-BtLDH-LP1t的目标片段大小为2、0.9、0.3kbp，hsp16p-HsLDH-hsp16t的目标片段大小为3.1、0.3kbp。挑取正确的hsp16p-HsLDH-hsp16t的菌落及hCMVp-BtLDH-LP1t的菌落经提取质粒，测序后确认相关基因序列碱基未发生突变，基因载体vector3及vector4构建完成，载体关键基因片段排列如图2所示。
3、对S.pombe的4种质粒载体的转化
Vector1～4的质粒通过限制性内切酶酶切处理(SmaI)后，进行电泳确认。切胶获得目标片段(4.7kbp)后，通过过柱纯化，酒精沉淀，重新溶解于TE buffer(pH7.5)。使用醋酸锂法，将目标片段转化至宿主S.pombe FY7652菌株(h-、leu1-32、ura4-D18)。利用leu1基因作为标记，在培养基中添加uracil诱导培养3天，挑取重新获得leucine需求性的菌落。挑取菌落通过菌落PCR进行确认，含有目标片段(2.5kbp)的菌落确认为导入LDH基因的菌株。
4、LDH基因导入菌株的L-乳酸发酵水平确认
对通过4种质粒分别导入LDH基因的菌株，进行L-乳酸发酵水平的培养确认。具体方法为，在5ml YPD(葡萄糖浓度6％)接种后，于32℃，180rpm，预培养24小时。取发酵液按照5％接种量接种于YPD(葡萄糖浓度6％)摇瓶中，于32℃，140rpm，培养20小时。回收菌体置于φ180×18mm试管中，添加4.5ml的11.1％葡萄糖溶液，于32℃，180rpm，培养3小时。培养液离心，抽取上清液稀释检测L-乳酸的浓度。结果显示，所有导入菌株均获得产生L-乳酸的能力，其中V1-2菌株(即导入Vector1-2的菌株)L-乳酸发酵水平最高，达到22g/L。
实施例2
本实施例为敲除丙酮酸脱氢酶(pdc1-4)基因和验证
1、采用Latour方法对pdc基因进行敲除。
为了制备用于敲除pdc基因的DNA片段，利用S.pombe FY7790菌株(野生型)，分别用UF和UR、OF及OR、DF及DR、Ura4-F及Ura4-R引物对UP区域、OL区域、DN区域及Ura4区域进行PCR扩增。各个片段经过过柱纯化后，分别通过PCR，以UP和OL区域为模板用UF及OR引物合成UO片段，以Ura4和DN区域为模板用Ura4-F及DR引物合成UraD片段。最后所得片段经过柱纯化后，再次以UO及UraD片段为模板，使用FF及FR引物进行PCR扩增获得pdc1～4的敲除用片段。将敲除用片段通过醋酸锂法导入V1-2菌株，培养于SD平板。于平板上获得具有尿嘧啶需求性回复的菌落，通过菌落PCR确认后，获得敲除片段导入菌株。菌株划线分离后，培养于SD-Ura-5FOA平板，最终获取Ura4基因及pdc基因共同脱落的菌株，所得的菌落再次经过菌落PCR确认pdc基因的敲除，得到敲除PDC2基因后获得的阳性菌PD205，敲除PDC3获得的阳性菌PD309。
2、pdc敲除菌株的乳酸发酵性能验证
挑选单菌株接种于装有5ml YPD离心管中，32℃、180rpm条件下培养20小时。取发酵液按照5％接种量接种于YPD摇瓶中，32℃、120rpm条件下20小时。离心回收菌体所有菌体于φ180×18mm试管中(11.1％ Glucose溶液)，32℃、150rpm培养3小时。菌液离心取上清稀释，检测L-乳酸和乙醇含量。结果显示PD309在发酵3小时后乳酸发酵水平达到40g/L，PD205发酵水平仅达到25g/L，但PD205对糖转化率较高，针对该菌株进行增殖选育进一步提高发酵性能。
实施例3
本实施例为PD205增殖性能的恢复和驯化菌株性能验证
1、PD205增值性能的恢复
通过驯化该菌株的培养基适应性(自然分离)回复其增殖性，提升菌体活性。挑取菌落进行液体培养基培养后制备甘油管-80℃保存，之后取出划线分离，重复培养及甘油管冻存步骤。数次的传代后，针对驯化菌株的增殖性进行考察确认。具体的，50ml试管中分别添加3ml,5ml,10ml的YPD培养基，从培养6天后的YPD平板上通过1ul接种环挑取菌体，按照1ul/5ml体量进行接种，在32℃，200rpm条件下培养1天，PD2503(驯化菌株)显示出高于PD205菌株3～4倍的OD，标明该驯化菌株的增殖性能有所改善。
2、驯化菌株PD2503发酵性能的验证
对自然分离得到的菌株PD2503进行L-乳酸发酵测试。32℃下于YPD平板培养4天后，挑取1uL接种于5ml YPD离心管中，32℃、180rpm培养44小时。以10％的接种量接种于YPD6摇瓶，32℃、140rpm培养44小时。回收菌体于φ180×18mm试管，添加2.1ml的11.1％Glucose溶液，32℃、180rpm培养3小时，离心分离培养液，回收上清稀释后对L-乳酸含量及葡萄糖含量进行检测。结果显示，PD2503菌株的乳酸发酵水平达到62g/L，PD2503即本申请述耐受低pH值的酵母菌，保藏名称为酵母菌(accharomyces sp.)JDKJ-S01-2309。
实施例4
本实施例为PD2503发酵性能提升
菌种在YPD平板上32℃下培养4天后挑取1uL菌体接种于5ml YPD离心管中，32℃、180rpm培养44小时。将培养液全部接种于100ml YPD6摇瓶中，在32℃、140rpm条件下培养24小时。在32℃、180rpm条件下，回收菌体于含有2.25ml的10％的葡萄糖溶液中培养0.5h，继续培养4h，在继续培养过程中分批次补料60％的葡萄糖溶液，累计补料量为1.5ml，再继续培养22h。离心回收上清，稀释后检测L-乳酸及葡萄糖浓度。结果显示，通过30％葡萄糖补料发酵，发酵水平达到145g/L。与在初期就将葡萄糖浓度设定在30％的条件相比较，发酵水平、糖转化率均较高。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。
Claims (9)
1.一种耐受低pH值的酵母菌，其特征在于，所述耐受低pH值的酵母菌为酵母菌(accharomyces sp.)JDKJ-S01-2309，所述酵母菌JDKJ-S01-2309保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.28441，保藏日期为2023年09月12日。
2.根据权利要求1所述的耐受低pH值的酵母菌，其特征在于，所述耐受低pH值的酵母菌耐受低pH值为2.5。
3.权利要求1所述的耐受低pH值的酵母菌在发酵生产L-乳酸中的应用。
4.一种发酵生产L-乳酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将权利要求1中所述的耐受低pH值的酵母菌接种于葡萄糖溶液中进行发酵培养，以生产L-乳酸。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在接种前，对耐受低pH值的酵母菌进行活化处理。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述葡萄糖溶液的浓度为8％～15％。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述发酵培养包括先初始发酵0.4～0.8h，再补加葡萄糖溶液进行培养3.5～4.5h，然后继续进行培养20～30h；
补加葡萄糖溶液的浓度为50％～70％，补加葡萄糖溶液的补加量为初始葡萄糖溶液体积的0.4～0.6倍，补加方式为分批次补加。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵培养温度为28～35℃。
9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述发酵培养在搅拌条件下进行，搅拌转速为160～250rpm。
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